JPH10259195A - 血栓の検出に使用する合成ペプチド類 - Google Patents
血栓の検出に使用する合成ペプチド類Info
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- JPH10259195A JPH10259195A JP9277888A JP27788897A JPH10259195A JP H10259195 A JPH10259195 A JP H10259195A JP 9277888 A JP9277888 A JP 9277888A JP 27788897 A JP27788897 A JP 27788897A JP H10259195 A JPH10259195 A JP H10259195A
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【課題】ヒトおよび動物の両者における、基本的には勿
論、ヒトの疾病における血栓の検出のための合成ペプチ
ド類の開発および用途を提供する。 【解決手段】３乃至１０のペプチド単位のオリゴペプチ
ドよりなり、ＲＧＤ特にオリゴペプチドＲＧＤＳＹ及び
ＲＧＤＦＹ配列順序を含む放射性で標識したペプチド、
および哺乳動物の血栓、腫瘍又は細胞接着分子（ＣＡ
Ｍ）の生体内での診断又は検出のための標識としての使
用。
論、ヒトの疾病における血栓の検出のための合成ペプチ
ド類の開発および用途を提供する。 【解決手段】３乃至１０のペプチド単位のオリゴペプチ
ドよりなり、ＲＧＤ特にオリゴペプチドＲＧＤＳＹ及び
ＲＧＤＦＹ配列順序を含む放射性で標識したペプチド、
および哺乳動物の血栓、腫瘍又は細胞接着分子（ＣＡ
Ｍ）の生体内での診断又は検出のための標識としての使
用。
Description
この発明は、ヒトおよび動物の両者における、基本的に
は勿論、ヒトの疾病における血栓の検出のための合成ペ
プチド類の開発および用途に関する。この発明に使用し
た方法および合成ペプチド類は、生体内の標的とする他
の部位、例えばＲＧＤ結合部位を含む細胞接着分子（Ｃ
ＡＭｓ）および腫瘍にも有効である。１９８７年、ピエ
ルシュバッヘル（Ｐｉｅｒｓｃｈｂａｃｈｅｒ）および
ルオスラチ（Ｒｕｏｓｌａｈｔｉ）は、フィブロネクチ
ンの細胞接触活性が合成ペプチドの小さい断片によって
模倣的に生ずる証拠を示した（Ｎａｔｕｒｅ，３０９，
３０−３３）。この活性能力のあるアミノ酸配列順序
は、アルキニン−グリシン−アスパラギン酸−セリン
（ＲＧＤＳ）であることが示され、この配列順序を含む
合成ペプチド類は、フィブロネクチンで被覆された基質
へのＮＲＫ細胞（神経芽腫細胞系からの細胞）の接触を
阻害し得ることが証明された。ＲＧＤＳを含むペプチド
類で得られる阻害は、用量依存性があることが示されて
いるが、ＲＧＤＳ配列順序を含まないペプチド類は細胞
接触を阻害することができなかった。テトラペプチドの
セリン基は、生物学的活性を保持するための通常の置換
体であるけれども必須なものでないことが知られてい
る。ＲＧＤＳ配列順序はフィブリノゲン、フィブロネク
チンおよびフォンウィルブランド（ｖｏｎ Ｗｉｌｌｅ
ｂｒａｎｄ）因子中に存在することが知られている。こ
れらの蛋白の受容器は、血小板の活性化のによって血小
板の膜表面に現れる。これらの細胞接着蛋白による血小
板の架橋は、血栓中の血小板−血小板の相互作用の原因
となる。ＲＧＤＳを含む合成ペプチド類が、生体外で血
小板凝集を阻害し得ることも立証されている。これは、
血小板膜表面に存在し、フィブリノゲン結合領域を含む
ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ（糖蛋白質フィブリノゲン受容
器）複合体との特異な相互作用を示唆している。カルボ
ン酸およびアミノ末端に一個のアミノ酸基が結合するこ
とによるＲＧＤＳ配列順序の延長は、その生物学的活性
において１０倍の減少を起こすが、さらに延長しても結
合能力がさらに減少することはない。セリン基をフェニ
ルアラニン基で置換すると、ＲＧＤＳよりも４ないし５
倍強力な抗凝集蛋白になる。ＲＧＤＳ配列順序において
セリンに相当する基は、異なるＲＧＤＳ受容器に対し
て、ある程度の認識特異性を伝達することができるとい
う示唆がなされている。これは、ＲＧＤ配列順序の周辺
を置換することによって、特異性および親和性の両者を
変化させ得る可能性を示している。ＲＧＤ結合部位が、
細胞接着分子（ＣＡＭｓ）および幾つかの腫瘍にあるこ
とも知られている。本発明は、生体内における血栓の検
出への新しい研究方法であり、患者（この用語は、本文
中で特に断らない限り、ヒトおよび動物の両者を意味す
る）への、血小板ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ複合体に対して
特異な親和性を有し、ＲＧＤ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓ
ｐ）配列順序、好適にはＲＧＤＳ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａ
ｓｐ−Ｓｅｒ）またはＲＧＤＦ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓ
ｐ−Ｐｈｅ）配列順序を含む放射性で標識した合成ペプ
チドの静脈注射、および、存在する場合には、血栓上で
の結合標識の存在を検出するものである。標識した抗体
を用いる血栓検出のこの方法は、系内における抗体の拡
散速度が遅いため数時間を要する；本発明の標識したペ
プチドを使用すると血栓の検出がおよそ数分で可能なこ
とが期待され、診断および治療がごく早期の段階で極め
て容易になる。生体における血栓検出のための用途とし
て、本発明はＲＧＤ，好適にはＲＧＤＳまたはＲＧＤＦ
配列順序を含み、放射性で標識された合成ペプチドを提
供するものである。上記のような放射性で標識されたペ
プチド類を製造するために用いられる好ましい放射性標
識の例としては、Ｔｃ９９ｍ、Ｉ１２３およびＩｎ
１１１が挙げられ、既知の方法、例えば合成ペプチドの
システイン基により合成ペプチドに取り入れられる。そ
の他の適当な方法は、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２０，６１３
−６１５；Ｉｎｔ．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏ
ｌ．，１２，３−８；Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，２７，
６８５−６９３およびＪ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，２６，
２９３−２９９に記載されている。非経口投与および有
効性、即ちＧＰＴＩＩｂ／ＩＩＩａ複合体への高い親和
性および特異性を妥当性の条件とすると、組成および長
さの点で、正確なアミノ酸配列順序は特に重要ではない
が、実際上の理由、例えば経済的および合成の容易さの
ために、比較的短い鎖、例えば３ないし１０のペプチド
単位よりなるペプチドが好ましい。ＲＧＤ、好適にはＲ
ＧＤＳまたはＲＧＤＦ配列順序を含む好ましいペプチド
類は、異なる各種の原料から入手できる、若しくは通常
のペプチド合成法、特に通常のペプチド合成装置を用い
て極めて容易に製造することができる。非経口的に投与
できるＲＧＤ配列順序を含む放射性で標識されたペプチ
ド溶液および非経口的に投与できる担体よりなる生体内
での血栓検出の診断薬、および血栓の血小板上でのＲＧ
Ｄ結合部位に結合することができるＲＧＤ配列順序を含
む放射能で標識されたペプチド静脈注射し、蓄積した結
合性ペプチドをＸ線写真で検出することよりなる生体内
で血栓を検出する方法が、この発明の範囲に含まれる。
この発明は、生体内でＣＡＭｓのＲＧＤ結合部位に局在
化した放射性で標識したペプチドの用途にも関する。こ
の発明の詳細な記述を行う前に、誤解を避けるため、こ
こに記述するアミノ酸配列順序は、次のように、三文字
の短縮形または一文字の略号の何れかによって表現す
る： アルギニン ＝ ａｒｇ．またはＲ． アスパラギン酸 ＝ ａｓｐ．またはＤ． グリシン ＝ ｇｌｙ．またはＧ． セリン ＝ ｓｅｒ．またはＳ． チロシン ＝ ｔｙｒ．またはＹ． フェニルアラニン ＝ ｐｈｅ．またはＦ． システイン ＝ ｃｙｓ．またはＣ． 添付の図は、この発明の放射性で標識したペプチドの静
脈注射したウサギの放射線写真であり、左耳において人
工的に誘発した血栓中のペプチドの局在化を示す。この
発明をより詳細に説明するため、血栓造影剤としての有
効性を評価するための四種のペプチド（ＲＧＤＳＹ、Ｒ
ＧＤＦＹ、ＲＧＤＳＹＣおよびＲＧＤＳＣＲＧＤＳＹ）
を用いて研究を行った。ＡＤＰが誘発した血小板凝集に
対するこれらのペプチドの効果を測定し、血小板凝集を
阻害することが知られているＲＧＤＳペプチドと比較し
た。この結果は
は勿論、ヒトの疾病における血栓の検出のための合成ペ
プチド類の開発および用途に関する。この発明に使用し
た方法および合成ペプチド類は、生体内の標的とする他
の部位、例えばＲＧＤ結合部位を含む細胞接着分子（Ｃ
ＡＭｓ）および腫瘍にも有効である。１９８７年、ピエ
ルシュバッヘル（Ｐｉｅｒｓｃｈｂａｃｈｅｒ）および
ルオスラチ（Ｒｕｏｓｌａｈｔｉ）は、フィブロネクチ
ンの細胞接触活性が合成ペプチドの小さい断片によって
模倣的に生ずる証拠を示した（Ｎａｔｕｒｅ，３０９，
３０−３３）。この活性能力のあるアミノ酸配列順序
は、アルキニン−グリシン−アスパラギン酸−セリン
（ＲＧＤＳ）であることが示され、この配列順序を含む
合成ペプチド類は、フィブロネクチンで被覆された基質
へのＮＲＫ細胞（神経芽腫細胞系からの細胞）の接触を
阻害し得ることが証明された。ＲＧＤＳを含むペプチド
類で得られる阻害は、用量依存性があることが示されて
いるが、ＲＧＤＳ配列順序を含まないペプチド類は細胞
接触を阻害することができなかった。テトラペプチドの
セリン基は、生物学的活性を保持するための通常の置換
体であるけれども必須なものでないことが知られてい
る。ＲＧＤＳ配列順序はフィブリノゲン、フィブロネク
チンおよびフォンウィルブランド（ｖｏｎ Ｗｉｌｌｅ
ｂｒａｎｄ）因子中に存在することが知られている。こ
れらの蛋白の受容器は、血小板の活性化のによって血小
板の膜表面に現れる。これらの細胞接着蛋白による血小
板の架橋は、血栓中の血小板−血小板の相互作用の原因
となる。ＲＧＤＳを含む合成ペプチド類が、生体外で血
小板凝集を阻害し得ることも立証されている。これは、
血小板膜表面に存在し、フィブリノゲン結合領域を含む
ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ（糖蛋白質フィブリノゲン受容
器）複合体との特異な相互作用を示唆している。カルボ
ン酸およびアミノ末端に一個のアミノ酸基が結合するこ
とによるＲＧＤＳ配列順序の延長は、その生物学的活性
において１０倍の減少を起こすが、さらに延長しても結
合能力がさらに減少することはない。セリン基をフェニ
ルアラニン基で置換すると、ＲＧＤＳよりも４ないし５
倍強力な抗凝集蛋白になる。ＲＧＤＳ配列順序において
セリンに相当する基は、異なるＲＧＤＳ受容器に対し
て、ある程度の認識特異性を伝達することができるとい
う示唆がなされている。これは、ＲＧＤ配列順序の周辺
を置換することによって、特異性および親和性の両者を
変化させ得る可能性を示している。ＲＧＤ結合部位が、
細胞接着分子（ＣＡＭｓ）および幾つかの腫瘍にあるこ
とも知られている。本発明は、生体内における血栓の検
出への新しい研究方法であり、患者（この用語は、本文
中で特に断らない限り、ヒトおよび動物の両者を意味す
る）への、血小板ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ複合体に対して
特異な親和性を有し、ＲＧＤ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓ
ｐ）配列順序、好適にはＲＧＤＳ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａ
ｓｐ−Ｓｅｒ）またはＲＧＤＦ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓ
ｐ−Ｐｈｅ）配列順序を含む放射性で標識した合成ペプ
チドの静脈注射、および、存在する場合には、血栓上で
の結合標識の存在を検出するものである。標識した抗体
を用いる血栓検出のこの方法は、系内における抗体の拡
散速度が遅いため数時間を要する；本発明の標識したペ
プチドを使用すると血栓の検出がおよそ数分で可能なこ
とが期待され、診断および治療がごく早期の段階で極め
て容易になる。生体における血栓検出のための用途とし
て、本発明はＲＧＤ，好適にはＲＧＤＳまたはＲＧＤＦ
配列順序を含み、放射性で標識された合成ペプチドを提
供するものである。上記のような放射性で標識されたペ
プチド類を製造するために用いられる好ましい放射性標
識の例としては、Ｔｃ９９ｍ、Ｉ１２３およびＩｎ
１１１が挙げられ、既知の方法、例えば合成ペプチドの
システイン基により合成ペプチドに取り入れられる。そ
の他の適当な方法は、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２０，６１３
−６１５；Ｉｎｔ．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏ
ｌ．，１２，３−８；Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，２７，
６８５−６９３およびＪ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，２６，
２９３−２９９に記載されている。非経口投与および有
効性、即ちＧＰＴＩＩｂ／ＩＩＩａ複合体への高い親和
性および特異性を妥当性の条件とすると、組成および長
さの点で、正確なアミノ酸配列順序は特に重要ではない
が、実際上の理由、例えば経済的および合成の容易さの
ために、比較的短い鎖、例えば３ないし１０のペプチド
単位よりなるペプチドが好ましい。ＲＧＤ、好適にはＲ
ＧＤＳまたはＲＧＤＦ配列順序を含む好ましいペプチド
類は、異なる各種の原料から入手できる、若しくは通常
のペプチド合成法、特に通常のペプチド合成装置を用い
て極めて容易に製造することができる。非経口的に投与
できるＲＧＤ配列順序を含む放射性で標識されたペプチ
ド溶液および非経口的に投与できる担体よりなる生体内
での血栓検出の診断薬、および血栓の血小板上でのＲＧ
Ｄ結合部位に結合することができるＲＧＤ配列順序を含
む放射能で標識されたペプチド静脈注射し、蓄積した結
合性ペプチドをＸ線写真で検出することよりなる生体内
で血栓を検出する方法が、この発明の範囲に含まれる。
この発明は、生体内でＣＡＭｓのＲＧＤ結合部位に局在
化した放射性で標識したペプチドの用途にも関する。こ
の発明の詳細な記述を行う前に、誤解を避けるため、こ
こに記述するアミノ酸配列順序は、次のように、三文字
の短縮形または一文字の略号の何れかによって表現す
る： アルギニン ＝ ａｒｇ．またはＲ． アスパラギン酸 ＝ ａｓｐ．またはＤ． グリシン ＝ ｇｌｙ．またはＧ． セリン ＝ ｓｅｒ．またはＳ． チロシン ＝ ｔｙｒ．またはＹ． フェニルアラニン ＝ ｐｈｅ．またはＦ． システイン ＝ ｃｙｓ．またはＣ． 添付の図は、この発明の放射性で標識したペプチドの静
脈注射したウサギの放射線写真であり、左耳において人
工的に誘発した血栓中のペプチドの局在化を示す。この
発明をより詳細に説明するため、血栓造影剤としての有
効性を評価するための四種のペプチド（ＲＧＤＳＹ、Ｒ
ＧＤＦＹ、ＲＧＤＳＹＣおよびＲＧＤＳＣＲＧＤＳＹ）
を用いて研究を行った。ＡＤＰが誘発した血小板凝集に
対するこれらのペプチドの効果を測定し、血小板凝集を
阻害することが知られているＲＧＤＳペプチドと比較し
た。この結果は
【表１】 のとおりであり、試験した四種のペプチドすべてが高濃
度で血小板凝集を阻害し得ること、およびＲＧＤＳと殆
ど同程度の効力を有することを示した。これは、これら
のペプチド配列順序への放射性で標識したアミノ酸の導
入が、血小板と結合する能力を破壊しないことを示して
いる（血栓造影処理のための前提条件）。次の試験で
は、ＲＧＤＳＹ、ＲＧＤＦＹ、ＲＧＤＳＹＣおよびＲＧ
ＤＳＣＲＧＤＳＹの放射性ヨウ素化、次いで全血液中の
活性化された血小板に対する結合能の解析を行った。そ
の結果は
度で血小板凝集を阻害し得ること、およびＲＧＤＳと殆
ど同程度の効力を有することを示した。これは、これら
のペプチド配列順序への放射性で標識したアミノ酸の導
入が、血小板と結合する能力を破壊しないことを示して
いる（血栓造影処理のための前提条件）。次の試験で
は、ＲＧＤＳＹ、ＲＧＤＦＹ、ＲＧＤＳＹＣおよびＲＧ
ＤＳＣＲＧＤＳＹの放射性ヨウ素化、次いで全血液中の
活性化された血小板に対する結合能の解析を行った。そ
の結果は
【表２】 のとおりであり、四種類のペプチドすべてが、ＡＤＰで
刺激された血液中の血小板と結合すること、および凝固
した血液中への取込みが高いことを示している。試験の
一つは、ヨウ素−１２３の放射性同位体で標識したＲＧ
ＤＳＹを用い、耳の微小血管系に血栓を予め形成したウ
サギに注射して行った。添付の図に示した画像の研究
は、この血栓に速やかに（２分以内）取込まれ、試験の
期間中（２０分）残存していることを示した。これらの
データは、試験した四種類のペプチドが血小板と結合し
得ること、ガンマ線を放出する同位体で放射性の標識が
なされ得ること、および刺激された血液および凝固した
血液中の凝集血小板に取込まれることを示している。こ
れは、上記のペプチドの一つを用いた実験動物モデルで
確認された生体内での血栓の検出および診断用に、これ
らのペプチドが有効であることを示している。上記の結
果は、ＲＧＤ配列順序を含む大きさの異なる一連の合成
ペプチドのすべてに対して、この発明の適用の可能性を
証拠立てている。ペプチドの実際の長さは重要でない
が、実際上の目的には、鎖の長さは３ないし１０、好適
には４ないし１０ペプチド単位の範囲であり、前述のご
とく、何れもＲＧＤＳまたはＲＧＤＦ配列順序よりな
り、若しくは含有する。多くのかかる合成ペプチドは、
既知の製品として既に市販されている。市販されていな
い場合には、既知のペプチド合成および／または既知の
ペプチド合成装置を用いて容易に合成される。同様に、
該合成ペプチドは既知の方法、例えばこのペプチドに組
込まれた末端のチロシン（Ｙ）をＩ１２３でヨウ素化す
ることによって、放射能で標識することができる。この
発明の放射能で標識されたペプチドの詳細な製法は、以
下の実施例によって例示される。
刺激された血液中の血小板と結合すること、および凝固
した血液中への取込みが高いことを示している。試験の
一つは、ヨウ素−１２３の放射性同位体で標識したＲＧ
ＤＳＹを用い、耳の微小血管系に血栓を予め形成したウ
サギに注射して行った。添付の図に示した画像の研究
は、この血栓に速やかに（２分以内）取込まれ、試験の
期間中（２０分）残存していることを示した。これらの
データは、試験した四種類のペプチドが血小板と結合し
得ること、ガンマ線を放出する同位体で放射性の標識が
なされ得ること、および刺激された血液および凝固した
血液中の凝集血小板に取込まれることを示している。こ
れは、上記のペプチドの一つを用いた実験動物モデルで
確認された生体内での血栓の検出および診断用に、これ
らのペプチドが有効であることを示している。上記の結
果は、ＲＧＤ配列順序を含む大きさの異なる一連の合成
ペプチドのすべてに対して、この発明の適用の可能性を
証拠立てている。ペプチドの実際の長さは重要でない
が、実際上の目的には、鎖の長さは３ないし１０、好適
には４ないし１０ペプチド単位の範囲であり、前述のご
とく、何れもＲＧＤＳまたはＲＧＤＦ配列順序よりな
り、若しくは含有する。多くのかかる合成ペプチドは、
既知の製品として既に市販されている。市販されていな
い場合には、既知のペプチド合成および／または既知の
ペプチド合成装置を用いて容易に合成される。同様に、
該合成ペプチドは既知の方法、例えばこのペプチドに組
込まれた末端のチロシン（Ｙ）をＩ１２３でヨウ素化す
ることによって、放射能で標識することができる。この
発明の放射能で標識されたペプチドの詳細な製法は、以
下の実施例によって例示される。
放射性で標識された（Ｉ１２３）ＲＧＤＳＹ、ＲＧＤＦ
Ｙ、ＲＧＤＳＹＣおよびＲＧＤＳＣＲＤＳＹの製法 ヨードゲン（Ｉｏｄｏｇｅｎ）管を、ヨードゲン（１，
３，４，６−テトラクロロ−３α，６α−ジフェニルグ
リコールウリル）をクロロホルムに１ｍｇ・ｍｌ−１の
濃度で溶解することにより製した。その５０μｌ（ヨー
ドケン５０μｌ）をポリプロピレン凍結管に分配し、ク
ロロホルムを乾固した。次いでこれらの管を用時まで−
２０℃で乾燥、貯蔵した。放射性標識前に、ペプチドを
リン酸緩衝液（ＰＢＳ）に５０μｇ・ｍｌ−１の濃度に
溶解した。最初にＲＧＤＳＹＣおよびＲＧＤＳＣＲＧＤ
ＳＹを、ＰＢＳ中のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）
の最終濃度が１％ｖ／ｖになるように小量のＤＭＳＯに
溶解した。ヨードケン管を室温に平衡させ、ペプチド溶
液２００μｌおよび１２３Ｉ（水溶液）１〜１０μｌを
添加した。次いで、反応混合物を１５分間室温に放置
し、時々振 した。定温放置後、反応混合物を取り出
し、ＰＢＳで平衡させたセファデックス（Ｓｅｐｈａｄ
ｅｘ）Ｇ１０カラムを通した。放射性で標識したペプチ
ドを遊離のヨウ素から分離するため、カラムをＰＢＳで
溶出し、２ｍｌづつの留分を集めた。留分中の放射能を
測定し、カラムから溶出した最初の放射能ピークを示す
ペプチドを集め、用時まで４℃で貯蔵した。生体内での
血栓検出における放射能で標識したペプチドの用途を、
以下の試験例によって例示する。
Ｙ、ＲＧＤＳＹＣおよびＲＧＤＳＣＲＤＳＹの製法 ヨードゲン（Ｉｏｄｏｇｅｎ）管を、ヨードゲン（１，
３，４，６−テトラクロロ−３α，６α−ジフェニルグ
リコールウリル）をクロロホルムに１ｍｇ・ｍｌ−１の
濃度で溶解することにより製した。その５０μｌ（ヨー
ドケン５０μｌ）をポリプロピレン凍結管に分配し、ク
ロロホルムを乾固した。次いでこれらの管を用時まで−
２０℃で乾燥、貯蔵した。放射性標識前に、ペプチドを
リン酸緩衝液（ＰＢＳ）に５０μｇ・ｍｌ−１の濃度に
溶解した。最初にＲＧＤＳＹＣおよびＲＧＤＳＣＲＧＤ
ＳＹを、ＰＢＳ中のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）
の最終濃度が１％ｖ／ｖになるように小量のＤＭＳＯに
溶解した。ヨードケン管を室温に平衡させ、ペプチド溶
液２００μｌおよび１２３Ｉ（水溶液）１〜１０μｌを
添加した。次いで、反応混合物を１５分間室温に放置
し、時々振 した。定温放置後、反応混合物を取り出
し、ＰＢＳで平衡させたセファデックス（Ｓｅｐｈａｄ
ｅｘ）Ｇ１０カラムを通した。放射性で標識したペプチ
ドを遊離のヨウ素から分離するため、カラムをＰＢＳで
溶出し、２ｍｌづつの留分を集めた。留分中の放射能を
測定し、カラムから溶出した最初の放射能ピークを示す
ペプチドを集め、用時まで４℃で貯蔵した。生体内での
血栓検出における放射能で標識したペプチドの用途を、
以下の試験例によって例示する。
放射性で標識した（Ｉ１２３）ＲＧＤＳＹの血栓症ウサ
ギへの静脈内投与 雄のニュージーランドホワイトウサギ（３ｋｇ）を、ヒ
プノルム（Ｈｙｐｎｏｒｍ）（０．４ｍｌ・ｋｇ−１）
の筋肉内注射で鎮静させ、次いでミダゾラム（Ｍｉｄａ
ｚｏｌａｍ）（２ｍｇ・ｋｇ−１）を静脈注射して麻酔
した。二個の円盤状永久磁石を頸静脈領域の外側に配置
し、次いでウサギの左耳動脈に対照溶媒［オムニパク
（Ｏｍｕｎｉｐａｑｕｅ）］の１ｍｌに懸濁した鉄カル
ボニルミクロスフェア０．２ｇを注射した。この方法は
耳の毛細管に微小な血栓を形成する。他方、耳を通過し
た鉄粒子は磁場によって捕捉され頸静脈内で血栓の形成
を促す。鉄注射の６０分後、反対側の耳に１２３Ｉ−Ｒ
ＧＤＳＹを静脈注射した。ガンマカメラによる動的な画
像は、両耳、頭及び頚部を視野に入れるため、前方に配
置したカメラで２０分間フレーム速度１分で撮影した。
標識したペプチドの静脈注射を行った後、ウサギのＸ線
写真を撮影し、得られたＸ線写真を添付した図に示し
た。Ｘ線写真で判るように、頸静脈内の血栓（矢印１）
及び左耳内の多数の小さな血栓によるペプチドの速やか
な吸収が見られた。特に、後者は生体内における小さな
血栓の検出、及び早期の診断と治療の可能性での、この
発明の有効性を示している。
ギへの静脈内投与 雄のニュージーランドホワイトウサギ（３ｋｇ）を、ヒ
プノルム（Ｈｙｐｎｏｒｍ）（０．４ｍｌ・ｋｇ−１）
の筋肉内注射で鎮静させ、次いでミダゾラム（Ｍｉｄａ
ｚｏｌａｍ）（２ｍｇ・ｋｇ−１）を静脈注射して麻酔
した。二個の円盤状永久磁石を頸静脈領域の外側に配置
し、次いでウサギの左耳動脈に対照溶媒［オムニパク
（Ｏｍｕｎｉｐａｑｕｅ）］の１ｍｌに懸濁した鉄カル
ボニルミクロスフェア０．２ｇを注射した。この方法は
耳の毛細管に微小な血栓を形成する。他方、耳を通過し
た鉄粒子は磁場によって捕捉され頸静脈内で血栓の形成
を促す。鉄注射の６０分後、反対側の耳に１２３Ｉ−Ｒ
ＧＤＳＹを静脈注射した。ガンマカメラによる動的な画
像は、両耳、頭及び頚部を視野に入れるため、前方に配
置したカメラで２０分間フレーム速度１分で撮影した。
標識したペプチドの静脈注射を行った後、ウサギのＸ線
写真を撮影し、得られたＸ線写真を添付した図に示し
た。Ｘ線写真で判るように、頸静脈内の血栓（矢印１）
及び左耳内の多数の小さな血栓によるペプチドの速やか
な吸収が見られた。特に、後者は生体内における小さな
血栓の検出、及び早期の診断と治療の可能性での、この
発明の有効性を示している。
【図１】 この発明の放射性で標識したペプチドの静脈
注射したウサギの放射線写真
注射したウサギの放射線写真
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｇ０１Ｎ 33/566 Ａ６１Ｋ 49/02 Ａ // Ｃ０７Ｍ 5:00
Claims (10)
- 【請求項１】 生体内でＲＧＤ結合部位に結合すること
ができる３乃至１０のペプチド単位よりなり、該３乃至
１０のペプチド単位中に、アルギニン−グリシン−アス
パラギン酸−フェニルアラニン（ＲＧＤ）の配列順序を
含む放射性で標識したペプチド。 - 【請求項２】 アルギニン−グリシン−アスパラギン酸
−セリン（ＲＧＤＳ）配列順序またはアルギニン−グリ
シン−アスパラギン酸−フェニルアラニン（ＲＧＤＦ）
配列順序よりなり、またはそれらを含む請求項１記載の
放射性で標識したペプチド。 - 【請求項３】 特に、ペプチドがＲＧＤＳＹ、ＲＧＤＦ
Ｙ、ＲＧＤＳＹＣ及びＲＧＤＳＣＲＧＤＳＹである請求
項１記載の放射性で標識したペプチド。 - 【請求項４】 放射性標識がＴｃ９９ｍ、Ｉ１２３また
はＩｎ１１１である請求項１乃至３の何れか一つに記載
の放射性で標識したペプチド。 - 【請求項５】 非経口的に投与し得る放射性で標識した
ＲＧＤ配列順序を含むペプチド及び非経口的に投与し得
る担体よりなる、ＲＧＤ結合部位における生体内での局
在性診断薬。 - 【請求項６】 該ＲＧＤ結合部位が血小板の結合部位で
ある請求項５記載の診断薬。 - 【請求項７】 該ＲＧＤ結合部位が血栓である請求項６
記載の診断薬。 - 【請求項８】 該ＲＧＤ結合部位が細胞接着分子である
請求項５の診断薬。 - 【請求項９】 該ＲＧＤ結合部位が腫瘍である請求項５
記載の診断薬。 - 【請求項１０】 放射性標識したペプチドが請求項１乃
至４の何れかの化合物である請求項５乃至９の何れかに
記載の診断薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9277888A JPH10259195A (ja) | 1997-09-04 | 1997-09-04 | 血栓の検出に使用する合成ペプチド類 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9277888A JPH10259195A (ja) | 1997-09-04 | 1997-09-04 | 血栓の検出に使用する合成ペプチド類 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2509749A Division JP2740794B2 (ja) | 1989-06-19 | 1990-06-18 | 血栓の検出に使用する合成ペプチド類 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10259195A true JPH10259195A (ja) | 1998-09-29 |
Family
ID=17589692
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9277888A Pending JPH10259195A (ja) | 1997-09-04 | 1997-09-04 | 血栓の検出に使用する合成ペプチド類 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH10259195A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101201557B1 (ko) | 2010-03-24 | 2012-11-14 | 경북대학교 산학협력단 | 상피세포 유래 암질환 표적 펩타이드 및 이의 의학적 용도 |
-
1997
- 1997-09-04 JP JP9277888A patent/JPH10259195A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101201557B1 (ko) | 2010-03-24 | 2012-11-14 | 경북대학교 산학협력단 | 상피세포 유래 암질환 표적 펩타이드 및 이의 의학적 용도 |
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