JPH10281994A

JPH10281994A - 蛍光測定装置

Info

Publication number: JPH10281994A
Application number: JP8956697A
Authority: JP
Inventors: Yoshinori Mizuguchi; 義則水口; Norikazu Sugiyama; 範和杉山
Original assignee: Hamamatsu Photonics KK
Current assignee: Hamamatsu Photonics KK
Priority date: 1997-04-08
Filing date: 1997-04-08
Publication date: 1998-10-23

Abstract

(57)【要約】【課題】蛍光の測定精度を向上させることができる蛍
光測定装置を提供することを目的とする。【解決手段】本発明は、マイクロプレート４の底面４
ａ側から、各ウェル３内の対象物Ｓに励起光を照射し各
対象物Ｓからの蛍光を底面４ａ側で検出する蛍光測定装
置において、励起光を発生する励起光発生手段５と、各
ウェル３に対し出射端面がウェル３に対応する底面４ａ
に対峙され、入射端面で励起光発生手段５からの励起光
を取り込む光導入用ファイバ６０と、各ウェル３に対し
入射端面がウェル３に対応する底面４ａに対峙され、出
射端面でウェル３内の対象物Ｓからの蛍光を射出する光
検出用ファイバ６１と、光検出用ファイバ６１の出射端
面からの蛍光を検出する蛍光検出手段１８とを備え、光
導入用ファイバ６０の開口数が光検出用ファイバ６１の
開口数より小さくなっている構成である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、マイクロプレート
の複数のウェル内に収容された各測定対象物からの蛍光
を測定する蛍光測定装置に関する。

【０００２】

【従来の技術】蛍光測定装置には、複数のウェルが設け
られたマイクロプレートが用いられ、そのマイクロプレ
ートの各ウェル内の測定対象物に励起光が照射され、そ
の測定対象物からの蛍光が測定されるものがある。この
種の蛍光測定装置は、例えば特開昭６０−４０９５５号
公報に開示され、この公報においては、蛍光測定装置
は、マイクロプレートの各ウェルに対応して途中で分岐
し光源からの光を伝送する光ファイバと、その分岐した
各光ファイバに束ねられた蛍光検出用光ファイバとを有
し、各ウェルに対して、分岐した光ファイバ及び蛍光検
出用光ファイバの端面が集光レンズを介してマイクロプ
レートの底面と対峙されている。

【０００３】また、他の蛍光測定装置としては、例えば
特開昭５５−４８６４２号公報に開示され、この公報に
おいては、蛍光測定装置は、ガスを収容する測定セル
と、その測定セルから光源まで延びる長尺の複数の照射
用光導体と、測定セルから検出器まで延び、ガスから生
じる蛍光をその検出器に導く長尺の複数の受光用光導体
とを有している。その照射用光導体および受光用光導体
の端部同士はひとまとまりにまとめられ、その端面が測
定セル内のガスに直接接触している。そして、照射用光
導体からは可能な限り小さい空間角で光が射出され、受
光用光導体では全空間角の半分に近い空間角でガスから
の光が取り込まれている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、特開昭
６０−４０９５５号公報の蛍光測定装置は、照射用光フ
ァイバからの広がった励起光が集光レンズを介してマイ
クロプレートの底面側から入射されると、測定対象物か
らの蛍光のみならず底面での励起光の反射光が受光用の
光ファイバに混入する。このため、検出する蛍光に対し
てノイズが増加し、蛍光測定精度が低下することとな
る。

【０００５】また、特開昭５５−４８６４２号公報の蛍
光測定装置においては、特開昭６０−４０９５５号公報
のように分岐した光ファイバの端面と試料との間にマイ
クロプレートを介在させていない。しかも、照射用光導
体の端面が試料であるガスに直接接触している。このた
め、照射用光導体からの照射光の一部が反射により受光
用光導体に混入するという問題は生じない。しかし、受
光用光導体が水晶等で作製されているため、ガスから生
じた蛍光を検出器に十分に導くことができず、良好な蛍
光測定精度を得ることができないという問題があった。

【０００６】本発明は、このような事情に鑑みてなされ
たもので、蛍光の測定精度を向上させることができる蛍
光測定装置を提供することを目的とする。

【０００７】

【課題を解決するための手段】上記目的を達成するため
に、本発明は、複数のウェルが形成されたマイクロプレ
ートの底面側から、各ウェル内の測定対象物に励起光を
照射し各測定対象物からの蛍光をマイクロプレートの底
面側で検出する蛍光測定装置において、励起光を発生す
る励起光発生手段と、各ウェルに対し出射端面がウェル
に対応するマイクロプレートの底面に対峙され、入射端
面で励起光発生手段からの励起光を取り込む光導入用フ
ァイバと、各ウェルに対し入射端面がウェルに対応する
マイクロプレートの底面に対峙され、出射端面でウェル
内の測定対象物からの蛍光を射出する光検出用ファイバ
と、光検出用ファイバの出射端面から射出される蛍光を
検出するための蛍光検出手段とを備え、光導入用ファイ
バの開口数が光検出用ファイバの開口数より小さくなっ
ていることを特徴とする。

【０００８】この発明によれば、励起光発生手段で発生
した励起光が、各光導入用ファイバによってマイクロプ
レートの底面側から各ウェル内の測定対象物に照射さ
れ、各測定対象物からの蛍光がマイクロプレートの底面
側で各光検出用ファイバの入射端面に取り込まれ、その
蛍光が蛍光検出手段で検出される。このため、光導入用
ファイバの出射端面から射出される励起光が光検出用フ
ァイバに直接混入することがない。また、光導入用ファ
イバの開口数が光検出用ファイバの開口数より小さいた
め、マイクロプレートの底面で、光導入用ファイバから
の励起光の反射等が抑えられ、従って、測定対象物への
励起光の割合が増加すると共に、マイクロプレートの底
面で反射され光検出用ファイバに取り込まれる励起光の
割合が減少する。更に、光検出用ファイバの開口数が光
導入用ファイバの開口数より大きいため、光検出用ファ
イバにおいて、測定対象物からの蛍光が十分に取り込ま
れる。この結果、励起光が効率よく測定対象物に照射さ
れると共に、蛍光の測定精度が向上することとなる。

【０００９】また、各ウェルに対しそのウェルに対応す
る光検出用ファイバが、隣接するウェルからの蛍光を入
射不可能とする開口数を有することが好ましい。この場
合、マイクロプレートの各ウェルに対し、そのウェルに
対応する光検出用ファイバに、隣接するウェル内の測定
対象物からの蛍光の侵入が十分に防止される。このた
め、隣接するウェル同士間でのクロストークが防止され
る。

【００１０】また、各ウェルに対し光導入用ファイバ及
び光検出用ファイバが複数本設けられ、光導入用ファイ
バに対し各光検出用ファイバがランダムに混合されてい
ることが好ましい。この場合、マイクロプレートの各ウ
ェル内の測定対象物からの蛍光が各光検出用ファイバの
入射端面において効率よく取り込まれる。

【００１１】また、マイクロプレートの底面側に配置さ
れ、各ウェルに対応して光導入用ファイバの出射端部及
び光検出用ファイバの入射端部を収容する開口部をもっ
たガイド部材を備えることが好ましい。この場合、ガイ
ド部材の各開口部によって、光導入用ファイバの出射端
部及び光検出用ファイバの入射端部が確実に保持され
る。

【００１２】

【発明の実施の形態】以下、添付図面と共に本発明の蛍
光測定装置の第１〜第３実施形態について詳細に説明す
る。

【００１３】図１は、第１実施形態に係る蛍光測定装置
の全体構成を示す概略図である。図１に示すように、蛍
光測定装置１は、暗箱２内にマイクロプレート４を備え
ている。マイクロプレート４には、その一面に測定対象
となる試料Ｓを収容する複数（９６個）のウェル３が形
成され、ウェル３は例えばマイクロプレート４の一面に
８列１２行に配列されている。また、各ウェル３内に収
容される試料Ｓは、例えば測定対象としての蛍光指示薬
ＤＡＰＩを負荷した一定数の細胞、及びその細胞を生か
しておくためのバッファー溶液が用いられる。なお、マ
イクロプレート４の底面４ａは、その底面４ａから入射
される光を透過できるように光学的に透明な材質で形成
されている。

【００１４】蛍光測定装置１は、励起光発生手段として
の光源ユニット５が設けられ、この光源ユニット５は例
えば暗箱２の外部に設けられている。この光源ユニット
５は、光源ボックス６内に収容される白色光源７を有
し、光源ボックス６内には、白色光源７から出射される
白色光の方向に集光レンズ８が設けられ、光源ボックス
６の外部には集光レンズ８の対向位置に励起光選択フィ
ルタ９が設けられ、その励起光選択フィルタ９により白
色光から所望の励起光が選択される。励起光選択フィル
タとしては、蛍光指示薬ＤＡＰＩに対応し、例えば透過
波長３６０ｎｍの干渉フィルタが用いられる。

【００１５】また、蛍光測定装置１には、光源ユニット
５側からマイクロプレート４の底面まで延びる光導入用
バンドルファイバ１２（例えば外径６ｍｍ）が設けられ
ている。この光導入用バンドルファイバ１２は、図２
（ａ）に示すように、保護チューブ１４を有し、その保
護チューブ１４内に、複数本（例えば５０本）の光導入
用ファイバ（例えば外径２００μｍの石英ガラス光ファ
イバ）６０が束ねられ収容されている。

【００１６】図１に示すように、このような光導入用バ
ンドルファイバ１２は、マイクロプレート４の各ウェル
３に対応して９６本設けられ、この９６本の光導入用バ
ンドルファイバ１２の各入射端部は、束ねられて円筒管
１７内に収納されている。そして、９６本の光導入用バ
ンドルファイバ１２の各出射端部は、各ウェル３に対応
して分配され、その分配された各出射端部は、ウェル３
に対応するマイクロプレート４の底面４ａに対峙されて
いる。従って、対応する各ウェル３内の試料Ｓに対し、
各光導入用バンドルファイバ１２からの励起光がマイク
ロプレート４の底面４ａ側から照射される。

【００１７】一方、蛍光測定装置１には、各ウェル３内
の試料Ｓからの蛍光を伝送する光検出用バンドルファイ
バ１３（例えば外径９ｍｍ）が設けられ、この光検出用
バンドルファイバ１３は、図２（ｂ）に示すように、保
護チューブ１５を有し、その保護チューブ１５内に光導
入用ファイバ６０と同径の複数本（例えば１００本）の
光検出用ファイバ６１（例えば外径２００μｍｍの石英
ガラス光ファイバ）が束ねられ収容されている。

【００１８】図１に示すように、光検出用バンドルファ
イバ１３は、マイクロプレート４のウェル３に対応して
９６本設けられ、この９６本の光検出用バンドルファイ
バ１３は、各入射端部が分配されて、ウェル３に対応す
るマイクロプレート４の底面４ａに対峙され、各出射端
部は暗箱２の外部まで延びている。なお、保護チューブ
１５内の光検出用ファイバ６１は、蛍光を優先的に取得
すべく、保護チューブ１４内の光導入用ファイバ６０よ
り多く設けられている（図２（ｂ）参照）。

【００１９】なお、光検出用ファイバ６０として石英ガ
ラス光ファイバを用いたが、石英ガラス光ファイバに代
えて、ＤＡＰＩの蛍光のみ透過させるような透過特性を
もったプラスチック製又はガラス製の光ファイバを用い
てもよい。この場合には、蛍光選択フィルタ１１を設け
なくてもよい。

【００２０】また、図１に示すように、蛍光測定装置１
は、蛍光検出手段を有し、この蛍光検出手段は例えば暗
箱２の外部に設けられている。この蛍光検出手段は、例
えば光電子増倍管１０と、蛍光選択フィルタ１１とから
なる９６台の蛍光検出器１８構成され、各光電子増倍管
１０は相互に同一性能を有している。このように各ウェ
ル３ごとに光電子増倍管１０を用いることで、蛍光の検
出感度の向上を図ると共に各ウェル３内の試料Ｓからの
蛍光を同時に測定できるようにしている。なお、蛍光選
択フィルタ１１は、各光検出用バンドルファイバ１３の
出射端面から射出される光から蛍光を選択的に透過させ
るものであり、光電子増倍管１０と光検出用バンドルフ
ァイバ１３の端面との間に設けられる。蛍光選択フィル
タ１１としては、蛍光指示薬ＤＡＰＩに対応して、例え
ば４００ｎｍ以上の光を透過する干渉フィルタが用いら
れる。

【００２１】また、各光電子増倍管１０は、高圧電源１
９に接続されると共に、互いに独立したアンプ回路２０
に接続され、各アンプ回路２０はアナログデータ処理装
置２１に接続され、アナログデータ処理装置２１はパー
ソナルコンピュータ２２に接続されている。各光電子増
倍管１０から出力された信号はアンプ回路２０で増幅さ
れ、その増幅された各信号はアナログデータ処理装置２
１でディジタル値に変換され、パーソナルコンピュータ
２２で各データの収集、データ解析および蛍光測定装置
１全体の制御が行われる。

【００２２】図３は、マイクロプレート４と、光導入用
および光検出用バンドルファイバ１２，１３との位置関
係を示す一部断面側面図であり、図４は、光導入用バン
ドルファイバ１２の出射端部及び光検出用バンドルファ
イバ１３の入射端部を示す一部断面側面図である。図３
に示すように、マイクロプレート４の各ウェル３に対
し、光導入用バンドルファイバ１２及び光検出用バンド
ルファイバ１３の入射端部及び出射端部同士はまとめら
れて円筒管２３内に収納されている。円筒管２３内で
は、図４に示すように、光導入用バンドルファイバ１２
の出射端部で光導入用ファイバ６０が露出され、光検出
用バンドルファイバ１３の入射端部で光検出用ファイバ
６１が露出され、これらが混合されて接着剤等で固めら
れている。

【００２３】なお、光検出用ファイバ６１は、図５に示
すように、円筒管２３内で互いに所定の間隔をもってラ
ンダムに分配されることで、各ウェル３からの蛍光が十
分に取り込まれ、蛍光の受容効率が向上されるようにな
っている。

【００２４】また、図４に示すように、光導入用ファイ
バ６０の各出射端面及び光検出用ファイバ６１の各入射
端面は、各ウェル３に対応するマイクロプレート４の底
面４ａに対峙されている。ここで、図６に示すように、
各光導入用ファイバ６０は、そのコア６０ａとクラッド
６０ｂとの屈折率差が小さくとられ、その開口数ＮＡ１
が例えば０．２〜０．３に設定されている。このため、
光導入用ファイバ６０のコア６０ａから出射される光束
Ｆ１は、図６（ａ）に示すような光束となっており、光
導入用ファイバ６０の出射端面の前方の狭い範囲が照射
されることとなる。

【００２５】一方、各光検出用ファイバ６１は、そのコ
ア６１ａとクラッド６１ｂとの屈折率差が大きくとら
れ、その開口数ＮＡ２が光導入用ファイバ６０の開口数
ＮＡ１より大きくなっており、例えば０．３５以上に設
定されている。このため、光検出用ファイバ６１におい
ては、そのコア６１ａの入射端面において、図６（ｂ）
に示すように、広角度で試料Ｓからの蛍光が取り込まれ
る。

【００２６】ただし、開口数ＮＡ２は、光検出用ファイ
バ６１のコア６１ａの入射端面に、隣接するウェル３か
らの蛍光が入射不可能な範囲にあることが好ましい。こ
れは、マイクロプレート４の各ウェル３に対し、各ウェ
ル３に対応する光検出用ファイバ６１のコア６１ａに、
隣接するウェル３内の試料Ｓからの蛍光の侵入を十分に
防止し、隣接するウェル３同士間でのクロストークを防
止するためである。このような効果を奏する開口数ＮＡ
２の範囲は、例えば０．３５以上ＮＡｍａｘ未満であ
る。ここで、ＮＡｍａｘは、図７に示すように、ウェル
３の底面の垂線Ｖに対し、隣接するウェル３の底面から
射出される蛍光の最大広がり方向Ｄによって規定され
る。例えばＮＡｍａｘは、この垂線Ｖと最大広がり方向
Ｄとのなす角（隣接するウェル３からの最小入射角）θ
に対し、ｎ₀ｓｉｎθで表される。ここで、ｎ₀は空気の
屈折率を表す。

【００２７】なお、図１及び図３に示すように、蛍光測
定装置１は、マイクロプレート４の底面４ａ側に、各ウ
ェル３に対応した円柱状の開口部２５をもった平板状の
ガイド部材２４を設け、各開口部２５内に、各光導入用
バンドルファイバ１２の出射端部および各光検出用バン
ドルファイバ１３の入射端部を挿入することで、その光
導入用バンドルファイバ１２および光検出用バンドルフ
ァイバ１３の出射端部および入射端部を確実に保持する
ようにしている。

【００２８】以上のような構成をもった蛍光測定装置１
によれば、光源ユニット５で発生した励起光が、各光導
入用ファイバ６０によって分配されて、マイクロプレー
ト４の底面４ａ側から各ウェル３内の試料Ｓに照射さ
れ、各試料Ｓからの蛍光がマイクロプレート４の底面４
ａ側で各光検出用ファイバ６１の入射端面に取り込ま
れ、その蛍光が蛍光選択フィルタ１１を通って光電子増
倍管１０で検出される。

【００２９】このため、光導入用ファイバ６０の出射端
面から射出される励起光が光検出用ファイバ６１に直接
混入することがない。また、光導入用ファイバ６０の出
射端面から蛍光が小さい広がりで射出されるため、マイ
クロプレート４の底面４ａで、光導入用ファイバ６０か
らの励起光の反射、散乱又は拡散が抑えられ、従って、
試料Ｓへの励起光の割合が増加すると共に、マイクロプ
レート４の底面４ａで反射され光検出用ファイバ６１に
取り込まれる励起光の割合が減少する（図８参照）。更
に、光検出用ファイバ６１の開口数ＮＡ２が光導入用フ
ァイバ６０の開口数ＮＡ１より大きいため、光検出用フ
ァイバ６１において、試料Ｓからの蛍光が十分に取り込
まれる（図９参照）。この結果、励起光が効率よく試料
Ｓに照射されると共に、蛍光の測定精度が向上する。

【００３０】次に、本発明の蛍光測定装置の第２実施形
態について説明する。なお、第１実施形態に係る蛍光測
定装置と同一又は相当の構成要素については、同一の符
号を付す。

【００３１】図１０は、第２実施形態に係る蛍光測定装
置の全体を示す概略図である。図１０に示すように、蛍
光測定装置３０においては、励起光発生手段としての励
起光波長選択フィルタ９に代えて、波長切替手段が設け
られている点で第１実施形態の蛍光測定装置１と異な
る。

【００３２】ここで、波長切替手段は、例えば円板３２
を有し、この円板３２には、その中心にモータ３３の回
転軸３３ａが直交するように取り付けられ、このモータ
３３の駆動によって回転軸３３ａ回りに回転されるよう
になっている。また、円板３２には、その円周に沿って
透過波長域の異なる複数（例えば２枚）の励起光選択フ
ィルタ３４，３５が設けられ、各励起光選択フィルタ３
４，３５は、円板３２が回転する場合に集光レンズ８と
円筒管１７との間に介在されるように円板３２上に配置
されている。

【００３３】励起光選択フィルタ３４としては、透過波
長３４０ｎｍのものが挙げられ、励起光選択フィルタ３
５としては、透過波長３８０ｎｍのものが挙げられる。
なお、波長切替手段３１には、励起光選択フィルタ３
４，３５の位置を検出するセンサ系が設けられ、また、
そのセンサ系から得られる信号に基づいて回転モータ３
３の回転量を制御するコントローラ３６が設けられてい
る。波長の切替えは、コントローラ３６に接続されたパ
ーソナルコンピュータ２２によって操作される。

【００３４】この蛍光測定装置３０によれば、測定すべ
き試料Ｓの種類に応じて、又は測定上の必要に応じて適
宜波長を選択することが可能となる。また、蛍光測定装
置３０によれば、異なる波長の励起光を同一の試料Ｓに
照射し、その試料Ｓからの蛍光を測定し、その蛍光量の
比と、予め求められた蛍光量の比及び試料Ｓ内の所定イ
オン濃度の関係とを照合することにより、試料Ｓ中の所
定イオン濃度を算出することができる。

【００３５】例えば試料Ｓとして、蛍光指示薬ＦＵＲＡ
２を負荷した一定数の細胞、および細胞を生かしておく
ためのバッファー溶液が用いられる場合には、ＦＵＲＡ
２の励起波長として３４０ｎｍ、３８０ｎｍが選定さ
れ、各波長に対する細胞からの蛍光量が測定され、その
蛍光量の比と、予め求められた蛍光量の比及び細胞内の
Ｃａイオン濃度の関係とを照合することにより、細胞内
のＣａイオン濃度を算出することができる。

【００３６】次に、本発明に係る蛍光測定装置の第３実
施形態について説明する。なお、第１又は第２実施形態
と同一又は相当の構成要素については同一の符号を付
す。

【００３７】図１１は、第３実施形態に係る蛍光測定装
置４０の構成を示す概略図である。同図に示すように、
蛍光測定装置４０は、移動機構４１と、マイクロプレー
ト送出手段４２と、マイクロプレート収納手段４３と、
試薬分注手段４４とを更に備える点で第２実施形態に係
る蛍光測定装置３０と異なっている。

【００３８】ここで、移動機構４１は、暗箱２内におい
て、水平方向に並設された一対のガイドレール４５，４
５を有し、その一対のガイドレール４５，４５間にわた
って平板状のホルダ（図示せず）が配置され、そのホル
ダ上にマイクロプレート４が取り付けられている。な
お、ホルダには開口部が形成され、その開口部を通して
光導入用バンドルファイバ１２からの励起光がマイクロ
プレート４の底面４ａ側から照射される。また、移動機
構４１には、ホルダを駆動するベルトコンベヤ等の駆動
装置（図示せず）が設けられ、これによりマイクロプレ
ート４がガイドレール４５，４５に沿って一定方向に移
動可能となっている。

【００３９】また、マイクロプレート送出手段４２は、
ガイドレール４５，４５の延長線上であって暗箱２の側
面２ａに設けられるボックス状の収納部４６を有し、そ
の収納部４６内には、複数段に積み重ねられたマイクロ
プレート４が収納可能となっている。また、この収納部
４６内には、複数段に積み重ねられたマイクロプレート
４を収納部４６の最下部まで下降させて、送出口４７を
通して順次ガイドレール４５，４５上に送り出す送出し
機構（図示せず）が設けられている。

【００４０】一方、暗箱２には、ガイドレール４５，４
５の延長線上であってマイクロプレート送出手段４２と
反対側の側面２ｂにマイクロプレート収納手段４３が設
けられている。マイクロプレート収納手段４３は、複数
のマイクロプレート４を複数段に積み重ねて収納するボ
ックス状の収納部４９を有している。収納部４９内に
は、送入口５０を通ってガイドレール４５，４５からマ
イクロプレート４が送り込まれるごとにマイクロプレー
ト４を上方に移動させるリフト機構（図示せず）が設け
られている。

【００４１】また、ガイドレール４５，４５の下方で
は、ガイド部材２４が対峙され、ガイドレール４５，４
５の上方には、マイクロプレート４の各ウェル３に一括
に所定の反応試薬を注入可能な試薬分注手段４４が設け
られている。この試薬分注手段４４は、一対のガイドレ
ール５１，５１を有し、そのガイドレール５１，５１に
は複数（２台）の試薬分注器５２，５３が懸架され、こ
の試薬分注器５２，５３は、ガイドレール５１，５１に
沿って往復移動可能となっている。なお、試薬分注器５
２，５３は同一構成となっており、例えば試薬分注器５
２は、マイクロプレート４の各ウェル３の配列に対応し
て８列１２行、すなわち９６個の分注ノズル５２ａを通
して反応試薬が各ウェル３に注入される。

【００４２】この蛍光測定装置４０によれば、収納部４
６から送出し機構によってガイドレール４５，４５上に
送り出されたマイクロプレート４がガイド部材２４に対
峙され、試薬分注器５２，５３がガイドレール５１，５
１に沿って移動されてガイド部材２４に対峙されるとき
に、その試薬分注器５２，５３によってマイクロプレー
ト４の各ウェル３に反応試薬を一括に分注することが可
能となる。また、送出し機構によって収納部４６からガ
イドレール４５，４５上に送り出されて測定されるべき
マイクロプレート４が複数あっても、各マイクロプレー
ト４は送入口５０を通って収納部４９に次々に収納され
る。このため、収納部４６に予め測定すべき複数のマイ
クロプレート４を収納するだけで、蛍光測定が終了する
たびにマイクロプレート４をセットすることなく複数の
マイクロプレート４について連続して測定させることが
できる。その結果、省力化が可能となる。

【００４３】また、蛍光測定装置４０は、マイクロプレ
ート４の底面４ａ側から励起光を照射し、マイクロプレ
ート４の上面側から各ウェル３に反応試薬を滴下する構
成となっているため、反応試薬の分注前後のみならず、
分注中においても蛍光の測定が可能である。

【００４４】なお、試薬分注器５２，５３はそれぞれパ
ーソナルコンピュータから送出される入力指示信号ＣＢ
に基づき駆動制御部４８から送出される分注指示信号Ｂ
１，Ｂ２によって制御可能となっている。また、収納部
４６の送出し機構、ホルダの駆動装置、および収納部４
９のリフト機構は、それぞれパーソナルコンピュータ２
２から送出される入力指示信号ＣＢによる駆動制御部４
８からの制御信号ＣＬ，ＣＣ，ＣＳによって制御可能と
なっている。

【００４５】なお、前述の第３実施形態においては、試
薬分注器５２，５３は２台に限定されず、測定に必要な
試薬の種類にあわせて１台又は３台以上とすることも可
能である。また、試薬分注器５２，５３をガイドレール
５１，５１に沿って往復移動させたが、ベルトコンベヤ
を使用して往復移動させたり、円環状のガイドレールを
使用し、ガイドレール４５，４５の上方において複数の
試薬分注器を周回移動させたりするようにしてもよい。

【００４６】

【発明の効果】以上述べたように本発明は、マイクロプ
レートの底面側から励起光を照射し、測定対象物からの
蛍光を底面側から取り込むようにしたので、光導入用フ
ァイバからの励起光の光検出用ファイバへの混入を防止
することができる。更に、光導入用ファイバの開口数を
光検出用ファイバの開口数より小さくすることで、励起
光を効率よく測定対象物に照射することができると共に
蛍光の測定精度を向上させることができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明による蛍光測定装置の第１実施形態を示
す概略断面図である。

【図２】（ａ）は光導入用バンドルファイバの断面図で
あり、（ｂ）は光検出用バンドルファイバの断面図であ
る。

【図３】マイクロプレートと、光導入用バンドルファイ
バおよび光検出用バンドルファイバの端部との位置関係
を示す一部断面側面図である。

【図４】光導入用ファイバ及び光検出用ファイバの端部
を示す一部断面側面図である。

【図５】図４のＶ−Ｖ線に沿った断面図である。

【図６】（ａ）は光導入用ファイバのコアの出射端から
励起光が射出される状態を示す斜視図であり、（ｂ）は
光検出用ファイバのコアの入射端で蛍光を取り込む状態
を示す斜視図である。

【図７】光導入用および光検出用バンドルファイバと、
ウェルとの位置関係を表す一部断面側面図である。

【図８】各光導入用ファイバの出射端から励起光が出射
される状態を示す一部断面側面図である。

【図９】各光検出用ファイバの入射端に蛍光が取り込ま
れる状態を示す一部断面側面図である。

【図１０】本発明による蛍光測定装置の第２実施形態を
示す概略断面図である。

【図１１】本発明による蛍光測定装置の第３実施形態を
示す概略断面図である。

【符号の説明】

１…蛍光測定装置、３…ウェル、４…マイクロプレー
ト、４ａ…底面、５…光源ユニット（励起光発生手
段）、７…白色光源（励起光発生手段）、８…集光レン
ズ（励起光発生手段）、９…励起光選択フィルタ（励起
光発生手段）、１０…光電子増倍管（蛍光検出手段）、
１１…蛍光選択フィルタ（蛍光検出手段）、２４…ガイ
ド部材、６０…光導入用ファイバ、６１…光検出用ファ
イバ。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】複数のウェルが形成されたマイクロプレ
ートの底面側から、前記各ウェル内の測定対象物に励起
光を照射し前記各測定対象物からの蛍光を前記マイクロ
プレートの底面側で検出する蛍光測定装置において、前記励起光を発生する励起光発生手段と、前記各ウェルに対し出射端面が前記ウェルに対応する前
記マイクロプレートの前記底面に対峙され、入射端面で
前記励起光発生手段からの励起光を取り込む光導入用フ
ァイバと、前記各ウェルに対し入射端面が前記ウェルに対応する前
記マイクロプレートの前記底面に対峙され、出射端面で
前記ウェル内の前記測定対象物からの蛍光を射出する光
検出用ファイバと、前記光検出用ファイバの出射端面から射出される蛍光を
検出するための蛍光検出手段とを備え、前記光導入用ファイバの開口数が前記光検出用ファイバ
の開口数より小さくなっていることを特徴とする蛍光測
定装置。
【請求項２】前記各ウェルに対しそのウェルに対応す
る前記光検出用ファイバが、隣接する前記ウェルからの
蛍光を入射不可能とする開口数を有することを特徴とす
る請求項１記載の蛍光測定装置。
【請求項３】前記各ウェルに対し前記光導入用ファイ
バ及び光検出用ファイバが複数本設けられ、前記光検出
用ファイバに対し前記光検出用ファイバがランダムに混
合されていることを特徴とする請求項１又は２に記載の
蛍光測定装置。
【請求項４】前記マイクロプレートの底面側に配置さ
れ、前記各ウェルに対応して前記光導入用ファイバの出
射端部及び前記光検出用ファイバの入射端部を収容する
開口部をもったガイド部材を備えることを特徴とする請
求項１〜３のいずれか一項に記載の蛍光測定装置。