RO114895B1 - REACTIV PENTRU PREPARAREA UNUI PRODUS RADIOFARMACEUTIC, PRODUS RADIOFARMACEUTIC, METODĂ PENTRU VIZUALIZAREA POZIȚIEI DEPOZITULUI PLACHETAR LA MAMIFERE Șl COMPUS RADIOMARCAT - Google Patents

Abstract

: Invenția se referă la un reactiv pentru prepararea unui produs radiofarmaceutic, care prezintă formula generală: (QLn)dCh; (Q]d. Ln - Ch, la un produs radiofarmaceutic ce conține un complex de reactivi, la o metodă pentru vizualizarea poziției depozitului plachetar la mamifere, precum și la un compus radiomarcat, cu destinație în diagnoza tulburărilor tromboembolice. Revendicări: 70 Figuri: 1

Description

Invenția de față se referă la un reactiv pentru prepararea unui produs radiofarmaceutic, la un produs radiofarmaceutic, la o metodă pentru vizualizarea poziției depozitului plachetar la mamifere cu acest reactiv și la un compus radiomarcat conținut în reactiv.

Deci, prezenta invenție se referă la noi produse radiofarmaceutice, care sunt compuși ciclici radiomarcați, conținând sisteme carbociclice sau cicluri heterociclice, la metodele pentru utilizarea acestor produse radiofarmaceutice ca agenți de vizualizare pentru diagnosticul trombilor arteriali și venoși, la noi reactivi, pentru prepararea acestor produse radiofarmaceutice.

Recunoșterea clinică a tulburărilor tromboembolice venoase și arteriale este inconstantă, lipsind atât sensibilitatea, cât și specificitatea. In lumina unei situații care amenință potențial viața, necesitatea unui diagnostic rapid al tulburărilor tromboembolice, utilizând o metodă neinvazivă, este o necesitate clinică nerezolvată. Activarea plachetei și agregarea rezultată, s-au arătat a fi asociate cu diferite condiții patofiziologice, incluzând tulburările tromboembolice cardiovasculare și cerebrovasculare, cum ar fi de exemplu angina instabilă, infarctul miocardic, atacul ischemic tranzitoriu, pulsul, ateroscleroza și diabetul. Contribuția plachetelor la aceste procese de boală apare din capacitatea acestora de a forma agregate sau trombi plachetari, în special în pereții arteriali ca urmare a acestor tulburări. [A se vedea în general, Fuster ș. a., JACC, voi. 5, nr. 6, pag.175B...183B (1985). Rubenstein ș. a., Am.Heart J., voi.102, pag. 363...367 (1981). Hamm ș.a., J. Am. Coli. Cardiol., voi.10, pag.

998...1006 (1987) și Davies ș. a., Circulation, voi. 73 pag. 418...427 (1986)]. Recent, complecșii ll_b/lll_a ai plachetelor glicoproteice (GP ΙΙ_ϋ/ΙΙζ), au fost identificați ca membrane proteice care mediază agregarea plachetară, prin formarea unui suport comun pentru agoniștii plachetelor cunoscute . [A se vedea Philips et al., Cell, voi. 65, pag. 359...362 (1991)].

Activarea și agregarea plachetelor joacă un rol semnificativ în tulburările tromboembolice venoase, cum ar fi de exemplu tromboflebita venoasă și embolia pulmonară ulterioară.

Este de asemenea cunoscut că, pacienții al căror sânge circulă pe suprafețe artificiale, cum ar fi valvele cardiace sintetice protetice, constituie un risc pentru dezvoltarea dopurilor plachetare, a trombilor și embolilor. [A se vedea în general, Fuster ș. a., JACC, voi. 5, nr. 5, pag. 175B...183B (1985). Rubenstein ș.a.. Am. Heart J. 102, pag. 363...367 (1981). Hamm ș.a., J. Am. Coli. Cardiol., voi. 10, pag.

998...1006 (1987) și Davies ș.a., Circulation, voi. 73 pag. 418...427 (1986)].

Mijloace convenabile pentru diagnoza neinvazivă și controlul pacienților cu astfel de tulburări tromboembolice potențiale, vor fi mult utilizate, din care unele s-au dovedit că dezvoltă agenții radiomarcați care țintesc plachetele pentru vizualizarea radionuclidelor neinvazive. De exemplu, studiile experimentale au fost efectuate cu anticorpi antifibrinici monoclonali 99 mTc, pentru vizualizarea de diagnostic a trombusului arterial. [A se vedea, Cerqueira ș.a., Circulation, voi. 85, pag. 298...304 (1992]]. Autorii prezintă utilitatea potențială a acestor agenți în vizualizarea trombusului arterial proaspăt format. Anticorpii monoclonali marcați cu 1311 și specifici pentru plachetele umane activate au fost prezentați ca având o aplicație potențială în diagnosticul trombilor arteriali și venoși. Cu toate acestea, un raport rezonabil de trombus față de sânge (ținta/suport), a fost atins numai la 4 h după administrarea anticorpului radiomarcat. [A se vedea Wu ș.a., Clin. Med.J., voi. 105, pag. 533...559 (1992)]. Utilizarea 1251, 1311, 99mTc și a anticorpului antiplachetar monoclonal 7E3 radiomarcat 111ln pentru vizualizarea trombilor, a fost așadar de curând discutată,

RO 114895 Bl

Colier ș.a., PCT Application Publication No. WO 89/11538 (1989). Anticorpul 7E3 50 radiomarcat are totuși dezavantajul ca fiind de o greutate moleculară foarte mare, în ceea ce privește molecula. Alte cercetări au utilizat t-PA inactivat enzimatic, radioiodurat cu 1231, 1251 și 1311 pentru detecția și localizarea trombilor. [A se vedea Ordm etal., Circulation, voi. 85, pag. 288...297 (1992)).

Au fost descrise, de asemenea, și alte cercetări privind detecția radiologică a 55 tromboembolismelor, de exemplu în Koblik ș.a., Semin, Nuci. Med., voi. 19, pag.

221...237 (1939).

Detectarea trombusului arterial și venos și localizarea acestuia este de o importanță critică în diagnosticul de precizie al tulburărilor tromboembolice și în determinarea unei terapii corecte. Sunt necesari agenți radiomarcați noi și mai buni pentru 60 detectarea trombilor.

Sunt cunoscute peptide antiagregative, precum și peptide ciclice cu activitate antiagregantă, folosite în compoziții farmaceutice și în metode pentru inhibarea agregării plachetare (EP A 0341915 și 0425212).

Prezenta invenție se referă la noi produse radiofarmaceutice care sunt com- 65 puși ciclici radiomarcați conținând sisteme de cicluri carbociclice sau heterociclice, care acționează ca antagoniști ai plachetelor de glicoproteine complexe ll_b/lll_a. Aceasta conține de asemenea metodele pentru utilizarea acestor produse radiofarmaceutice ca agenți de vizualizare pentru diagnosticul trombilor arteriali și venoși.

Prezenta invenție se mai referă la noi reactivi pentru prepararea acestor pro- 70 duse radiofarmaceutice.

Invenția constă într-un reactiv pentru prepararea unui produs radiofarmaceutic care prezintă formulele generale următoare:

(QU_dc_h; (θ)Λ-ο, în care d este 1 ...3, d’ este 2...20, Ln este o grupă de legătură, C_h este un metal de 75 chelatare și Q este un compus cu formula generală (l):

sau o sare a acestuia acceptabilă farmaceutic sau o formă de promedicament a 85 acestuia, în care:

R³¹ este un sistem ciclic carbociclic C₆-C₁₄ saturat, parțial saturat sau aromatic, substituit cu O...4 R¹⁰ sau R^10a și care este opțional legat la L_n ; un sistem ciclic heterociclic, opțional substituit cu O...4 R¹° sau R^10a și este legat opțional la

R³² este selectat dintre: -C=(0)-; -C(=S)-; -S(=0)₂-; -S(=0)-; -P(=Z)(ZR¹³)-; Z este S sau 90

O;

n” și n’ sunt independent O...2;

R¹ și R²² sunt independent selectați dintr-una din grupările: hidrogen,alchil C^-Οθ substituit cu O...2 R¹¹;alchenil C2-Cg substituit cu O...2 R¹¹;alchinil Cg-Cg substituit cu O...2 R¹¹;cicloalchil C3-C₁₀ substituit cu O...2 R¹¹; o legătură la Luării substituit cu 95 O...2 R¹²;un sistem ciclic heterociclic cu 5...10 membri conținând 1 ...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S si O, acest ciclu heterociclic fiind substituit cu O...2 R¹²:

RO 114895 Bl =0, F, CI, Br, I, -CF₃, -CN- -C0₂R¹³, -C(=0)R¹³, -C(=0]N(R¹³)₂, -CHO, -CH₂0R¹³,

-0C(=0)R¹³, OC(=0]0R^13a, -OR¹³, -0C(=0)N(R¹³)2, -NR'ÎbOJR¹³, -NR^1zC(=0)R^13a, NR¹³C(=0]N(R¹³]2, -NR¹⁴S02N(R¹³)2 ,-NR¹⁴S02R^13a, -S03H, -S0₂R^13a, -SR¹³,

-S(=0)R^13a, -S02N(R¹³)2, -N(R¹³)2, -NHC(=NH)NHR¹³, -C(=NH)NHR¹³, =N0R¹³, N02,

-C(=0)NH0R¹³, -C(=0]NHNR¹³R^13a, -0CH₂C0₂H, 2-(1-morfolino) etoxi;

R¹ și R²¹ se leagă alternativ pentru a forma un ciclu carbociclic cu 3...7 membri substituiți cu O...2 R¹²;

când n' este 2, radicalii R¹ sau R²¹ pot fi alternativ luați împreună cu atomul de carbon adiacent pentru a forma o legătură directă, deci pentru a forma o legătură dublă sau triplă între acești atomi de carbon;

R²¹ și R²³ sunt independent selectați dintre un atom de hidrogen, un radical alchil (C.,C₄) opțional substituit cu 1-6 atomi de halogen; benzii;

R²² și R²³ pot fi legați alternativ pentru a forma un ciclu carbociclic cu 3...7 membri substituiți cu O...2 R¹²; iar când n” este 2, R²² sau R²³ pot fi luați împreună, alternativ, cu R²² sau R²³ la atomul de carbon adiacent pentru a forma o legătură dublă sau triplă între atomii de carbon adiacenți;

R¹ și R², în care R²¹ este H, pot alternativ, să formeze un ciclu carbociclic cu 5...8 membri, substituit cu O...2 R¹²;

R¹¹ este selectat din una sau mai multe din următoarele grupe:

=0, F, CI, Br, I, -CF₃, -CN, -C0_PR¹³, -C(=0]R¹³, -C(=0)N(R¹³)2, -CHO, -CH20R¹³, -OC(=O)R¹³, -OC(=O)OR^13a, -OR¹³. -0C(=0)N(R¹³)2, -NR¹³C(=0)R¹³, -NR¹⁴C(=0)0R^13a, NR¹³C(=0)N(R¹³]2, -NR¹⁴S02N(R¹³]₂, -NR¹⁴S02R^13a, -S03H, -S0₂R^13a. -SR¹³,

-S(=0)R^13a, -S02N(R¹³)2, -N(R¹³)2, -NHC(=NH)NHR¹³, -C(=NH)NHR¹³, =N0R¹³, N02, -C(=0)NH0R¹³, -C(=0)NHNR¹³R^13a, -OCH₂CO₂H, 2-(1-morfolino)-etoxi, un radical alchil (C.,-C₅], alchenil (C₂-C₄), cicloalchil (C₃-C₆), cicloalchilmetil (C₃-C₆), alcoxialchil (C₂-Cg), cicloalcoxi (Cg-ty, alchil (C,-Q), radicalul alchil fiind substituit cu 1-5 grupe selectate dintre: -NR¹³R¹⁴, -CF₃, N0₂, -S0₂R^13a sau -S(=0)(R^13a , arii substituit cu O...2 R¹², un sistem heterociclic cu 5... 10 membri conținând 1...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S și O. acest ciclu heterociclic fiind substituit cu 0...12 R¹²;

R¹² este selectat dintr-una sau mai multe dintre următoarele grupe: fenil, benzii, fenetil, fenoxi, benziloxi, halogen. hidroxi, nitro, ciano, alchil (C₄-C₅), cicloalchil (C₃>C-₆), cicloalchilmetil (C₃-C₆), arilalchil (C₇-C₁₀), alcoxi (C.,-C₅], -C0₂R¹³,

-C(=0)NH0R^13a, -C(=0)NHN(R¹³]2, =N0R¹³, -BfR³⁴) (R³⁵), cicloalcoxi (C3-Cg), -OC(=O)R₁₃, -C(=0)R¹³, -0C(=0)0R^13a, -OR¹³, -{alchil 0,-CJ-OR¹³, -N(R¹³)2, -0C(=0)N(R¹³)2, -NR¹³C(=0)R¹³, -NR¹³C(=0)0R¹³, -NR¹³C(=0]0R^13a,

-NR¹³C(=0)N(R¹³]2, -NR¹³S02N(R¹³)2, -NR¹³S02R^13a, -S03H, -S02R^13a, -S(=0)R^13a, -SR¹³, -S02N(R¹³)2, alcolxialchil (C2-C6), metilendioxi, etilendioxi, haloalchil (C-,-C4), haloalcoxi (C.,-C4), alchilcarboniloxi (C,-C4], alchilcarbonil (0,-CJ, alchilcarbonilamino (C, C4), -OCH2C02H, 2-(1-morfolino)etoxi, alchil (C,-C4) (radicalul alchil fiind substituit cu N(R¹³]2, -CF₃, N0₂ sau -S(=0](R^13a);

R¹³ este selectat independent dintre: H, alchil (C₁-C_1O), cicloalchil (C₃-C₁₀), alchilcicloalchil (C₄-C₁₂), arii, -(alchilC^^) arii sau alcoxialchil (C₃-C₁₀);

R^13a este alchil (0,-Cy. cicloalchil (Cg-Cy, alchil (C₄-C,₂) cicloalchil, arii, alchil (Ο,-Ο,ο) arii, sau alcoxi (C₃-C₁₀)alchil; când cele două grupări R¹³ sunt legate la un singur N, aceste grupări R¹³ pot fi alternativ luate împreună pentru a forma:

-{CH₂)_{2 5}- sau -(CH₂]0(CH₂)-;

R¹⁴ este OH, H. alchil (Ο,·Ο₄) sau benzii; R² este H sau alchil (Ο-,-ϋθ);

R¹⁰ și R^1Oa sunt selectați independent din una sau mai multe dintre grupele următoare:

RO 114895 Bl fenil, benzii, fenetil, fenoxi, benziloxi, halogen, hidroxi, nitro, ciano, alchil (CȚ-Cy, cicloalchîl (C₃-C₆), cicloalchil (C₃-C₆] metil, arilalchil (C₇-C₁₀), alcoxi (C.,-C₅), -C0₂R¹³, -C(=0]N(R¹³]2, -C(=0]NH0R^13a, -C(=O]NHN(R¹³)2, =NOR¹³, -B(R³⁴)(R³⁵), cicloalcoxi(C3- 150 C6). -0C(=0)R¹³, -C(=0)R¹³, -0C(=0)0R^13a, -OR¹³, -(C^alchilJOR¹³ . N(R¹³)2, -0C(=0)N(R¹³)2, -NR¹³C(=0)R¹³, -NR¹³C(=0]0R^13a, -NR¹³C(=0)N(R¹%, -NR¹³SC^N(R¹²^, -NR¹³S02R^13a, -SOgH, -SO^¹³³, -S(=0)R^13a, -SR¹³, -SCȚNfR¹³ , alchil (Q-QJ alcoxi, metil· endioxi, etilendioxi, haloalchil (CȚ-CJ (incluzând -CvFwîn care v = 1 la 3 și w = 1 la (2v + 1)), haloalcoxi (C^-CJ, alchil (C.,-C₄) carboniloxi. alchil (C.,-C₄) carbonil, alchil (0.,-CJ 155 carbonilamino. -0CH₂C0₂H, 2-(1-morfolinoetoxi], alchil (0,-CJ (radicalul alchil fiind substituit cu -N(R¹³)₂, -CF₃, N0₂ sau -S(=0]R^13a);

J este β-Ala sau un L-izomer sau D-izomer al aminoacidului cu structura

-N (R³) C (R⁴) (R⁵) C (=0)-, în care:

R³ este H sau alchil (C.,-C8), R⁴ este H sau alchil (C.,-C3); R⁵ este selectat dintre: 160 hidrogen, alchil(C.,-C8] substituit cu O...2 R¹¹;alchenil (C2-C₈) substituit cu O...2 R¹¹; alchinil (C₂-Cg) substituit cu O...2 R¹¹; cicloalchil (Cj-Cy substituit cu O...2 R¹¹; o legătură la Luării substituit cu O...2 R¹²;un sistem de inel heterociclic cu 5...10 membri conținând 1...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O, acest ciclu heterociclic fiind substituit cu O...2 R¹²; 165 =0, F, Cl, Br, I, -CF₃, -CN, -C0₂R¹³, -C(=0]R¹³, -C(=0)N(R¹³)₂, -CHO, - CH₂0R¹³,

-0C(=0]R¹³, -0C(=0)0R^13a, -OR¹³, -OC(=0)N(R¹³)2, -NR¹³C(=0)R¹³, -NR¹⁴C(=0)0R^13a, NR¹³C(=0)N(R¹³]2, -NR¹⁴SOL,N(R¹³)b, -NR¹⁴SQ,F?^3a. -SQH, -S(ȚF?^3a , -SFf³ , -S(=0)Ff^3a , -S02N(R¹³)2, -N(R¹%, -NHC(=NH)NHR¹³, -C(=NH)NHR¹³, =N0R¹³, NO,, -C(=0)NH0R¹³, -C(=0)NHNR¹³R^13a, =N0R¹³, -B(R³⁴)(R³⁵), -0CH₂C0₂H, 170

2-(1-morfolino) etoxi, -SC(=NH)NHR¹³, N₃, -Si(CH₃)₃, (C.,-C₅ alchil)NHR¹⁶;

-(Co-C₆ alchilJX;

CH₂) _q-X , în care q este independent O sau 1

175 — CH

-(CH₂)_mS (O)p' (CH₂)₂X, în care m este 1 sau 2 și p'este O...2; și în care X este definit ca mai sus;

R³ și R⁴ pot fi luați de asemenea împreună pentru a forma:

(CH₂)_nX

180

185

-CH₂CHCH₂-, în care:

în care n = O sau 1 și X este:

190 \ 13 1

NCR¹³)?? ;

R³ și R⁵ pot fi luați alternativ împreună pentru a forma:

-(CH₂)t- sau -CH₂S(0]_p.C(CH₃)₂-, în care t= 2...4 și p' = O; 2 sau R⁴ și R⁵ pot fi luați alternativ împreună pentru a forma:

-(CH₂)_u-, în care u= 2...5;

195

RO 114895 Bl

R¹⁶ este selectat dintre: o grupă de protecție amino; 1 ...2 aminoacizi;

...2 aminoacizi substituiți cu o grupă de protecție amino;

K este D-izomer sau L-izomer al unui aminoacid cu structura:

-N(R⁶)CH(R⁷)C(=0)-în care:

R⁶ este H sau (Ο_η-Ο_θ) alchil;

R⁷ este selectat dintre: -(C.,-C₇ alchilJX;

'/ \

-(CK₂)‘(CH₂) în care: fiecare q este independent

O...2 și substituția la grupa fenil este în poziția 3 sau 4;

“(CH/TA ^x ' (CH₂) _q X, τ_{η care} fj_eCare q este independent O...2 și substituția la grupa ciclohexil este în poziția 3 sau 4;

- (Cj-Cgialchil)

-(CHghO-fC^-CX, alchil)-Xîn care m este 1 sau 2;

-fCH^SfOJp’-fC,^ alchil)-X, în care m = 1 sau 2 și p’= O, 2; și X este selectat dintre:

NR —NH—C

N(R¹³)R¹³; _ N(Rl3)Rl3;

-C(=NH)(NH₂); -SC(=NH)-NH₂; -NH-C(=NH)(NHCN); -NH-C(=NCN)(NH₂); -NH-C(=N-0R¹³)(NH₂);

R⁶ si R⁷ pot fi alternativ luati împreună pentru a forma:

(CH₂)_nX ' (CH₂) _qCH (CH₂) _{q x}în care fiecare q este independent 1 sau 2 și în care n = O sau 1 și X este -NH₂ sau .NR¹³ r-'t' —NH—C

N <R¹³) R¹³;

L este -Y(CH₂)_vC(=0)-, în care:

Y este NH, NfCȚ-Cg alchil), O sau S și v= 1 sau 2;

M este un izomer D sau un izomer L al unui aminoacid cu structura:

-NR¹⁷-CH-C(=0)(CH(R⁴) )_q«

R⁸ în care: q’este O...2; R¹⁷ este H, alchil (C₁-C₃);

R⁸ este selectat dintre:

-C0₂R¹³, -S03R¹³, -S0aNHR¹⁴, -B(R³⁴)(R³⁵), -NHS0₂CF₃, -C0NHNHS0₂CF₃,

-P0(0R¹³)₂, -P0(0R¹³)R¹³, -SOpNH-heteroaril, acest heteroaril având 5... 10 membri și

RO 114895 Bl

...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O, -S0₂NH-heteroaril, acest heteroaril având 5...10 membri și 1 ...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O, -S0₂NHC0R¹³, -C0NHS02R^13a, -CH2C0NHS0₂R^13a, -NHS02NHC0R^13a, NHC0NHS02R^13a, -S0₂NHC0NHR¹³;

R³⁴ și R³⁵ sunt independent selectați dintre: -OH, -F, -N(R¹³)₂ sau alcoxi (Ο,-Cg);

R³⁴ și R³⁵ pot alternativ fi luați împreună pentru a forma: un ester ciclic al borului în care această catenă sau ciclu conține de la 2 la 20 atomi de carbon și opțional, 1 ...4 heteroatomi independent selectați dintre N, S sau O; o amidă de bor ciclică bivalentă în care această catenă sau ciclu conține de la 2 la 20 atomi de carbon și opțional,

...4 heteroatomi selectați independent dintre N. S sau O;

un amidoester ciclic de bor în care catena sau ciclul conțin de la 2 la 20 atomi de carbon și opțional, 1 ...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O.

(2) In prezenta invenție, sunt incluși reactivii în care R³¹ este legat la (C(R²³)R²²)n” și (C(R²¹)R¹)_n , la doi atomi diferiți pe ciclul carbociclic menționat.

(3) De asemenea, sunt incluși în prezenta invenție acei reactivi de mai sus în care:

n“ este O și n' este O; n este O și n' este 1; neste O și n'este 2; n’ este 1 și n’ este O; n este 1 și n‘ este 1; n este 1 și n'este 2; n” este 2 și n’ este O; neste 2 și n’este 1; sau neste 2 și n'este 2.

(4) Reactivii în care R⁶ este un radical metil, etil sau propil sunt conținuți în această invenție.

(5) Mai fac parte din invenție și reactivii în care:

R³² este selectat dintre: -C(=0)-; -C(=S)-; -S(=0)_P-;

R¹ și R²² sunt independent selectați din grupele următoare:hidrogen, alchil (Ο-,-Οθ) substituit cu O...2 R¹¹; alchenil (C2-Cg) substituit cu O...2 R¹¹; alchinil (Cg-Cg) substituit cu O...2 R¹¹; cicloalchil (C3-Cg) substituit cu O...2 R¹¹; bicicloalchil (Cg-Cg) substituit cu O...2 R¹¹; o legătură la L/, arii substituit cu O...2 R¹²; un sistem cu inel heterociclic cu 5...10 membri conținând 1...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O, acest ciclu heterociclic fiind substituit cu O...2 R¹²;

=0, F, CI, Br, I, -CF₃, -CN, -C0₂R¹³, -C(=0)R¹³,

-C(0)N(R¹³)2l -CHO, -CH20R¹³, -0C(=0)R¹³, -0C(=0)R^13a, -OR¹³, -OC(=0)N(R¹³)2, -NR¹³C(=0)R¹³, -NR¹⁴C(=0)0R^13a, -NR¹³C(=O)(R¹³)₂, -NR¹⁴S02N(R¹³)2,

-NR¹⁴S02R^13a, -S03H, -S0₂R^13a, -SR¹³, -S(=0)R^13a, -S02N(R¹³)2, -CH₂N(R¹³)₂,

-N(R¹³)2, -NHC(=NH)NHR¹³, -C(=NH)NHR¹³, N02;

R¹ și R²¹ pot fi uniți alternativ pentru a forma un ciclu carbociclic cu 5...7 membri substituiți cu O...2 R¹²;

când n'este 2, R¹ sau R²¹ pot alternativ fi luați împreună cu R¹ sau R²¹ la atomul de

250

255

260

265

270

275

280

285

RO 114895 Bl carbon adiacent, formând astfel o legătură dublă sau triplă între acești atomi de carbon;

R²² și R²³ pot fi uniți alternativ pentru a forma un ciclu carbociclic cu 3...7 membri substituiți cu O...2 R¹²;

când neste 2, R²² sau R²³ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma cu R²² sau R²³ o legătură directă, obținându-se astfel o legătură dublă sau triplă între acești atomi de carbon; R¹ și R², când R²¹ este H, pot fi alternativ uniți pentru a forma un ciclu carbociclic cu 5...8 membri substituiți cu O...2 R¹²;

R¹¹ este selectat din una sau mai multe din grupele:

=0. F, Cl, Br, I. -CF₃, -CN, -C0₂R¹³, -C(=0)R¹³, -C(=0)N(R¹³)2, -CHO, -CH20R¹³, -OC(=O)R¹³, -0C(=0)0R^13a, OR¹³, -0C(=0)N(R¹³)2, -NR¹³C(=0)R¹³, -NR¹⁴C(=0)0R^13a, -NR¹³C(=0)N(R¹³)₂, - NR¹⁴S02N(R¹³)2, -NR¹⁴S02R^13a, -S03H, - S0₂R^13a, -SR¹³, -S(=0]R^13a, -S0_PN(R¹³}2, -CHpN(R¹³)p, - N(R¹³)P, -NHC(=NH)NHR¹³, -C(=NH)NHR¹³, =N0R¹³, N02; alchil (C-j-Cs), alchenil (C_P-C₄), cicloalchifCa-Ce)!, cicloalchi(C₃-C₆)lmetil, alcoxi (C₂-C₆) alchil, alchil (C₁-C₄)(substituit cu -NR¹³R¹⁴, -CFa, N02, -S02R¹³ sau S(=0)R^13a), arii substituit cu O...2 R¹², un sistem ciclic heterociclic cu 5...10 membri conținând 1...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O, acest ciclu heterociclic fiind substituit cu O...2 R¹²; R³ este H sau CH3;

R⁵ este H, alchil (0.,-Cg), cicloalchiKCa-C^), cicloalchi(C3-Cg)l metil, cicloalchil (ϋ-,-Οβ)etil, fenil, fenilmetil, CH2OH, CH2SH, CH20CH3, CH2SCH3, CH2CH2SCH3, (CHP)SNHP, (CH2)sNHC (=NH)(NH2), (CH2)sNHR¹⁶, în care s este 3...5; o legătură la Ln;

R³ și R⁵ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma -(CH_P)t- (t = 2...4) sau -CH₂SC(CH₃)₂-; sau R⁷ este selectat dintre:

-tC.,-C₇ alchil)X;

(CH₂)_q-X în care fiecare q este independent

O...2 și substituirea grupei fenil este în poziția 3 sau 4;

“(CH₂)_qX3X ^x ' (CH₂) q X, τ_{η care} fi_eCare q este independent O...2 și substituția la ciclohexil este în poziția 3 sau 4;

-(CH_P)_mO-alchil (Qj-CJ-Xîn care m este 1 sau 2;

-(CH₂)_mS-alchil (0.,-CJ-X în care m este 1 sau 2 și

X este selectat dintre: -NH-C(=NH)(NH₂), -NHR¹³, -C(=NH)(NH_P), -SC(NH)-NH_P; R⁶ și R⁷ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma:

(CH₂)_nX

-CH₂CHCH₂-_f în care n = O sau 1 și X este -NH_P sau -NH-C(=NH)(NH₂);

L este -Y(CH₂)_vC(=0)-, în care:

Y este NH, N(alchil C.,-C₃), O sau S și v= 1 sau 2;

RO 114895 Bl

340

M este un izomer L sau un izomer D al unui aminoacid cu structura:

-NR¹⁷-CH-C(=0)t în care q'este O...2; R¹⁷ este H, alchil (CȚ-CJ;

R⁸ este selectat dintre: -C02R¹³, -S03R¹³, -S02NHR¹⁴, -BfR³⁴]^³⁵), -NHS02CF₃, C0NHNHS0₂CF₃, -P0(0R¹³)2, -P0(0R¹³)R¹³, -S02NH-heteroaril (acest heteroaril fiind de 5...10 membri și având 1 ...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O), -SO₂NH-heteroaril (acest heteroaril fiind selectat independent dintre un heteroaril 345 cu 5...10 membri și având 1...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O), -S0₂NHC0R¹³, -C0NHS02R^13a, -CH2C0NHS0₂R^13a,

-NHS0₂NHC0R^13a, -NHC0NHS02R^13a, -S02NHC0NHR¹³;

R³⁴ și R³⁵ sunt independent selectați dintre, -OH, -F, - NR¹³R¹⁴ sau alcoxi (Ο,-Οθ);

R³⁴ și R³⁵ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma: 350 un ester ciclic de bor, în care catena sau ciclul conține de la 2 la 20 atomi de carbon și opțional 1 ...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O; o amidă de bor ciclică bivalentă în care catena menționată sau ciclul conțin de la 2 la 20 atomi de carbon și opțional 1 ...4 heteroatomi independent selectați dintre N, S sau O;

un ester amidă ciclică de bor în care catena sau ciclul conțin de la 2 la 20 atomi de 355 carbon și opțional 1....4 heteroatomi independent selectați dintre N, S sau O.

(6] Alți reactivi care sunt prezentați în invenția de față sunt acei reactivi în care R³¹ este selectat dintr-o grupă care constă din:

a) un inel carbociclic cu 6 membri, saturat, parțial saturat sau aromatic, substituit cu

O... 3 R¹⁰ sau R^10a și care poate avea opțional o legătură la Ι_„; 360

b) un ciclu carbociclic cu 8...11 membri saturat, parțial saturat sau aromatic biciclic condensat, substituit cu O... 3 R¹⁰ sau R^10a și opțional purtând o legătură la Ι_„ sau

c) un ciclu carbociclic triciclic condensat, cu 14 membri, saturat, parțial saturat sau aromatic, substituit cu O...3 R¹⁰ sau R^10a și opțional având o legătură la L_n.

(7) Tot astfel mai sunt reactivii în care: 365

R³¹ este selectat dintr-o grupă care constă din:

a) un ciclu carbociclic cu 6 membri, saturat, parțial saturat sau aromatic, având formula:

370 în care orice legături formate cu ciclul carbociclic pot fi o legătură simplă sau o legătură dublă și în care acest ciclu carbociclic este substituit cu O...3 R¹⁰ și opțional are 375 o legătură la L,,;

b) un ciclu carbociclic biciclic cu 10 membri, saturat, parțial saturat sau aromatic, având formula:

380

RO 114895 Bl în care orice legătură care se formează cu ciclul carbociclic poate fi o legătură simplă sau o legătură dublă, în care acest ciclu carbociclic este substituit independent cu

O...4 R¹° și opțional are o legătură la L,,;

c) un ciclu carbociclic biciclic cu 9 membri, saturat, parțial saturat sau aromatic, având formula:

în care orice legături care se formează în ciclul carbociclic pot fi legături simple sau duble, în care ciclul carbociclic este substituit independent cu O...4 R¹⁰ și opțional poate avea o legătură la L_n.

(8) De asemenea, mai sunt reactivii în care:

R³¹ este selectat dintre radicalii cu formulele de mai jos (legătura activă poate fi o legătură simplă sau dublă):

în care R³¹ poate fi independent substituit cu O...3 R¹⁰ sau R^10a și opțional poate avea o legătură la neste O sau 1 și ri este 0...2.

(9) Mai sunt prezenți în invenția de față reactivii în care:

R¹ și R²² sunt selectați independent dintre un radical fenil, benzii, fenetil, fenoxi, benziloxi, halogen, hidroxi, nitro, ciano, alchil (CȚ-Cy, cicloalchil ((Ζ^-Οθ), cicloalchilmetil (C₃-C₆), arilalchil (C₇-C₁₀), alcoxitC.-Cs), -C0₂R¹³, -C(=0)NH0R^13a,

-C(=0)NHN(R¹³)2, =N0R¹³, -BR³⁴)^³⁵), cicloalcoxi (C3-C₆), -0C(=0)R¹³, -C(=0)R¹³, -0C(=0)0R^13a, OR¹³, -ÎC.,-C4) alchil -OR¹³, -N(R¹³)2, -0C(=0)N(R¹³)₂, -NR¹³C(=0)R¹³, -NR¹³C(=0)0R^13a, -NR¹³C(=0)N(R¹³)2, -NR¹³S02N(R¹³)_p, -NR¹³S02R^13a, -S03H, -S0₂R^13a, -S(=O)R^13a, -SR¹³, -S02N(R¹³)2, alcoxialchil (C₂-C₆), metilendioxi, etilendioxi, haloalchil (C.,-C₄), haloalcoxi (C.,-C₄), alchilcarboniloxi (Cț-Q,), alchilcarbonil (C,-Q,), alchil (CȚ-CJ carbonilamino, -0CH₂C0₂H, 2-(1-morfolino)etoxi, alchil (0.,-CJ (radicalul alchil fiind substituit cu -N(R¹³)₂, -CF₃, N0₂ sau -S(=0)R^13a).

(10) Reactivii în care:

R³¹ este selectat dintre un radical având formulele de mai jos:

RO 114895 Bl

435

440 în care R³¹ poate fi substituit independent cu O...3 R¹⁰ sau R^1Oa și poate fi opțional legat la L^;

R³² este -C(=O)-; neste O sau 1; n'este O...2;

R¹ și R²² sunt selectați independent dintre H, alchil fenil, benzii, fenil -{C ₅

CJalchil, alcoxiiC^-CJ și o legătură la 1^;

R²¹ și R²³ sunt independent H sau alchil (C.,-C₄);

R² este H sau un radical alchil (C^g);

R¹³ este selectat independent dintre: H, alchil (C.,-C₁₀], cicloalchil (C₃-C_1Q), alchilcicloalchil (C₄-C₁₂), arii, - alchil(C₁-C₁₀]aril sau alcoxialchil (C₃-C₁₀);

R^13a este alchil (Ο,-Ο,ο). cicloalchil (C₃-C₁₀), alchilcicloalchil (C₄-C₁₂), arii,

- alchil(C₁-C₁₀)aril sau alcoxialchi (C₃-C₁₀] când cele două grupe R¹³ sunt legate la un singur N, aceste grupe R¹³ pot fi alternativ luate împreună pentru a forma:

-(CH₂]₂.₅- sau -(CH₂)O(CH₂)-;

R¹⁴ este OH, H, alchil (C.,-C₄] sau benzii;

rw gj pioa _{este se}|_ectat independent dintre: H, alchil (G^g), fenil, halogen sau alcoxi (Ch-CJ;

J este β-Ala sau un izomer L sau izomer D al unui aminoacid cu structura: -N(R³]C(R⁴](R⁵]C (=0)-, în care:

R³ este H sau CH₃; R⁴ este H sau alchil (C^J;

R⁵ este H, alchil (C,^), cicloalchil (Cg-C^), cicloalchimetill (Cg-Cg), cicloalchietill (C^-Qg) . fenil, fenilmetil, CH20H, CH2SH, CH20CH3, CH2SCH3, CH2CH2SCH3, (CH2)SNH2, -(CH2]SNHC(=NH](NH2]-, -(CH2]sNHR¹⁶ în care s = 3...5 și o legătură la Ln; sau R³ și R⁵ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma -(CH₂)- (£ = 2...4] sau -CH₂SC(CH₃]₂sau

R⁴ și R⁵ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma -{CH₂)_U-, în care tz=2...5;

R¹⁶ este selectat dintre: o grupă de protecție amino, 1...2 aminoacizi sau 1...2 aminoacizi substituiți cu o grupă amino de protecție;

K este un izomer L sau un izomer D al unui aminoacid cu structura: -N(R⁶]CH(R⁷]C(=0]-, în care: R⁶ este H sau alchil (C^g);

R⁷ este:

445

450

455

460

465

470

475

480

RO 114895 Bl

-(CH₂)_r X. în care r- 3...6;

-(CH₂)_mS (CH₂)₂X, în care m = 1 sau 2; -(C₃-C₇ alchil) - NH - (Ο,-Οθ alchil);

-(ΟΗ^Ο-ΙΟ,-Ο.* alchill-NH-iC,-^; alchil), în care m este 1 sau 2; -(CF^^-S-alchil (C, -C₄) -NH-alchil (C₁-C_B]. în care m este 1 sau 2 și X este -NH₂ sau -NHC(=NH](NH₂) sau R⁶ și R⁷ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma:

(CH₂)_nX

-CH₂CH-CH₂- î_{n C}are n = O sau 1 și X este -NH₂ sau -NHC(=NH)(NH₂); L este Y(CH₂)_v C(=0) - în care: Y este NH, O sau S; și v este 1 sau 2;

M este un D-izomer sau L-izomer al unui aminoacid cu structura:

-NR¹⁷-CH-C(=0)(CH(R⁴) )_q<

-NHS0₂CF₃,

-conhnhso₂cf₃, în care: q'este O...2; R¹⁷ este H, alchil (C^-Cg,;

R⁸ este selectat dintre:

-C0₂R¹³, -S03R¹³, -S02NHR¹⁴, -B(R³⁴](R³⁵),

-POfOR¹³) 2 , - P0(0R¹³)R¹³, -SO2NH-heteroaril (acest heteroaril având 5...10 membri și 1„t4 heteroatomi, selectați independent dintre N, S sau O) , -S0₂NHheteroaril (acest heteroaril având 5...10 membri și 1...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O). -S0₂NHC0R¹³, - C0NHS02R^13a, -CH2C0NHS0₂R^13a, -NHS02NHCQR^13a, - NHC0NHS02R^13a și grupa -SO₂NHCONHR¹³ sunt de asemenea conținuți în prezenta invenție.

(11) Reactivul conform prezentei invenții este acel reactiv care este un compus 1,3fenil disubstituit, având formula generală II: _Ț

K / ^X

J \

o=c

NR^Z /

CHR (II) în care ciclul fenilic poate fi substituit cu O...3 R¹⁰ și poate avea opțional o legătură la k;

RO 114895 Bl

R¹⁰ este selectat independent dintre H, alchil (C.,-Cg], fenil, halogen sau alcoxi (C.,-C₄);

R¹ este H, alchil (C.,-C₄, fenil, benzii, fenil -{C₁-C₄)-alchil sau o legătură la Ι_„; R² este H sau metil;

R¹³ este selectat independent dintre: H, alchil (C₁-C_1O), cicloalchil (C₃-C₁₀), alchilcicloalchil (C₄-C₁₂), arii, -(C^^ alchil] arii sau alcoxialchil (C₃-C_1O);

R^13a este alchil (C^J, cicloalchil (Cg-C^), alchilcicloalchil (C4-C12], arii, -(Ο,ΐ,ο alchil] arii sau alcoxialchil (C3-C10); când cel două grupe R¹³ sunt legate împreună la un singur N, aceste grupe R¹³ pot fi alternativ luate la un loc pentru a forma -(CH2]₂.₅- sau -(CH₂)0(CH₂)-;

R¹⁴ este OH, H. alchil (C.,-C₄) sau benzii;

J este β-Ala sau un izomer L sau izomer D al unui aminoacid cu structura ! -N(R³]C(R⁴)(R⁵)C(=0]-, în care:

i* R³ este H sau CH3; R⁴ este H sau alchil (C1-C₃];

R⁵ este H, alchil (C^-Cg), cicloalchil (Cg-C^), cicloalchil(Q,-Q]metil, cicloalchil (C, -Q)- etil, fenil, fenilmetil, CH20H, CH2SH, CH20CH3, CH2SCH3, CH2CH2SCH3, (CH2]SNH2, -(CH2)SNHC(=NH)(NH2), -(CH2]SNHR¹⁶, în care s= 3...5 sau o legătură la Ln;

R³ și R⁵ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma -CH2CH2CH2- sau R⁴ și R⁵ pot fi alternativ luați împreună, pentru a forma -(CH2)_U, în care u = 2...5;

R¹⁶ este selectat dintre; o grupă amino de protecție, 1...2 aminoacizi sau 1...2 aminoacizi substituiți cu o grupă amino de protecție;

K este un L-izomer al unui aminoacid având structura:

-N(R⁶)CH(R⁷)C(=0]-, în care;

R⁶ este H sau alchil (Ο,-Οθ);

R⁷ este

530

535

540

545

550

555

560

565

570

-{CH₂)_mS(CH₂)₂X. în care m este 1 sau 2; - alchil (C₃-C₇) - NH - alchil (C₁-C₆]

575

-{CH₂)_m-O- alchil (C.,-C₄) - NH - alchil (C.,-C₆], în care m = 1 sau 2;

-fCH₂)_m-S-alchil (0.,-CJ - NH - alchil (O,-C^), în care m este 1 sau 2; și X este -NH, sau

-NHC(=NH)(NH₂), cu condiția ca X să fie diferit de -NH₂ atunci când r = 4 sau

R⁶ și R⁷ sunt alternativ luați împreună pentru a forma:

RO 114895 Bl

-CH₂CH-CH₂- , în care n = O, 1 și X este -NH₂ sau -NHC(=NH)(NH₂);

L este -Y(CH₂)_vC(=0)-, în care: Y este NH, O sau S și v este 1 sau 2; M este un izomer D sau un izomer L al unui aminoacid cu structura:

-NR^l7-CK-C<=0)(CH(R⁴) )_q.

, în care: cf este O...2; R¹⁷ este H, alchil

R⁸ este selectat din:

-C0₂R¹³, - S03R¹³, -S02NHR¹⁴, -BtR^KR³⁵), -NHS0₂CF₃, -C0NHNHS0₂CF₃,

-PO(OR¹³]2, -P0(0R¹³]R¹³, -S02NH-heteroaril (acest heteroaril având 5...10 membri și

1...4 heteroatomi selectați independent din N, S sau O, -SO₂NH-heteroaril (acest heteroaril având 5...10 membri și 1 ...4 heteroatomi selectați independent dintre: N, S sau O, -S0₂NHC0R¹³, -C0NHS02R^13a, GH2C0NHS0₂R^13a, -NHS02NHC0R^13a, -NHG0NHS02R^13a și grupa -S0₂NHC0NHR¹³.

(12) Un att reactiv conform invenției este acela reprezentat de compusul fenil 1,3disubstituit, având formula generală II:

J

NR² /

CHR¹ (II) în care ciclul fenil poate fi substituit cu O...3 R¹⁰ sau R^10a;

R¹° sau R^10a sunt selectați independent dintre: H, alchil (C^-Cg) fenil, halogen sau alcoxi (C..-CJ;

R¹ este H, alchil (C.,-C₄), fenil, benzii sau fenil alchil (C₂-C₄);

R² este H sau metil; R¹³ este selectat independent dintre: H, alchil (C.,-C10), cicloalchil (C3-C10), alchil (C4-C12) cicloalchil, arii, -(C^^ alchil) arii sau alcoxialchil (C3-C10); când cele două grupe R¹³ sunt legate la un singur N, aceste grupe R¹³ pot fi alternativ luate împreună pentru a forma o grupă -(CH2)₂₅- sau -(CH₂]0(CH₂)-;

R^13a este alchil (Ο_η-Ο_1ο), cicloalchil (Cg-C^), alchilcicloalchil (C₄-C₁₂), arii - (0.,-0.,0 alchil) arii sau alcoxialchil (C₃-C₁₀);

R¹⁴ este OH, H, alchil (C.,-C₄] sau benzii;

J este β-Ala sau un L-izomer sau D-izomer al unui aminoacid cu structura -N(R³)C(R⁴)(R⁵]C(=0), în care: R³ este H sau CH₃; R⁴ este H;

R⁵ este H, alchil (Ο-,-Οθ), cicloalchil(C3-Cg)metil, cicloalchil(C.,-C6]etil, fenil, fenilmetil, CH20H, CHaSH, CHgOCHg, CHSCHj, ΟΗ,ΟΗ,εΟΗ^, (O-j, 1 Nl-ț , (CF-J, ) NHC(=NH)(NF£ ], (CH2)sR¹⁶, în care s = 3...5; sau o legătură la Ln;

R³ și R⁵ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma o grupă -CH₂CH₂CH₂-;

R¹⁶ este selectat dintre: o grupă de protecție amino, 1...2 aminoacizi; 1...2 aminoacizi substituiți cu o grupă de protecție amino;

K este un L izomer al aminoacidului cu structura:

-N(R⁶)CH(R⁷)C(=0)-, în care:

R⁶ este H sau alchil (C₃-C_a):

RO 114895 Bl

630

635

-(CHgJrX, în care r= 3...6;

640

-{CH₂)_mS(CH₂)₂X, în care m = 1 sau 2 - (C₁-C₄ alchil).

V NH

-(C₄-C₇ alchiO-NH-iCȚ-Ce alchil);

645 ' · 0-3

-(CH₂)_m-0-(C₁-C4alchil)-NH-(C₁-C₆ alchil) în care m=1 sau 2;

-(CH^-S-fC.,^ alchil)-NH-(C₁-C₆ alchil) în care m=1 sau 2;

și X este -NH₂ sau -NHC(=NH)(NH₂] cu condiția ca X să fie diferit de - NH₂ când r=4 sau L este -YCH₂(=0)-în care: Y este NH sau O; M este un D-izomer sau L-izomer al unui aminoacid cu structura:

-NR¹⁷-CH-C(=O)(CH(R⁴) )_q.

R® , în care q’este 1; R¹⁷ este H, alchil (C₁-C₃);

R® este selectat din : -C0₂H sau -S0₃R¹³.

(13) Un alt reactiv este acela reprezentat de compusul cu formula generală II, în care ciclul fenil are o legătură la L_n și poate fi apoi substituit cu O...2 R¹⁰ sau R^1Oa; R¹⁰ sau R^1Oa sunt selectați independent dintre: H, alchil (Ο,-Οθ), fenil, halogen sau alcoxi (0_η-0₄); R¹ este H; R² este H;

R¹³ este selectat independent dintre: H, alchil (Ο_η<3_1ο], cicloalchil (C₃-C₁₀), alchilcicloalchil (C₄-C₁₂), arii, -(C .,-0-,,-, alchil)-aril sau alcoxialchil (C₃-C₁₀);

R^13a este alchil (C1-Cia), cicloalchil (C3-C10), alchil(C4-C12)cicloalchil, arii - (Ο,-C^ alchil) arii sau alcoxialchil (C3-C10); când cele două grupări R¹³ sunt legate la un singur N, aceste grupe R¹³ pot fi alternativ luate împreună pentru a forma -(CH2)_p.₅- sau -(CH₂)0(CH₂)-;

R¹⁴ este OH, H, alchil (C^-CJ sau benzii;

J este β-Ala sau L-izomerul sau D-izomerul aminoacidului cu formula:

- N(R³)CH(R⁵)C(=O) în care:

R³ este H și R⁵ este H, CH₃, CH₂CH₃, CH(CH₃)₂, CH(CH₃)CH₂CH₃, CH₂CH₂CH₃,

CH₂CH₂CH₂CH₃, CH₂CH₂SCH₃, CH₂CH(CH₃)₂, (CH₂)₄NH₂, (Cg-Cs alchilJNHR¹⁶; sau R³ este CH₃ și R⁵ este H sau R³ și R⁵ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma CHgCHgCHg-; R^1B este selectat dintre: o grupă amino de protecție, 1...2 aminoacizi;

...2 aminoacizi substituiți cu o grupă amino de protecție;

650

655

660

665

670

675

RO 114895 Bl

K este un L-izomer al unui aminoacid cu formula:

-N(CH₃)CH(R⁷]C)=0)-, în care: R⁷ este -(CH₂)₃NHC(=NH)(NH₂);

L este -NHCH₂C(=0)- și

M este un izomer D sau un izomer L al unui aminoacid cu structura:

-NR¹⁷-CK-C(=0)-

în care q‘ este 1;

R⁴ este H sau CH3; R¹⁷ este H; R⁸ este -C02H, -S0₃H.

(14) Din invenția de față, mai face parte reactivul reprezentat de compusul cu formula generală II de mai sus, în care ciclul fenil are o legătură la L_n;

R¹ și R² sunt independent selectați dintre: H, metil,

J este selectat dintre D-Val, acid D-2-aminobutiric, D-Leu, D-Ala, Gly, D-Pro, D-Ser, DLys, β-Ala, Pro, Phe, NMeGly, D-NIe, D-Phg, D-lle, D-Phe, D-Tyr, Ala, h^-p-azidobenzoilD-Lys, N^p-benzoilbenzoil-D-Lys, NMriptofanil-D-Lys, Nⁱ-o-benzilbenzoil-D-Lys, Ν^ξ-ρacetilbenzoil-D-Lys, N^ansil-D-Lys, N⁵-glicil-D-Lys, N'kjIicil-p-benzoilbenzil-D-Lys, Ν^ζ-ρfenilbenzoil-D-Lys, hf-m-benzoilbenzoil-D-Lys, N^-benzoilbenzoil-D-Lys;

K este selectat din NMeArg, Arg; L este selectat din Gly, β-Ala, Ala; M este selectat din Asp.aMeAsp.pMeAsp, NMeAsp; D-Asp.

(15) Un alt reactiv este acela în care, în formula generală I,

R³¹ poartă o legătură la L_n;

R¹ și R² sunt independent selectați dintre H, metil;

J este selectat dintre: D-Val, acidul D-2-aminobutiric, D-Leu, D-Ala, Gly, D-Pro, D-Ser, D-Lys, β-Ala, Pro, Phe, NMeGly, D-NIe, D-Phg, D-lle, D-Phe, D-Tyr, Ala;

K este selectat din NMeArg;

L este Gly;

M este selectat dintre:Asp, aMeAsp, pMeAsp, NMeAsp, D-Asp.

(16) sau reactivul care în formula generală I :

C_h este selectat din grupa:

,W-a² _tz ,W-_A2-W

w.

w.

A

W

i I ,w.

w

RO 114895 Bl ,1' _wA²-VFa<_w

730 yr

A²-W-A³-W-A⁴-W-A⁵k ^A²-W-A3-W-A⁵-W-A⁶ w

I «A⁴

A¹ A² W^a A⁵ A6

A³

I xW v/

A¹—W

A⁴ \ / W—Α³χ w / \ 4 w-aI-w-a^

A \ Λ· wj w

A⁵

W'

A²-W-_A3-W-_A4-W-_A6

V

A’-W

A² yr _a3-W-_a4_VV-_A6 w

i

Α^δ

I v/ w I I

A 3 ή 2 Δ 5 vSr 'î,·-'.

/ w I

A¹—W / \

A²—W \ / W—_A3

735

740

745

750

755

760

765

770

RO 114895 Bl .A2__W__a3__W__a4__W—_A5_w—Αθ _A2—W—A³—W—A⁴—W—A⁵.—W-A₇ *’ \ ₆ ’·

A⁶ _A2__W_a³—W—A⁴—W—A⁶—W-A⁷

X I w

w' ./ ./

I, _iA2—W—A³—w—A⁶—W—A⁷ _a2__W__a4__w__a5__W__a

A⁴

A¹-W.

W—A^

A² ^_a6

I w

Z în care A¹, A², A³, A⁴, A⁵, A⁶ grupă aleasă dintre:

NR^4OR⁴¹, S, SH, S(Pg), O, OH w

iI w

_A2—w—A⁴—W—A⁶—w—A⁷ 2 I I

A¹ W W / I

A³ A⁵

A¹-W.

^A,² \ ^.At w \ /

\ w

X și A⁷ sunt independent selectați în fiecare caz, dintr-o ₃44i_D42_d43.

PR⁴²R⁴³, P(O)R⁴²R⁴³, P(S)R⁴²R⁴³, P(NR⁴⁴)R⁴²R

W este o legătură, CH sau o grupare în spațiu selectată dintre:

C.,-C_1O alchil substituit cu O...3 R⁵², arii substituit cu 0-3 R⁵², cicloalchil substituit cu O...3 R⁵², heterocicloalchil substituit cu O...3 R⁵², aralchil substituit cu O...3 R⁵² și alcaril substituit cu O...3 R⁵²;

W^a este o grupă alchil (0.,-Ο_1ο) sau un carbociclu (C₃-C₁₄);

R⁴⁰, R⁴¹, R⁴², R⁴³ și R⁴⁴ sunt fiecare independent selectați dintr-o grupă ca:

o legătură la L„, hidrogen, alchil (C.,-C₁₀) substituit cu O...3 R⁵², arii substituit cu O...3

R⁵², cicloalchil substituit cu O...3 R⁵², heteroalchil substituit cu O...3 R⁵²;

RO 114895 Bl aralchil substituit cu O...3 R⁵², alcaril substituit cu O...3 R⁵² substituit cu O...3 R⁵² și un electron, cu condiția ca, atunci când unul dintre R⁴⁰ sau R⁴¹ reprezintă un electron, celălalt este de asemenea un electron și cu condiția ca, atunci când unul dintre R⁴² sau R⁴³ este un electron, celălalt este de asemenea un electron; adițional R⁴⁰ și R⁴¹ se pot uni pentru a forma grupa:

=0(0,-03 alchil)(C.,-C₃-alchil);

R⁵² este selectat independent în fiecare caz, dintr-o grupă: o legătură la =0, F, CI, Br, I, -CF3, -CN, -C02R⁵³, -C(=0)R⁵³, -C(=0)N(R⁵³)2, -OHO, -CH₂0R⁵³,-0C(=0)R⁵³, -0C(=0)0R^53a, OR⁵³, -0C(=0]N(R⁵³]2, -NR⁵³C(=0]R⁵³, -NR⁵⁴C(=O)OR^53a, -NR⁵³C(=0]N(R⁵³)2, -NR⁵⁴S02N(R⁵³)2, -NR⁵⁴S02R^53a, -S03H, -S0₂R^53a, -SR⁵³, -S(=O)R^53a, -S02N(R⁵³)2, -N(R⁵³)2, -NHC(=NH)NHR⁵³, -C(=NH)NHR⁵³, =N0R⁵³, no2, -C(=0)NH0R⁵³, -C(=0}NHNR⁵³R^53a, -0CH₂C0₂H, 2-(1-morfolino) etoxi, alchil (0,-0^. alchenil (C₂-C₄), cicloalchil (0₃-0θ)< cicloalchilmetil (C₃-C₆), alcoxialchil (C₂-C₆), arii substituit cu O...2 R⁵³,un sistem ciclic heterociclic cu 5...10 membri, conținând 1 ...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S și O;

R⁵³, R^53a și R⁵⁴ sunt selectați independent la fiecare caz, dintr-o grupă:

o legătură la L_n, alchil (Ο,-Οθ), fenil, benzii, alcoxi (Ο,-Οθ], halogenură, nitro, ciano și trifluormetil și Pg este o grupă de protecție tiol capabilă de a fi dislocuită după reacție cu o radionuclidă.

(17) Un alt reactiv important din prezenta invenție este acela îh care C_h este selectat dintr-o grupă ca:

825

830

835

840

W-_A2—W

845

A¹^ 'W³' 'A³ _Αΐ-νν_{χ wr},A³-W-A*-W-A⁶ Vv |

A²' W ;

A⁵

A²—W—a⁴—W—a⁵— W—A⁷ A A Α_χ A

A¹ W *

A^{3 A}

A⁵ /

w \,

A¹-W

V A²

A²~W—A⁴—W-A⁶—w—A⁷ Λ I I w w......

L L

A⁵ / w

V

A’-w,

850

855

860 w—A³ w-A^: z

\ w

/

865 în care A¹, A², A³, A⁴, A⁵, A⁶ și A⁷ sunt independent selectați în fiecare caz, dintr-o grupă: NR^R⁴¹, S, SH, S(Pg), OH;

W este o legătură, CH, sau o grupă spațială selectată dintre alchil (C,-C₃) substituit cu O...3 R⁵²;

870

RO 114895 Bl

W³ este o grupă metilen sau un carbociclu (C₃-C₆);

R⁴⁰, R⁴¹, R^4a, R⁴³ și R⁴⁴ sunt fiecare selectați independent dintr-o grupă; o legătură la L^,, hidrogen, alchil (C.,-C_1O) substituit cu O...3 R⁵² și un electron, cu condiția ca, atunci când unul dintre R⁴⁰ sau R⁴¹ este un electron, celălalt este de asemenea un electron, și cu condiția ca, atunci când unul dintre R⁴² sau R⁴³ este un electron, atunci celălalt este de asemenea un electron;

adițional R⁴⁰ și R⁴¹ pot fi uniți pentru a forma grupa =C(C.,-C₃ alchil)(C.,-C₃ alchil);

R⁵² este selectat independent în fiecare caz dintr-o grupare:

o legătură la U =0, F, Cl, Br. I, -CF₃, -CN, -C0₂R⁵³, -C(=0)R⁵³, -C(=)0N(R⁵³)2, -CHO, CH20R⁵³, -0C(=0)R⁵³, -0C(=0)0R^53a, -OR⁵³, -OC(=0)N(R⁵³)P, -NR⁵³C(=0)R⁵³, -NR⁵⁴C(=0)0R^53a, -NR⁵³C(=0]N(R⁵³]_P, -NR⁵⁴S02N(R⁵³)2, -NR^SO^⁵³³, -S0₃H, -S0₂R^53a, -SR⁵³, -S(=0]R^53a, -S02N(R⁵³]2, -N(R⁵³)_a, -NHC(=NH)NHR⁵³,

-C(=NH)NHR⁵³, =NOR⁵³, N02, -C(=0)NH0R⁵³, -C(=0)NHNR⁵³R^53a, -0CH2C0_PH, 2-(1morfolino)etoxi și

R⁵³, R^53a și R⁵⁴ sunt independent selectați în fiecare caz dintr-o grupă: o legătură la k. alchil (Ο,-Οθ).

(18) Tot un reactiv conform invenției este acela reprezentat de un compus cu formula generală:

(QUd c_h, în care d este 1 și C_h este reprezentat de formula:

în care: A¹și A⁴ sunt SH sau Spg; A² și A³ sunt NR⁴¹;

W este selectat independent dintr-o grupă:

CHR⁵², CHPCHR⁵², CH2CH₂CHR⁵² și CHR⁵²C=0 și

R⁴¹ și R⁵² sunt selectați independent din hidrogen și o legătură la k și _ZW-A²

A¹ t

în care: A¹ este NH_P sau N=C(C₁-C₃ alchil) (0_η·Ο₃ alchil)

W este o legătură;

A² este NHR⁴⁰, în care R⁴⁰ este heterociclu substituit cu R⁵² în care heterociclul este selectat dintre grupele: piridină, pirazină, pralină, furan, tiofuran, tiazol și diazină și R⁵² este o legătură la L_n;

(19) sau reactivul reprezentat de un compus cu formula generală:

(QlJd C_h, în care d este 1 sî C_h este:

_zW-a²

A¹ în care, A¹ este NH_P sau N=C(C₁-C₃ alchil) (C.,-C₃ alchil);

W este o legătură;

A² este NHR⁴⁰, în care R⁴⁰ este un heterociclu substituit cu R⁵² în care heterociclul este selectat dintre piridină și tiazol și R⁵² este o legătură la L_n.

(20) Un alt reactiv este reactivul prezentat mai sus la (1)...(15) în care L_n este o legătură între Q și C_h, sau un compus cu formula: M¹-{Y¹(CR⁵⁵R⁵⁶]tl(Z¹]h.Y²]_h.-M².

în care: M¹ este '-((CH2)gZ¹]g.-[Z¹(CR⁵⁵R⁵⁶)_g.-;

M² este -{CR⁵⁵R⁵⁶]g.-[Z¹(CH2)_g]_g.-; g este independent O...O;

RO 114895 Bl g’este independent O... 1; <7este O... 10; h este O... 10; h' este O... 10, h”este 0...1, Y¹ și Y² în fiecare caz sunt independent selectați dintre: o legătură, O, NR ⁵⁶C=0, 0(=0)0, OC(=O)NH-, C=NR⁵⁶, S, SO, S0₂, S0₃, NHC(=O), (NH)_PC(=O), (NH)_PC=S;

Z¹ este independent selectat în fiecare caz dintre un sistem C₆-C₁₄ ciclic carbociclic saturat, parțial saturat sau aromatic substituit cu O...4 R⁵⁷; un ciclu heterociclic, acest sistem fiind substituit opțional cu O...4 R⁵⁷;

R⁵⁵ și R⁵⁶ sunt independent selectați în fiecare caz, dintre:

hidrogen, alchil (0,-0,_ο) substituit cu O...5 R⁵⁷;

(C.,-C₁₀ alchil) arii în care arii este substituit cu O...5 R⁵⁷;

R⁵⁷ este independent selectat în fiecare caz dintr-o grupă:

hidrogen, OH. NHR⁵⁸, C(=0]R⁵⁸, OCf^JR⁵⁸, 0C(=0)0R⁵⁸, C(=0)0FÎ⁸, C(=0)NR⁵⁸, ON, SR⁵⁸, SOR⁵⁸, SOgR⁵⁸, NHC(=0)FP⁸, NHC(=0)NHFF⁸, NHC(=S)NHFP⁸ sau alternativ când sunt atașați la o moleculă Q adițională, R⁵⁷ este independent selectat în fiecare caz dintr-o grupă ca: O, NR⁵⁸, C=0, 0(=0)0, 00(=0)0, C(=0)N-, C=NR⁵⁸, S, SO. S0₂, S0₃, NHC(=0), (NH)₂C(=0), (NH)₂C=S și

R⁵⁸ este independent selectat în fiecare caz dintr-o grupă:

hidrogen, alchil (C,-C₆), benzii și fenii;

(21) sau în care L,, este un compus cu formula M¹-[Y¹(CR⁵⁵R⁵⁶)h(Z¹)h.(Y²)_n.-M², în

925

930

935 care:

M¹ este -t(CHa)eZ¹)fl4CR⁵⁵R⁵⁶)_g-;

M² este -(CR⁵⁵R⁵⁶)g.-(Z¹ (CHP)g^.-·, g este independent O.. .0; g‘ este independent O-... 1; g“ este O... 10; h este O... 10; h‘ este O... 10; h“este O... 1; Y¹ și Y² în fiecare caz sunt independent selectați dintre o legătură, O, NR⁵⁶, C=0, 0(=0)0, 00(=0)0, C(=0)NH-, C=NR⁵⁶, S, SO, S0₂, S0₃, NHC(=0), (NH)₂C(=0), (NH)₂C=S;

Z¹ este independent selectat în fiecare caz dintre un sistem ciclic carbociclic C₆-C,₄ saturat, parțial saturat sau aromat, substituit cu O...4 R⁵⁷; un sistem ciclic heterociclic opțional substituit cu O...4 R⁵⁷;

R⁵⁵ și R⁵⁶ sunt independent selectați în fiecare caz dintre:

hidrogen, alchil (C,-C,_Q) substituit cu O...5 R⁵⁷;

(0.,-0.,0 alchil) arii în care grupa arii este substituită cu O...5 R⁵⁷;

R⁵⁷ este independent selectat în fiecare caz dintre o grupă:

hidrogen, OH, NHR⁵⁸, C(=0)R⁵⁸, OC^OjR⁵⁸, 00(=0)0(3⁵⁸. C(=0)0FP⁸, 0(=0)ΝΡΡ⁸-, C=N, SR⁵⁸, SOR⁵⁸, S02R⁵⁸, NHC(=0)R⁵⁸, NHC(=0)NHR⁵⁸, NHC(=S)NHR⁵⁸ sau alternativ, când sunt atașați la o moleculă adițională Q, R⁵⁷ este independent selectat în fiecare caz dintr-o grupă: O, NR⁵⁸. 0=0, 0(=0)0, 00(=0)0, C(=0)N-, C=NR⁵⁸, S, SO, S02, S0₃, NHC(=0), (NH)₂C(=0), (NH)_aC=S și R⁵⁷ este legat la o moleculă Q și R⁵⁸ este independent selectat în fiecare caz dintre grupele: hidrogen, alchil (Ο,-Οθ), benzii sau fenii.

940

945

950

955 (22) Un alt reactiv este reactivul din (17) în care Ln este: -(CR⁵⁵R⁵⁶)g.[Y¹(CR⁵⁵R⁵⁶)hY²)_h.-{VR⁵⁵R⁵⁶) .960 în care: g“ este 1...10; h este O... 10; h’ este 1...10; Y și Y² în fiecare caz sunt selectați independent dintre o legătură, O, NR⁵⁶, 0=0, 0(=0)0, 00(=0)0,

C(=0)NH-, C=NR⁵⁶, S, SO, S0₂, S0₃, NHC(=0), (NH)_PC(=0), (NH)_PC=S;

r55 șj p56 _{S(jnt se}|_ectați în fiecare caz independent, dintre hidrogen, alchil (C,-C,_o) substituit cu O...5 R⁵⁷;

(Ο,-Ο,ο alchil) arii în care grupa arii este substituită cu 0...5R⁵⁷;

R⁵⁷ este independent selectat în fiecare caz dintre grupele:

965

RO 114895 Bl hidrogen, OH, NHR⁵⁸, C(=0)R⁵⁸, 00(=0)13⁵⁸. OC(=0)OR⁵⁸, C(=0]0R⁵⁸, C(=0)NR⁵⁸, C< SR⁵⁸, SOR⁵⁸, S02R⁵⁸ NHC(=O]R ⁵⁸ NHC(=O)NHR ⁵⁸ NHC(=S]NHR ⁵⁸sau, alternativ când este atașat la o moleculă adițională Q, R⁵⁷ este independent selectat în fiecare caz dintre o grupă: O, NR⁵⁸, C=0, 0(=0)0, 00(=0)0, C(=O]N-, C=NR⁵⁸, S, SO, S02, S0₃, NHC(=O), (NH)₂C(=O), (NH)₂C=S și R⁵⁷ este atașat la o moleculă adițională Q și R⁵⁸ este independent selectat în fiecare caz dintre o grupă ca:

hidrogen, alchil (C.,-C₆], benzii și fenil;

este:

(23) sau reactivul din (18) în care L_n -(CR⁵⁵R⁵⁸)g.-Y¹(CR⁵⁵R⁵⁶)t1Y²]h.-(CR⁵⁵R⁵⁸]g--, în care: g este 1...5; h este O...5; h' este 1...5; Y¹ și Y² în fiecare caz sunt independent selectați dintre:

O, NR⁵⁶. C=0, 0(=6)0, 00(=0)0, C(=O)NH-, C=NR⁵⁶, S, SO, S0₂, S0₃, NHC(=O), (NH)₂C(=0), (NH)₂C=S;

R⁵⁵ și R⁵⁶ sunt independent selectați în fiecare caz dintre:

hidrogen alchil (C.,-C_1O); (C.,-C₁₀ alchil) arii;

(24) sau reactivul din (19] în care L,-, este: 4CR⁵⁵R⁵⁸)g.-{Y¹(CR⁵⁵R⁵⁶)hY²]_h.-(CR⁵⁵R⁵⁶]g.-:

în care: geste 1 ...5; h este O...5; h'este 1 ...5; Y¹ și Y² sunt în fiecare caz selectați dintre:

O, NR⁵⁶, C=0, 0(=0)0, 00(=0)0, C(=O)NH-, C=NR⁵⁶, S, NHC(=O), (NH)₂C(=0), (NH)₂C=S;

R⁵⁵ și R⁵⁶ sunt independent selectați de fiecare dată hidrogen.

(25) Un reactiv inclus în prezenta invenție este reactivul din (1 ], care are una din următoarele formule:

RO 114895 Bl

1020

Ν,Η-4

NH ,Χί

1025

NH

1030

NH

Kj O

1035

1040

1045

1050 ·

1055

1060

CT NH

SjU

1065

RO 114895 Bl

1085

1090 (26) Reactivii de mai sus, într-o cantitate predeterminantă, sub formă sterilă, se utilizează pentru prepararea unui produs radiofarmaceutic.

1070 (29) Se include, de asemenea, în prezenta invenție, produsul radiofarmaceutic care conține un complex format din reactivii (11)...(15) și o radionuclidă, selectată dintr-o grupă ca: ^99mTc, ^94mTc, ⁹⁵Tc, ¹¹¹ln, ⁶²Cu, ⁴³Sc, ⁴⁵Ti, ⁶⁷Ga, ⁶⁸Ga, ⁹⁷Ru, ⁷²As, ^B2Rb si ²⁰¹Ti;

(30) sau produsul radiofarmaceutic care conține un complex format din reactivul

1075 (16) și o radionuclidă selectată dintre o grupă ^99mTc, “Tc, ⁹⁵Tc, ¹¹¹ln, ⁶²Cu, ⁴³Sc, ⁴⁵Ti, ⁶⁷Ga, Ga, ⁹⁷Ru, ⁷²As, ⁸²Rb și ^Tl;

(31) sau produsul radiofarmaceutic care conține un complex constând din reactivul (17) și o radionuclidă selectată dintre o grupă ^99rT1Tc, “Tc, ⁹⁵Tc, ¹¹¹ln, ⁶²Cu, ⁴³Sc, ⁴⁵Ti, ⁶⁷Ga, Ga, ⁹⁷Ru, ⁷²As, ⁸²Rb și ^Tl;

108(p (32) sau produsul radiofarmaceutic care conține un complex constând din reactivul (18) și o radionuclidă selectată dintre o grupă ^99mTc, ^S4mTc, ⁹⁵Tc, ¹¹¹ln, ⁶Î!u, ⁴iîc, ⁴⁵Ti, ⁶⁷Ga, Ga, ⁹⁷Ru, ⁷²As, ⁸²Rb și ^Tl;

(33) sau produsul radiofarmaceutic care conține un complex constând din reactivul (19) și o radionuclidă selectată dintre o grupă ^99mTc, “Tc, ⁹⁵Tc, ¹¹¹ln, ⁶²Cu, ⁴³Sc, ⁴⁵Ti, ⁶⁷Ga, Ga, ⁹⁷Ru, ⁷²As, ⁸²Rb și ^Tl;

(34) sau produsul radiofarmaceutic care conține un complex constând din reactivul (20) și o radionuclidă selectată dintre o grupă ^99mTc, “Tc, ⁹⁵Tc, ¹¹¹ln, ⁶²Cu, ⁴³Sc, ⁴⁵Ti, ⁶⁷Ga, Ga, ⁹⁷Ru, ⁷²As, ⁸²Rb și ^Tl;

(35) sau produsul radiofarmaceutic care conține un complex constând din reactivul (21) și o radionuclidă selectată dintre o grupă ^99mTc, ¹¹¹ln și ⁶²Cu;

(36) sau produsul radiofarmaceutic care conține un complex constând din reactivul (22) și o radionuclidă selectată dintre o grupă Tc, ¹¹¹ln și ⁶²Cu;

(37) sau produsul radiofarmaceutic care conține un complex constând din reactivul (23) și o radionuclidă selectată dintre o grupă ^99rnTc, ¹¹¹ln și Cu;

1095 (38) sau produsul radiofarmaceutic care conține un complex constând din reactivul (24) și o radionuclidă selectată dintre o grupă ^99mTc și ¹¹¹ln.

(39) Un alt produs radiofarmaceutic conform (29) care este reprezentat de una din formulele de mai jos:

1100

1105

1110

NH

OH

1115

RO 114895 Bl

1120

ΜΗ

1125

1130

1135

1140

1145

OH

1150

1155

1160

1165

RO 114895 Bl

NH

RO 114895 Bl

1215

1220

1225

1230

1235

1240

1245

1250

1255

RO 114895 Bl

NH

H

I;

1310

RO 114895 Bl

NH

t

1315

1320

1325

1330

1335

1340

1345

1350

RO 114895 Bl

RO 114895 Bl (40) Se include de asemenea în prezenta invenție, o metodă de vizualizare a poziției depozitului plachetar la mamifere, prin radiovizualizare, cuprinzând (i) administrarea 1405 la acel mamifer, a unei cantități eficiente din produsul radiofarmaceutic conform (29 și (ii) scanarea mamiferului, utilizând un dispozitiv de radiovizualizare.

(41) Se include de asemenea în prezenta invenție, metoda de vizualizare a poziției depozitului plachetar la mamifere, prin radiovizualizare, cuprinzând (i) administrarea la acel mamifer a unei cantități eficiente din produsul radiofarmaceutic conform (30) 1410 și (ii) scanarea mamiferului, utilizând un dispozitiv de radiovizualizare.

(42) Se mai include de asemenea în prezenta invenție, metoda de vizualizare a poziției depozitului plachetar la mamifere, prin radiovizualizare, cuprinzând (i) administrarea la acel mamifer, a unei cantități eficiente din compusul radiofarmaceutic conform (31) și (îi), scanarea mamiferului, utilizând un dispozitiv de radiovizualizare. 1415 (43) Se include de asemenea în prezenta invenție o metodă pentru vizualizarea poziției depozitului plachetar la mamifere, prin radiovizualizare, cuprinzând (i) administrarea la acest mamifer, a unei cantități eficiente din produsul radiofarmaceutic conform (32) și (ii) scanarea mamiferului, utilizând un dispozitiv de radiovizualizare.

(44) Metodă pentru vizualizarea depozitului plachetar la mamifere, prin radio- 1420 vizualizare, cuprinzând (i) administrarea la acest mamifer, a unei cantități eficiente din produsul radiofarmaceutic conform (33) și (ii) scanarea mamiferului utilizând un dispozitiv de radiovizualizare.

(45) Metodă pentru vizualizarea poziției depozitului plachetar la mamifere, prin radiovizualizare, cuprinzând (i) administrarea la acest mamifer a unei cantități eficiente din 1425 produsul radiofarmaceutic conform (34) și (ii) scanarea mamiferului utilizând un dispozitiv de radiovizualizare.

(46) Metodă pentru vizualizarea poziției depozitului plachetar la mamifer, prin radiovizualizare, cuprinzând (i) administrarea la acest mamifer a unei cantități eficiente din produsul radiofarmaceutic conform (35) și (ii) scanarea mamiferului, utilizând un dis- 1430 pozitiv de radiovizualizare.

(47) Metodă pentru vizualizarea poziției depozitului plachetar la mamifer, prin radiovizualizare, cuprinzând (i) administrarea la acest mamifer a unei cantități eficiente din produsul radiofarmaceutic conform (36) și (ii) scanarea mamiferului utilizând un dispozitiv de radiovizualizare. 1435 (48) Metodă pentru vizualizarea poziției depozitului plachetar la mamifere, prin radiovizualizare, cuprinzând (i) administrarea la acest mamifer a unei. cantități eficiente din produsul radiofarmaceutic conform (37) și (ii) scanarea mamiferului utilizând un dispozitiv de radiovizualizare.

(49) Metodă pentru vizualizarea poziției depozitului plachetar la mamifer, prin radio- 1440 vizualizare, cuprinzând (i) administrarea la acest mamifer a unei cantități eficiente din produsul radiofarmaceutic conform (38) și (ii) scanarea mamiferului, utilizând un dispozitiv de radiovizualizare.

(50) Metodă pentru vizualizarea poziției depozitului plachetar la mamifer, prin radiovizualizare, cuprinzând (i) administrarea la acest mamifer a unei cantități eficiente din 1445 produsul radiofarmaceutic conform revendicării 39 și (ii) scanarea mamiferului utilizând un dispozitiv de radiovizualizare.

(51) Prezenta invenție conține compușii radiomarcați care au formula generală I:

/

R³²

I

NR² ({R²¹)R¹)_n1450

1455

CI)

RO 114895 Bl sau o sare acceptabilă farmaceutic, sau o formă promedicament al acestuia, în care:R³¹ este un sistem ciclic carbociclic (C₆-C₁₄) saturat, parțial saturat sau aromatic, substituit cu O...4 R¹° sau R^1Oa;

R³² este selecționat dintre:

-C(=0)-; C(=S)-; -S(=0)₂-; -S(=0)-; -P(=Z)(ZR¹³)-;

Z este S sau O; nși n'sunt independent O...2;

R¹ și R²² sunt independent selectați din următoarele grupări: hidrogen, alchil (C.,-C8) substituit cu O...2 R¹¹; alchenil (C2-Ca) substituit cu 0...2 R¹¹; achinil (C^-Cg) substituit cu 0...2 R¹¹; cicloalchil C3-C10 substituit cu 0...2 R¹¹; arii substituit cu O...2 R¹²; un sistem ciclic heterociclic cu 5...10 membri conținând 1 .. 4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O, acest ciclu heterociclic fiind substituit cu O...2 R¹²; =0. F, Cl, Br, I, -CF3, -CN, -CO₂R¹³, -C(=0)R¹³, -C(=0)N(R¹³)2, -CHO, -CH20R¹³, -0C(=0)R¹³, -0C(=0)0R^13a, OR¹³, -0C(=0)N(R¹³)2, -NR¹³C(=0)R¹³, -NR¹⁴C(=0)0R^13a, -NR¹³C(=0)N(R¹³)₂, -NR¹⁴S02N(R¹³)2, -NR¹⁴S02R^13a, -S03H, -S0₂R^13a, -SR¹³,

-S(=0)R^13a, -S02N(R¹³)2, -N(R¹³)2-, -NHC(=NH)NHR¹³, -C(=NH)NHR¹³, =nor¹³, no2, C(=0)NH0R¹³, -C(=0)NHNR¹³R^13a, -0CH₂C0₂H, 2-{1-morfolino)etoxi;

R¹ și R²¹ pot fi alternativ legați pentru a forma un ciclu carbociclic cu 3...7 membri, substituit cu O...2 R¹²;

când n’este 2, R¹ sau R²¹ pot fi alternativ luați împreună cu R¹ sau R²¹ la un atom de carbon adiacent, pentru a forma o legătură directă, prin care se formează apoi o legătură dublă sau triplă între acești atomi de carbon;

R²² și R²³ se pot uni alternativ pentru a forma un ciclu carbociclic cu 3...7 membri, substituit cu O...2 R¹²;

când neste 2, R²² sau R²³ pot fi alternativ uniți cu R²² sau R²³ la atomul de carbon adiacent, pentru a forma o legătură directă, prin care se formează o legătură dublă sau triplă între atomii de carbon adiacenți;

R¹ și R², în care R²¹ este H, pot fi alternativ uniți pentru a forma un ciclu carbociclic cu 5...8 membri, substituit cu O...2 R¹²;

R¹¹ este selectat dintr-unul sau mai mulți dintre radicalii:

=0, F, Cl, Br, I, -CF₃, -CN, -C0₂R¹³, -C(=0)R¹³, -C(=0)N(R¹³)2, -CHO, -CH20R¹³, -C0(=0)R¹³, -0C(=0)0R^13a,- OR¹³, -0C(=0)N(R¹³)2, -NR¹³C(=0)R¹³, -NR¹⁴C(=0)0R^13a, NR¹³C(=0)N(R¹³)₂, -NR¹⁴S02N(R¹³)2, -NR¹⁴S02N(R¹³)2, -NR¹⁴S02R^13a, -S03H,

-S0_PR^13a, -SR¹³, -S(=0)R^13a, -S02N(R¹³)2, -N(R¹³)₂, -NHC(=NH)NHR¹³,

-C(=NH)NHR¹³, =N0R¹³, N02, -C(=0)NH0R¹³, -C(=O)NHNR¹³R^13a, -0CH2C0₂H, 2-(1morfolinojetoxi;

alchil (C,-^), alchenil (C^-CJ, cicloalchil (Cg-CȚ), cicloalchil (Cj-Q) metil, alcoxialchil (C,C₆), cicloalcoxi (C₃-C₆), alchil (C.,-C₄), radicalul alchil fiind substituit cu 1...5 grupe selectate independent dintre: NR¹³R¹⁴, -CF₃, N0₂, -SOgR¹³* sau -{=0)R^13a, arii substituit cu O...2 R¹², un sistem ciclic heterociclic cu 5...10 membri, conținând 1...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S și O, acest ciclu fiind substituit cu O...2 R¹²;

R¹² este selectat dintr-una sau mai multe din următoarele grupe: fenil, benzii, fenetil, fenoxi, benziloxi, halogen, hidroxi, nitro, ciano, alchil (0,-05), cicloalchil (C3-C6), cicloalchil(C3-C6)metil, arilalchil (C7-C1O), alcoxi (C.,-C5), -C02R¹³, -C(=0)NH0R^13a, C(=0)NHN(R¹³)2, =N0R¹³, -B(R³⁴)(R³⁵), cicloalcoxi (C3-C6), -0C(=0)R¹³, -C(=0)R¹³, 0C(=0)0R^13a, -OR¹³, -(0,-04 alchil) - OR¹³, -N(R¹³)2, -OC(=0)N(R¹³)₂, -NR¹³C(=0)R¹³, NR¹³C(=0)0R^13a, -NR¹³C(=0)N(R¹³)2, -NR¹³S02N(R¹³)2, -NR¹³S02R^13a, -S0₃H,

-S0₂R^13a, -S(=O)R^13a, -SR¹³, -S02N(R¹³)2, alcoxialchil (C₂-C₆), metilendioxi, etilendioxi, haloalchil (CȚ-CJ, haloalcoxi (C.,-C₄), alchil (0,-0₄) carboniloxi, alchil (C,-C₄) carbonil,

RO 114895 Bl alchil (CȚ-CJ carbonilamino, -OCHgCOgH, 2-(1-morfolino]etoxi, alchil (C,-QJ (alchilul fiind 1505 substituit cu -N(R¹³]₂, -CF₃, N0₂ sau -S(=0]R^13a);

R¹³ este selectat independent dintre: H, alchil (C^^), cicloalchil (C₃-C_1o), alchil- (C₄C₁₂)cicloalchil, arii, -(C^^ alchil) arii sau alcoxialchil (C₃-C_1O);

R^13a este alchil (0,-C^) .cicloalchil (Cg-C₁₀), alchil(C₄-C₁₂)cicloalchil, arii, -(Τ-Ο,ο alchil) arii sau alcoxialchil (C₃-C₁₀); 1510 când cele două grupe R¹³ sunt legate la un singur N, acestea pot fi alternativ legate împreună pentru a forma -fCH₂)₂.₅- sau -(CH₂]0(CH₂)-;

R¹⁴ este OH, H, alchil (C.,-C₄) sau benzii;

R²¹ și R²³ sunt independent selectate dintre: hidrogen, alchil (CȚ-CJ opțional substituit cu 1...6 atomi de halogen, benzii, 1515

R² este H sau alchil (^-Cg);

| R¹° și R^10a sunt selectate independent din una sau mai multe grupe: fenil, benzii, fenetil, fenoxi, benziloxi, halogen, hidroxi, nitro, ciano, alchil (C-j-Cg), cicloalchil (C₃-C₆), cicloalchil (C₃-C₆) metil, arilalchil (Cy-C^), alcoxi (C.,-C₅), -C0₂R¹³, -C(=0)N(R¹³]2, C(=0)NH0R^13a, C(=0)NHN(R¹³]2, -NOR¹³ -B(R³⁴)(R³⁵), cicloalcoxi (Cg-Cg), 1520

-0C(=0]R¹³, -C(=0]R¹³, -0C(=0]0R^13a, -OR¹³, -ÎC,-C4 alchil) - OR¹³, -N(R¹³]2,

-0C(=0)N(R¹³]2, -NR¹³C(=0)R¹³, -NR¹³C(=0]0R^13a, -NR¹³C(=0)N(R¹³)2,

-NR¹³S0₂N(R¹³)2, -NR¹³S02R^13a, -S0₃H. -S0₂R^13a, -S(=0)R^13a, -SR¹³, -S02N(R¹³)2, alcoxialchil (C₂-C₆), metilendioxi, etilendioxi, haloalchil (C,^). (incluzând -CvFwîn care v=1 la 3 și w= 1 la (2v+1)), haloalcoxi (Cj-CJ, alchil (C,-C₄) carboniloxi, alchil- (C.,- 1525 CJcarbonil, alchil-(C₁-C₄)carbonilamino, -OCHgCOgH, 2-{1-morfolino)etoxi, alchil (C,-C₄) (radicalul alchil fiind substituit cu -N(R¹³)₂, -CF₃, N0₂ sau -S(=0)R^13a);

J este β-Ala sau L-izomer sau D-izomer al unui aminoacid cu structura: -N(R³)C(R⁴)(R⁵]C(=0)-, în care:

R³ este H sau alchil (C.,-C_a); R₄ este H sau alchil (C.,-C₃); 1530

R⁵ este selectat dintre: hidrogen, alchil (C-j-Cg) substituit cu O...2 R¹¹; alchenil (Cg-Cg) substituit cu O...2 R¹¹; alchinil (C2-Cg) substituit cu O...2 R¹¹; cicloalchil (C3-C_1O) substituit cu O...2 R¹¹; arii substituit cu O...2 R¹²;

un sistem ciclic heterociclic cu 5...10 membri conținând 1...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O, acest ciclu heterociclic fiind substituit cu O...2 R¹²; 1535 =0, F, CI. Br, I, -CFg, -CN, -C0₂R¹³, -C(=O)R¹³, -C(=0)N(R¹³)₂, -CHO, -CH₂0R¹³,

-C0(=0)R¹³, -0C(=0]0R^13a, OR¹³. -0C(=0)N(R¹³)₂, -NR¹³C(=0)R¹³, -NR¹⁴C(=0)0R^13a, NR¹³C(=0]N(R¹³)2, -NR¹⁴S02N(R¹³)_2i -NR¹⁴S02R^13a, -S03H, -S0₂R^13a, -SR¹³,

-S(=0)R^13a, -S02N(R¹³)2, -N(R¹³]P, -NHC(=NH)NHR¹³, -C(=NH]NHR¹³, =NOR¹³, N02, C(=0]NH0R¹³, -C(=0)NHNR¹³R^13a, =N0R¹³, -BfR³⁴)^³⁵) -OCH₂CO₂H, 1540

2-(1-morfolino)etoxi, -SC(=NH)NHR¹³, N₃, -Si(CH₃)₃ , (C,-^ alchil)NHR¹⁶;

-(Co-Cg alchil)X:

-(CH₂)q

CH₂) _q-X, în care g este independent O

1545 sau 1; - CH₂ 2~^ch2^x

-(CH₂)_mS(0]_p, (CH₂)₂Xîn care m este 1, 2 și p'este O...2;

în care X este definit mai jos și R³ și R⁴ pot fi luați împreună pentru a forma: 1550 (CH₂)_nX

-CH₂CHCH₂-, în care n este O sau 1 și X este:

RO 114895 Bl .NR¹³ —NH-C

N (R¹³)R¹³.

R³ și R⁵ pot fi luați alternativ împreună pentru a forma:

-(CH₂)_t- sau -CH₂S(0)_pC(CH₃)₂-, în care t= 2...4 și p’= O...2; sau

R⁴ și R⁵ pot fi luați alternativ împreună pentru a forma:

-{CH₂)_u-, în care u = 2...5;

R¹⁶ este selectat dintre: o grupă amino de protecție; 1...2 aminoacizi; 1...2 aminoacizi substituiți cu o grupă amino de protecție; K este un D-izomer sau L-izomer al unui aminoacid cu formula de structură: -N(R⁶)CH(R⁷)C(=0)-, în care: Ff³ este H sau alchil (C1-C8); R⁷ este selectat dintre : -(0,-07 alchiljX;

—(CK₂)_q (CK₂)_q-X, γ_{η cgre} fj_ecare q _este independent O...2 și substituirea la fenil este în poziția 3 sau 4;

(CH₂) _q-X, în care fiecare q este independent selectat din O...2 și substituirea la ciclohexil se face în poziția 3 sau 4;

- (Cj-Cg) alchil)

NH

-(CH^O- (0,-04 alchilJ-X, în care m = 1 sau 2;

-tCH₂)_mS(0]p.- (C,-C₄ alchil)-X, în care m este 1 sau 2 și p'este O...2 și X este selectat dintre: ,_q .NR¹³ —NH—. N (R¹³)R¹;-N (R¹³)R¹³

-C(=NH)(NH₂); -SC(=NH)-NH₂; -NH - C(=NH)(NHCN);

-NH - C(=NCN)(NH₂); -NH - C(=N-0R¹³)(NH₂);

R⁶ și R⁷ pot fi luați alternativ împreună pentru a forma:

(CH₂)_nX

- (CH₂) _qCH-(CH₂) _q-; în care fiecare q este independent 1 sau 2 și în care: n = O sau 1 și X este -NH₂ sau

NR» —NH—C^

N(R¹³)R^: .

L este -Y(CH₂)_vC(=0), în care:

Y este NH, N (0,-0₃ alchil), O sau S și v = 1 sau 2;

M este un D-izomer sau L-izomer al unui aminoacid cu structura:

RO 114895 Bl

-NRⁿ-CH-C (=0) -

1605 în care: g'este O...2; R¹⁷ este H, alchil (Cî-Cg];

R⁸ este selectat dintre:

-C0₂R¹³, -SO3R¹³, -SO^NHR¹⁴, -B(R³⁴)(R³⁵), -NHS0^CF3, -C0NHNHSQ,CF3, -POfOR¹³^, 1610 -P0(0R¹³)R¹³, -S02NH-heteroaril (acest heteroaril fiind format din 5...10 membri și având 1 ...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O), -S0₂NH- heteroaril (acest heteroaril având 5...10 membri și 1...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O], -S0₂NHC0R¹³, -CONHSO2R^13a, -CH2C0NHS0₂R^13a,

-NHS0₂NHC0R^13a, -NHC0NHS02R^13a, -S02NHC0NR¹³; 1615

R³⁴ și R³⁵ sunt independent selectați dintre o grupă, ca: -OH, -F, -N(R¹³)₂ sau alcoxi

R³⁴ și R³⁵ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma: un ester ciclic de bor în care catena sau ciclul conțin de la 2 la 20 atomi de carbon și opțional 1...4 heteroatomi independent selectați dintre N, S sau O; o amidă ciclică de bor bivalent în care catena 1620 sau ciclul menționat conține de la 2 la 20 atomi de carbon și opțional 1...4 heteroatomi independent selectați dintre N, S sau O; o ester-amidă ciclică de bor în care catena sau ciclul menționat conține de la 2 la 20 atomi de carbon și opțional

1...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O și în care compusul radiomarcat este selectat dintr-o grupă: ¹²³l, ¹²⁵l, ¹³¹l, ¹⁸F, ¹¹C, ¹³N, ¹⁵0, ⁷⁵Br. 1625 (52) Un alt compus radiomarcat este acela conform (51) în care R³¹ este legat la (C(R²³)R^2a)n- și (C(R²¹)R¹)n· la doi atomi diferiți din ciclul carbociclic;

(53) sau compusul conform (51) în care n este O și n’ este O; n este O și n’ este 1; n este O și n‘ este 2; n“ este 1 și n’ este O; n este 1 și n' este 1; n” este 1 și n' este 2; n” este 2 și n'este O; neste 2 și n'este 1; sau neste 2 și n'este 2; 1630 (54) sau compusul conform (51) în care R⁸ este un radical metil, etil sau propii;

(55) sau compusul conform (51) în care R³¹ este selectat dintr-o grupă care constă din:

(a) un ciclu carbociclic cu 6 membri, saturat, parțial saturat sau aromatic, substituit cu O...3 R¹⁰ sau R^10a;

1635 (b) un ciclu carbociclic biciclic condensat având 8...11 membri, saturat, parțial saturat sau aromatic, substituit cu O...4 R¹⁰ sau R^10a; sau (c) un ciclu carbociclic triciclic condensat cu 14 membri, saturat, parțial saturat sau aromatic, substituit cu O...4

R¹° sau R^10a;

(56) sau compusul conform (51) în care R³¹ este selectat dintr-o grupă care constă 1640 din: a) un ciclu carbociclic cu 6 membri, saturat, parțial saturat sau aromatic, având formula: ,

1645 în care oricare legătură care formează ciclul carbociclic poate fi o legătură simplă sau dublă, și în care acest ciclu carbociclic este substituit independent cu O...4 R¹⁰; b) un ciclu carbociclic cu 10 membri, saturat, parțial saturat sau aromatic, având 1650 formula:

RO 114895 Bl

în care orice legături formatoare de ciclu carbociclic pot fi o legătură simplă sau o legătură dublă și în care acest ciclu carbociclic este independent substituit cu O...4

R^1Q sau R^10a;

c) un ciclu carbociclic biciclic având 9 membri, saturat, parțial saturat sau aro matic având formula:

în care orice legături care formează ciclul carbociclic, pot fi legături simple sau duble și în care acest ciclu carbociclic este substituit independent cu O...4 R¹° sau R^10a.

(57) Un compus radiomarcat, conform invenției, este compusul conform (51) în care R³¹ este selectat dintre radicalii având formulele următoare (în care legătura de bază este o legătură simplă sau dublă):

sau n este O sau 1; și n’ este O.. .2;

(58) sau compusul conform (51) în care R¹ și R²² sunt independent selectați dintre: fenil, benzii, fenetil, fenoxi, benziloxi, halogen, hidroxi, nitro, ciano, alchil (C.,-C5), cicloalchil (C3-C6), cicloalchil(C3-C6]metil, arilalchil (C7-C10), alcoxi (C^-Cg), -C02R¹³, -C(=0)NH0R^13a, -C(=0)NHN(R¹³)2, =N0R¹³ -B(R³⁴)(R³⁵), cicloalcoxi (C3-C6), -0C(=0)R¹³, -C(=0)R¹³, 0C(=0]0R^13a, -OR¹³, -(C.,-C4 alchil) - OR¹³, -N(R¹³)2, -0C(=0]N(R¹³]2, -NR¹³C(=0]R¹³, -NR¹³C(=0]0R^13a, -NR¹³C(=O)N(R¹³)2, -NR¹³S02N(R¹³]₂, -NR¹³S02R^13a, -S03H, -S0₂R^13a, -S(=O)R^13a, -SR¹³, -S0₂N(R¹³]₂, alcoxialchil (C₂-C₆), metilendioxi,

RO 114895 Bl etilendioxi, haloalchil (C.,-C₄], haloalcoxi (C -C,), ₄ alchil(C -C )pa#ioniloxi, alchil(C - _η CJcarbonil, alchil(C.,0₄)carbonilamino, OCH₂C0₂H, 2-{1-morfolino)etoxi, (0_ηΟ₄) alchil (radicalul alchil fiind substituit cu:

-N(R¹³)₂, -CF₃, N0₂ sau -S(=0)R^13a);

(59) sau compusul conform (51) în care R³¹ este selectat dintre radicalii având 1705 următoarele formule:

1710

1715

1720

1725

1730 în care R³¹ poate fi substituit independent cu O...3 R¹⁰ sau R^10a; R³² este -C(=0); n” este O sau 1; ri'este O...2; R¹ și R²² sunt independent selectați dintre H, alchil (C_r C₄), fenil, benzii, fenil - (C₂-C₄) alchil, alcoxi (C.,-C₄);

R²¹ și R²³ sunt independent H sau alchil (C.,-C₄);

R² este H sau alchil (C.,O₈); 1735

R¹³ este selectat independent dintre: H, alchil (0,0^), cicloalchil (C₃O₁₀), alchil- (C₄C₁₂)cicloalchil, arii, -(0,-0.,0 alchil) arii, -ÎC.,O₁₀ alchil) arii sau alcoxialchil (C₃0₁₀);

R^13a este alchil (C.,O10), cicloalchil (C3O10), alchil(04012)cicloalchil, arii, -(C.,0.,0 alchil) arii sau alcoxialchil (C3O10); când două grupe R¹³ sunt legate la un singur N, acestea pot fi luate alternativ împreună pentru a forma -(CH2)_{2 5}- sau -(CH₂)0(CH₂)-; 1740

R¹⁴ este OH, H, alchil (C_nO₄) sau benzii;

ri° gj pioa _{S(jnt se}|_ectați independent dintre: H, alchil (C₁-C₈), fenil, halogen sau alcoxi (C^-CJ;

J este β-Ala sau un L-izomer sau D-izomer al unui aminoacid cu structura:

-N(R³)C(R⁴)(R⁵)C(=0)- în care: 1745

R³ este H sau CH3; R⁴ este H sau alchil (0,Ο3);

R⁵ este H, alchil (C.,O₈), cicloalchil (C₃O₆), cicloalchil (C₃O₆)metil, cicloalchil (0,Ο₆) etil, fenil, fenilmetil, CH₂0H, CH₂SH, CH₂0CH₃, CH₂SCH₃, CH₂CH₂SCH₃, (CH₂)_SNH₂, -(CH₂)_sNHC(=NH)(NH₂), -(CH₂)_sNHR₁₆, în care s = 3...5 sau:

RO 114895 Bl

R¹⁶ este selectat dintre: o grupă de protecție amino; 1...2 aminoacizi sau 1...2 aminoacizi substituiți cu o grupă de protecție amino;

R³ și R⁵ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma:

-(CH₂)_t- (t = 2 - 4) sau CH₂SC(CH₃)₂- sau

R⁴ și R⁵ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma -(CH₂]_u-în care u = 2...5;

K este un L-izomer al aminoacidului cu structura:

-{CHJpXîn care r= 3...6;

alchiO-NH-fC,-^ alchil), în care m= 1 sau 2; -fC^LS-fQ-Q alchil)-NH(0,-Ce alchil), în care m = 1 sau 2; și X este -NH₂ sau -NHC(=NH)(NH₂) sau R⁶ și R⁷ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma:

(CH₂)_nX _CH CH-CH - · Îh ^care = O sau 1 și X este -NH₂ sau -NHC(=NH](NH₂); ^{2 2}

L este -Y(CH₂)_vC(=0)-în care:

Y este NH, O sau S și v= 1 sau 2;

M este un D-izomer sau L-izomer al aminoacidului cu structura:

-NR^1?-CH-C (=0) (CH(R⁴) )_q.

L

R⁸ în care: q'este O...2; R¹⁷ este H, alchil (C.,-C₃);

R⁸ este selectat dintre:

-C0₂R¹³, -SOgR¹³, -SOgNHR¹⁴, -B(R³⁴)(R³⁵), -NHSOgCFg, -C0NHNHS0^CF3, -POfOR¹³^, -P0(0R¹³)R¹³, -SO2NH-heteroaril (acest heteroaril având 5...10 membri și 1.. .4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O), - S0₂NH-heteroaril (acest heteroaril având 5...10 membri și 1...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O), -S0₂NHC0R¹³, -CONHSOgR¹³³, -CH^ONHSO jR^13a, -NHCONHSO j=l^13a

-NHS0₂NHC0R^13a, -S0₂NHC0NHR¹³.

RO 114895 Bl (60) Un alt compus radiomarcat este compusul conform (51) care este compusul 1,3-fenil disubstituit radiomarcat, având formula generală II: _Ύ

K

10.

1800 /

J \

o=c.

NFc /

CHR¹

1805 în care ciclul fenil poate fi substituit cu O...3 R R¹⁰ este selectat independent dintre: H, alchil (0,-Cg), fenil, halogen sau alcoxi (II)

1810

R¹ este H, alchil (Ο,-Ο^. fenil, benzii sau fenil -tC₁-C₄)-alchil; R² este H sau metil;

R¹³ este selectat independent dintre : H, alchil (C.,-C₁₀). cicloalchil (C₃-C_1O), alchil- (C₄C₁₂)ciclocalchil, arii, -(Ο,-Ο,ο alchil) arii sau alcoxialchil (C₃-C₁₀);

R¹³ este alchil (Ο,-Ο,θ). cicloalchil (C₃-C₁₀), alchil(C₄-C₁₂)cicloalchil, arii, -ÎC.,-C₁₀ alchil) arii sau alcoxialchil (C₃-C₁₀);

când cele două grupe R¹³ sunt legate la un singur N, aceste grupe R¹³ pot fi alternativ luate împreună pentru a forma -(CH2)2.5- sau -{CH2) O (CK,)-; R¹⁴ este OH, H, alchil (C,C4] sau benzii;

J este β-Ala sau L-izomerul sau D-izomerul aminoacidului cu structura:

-N(R³) C (R⁴)(R⁵) C(=0), în care:

R³ este H sau CH3; R⁴ este H sau alchil (C,-C3);

R⁵ este H, alchil (Ο,-Cg), cicloalchil (Cg-C^), cicloalchi (Gj-QJmetil, cicloalchil (C,-Q)- etil, fenil, fenilmetil, CH₂0H, CH₂SH, CH₂0CH₃, CH₂SCH₃, CH₂CH₂SCH₃, (CH₂)_SNH₂, (CH₂)_sNHC(=NH)(NH₂), -(CH₂)_sNHR¹⁶, în care s = 3... 5 sau

R¹⁶ este selectat dintre:

o grupă de protecție amino, 1...2 aminoacizi sau 1...2 aminoacizi substituiți cu o grupă de protecție amino;

R³ și R⁵ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma o grupă -CH2CH2-CH2- sau R⁴ și R⁵ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma o grupă -(CH2)_U- în care u=2...5;

K este un L-izomer al unui aminoacid cu structura:

-N(R⁶) CH(R⁷) C(=0)-, în care:

R⁶ este H sau alchil (Ο,-Cg); R⁷ este:

1815

1820

1825

1830

-(CHJrX, în care r= 3...6;

-(CH₂) — (CH₂)

1835

1840

1845

RO 114895 Bl

-(CH₂]_mS(CH₂)₂X, în care m = 1 sau 2; -{C₃-C₇ alchilJ-NH-ÎC^e alchil]

-(CH₂]_m-0-{C₁-C₄ alchil)-NH-{C₁-C₆ alchil] în care m = 1 sau 2

-(CHgJHfSIC.i-CL alchilJ-NH-fC^-Cs alchil] în care m = 1 sau 2 și X este -NH₂ sau -NHC(=NH)(NH₂), cu condiția ca X să fie diferit de -NH₂, când r = 4 sau R⁶ și R⁷ sunt alternativ luați împreună pentru a forma:

(CH₂)_nX

J

-CH₂CH-CH₂- , în care π = O sau 1 și X este -NH₂ sau -NHC(=NH)(NH₂);

L este -Y(CH₂]„C(=0)-, în care:

Y este NH, O sau S; și v= 1 sau 2;

M este un izomer D sau un izomer L al unui aminoacid cu structura:

-NR¹⁷-CK-C(=0)(CH (R⁴) )_q.

R^e în care: q'este O...2; R¹⁷ este H, alchil (C^-Cy;

R⁸ este selectat dintre:

-C0₂R¹³, -S03R¹³, -S02NHR¹⁴, -B(R³⁴)(R³⁵), -NHS0pCF3, -C0NHNHS02CF3i -P0(0R¹³)2, -P0(0R¹³)R¹³, -SC^NH-heteroaril (acest heteroaril având 5...10 membri și 1 ...4 heteroatomi, selectați independent dintre N, S sau O), -SO₂NH-heteroaril (acest heteroaril având 5...10 membri și 1...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O), -S0₂NHC0R¹³, -C0NHS02R^13a, -CH2C0NHS0₂R^13a, -NHS0₂NHC0R^13a, -NHC0NHS02R^13a, -S0PNHC0NHR¹³.

(61) . Un alt compus radiomarcat este compusul conform (51) care este 1,3-fenil disubstituit radiomarcat având formula generală II:

(II) în care ciclul fenil în formula (II) poate fi substituit cu O...3 R¹⁰ sau R^10a;

R¹⁰ sau R^10a sunt selectați independent dintre: H, alchil (C₁-C₈), fenil, halogen sau alcoxi (t^-CJ;

R¹ este H, alchil (C.,-C₄), fenil, benzii sau fenialchil (C₂-C₄);

R² este H sau metil; R¹³ este selectat independent dintre:

H, alchil (Ο,-Ο,ο), cicloalchil (Cg-Cy, alchil(C₄-C,₂)cicloalchil. arii, -(Ο,-Ο,θ alchil) arii sau

RO 114895 Bl alcoxialchil(C₃-C_1o);

când cele două grupe R¹³ sunt legate la un singur N, aceste grupe R ¹³ pot fi alternativ luate împreună pentru a forma o grupă:

sau -(CH₂) O (CH₂)-;

R^13a este alchil (C^^), cicloalchil (C₃-C₁₀), alchil(C₄-C₁₂)cicloalchil, arii, -(C.,-C_1Q alchil) arii sau alcoxialchil (C₃-C₁₀);

R₁₄ este OH, H, alchil (Ο,-CJ sau benzii;

J este β-Ala sau un L-izomer al unui aminoacid cu structura -N(R³) C(R⁴)(R⁵) C(=O)-, în care: R³ este H sau CH₃; R⁴ este H;

R⁵ este H, alchil (Ο_η-Οθ), cicloalchil (C^-Q), cicloalchil(Q -Q ) metil, cicloalchil (CJ -Q )- etil, fenil, fenilmetil, CH₂0H, CH pH, CH pCH ,₃ CH ȘCH ,₃ CH C^ SQH , £CH ) Nțt, (CH₂)_sNHC(=NH)(NH₂), (CH₂)_sR¹⁶, în care s= 3...5;

r R³ și R⁵ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma o grupă -CH₂CH₂-CH_P-; R¹⁶ este selectat dintre: o grupă de protecție amino, 1 ...2 aminoacizi; 1 ...2 aminoacizi substituiți cu o grupă de protecție amino;

K este L-izomer al unui aminoacid cu structura:

-N(R⁶] CH(R⁷) C(=O)-în care:

R⁶ este H sau alchil (C₃-C₈); R⁷ este:

1900

1905

1910

-(CH₂)_rX, în care r= 3...6;

1915

1920 — ch₂

1925

1930

-(CH₂]_(T1S(CH₂)₂X, în care m = 1 sau 2; -(C₄-C₇ alchilJ-NH-ÎC^ alchil)

1935

-(CH₂)_rn-0-(C₁-C₄ alchilJ-NH-tC.j-Ce alchil) în care m = 1 sau 2;

-(CH₂]_m-S-(C₁-C₄ alchil]-NH-(C₁-C₆ alchil) în care m = 1 sau 2 și X este -NH₂ sau -NHC(=NH)(NH_P), cu condiția ca X să fie diferit de -NH₂, când r = 4 sau L este -YCH₂C(=O)- în care Y este NH sau O;

M este un D-izomer sau L-izomer al unui aminoacid cu structura:

-NR¹⁷-CH-C(=0)(CH (R⁴) )<,·

R⁸ în care q’este 1; R¹⁷ este H, alchil (C^-Cal; R³ este selectat dintre: -CC^H sau -SO^R¹³

1940

1945

RO 114895 Bl (62) Un alt compus radiomarcat este compusul conform (51), care are formula generală II de mai sus, în care ciclul fenil poate fi substituit cu O...2 R¹⁰ sau R^10a;

R¹° sau R^10a sunt selectați independent dintre: H, alchil (Ο-,-Οθ), fenil, halogen sau alcoxi (C^J;

R¹ este H, R² este H;

R¹³ este selectat independent dintre: H, alchil (C₁-C₁₀), cicloalchil (C₃-C₁₀), alchil- (C₄C₁₂)cicloalchil, arii, -(C₁G_1O alchil) arii sau alcoxialchil (C₃-C₁₀);

R^13a este alchil (C^^), cicloalchil (C₃-C_1O), alchil(C₄-C₁₂)cicloalchil, arii, -{C₁G_1O alchil) arii sau alcoxialchil (C₃-C₁₀);

când cele două grupe R¹³ sunt legate la un singur atom de N, aceste grupe R¹³ pot fi luate alternativ împreună pentru a forma o grupă -{CH₂)₂_₅ sau -(CH₂) O (CH₂);

R¹⁴ este OH, H, alchil (C₁-C₄) sau benzii;

J este β-Ala sau un L-izomer sau D-izomer al unui aminoacid cu formula

-N(R³) CH(R⁵) C(=0)- în care:

R³ este H și R⁵ este H, CH3, CH2CH3, CH(CH3)2, CH(CH3)CH2CH3, CH2CH2CH3, CH2CH2CH2CH3, CH2CH2SCH3, CH2CH(CH3)2, (CH2)4NH2, (Cg-Cs alchilJNHR¹⁸; sau R³ este CH3 și R⁵ este H; sau R³ și R⁵ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma; CH₂CH₂CH₂-;

R¹⁶ este selectat dintre: o grupă amino de protecție, 1 ...2 aminoacizi; 1 ...2 aminoacizi substituiți cu o grupă amino de protecție;

K este un izomer L al unui aminoacid cu formula:

-N(CH₃) CH(R⁷) C(=0)-, în care: R⁷ este -(CH₂)₃- NHC(=NH)(NH_P); și L este NHCH₂C(=O)- și

M este D-izomer sau L-izomer al unui aminoacid cu structura:

-NR^1?-CH-C(=0)(CH(R⁴) )_q.

R^e , în care: q’este 1; R⁴ este H sau CH₃; R¹⁷ este H; R⁸ este -C0₂H, -S0₃H.

(63) Un alt compus radiomarcat este compusul conform (51), care are formula generală II sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, în care R¹ și R² sunt-independent selectați dintre H, metil;

J este selectat dintre D-Val, acidul D-2-aminobutiric, D-Leu, D-Ala, Gly, D-Pro, D-Ser, D-Lys, β-Ala, Pro, Phe, NMeGly, D-NIe, D-Phg, D-lle, D-Phe, D-Tyr, Ala, Ν^ζ-Ρazidobenzoil-D-Lys, NLp-benzoilbenzoil-D-Lys, NMriprofanil-D-Lys, IX^-o-benzil benzoil-DLys, NLp-acetilbenzoil-D-Lys, N^?-dansyl-D-Lys, N^p-glicil-D-Lys, IXf-glicil-para-benzoilbenzoil-D-Lys, NLparafenil-benzoil-D-Lys, N^m-benzoilbenzoil-D-Lys, l\f-o-benzoilbenzoil-DLys; K este selectat dintre NmeArg, Arg;

K este ales dintre NMeArg, Arg;

L este selectat dintre Gly, β-Ala, Ala;

M este selectat dintre Asp; aMeAsp; βΜβΑερ; D-Asp.

(64) Un alt compus radiomarcat este compusul conform (51), care are formula generală II sau o sare a acestuia acceptabilă farmaceutic, în care:

R¹ și R² sunt independent selectați dintre H, metil;

J este selectat dintre: D-Val, acidul D-2-aminobutiric, D-Leu, D-Ala, Gly, D-Pro, D-Ser,

D-LYs, β-Ala, Pro, Phe, NMeGly, D-NIe, D-Phg, D-lle, D-Phe, D-Tyr, Ala; K este selectat din NMeArg;

L este Gly;

RO 114895 Bl

M este selectat dintre: Asp, aMeAsp, pMeAsp, NMeAsp; D-Asp; 1995 (65) sau compusul (51) care este reprezentat de:

compusul radiomarcat cu formula generală II, în care R¹ și R² sunt H; J este D-Val;

K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este acidul D-2aminobutiric; K este NMeArg: L este Gly și M este Asp: 2OOO compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² este H; J este D-Leu; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este D-Ala, K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este Gly; K este 2005 NMeArg; L este Gly și M este Asp;

? compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este D-Pro; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este D-Lys; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp; 2010 compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este β-Ala, K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este NMeGly;

K este NMeArg; L este Gly și M este Asp; compus radiomarcat cu formula generală

II în care R¹ este metil (izomerul 1); R² sunt H; J este D-Val; K este NMeArg; L este 2015

Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ este metil (izomerul 2); R² este H; J este D-Val; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compusul radiomarcat cu formula generală II în care R¹ este fenil (izomerul 1); R² este H; J este D-VAI; K este NMeArg; L este Gly; și M este Asp; 2020 compus radiomarcat cu formula generală II în care J este D-Met, K este NMeArg, L este Gly, M este Asp, R¹ este H, R² este H;

compus radiomarcat cu formula generală II în care J=D-Abu, K = diNMe-guanidinil-Orn,

L=Gly, M=Asp, R¹ este H, R² este H;

compus radiomarcat cu formula generală II în care J este D-Abu, K este diNMe-Lys, 2025 L este Gly, M este Asp, R¹ și R² sunt H; .

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este Nf-paraazidobenzoil-D-Lysina; K este NMeArg, L este Gly și M este Asp; compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este Ν^ζ-ρbenzoilbenzoil-D-Lysină; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp; 2030 compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este Ν^ξtriptofanil-D-Lysină; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp; compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este Ν^ξ-οbenzilbenzoil-D-Lysină; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp.

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este Ν^ξ-ρ- 2035 acetilbenzoil-D-Lysină; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp; compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este Nkfansyl-DLysină; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este N⁵-glycil-DLysină; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp; 2040 compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este N^e-g!icilpara-benzoilbenzoil-D-Lysină; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este Ν^ξ-ρRO 114895 Bl fenilbenzoil-D-Lysină; K este NMeArg; L este Gly; și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este N^c-mbenzoilbenzoil-D-Lysină; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt Η; K este MMeArg; J este N'khbenzoilbenzoil-D-Lysină; L este Gly și M este Asp; compus radiomarcat cu formula generală III în care R¹ și R² sunt H; J este D-Val; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este D-Val; K este D-NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este D-NIe; K este NMeArg; L este Gly; și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este D-Phg; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este D-Phe; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală V în care R¹ și R² sunt H; J este D-lle; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

/

J \

o=c.

NR (CHR²²)„CHR // (V) compus radiomarcat cu formula generală V în care n = 1, R¹, R² și R²² sunt H; J este D-Val; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală VI în care n” = O, R¹ și R² sunt H; J este DVal; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

(VI) compus radiomarcat cu formula generală VI în care R¹ și R²² sunt H; J este D-Val; K

RO 114895 Bl

2095 este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

2100 î 2105 compus radiomarcat cu formula generală VII în care R¹, R² și R¹⁰ sunt H; R^1Oa este Cl; J este D-Val; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus cu formula generală VII, radiomarcat, în care R¹, R² și R¹° sunt H; R^1Oa este I; J este D-Val; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală VII în care R¹, R² și R¹⁰ sunt H; R^10a este 2110 I; J este D-Abu; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală VII în care R¹, R² și R¹⁰ sunt H; R^10a este Me; J este D-Val; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală VII în care R¹, R² și R^10a sunt H; R¹° este Cl; J este D-Val; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp; 2115 compus radiomarcat cu formula generală VII în care R¹, R² și R^10a sunt H; R¹° este MeO; J este D-Val; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală VII în care R¹, R² și R^10a sunt H; R¹⁰ este Me; J este D-Val; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală VII în care R¹, R² și R¹⁰ sunt H; R^1Oa este 2120 CI; J este D-Abu; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală VII în care R¹, R² și R¹⁰ sunt H; R^1Oa este I; J este D-Abu; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală VII în care R¹, R² și R¹° sunt H; R^1Oa este Me; J este D-Abu; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp; 2125 compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este D-Tyr; K este NMeArg; L este Gly; și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este D-Val; K este NMeAmf; L este Gly; și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este D-Val; K 2130 este NMeArg; L este Gly; și M este ȘMeAsp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ este H; R² este CH₃; J este DVal; K este NMeArg; L este Gly; și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală III în care R¹ și R² sunt H; J este D-Val; K este NMeArg; L este Gly; și M este Asp; 2135 compus radiomarcat cu formula generală VIII în care J este D-Val; K este NMeArg;

L este Gly și M este Asp;

RO 114895 Bl

2140

2145

215(p

2155

2160

2165

2170

2175

2180

(66) Un alt compus radiomarcat conform (51)...(65) este compusul în care radiomarcarea este selectată dintr-o grupă ¹³F, ¹¹C, ¹²³l, ¹²⁵l, (67) sau compusul conform (66) în care radiomarcarea este o grupă ¹²³l.

(68) Compusul radiofarmaceutic conform (51)...(67) se utilizează la determinarea depozitului plachetar la un mamifer sau la (69) diagnoza tulburărilor asociate cu depozitul plachetar la mamifer ca atare, (70) sau sub formă de compoziție farmaceutică constituită dintr-un vehicul acceptabil radiofarmaceutic și o cantitate eficientă de compus radiomarcat având caracteristicile arătate la 51 ...67.

Invenția prezintă avantaje prin obținerea de derivați noi cu proprietăți superioare pentru vizualizarea neinvazivă la diagnosticul tulburărilor tromboembolice.

Compușii radiomarcați, conform invenției, pot fi preparați utilizând procedee standard de radiomarcare, cunoscute bine în domeniul de specialitate. Metodologia de sinteză în detaliu, este descrisă în continuare. Așa cum se va discuta mai departe, compușii ciclici ai plachetei glicoproteice ll_b/ll_a, conform prezentei invenții, pot fi radiomarcați fie direct (adică prin încorporarea directă a radiomarkerului în compuși) fie indirect (adică prin încorporarea radiomarkerului într-un agent de chelatare, acest agent de chelatare fiind încorporat în acești compuși). Așadar, radiomarcarea poate fi izotopică sau neizotopică. In cazul radiomarcării izotopice, o grupă care este deja prezentă în compușii ciclici descriși mai sus, este substituită cu (sau schimbată cu) radioizotopul. In cazul radiomarcării neizotopice, radioizotopul este adăugat la compușii ciclici fără substituire (sau schimbare) într-o grupare care există deja. Compușii radiomarcați direct sau indirect ca și compușii radiomarcați izotopic și neiozotopic, sunt incluși în fraza “compuși radiomarcați” așa cum se utilizează în legătură cu prezenta invenție. Astfel de radiomarcare va fi așadar rezonabil de stabilă, atât chimic cât și metabolic, aceste aplicații standard fiind recunoscute în literatura de specialitate. Așadar, compușii conform prezentei invenții pot fi marcați într-o varietate de moduri, cu diferiți radioizotopi, așa cum este recunoscut în literatura de specialitate, aceste radiomarcări putând fi efectuate într-o astfel de manieră, încât afinitatea de legare superioară și specificitatea compușilor ciclici nemarcați ai plachetelor GP ll_b/lll_a, conform prezentei invenții, față de receptorul GP lll_b/lll_a, să nu fie semnificativ afectată. Prin expresia nesemnificativ afectată, se înțelege că afinitatea de legare și speci2185

RO 114895 Bl ficitatea nu sunt afectate mai mult decât aproximativ 3 unități log, de preferință nu mai mult decât aproximativ 2 unități log, mult mai preferat nu mai mult decât aproximativ 1 unitate log, chiar mult mai preferat nu mai mult decât aproxiamtiv 500% și de asemenea chiar și mai preferat nu mai mult decât aproxiamtiv 250%. Cel mai 2190 preferabil afinitatea de legare și specificitatea nu sunt deloc afectate.

Pentru compușii radiomarcați, marcarea poate să apară în orice poziție pe Q. Compușii radiomarcați preferați, conform prezentei invenții, sunt compușii radiomarcați în care radiomarcarea este localizată pe sistemul ciclic carbociclic al R³¹, substituientul R⁵ pe J și la R¹ sau R²². Chiar compușii radiomarcați mult mai preferați, 2195 conform prezentei invenții, sunt cei cu formula (II), în care radiomarcarea este localizată în sistemul ciclic carbociclic al R³¹ sau substituientul R⁵ pe J. Cu privire la compușii radiomarcați direct, preferați și mult mai preferați, radiomarcarea preferată este | cea cu marcare cu halogen, în special radiomarcarea cu iod. Pentru compușii radiomarcați indirect, nuclidele metalice preferate sunt ^99mTc și ¹¹¹ln. Grupările de legătură 2200 preferate, Ι_„ și chelatorii metalici, C_h, sunt descriși în continuare.

S-a descoperit că, compușii radiomarcați, conform prezentei invenții, sunt utilizabili ca produse radiofarmaceutice pentru vizualizarea neinvazivă la diagnosticul tulburărilor tromboembolice prezente sau potențiale, cum ar fi de exemplu tromboza arterială sau venoasă, incluzând de exemplu, angina nestabilă, infarctul miocardic, atacul 2205 ischemic trecător, palpitațiile, ateroscleroza, diabetul, tromboflebita, embolia pulmonară sau aglomerările de plachete, trombii sau embolii sau produși din cauza unor dispozitive protetice cardiace, cum ar fi de exemplu valvele pentru cord. Compușii radiomarcați, conform prezentei invenții, se folosesc atât pentru trombii recent formați, cât și pentru trombii mai vechi. Compușii radiomarcați, conform prezentei 2210 invenții sau condițiile potențiale în care există o supraexprimare a receptorilor GP ll_b/lll_a, cum ar fi de exemplu celulele canceroase metastatice. Compușii conform prezentei invenții pot fi utilizați efectiv în doze mici, pentru aceasta minimalizându-se orice risc de toxicitate. Așadar, compușii, conform prezentei invenții, sunt de dimensiuni mult mai mici față de, exemplu, anticorpii radiomarcați 7E3 cunoscuți în domeniul de 2215 specialitate, permițându-se astfel ușor atingerea unui raport convenabil între țintă și suport (T/B) pentru detectarea trombilor. Utilizarea compușilor radiomarcați, conform prezentei invenții, este descrisă în continuare.

In cadrul prezentei invenții, s-a constatat de asemenea că, compușii radiomarcați, menționați mai sus, sunt utilizați ca inhibitori de glicoproteine ll_b/ll_a (GP Ιζ/ΙΙζ) 2220 și astfel compușii radiomarcați, conform prezentei invenții, pot fi de asemenea utilizați pentru scopuri terapeutice, în adiție la utilizarea în diagnostic descrisă mai sus. Așa cum s-a discutat mai sus GP ll_b/lll_a, mediază procesul de activare al plachetelor și procesul lor de agregare. Compușii radiomarcați, conform prezentei invenții, inhibă activarea și agregarea plachetelor induse de agoniștii endogeni cunoscuți, ai plache- 2225 telor.

Compușii descriși aici pot avea centre asimetrice. Numai dacă este indicat altfel, toate formele chiralice, diastereometrice și racemice sunt incluse în prezenta invenție. Mulți izomeri geometrici ai olefinelor, dublele legături C=N și altele asemănătoare. pot fi prezenți în compușii astfel descriși și toți acești izomeri stabili sunt des- 2230 criși în prezenta invenție. Se va aprecia că, compușii conform prezentei invenții conțin atomi de carbon substituiți asimetric și pot astfel fi izolați ca forme optic active sau forme racemice. Se cunoaște în literatura de specialitate, modul de preparare a formelor optice active, cum ar fi de exemplu rezoluția formelor racemice sau sinteza, plecând de la materiale primare optic active. Doi izomeri distincți (cis și trans] ai legă- 2235

RO 114895 Bl turii peptidice sunt cunoscuți a fi produși, ambii putând astfel fi prezenți în compușii descriși aici și toți acești izomeri stabili sunt descriși în prezenta invenție. Numai dacă nu este specificat altfel, L-izomerul unui aminoacid este utilizat în pozițiile <J, K, L și M ale compușilor conform invenției. Exceptând așa cum s-a prevăzut în precedentele paragrafe, toate formele chiralice, diastereomerice și racemice și toate formele izomerice geometrice cu structura prevăzută, numai stereochimia specifică sau forma izomerică este specific indicată. Izomerii D și L ai unui aminoacid special sunt desemnați aici, utilizând abrevierea convențională cu 3 litere a acestui aminoacid, așa cum s-a indicat prin exemplele următoare: D-Leu, D-Leu, L-Leu sau L-Leu.

Când orice variabilă (de exemplu R¹ până la R⁸, m, η, ρ, X, Y etc.) se produce mai mult decât odată în orice constituient sau în orice formulă, definiția acesteia de fiecare dată este indepedentă de definiția acesteia de fiecare altă dată.

Astfel, de exemplu, dacă o grupă este prezentată a fi substituită cu 0...2 R¹¹, atunci această grupare poate fi opțional substituită cu peste două grupări R¹¹ și R¹¹ la fiecare ocurență, fiind selectată independent din lista definită pentru posibile grupări R¹¹. Așadar, de exemplu pentru gruparea -N(R¹³)₂ fiecare din cei doi substituienți R¹³ pe N, aceasta este selectată independent din lista definită pentru posibile grupări R¹³.

Când o legătură la un substituient este prezentată încrucișată, conexiunile de legătură la doi atomi în ciclu, atunci un astfel de substituient poate fi legat la orice atom din ciclu. Combinațiile de substituienți și/sau variabile sunt permisibile numai dacă astfel de combinații au ca rezultat compuși stabili. Prin “compus stabil” sau “structură stabilă” se înțelege un compus care este suficient de rezistent pentru a supraviețui la un grad util de puritate din reacția în amestec și care poate fi formulat ca un agent terapeutic eficient.

Termenul de “substituit” utilizat aici reprezintă unul sau mai mulți atomi de hidrogen pe atomul desemnat, care este înlocuit printr-o grupă indicată, cu condiția ca valențele normale ale atomilor desemnați să nu fie depășite și ca substituirea să aibă ca rezultat un compus stabil. Când un substituient este ceto (de exemplu = O), atunci se înlocuiesc doi atomi de hidrogen, de pe acel atom.

Așa cum se utilizează în această descriere “alchil este o grupă care include atât grupa de hidrocarburi alifatice cu catene saturate lineare, cât și ramificate, având specificat numărul de atomi de carbon, “haloalchil” este o grupă care include atât grupe de hidrocarburi alifatice cu catene saturate liniare, cât și ramificate, având specificat de atomi de carbon, substituiți cu unul sau mai mulți atomi de halogen [de exemplu -C_vF_wîn care v= 1 până la 3 și w = 1 până la (2v+1)].

Grupa alcoxi” reprezintă o grupă alchil cu un număr indicat de atomi de carbon, legați printr-o punte de oxigen, grupa “cicloalchil” reprezintă grupe ciclice saturate, incluzând sisteme ciclice monociclice, biciclice sau policiclice, cum ar fi de exemplu ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil, ciclohexil, cicloheptil, ciclooctil și adamantil și grupa “bicicloalchil” reprezintă grupe ciclice biciclice saturate, cum ar fi de exemplu [3,3,0] biciclooctan, [4,3,0] biciclononan, [4,4,0] biciclodecan [decalin], [2,2,2,]biciclooctan și altele. Grupa “alchenil” reprezintă o grupă care include catene de hidrocarburi cu configurație liniară sau ramificată și una sau mai multe legături carbon - carbon nesaturat, care se pot produce în orice punct stabil de-a lungul catenei, cum ar fi de exemplu etenil, propenil și altele și grupa alchinil” include catenele de hidrocarburi cu configurație liniară sau ramificată și una sau mai multe legături triple carbon - carbon, care se produce în orice punct stabil, de-a lungul catenei, cum ar fi de exemplu etinil, propinil și altele.

Expresia “acid boric” utilizată în această descriere reprezintă o grupă cu forRO 114895 Bl mula -B (R³⁴)(R³⁵), în care R³⁴ și R³⁵ sunt independent selectați dintre: -OH, -F, - 2285 NR¹³R¹⁴ sau Ο,-Οθ alcoxi sau Ff³⁴ și R³⁵ pot fi luați alternativ împreună pentru a forma: un ester ciclic de bor în care catena sau ciclul conțin de la 2 la 20 atomi de carbon și opțional, 1 ...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O, o amidă ciclică de bor bivalent în care catena sau ciclul conțin de la 2 la 20 atomi de carbon și opțional, 1 ...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O, un ester amidă 2290 ciclică de bor în care catena sau ciclul conțin de la 2 la 20 atomi de carbon și opțional, 1...4 heteroatomi independent selectați din N, S sau O. Astfel de esteri ciclici de bor, amide de bor sau esteri - amide de bor, pot fi substituiți opțional cu

1...5 grupe independent selectate dintre R¹¹.

Esterii de bor includ jumătăți derivate din dioli, de exemplu pinandiol și pinacol, 2295 pentru a forma acidul pinandiol boric și acidul pinacol boric respectiv. Alți dioli utilizați pentru esterii acidului boric derivați sunt perfluor pinacolul, etilen glicolul, dietilenglicol,

1.2- etandiolul, 1,3-propandiolul, 1,2-propandiolul, 1,2-butandiolul, 1,4-hexandiolul, catecholul, 1,2-diizopropiletan diolul, 5,6-decandiolul, 1,2-diciclohexiletandiolul.

“Halo” sau “halogen” utilizat în prezenta invenție se referă la fior, clor, brom și 2300 iod și “counterion” utilizat aici reprezintă specii mici încărcate negativ, cum ar fi de exemplu clorură, bromura, hidroxidul, acetatul, sulfatul și altele.

Așa cum se utilizează în prezența invenției, arii” sau “rest aromatic” reprezintă fenil sau naftil. “Carbociclu” sau “restul carbociclic” reprezintă orice monociclu sau biciclu cu 3...7 membri, stabil, sau orice biciclu sau triciclu stabil, cu 14 membri sau 2305 orice ciclu carbonic policiclic cu peste 26 membri, din care oricare poate fi saturat, parțial saturat sau aromatic. Exemplele includ carbocicluri, fără a se limita la: ciclopropil, ciclopentil, ciclohexil, fenil, difenil, anaftil, indanil, adamantil sau tetrahidronaftil (tetralina).

Așa cum este utilizat în prezenta invenție, termenul de “heterociclu” sau 2310 “sistemul ciclic heterociclic” reprezintă un ciclu heterociclic monocilic stabil, cu 5 până la 7 membri sau un ciclu heterociclic biciclic stabil, cu 7 până la 10 membri, care poate fi saturat, parțial saturat sau aromatic și care constă din atomi de carbon și de la 1 la 4 heteroatomi selectați independent dintr-o grupă care constă din N, O și S și în care nitrogenul și sulful ca heteroatomi pot fi opțional oxidați și acest nitrogen poate 2315 fi opțional cuaternizat și includ orice grupă biciclică în care orice ciclu heterociclu definit mai sus este condensat cu un ciclu benzenic. Ciclul heterociclic poate fi atașat la grupa pendantă la orice heteroatom sau atom de carbon care rezultă cu o structură stabilă.

Ciclurile heterociclice descrise în prezenta invenție pot fi substituite pe atomul 2320 de carbon sau pe atomul de azot dacă compusul care rezultă este stabil. Exemplele de astfel de heterocicluri includ, fără a se limita la acestea, benzopiranul, tiadiazina, tetrazolul, benzofuranul, benzotiofenilul, indolenul, chinolina, izochinolinil sau benzimidazolil, piperidinil, 4-piperidona, 2-pirolidona, tetrahidrofuranul, tetrahidrochinolina, tetrahidroizochinolina, decahidrochinolina, octahidroizochinolina, azocina, 2325 triazina (incluzând 1,2,3-, 1,2,4- și 1,3,5-triazina), 6H-1,2,5-triadiazina, 2H, 6H 1.5.2- ditiazina, tiofenul, tetrahidro-tiofenul, tiantrenul, furanul, piranul, izobenzofuranul, cromena, xantena, fenoxantin, 2H-pirol, pirol, imidazol, pirazol, tiazol, izotiazol, oxazol (incluzind 1,2,4-și 1,3,4-oxazolul), izoxazolul, triazolul, piridina, pirazina, pirimidina, piridazina, indolizina, izoindolul, 3H-indolul,indolul, 1H-indazolul, purina, 4H-chinolizina, 2330 izochinolina, chinolina, ftalazina, naftiridina, chinoxalina, chinazolina, cinolina, pteridina, 4aH-carbazolul, carbazolul, beta-carbolina, fenantridina, acridina, perimidina, fenantrolina, fenazina, fenarsazina, fenotiazina, furazanul, fenoxazina, izocromanul, cromaRO 114895 Bl nul, pirolidina, pirolina, imidazoilidina, imidazolina, pirazolidina, pirazolina, piperazina, indolina, izoindolina, chinuclidina sau morfolina. Se mai includ de asemenea cicluri condensate și spirocompuși care conțin de exemplu heterociclurile de mai sus.

Așa cum este utilizat în prezenta invenție termenul “orice grupă care atunci când este administrată la un subiect mamifer, se descompune pentru a forma un hidroxil liber, amino sau sulfhidrir, reprezintă orice grupă legată la O, N sau un atom de S respectiv, care este rupt de la O, N sau atomul de S, când compusul este administrat la un subiect mamifer, pentru a se obține compusul având o grupă liberă hidroxil, care rămâne o grupă amino sau respectiv grupă sulfhidril. Exemple de aceste grupe, care, când se administrează la subiecți mamifere, sunt descompuse pentru a forma grupe libere hidroxilice,amino sau sulfhidril, incluzând fără a se limita la acestea, (C.,-C₆) alchil substituit cu O...3 R¹¹, (C^C Jalcoxialchil substituit cu O...3 R ¹,¹ (C CeJalchilcarbonil substituit cu O...3 R¹¹, (C.,-C₆) alcoxicarbonil substituit cu O...3 R¹¹, C-,-Οθ alchilaminocarbonil substituit cu O...3 R¹¹, benzoil substituit cu O...3 R¹², fenoxicarbonil substituit cu O...3 R¹², fenilaminocarbonil substituit cu O...3 R¹². Exemplele de grupe care, atunci când sunt administrate la un subiect mamifer, sunt descompuse pentru a forma hidroxil liber, amino sau sulfhidril, includ hidroxi, amino sau grupe de protecție respectiv sulfhidrilice.

Așa cum se utilizează în prezenta invenție, termenul de “grupă de protecție amino” reprezintă orice grupă cunoscută în domeniu pentru protecția grupelor amino, în sinteza organică. Astfel de grupe amino de protecție includ pe cele menționate de Greene, Proiective Groups in Organic Synthesis, Jonh Wiley & Sons, New York (1981) și The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, voi. 3, Academic Press, New York (1981) descriere încorporată aici prin referință. Orice grupe amino de protecție cunoscute în domeniu, se pot utiliza.

Exemple de grupe amino de protecție includ, fără a se limita la acestea, 1) acil, ca formil, trifluoracetil, ftalil și p-toluensulfonil, 2) tipuri de carbamați aromatici ca de exemplu benziloxicarbonil (CbZ sau Z) și benziloxicarbonilii substituiți, 1(p-difenil)-1metiletoxicarbonil și 9-fluorenil-metiloxicarbonil (Fmoc), 3) tiputi de carbamați alifatici ca de exemplu terțiarbutiloxicarbonil (Boc), etoxicarbonil, diizopropilmetoxicarbonil și aliloxicarbonil, 4) tipuri de carbamați alchil ciclici ca de exemplu ciclopentiloxicarbonil și adamantiloxicarbonil, 5) tipuri de alchil ca de exemplu trifenilmetil și benzii, 6) trialchilsilan ca de exemplu trimetilsilan și 7) tipuri conținând tiol ca de exemplu feniltiocarbonil și ditiasuccinoil. Se mai includ în termenul “grupă de protecție amino” acele grupe acil ca de exemplu azidobenzoil, para-benzoilbenzoil, obenzoilbenzoil, paraacetilbenzoil, densil, glicil-para-benzoilbenzoil, feniîbenzoil, metabenzoilbenzoil, benzoilbenzoil.

Așa cum se utilizează în prezenta invenție, termenul de “săruri acceptabile farmaceutic” se referă la derivații compușilor cu formula (I) care se modifică prin obținerea de săruri acide sau bazice ale compusului cu formula (I). Exemple de săruri acceptabile farmaceutic includ, fără a se limita la acestea, sărurile acizilor minerali sau organici ale resturilor bazice, cum sunt aminele, sărurile alcaline sau organice ale resturilor acide cum sunt acizii carboxilici și alții.

Sărurile acceptabile farmaceutic ale compușilor, conform invenției, pot fi preparate prin reacția dintre un acid liber sau forme de baze ale acestor compuși cu o cantitate stoechiometrică dintr-o bază sau un acid corespunzător în apă sau într-un solvent organic sau un amestec de două, în general medii neapoase, cum este eterul, acetatul de etil, etanolul, izopropanolul sau acetonitrilul, care sunt preferați. Astfel de săruri convenabile sunt prezentate în Pemington’s Pharmaceutical Sciences, ediția 17,

RO 114895 Bl

Mack Publishing Company Easton, PA, 1985, pag. 1418, a cărei descriere este încorporată prin referință.

Termenul de “aminoacid utilizat, reprezintă un compus organic care conține 2385 atât grupa amino bazică, cât și grupa carboxil acidă. Incluși în acest termen sunt acizii amino neuzuali și modificați, cum sunt cei care sunt descriși de exemplu de Roberts and Vellaccio (1983), The Peptides, 5:342...429, care sunt cuprinse prin referințe. Aminoacizii neuzuali sau modificați care pot fi utilizați în practica prezentei invenții, includ, dar fără a se limita la aceștia: D-aminoacizi, hidroxilisina, 4-hidroxiprolina, 2390 ornitina, acidul 2,4-diaminobutiric, homoarginina, norleucina, acidul N-metilaminobutiric, naftilalanina, fenilglicina, beta-fenilprolina, terțiarleucina, 4-amino ciclohexilalanina, N-metil-norleucina, 3,4-dehidroprolina, acidul 4-aminopiperidin-4-carboxilic, acidul 6-aminocaproic, acidul trans-4-(aminoetil]-ciclohexancarboxilic, acidul 2-, 3- și p 4-(aminometil]benzoic, acidul 1-aminociclopropancarboxilic și acidul 2-benzil-5-amino- 2395 pentanoic.

Termenul “rest aminoacid” utilizat, reprezintă faptul că, porțiunea de aminoacid (așa cum este definită aici] este prezentă în peptidă.

Termenul de “peptidă” utilizat, reprezintă un compus liniar care constă din doi sau mai mulți aminoacizi (așa cum este definit aici) care sunt legați printr-o legătură 2400 peptidică.

Termenul de “peptidă” inclus, reprezintă compușii care conțin componente peptidice cât și componente nepeptidice, ca de exemplu pseudopeptide sau reziduuri mimetice peptidice sau alte componente neaminoacide. Astfel de compuși conțin atât componente peptidice cât și componente nepeptidice, care se pot referi de asemenea 2405 la “analogi de peptide”.

O “pseudopeptidă” sau “peptidă mimetică” este un compus care mimează structura unui rest de aminoacizi sau peptide, de exemplu, prin utilizarea unor grupe de legătură, diferite de legăturile amidice între peptidă mimetică și restul de aminoacid (legături de pseudopeptide) și/sau prin utilizarea de substituienți neaminoacizi și/sau 2410 un reziduu de acid amino modificat.

Un “reziduu de pseudopeptidă” înseamnă porțiunea unei pseudopeptide sau peptide mimetice (așa cum se definește aici), care este prezentă în peptidă.

Termenul de “legătură peptidică” reprezintă c legătură amidică covalentă formată prin pierderea unei molecule de apă la grupa carboxil a unui aminoacid și grupa 2415 amino a celui de al doilea aminoacid.

Termenul de “legătură pseudopeptidică” include izosteri ai legăturii peptidice care pot fi utilizați în loc sau ca substituenți ai unei legături amidice normale. Aceste substituiri sau legături amidice “echivalente” sunt formate din combinațiile de atomi care nu se găsesc în mod normal în peptide sau proteine care mimează cerințele unei 2420 legături amidice spațiale și care ar stabiliza molecula în cazul degradării enzimatice.

Termenii “L/, “grupă de legătură” și linker” utilizați peste tot neschimbați, desemnează grupa de atomi care separă Q de metalul chelator C_h.

Termenii “grupă activată L/ și linkerul activat”, utilizați neschimbați pretutindeni, se referă la o grupă de legătură care poartă una sau mai multe grupe reactive capa- 2425 bile de reacția cu, și formarea unei legături cu, un chelator sau Q.

Termenii “C_h”, “metal chelator” și “chelator” utilizați peste tot neschimbați, desemnează o jumătate chimică capabilă de a se lega la sau complexa cu o nuclidă metalică.

Termenul “jumătate de ciclizare” reprezintă compusul intermediar care servește 2430 ca precursor la grupa R³¹ a grupei Q.

RO 114895 Bl

Termenul jumătate de ciclizare substituită în ciclu” este o jumătate de ciclizare care poartă o grupă de substituție din una sau mai multe din ciclurile carbociclice sau heterociclice.

Termenul “jumătate de ciclizare la linkerul modificat” se referă la o jumătate de ciclizare care poartă o grupă L„ activată.

Termenul de “compus intermediar ciclic” se referă la compusul intermediar care servește ca precursor la grupa Q la compușii revendicați.

Termenul “compus intermediar ciclic la linkerul modificat” reprezintă un compus ciclic intermediar care poartă o grupă L_n activată.

Compușii prezentei invenții pot fi preparați prin mai multe căi cunoscute în domeniul de specialitate al sintezei organice.

Metodele preferate inlcud, fără a se limita la acestea, metodele descrise în continuare.

Se utilizează aici, următoarele abrevieri:

Acm D-Abu 5-Aca b-Ala, b-Ala sau bAla Boc

Boc-iodo-Mamb Boc-Mamb BocON CI₂Bzl

CBz, Cbz sau z DCC DIEA di-NMeOrn DMAP HBTU

NMeArg sau MeArg NMeAmf NMeAsp NMeGly sau MeGly NMe-Mamb NMM OcHex OBzI oSu pNP TBTU

Teoc Tos Tr

Se utilizează următoarele abrevieri convenționale de aminoacizi cu trei litere, acetamidometil acid D-2-aminobutiric 5-aminocaproamida (5-aminohexanamida) acid 3-aminopropionic t-butiloxicarbonil acid t-butiloxicarbonil-3-aminometil 4-iodobenzoic acid t-butiloxicarbonil-3-aminometil benzoic (2-(terțiar-butiloxicarboniloxilimino)-2-fenilacetonitril diclorbenzil carbobenziloxi diciclohexilcarbodiimida diizopropiletilamina

N-aMe-N-gMe-ornitina

4-dimetilaminopiridina

2(1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametil-uronium hexafluorofosfat a-N-metil arginina N-Metilaminometilfenilalanina acidul a-N-metil aspartic

N-metil glicina acid N-metil-3-aminometilbenzoic

N-metilmorfolina

O-ciclohexil

O-benzil

O-succinimidil paranitrofenil

2(1 H-benzotriazol-1-il)-1 ,1,3,3-tetrametil-uronium tetrafluoroborat

2-(trimetilsilil)etiloxicarbonil

Tosil

Tritil

RO 114895 Bl

2485

abrevierile convenționale de aminoacizi cu o literă nu sunt utilizate în prezenta invenție.
Ala	=	alanina
Arg	=	arginină
Asn	=	asparagină
Asp	=	acid aspartic
Cys	=	cisteină
Gin	=	glutamină
Glu	=	acid glutamic
Gly	=	glicină
His	=	histidină
lle	=	izoleucină
Leu	=	leucină
Lys	=	lizină
Met	=	metionină
Nle	=	norleucină
Phe	=	fenilalanină
Phg	=	fenilglicină
Pro	=	prolină
Ser	=	serină
Thr	=	treonină
Trp	=	triptofan
Tyr	=	tirozină
Val	=	valină

2490

2495

2500

Compușii prezentei invenții pot fi sintetizați utilizând metode standard sintetice, cunoscute în domeniul de specialitate. Metodele preferate includ, fără a se limita la 2505 acestea, metodele descrise în continuare.

In general, peptidele sunt elongate prin deprotejarea aminei din reziduul C-terminal și cuplarea următorului aminoacid de protecție convenabil prin legare peptidică, utilizând metodele descrise. Această deprotejare și procedeul de cuplare este repetată până ce se obține secvența dorită. Acestă cuplare poate fi obținută cu aminoacizi 2510 constituienți într-un mod treptat sau condensarea fragmentelor (două până la mai multe grupări de aminoacizi) sau combinarea ambelor procedee sau prin sinteză peptidică în fază solidă, conform metodei originale, descrise de Merrifield, LAm.Chem.Soc.

85, 2149...2154, (1963) descriere care este încorporată aici prin referință.

Compușii, conform prezentei invenții, pot fi așadar sintetizați, utilizând un echi- 2515 pament automat de sintetizare a peptidelor.

In completarea procedeelor menționate, aceste procedee pentru sintetizarea peptidelor sunt descrise de Stewart and Young în Solid Phase Peptide Synthesis, 2 nd ed, Pierce Chemical Co., Rockford, IL (1984), Gross, Mainhofer, Undenfriend Eds,

The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, voi. 1,2, 3, 5 și 9, Academic Press, New 2520 York (1980...1987), Bodanszky, Peptide Chemistry: A Practicai Textbook, Springer Verlag, New York (1988) and Bodanszky et al., The Practice of peptide Synthesis, Springer-Verlag, New York (1984), descrierile fiind încorporate prin referințe.

Cuplarea între derivații a doi aminoacizi, un aminoacid și o peptidă, două fragmente peptidice sau ciclizarea unei peptide, se poate efectua utilizând procedee de 2525 cuplare standard, cum ar fi de exemplu metoda azidei, în amestec cu anhidrida acidului carbonic (cloroformiatul de izobutil), metoda carbodiimidei (diciclohexilcarbodiimida, diizopropilcarbodiimida, sau carbodiimidele solubile în apă), metoda esterului activ (para-nitrofenil esterul, N-hidroxisuccinic imido esterul), metoda Woodward

RO 114895 Bl reactiv K, metoda carbonildiimidazolului, metoda reactivilor de fosfor ca de exemplu

ΒΟΡ-CI sau metoda oxidare-reducere. Unele dintre aceste metode, în special metoda carbodiimidei poate fi potențată prin adiție de 1-hidroxibenzotriazol. Aceste reacții de cuplare pot fi efectuate fie în soluție (fază lichidă), fie ca fază solidă.

Grupele funcționale ale aminoacizilor constituienți pot fi protejate în timpul reacțiilor de cuplare, pentru a nu se obține legături nedorite, care pot fi astfel formate. Grupele de protecție care pot fi utilizate, sunt prezentate în Greene Proiective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York (1981) și The Peptides: Analysis Synthesis Biology, voi. 3 Academic Press, New York (1981), descriere care este încorporată prin referință.

Grupa a - carboxil a unui reziduu C - terminal, este de obicei protejată printr-un ester care poate fi desfăcut pentru a se obține acidul carboxilic. Aceste grupe de protecție includ: 1) esteri alchilici ca de exemplu metil și t-butil, 2) arii esteri cum sunt benzii și benzii substituit sau 3) esterii care pot fi descompuși printr-un tratament de bază ușor sau prin mijloace de reducere lente, cum ar fi tricloretil esterul și fenacil esterul. In cazul fazei solide, aminoacidul C-terminal este legat de un suport insolubil (de obicei polistirenul). Aceste suporturi solide conțin o grupă care reacționează cu grupa carboxil pentru a forma o legătură care este stabilă în condiții de elongație, dar se descompune real, mai târziu. Exemple din care sunt: oximrășină (De Grado and Kaiser (1980), J. Org. Chem. 45, 1295-1300) rășina de clor sau brommetil, rășina hidroximetilică și rășina aminometilică. Multe dintre aceste rășini sunt comercial disponibile, având aminoacidul C-terminal deja încorporat.

Gruparea a - amino din fiecare grupă amino trebuie să fie protejată. Orice grupă de protecție cunoscută în domeniu, poate fi utilizată. Exemple din acestea sunt următoarele:

1) tipurile acil ca, formil, trifluoracetil, ftalil și para-toluensulfonil, 2) tipuri carbamat aromatic ca, benziloxicarbonil (Cbz) și benziloxicarbonilii substituiți, 1(paradifenil)-1-metiletoxicarbonil și 9-fluorenilmetiloxi- carbonil (Fmoc), 3) tipuri de carbamați alifatici ca terțiar butiloxicarbonil (Boc), etoxicarbonil, diizopropilmetoxi carbonil și aliloxicarbonil, 4) tipuri de carbamați alchil ciclici cum este ciclopentiloxicarbonil și adamatiloxicarbonil, 5) tipuri de alchil cum sunt trifenilmetilul și benzii, 6) trialchilsilanul cum este trimetilsilan și 7) tipuri de compuși conținând tiol, cum este feniltiocarbonil și ditiasuccinil. Gruparea de protecție preferată a-amino este Boc sau Fmoc. Mulți derivați de aminoacizi convenabili pentru protecția sintezei peptidelor sunt compuși comerciali potriviți.

Grupa de proteine a-amino este este descompusă înainte de cuplarea următorului aminoacid. Când gruparea Boc este utilizată, metodele de alegere sunt acidul trifluoracetic ca atare, sau în diclormetan sau acid clorhidric în dioxan. Sarea de amoniu care rezultă este neutralizată apoi înainte de cuplare sau in situ cu soluții bazice, cum sunt soluțiile apoase tampon sau amine terțiare în diclormetan sau dimetilformamidă. Când se utilizează gruparea Fmoc, reactivii aleși sunt piperidina sau piperidinele substituite în dimetilformamidă, dar se mai pot utiliza orice soluții de amine secundare sau soluții bazice apoase. Deprotejarea este efectuată la o temperatură între 0°C și temperatura camerei.

Oricare dintre aminoacizii care poartă funcționalități ale catenei secundare, trebuie să fie protejați în timpul preparării peptidei, utilizând orice grupe identificate mai sus. Așa cum este apreciat în literatura de specialitate, selecția și utilizarea unor grupe de protecție corespunzătoare pentru aceste funcționalități ale catenei secundare, depind de aminoacid și de prezența altor grupe de protecție în peptidă.

RO 114895 Bl

Selecția unor astfel de grupe de protecție este importantă prin aceea că, nu trebuie să fie îndepărtată în timpul deprotejării și cuplării grupei a-amino, 2580

De exemplu, când Boc este ales pentru a-amino de protecție, sunt acceptabile următoarele grupe de protecție:

Para-toluensulfonil (tosil) jumătăți și nitro pentru arginină, benziloxicarbonil, benziloxicarbonili substituiți, tosil sau trifluoracetil pentru lizină, benzii sau ester alchilici ca ciclopentil pentru acizii glutamic și aspartic, esteri benzilici pentru serină și 2585 treonină, esteri benzilici, esteri benzilici substituiți sau 2-brombenziloxicarbonil pentru tirozină, para-metilbenzil, para-metoxibenzil, acetamidometil, benzii sau t-butilsulfonil pentru cisteină și indolul triptofanului poate fi lăsat neprotejat cu o grupă formil.

Când Fmoc este ales pentru a-amino de protecție uzual, terțiarbutil pe baza grupelor de protecție, acestea sunt acceptabile. De exemplu, Boc poate fi utilizat pen- 2590 lî tru lizină, eterul butii terțiar pentru serină, treonină și tirozină și esterul terțiarbutilic pentru acizii glutamic și aspartic.

Odată ce elongația și ciclizarea peptidei este completă, toate grupele de protecție sunt îndepărtate. Pentru faza de sinteză lichidă, grupele de protecție sunt îndepărtate într-o astfel de manieră, care depinde de alegerea grupelor de protecție. 2595 Aceste procedee sunt bine cunoscute în literatură. Când se utilizează sinteza în fază solidă, peptida trebuie să fie îndepărtată din rășină fără a se îndepărta simultan grupele de protecție din grupele funcționale care ar putea interfera cu procedeul de ciclizare. Astfel, dacă peptida trebuie ciclizată în soluție, condițiile de descompunere sunt necesare a fi alese astfel ca să fie generate un a-carboxilat liber și o grupă a-amino 2600 liberă, fără o îndepărtare simultană a altor grupe de protecție. Alternativ, peptida poate fi îndepărtată din rășină prin hidrazinoliză și apoi se cuplează prin metoda azidei.

O altă metodă foarte convenabilă este sinteza peptidelor pe o rășină oximă, după care are loc dislocuirea nucleofilică intramoleculară din rășină, care generează o peptidă ciclică (Osapay, Profit and Taylorf1990), TetrahedronlettersAC, 6121...6124). Când 2605 oxim rășina este utilizată, schema de protecție Boc este în general aleasă. Apoi, metoda preferată pentru îndepărtarea grupelor de protecție în catena secundară este în general tratamentul cu HF anhidru conținând aditivi ca dimetilsulfura, anisolul, tioanisolul sau para-crezolul la 0°C. Descompunerea peptidei poate fi de asemenea însoțită de alți reactivi acizi cum ar fi acidul trifluormetansulfonic în amestec cu acidul 2610 trifluoracetic.

Aminoacizii uzuali, utilizați în prezenta invenție, pot fi sintetizați prin metode standard familiare cu cele descrise în literatura de specialitate (The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, voi. 5, pag. 342...449, Academic Press New York (1981). Aminoacizii N-alchilici pot fi preparați utilizând procedeele descrise mai sus (Cheung 2615 et al. (1977) Can, J.Chem. 55, 906, Freidinger et al. (1982) J.Org.Chem. 48, 77 (1982), care sunt încorporate prin referință.

Compușii conform prezentei invenții pot fi preparați utilizând procedeele detaliate în continuare. Materialele reprezentative și metodele care sunt utilizate la prepararea compușilor conform prezentei invenții, sunt descrise în continuare. 2620

Sinteza manuală a peptidei, în fază solidă este efectuată în 25 ml de polipropilen în tuburi de filtrare sau în vase de reacție de sticlă de 60 ml pe oră. Oximrășina (nivel de substituție = 0,96 mmoli/g] este preparată conform procedeelor publicate (De Grado și Kaiser (1980), J.Org.Chem. 45, 1295) sau sunt disponibile comercial (nivelul de substituție = 0,62 mmoli/g). Toate substanțele chimice și 2625 solvenții (gradul reactiv] sunt utilizate suplimentar fără o altă purificare. T-butiloxicarbonil aminoacizii și alți aminoacizi ca materii prime, pot fi disponibile comercial.

RO 114895 Bl

Se utilizează 2-{1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametil-amoniu hexafluorofosfat (HBTU) și TBTU care sunt disponibile comercial. N-metilmorfolina (NMM), metacrezolul, acidul D-2-aminobutiric, trimetilacetilclorura, diizopropil-etilamina (DIEA), acidul 3-cianobenzoic și [2-(terțiarbutiloxi-carboniloxiliminoHfenilacetonitril] (Boc-On) sunt disponibile comercial. Dimetilformamida (DMF), acetatul de etil, cloroformul (CHCI₃) metanolul (MeOH), piridină și acidul clorhidric (HCl) sunt disponibile comercial. Acetonitrilul, diclormetanul (DCM), acidul acetic (HOAc), acidul trifluoracetic (TFA), eterul etilic, trietilamina. acetona și sulfatul de magenziu sunt disponibile comercial. Catalizatorul paladiu/cărbune (10% Pd) este disponibil comercial.. Etanolul absolut este disponibil comercial. Cromatografia în strat subțire (TLC) este efectuată pe silicagel 60F 24 plăci TLC (grosimea stratului de 0,2 mm), care este disponibil comercial. Vizualizarea TLC este însoțită de utilizarea luminii ultraviolete, a iodului, spray-ului cu ninhidrină și/sau spray Sakaguchi. Punctele de topire sunt determinate utilizând un aparat pentru determinarea punctului de topire Thomas Hoover sau Electrothermal 9200 și acestea nu sunt corectate. Analizele HPLC sunt realizate pe Hewlett Packard 1090, Waters Delta Prep 3000 Rainin sau Du Pont 8800 sistem. Spectrele RMN sunt înregistrate pe General Electric QE-30Q de 300 Mhz, Varian 300 sau Spectrometrul Varian 400. Spectroscopia de masă cu bombardare rapidă de atomi (FAB-MS) este realizată pe VG Zab-E spectrometru de masă cu focus dublu, utilizând un tub Xenon FAB ca o sursă de ioni sau Finnigan MAT 8230.

Acidul Boc-D-2 aminobutiric (Boc-D-Abu) se prepară prin modificarea procedeelor prezentate în literatura de specialitate (Itoh, Hagiwara and Kamiya (1975), Tett.Lett. 4393), așa cum este arătat în schema de mai jos:

Acidul D-2-aminobutiric

O cantitate de 1,0 g (9,70 mmoli) de acid D-2-aminobutiric este dizolvată în 20 ml de apă si se adaugă soluția de Boc-ON (2,62 g, 10,6 mmpli) în 20 ml de acetonă.

Precipitatul alb astfel format care se dizolvă după adăugare de trietilamină (3,37 ml, 24,2 mmoli) duce la obținerea unei soluții galben pal (pH = 9,1 a hârtiei indicator de pH umectată). Soluția este apoi agitată la temperatura camerei până a doua zi, când acetona este îndepărtată sub presiune redusă. Stratul apos care rămâne, este extras de trei ori cu eter, acidulat la pH = 2 cu acid clorhidric concentrat și apoi extras cu acetat de etil, de trei ori.

Straturile organice combinate, sunt uscate pe sulfat de magneziu anhidru și evaporate sub presiune redusă, când se obțin 2,05 g de produs sub formă de ulei care este acidul butiloxicarbonil-D-2-aminobutiric,(randament mai mare decât cantitativ deoarece conține solvent), produsul fiind utilizat apoi fără o altă purificare.

¹H RMN (CDCI₃) 0,98 (t, 3H), 1,45 (s, 9H), 1,73 (m, 1H), 1,90 (m, 1H),

4,29 (m, 1H), 5,05 (m, 1H).

Sinteza jumătăților de ciclizare R³¹. In această secțiune, este redată sinteza anumitor jumătăți de ciclizare care servesc ca produse intermediare pentru grupele R³¹ în Q. Celelalte secțiuni prezintă sinteza altor jumătăți de cliclizare.

Sinteza acidului Boc-aminometilbenzoic, a acidului Boc-aminofenilacetic si derivatilor acidului Boc-aminometil-fenilacetic. Derivații acidului Boc-aminometilbenzoic

RO 114895 Bl utilizați ca jumătăți de ciclizare în sinteza compușilor, conform prezentei invenții, sunt preparați utilizând procedee standard, de exemplu, cele descrise de Tett. Lett. 4393 (1975) Modern Synthetic Reactions, H.O. House (1972) sau Harting ș.a., J. Am. Chem. Soc. 50:3370 (1928), 2680 așa cum se arată schematic, mai jos:

2685

Acidul 3-aminometilbenzoic. HCl. O cantitate de 10,0 g (68 mmoli] de acid 3cianobenzoic se dizolvă în 200 ml de etanol, prin încălzire în baia de apă la 35...50°C. 2690 Se adaugă apoi acid clorhidric concentrat (6,12 ml, 73 mmoli) și soluția se transferă într-un balon cu fund rotund de 500 ml, prin care se pulverizează azot, care conține catalizatorul paladiu pe cărbune (1,05 g, 10% Pd/C). Suspensia este agitată în atmosferă de hidrogen timp de 38 h, apoi este filtrată printr-o pâlnie de sticlă și apoi este spălată cu apă. Etanolul este îndepărtat sub presiune redusă și stratul apos care 2695 rămâne, conține un produs alb. care se diluează la 250 ml, cu o cantitate suplimentară de apă.

Se adaugă 250 ml de eter etilic și suspensia obținută este transferată într-o pâlnie de separare. După agitare viguroasă, toate substanțele solide sunt dizolvate și stratul apos este apoi spălat de două ori cu eter, apoi se evaporă la presiune redusă, 2700 obținând un volum de 150 ml și care se liofilizează, pentru a se obține compusul dorit (acidul 3-aminometilbenzoic.HCl) în cantitate de 8,10 g, cu randament de 64%, ca un produs solid de culoare bej.

¹H RMN (0₂0) 4,27 (s, 2H), 7,60 (t, 1H), 7,72 (d, 1H) 8,06 (d, 2H).

Acidul t-butiloxicarbonil-3-aminometilbenzoic (Boc-Mamb). Compusul din titlu 2705 este preparat conform unei modificări a procedeelor standard menționate anterior în literatura de specialitate (Itoh, Hagiwara and Kamiya (1975), Tett.Lett. 4393). Se utilizează acidul 3- aminometilbenzoic (sarea clorhidrică) în cantitate de 3,0 g (16,0 mmoli), care se dizolvă în 60 ml de apă. Se adaugă apoi o soluție de 4,33 g (17,6 mmoli) de Boc-ON în 60 ml de acetonă, apoi 5,56 ml(39,9 mmoli) de trietilamină. 2710 Soluția devine galbenă și pH-ul este ajustat la 9 (cu hârtie umecatată), prin adăugare de încă 1,0 ml (7,2 mmoli) de trietilamină. Soluția este apoi agitată până a doua zi la temperatura camerei, când, stratul apos rămas este spălat de trei ori cu eter. Stratul apos este apoi acidulat la pH = 2 cu acid clorhidric 2N și apoi este extras de trei ori cu acetat de etil. Straturile organice combinate sunt spălate de trei ori cu apă, apoi 2715 se usucă pe sulfat de magneziu anhidru și se evaporă la sec, sub presiune redusă. Materialul este apoi recristalizat din acetat de etil/hexan, pentru a se obține două porțiuni de compus din titlu (2,58 g, randament de 64%) de produs solid albicios, cu punctul de topire de 123...125°C.

¹H RMN (CDCI₃) 1,47 (s, 9H), 4,38 (br, s, 2H), 4,95 (br, s, 1H), 7,45 (t, 1H), 7,55 2720 (d, 1H), 8,02 (d, 2H).

Sinteza acidului t-butiloxicarbonil-3-aminofentlacetic. Acizii t-butiloxicarbonil-3aminofenilacetici, sunt utilizați ca intermediari în sinteza compușilor invenției, care sunt preparați utilizând procedee standard, de exemplu cele descrise de Collman și Groh (1982), J.Am.Chem.Soc., 104:1391 și așa cum se arată schematic în continuare: 2725

RO 114895 Bl

2730

2735

2740

2745

Acidul t-butiloxicarbonil-3-aminofenilacetic. O soluție de acid 3-aminofenilacetic (Aldrich, 10 g, 66 mmoli), bicarbonat di-terțiarbutilic (15,8 g, 72 mmoli) și DIEA (8,6 g, 66 mmoli) în 50 ml de diclormetan, s-a agitat până a doua zi la temperatura camerei. Amestecul de reacție este concentrat, porționat între diclormetan-apă, stratul apos se separă, se acidulează la pH 3 cu acid clorhidric 1N și se extrage cu diclormetan. Extractele se spală cu apă, cu o soluție salină, apoi se usucă pe sulfat de sodiu anhidru și se evaporă la sicitate sub presiune redusă. Acest material este purificat prin recristalizare din heptan, pentru a se obține compusul din titlu (3,7 g, 22%) sub formă de produs solid, alb, cu punct de topire de 105°C.

¹H RMN (CDCIg) 7,35 (s, 1H), 7,25 (m, 3H), 6,95 (m, 1H), 6,60 (br, s, 1H),

3,65 (s, 2H), 1,50 (s, 9H).

Sinteza acidului 2-aminometilbenzoic.HCI si a acidului 2-aminometilfenilacetic.HCI. Acidul 2-aminometilbenzoic.HCI și acidul 2-aminometil-fenilacetic.HCI utilizați ca intermediari în sinteza compușilor invenției, sunt preparați utilizând procedee standard, de exemplu cele descrise de Naito et al., J. Antibiotics, 30:698 (1977) sau Young and Sweet, J.Am.Chem.Soc. 80:800 (1958), schema fiind prezentată mai jos:

2750

2755

2760

2765

2770 d-Lactama acidului 2-aminometilfenilacetic. Compusul din titlu s-a preparat prin modificarea procedeelor menționate mai sus și prezentate în literatură (Naito et al.

1977, J. Antibiotics, 30:698). La o suspensie răcită pe gheață, formată din 10,8 g (82 mmoli) de 2-indanonă și din 9,4 g (82 mmoli) de azidotrimetilsilan în 115 mlcloroform, se adaugă 2Ue 30 și 40°C. După o adiție de 3 h, amestecul de reacție este turnat pe gheață și stratul apos este adus la pH bazic cu hidroxid de amoniu concentrat.

Stratul de cloroform este separat, spălat cu apă, cu o soluție salină, uscat pe sulfat de magneziu anhidru și evaporat la sicitate sub presiune redusă. Acest material este purificat prin subliminare (145°C, < 1 mm) apoi prin recristalizare din benzen pentru a se obține compusul dorit (5,4 g, cu randament de 45%), sub formă de cristale galben pal, cu punctul de topire la 149...150°C. ¹H RMN (CDCI₃) 7,20 (m, 5H), 4,50 (s, 2H), 3,60 (s, 2H).

Acidul 2-aminometilfenilacetic.HCI. Compusul din titlu este preparat prin modificarea procedeelor menționate mai sus în literatură (Naito et al. (1977),

RO 114895 Bl

J.Anitibiotics, 30: 698). Un amestec de d-lactama acidului 2-aminometilfenilacetic 2775 (6,4 g, 44 mmoli) și 21 ml de acid clorhidric 6N, este încălzit la temperatura de reflux timp de 4 h. Amestecul de reacție este tratat apoi cu cărbune activat (Norit A], filtrat, evaporat la sicitate și reziduul uleios este triturat cu acetonă. După filtrare, se obține compusul rubricat (5,5 g, 62% randament) sub formă de cristale incolore, cu punctul de topire la 168°C (cu descompunere] ¹H RMN (D₆-DMS0) 12,65 (br, s, 1H) 8,35 2780 (br, s, 3H), 7,50 (m, 1H), 7,35 (m. 3H], 4,05 (Ab„, 2H), 3,80 (s, 2H).

Compusul din titlu este preparat prin modificarea procedeelor menționate anterior în literatură (Danishefsky et al. (1975), J.Org.Chem. 40:796). Un amestec de metil o-toluat (45 g, 33 mmoli), N-bromsuccinimidă (57 g, 32 moli) și peroxid dibenzoil (0,64 g) în 175 ml de tetraclorură de carbon, se încălzește la temperatura 2785 de reflux timp de 4 h. Amestecul de reacție răcit este filtrat, evaporat la sicitate sub } presiune redusă, dizolvat în 250 ml de metanol și în hidroxid de amoniu concentrat (75 ml, 1,11 moli] care se adaugă la acest amestec. Amestecul de reacție este încălzit la temperatura de reflux timp de 5 h, apoi este concentrat, filtrat și produsul solid este spălat cu apă, apoi cu eter. Acest material este purificat prin recristalizare 2790 din apă, pentru a se obține compusul din titlu (11,0 g cu 26% randament], sub formă de produs solid alb, cu punct de topire la 150°C. ¹H RMN (CDCI₃) 7,90 (d, 1H), 7,60 (t, 1H], 7,50 (t, 2H), 7,00 (br, s, 1H), 4,50 (s, 2H).

Acidul 2-aminometilbenzoic.HCI. Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris mai sus pentru acidul 2-aminometilfenilacetic .HCl. Astfel, 2795 o cantitate de 3,5 g (26 mmoli) de lactamă este transformată în compusul din titlu (2,4 g, cu randament de 50%) sub formă de cristale incolore, cu punctul de topire la 233°C (cu descompunere). ¹H RMN (D₆-DMS0) 13,40 (br, s, 1H], 8,35 (br, s,

3H), 8,05 (d, 1H). 7,60 (m, 3H), 4,35 (br, s, 2H).

Sinteza compușilor intermediari ciclici. Această secțiune tratează sinteza 2800 anumitor compuși ciclici intermediari. Acești compuși intermediari servesc ca precursori la grupa Q în compușii revendicați, (OL^C^, (0)^0,^. Acești compuși pot fi marcați direct cu radioizotopi sau pot fi modificați prin atașarea grupelor linker și chelatorilor.

Acidul t-butiloxicarbonil-3-aminometilbenzoic (Boc-Mamb) este cuplat la 2805 oximrășină prin modificarea metodei descrise de De Grado and Maiser (1980),

J.Org.Chem. 45, 1295, utilizând un echivalent din acidul 3-aminometilbenzoic (cu referire la nivelul de substituire a rășinei], 1 echivalent de HBTU și 3 echivalent de NMM. Alternativ, Boc-Mamb (1 echivalent] poate fi cuplat la oximrășină utilizând câte 1 echivalent de DCC și DMAPîn clorură de metilen. Perioadele de cuplare sunt de la 2810 15 la 96 h. Nivelul de substituire este apoi determinat, utilizând fie testul cu acidul picric (Sarin, Kent, Tam și Merrifield (1981), Anal, Biochem. 117, 145...157) sau analiza cantitativă cu ninhidrină (Gisin (1972) Anal.Chem.Acta 58, 248...249). Grupele de oximă nereacționate sunt blocate utilizând 0,5 M trimetilacetilclorură/0,5 M diizopropiletilamină în DMF timp de 2 h. Deprotecția grupei de protecție Boc este 2815 efectuată folosind TFA 25% în DCM timp de 30 min. Aminoacizii rămași sau derivații de aminoacizi, sunt cuplați utilizând între două și zece ori exces (bazat pe greutatea primilor aminoacizi sau primilor derivați de aminoacizi) ai aminoacizilor sau derivaților de aminoacizi corespunzători și HBTU în aproximativ 8 ml de dimetilformamidă. Rășina este apoi neutralizată in situ utilizând 3 echivalenți de NMM (bazat pe cantitatea de 2820 aminoacid utilizată) și perioade de cuplare de la o oră până la mai multe zile. definitivarea cuplării este monitorizată prin analiza calitativă cu ninhidrină sau analiza cu acid picric în cazurile în care aminoacidul este cuplat la o amină secundară.

RO 114895 Bl

Aminoacizii sunt apoi recuplați dacă este necesar, pe baza acestor rezultate.

După ce peptida liniară a fost asamblată, gruparea Boc N-terminal este îndepărtată prin tratament cu TFA 25% în DCM, timp de 30 min. Rășina este apoi neutralizată prin tratament cu DIEA 10% în DCM. Ciclizarea cu descompunerea concomitentă a peptidei, este efectuată prin metoda lui Osapay and Taylor ((1990), J.Am.Chem.Soc. 112, 6046) prin suspendarea rășinei în aproxiamtiv 10 ml per gram dimetilformamidă, adăugând 1 echivalent de HOAc (bazat pe greutatea primului aminoacid) și agitare la temperatura de 5O...6O°C timp de 60 până la 72 h. După filtrare prin pâlnia de sticlă sinterizată, filtratul de dimetilformamidă este evaporat, redizolvat în HOAc sau un amestec de părți egale de acetonitril și apă și apoi se liofilizează pentru a se obține materialul ciclizat, protejat. Alternativ, materialul poate fi dizolvat în metanol și precipitat cu eter pentru a se obține materialul ciclizat, protejat. Acesta este apoi tratat utilizând procedee standard cu acid fluorhidric anhidru (Stewart and Young (1984), Solid Phase Peptide Synthesis, 2 nd. Edition, Pierce Chemical Co., 85) conținând 1 ml per gram de meta-cresol sau anisol pentru curățare, la 0°C timp de 20 până la 60 min, pentru îndepărtarea grupelor de protecție ale catenei secundare. Produsul brut poate fi apoi purificat prin HPLC în fază reversă, utilizând o coloană preparativă Vydac C18 de 2,5 cm, cu-un gradient linear acetonitril conținând 0,1% TFA pentru a produce un material ciclizat, pur. Următoarii aminoacizi N-a-Boc protejați, pot fi utilizați pentru sinteză:

Boc-Arg (Tos), Boc-N-a-MeArg (Tos), Boc-Gly, Boc-Asp (OcHex), acidul Boc-3aminometil-4-iodo-benzoic , Boc-D-lle, Boc-NMeAsp(OcHex), Boc-NMe-Mamb, Boc-DPhg, Boc-D-Asp(OBzl), Boc-L-Asp (OcHex), Boc-aMeAsp (OcHex), Boc-bMe-Asp (OcHex), Boc-L-Ala, Boc-L-Pro, Boc-D-NIe, Boc-D-Leu, Boc-D-Val, acid Boc-D-2-aminobutiric (Boc-D-Abu), Boc-Phe, Boc-D-Ser (Bzl), Boc-D-Ala, acidul Boc-3-aminometilbenzoic (Boc-Mamb), Boc-D-Tyr (CI₂Bzl), Boc-NMe-Amf(CBZ), acid Boc-aminotehalincarboxilic, acid Boc-aminometilnaftanoic, acidul Boc-4-aminometilbenzoic sau BocNMeGly.

Aminoacizii N-a-Boc-protejați, preferabili, care sunt utilizați în aceste sinteze sunt: Boc-Arg (Tos), Boc-N-a-MeArg (Tos), Boc-Gly, Boc-Asp (OcHex), Boc-D-Leu, BocD-Val, acidul Boc-D-2-aminobutiric (Boc-D-Abu), Boc-Phe, Boc-D-Ser(Bzl), Boc-D-Ala, acidul Boc-36 aminometilbenzoic (Boc-Mamb), Boc-D-Lys (2T3IZ), Boc-Ala, Boc-D-Pro sau Boc-NMeGly.

Sinteza compușilor conform prezentei invneții este exemplificată în continuare. Tabelele de mai jos conțin compușii reprezentativi ai prezentei invenții.

Compusul intermediar ciclic 1. Ciclo-(Gly-NMeArg-Gly-Asp-Mamb), compusul cu formula (II) în care J = Gly, K = NMeArg, L = Gly, M = Asp, R¹ = R² = H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris în continuare pentru ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb). Peptida este preparată pe o scală 0,336 mmoli pentru a da peptida ciclică protejată (218 mg, cu un randament de 84%). Se tratează 200 mg de peptidă și 200 ml de m-cresol, cu acid fluorhidric anhidru la 0°C timp de o oră. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvat în HOAc apos și liofilizat, pentru a genera compusul rubricat, sub formă de produs solid galben pal (158 mg, apoi mai mult decât randamentul cantitativ; calculat sub formă de sare, acetat). Purificarea este efectuată prin HPLC în fază reversă pe o coloană preparativă Vydac C₁₈ de 2,5 cm, utilizând 0,23%/min gradient de 2 până la 11% acetonitril conținând 0,1% TFA și apoi se liofilizează pentru a se obține sarea TFA a compusului din titlu, ca produs solid alb, pufos (21% recuperare, randament general 16,3%). Spectrul de masă: Μ + H = 533,26.

RO 114895 Bl

Compusul intermediar ciclic 2. Ciclo-{D-Ala-NMeArg-Gly-Asp-Mamb), compusul cu formula (II) în care J = D-Ala, K = NMeArg, L = Gly, M = Asp, R¹ = R² = H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris mai jos 2875 pentru ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb).

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general de mai jos pentru CicloȚD-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb). Decuplarea reziduului Boc-N-MeArg (Tos) a fost găsită a fi necesară. Peptida a fost preparată pe scală de 0,244 mmoli pentru a se obține peptida ciclică protejată (117 mg, 61%). Peptida în cantitate de 110 mg și 2880 110 ml de metacrezol se tratează cu acid fluorhidric anhidru la temperatura de 0°C, timp de 1 h. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvatîn HOAc apos și liofilizat pentru a genera compusul din titlu, sub formă de produs solid galben pal. Purificarea este efectuată prin HPLC fază reversă prin utilizarea unei coloane preparative Vydac i' C₁₈ de 2,5 cm, utilizând 0,25%/min gradient de 2 la 11 % acetonitril conținând 0,1% 2885 TFA și apoi se liofilizează pentru a se obține sarea TFA a compusului din titlu, sub formă de produs solid alb, pufos. Spectrul de masă: Μ + H = 547,23.

Compusul intermediar ciclic 3. CicloȚD-Abu-NMeArg-Gly-Asp-Mamb), compusul cu formula (II) în care J = D-Abu, K = NMeArg, L = Gly, M = Asp, R¹ = R² = H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris mai jos 2890 pentru compusul intermediar ciclic 4. Peptida este preparată la scală 0,101 mmoli pentru a se obține peptida ciclică protejată (51 mg, cu randament de 63%). 43 mg de peptidă și 50 pl de mete-crezol se tratează cu acid fluorhidric anhidru la 0°C timp de 30 min. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvatîn HOAc apos și liofilizat pentru a genera compusul din titlu, ca solid galben pal (23 mg, randament de 2895 68,7%); calculat sub formă de sare, acetat). Purificarea este efectuată prin cromatografie HPLC în fază reversă pe o coloană preparativă Vydac C₁₈ de 2,5 cm, utilizând 0,23%/min gradient de la 7 la 14% acetonitril conținând 0,1% acid trifluoracetic și apoi este liofilizat pentru a da sarea TFA a compusului din titlu, sub formă de produs solid alb. pufos (recuperare 31%, randament total 12,4%). Spectrul de masă: M + 2900 H = 561,46.

Compusul intermediar ciclic 3a. Ciclo-(D-Abu-NMeArg-Gly-Asp-Mamb), compusul cu formula (II) în care J = Abu, K = NMeArg, L = Gly, M = Asp, R¹ = H, R² = H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris pentru ciclo(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb) (Compusul intermediar ciclic 4). Metoda 2905 DCC/DMAP este utilizată pentru legarea Boc-Mamb la oximrășină. TBTU se utilizează ca reactiv de cuplare. Peptida este preparată la scală 0,596 pentru a se obține peptida ciclică de protecție (182 mg, randament de 38,4%). Peptida (176 mg) și 0,176 ml de anisol, se tratează cu acid fluorhidric anhidru la 0°C timp de 20 min. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvatîn acetonitril apos și liofilizat pentru 2910 a genera compusul din titlu (116 mg cu un randament de 90,4%, calculat ca sare fluorură). Purificarea este realizată prin cromatografie HPLC în fază reversă pe o coloană preparativă Vydac C₁₈ de 2,5 centimetri, utilizând 0,45%/min gradient de 9 la 27% acetonitril conținând 0,1% TFA și apoi se liofilizează pentu a se obține sarea TFA a compusului rubricat, ca produs solid, alb, pufos (1,92% recuperare, randament 2915 general de 0,574%) FAB-MS; (Μ + H = 561.39.

Compusul intermediar ciclic 4. Ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb), compusul cu formula (II) în care J = D-Val, K = NMeArg, L = Gly, M = Asp, R¹ = R² = H.

La un tub cu 25 ml din polipropilenă, prevăzut cu frită, se adaugă Boc-Mamb (0,126 g, 0,5 mmoli) și 6 ml de dimetilformamidă. La acesta se mai adaugă HBTU 2920 (0,194 g, 0,5 mmoli), oximrășină (0,52 g, nivelul de substituire = 0,96 mmoli/gram),

RO 114895 Bl și N-metilmorfolină (0,165 ml, 1,50 mmoli). Suspensia este amestecată la temperatura camerei timp de 24 h. Rășina este apoi spălată odată cu 10-12 ml în volume, de 3 ori cu dimetilformamidă, odată cu metanol, de 3 ori cu DCM, de două ori cu metanol și de 3 ori cu DCM. Nivelul de substituire determinat a fost de 0,389 mmoli/g, prin analiză cantitativă cu ninhidrină. Grupele oximă nereacținate sunt blocate prin tratare cu 0,5 M, trimetilacetilclorura/0,5 M DIEAîn dimetilformamidă timp de 2 h.

Următoarele faze sunt realizate astfel:

(Faza 1) Rășina este spălată de 3 ori cu dimetilformamidă, odată cu metanol, de 3 ori cu DCM, de două ori cu metanol, și de 3 ori cu DCM. (Faza 2) Grupa t-Boc este deprotejată utilizând 25% TFA în DCM timp de 30 min.

(Faza 3) Rășina este spălată de 3 ori cu DCM, odată cu metanol, de două ori cu DCM și de 3 ori cu dimetilformamidă. (Faza 4) Boc-Asp(OcHex] (0,613 g, 1,94 mmoli), HBTU (0,753 g, 1,99 mmoli), 8 ml de dimetilformamidă și N-metilmorfolină (0,642 ml, 5,84 mmoli], care se adaugă la rășină și reacția este lăsată să continue timp de

2,5 h. (Faza 5) Reacția de cuplare este determinată a fi completă așa cum s-a analizat prin analiză cantitativă cu ninhidrină. Fazele 1...5 sunt repetate până ce se atinge secvența dorită. Cuplarea Boc-D-Val la NMeArg este monitorizată prin testare cu acid picric.

După ce peptida liniară este asamblată, grupa t-Boc la N-terminal este îndepărtată prin tratare cu 25% TFA în DCM, timp de 30 min. Rășina este spălată odată cu DCM de trei ori, de două ori cu metanol și de trei ori cu DCM și apoi este neutralizată cu un amestec de 10% DIEAîn DCM, de două ori câte 1 min. Rășina este spălată apoi de trei ori cu DCM apoi de trei ori cu metanol și apoi este uscată. Jumătate din cantitatea de rășină (0,101 mmoli) este ciclizată prin tratare cu 6 ml de dimetilformamidă conținând HOAc (5,8 ml, 0,101 mmoli) și se încălzește la 50°C timp de 72 h. Rășina este apoi filtrată printr-o pâlnie de sticlă scintered și spălată odată cu dimetilformamidă. Filtratul de dimetilformamidă este evaporat obținând un ulei, care este redizolvat într-un amestec în părți de 1:1 acetonitril și apă și apoi se liofilizează pentru a se obține peptida ciclică protejată (49 mg, 60%). Peptida (42 mg) este tratată cu acid fluorhidric anhidru la 0°C, în prezența a 50 de ml de meta-crezol scavenger, timp de-30 min, pentru îndepărtarea grupelor de protecție ale catenei secundare. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvat în HOAc apos și liofilizat pentru a genera compusul din titlu sub formă de produs solid, galben pal (23 mg, cu un randament de 70%, calculat ca sare, acetat). Purificarea este realizată utilizând cromatografia HPLCîn fază reversă cu o coloană Vydac C₁₈ preparativă, de 2,5 cm și un gradient deO,23%, minimum 7 la 18% acetonitril conținând 0,1% acid trifluoracetic, pentru a se obține sarea TFA a compusului din titlu, sub formă de produs solid alb, pufos (24% recuperare și randament general de 9,4%) FAB-M6: (Μ + H) = 575,45.

Sinteza în fază de soluție a compusului intermediar ciclic 4. Următoarele abrevieri sunt utilizate în continuare pentru sisteme de solvenți TLC: cloroform/ metanol 95:5 = CM, cloform/acid acetic 95,5:5 = CA cloroform/metanol/acid acetic 95:5 = CMA

Boc NMeArg(tos)-Gly-OBzl 25 mmoli BocNMeArg(Tos) în cantitate de 11,07 g,

Bachem), 30 mmoli Gly-OBzI tosilat (10,10 g Bachem) 25 mmoli HBTU (o-benzotriazol

Ν,Ν,Ν',Ν’-tetrametil-uroniu-hexafluorfosfat 9,48 g (Advanced Chemetech) și 75 mmoli de DIEA (diizopropiletilamină Aldrich], se dizolvă în 25 ml de CH₂CI₂. Reacția este lăsată să continuie timp de o oră, solventul este evaporat la presiune redusă la 50°C

RO 114895 Bl până se obține un sirop care este apoi dizolvat în 400 ml acetat de etil. Această soluție este extrasă cu câtel 50 ml fiecare (de două ori) acid citric 5%, o dată cu apă, de două ori cu soluție saturată de bicarbonat de sodiu, apoi odată cu o soluție saturată de NaCI. Stratul organic este uscat apoi pe sulfat de magneziu și solventul este evaporat la presiune redusă. Uleiul astfel rezultat este triturat cu eter de petrol și 2975 uscat la vid înaintat, timp de cel puțin o oră, când se obțin 14,7 g (randament de 99,5%) produs. TLC Rf (CM) = 0,18 Rf CA = 0,10 RMN este în concordanță cu structura FABMS M+H⁺ = 590,43 (față de valoarea așteptată de 590,26).

NMeArg(Tos]-Gly-OBzl-14,5 g (BocNMeArg(Tos)-Gly-OBzl-(24,5 mmoli) este dizolvat în 30 ml deTFA, apoi este lăsat să reacționeze timp de 5 min și solventul este 2980 evaporat la o presiune de 1 mm Hg la temperatura camerei. Siropul astfel rezultat este dizolvat în 400 mlde acetat de etil rece și extras apoi cu 100 ml de soluție saturată de bicarbonat de sodiu răcită pe gheață, apoi faza apoasă este extrasă de două ori cu câte 200 ml de acetat de etil și fazele organice combinate sunt extrase odată cu 25 ml de soluție saturată de NaCI. Solventul este evaporat la presiune 2985 redusă, când se obține un ulei vâscos care este apoi triturat cu 300 ml de eter. Produsul rezultat este apoi filtrat și spălat cu eter, obținând compusul higroscopic care este uscat apoi în desicator cu vacuum, obținând 10,33 g (86,2%) TLC FțfCM) = 0,03, R_f(CM) = 0,20. RMN este în concordanță cu structura. FABMS M + H⁺ = 490,21 (față de valoarea așteptată 490,20). 2990

Boc-D-Val NMeArg(Tos)-Gly-OBzl-9,8O mmoli NMeArg (Tos)-Gly-OBzl (4,80 g),

9,82 mmoli Boc-D-Val (2,13 g Bachem) și 10,0 mmoli HBTU (3,79 g) se dizolvă în 10 ml de clorură de metilen. Balonul este plasat pe o baie de gheață, după care se mai adaugă 20 mmoli DIEA (3,48 ml). Reacția este lăsată să se desfășoare la 0°C timp de 15 min și apoi două zile la temperatura camerei. Amestecul de reacție este 2995 diluat cu 400 ml acetat de etil, extras de două ori cu câte 200 ml de acid citric 5% și apoi cu o soluție saturată de NaCI după care se usucă pe sulfat de magneziu și se evaporă sub presiune redusă. Uleiul astfel rezultat este triturat cu 50, apoi cu 30 ml de eter, timp de 30 min, cu amestecare eficientă, când se produc 4,58 g (randament de 69% produs), TLC R,(CM)= 0,27 (conține așadar o cantitate mică de impuritate 3000 aromatică care este îndepărtată prin triturarea produsului în faza următoare). RMN este îh concordanță cu structură; FABMS M+H* = 689,59 (față de valoarea așteptată 689,43).

Boc-D-ValNMeArg (Tos)-Gly-4,5O g de Boc D-Val-NMeArg (Tos)-Gly-OBzl (4,44 mmoli) dizolvați în 80 ml de metanol se purjează cu N₂ timp de 10 min. Se adaugă 3005 apoi 1,30 g de Pd/C catalizator (10% Fluka lot # 273890) și apoi se trece direct la suprafață de reacție, un curent de hidrogen H₂.

Prin TLC se arată că reacția este completă în aproximativ 0,5 h. După o oră, catalizatorul este îndepărtat prin filtrare printr-un pat de Celită și solventul este îndepărtat la 40°C la presiune redusă. Produsul solid astfel rezultat este bine triturat 3010 cu 50 ml de eter la reflux, filtrat și spălat cu eter de petrol. Se obțin 3,05 g, cu un randament de 78%.

TLC R_f(CM) = 0,03, Rj(CMA)=0,37; RMN este în concordanță cu structura, FABMS M+H⁺ = 599,45 (față de valoarea așteptată 599,29).

4-Nitrobenzafenona Oxima (0x)-50 g de 4-nitro-benzofenonă (220 mmoli, 3015 Aldrich) și 30,6 g clorhidrat de hidroxilamină (Aldrich, 440 mmoli) se încălzesc în 0,5 I metanol/piridină (9:1) la reflux, timp de o oră. Amestecul de reacție este evaporat la presiune redusă, dizolvat în 500 ml de eter și extras cu 200 ml de acid citric 5% (de două ori) și apoi odată cu o soluție saturată de NaCI, apoi se usucă pe sulfat de

RO 114895 Bl magneziu, se evaporă la presiune redusă și se triturează cu eter, când se obțin 44,35 g (83%) oximă ca un amestec de izomeri cis și trans. TLC R_f(CM)=0,50,

R,(CMA)=0,82. RMN esteîn concordanță cu structura. FABMS M + H⁺ = 242,07 (față de valoarea așteptată de 242,07).

BocMamb-Ox—22 mmoli BocMamb (5,522 g), 20 mmoli de oximă nitrobenzofenonă (4,84 g) și 20 mmoli DMAP (4-dimetilaminopiridina, Aldrich), se dizolvă în 40 ml de CH₂CI₂. Flaconul este plasat pe o baie de gheață și se adaugă 21 mmoli DCC (diciclohexilcarbodiimida, 4,33 g). Amestecul este lăsat să reacționeze pe gheață timp de 30 min și apoi la temperatura camerei până a doua zi. Diciclohexilureea formată este filtrată și spălată cu 40 ml de clorură de metilen. Filtratul este evaporat la presiune redusă la temperatura camerei până se obține un sirop care este apoi dizolvat în 400 ml de acetat de etil. Această soluție este apoi extrasă de două ori cu câte 150 ml de acid citric 5%, apoi o dată cu apă, de două ori cu o soluție saturată de bicarbonat de sodiu și o dată cu o soluție saturată de NaCl. Stratul organic este uscat pe sulfat de magneziu și solventul este evaporat la presiune redusă. Se obține un produs uleios care se triturează cu eter de petrol și apoi se usucă la vid înaintat, timp de cel puțin o oră, obținând 7,51 g (79% randament). TLC R_f(CM] = 0,41, FțtCMA] = 0,66 RMN esteîn concordanță cu structura. FABMS M+H⁺ = 476,30 (față de valoarea așteptată de 476,18).

TFA-MAMB-Ox—BocMamb-Ox, 7,4 g (15,5 mmoli) se dizolvă în 30 ml de clorură de metilen plus 10 ml TFA (25% TFA). Amestecul de reacție este lăsat să reacționeze la temperatura camerei, timp de o oră și solventul este apoi evaporat sub presiune redusă la temperatura camerei timp de 10 min, apoi la 40°C timp de 15 min. Siropul astfel obținut este triturat cu 200 ml de eter la

-5°C. Se obțin astfel cristale care se filtrează după o oră și se spală bine cu eter. Se obțin 7,22 g (95%) Fț(CMS] = 0,25. RMN este în concordanță cu structura. FABMS M+H⁺ = 376,22 (valoarea așteptată de 376,12).

Boc-Asp(Oc-Hex)-Mamb-Ox—20 mmoli de Boc-Asp (OcHex) (6,308 g, Bachem) și 44 mmoli DIEA (7,66 ml) se dizolvă în 20 ml de dimetilformamidă, apoi se adaugă 20 mmoli de HBTU (7,58 g, Advanced Chemtech] și amestecul de reacție este lăsat să reacționeze timp de 2 min sub agitare viguroasă. TFA, Mamb-Ox (7,13 g, 15 mmoli] se adaugă și amestecul este lăsat să ^reacționeze o oră la temperatura camerei. Solventul este îndepărtat sub presiune redusă obținând un ulei care este apoi dizolvat în 500 ml de acetat de etil și această soluție este extrasă de două ori cu câte 150 de ml de acid citric 5%, apoi odată cu o soluție saturată de bicarbonat de sodiu, odată cu o soluție saturată de NaCl. Stratul organic este uscat pe sulfat de magneziu și solventul este evaporat sub presiune redusă. Uleiul astfel obținut este triturat cu eter de petrol și uscat sub vid înaintat, obținând 9,76 g, cu randament de 97% de TLC Εζ(0Μ]=Ο,55. NMR esteîn concordanță cu structura. FABMS M+H⁺ = 673,45 (valoarea așteptată fiind de 673,23).

TFA Asp (OcHex)-MAMBOx-l 5 mmoli Boc-Asp (OcHex)-MAMB-Ox este dizolvat în 50 ml de TFA 35% în CH₂CI₂ și se lasă apoi să reacționeze timp de 90 min. Solventul este evaporat sub presiune redusă la temperatura camerei timp de 10 min, apoi la 40°C, timp de 15 min. Pentru îndepărtarea urmelor de TFA, se adaugă 25 ml de dimetilformamidă și solventul este evaporat la 50°C. Siropul rezultat este triturat cu 200 ml de eter, apoi este uscat la vid înaintat, când se obțin 9,61 g (randament de 93%).

R,(CMA) = 0,45 NMR este considerat în concordanță cu structura. FABMS M + H⁺ = 573,56 (față de valoarea așteptată de 573,23).

RO 114895 Bl

Boc-D-Val-NMeArg (Tos)-Gly-Asp(OcHex}-MAMB-Ox—10,0 mmoli din fiecare TFA Asp (OcHexJ-ΜΑΜΒΌχ, Boc-D-Val-NMeArg (Tos)-Gly și HBTU, plus 30 mmoli de DIEA, 3070 se dizolvă în 20 ml de dimetilformamidă. După 4 h, solventul este îndepărtat sub presiune redusă și reziduul este luat cu 600 ml de acetat de etil, care este extras cu 300 ml de acid citric 5%, cu apă și apoi cu o soluție saturată de NaCI. Stratul organic este uscat pe sulfat de magneziu, evaporat sub presiune redusă, triturat cu eter și uscat în vacuum. Se obțin astfel 9,90 g cu randament de 86%. R_f(CM) = 0,10 RMN 3075 este considerat în concordanță cu structura, FABMS M+H⁺ = 1153,22 (valoarea așteptată 1153,47).

TFA.D-Val-NMeArg(Tos]-Gly-Asp(OcHex)-MAMB-Ox. Acest compus este preparat din Boc-D-Val-NMeArg(Tos]-Gly-Asp (Ochex]-MAMB-Ox (9,8 g, 8,5 mmoli) prin tratare cu TFA/CH₂CI₂ (1:1) timp de 45 min. Solventul este evaporat și produsul este triturat 3080 cu eter, obținând 9,73 g (cu randament de 98%). R,(CM) = 0,10. RMN este în concordanță cu structura, FABMS M+H⁺ = 1053,22 (valoarea așteptată 1053,4).

Ciclo(D-Val-NMeArg(Tos)-Gly-Asp (OcHex)-MAMB) TFA, D-Val-NMeArg(Tos)-GlyAsp (OcHex]-MAMB-Ox (1,80 g, 1,54 mmoli) și 2 mmoli fiecare de DIEA și acid acetic se dizolvă în 200 ml de dimetilformamidă. Amestecul este încălzit la 50°C, timp de 3085 2 zile, apoi se evaporă sub presiune redusă. Siropul este dizolvat în 400 ml acetat de etil/n-butanol (1:1) și apoi se extrage cu 200 ml de două ori cu acid citric 5% și cu soluție saturată de NaCI, o singură dată. Stratul organic este uscat pe sulfat de magneziu și triturat de două ori cu 200 ml de eter, când se obțin 1,07 g (randament de 86%). R_f(CM) = 0,10, RMN este în concordanță cu structura, FASMB M+H⁺ = 3090 811,25 (față de valoarea așteptată de 811,38).

Ciclo(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-MAMB)-O,5O g ciclo (D-VAI-NMeArg(Tos)-GlyAsp(OcHex)-MAMB) se tratează cu 5 ml de HF la 0°C, în prezență de 0,5 ml anisol, timp de 30 min. HF este îndepărtat sub presiune redusă și peptida brută este triturată cu eter, acetat de etil și eter. Produsul solid astfel rezultat este dizolvat în 3095 acid acetic 10% și liofilizat, obținând 0,321 g (cu randament de 82% calculat ca sare, acetat). Produsul este apoi purificat cu o recuperare de aproximativ 40 %, utilizând aceeași metodă așa cum s-a descris pentru materialul sintetizat, prin procedeul în fază solidă.

Cristalizarea compusului intermediar ciclic 4. Prepararea Jormelor de sare ale 3100 · compusului intermediar ciclic 4. S-a constatat că, compușii conform prezentei invneții pot fi izolați prin cristalizarea compusului din solvenți organici și solvenți apoși.

Zwitterionul compusului intermediar ciclic 4 este transformat în sarea mesil (metasulfonat) a compusului intermediar ciclic 4 [compusul intermediar ciclic 4 (metan-sulfonat)], prin refluxarea zwitterionului cu agitare în izopropanol la 25 mg/mlși 3105 apoi se adaugă lent o soluție de acid metasulfonic 1,0 molar echivalent (corectând pentru conținutul de apă al zwitterionului), care se dizolvă în izopropanol. Sursa de căldură este îndepărtată și soluția se răcește la 5°C pe o baie de gheață. După agitare timp de o oră, soluția se filtrează și produsul solid se spală de trei ori cu izopropanol rece și se usucă la vacuum până la greutate constantă. 3110

Următoarele săruri ale compusului, ale compusului intermediar ciclic 4, sunt preparate utilizând aceleași procedee, prin adăugare de 1,0 echivalenți de acid corespunzător:

Compusul intermediar ciclic 4 (difenilsulfonatul): zwitterion + 1,0 acid difenilsulfonic echivalent. 3115

Compusul intermediar ciclic 4 (a-naftalensulfonat): zwitterion + 1,0 echivalenți acid a-naftalensulfonic.

RO 114895 Bl

3120

3125

313qi

3135

3140

3145

3150

3155

3160

3165

Compusul intermediar ciclic 4 (tmaftalensulfonat): zwitterion +1,0 echivalenți de acid h-naftalensulfonic.

Compusul intermediar ciclic 4 (benzensulfonat): zwitterion +1,0 echivalent acid benzensulfonic.

Compusul intermediar ciclic 4 (para-toluensulfonat): zwitterion +1,0 echivalenți acid paratoluensulfonic.

Următoarele săruri ale compusului intermediar ciclic 4, sunt preparate prin cristalizarea compusului din sistem apos.

Compusul intermediar ciclic 4 (sulfat): 10 mg de compus intermediar ciclic 4 dimorf (preparat prin liofilizarea zwitterionului dintr-o soluție 2 echivalenți molari de acid acetic în apă) se dizolvă într-un ml de acid sulfuric, la pH ajustat la 2,5. Prin repaus la temperatura camerei, se formează un precipitat. Acesta se filtează printr-o pâlnie de sticlă sinterizată și se usucă la vacuum până la greutate constantă.

Compusul ciclic intermediar 4 (metansulfonat de mesil): 100 mg de DMF 728 amorf se dizolvă per ml apă +1.2 echivalenți molari de acid metansulfonic (acesta este obținut ca o soluție apoasă 4 M). Prin repaus la temperatura camerei, se formează cristale mari, plate.

Compusul intermediar ciclic 4 (benzensulfonat): 100 mg zwitterion se dizolvă per ml apă +1,2 echivalenți de acid benzensulfonic se adaugă. Prin repaus la temperatura camerei, se formează un precipitat. Acesta se filtrează printr-o pâlnie de sticlă sinterizată, se spală cu volume mici de izopropanol și se usucă sub vacuum până la greutate constantă.

Compusul intermediar ciclic 5 (para-toluensulfonat): 100 mg de zwitterion se dizolvă per ml de apă +1,2 echivalenți molari de acid toluen sulfonic care se adaugă. Prin repaus la temperatura camerei, se formează un precipitat. Acest precipitat se filtrează printr-o pâlnie de sticlă sinterizată și se usucă sub vacuum la greutate constantă.

Compusul intermediar ciclic 4b. Ciclo-(D-\/al-D-NMeArg-Gly-Asp-Mamb) J = DVal, K = D-NMeArg, L = Gly, M = Asp, R¹ = H, R² = H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris pentru ciclo-(D-\/al-NMeArg-Gly-Asp-Mamb) (Compusul intermediar ciclic 4). Se utilizează metoda DCC/DMAP, pentru legarea la oxim rășină, a Boc-Mamb. Peptida este preparată pe scală de 0,596 mmoli pentru a se obține peptida ciclică de protecție (186 mg, 38,6%). Peptida (183 mg) și 0,183 mlde anisol se tratează cu acid fluorhidric anhidru la 0°C, timp de 30 min. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvatîn acetonitril apos și liofilizat, pentru a genera compusul din titlu (145 mg. mai mult decât randamentul cantitativ) calculat ca sare, fluorură. Purificarea este realizată prin HPLCîn fază reversă pe o coloană Vydac C18 preparativă de 2,5 cm, utilizând un gradient 0,23%/min, de 9 până la 22,5% acetonitril conținând 0,1%TFA și apoi se liofilizează pentru a se obține sarea de TFA a compusului din titlu, ca produs solid alb, pufos (14,8% recuperat, randament total 5,3%). FABMS: (M+H)=575,31.

Compusul intermediar ciclic 5. Ciclo(D-Leu-NMeArg-Gly-Asp-Mamb): compusul cu formula (II) în care J = D-Leu, K = NMeArg, L = Gly, M = Asp, R¹ = R² = H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris mai sus pentru ciclo-tD-VaFNMeArg-Gly-Asp-Mamb). Peptida este preparată la scală de 0,115 mmoli pentru a se obține peptida ciclică protejată (92,4 mg, 98% randament). Peptida (92,4 mg) și 93 ml de meta-crezol se tratează cu acid fluorhidric anhidru la 0°C, timp de 20 min.

Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvat în HOAc apos și liofilizat

RO 114895 Bl pentru a genera compusul din titlu sub formă de produs solid de culoare galben pal (45,7 mg, 63% calculat ca sare. acetat). Purificarea este realizată prin HPLCîn fază reversă pe o coloană Vydac C18 preparativă, de 2,5 cm, utilizând 0,23%/min, gradient de 7 la 21% acetonitril, conținând 0,1% TFA și apoi se liofilizează pentru a 3170 se obține sarea TFA a compusului rubricat, ca produs solid alb, pufos (recuperare 29%, randament total 16,5%) FAB-MS: (M+H) = 589,48.

Compusul intermediar ciclic 7. Ciclo-(D-Nle-NMeArg-Gly-Asp-Mamb) compusul cu formula (II) în care J = D-NIe, K = NMeArg, L = Gly, M = Asp, R¹=H, R²=H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris pentru 3175 ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb) (compusul intermediar ciclic 4). Metoda DCC/DMAP este utilizată pentru legarea Boc-Mamb la oxim rășină. Peptida este preparată pe scală 0,586 mmoli pentru a se obține peptida ciclică protejată (305 mg, 63,3%). Peptida (295 mg) și 0,295 ml de anisol, se tratează cu acid fluorhidric anhidru la 0°C timp de 30 min. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvatîn 3180 acetonitril apos și liofilizat, pentru a genera compusul din titlu (207 mg, 95,4%, calculat ca sare florură). Purificarea este efectuată prin HPLC pe fază reversă cu o coloană Vydac C18 preparativă, de 2,5 cm, utilizând 0,23%/min. gradient de 5,4 până la 18% acetonitril conținând 0,1% TFA și apoi se liofilizează pentru a se obține sarea TFA a compusului rubricat, ca produs solid, alb pufos (recuperat 44%, randament 3185 total 22,9%) FAB-MS; (M+H]=589,26.

Compusul intermediar ciclic 11. Ciclo-(D-Phg-NMeArg-Gly-Asp-Mamb) compusul cu formula (II) în care J = D-Phg, K = NMeArg, L = Gly, M = Asp, R¹=H, R²=H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris pentru ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb) (compusul intermediar ciclic 4). Metoda 3190 DCC/DMAP este utilizată pentru legarea Boc-Mamb la oxim rășină. Peptida este preparată pe scală 0,611 mmoli, pentru a se obține peptida ciclică protejată (296 mg, 57,4%). Peptida (286 mg) și 0,286 ml de anisol se tratează cu acid fluorhidric anhidru la 0°C, timp de 30 min. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvat pentru solubilizare în acetonitril apos și liofilizat pentru a genera compusul din titlu 3195 (210 mg, 98,9%, calculat ca sare, fluorură). Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă cu o coloană Vydac C18 de 2,5 cm, preparativă, utilizând 0,23%/min gradient de 5,4 la 18% acetonitril, conținând 0,1% TFA și apoi se liofilizează pentru a se obține sarea TFA a compusului rubricat, ca produs solid (24,2% recuperat, randament total 11,9%) FAB-MS: (M+H)=609,27. 3200

Compusul intermediar ciclic 12 Ciclo-(D-Phe-NMeArg-Gly-Asp-Mamb); compusul cu formula (II) în care J = D-Phe, K = NMeArg, L = Gly, M = Asp, R¹=H, R²=H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris pentru ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb) (compusul intermediar ciclic 4). Metoda DCC/DMAP este utilizată pentru legarea Boc-Mamb la oxim rășină. Peptida este 3205 preparată pe scală 0,611 mmoli pentru a se obține peptida ciclică protejată (140 mg, 26,7%). Peptida (135 mg] și 0,135 ml de anisol, se tratează cu acid fluorhidric anhidru la 0°C, timp de 30 min. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvat în acetonitril apos și liofilizat, pentru a genera compusul din titlu (108 mg, mai mult decât randamentul cantitativ, calculat ca sare fluorură). Purificarea este efectuată prin 3210 HPLC pe fază reversă cu o coloană Vydac C18 preparativă, de 2,5 cm, utilizând 0,23%/min gradient de 7,2 până la 22,5% acetonitril, conținând 0,1 TFA și apoi se liofilizează pentru a se obține sarea TFA a compusului din titlu, ca produs solid, alb pufos (recuperat 35%, randament total 8,7%) FAB-MS; (M+H)=623,28.

Sinteza în faza solidă a compusului intermediar ciclic 13f. Ciclo-(D-Lys-NMeArg- 3215

RO 114895 Bl

Gly-Asp-Mamb); compusul cu formula (II) în care J = D-Lys, K = NMeArg, L = Gly, M = Asp, R¹=H, R²=H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris mai sus pentru ciclo-(D-\/al-NMeArg-Gly-Asp-Mamb). Metoda DCC/DMAP este utilizată pentru legarea Boc-Mamb la oxim rășină. Peptida este preparată pe scală 0,586 mmoli pentru a se obține peptida ciclică protejată (349 mg, 58,9%). Peptida (334 mg] și 334 ml de anisol, se tratează cu acid fluorhidric anhidru la 0°C, timp de 30 min. Produsul brut se precipitată cu eter, se redizolvă în acetonitril apos și se liofilizează, pentru a se genera compusul din titlu ca produs solid galben pal (168 mg, 79,1%, calculat ca sare fluorură). Purificarea este efectuată prin HPLC în fază reversă pe o coloană Vydac C18 preparativă de 2,5 cm, utilizând 0,23%/min, gradientul fiind de la 5,4 până la 14,4% acetonitril conținând 0,1% TFA și apoi se liofilizează pentru a se obține sarea TFA a compusului rubricat, ca produs solid, alb, pufos (33,6% recuperare, randament total 12,1%] FAB-MS: (M+H]=604,32.

Sinteza în fază de soluție a compusului intermediar ciclic 13 f. Schema prezentată mai jos, descrie sinteza acestui compus.

Ciclo-(D-Lys-NMeArg-Gly-Asp-Mamb); compusul cu formula (yy) în care:

Partea A - Boc-AspfOBzII. La o soluție de Boc-Asp(OBzl) (45,80 g, 140 mmoli) și HOSU (N-hidroxisuccinimida 16,10 g, 140 mmoli) în 300 ml para-dioxan la

3...10°C, se adaugă DCC (30,20 g, 140 mmoli). Soluția este agitată timp de 30 min la 5...10°C, apoi produsul solid se filtrează și se spală de 3 ori cu 50 ml de dioxan. Straturile organice combinate sunt concentrate sun presiune redusă, pentru a se obține un ulei clar care cristalizează într-un produs solid incolor (42,98 g, 73%) apoi este triturat de 3 ori cu câte 100 ml de eter etilic. RMN este în concordanță cu strutura. Punct de topire = 98...99°C.DCI-MS: (M-NH₄) = 438.

Partea B - Boc-AsoiOBzIl-Mamb. Acidul 3-aminometilbenzoic. Hcl (Mamb; 13,08 g, 70,0 mmoli) se dizolvă în 120 ml de dimetilformamidă și DIEA (24,32 ml, 140 mmoli) se adaugă schimbând pH-ul de la 4 la 7,5. Suspensia albă este agitată, timp de 30 min la temperatura camerei înainte de a se adăuga o soluție de Boc-Asp (Obzl)-OSu 9, 40 g, 70,0 mmoli) în 50 ml dimetilformamidă. Amestecul este lăsat să se agite 24 h, timp în care culoarea soluției devine aurie. Soluția este adăugată la 2000 ml de acid citric 5% și apoi se răcește la 5°C, timp de 3 h. Produsul solid este apoi colectat prin filtrare, spălat cu 200 ml de apă cu gheață și 100 ml eter etilic răcit pe gheață, apoi se usucă sub presiune redusă pentru a se obține produsul rubricat, solid incolor (29,62 g, 92%), cu punctul de topire la 149...151 °C. DCI-MS: (M+NH₄) = 474.

Partea C - HCI.H-AspfOBzIl-Mamb. Boc-Asp(OBzl)-Mamb (7,92 g, 17,4 mmoli) se dizolvă în 50 ml de 4N HCI în dioxan, se agită amestecul timp de 2 h și soluția se concentrează sub presiune redusă, pentru a se obține compusul din titlu solid, incolor (6,80 g 99%).DCI-MS: (M+NH₄) = 374.

Partea D - Boc-D-Lvs(Tfa]-NMeArqfTos]-Glv-QBzl. NMeArg (Tos)-GlyOBzl (14,40 g, 29,4 mmoli], Boc-D-Lys(Tfa) (10,0 g, 29,4 mmoli] și HBTU (11,37 g, 62,0 mmoli] se dizolvă în 40 ml de clorură de metilen. După răcire la 0°C, se adaugă DIEA (10,44 g, 62,0 mmoli] și amestecul de reacție se lasă să reacționeze timp de 20 min la 0°C și apoi 2 zile la temperatura camerei.

Amestecul de reacție este apoi diluat cu 800 ml de acetat de etil, apoi se extrage cu porțiuni de 200 ml de 0,2 N HCI (1X]_t cu o soluție saturată de bicarbonat de sodiu (IX) și o soluție saturată de NaCl de două ori, apoi se usucă pe sulfat de magneziu și se evaporă sub presiune redusă, obținând un produs solid, galben.

RO 114895 Bl

Purificarea prin cromatografie flash (silicagel, 5:1 EtOAc: acetonitril) duce la obținerea 3265 compusului rubricat, solid incolor (20,34 g, 85% ; punct topire = 78,..85°C; DCI-MS: (M+NH₄) = 831.

Partea E - Boc-D-LysfTfal-NMeArqfTosl-GIv. O soluție de Boc-D-Lys(Țfa)NMeArg(Tos)-Gly-OBzl (11,00 g, 13,5 mmoli) în 200 ml de metanol se aduce într-un flacon Parr sub agitare, purjat cu N₂ timp de 10 min și se tratează cu catalizator 10% 3270 paladiu pe cărbune (10% Pd/C 3,6 g). Flaconul cu agitare este apoi purificat prin 7 cicluri presurizare-evacuare, apoi este represurizat și lăsat sub agitare 90 min, în care timp cantitatea calculată de hidrogen, este consumată. Catalizatorul este îndepărtat prin filtrare printr-un pat de Celită și filtratul este concentrat sub presiune redusă, obținând un produs solid. Prin triturare cu 75 ml de eter etilic, se obține pro- 3275 dusul pur (9,18 g, 94%), solid incolor. DCI-MS: (M+H = 724.

Partea F-Boc-D-LysfTfal-NMeArq fTosl-GIv-QSu. Boc-D-Lys (Tfa)-NMeArg(Tos)-Gly (8,00 g, 11,0 mmoli), HOSu (1,25 g, 10,8 mmoli) și DCC (2,22 g, 10,8 mmoli) se dizolvă în 75 ml de dimetilformamidă și se agită la temperatura camerei timp de 2 zile. Produsul solid se îndepărtează prin filtrare și se spală de două ori cu câte 15 ml 3280 de dimetilformamidă. Filtratul este apoi concentrat sub presiune redusă și siropul rezultat este uscat sub presiune redusă la 40°C, până ce se obține un produs solid cafeniu (6,50 g, 72%). Punctul de topire la 66...69°C. FAB-MS: (M+H) = 821.

Partea G - Boc-D-LvsfTfa)-N-MeArq(Tos1-Glv-AspfOBzn-Mamb. O suspensie de Boc-D-Lys(Tfa)-N-MeArg(Tos)-Gly-OSu (8,85 g 10,8 mmoli) și HCI-Asp(OBzl)-Mamb 3285 (4,24 g, 10,8 mmoli), în 100 ml amestec în părți egale de dioxan și dimetilformamidă, se tratează cu DIEA (1,39 g, 10,8 mmoli), timp de peste 10 min. Amestecul rezultat este agitat 2 zile la temperatura camerei și apoi este concentrat sub presiune redusă, obținând un sirop. Acest sirop este dizolvat în 300 ml de acetat de etil și spălat cu porțiuni de 75 ml soluție 0,2 N HCI de trei ori, cu o soluție saturată 3290 de bicarbonat de sodiu de două ori, cu apă odată și o soluție saturată de clorură de sodiu odată. Stratul organic este uscat apoi pe sulfat de magneziu și concentrat sub presiune redusă la 40°C, obținând un produs solid cleios de culoarea chihlimbarului (9,13 g, 78%). Punctul de topire = 9O...93°C, FAB-MS: (M+H)=1062.

Partea H - HCI. D-Lys (Tfa)-N-MeArqfTos)-Glv-Asp(OBZL)-Mamb· Boc-D-Lys(Tfa)- 3295 N-MeArg(Tos)-Gly-Asp(OBzl)-Mamb (8,30 g, 7,8 mmoli), se dizolvă parțial în 4N HCI în 50 ml de dioxan, se agită la temperatura camerei, timp 30 min și se concentrează sub presiune redusă pentru a se obține un produs solid, galben. Prin triturare cu 60 ml EtOAc cald, se obține un produs (7,65 g, 98%) solid, galben. FAB-MS: (M+H) =

962. 3300

Partea I - Ciclo-fD-Lys (Tfa)-N-MeArg (Tosl-Gly-Asp (Obzl)-Mamb). HCI-D-Lys (Tfa)N-MeArg (Tos)-Gly-Asp (0Bzl)-Mamb (3,00 g, 3,0 mmoli), DIEA (0,77 g, 6,0 mmoli) și TBTU (0,98 g, 3,0 mmoli) se dizolvă în 100 ml dimetilformamidă.

Amestecul de reacție este menținut sub agitare la temperatura camerei timp de 22 h și pH-ul este menținut la 7...8 prin adiție de DIEA cât este necesar. Ameste- 3305 cui de reacție este concentrat sub presiune redusă și uleiul rezultat este dizolvat în 110 ml de 3,75:1 acetat de etil : 1-butanol. Soluția organică este spălată cu porțiuni de 50 ml de HCI 0,2N, de două ori, o soluție saturată de bicarbonat de sodiu, o dată cu apă și o dată cu o soluție saturată de clorură de sodiu și se usucă pe sulfat de magneziu, se concentrează obținând un ulei brun. Prin triturare cu 100 ml eter etilic, 3310 se obține un produs solid brun, care este purificat prin cromatografie flash (silicagel,

5:1 EtOAC:EtOH) obținând compusul rubricat (1,62 g, 57%), solid incolor. Punct de topire: 128...130°C.FAB-MS: (M+H) = 944.

RO 114895 Bl

Partea J-Ciclo-fD-LysfTfal-N-MeArq-GIv-Asp-Mamb. Ciclo-(D-Lys. (Tfa)-NMeArg(Tos)-Gly-Asp(OBzl)-Mamb] (0,85 g, 0,9 mmoli] se dizolvă în 10 ml de TFA și se răcește la -10°C. Se adaugă lent 10 ml de acid triflic (acid trifluormetansulfonic) la acest amestec de reacție sub agitare, menținând amestecul sub agitare la temperatura de -5°C. Se adaugă 2 ml anisol și agitarea continuă 3 h la -5°C. Temperatura amestecului se scade apoi la -78°C, se adaugă 200 ml eter etilic și se mai agită o oră. Produsul solid alb cleios se îndepărtează prin filtrare și se spală cu 50 ml de eter rece ca gheața. Produsul solid se dizolvă în 10 ml amestec în părți egale de acetonă și apă și se liofilizează, obținând compusul din titlu (0,63 g, 100%) sub formă de produs solid incolor pufos. FAB-MS: (Μ + H): 700.

Partea K - Ciclo fD-Lvs-N-MeArg-GIv-Asp-Mambl. Ciclo-(D-Lys(Tfa)-N-MeArg-GlyAsp-Mamb) (0,63 g, 0,9 mmoli) se dizolvă în 10 ml de soluție apoasă de piridină 1,0 M la temperatura de 0°C, și amestecul de reacție este menținut la încălzire lentă până la temperatura camerei, timp de peste 3 h.

Soluția este apoi liofilizată pentru a se obține astfel un produs solid de culoare galbenă. Prin purificarea realizată prin cromatografie lichidă de înaltă performanță HPLC, utilizând o coloană de cromatografie protein-peptidică Vydac C18 de 2,1 cm, utilizând gradientul 0,36%/min, format din 9 până la 18% acetonitril conținând 0,1% TFA, după care se liofilizează pentru a se obține astfel compusul din titlu, în cantitate de 0,20 g, cu un randament de 90%, sub formă de produs solid incolor, pufos, având punctul de topire la temperatura de 138...142°C.

FAB-MS: (Μ + H) = 604.

SINTEZA ÎN FAZA DE SOLUȚIE A 13 r

H-Gly-OBzJ

Boc-N-MeArjfToîFOH ————Boc-N-MeArg(Toi)-Gly-OBz! .,ȚFA HBTU.DIEA

Boc-D-Ly*<Tf«>-OH

H-N-MeArihMFGly-OBd ^r Boc-D-Ly<Tf*FN-MeAr_£ao«)-GlyOB2j

HBTU.DIEA

Hj. PdA? HOSU.DCC.

— .....— - Boc-D-Ly$(TÎ*}-N-McArg(Toi)-Gly-OSu

DMF

OH NH-Boc

Boc-Asp(OBz])-OSu DIEA. DMF

OH

Boc-Asp(OBzI)

Ah i. tfa. ch₂ cLj

2. Boc-D-Ly*fn*)N-MeArj(Toi}-Gly-OSu. DIEA. DMF

N-MeArg(Tos)Boc-D-Lys(T1a)

OX •G.ly \

Asp(OBzl)

NH ^,Gly

N-MeArg (Tos) a_s..(OBzI) D-Lys(T1a) Ah

1. 4N HCI/Dwxw

X TBTU. DIEA DMF

1. TFA. Triflic Arid

2. IM PiperidinA

3. HPbC /^G|y.

N-MeArg \._p / | ^D'^Lys Ah •CFjCOjH

RO 114895 Bl

Compusul ciclic intermediar 13 r. CicloȚD-lle-NMeArg-Gly-Asp-Mamb). 3365 Compusul cu formula (II) în care J = lle, K = NmeArg, L = Gly, M = Asp, R¹ = R^a=H.

Compusul rubricat este preparat utilizând procedeul general descris pentru ciclo-(D-VAI-NMeArg-Gly-Asp-Mamb] (compusul intermediar ciclic 4). Metoda DCC/DMAP este utilizată pentru legarea Boc-Mamb la oxim rășină. Peptida este preparată pe scală de 0,611 mmoli, obținând peptida ciclică protejată (349 mg, 69,2%). 3370 Peptida (342 mg) și 0,342 ml de anisol se tratează cu acid fluorhidric anhidru la 0°C, timp de 30 min. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvat în acetonitril apos și liofilizat pentru a genera compusul din titlu (227 mg, 90%, calculat față de sare, fluorură). Purificarea este realizată prin HPLCîn fază reversă pe o coloană preparative Vydac C18 de 2,5 cm, utilizând 0,23%/min gradient de 10,8 până la 19,8% 3375 acetonitril, conținând 0,1% TFA și apoi se liofilizează pentru a se obține sarea TFA a ț compusului rubricat, solid, alb, pufos (recuperare 22,5%, randament total 12,1%).

FAB-MS: (Μ + H): 589,34.

Compusul intermediar ciclic 17. Ciclo-(D-Met-NMeArg-Gly-Asp-Mamb); compusul cu formula (II) în care J = D-Met, K = NmeArg, L = Gly, M = Asp, R¹ = R² = H. 3380

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris pentru ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb) (compusul intermediar ciclic 4). Metoda DCC/DMAP este utilizată pentru legarea Boc-Mamb la rășină. Peptida este preparată pe o scală 0,179 mmoli pentru a se obține peptida ciclică protejată (105 mg, 69,7%). Peptida (105 mg) și 0,105 ml de anisol se tratează cu acid fluorhidric 3385 anhidru la 0°C, timp de 20 min. Materialul brut este reprecipitat cu eter, redizolvat în soluție apoasă de acetonitril și liofilizat pentru a genera compusul rubricat (72 mg,

92,3% randament, calculat ca sare, fluorură). Purificarea este efectuată prin HPLC în fază reversă pe o coloană preparativă Vydac C18 de 2.5 cm, utilizând 0,23%/min gradient de 14,4 la 23,4% acetonitril conținând 0,1% TFA și apoi se liofilizează, 3390 obținând sarea de TFA a compusului rubricat, ca produs solid alb, pufos (recuperare 13,2%, randament total 7,4%). FAB-MS: (Μ + H): 607,3.

Compusul intermediar ciclic 18. Ciclo-(NMeGly-NMeArg-Gly-Asp-Mamb); compusul cu formula (II) în care J = NMeGly, K = NMeArg, L = Gly, M = Asp, R¹ = R² = H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris mai sus 3395 pentru cicloȚD-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb). Metoda DCC/DMAP este utilizată pentru legarea Boc-Mamb la oxim rășină. Peptida este preparată pe scală 0,43 mmoli pentru a se obține peptida ciclică protejată (205 mg, 60%). Peptida (200 mg) și 200 ml de mete-crezol se tratează cu acid fluorhidric anhidru la 0°C, timp de 30 min. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvat în HOAc apos și liofilizat, pentru a genera corn- 3400 pusul 18, sub formă de produs solid galben (148 mg, 97%, calculat ca sare, acetat). Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă pe o coloană preparativă Vydac C18 de 2,5 cm, utilizând 0,23%/min gradient de 7 până la 22% acetonitril conținând 0,1% TFA și apoi se liofilizează pentru a se obține sarea TFA a compusului 18, ca produs solid alb, pufos (14,7% recuperare, randament total 7,9%);FAB-MS: (Μ + H] = 3405 547,34.

Compusul intermediar ciclic 24. CicloȚPro-NMeArg-Gly-Asp-Mamb); compusul cu formula (II) în care J = Pro, K = NMeArg, L = Gly, M = Asp, R¹ = R² = H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris mai sus pentru ciclo(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb). Metoda DCC/DMAP este utilizată pentru 3410 legarea Boc-Mamb la oxim rășină. Peptida este preparată pe o scală de 0,43 mmoli pentru a obține peptida ciclică protejată (170 mg, 48,8%). Peptida (164 mg) și 164 ml de meta-crezol se tratează cu acid fluorhidric anhidru la 0°C, timp 30 min.

RO 114895 Bl

Produsul brut este precipitat cu eter, redizolvat în HOAc apos și liofilizat pentru a genera compusul 24, ca produs solid galben pal (101 mg, 79%, calculat ca sare, acetat).

Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă pe o coloană Vydac C18 preparativă de 2,5 cm. utilizând 0,23%/min gradient de 7 până la 22% acetonitril care conține 0,1% TFA și apoi se liofilizează, obținând sarea TFA a compusului 24 ca produs solid alb, pufos (recuperare 5,8%, randament total 2.1%); FAB-MS: (Μ + H) = 573.46.

Compusul intermediar ciclic 25. Ciclo-(D-Pro-NMeArg-Gly-Asp-Mamb); compusul cu formula (II) în care J = D-Pro, K = NMeArg, L = Gly, M = Asp, A¹ = R² = H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris mai sus pentru ciclo-(D-Val-NMeAeg-Gly-Asp-Mamb). Metodă DCC/DMAP este utilizată pentru legarea Boc-Mamb la oxim rășină. Peptida este preparată pe scală de 0,43 mmoli pentru a obține peptida ciclică protejată (211 mg, 60,8%). Peptida (200 mg] și 200 ml de metacrezol, se tratează cu acid fluorhidric anhidru la 0°C timp de 30 min. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvat în HOAc apos și liofilizat pentru a genera compusul 25, ca produs solid galben pal (145 mg, 93,3%, calculat ca sare, acetat). Prin purificare realizată prin HPLC în fază reversă cu o coloană Vydac C18 preparativă de 2,5 cm, utilizând 0,23%/min gradient de 7 la 22% acetonitril conținând 0,1% TFA și prin liofilizare, se obține sarea TFA a compusului 25 ca produs solid alb, pufos (6,4% recuperat, randament total de 3,3%); FAB-MS: (Μ + H) = 573,35.

Compus intermediar ciclic 28 c. Ciclo-(b-Ala-NMeArg-Gly-Asp-Mamb); compusul cu formula (II) în care J = b-Ala, K = NMeArg, L = Gly, M = Asp, R¹ = R² = H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris mai sus pentru ciclo-(D-Val-NMeAeg-Gly-Asp-Mamb]. Metoda DCC/DMAP este utilizată pentru legarea Boc-Mamb la oxim rășină. Peptida este preparată pe scală de 0,586 mmoli, obținând peptida ciclică protejată (264 mg, 57,5%). Peptida (258 mg] și 258 ml de anisol sunt tratați cu acid fluorhidric anhidru la 0°C, timp de 30 min. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvat în acetonitril apos și liofilizat pentru a genera compusul rubricat, solid galben pal (231 mg, mai mare decât randamentul cantitativ, calculat ca sare fluorură). Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă cu o coloană preparativă Vydac C18 de 2,5 cm, utilizând 0,23%/min gradient de 5,4 la 14,4% acetonitril conținând 0,1% TFA și prin liofilizare, se obține sarea TFA a compusului din titlu ca solid alb, pufos (53,2% recuperat, randament total de 32,5%); FABMS: (Μ + H) = 547,28.

Compusul intermediar ciclic 28 f. Ciclo-(D-Tyr-NMeArg-Gly-Asp-Mamb); compusul cu formula (II) în care J = D-Tyr, K = NMeArg, L = Gly, M = Asp, R¹ = R² = H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris mai sus pentru ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Marnb) (compusul intermediar ciclic 4). Metoda DCC/DMAP este utilizată pentru legarea Boc-Mamb la oxim rășină. Peptida este preparată pe scală de 0,313 mmoli, obținând peptida ciclică protejată (342 mg, mai mult decât randamentul cantitativ). Peptida (331 mg) și 0,331 ml de anisol se tratează cu acid fluorhidric anhidru la 0°C, timp de 30 min. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvat în acetonitril apos și liofilizat pentru a genera compusul rubricat (218 mg, mai mult decât randamentul cantitativ, calculat ca sare fluorură). Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă cu o coloană Vydac C18 preparativă de 2,5 cm, utilizând 0,23%/min gradient de 9 la 18% acetonitril conținând 0,1% TFA și apoi se liofilizează, obținând sarea TFA a compusului rubricat, solid alb, pufos (11,3% recuperat, randament total de 10,8%); FAB-MS: (Μ + H) = 639,54.

RO 114895 Bl

Compusul intermediar ciclic 29. CiclofGly-Arg-Gly-Asp-Mamb); compusul cu formula (II) în care J = Gly, K = Arg, L = Gly, M = Asp, R¹ = R² = H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris mai sus 3465 pentru ciclo-(D-Val-NMeAeg-Gly-Asp-Mamb]. Peptida este preparată pe scală de 0,283 mmoli și jumătate este ciclizată pentru a obține peptida ciclică protejată (62 mg,

58%). Peptida (60 mg] și 60 ml de meta-crezol, se tratează cu acid fluorhidric anhidru la temperatura de 0°C, timp de o oră. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvat în HOAc apos și liofilizat pentru a se obține compusul rubricat ca produs 3470 solid galben pal (48 mg, mai mult decât randamentul cantitativ, calculat ca sare, acetat). Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă pe o coloană Vydac C18 preparativă de 2,5 cm, C₁₈, utilizând 0,30%/min gradient de O la 9% acetonitril conținând 0,1% din compusul rubricat, solid alb, pufos (36% recuperare, randament total de 19,9%); FAB-MS: (Μ + H) = 519,26. 3475

Compusul intermediar ciclic 30. CiclofD-Ala-Arg-Gly-Asp-Mamb); compusul cu formula (II) în care J = D-Ala, K = Arg, L = Gly, M = Asp, R¹ = R² = H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris mai sus pentru ciclo-(D-Val-NMeAeg-Gly-Asp-Mamb). Peptida este preparată pe scală de 0,189 mmoli, obținând peptida ciclică protejată (211 mg, mai mult decât randamentul 3480 cantitativ). Peptida (195 mg] și 195 ml de meta-crezol, se tratează cu acid fluorhidric anhidru la temperatura de 0°C, timp de o oră. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvat în HOAc apos și liofilizat pentru a genera compusul rubricat, solid galben pal (125 mg, 83%, calculat la sare, acetat). Purificarea este însoțită prin cromatografie HPLC realizată pe o coloană preparativă în fază reversă Vydac C18 de 2,5 cm, 3485 utilizând 0,23%/min gradient de 2 la 11% acetonitril conținând 0,1% TFA și apoi se liofilizează obținând sarea TFA a compusului rubricat, ca solid alb, pufos (12,5% recuperare, randament total de 13,8%); FAB-MS; (Μ + H] = 533,26.

Compusul intermediar ciclic 31. Ciclof Ala-Arg-Gly-Asp-Mamb); compusul cu formula (II) în care J = Ala, K = Arg, L = Gly, M = Asp, R¹ = R^a = H. 3490

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris mai sus pentru ciclo-(D-Val-NMeAeg-Gly-Asp-Mamb]. Peptida (100 mg] și 100 ml de metacrezol se tratează cu acid fluorhidric anhidru la 0°C, timp de o oră. Materialul brut

.. ~ este precipitat cu eter, redizolvat în HOAc apos și liofilizat pentru a se genera compusul rubricat, solid galben pal (75 mg, 97,4%, calculat ca sare, acetat). Purificarea 3495 este realizată prin HPLC în fază reversă pe o coloană preparativă Vydac C18de 2,5 cm, utilizând 0,23%/min gradient de 2 la 11% acetonitril conținând 0,1% TFA și apoi se liofilizează, obținând sarea TFA a compusului din titlu, solid alb, pufos (15,5% recuperare, randament total 10,5%); FAB-MS: (Μ + H) = 533,25.

Compusul intermediar ciclic 32. CiclofD-Val-Arg-Gly-Asp-Mamb); compusul cu 3500 formula (II) în care J = D-Val, K = Arg, L = Gly, M = Asp, R¹ = R² = H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris mai sus pentru ciclofD-Val-NMeAeg-Gly-Asp-Mamb). Peptida este preparată pe scală de 0,193 mmoli, obținând peptida ciclică protejată (199 mg, mai mult decât randamentul cantitativ). Peptida (193 mg] și 193 ml de meta-crezol se tratează cu acid fluorhidric 3505 anhidru la 0°C, timp de o oră. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvat în HOAc apos și liofilizat pentru a genera compusul rubricat, solid galben pal (130 mg,

86%, calculat ca sare, acetat). Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă pe o coloană preparativă Vydac C18 de 2,5 cm, utilizând 0,23%/min gradient de 2 la 13% acetonitril conținând 0,1% TFA și apoi se liofilizează obținând sarea TFA a 3510 compusului din titlu, ca produs solid alb, pufos (5% recuperare, randament total de

RO 114895 Bl

58,1%); FAB-MS: (Μ + H) = 561,22.

Compusul intermediar ciclic 33. Ciclo-(D-Leu-Arg-Gly-Asp-Mamb); compusul cu formula (II) în care: J = D-Leu, K = Arg, L = Gly, M = Asp, R¹ = R² = H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris mai sus pentru ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb). Peptida este preparată pe scală de 0,202 mmoli pentru a obține peptida ciclică protejată (152 mg, 93%). Peptida (150 mg) și 150 ml de meta-crezol, se tratează cu acid fluorhidric anhidru la 0°C pentru o oră. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvat în HOAc apos și liofilizat pentru a genera compusul rubricat ca solid galben pal (78 mg, 66%, calculat ca sare, acetat). Purificarea se efectuează prin HPLC în fază reversă pe o coloană Vydac C18 preparativă de 2,5 cm, utilizând 0,23%/min gradient de 5 la 18% acetonitril, pentru a obține sarea TFA a compusului din titlu ca produs solid alb, pufos (26% recuperare, randament total de 14,8%); FAB-MS: (Μ + H) = 575,45.

Compusul intermediar ciclic 34. Ciclo-(D-Abu-Arg-Gly-Asp-Mamb); compusul cu formula (II) în care J = D-Abu, K = Arg, M = Asp, R¹ = R² = H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris mai sus pentru ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb]. Peptida este preparată pe scală de 0,193 mmoli pentru a obține peptida ciclică protejată (210 mg, mai mare decât randamentul cantitativ). Peptida (206 mg) și 206 ml de metacrezol, se tratează cu acid fluorhidric anhidru la 0°C, timp de o oră. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvat în HOAc apos și liofilizat pentru a genera compusul din titlu ca solid galben pal (158 mg. 99%, calculat ca sare, acetat). Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă pe o coloană preparativă Vydac C18 de 2,5 cm, utilizând 0,23%/min gradient de 2 la 11% acetonitril conținând 0,1% TFA și apoi se liofilizează pentru a se obține sarea TFA a compusului din titlu, ca solid alb pufos (57% recuperat, randament total 72,2%); FAB-MS: (Μ + H) = 547,21.

Compusul ciclic intermediar 35. Ciclo-(D-Ser-Arg-Gly-Asp-Mamb); compusul cu formula (II) în care J = D-Ser, K = Arg, L = Gly, M = Asp, R¹ = R² - H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris mai sus pentru ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb]. Peptida este preparată pe scală de 0,193 mmoli, obținând peptida ciclică protejată (224 mg, mai mult decât randamentul cantitativ). Peptida (210 mg) și 210 ml de meta-crezol, se tratează cu acid fluorhidric anhidru la temperatura de 0°C, timp de o oră. Materialul brut este precipitat cu eter, pentru a fi redizolvat în HOAc apos și liofilizat, generând compusul din titlu, produs solid galben pal (145 mg, 89%, calculat ca sare, acetat).

Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă pe o coloană preparativă Vydac C18 de 2,5 cm, utilizând 0,23%/min gradient de 2 la 13% acetonitril conținând 0,1% TFA și apoi se liofilizează, obținând sarea TFA a compusului din titlu, ca solid alb pufos (22% recuperare, randament total 27%); FAB-MS: (M + H) = 549,31.

Compusul intermediar ciclic 36. CicloȚD-Phe-Arg-Gly-Asp-Mamb); compusul cu formula (II) în care J = D-Phe, K = Arg, L = Gly, M = Asp, R¹ = R² = H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris mai sus pentru ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb). Peptida este preparată pe scală de 0,266 mmoli, obținând peptida ciclică protejată (202 mg, 90%). Peptida (157 mg] și 157 ml de meta-crezol, se tratează cu acid fluorhidricanhidru la 0°C, timp de o oră. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvat în HOAc apos și liofilizat pentru a genera compusul rubricat, solid galben pal (125 mg, mai mult decât randamentul cantitativ, calculat ca sare, acetat). Purificarea se efectuează prin HPLC în fază

RO 114895 Bl reversă pe o coloană Vydac C18 preparativă de 2,5 cm, utilizând 0,23%/min gradient de 7 la 23% acetonitril conținând 0,1% TFA și apoi se liofilizează, obținând sarea TFA a compusului din titlu, ca solid alb pufos (35% recuperare, randament total de 29,3%]; FAB-MS: (Μ + H) = 609,25.

Compusul intermediar ciclic 37. Ciclo-(Phe-Arg-Gly-Asp-Mamb); compusul cu for- 3565 mula (II) în care J = Phe, K = Arg, L = Gly, M = Asp, R¹ = R² = H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris mai sus pentru cicloȚD-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb). Peptida este preparată pe scală de 0,335 mmoli obținând peptida ciclică protejată (306 mg, mai mare decât randamentul cantitativ). Peptida (275 mg] și 275 ml de meta-crezol, se tratează cu acid fluorhidric 3570 anhidru la 0°C, timp de o oră. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvat în HOAc apos și liofilizat pentru a genera compusul rubricat ca solid galben pal (214 mg,

98%, calculat ca sare, acetat). Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă pe o coloană Vydac C18 preparativă de 2,5 cm, utilizând 0,23%/min gradient de 9 la 23% acetonitril conținând 0,1% TFA și apoi se liofilizează obținând sarea TFA a 3575 compusului din titlu, ca produs solid alb, pufos (32% recuperare, randament total de 31,5%); FAB-MS: (Μ + H) = 609,26.

Compusul intermediar ciclic 40. CicloȚD-Val-NMeAmf-Gly-Asp-Mamb); compusul cu formula (II) în care J = D-Val, K = NMeAmf, L = Gly, M = Asp, R¹ = R² = H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris pentru 3580 ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb] (compusul intermediar ciclic 4). Metoda DCC/DMAP este utilizată pentru legarea Boc-Mamb la oxim rășină. Peptida este preparată pe scală la 0,586 mmoli, obținând astfel peptida ciclică protejată (189 mg, 39,9%). Peptida (189 mg) și 0,189 ml de anisol se tratează cu acid fluorhidric anhidru la temperatura de 0°C timp de 30 min. Materialul brut este precipitat cu 3585 eter, redizolvat în acetonitril apos și liofilizat, pentru a genera compusul rubricat (212 mg, mai mult decât randamentul cantitativ, calculat sub formă de sare, fluorură). Purificarea este efectuată prin cromatografie HPLC în fază reversă, utilizând o coloană Vydac C18 preparativă de 2,5 cm, și utilizând 0,23%/min, gradientul de 10,8 până la 22,5% acetonitril conținând 0,1% TFA și apoi produsul se liofilizează, obținându-se 3590 astfel sarea TFA a compusului din titlu, care este un produs solid de culoare albă, pufos (8,1% recuperare, randamentul total fiind de 4,1%);

FAB-MS: (M + H) = 595,23.

Compusul intermediar ciclic 48 a. Compusul din titlu poate fi sintetizat utilizând procedeele descrise de Mosher et al., Tett. Lett. 29: 3183...3186 și conform sche- 3595 melor prezentate în continuare.

Același procedeu este în general utilizat ca metodă folositoare pentru transformarea aminei primare într-o funcționalitate de guanidină.

O \

NH

D-Val ‘Asp \

Me—N

NH,C(.NH)SO]H j

NH

D-Val

3605

RO 114895 Bl

Compușii intermediari ciclici 42...45. Sinteza compușilor intermediari ciclici

42...45 este prezentată schematic mai jos:

HNH® ^SiCHJjNH · H S 0₃θ

Compușii intermediari ciclici 46 si 47. Compușii intermediari ciclici 46 și 47 sunt preparați conform procedeelor standard, de exemplu așa cum sunt descrise în Garigipati, Tett. Lett. (1990) 31: 1969...1972 și brevet CA 2008311, așa cum este prezentat schematic mai jos. Gruparea acidului aspartic poate fi protejată (de exemplu cu gruparea de protecție fenacil), pentru a se evita reacțiile secundare.

(CHa),

n = 0, 1

1) Me AI(CI)NR'R Toluen, 80’C

R' = R = H

2) KzO

OR

1, HaS/Pyr/EtjN

2) Mel/aeetonă

3) Amm. acetat

RO 114895 Bl

Compusul intermediar ciclic 54. Ciclo-(D-Val-NMeArg-b-Ala-Asp-Mamb); J = D- 3655 Val, K = NMeArg, L = b-Ala, M = Asp, R¹ = R² = H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris mai sus pentru ciclcHD-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb). Metoda DCC/DMAP este utilizată pentru legarea Boc-Mamb la oxim rășină. Peptida este preparată dintr-o cantitate de 0,586 mmoli pentru a se obține peptida ciclică protejată (227 mg, 46,9%). Peptida (219 3660 mg) și 219 ml de anisol, se tratează cu acid fluorhidric anhidru la 0°C, timp de 30 min. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvatîn acetonitril apos și liofilizat, pentru a se obține compusul 54, sub formă de produs galben pal (150 mg, 93,2%, calculat sub formă de sare, fluorură).

Purificarea este efectuată prin cromatografie HPLCÎn fază reversă, utilizând 3665 o coloană Vydac C18 preparativă de 2,5 cm, utilizând 0,23%/min gradient de 7,2 până la 16,2% acetonitril conținând 0,1% TFA și apoi se liofilizează pentru a se obține sarea TFA a compusului 54, sub formă de produs solid alb, pufos (43,6% recuperare, randament total de 16,5%);

FAB-MS: (Μ + H) = 589,32. 3670

Compușii ciclici intermediari 55...58. Sinteza compușilor ciclici intermediari

55...58 este prezentată schematic mai jos:

1) 25* TFA in DCM

2) 10* OIEA in DCM

BOC-Asp-Mamb-oxima -3) Br(Chfe)_nCOOH n = 1,2 DCC

Q 3680

X

Br(CH₂)rv Mamb-oxima

3685

TOS—NH

3690

3695

3700

RO 114895 Bl

Compusul intermediar ciclic 58 c. CicloȚD-Val-NMeArg-L-Ala-Asp-Mamb); compusul cu formula (II) în care J = D-Val, K = NmeArg, L = -Ala, M = Asp, R¹ = R² = H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul descris pentru ciclo-(D-ValNMeArg-Gly-Asp-Mamb) (compusul ciclic intermediar 4). Metoda DCC/DMAP este utilizată pentru legarea Boc-Mamb la oximrășină. Peptida este preparată pe scală de 0,611 mmoli, obținând peptida ciclică protejată (375 mg, 74,6%). Peptida (360 mg) și 0,360 ml de anisol se tratează cu acid fluorhidric anhidru la 0°C, timp de 30 min. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvat în acetonitril apos și liofilizat pentru a genera compusul rubricat (220 mg, 83%, calculat ca sare, fluorură).

Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă pe o coloană Vydac C18 preparativă de 2,5 cm, utilizând 0,23%/min gradient de 9 la 18% acetonitril conținând 0,1% TFA și apoi se liofilizează pentru a se obține sarea TFA a compusului din titlu, ca produs solid alb, pufos (19,9% recuperare, randament total 10,6%); FABMS: (Μ + H) = 589,31.

Compușii intermediari ciclici 63 si 63a. Ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-a-MeAspMamb); compusul cu formula (II) în care J = D-Val, K este NMeArg, L este Gly, M este a-MeAsp, R¹ = R² = H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris pentru ciclo-fD-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb). Metoda DCC/DMAP este utilizată pentru legarea Boc-Mamb la oximrășină. Peptida este preparată pe scală de 0,794 mmoli pentru a se obține peptida ciclică protejată (237 mg, 36,1%). Peptida (237 mg) și 0,237 ml de anisol se tratează cu acid fluorhidric anhidru la 0°C, timp de 30 min. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvat în acetonitril apos și liofilizat pentru a genera compusul rubricat (165 mg, 94,3%, calculat ca sare, fluorură).

Purificarea este realizată prin cromatografie HPLC în fază reversă pe o coloană Vydac C18 preparativă de 2,5 cm, utilizând 0,23%/min gradient de la 9 la 18% acetonitril conținând 0,1% TFA și apoi se liofilizează pentru a se obține sarea TFA a compusului din titlu, ca produs solid alb, pufos; izomerul#1 (8,36% recuperare, randament total 2,5%); FAB-MS: (Μ + H) = 589,27.

Compușii intermediari ciclici 64 si 64a. Ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-B-MeAspMamb); compusul cu formula (II) în care J = D-Val, K = NMeArg, L = Gly, M =BMeAsp, R¹ = R² = H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris pentru ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb) (compusul intermediar ciclic 4). Metoda DCC/

RO 114895 Bl

DMAP este utilizată pentru legarea Boc-Mamb la oxim rășină. Peptida este preparată pe scală de 0,611 mmoli, pentru a se obține peptida ciclică protejată (201 mg, 40,0%). Peptida (200 mg] și 0,200 ml de anisol se tratează cu acid fluorhidric anhidru la 0°C, timp de 30 min. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvat în acetonitril apos și liofilizat pentru a genera compusul din titlu (162 mg, mai mult decât 3755 randamentul cantitativ, calculat ca sare, fluorură). Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă pe o coloană Vydac C_1O preparativă de 2,5 cm, utilizând 0,23%/min gradient de 9 la 18% acetonitril, conținând 0,1% TFA și se liofilizează pentru a se obține sarea TFA a compusului din titlu, ca produs solid alb, pufos; izomerul# 1 (12,7% recuperare, randament total 4,8%); FAB-MS: (Μ + H) = 589,43; izomer #2 3760 (13,9% recuperare, randament total 5,3%); FAB-MS; (M+H) = 589,45.

Compusul intermediar ciclic 64 b. Ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-NMeAsp-Mamb); compusul cu formula (II) în care J = D-Val, K = NMeArg, L = Gly, M =NMeAsp, R¹ =

R² = H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul descris pentru ciclo-(D-Val- 3765 NMeArg-Gly-Asp-Mamb) (compusul intermediar ciclic 4). Metoda DCC/DMAP este utilizată pentru legarea Boc-Mamb la oxim rășină. Peptida este preparată pe scală de 0,611 mmoli, când se obține peptida ciclică protejată (232 mg, 46,1%). Peptida (225 mg] și 0,225 ml de anisol se tratează cu acid fluorhidric anhidru la CTC timp de 30 min. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvat în acetonitril apos și liofilizat, 3770 când generează compusul din titlu (160 mg, 96,4%, calculat ca sare, fluorură). Purificarea este realizată prin HPLC pe coloană Vydac C18 preparativă de 2,5 cm, utilizând 0,23%/min gradient de la 9 la 18% acetonitril, conținând 0,1% TFA și apoi se liofilizează pentru a se obține sarea TFA a compusului din titlu, ca produs solid alb, pufos (28,2% recuperare, randamentul total fiind de 10,9%); FAB-MS: (Μ + H) = 3775 589,42.

Compusul intermediar ciclic 64c. Ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-D-Asp-Mamb]; compusul cu formula (II) în care J = D-Val, K = NMeArg, L = Gly, M =D-Asp, R¹ = R² = H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris pentru ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb). Metoda DCC/DMAP este utilizată pentru legarea 3780 Boc-Mamb la oxim rășină. Peptida este preparată pe scală de 0,611 mmoli, obținând peptida ciclică protejată (257 mg, 51,9%). Peptida (250 mg) și 0,250 ml de anisol se tratează cu acid fluorhidric anhidru la 0°C timp de 30 min. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvat în acetonitril apos și liofilizat, pentru a genera compusul din titlu (192 mg, mai mult decât randamentul cantitativ, calculat ca sare, fluorură). 3785

Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă pe o coloană Vydac C18 preparativă de 2,5 cm, utilizând 0,23%/min gradient de 9 la 18% acetonitril, conținând 0,1% TFA și apoi se liofilizează pentru a se obține sarea TFA a compusului din titlu, ca produs solid alb, pufos (44,4% recuperare, randament total 20,7%); FABMS: (M+H) = 575,42. 3790

Compusul intermediar ciclic 89 e. Ciclo-(D-Abu-di-NMeOrn-Gly-Asp-Mamb); compusul cu formula (II) în care J = D-Abu, K =di-NMeOrn, L = Gly, M =Asp, R¹ = R² = H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris pentru ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb) (Compusul intermediar ciclic 4). Metoda DCC/DMAP este utilizată pentru legarea Boc-Mamb la oxim rășină. Peptida este pre- 3795 parată la scală de 0,498 mmoli, pentru a se obține peptida ciclică protejată (150 mg, 39,3%). Peptida (150 mg) și 0,150 ml de anisol se tratează cu acid fluorhidric anhidru la O°C timp de 30 min. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvat în acetonitril apos și liofilizat, pentru a genera compusul din titlu (93 mg, 86%, calculat

RO 114895 Bl ca sare, fluorură).

Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă pe o coloană Vydac C18 preparativă de 2,5 cm, utilizând 0,45%/min gradient de 3,6 la 18% acetonitril, conținând 0,1% TFA și apoi se liofilizează pentru a se obține sarea TFA a compusului din titlu, ca produs solid alb, pufos (49,3% recuperare, randament total 14,2%); FABMS: (M+H) = 533,34.

Compusul intermediar ciclic 89 f. Ciclo-(D-Abu-NMeArg-Gly-D-Asp-Mamb); compusul cu formula (II) în care J = D-Abu, K = NMeArg, L = Gly, M =D-Asp, R¹ = R² = H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris pentru ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb) (Compusul intermediar ciclic 4). Metoda DCC/DMAP este utilizată pentru legarea Boc-Mamb la oxim rășină. TBTU este utilizat ca agent de cuplare. Peptida este preparată pe scală la 0,596 mmoli, pentru a se obține peptida ciclică protejată (273 mg, 57,6%). Peptida (263 mg) și 0,263 ml de anisol se tratează cu acid fluorhidric anhidru la 0°C, timp de 20 min. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvat în acetonitril apos și liofilizat, pentru a genera compusul din titlu (218 mg, mai mult decât randamentul cantitativ, calculat ca sare, fluorură). Purificarea este realizată prin HPLCîn fază reversă, cu o coloană Vydac C18 de 2,5 cm, preparativă, utilizând 0,23%/min gradient de 10,8 la 19,8% acetonitril conținând 0,1% TFA și apoi se liofilizează pentru a se obține sarea TFA a compusului din titlu, sub formă de produs solid alb, pufos (40,4% recuperare, randament general 21,9%); FAB-MS: (M+H) = 561,37.

Compusul intermediar ciclic 89 q. Ciclo-(D-Abu-S-NMeArg-Gly-Asp-Mamb]; compusul cu formula (II) în care J = D-Abu, K = D-NMeArg, L = Gly, M = Asp, R¹ = R² = H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris pentru ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb) (compusul intermediar ciclic 4). Metoda DCC/DMAP este utilizată pentru legarea Boc-Mamb la oxim rășină. TBTU este utilizat ca reactiv de cuplare. Peptida este preparată la scală de 0,596 mmoli pentru a se obține peptida ciclică protejată (241 mg, 50,8%). Peptida (235 mg) și 0,235 ml de anisol se tratează cu acid fluorhidric anhidru la 0°C, timp de 20 min. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvat în acetonitril apos și prin liofilizare se generează compusul din titlu (168 mg, 98,3%, calculat ca sare, fluorură). Purificarea este realizată prin HPLCîn fază reversă cu o coloană Vydac C18 preparativă de 2,5 cm, utilizând 0,23%/min gradient de 12,6 la 21,6% acetonitril conținând 0,1% TFA și apoi se liofilizează pentru a se obține sarea TFA a compusului din titlu, solid alb, pufos (2,3% recuperare, randament general 0,99%); FAB-MS: (M+H) = 561,36.

Compusul intermediar ciclic 89 h. Ciclo-(D-Ala-p-guanidinil-Phe-Gly-Asp-Mamb); compusul cu formula (II) în care J = D-Ala, K = p-guanidinil-Phe, L= Gly, M = Asp, R¹ = R² = H.

OMAP, EtOH

NHrC( = NH)SO»H

RO 114895 Bl

Se dizolvă 25 mg (38,3 mmoli) de ciclo (D-Ala-para-amino-Phe-Gly-Asp-Mamb) (sarea TFA), 14,3 mg (114,9 umoli) acid formamidinsulfonic și 18,7 mg (153,2 3850 umoli) de 4-dimetil-aminopiridină în 5 ml de etanol într-un flacon cu.fund rotund de 10 ml. Prin refluxarea amestecului timp de 3 h și adăugare de 14,3 mg de acid formamidinsulfonic adițional și de 18,7 mg de 4-dimetil-aminopiridină și refluxare în timp adițional de 3 h, reacția este 875% completă, prin HPLC în fază reversă. Etanolul este evaporat sub presiune redusă și reziduul este purificat pe o coloană 3855 Vydac C18 preparativă de 2,5 cm, utilizând 0,45%/min gradient de O la 18% acetonitril conținând 0,1% TFA.

Prin liofilizare se obține sarea TFA a compusului din titlu, ca produs solid alb (28% recuperare, randament total 26,4%); FAB-MS: (M+H) = 581,30.

Compusul intermediar ciclic 89 i. Ciclo-(D-Abu-(DiNMe,guanidinil-Orn)-Gly-Asp- 3860 Mamb); compusul cu formula (II) în care J = D-Abu, K = di NMe, guanidinil-Orn, L=

Gly, D = Asp, R¹ = R² = H.

Dizolvate în 2,5 ml de etanol, 10,53 mg (16,3 mmoli) de ciclo (D-AbudiNMeOrn-Gly-Asp-Mamb) (sarea TFA), apoi 6,08 mg (48, 99 umoli) acid formamidinsulfonic și 8,00 mg (65,57 umoli) de 4-dimetil-aminopiridină se aduc în balon cu fund rotund de 10 ml. Amestecul este refluxat timp de 2 h și apoi este adus 3875 sub agitare la temperatura camerei până a doua zi.

La amestecul refluxat 1 h, se adaugă o cantitate adițională de 6,08 mg de acid formamidinsulfonic și 8,00 mg de 4-dimetilaminopiridină și apoi se refluxează un timp adițional de 2 h. Prin evaporarea etanolului sub presiune redusă și purificarea rezidului pe o coloană Vydac C18 preparativă de 2,5 cm, utilizând 0,45%/min din gradientul 3880

3,6 până la 18% de acetonitril care conține 0,1% TFA și prin liofilizare, se obține sarea TFA a compusului din titlu, sub formă de produs solid de culoare albă (57,2% recuperare, randament total de 53,5%). FAB-MS: (M+H) = 575,34.

Compusul intermediar ciclic 89 j. Ciclo-(D-Abu-Di-NMeLys-Gly-Asp-Mamb); compusul cu formula (II) în care J = D-Abu, K = NMeLys, L = Gly, M = Asp, R¹ = H, R² = 3885 H.

Derivații acidului Di-N-metil amino pot fi preparați utilizând metodele care au fost descrise mai sus (Olsen, J.Org.Chem. (1970) 35: 1912) sau alternativ, prin utilizarea NaH/CH₃l. Aminoacidul mono-NMe-Lysină este obținut ca un produs secundar în timpul sintezei derivatului di-NMe-Lysină corespunzător. Compușii din titlu sunt 3890 preparați utilizând metode convenționale privind chimia peptidelor, în fază de soluție, care au fost descrise mai sus.

CicloȚD-Abu-diNMeLys-Gly-Asp-Mamb) se obține cu randamentul total de 0,31%. FAB-MS: (M+H) = 547.3.

Ciclo-(D-Abu-NMeLys-Gly-Asp-Mamb) se obține cu randamentul total de 0,25%. 3895 FAB-MS: (M+H): = 533,3.

Compusul intermediar ciclic 90; Acidul ciclo - (D - Val - NMeArg-Gly-Asp-2RO 114895 Bl aminometilfenilacetic. Compusul din titlu este preparat prin modificarea metodei chimice generale în fază de soluție. Această cale, utilizează esterul succinimidei aminoacidului cuplat la jumătatea aromatică de ciclizare și la dinitrobenzofenonoxima, așa cum este prezentat schematic în continuare (n = 1 ].

M-M«{To*)Arg /

O-V«l 'A«p(OcH«x) \ 1. HF. PhOM*

CFjCOjH· _Gly

N-M^Arg^*” ''^Axp / \ »- D-V*l NH

2. TFA, HPLC

Acidul Boc-Asp fOcHexT-2-aminometilfenilacetic. La suspensia de 4,0 g (20 mmoli] de acid 2-aminometilfenilacetic.HCI în 20 ml de apă, se adaugă 5,0 g (60 mmoli) de bicarbonat de sodiu, apoi o soluție de 7,5 g (18 mmoli) de Boc-Asp (OxHex)OSu în 20 ml de tetrahidrofuran. Amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei timp de 3 h, apoi este filtrat, diluat cu apă, acidulat cu acid clorhidric 1N și extras cu acetat de etil. Extractele sunt apoi spălate cu apă, cu o soluție salină,-după care sunt uscate pe sulfat de magneziu anhidru și evaporat la sicitate, sub presiune redusă. Acest material este triturat cu eter pentru a se obține compusul din titlu (7,0 g, 83%) ca o pulbere albă. ¹H NMR (D6-DMS0): 12,40 (br s, 1H], 8,30 (br t, 1H), 7,20 (m, 5H), 4,65 (m, 1H), 4,35 (q, 1H), 4,25 (m, 2H), 3,65 (s, 2H), 2,70 (dd, 1H), 2,55 (dd, 1H), 1, 70 (m, 4H). 1,40 (s, 9H), 1,35 (m, 6H).

4,4^,-Oinrtrobenzofenonoximă. Compusul din titlu este preparat prin modificarea procedeelor prezentate mai sus în literatură (Chapman and Fidler (1936), J.Chem.Soc.448, Kulin and Leffek (1973) Cari. J.Chem. 51: 687). O soluție de 20 g (200 mmoli) de anhidridă cromică în 125 ml de apă se adaugă prin picurare timp de peste 4 h, la o suspensie de 25 g (97 mmoli] de bis (4-nitro fenil] metan în 300 ml de acid acetic, se încălzește la temperatura de reflux. Amestecul de reacție este încălzit la temperatura de reflux timp de o oră, apoi este răcit la temperatura camerei și turnat în apă. Produsul solid este colectat prin filtrare, spălat cu apă, cu o soluție 5% de bicarbonat de sodiu, apoi cu apă și uscat la aer, pentru a se obține un amestec în părți egale de bis (A-nitrofeniOmetan/A.^-dinitrobenzofenonă, analizat prin ¹H RMN. Acest material este oxidat cu o a doua porțiune de anhidridă cromică (20 g, 200 mmoli), urmând procedeul identic de mai sus, pentru a se obține produsul brut. Prin

RO 114895 Bl triturare cu 200 ml de benzen, încălzit la reflux timp de 16 h, se obține 4,4'-dinitrobenzofenona pulbere galbenă (20,8 g, 79%).

O soluție de clorhidrat de hidroxilamină (10,2 g, 147 mmoli) se adaugă la o suspensie de 4,4'-dinitrobenzofenonă (19 g, 70 mmoli) în 100 ml de etanol. 3950 Amestecul de reacție este încălzit la reflux timp de 2 h, răcit la temperatura camerei și produsul solid este colectat prin filtrare. Prin recristalizare din etanol, se obține compusul din titlu (14,0 g, 70%) ca produs cristalin galben pal, cu punctul de topire la 194°C; ¹H RMN (D6-DMS0): 12,25 (s, 1H), 8,35 (d, 2H), 8,20 (d, 2H), 7,60 (d,

4H). 3955

4,4'-Dinitrobenzofenonoxima Boc-Aspf0cHex]-2-aminometil-fenilacetat. La o soluție răcită pe gheață formată din 3,5 g (7,6 mmoli] de acid Boc-Asp(0cHex)-2aminometilfenilacetic și 2,2 g (7,5 mmoli) de 4,4'-dinitrobenzofenona oxima în 50 ml :· acetat de etil și 5 ml de dimetilformamidă, se adaugă DCC (1,6 g, 7,8 mmoli).

Amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei timp de 8 h, filtrat, diluat 3960 cu acetat de etil, spălat cu o soluție saturată de bicarbonat de sodiu, cu apă, cu o soluție salină, apoi este uscat pe sulfat de magneziu anhidru și evaporat la sicitate sub presiune redusă. Acest material este purificat prin cromatografie pe coloană de silicagel (EM 5cience, 230...400 ochiuri) utilizând un amestec de 10 părți diclormetan și 1 parte acetat de etil, pentru a se obține compusul rubricat (4,3 g, 78%), cristale 3965 galben pal.

¹H RMN (D6-DM50) 8,30 (dd, 5H], 7,80 (d, 2H). 7,65 (d, 2H), 7,15 (m, 5H),

4,65 (m. 1H), 4,35 (q, 1H). 4,15 (m, 2H), 3,90 (s, 2H), 2,70 (dd,1H), 2,50 (dd,

1H), 4,15 (m, 2H), 3,90 (s, 2H], 2,70 (dd, 1H], 2,50 (dd, 1H], 1,70 (m, 4H), 1,40 (s, 9H), 1,35 (m, 6H). 3970

4,4^,-Dinitrobenzofenonoxima Boc-D-Val-NMeArq(Tos)-Glv-Asp(QcHex)-2aminometilfenilacetat. La o soluție de 4,4'-dinitrobenzofenonă oxima Boc-Asp (OcHex)2-aminometilfenilacetat (1,5 g, 2 mmoli] în 4 ml de diclormetan, se adaugă 2 ml de acid trifluoracetic. Amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei timp de o oră, diluat cu diclormetan și evaporat la sicitate sub presiune redusă. Reziduul uleios 3975 este concentrat sub vacuum înalt pentru a îndepărta urmele de exces de acid trifluoracetic.

La o soluție de sare brută TFA și Boc-D-Val-NMeArg(Tos]-Gly (1,2 g, 2 mmoli) în 5 ml de dimetilformamidă se adaugă TBTU (640 mg, 2 mmoli) și DIEA (780 mg, mmoli). Amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei timp de 16 h, 3980 concentrat la vacuum ridicat, diluat cu acetat de etil, spălat cu acid citric 5%, apă, soluție salină, uscat pe sulfat de magneziu și evaporat la sicitate sub presiune redusă.

Acest material este triturat cu eter pentru a se obține compusul rubricat (2,3 g,

95%), ca pulbere galbenă. Acest material este utilizat fără altă purificare.

Acidul ciclo- (D-Val-NMeArg ÎTos]-Gly-Aspf0cHex]-2-amino metilfenilacetic. La o 3985 soluție de 4,4^,-dinitrobenzofenonoximă Boc-D-Val-NMeArg (Tos]-Gly-Asp(0cHex)-2aminometilfenilacetat (1,2 g, 1 mmoli) în 4 ml de diclormetan, se adaugă 2 ml de acid trifluoracetic. Amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei timp de 3 h, diluat cu diclormetan și evaporat la sicitate sub presiune redusă. Reziduul uleios este concentrat la vacuum înalt pentru îndepărtarea urmelor de acid trifluoracetic în exces. 3990

La o soluție de sare brută TFA în 100 ml de dimetilformamidă, se adaugă acid acetic (0,50 ml, 8,7 mmoli] și DIEA (1,52 ml, 8,7 mmoli). Amestecul de reacție este agitat la 60°C timp de 3 zile, concentrat sub vacuum înalt, diluat cu acetat de etil și soluția este lăsată să cristalizeze până a doua zi. Prin filtrare, se obține compusul din titlu (563 mg, 68%) ca pulbere galbenă. ¹H RMN (D6-DMS0): 8,70 (d, 1H], 8,40 (brs, 3995

RO 114895 Bl

1H). 8,30 (br s, 1H). 8,05 (t, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,25 (d, 2H), 7,20 (m, 4H), 7,10 (br d, 1H) 6,80 (br s, 1H] 6,60 (br s, 1H), 5,10 (dd, 1H), 4,65 (m, 1H), 4,55 (m,

1H), 4,40 (m, 2H), 3,85 (m, 2H), 3,65 (d, 1H], 3,45 (m, 2H), 3,05 (m, 2H). 2,80 (s, 3H). 2,80 (m, 1H), 2,60 (dd, 1H). 2,30 (s, 3H). 1,70 (m, 6H), 1,30 (m, 9H),

0,95 (d, 3H), 0,80 (d, 3H). DCI(NH3)-MS: (M+H) = 825.

Acidul ciclcHD-Val-NMeArqGlv-Asp-2-aminometilfenilacetic). Un amestec de 352 mg (0,43 mmoli) de acid ciclo-(D-Val-NMe Arg (Tos)-Gly-Asp(0cHex)-2-aminometilfenilacetic] și 352 pl anisol se tratează la 0°C cu 5 ml de acid fluorhidric timp de 20 min. Excesul de acid fluorhidric este îndepărtat sub presiune redusă, iar reziduul este triturat cu eter, dizolvat în acetonitril 50%/apă și liofilizat pentru a se obține peptida ciclică brută sare de acid fluorhidric, sub formă de pulbere albicioasă. Prin purificare realizată prin HPLC în fază reversă pe coloană Vydac C18 preparativă de 2,5 cm utilizând 0,8%/min gradient de 10 la 38% acetonitril conținând 0,1% acid trifluoracetic, se obține sarea TFA a compusului din titlu (225 mg, 75%), produs solid alb, pufos.

¹H RMN (06-DMS0): 8,70 (d, 1H), 8,35 (d, 1H), 8,20 (t, 1H), 8,00 (t, 1H), 7,45 (t, 1H), 7,20 (m. 3H], 7,10 (m, 1H), 7,00 (br s, 4H], 5,10 (dd, 1H], 4,50 (dt, 1H), 4,40 (m, 2H), 3,85 (dt, 2H), 3,65 (d,1H), 3,50 (dd, 1H), 3,45 (d, 1H), 3,10 (m, 2H), 2,90 (s, 3H], 2,75 (dd, 1H), 2,55 (dd, 1H), 2,00 (m, 1H], 1,85 (m, 1H),

1,65 (m, 1H), 1,30 (m, 2H), 0,95 (d, 3H). 0,85 (d, 3H). FAB-MS: (M+H) = 589.

Compusul intermediar ciclic 91. Acidul ciclo-ÎD-Val-NMeArg-Gly-Asp-2-aminometilbenzoic). Compusul din titlu este preparat prin procedeul general în fază de soluție descris mai sus pentru acidul ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-2-aminometilfenilacetic) și așa cum se prezintă schematic pentru compusul intermediar ciclic de mai sus, schema 90 (n=0).

Peptida ciclică (192 mg, 0,24 mmoli) este deprotejată cu un exces de acid fluorhidric în prezență de anisol ca purificator. Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă pe coloană preparativă Vydac C18 de 2,5 cm, utilizând 0,8%/min gradient de 10 la 38% acetonitril conținând 0,1% acid trifluoracetic, pentru a se obține sarea TFA a compusului rubricat (20 mg, 12%) ca produs solid alb, pufos.

¹H RMN (D6-DMS0), 8,75 (d, 1H], 8,50 (d, 1H), 7,65 (t, 1H), 7,60 (t, 1H],

7,50 (m. 2H), 7,40 (m, 3H). 7,00 (br s, 4H], 5,05 (dd, 1H), 4,50 (t, 1H), 4,30 (m. 3H), 4,10 (dd, 1H), 3,70 (m, 2H), 3,15 (q, 2H], 3,05 (s, 3H], 2,80 (dd, 1H), 2,55 (dd, 1H), 2,1O(m, 1H), 1,95 (m, 1H), 1,60 (m, 1H). 1,40(m, 2H), 1,05 (d, 3H), 0,95 (d, 3H). FAB-MS: (M+H)=575.

Compusul intermediar ciclic 92. Acidul Ciclo-fD-Val-NMeArq-Gly-Asp-3-aminofenilacetic). Compusul din titlu este preparat prin procedeul general în fază de soluție descris mai sus pentru ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb) și este prezentat schematic în continuare. Peptida ciclică (360 mg, 0,44 mmoli) este deprotejată cu exces de acid fluorhidric în prezență de anisol ca purificator. Purificarea este efectuată prin HPLCîn fază reversă pe o coloană preparativă LiChrospher RP-18 de 5 cm, utilizând 2,3%/min gradient de 22 la 90% acetonitril conținând 0,1% acid trifluoracetic pentru a se obține sarea TFA a compusului din titlu (150 mg, 50%) ca produs solid alb, pufos.

¹H RMN (D6-DMS0): 12,40 (br s, 1H), 7,50 (m, 1H), 7,20 (t, 1H) 7,00 (br s, 4H);

6,90 (m, 2H), 5,15 (dd, 1H), 4,65 (q, 1H), 4,55 (t, 1H), 3,65 (m, 2H), 3,60 (dd,

1H), 3,10 (m. 2H), 2,85 (s, 3H), 2,85 (D, 1H), 2,70 (dd. 2H), 2,00 (m, 2H), 1,75 (m, 1H), 1,35 (m, 2H), 0,90 ((d, 3H), 0,85 (d, 3H); FAB-MS: (M+H) = 575.

Compușii intermediari ciclici 87, 88. Acidul ciclo - (D-Val-NMeArg-Gly-Asp-4RO 114895 Bl aminometilbenzoic), compusul cu formula (III) în care J = D-Val, K = NmeArg, L = Gly, 4045 M = Asp, R¹ = H, R² = H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris mai sus pentru ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb). Metoda DCC/DMAP este utilizată pentru legarea acidului Boc-4-amino metil benzoic la oximrășină. Peptida este preparată pe scală 0,43 mmoli pentru a se obține peptida ciclică protejată (212 mg, 60,8%). 4050 Peptida (200 mg) și 200 ml de meta-crezol se tratează cu acid fluorhidric anhidru la 0°C timp de 30 min. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvat în HOAc apos, și liofilizat pentru a genera peptida brută, produs solid galben pal (152 mg, 97%, calculat ca sare acetat). Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă pe coloană preparativă Vydac C18 de 2,5 cm, utilizând 0,23%/min, gradient de 7 la 4055 22% acetonitril conținând 0,1% TFA. 2 vârfuri au fost izolate pentru a se obține izomerul # 2 (88) (13,4% recuperare, randament total 7,3%); FAB-MS: (M+H) = 575,41 (izomerul # 1.87; 575,44 (izomerul # 2; 88).

Compușii intermediari substituiți R¹ sau R². Compusul ciclic intermediar care încorporează substituenți la R¹ sau R² sunt sintetizați din jumătățile de ciclizare 4060 substituite corespunzătoare. Următoarele scheme, discuții și exemple se referă la prepararea acestei clase de jumătăți de ciclizare și la compușii intermediari ciclici corespunzători.

Acidul E-butiloxicarbonil-l\l-metil-3-aminometilbenzoic(Boc-NMeMambl· Compusul rubricat poate fi preparat conform procedeelor cunoscute de exemplu, așa cum s-a 4065 descris în Olsen, J.Org.Chem. (1970), 35:1912 și așa cum, se prezintă schematic în continuare:

4070

4075

Sinteza analogilor acidului aminometilbenzoic (schema de mai jos)

Jumătățile ciclizate pentru formula de mai jos pot fi preparate utilizând procedee sintetice standard, de exemplu, așa cum este arătat în schemele de reacție indicate în continuare.

4085

Pentru R = CH₃, CH₂CH₃, CH₂CH₂CH₃, CH₂CH₂CH₂CH₃, CH(CH₃)₂, CH(CH₃)₃.

CH(CH₃)CH₂CH₃, benzii, ciclopentil, ciclohexil, vezi schema 1.

Pentru R = CH₃, CH₂CH₂CH₂CH₃, fenil, vezi schema 2.

Pentru R = CH₃, fenil, vezi schemele 3 și 4.

4090

RO 114895 Bl

Schema 1 ° O Pd-CZH/ o N ««-yy’ —^τ,Μ mkAqJ

Ph

NH-BOC (i) Deprotectie (ii) BOC-ON

Pti

HN=<

Pn

RX

Pn

Schema 2

(O RLi (ii) H₂O/HC

Schema 4

HO' /

(i) NHjOH.HCl/ElOH/Pyr. -*- HO (ii) Pd-C/EtOH/HCl_COn./H2

NH,HCI y··

HO

RO 114895 Bl

Acidul 3-(1'-(t-butiloxicarboninamino)etilbenzoic (Boc-MeMamb). Compusul din 4140 titlu pentru scopul prezentei invenții este preparat conform schemei 4 (de mai sus).

Acidul 3-acetilbenzoic (0,50 g, 3 mmoli), clorhidrat de hidroxilamină (0,70 g, mmoli] și piridină (0,70 ml, 9 mmoli) se aduce la reflux în 10 ml etanol, timp de 2 h. Amestecul de reacție este concentrat, reziduul este triturat cu apă, filtrat și uscat. Oxima este izolată ca produs solid alb (0,51 g, 94,4% randament). ¹H RMN 4145 (CD₃0D): 7,45-8,30 (m. 4H), 2,30 (s, 3H], MS(CH₄CI), (M + H-0] = 164.

O soluție de oximă (0,51 g, 3 mmoli] în etanol, conținând 1,5 g paladiu pe cărbune 10% și 0,25 ml (3 mmoli] de acid clorhidric concentrat, este hidrogenată la 2,10 kgf/cm² (2,1 kgf/cm²] presiune de hidrogen într-un hidrogenator Parr timp de 5 h. Catalizatorul este filtrat și filtratul este concentrat. Reziduul este triturat cu eter. 4150 Clorhidratul aminic este izolat ca produs solid alb (0,48 g, randament 7%). ¹H RMN (CD₃CI): 7,6-8,15 (m, 4H), 4,55 (q, 1H), 1,70 (s, 3H] MS(M+H)=166.

Clorhidratul aminic (0,40 g, 2 mmoli) este dizolvat în 15 ml de apă. Se adaugă o soluție de Boc-ON (0,52 g, 2,1 mmoli) în 15 ml de acetonă, apoi are loc adiția de 0,8 ml (6 mmoli) de trietilamină. Amestecul de reacție este lăsat să reacționeze timp 4155 de 20 h. Amestecul de reacție este apoi concentrat, porționat între acetat de etil și apă. Stratul apos este acidulat la pH=2, utilizând 10% soluție acid clorhidric. Produsul este extras cu acetat de etil, care este prelucrat în mod obișnuit și cristalizat dintr-un amestec de acetat de etil și hexan, obținând produsul din titlu, solid, alb (0,30 g, randament 57%), punctul de topire la 116...118°C. ¹H RMN (CDCI₃): 7,35-8,2 (m, 4160 4H), 4,6 (br s, 1,5H), 1,50 (d, 3H), 1,40 (s, 9H). MS(NH3-CI) (M+H) = 283.

Acidul 3-f1'-(t-butiloxicarbonil)amino1benzilbenzoic (Boc-PhMamb). Compusul din titlu, în scopul prezentei invenții este preparat conform schemei 4 de mai sus, printrun procedeu similar cu cel utilizat pentru derivatul metilic.

O soluție de acid 3-benzoilbenzoic (2,00 g, 9 mmoli), clorhidrat de hidroxilamină 4165 (2,00 g, 29 mmoli și piridină (2,00 ml, 25 mmoli] în etanol, se aduce la reflux timp de 12 h. După prelucrarea obișnuită, se obține un produs solid, alb (2,41 g). Acest produs mai conține urme de piridină, dar este utilizat în faza următoare, fără o altă purificare. Produsul brut (2,00 g, aproximativ 8 mmoli], este dizolvat în 200 ml de etanol. Se adaugă 2,00 g catalizator paladiu pe carbon 10% și acid clorhidric 4170 concentrat (1,3 ml, 16 mmoli). Amestecul de reacție este hidrogenat la 2,10 kgf/cm² (2,1 kgf/cm²), timp de o oră. Catalizatorul este filtrat și amestecul de reacție este concentrat. După triturarea reziduului cu eter și uscare sub vacuum, se obține clorhidratul aminic ca un produs solid, alb (2,12 g, 97% randamentul). ¹H RMN (CD₃0D): 7,4-8,15 (m, 10H), 5,75 (s, 1H).MS(CH₄-CI] (M+H-OH) = 211. 4175

Clorhidratul aminic (1,00 g, 4 mmoli) este transformat în derivații BOC printrun procedeu similar cu cel utilizat pentru metil. Se obțin 0,60 g (randament 48%) prin recristalizare dintr-un amestec de etanol și hexan, din compusul rubricat, solid alb, cu punctul de topire la 190...192°C. ¹H RMN (CD₃OD): 7,2-8,0 (m, 10H), 5,90 (2s, 1H, izomeri), 1,40 (s, 9H). MS(NH₃-CI) (M+NH₄-C₄H₈) = 289. 4180

Compușii intermediari ciclici 68 si 68a. Ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-MeMamb]; compusul cu formula (II) în care J = D-VAI, K = NMeArg, L = Gly, M = Asp, R¹ = CH₃,

R² = H.

Jumătatea de ciclizare MeMAMB este preparată conform schemei 4 descrisă mai sus. Compusul din titlu este preparat pe cale sintetică în fază de soluție, pentru 4185 legarea MeMAMB la tripeptidă. Prin ciclizare, se obține peptida ciclică protejată. Deprotejarea este obținută prin tratarea peptidei (380 mg) și a anisolului (0,390 ml], cu acid fluorhidric anhidru la temperatura de 0°C, timp de 30 min. Materialul brut

RO 114895 Bl este precipitat cu eter, redizolvat în acid acetic soluție aposă 10% și liofilizat, obținând astfel un amestec de doi izomeri (330 mg, mai mult decât randamentul cantitativ, calculat ca sare, acetat). Purificarea și separarea izomerilor se realizează HPLC în fază reversă pe o coloană preparativă Vydac C18 de 2,5 cm, utilizând 0,48%/min gradient de 7 la 23% acetonitril conținând 0,1% TFA. Fracțiunile colectate la Rf 24,1 min și 26,8 min, sunt liofilizate pentru a se obține sărurile TFA ale izomerilor 1 și respectiv

2. FAB-MS (izomerul 1): (M+H) = 589,31; FAB-MS (izomerul 2): (M+H) = 589,31.

Compușii intermediari ciclici 76 si 76a. Ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-PhMamb); compusul cu formula (II) în care J = D-VAI, K = NMeArg, L = Gly, M = Asp, R¹ = Ph, R² = H.

Jumătatea de ciclizare PhMamb este preparată prin schema 4 prezentată mai sus. Compusul din titlu este preparat pe cale sintetică în fază de soluție, pentru a lega PhMamb la tripeptidă. Prin ciclizare, se obține peptida ciclică. Prin deprotejare, care are loc prin tratarea peptidei (470 mg) și anisolului (0,470 ml) cu acid fluorhidric anhidru la 0°C timp de 30 min, se obține materialul brut care este precipitat cu eter, redizolvat în acid acetic 10% și liofilizat, pentru a se obține un amestec de doi izomeri (310 mg, cu randament total 82,4%). Purificarea și separarea izomerilor este realizată prin HPLC în fază reversă pe o coloană preparativă Vydac C18 de 2,5 cm, utilizând 0,55%/min gradient de 18 la 36% acetonitril conținând 0,1% TFA. Fracțiunile colectate la Rf 22 min și 24,6 min, sunt liofilizate pentru a se obține sărurile TFA ale izomerilor 1 și respectiv 2. FAB-MS (izomerul 1): (M+H) = 651,33; FABMS (izomerul 2): (M+H) = 651,33.

Compusul intermediar ciclic 79. Ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-NMeMamb); compusul cu formula (II) în care J = D-VAI, K = NMeArg, L = Gly, M = Asp, R¹ = H, R² = CH₃

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris pentru ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb) (Compusul intermediar ciclic 4). Metoda DCC/ DMAP este utilizată pentru legarea Boc-NMeMamb la rășină oximă. Peptida este preparată pe scală de 0,456 mmoli, pentru a se obține peptida ciclică protejată (460 mg, mai mult decât randamentul cantitativ). Peptida (364 mg) și 0,364 ml de anisol, se tratează cu acid fluorhidric anhidru la 0°C, timp de 30 min. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvat în acetonitril soluție aposă și liofilizat pentru a genera compusul din titlu (251 mg, 93,5%, calculat ca sare fluorură). Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă pe o coloană preparativă Vydac C18 de 2,5 cm, utilizând 0,23%/min gradient de 9 la 18% acetonitril conținând 0,1% TFA și apoi se liofilizează obținând sarea TFA a compuslui din titlu, ca produs solid alb, pufos (34,2 recuperare, randament total 29,9%); FAB-MS: (Μ + H) = 589,33

Jumătăți de ciclizare-Ciclu substituit R³¹. Jumătățile de ciclizare care posedă ciclu aromatic purtând o grupă de substituție, pot fi preparate utilizând metode prezentate în următoarele exemple și scheme.

Sinteza acidului aminometilbenzoic.HCI 4, 5 si 6 - substituit si derivaților acidului fc-butiloxicarbonil-3-aminometilbenzoic 4,5 si 6 substituit. Derivații acidului 3-aminometilbenzoic. HCI 4, 5 și 6 substituit și ai acidului frbutiloxicarbonil-3-aminometil-benzoic 4, 5 și 6 substituit, utilizați drept compuși intermediari în sinteza compușilor conform prezentei invenții, sunt preparați utilizând procedee standard, de exemplu cele descrise de Felder et al., Helv. Chim. Acta 48:259 (1965), de Diesbach, Helv. Chim. Acta, 23:1232 (1942). Truittand Creagn, J. Org. Chem. 27:1066 (1962); or Sekiya et al., Chem. Pharm. Bull. 11:551 (1963) și așa cum se prezintă schematic mai jos:

RO 114895 Bl

4240

4245

Sinteza acidului 4-clor-3-aminometilbenzoic.HCI. Compusul din titlu este pre- 4250 parat prin modificarea procedeelor menționate mai sus în literatură (Felder et al.

(1965), Helv. Chim. Acta, 48:259). La o soluție de acid 4-clorbenzoic (15,7 g, 100 mmoli) în 150 ml de acid sulfuric concentrat, se adaugă N-hidroximetildicloracetamidă (23,7 g, 150 mmoli) în porțiuni. Amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei timp de 2 zile, turnat în 375 g gheață, agitat o oră, după care produsul solid 4255 este colectat prin filtrare și spălat cu apă. Produsul solid umed este dizolvat într-o soluție de bicarbonat de sodiu 5%, filtrat și acidulat la pH = 1 cu acid clorhidric concentrat. Produsul solid este colectat prin filtrare, spălat cu apă și uscat la aer până a doua zi, când se obține acidul 4-clor-3-diclor-acetilaminometilbenzoic (26,2 g,

89%), sub formă de pulbere albă. 4260

O suspensie de acid 4-clor-3-dicloracetilaminometilbenzoic (26,2 g, 88 mmoli) în 45 ml de acid acetic, 150 ml de acid clorhidric concentrat și 150 ml de apă, se încălzește la reflux timp de 3 h, se filtrează cald și se lasă să se răcească la temperatura camerei. Produsul solid este colectat prin filtrare, spălat cu eter, spălat apoi cu un amestec de acetonă și eter și uscat la aer până a doua zi, obținând astfel corn- 4265 pusul rubricat (7,6 g, 39%), sub formă de cristale albicioase cu punctul de topire la

278...279°C. ¹H RMN (D6-DMS0): 13,40 (br s, 1H), 8,75 (br s, 3H). 8,20 (s, 1H), . 7,95 (dd, 1H), 7,70-fd, 1H), 4,20 (br s, 2H).

Acidul t-butiloxicarbonil-4-clor-3-aminometilbenzoic. O suspensie de acid 4-clor-3aminometilbenzoic.HCI (6,7 g, 30 mmoli) și trietilamină (9,3 g, 92 mmoli) în 50 ml 4270 de apă, se adaugă la o soluție de Boc-ON (9,2 g, 38 mmoli) în 50 ml de tetrahidrofuran răcit la 0°C. Amestecul de reacție este agitat apoi la temperatura camerei până a doua zi, și compușii volatili sunt îndepărtați prin concentrare sub presiune redusă. Reziduul este diluat cu apă, spălat cu eter, acidulat la pH = 3 cu acid clorhidric 1N și extras cu acetat de etil. Extractele sunt spălate apoi cu apă, cu o soluție salină, uscate 4275 pe sulfat de magneziu anhidru și evaporate la sicitate sub presiune redusă. Acest material este triturat cu amestecul de eter și hexan pentru a se obține compusul din titlu (7,4 g, 87%) sub formă de pulbere albă, cu punctul de topire la 150°C (cu descompunere). ¹H RMN (D6-0MS0): 13,20 (br s, 1H), 7,90 (s, 1H), 7,80 (dd, 1H),

7,60 (br s, 1H), 7,55 (d, 1H), 4,20 (br d, 2H], 1,40 (s, 9H). 4280

Sinteza acidului 3-aminometil-6-iodobenzoic.HCI. Compusul din titlu este preparat prin modificarea procedeelor menționate mai sus în literatură (Felder et al. (1965), Helv. Chim. Acta, 48:259). La o soluție de acid 6-iodobenzoic (24,8 g, 100 mmoli) în 150 ml de acid sulfuric concentrat, se adaugă N-hidroximetil dicloracetamidă (23,7 g, 150 mmoli), în porțiuni. Amestecul de reacție este agitat la 4285

RO 114895 Bl temperatura camerei timp de 7 zile, turnat pe 375 g de gheață și agitat timp de o oră. Produsul solid este colectat prin filtrare și spălat apoi cu apă. Produsul solid umed este dizolvat într-o soluție de bicarbonat de sodiu 5%, filtrat și acidulat la pH 1 cu acid clorhidric concentrat. Produsul solid este colectat prin filtrare, spălat cu apă și uscat la aer până a doua zi, obținând acidul 3-dicloracetic-aminometil-6-iodobenzoic (32,0 g, 82%) ca pulbere albă.

O suspensie de acid 3-dicloracetilaminometil-6-iodobenzoic (32,0 g, 82 mmoli) în 51 ml de acid acetic, 170 ml de acid clorhidric concentrat și 125 ml de apă se încălzește la temperatura de reflux timp de 3 h și se filtrează odată, cald, și apoi se răcește la temperatura camerei prin repaus. Produsul solid este colectat prin filtrare, spălat cu eter, spălat cu un amestec de acetonă-eter și uscat la aer până a doua zi, când se obține compusul din titlu (13,2 g, 51%), ca pulbere de culoare beige. ¹H RMN (D6-DMS0) 13,50 (br s. 1H), 8,50 (br s, 3H), 8,05 (d, 1H), 7,85 (s, 1H), 7,40 (d, 1H), 4,05 (br s, 2H).

Acidul t-butiloxicarbonil-3-aminometil-6-iodobenzoic. O suspensie de acid 3aminornetil-6-iodobenzoic.HCI (8,0 g 26 mmoli) și trietilamină (8,7 g, 86 mmoli) în 32 ml de apă, se adaugă la o soluție de Boc-ON (8,0 g, 32 mmoli] în 23 ml de tetrahidrofuran răcit la 0°G. Amestecul de reacție este agitat la temepratura camerei până a doua zi și compușii volatili sunt îndepărtați prin concentrare sub presiune redusă. Reziduul este diluat cu apă, spălat cu eter, acidulat la pH 3 cu acid clorhidric 1N și extras cu acetat de etil. Extractele sunt spălate cu apă. cu o soluție salină, uscate pe sulfat de magneziu anhidru și evaporate la sicitate sub presiune redusă. Acest material este triturat din eter pentru a se obține compusul din titlu (5,7 g, 59%), ca pulbere albă cu punctul de topire la 182°C (cu descompunere); ¹H RMN (D6-DMS0) 13,35 (brs, 1H), 7,95 (d, 1H), 7,60 (s, 1H), 7,50 (br t, 1H), 7,10 (d. 1H], 4,10 (d, 2H), 1.40 (s, 9H).

Alte exemple de jumătăți de ciclizare a ciclului substituit R³¹ preparate utilizând procedeul general descris mai sus pentru acidul t-butiloxicarbonil-3-aminometil-6iodobenzoic, sunt prezentate în tabelul următor:

X	Y	Z	P.t.°C
H	H	CI	159
H	H-	I	168
H	H	Me	155
H	H	MeO	171
CI	H	H	150
l	H	H	182
Me	H	H	166
MeO	H	H	79

Derivații de 4-brom și 6-brom utilizați drept compuși intermediari în sinteza compușilor prezentei invenții, pot fi preparați așa cum s-a descris mai sus pentru acidul t-butiloxicarbonil-3-aminometil 6-iodobenzoic. Derivații 4-hidroxi- și 6-hidroxi utilizați drept compuși intermediari în sinteza compușilor conform prezentei invenții pot fi preparați așa cum s-a descris de Sekiya et al., Chem. Pharm. Bull. 11:551 (1963). Derivații 5-nitro și 5-amino utilizați ca intermediari în sinteza compușilor conform invenției, pot fi preparați așa cum s-a descris de Felder et al., Helv. Chim. Acta, 48:259 (1965). Derivatul 5-amino poate fi transformat în derivați 5-iodo, 5-bromo,

5-cloro sau 5-fluoro, prin sarea de diazonium, așa cum s-a descris în Org.Syn.Coli.Voi. 2:130 (1943); 2:299 (1943); 2:351 (1943) și 3 185 (1955).

RO 114895 Bl

X Y z

Η H Br

Br Η H

Η H HO

HO Η H

H N0₂ H

Η NH₂ H

Η I H

H Br H

H F H

4335

4340

Sinteza compușilor intermediari ciclici utilizând jumătăți de ciclizare a ciclului substituit R³¹. Compușii intermediari ciclici în care jumătatea de ciclizare conține un 4345

1* ciclu aromatic purtând o grupare substituentă, pot fi preparați așa cum este prezentat în exemplele următoare.

Compusul intermediar ciclic 93; Acidul ciclo-fD-Val-NMeArg-Gly-Asp-3aminometiM-clorbenzoic). Compusul din titlu este preparat prin procedeul general descris mai sus, în fază de soluție, pentru ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb). Peptida 4350 ciclică (240 mg, 0,28 mmoli) este deprotejată cu un exces de acid fluorhidric în prezența anisolului ca purificator. Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă pe o coloană preparativă LiChrospher RP-18 de 5 cm, utilizând 1,4%/min gradient de 22 la 90% acetonitril conținând acid trifluoracetic 0,1% pentru a se obține sarea TFA a compusului din titlu (80 mg, 39%) ca produs solid alb, pufos; ¹H RMN (D6-DMS0) 4355 9,00 (d, 1H), 8,50 (d, 1H), 8,45 (t, 1H), 7,60 (d, 2H], 7,45 (s, 1H), 7,45 (d, 2H),

7,00 (br s, 4H), 5,15 (dd, 1H). 4,45 (m, 2H), 4,20 (m, 2H), 4,10 (d, 1H), 3,55 (d,

1H), 3,10 (m, 2H), 2,90 (s, 3H), 2,65 (dd, 1H), 2,50 (m, 1H) 2,05 (m, 2H). 1,50 (m, 1H), 1,30 (m, 2H), 1,05 (d. 3H), 0,85 (d, 3H), FAB-MS: (Μ + H) = 609.

Compusul intermediar ciclic 94. Ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-iodo-Mamb); com- 4360 pusul cu formula (VII) în care J = D-Val, K = NMeArg, L = Gly, M = Asp, R¹ = R² = H.

R¹° = H, R^1Oa = I;

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul descris mai sus pentru ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb) (compusul intermediar ciclic 4). Metoda DCC/

DMAP este utilizată pentru legarea Boc-iodo-Mamb la oximrășină. Peptida este prepar 4365 rată pe scală de 1,05 mmoli, pentru a se obține peptida ciclică protejată (460 mg, 46,8%). Peptida (438 mg) și 0,5 ml de anisol, se tratează cu acid fluorhidric anhidru la 0°C, timp de 30 min. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvat în acid acetic soluție apoasă și liofilizat pentru a genera compusul din titlu (340 mg, 95,6%, calculat ca sare, acetat). 4370

Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă pe o coloană preparativă Vydac 018 de 2,5 cm, utilizând 0,23%/min, gradient de la 12,6 la 22,5% acetonitril conținând 0,1% TFA și prin liofilizarea produsului, obținând sarea TFA a compusului din titlu, solid, alb, pufos (39,7% recuperare, randament general 16,6%); ¹H RMN (D6-DMS0) delta 9,05 (d, 1H), 8,55 (d, 1H), 8,55 (t, 1H), 7,90 (d, 1H), 7,65 (d, 4375 1H), 7,55 (t, 1H), 7.20 (d, 1H), 7,15 (s, 1H], 7,00 (brs, 4H), 5,15 (dd, 1H), 4,50 (g, 1H), 4,30 (m, 3H), 3,95 (dd, 1H), 3,60 (d. 1H), 3,10 (m, 2H), 3,00 (s, 3H),

2,75 (dd, 1H), 2,55 (dd, 1H), 2,10(m, 2H), 1,60 (m, 1H), 1,35 (m, 2H), 1,10 (d,

3H), 0,90 (d, 3H), FAB-MS: (M+H) = 701,37.

Compusul intermediar ciclic 95; Acidul ciclo-(D-Val-NMeArq-Glv-Asp-3- 4380 aminometiM-metoxibenzoicl. Compusul din titlu este preparat prin procedeul general în fază de soluție descris mai sus pentru ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb). Peptida

RO 114895 Bl

4385

4390

439!p

4400

4405

4410

4415

4420

4425

4430 ciclică (600 mg, 0,71 mmoli) este deprotejată cu un exces de acid fluorhidric în prezență de anisol ca purificator. Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă pe o coloană preparativă VydacC18 de 2,5 cm, utilizând 0,33%/min gradient de 7 la 18% acetonitril conținând 0,1% acid trifluoroacetic, pentru a obține sarea TFA a compusului din titlu (104 mg, 32%) ca produs solid alb, pufos. ¹H RMN (D6-0MS0) 12,40 (br s, 1H), 8,25 (d, 1H), 8,20 (br s, 1H), 8,00 (br s, 2H), 7,85 (d, 1H), 7,75 (s, 1H). 7,65 (br. s, 1H). 7,05 (d, 1H), 7,05 (br s, 4H), 5,00 (dd, 1H), 4,60 (q, 1H).

4.30 (d, 1H), 4,25 (d, 2H). 3,85 (s, 3H), 3,85 (dd, 1H), 3,70 (dd, 1H), 3,10 (q, 2H), 3,00 (s, 3H), 2,70 (m, 1H), 2,50 (m, 1H), 2,10 (m, 1H), 1,90 (m, 1H), 1,65 (m, 1H), 1,35 (m, 2H), 1,00 (d, 3H), 0,90 (d, 3H); FAB-MS: (M+H₂0+H) = 623.

Compusul intermediar ciclic 96; Acidul ciclo-(D-Val-NMeArq-Glv-Asp-3aminometil-4-metilbenzoic). Compusul din titlu este preparat prin procedeul general în fază de soluție, descris mai sus pentru ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb). Peptida ciclică (210 mg, 0,25 mmoli) este deprotejată cu exces de acid fluorhidric în prezență de anisol ca epurator. Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă pe o coloană preparativă LiChrospher RP-18 de 5 cm utilizând 2,3%/min gradient de 22 la 90% acetonitril conținând 0,1% acid trifluoracetic pentru a se obține sarea TFA a compusului din titlu (75 mg, 42%) ca produs solid alb pufos. ¹H RMN (D6-DMS0)

12.30 (br s, 1H). 8,85 (d, 1H). 8,55 (d, 1H), 8,30 (t, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,55 (m, 2H), 7,40 (s, 1H), 7,20 (s, 1H), 7,00 (brs, 4H), 5,20 (dd, 1H), 4,55 (q, 1H). 4,45 (dd, 1H), 4,30 (m, 2H), 4,05 (dd, 1H), 3,60 (d, 1H), 3,10 (q. 2H), 3,00 (s, 3H),

2,70 (dd, 1H). 2,50 (m, 1H), 2,25 (s, 3H). 2,10 (m, 2H), 1,60 (m, 1H), 1,35 (m, 2H), 1,10 (d, 3H), 0,90 (d, 3H); FAB-MS: (Μ + H) = 589.

Compusul intermediar ciclic 97; Acidul ciclo-(D-Val-NMeArg-Glv-Asp-3aminometil-6-clorobenzoic). Compusul din titlu este preparat prin procedeul general în fază de soluție descris mai sus pentru ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb), cu excepția că se utilizează 4.4'-dinitrobenzofenon oxima. Peptida ciclică (550 mg, 0,65 mmoli) este deprotejată cu un exces de acid fluorhidric în prezență de anisol ca purificator. Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă pe o coloană preparativă Vydac C18 de 2,5 cm, utilizând 0,8%/min gradient de la 10 la 38% acetonitril conținând 0,1% acid trifluoracetic pentru a se obține sarea de TFA a compusului rubricat (254 mg, 54%) ca produs solid alb, pufos. ¹H RMN (D6-DMS0) 12,30 (br s, 1H), 9,05 (d, 1H), 8,45 (m, 2H), 7,50 (t, 1H), 7,35 (d, 1H), 7,30 (m, 2H), 7,10 (s, 1H), 7,05 (brs, 4H), 5,15 (dd. 1H). 3,15 (q, 2H), 3,10 (s, 3H), 2,70 (dd, 1H). 2,50 (m, 1H), 2,05 (m. 2H), 1,65 (m, 1H), 1,35 (m, 2H), 1,10 (d, 3H), 0,90 (d, 3H), FABMS: (Μ + H) = 609.

Compusul intermediar ciclic 99; Acidul ciclo-țD Val-NMeArq-Gly-Asp-3aminometil-6-metoxibenzoic). Compusul din titlu este preparat prin procedeul general în fază de soluție descris mai sus pentru ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb), cu excepția că se utilizează 4,4'-dinitrobenzofenonoximă. Peptida ciclică (256 mg, 0,30 mmoli) este deprotejată cu un exces de acid fluorhidric în prezență de anisol ca purificator. Purificarea este realizată cu HPLC în fază reversă pe coloană preparativă Vydac C18 de 2,5 cm, utilizând 0,8%/min gradient de la 1O la 38% acetonitril conținând 0,1% acid trifluoracetic pentru a se obține sarea TFA a compusului rubricat (137 mg, 63%) ca produs solid, alb, pufos. ¹H RMN (D6-DMS0) 8,45 (d, 1H), 8,40 (d, 1H),

8.30 (t, 1H), 7,65 (d, 1H), 7,50 (t, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,35 (d, 1H), 7,05 (d, 1H), 7,00 (br s, 4H), 5,20 (dd, 1H), 4,55 (dd, 1H), 4,50 (q, 1H), 4,35 (dd, 1H), 4,25 (dd, 1H), 3,95 (dd, 1H). 3,90 (s, 3H), 3,55 (d, 1H), 3,10 (q, 2H), 3,00 (s, 3H),

2,70 (dd, 1H), 2,50 (m, 1H). 2,05 (m. 2H), 1,60 (m, 1H), 1,35 (m, 2H), 1,10

RO 114895 Bl (d. 3H), 0,95 (d. 3H): FAB-MS: (M+H) - 605.

Compusul intermediar ciclic 100; Acidul ciclof D-Val-NMeArg-Gly-Asp-3aminometil-6-metilbenzoic). Compusul din titlu este preparat prin procedeul general în fază de soluție descris mai sus pentru ciclofD-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb) cu 4435 excepția că se utilizează 4.4'-dinitrobenzofenona oxima. Peptida ciclică (230 mg, 0,28 mmoli) este deprotejază cu un exces de acid fluorhidric în prezență de anisol ca purificator. Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă pe o coloană preparativă Vydac C18 de 2,5 cm, utilizând 0,8%/min gradient de la 10 la 38% acetonitril conținând 0,1% acid trifluoracetic pentru a se obține sarea TFA a compusului din titlu (54 4440 mg, 27%) ca produs solid alb, pufos: ¹H RMN (D6-DMS0) 12,30 (br s, 1H], 8,80 (d,1H), 8,40 (d, 1H), 8,30 (t, 1H), 7,45 (m, 2H), 7,15 ( q, 2H], 7,00 (s, 1H). 7,00 (brs, 4H), 5,15 (dd, 1H], 4,45 (m, 3H), 4,05 (m, 2H). 3,55 (dd, 1H), 3,10 (q, 2H),

3,05 (s, 3H), 2,70 (dd, 1H), 2,50 (m. 1H], 2,30 (s, 3H), 2,05 (m, 2H), 1,60 (m,

1H), 1,35 (m, 2H), 1,05 (d. 3H], 0,90 (d, 3H); FAB-MS; (Μ + H) = 589. 4445

Compusul intermediar ciclic 100a; Acidul ciclof D-Abu-NMeArg-Gly-Asp-3aminometil-6-clorbenzoic. Compusul din titlu este preparat prin procedeul în fază de soluție descris mai sus pentru ciclof D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb], cu excepția că se utilizează 4,4'-dinitrobenzofenonoxima. Peptida ciclică (330 mg, 0,40 mmoli] este deprotejată cu un exces de acid fluorhidric în prezența anisolului pentru purjare. 4450 Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă pe o coloană preparativă Vydac C18 de 2,5 cm utilizând 1,0%/min gradient de 10 la 38% acetonitril conținând 0,1% acid trifluoracetic pentru a se obține sarea TFA a compusului din titlu (114 mg, 41%), ca produs solid. alb. pufos; ¹H RMN (D6-DMS0), 9,00 (d, 1H), 8,40 (m, 2H), 7,50 (m, 1H), 7,40 (d. 1H), 7,30 (m, 2H), 7,15 (s, 1H). 7,00 (br s, 4H), 5,15 (dd, 1H). 4455

4,65 (q, 1H), 4,50 (dd, 1H), 4,40 (q, 1H), 4,05 (dd, 1H], 3,95 (dd, 1H], 3,65 (dd,

1H], 3,10 (q, 2H), 3,05 (s. 3H], 2,75 (dd, 1H), 2,50 (m. 1H). 1,95 (m, 1H), 1,75 (m, 2H), 1,60 (m, 1H], 1,35 (m, 2H], 0,95 (t, 3H), FAB-MS: (M+H)=595,4.

Compusul intermediar ciclic 89d. Ciclof D-Abu-NMeArg-Gly-Asp-lodo-Mamb); compusul cu formula (VII) în care J = D-Abu, K = NMeArg, L = Gly, M = Asp, R¹ = R² 4460 = H, R¹° = H, R^1Oa = I.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general în descrierea de mai sus pentru ciclof D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb) (compusul intermediar ciclic 4). Metoda DCC/DMAP este utilizată pentru legarea Boc-iodo-Mamb la oximrășină. Peptida este preparată pe scală de 3,53 mmoli pentru a se obține peptida ciclică 4465 protejată (4,07 g, mai mult decât randamentul cantitativ). Peptida (4,07 g) și 4,0 ml de anisol se tratează cu acid fluorhidric anhidru la 0°C, timp de 30 min. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvat în acid acetic soluție apoasă și liofilizat pentru a genera compusul din titlu (2,97 g, mai mult decât randamentul cantitativ, calculat ca sare, acetat). 4470

Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă pe o coloană preparativă Vydac C18 de 2,5 cm, utilizând 0,16% pe min, gradient de 16,2 la 22,5% acetonitril, conținând 0,1% TFA și apoi se liofilizează pentru a obține sarea TFA a compusului din titlu, ca produs solid alb pufos (28,7% recuperare, randament general 30,2%);

FAB-MS: (M+H) = 687,33. 4475

Compusul intermediar ciclic 100 b; Acidul ciclof D-Abu-NMeArg-Giy-Asp-3aminometil-6-iodobenzoicl. Compusul din titlu este preparat prin procedeul general în fază de soluție descris mai sus pentru ciclof D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb], cu excepția că se utilizează 4,4'-dinitrobenzo-fenonoximă. Peptida ciclică (350 mg, 0,38 mmoli) este deprotejată cu un exces de acid fluorhidric în prezență de anisol ca purificator. 4480

RO 114895 Bl

Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă pe o coloană preparativă Vydac

C18 de 2,5 cm, utilizând 1,0%/min gradient de 10 la 38% acetonitril conținând

0,1% acid trifluoracetic pentru a se obține sarea TFA a compusului din titlu (150 mg,

49%) ca produs solid alb, pufos;¹H RMN (D6-DMS0) 8,90 (d, 1H), 8,40 (m, 2H),

7,70 (d, 1H), 7,50 (m, 1H), 7,30 (m, 1H], 7,05 (s, 1H], 7,00 (d, 1H), 7,00 (br s, 4H], 5,15 (dd, 1H], 4,65 (q, 1H). 4,45 (dd, 1H), 4,40 (q, 1H), 4,00 (q, 1H], 3,90 (q, 1H). 3,65 (dd, 1H), 3,10 (q, 2H), 3,05 (s, 3H), 2,70 (dd, 1H), 2,50 (m, 1H), 1,95 (m. 1H), 1,75 (m, 2H), 1,60 (m, 1H), 1,40 (m, 2H), 0,90 (t, 3H); FAB-MS:

(M+H) = 687,3.

Compusul intermediar ciclic 100 c; Acidul ciclo-fD-Abu-NMeArq-Gly-Asp-3aminometil-6-metilbenzoicl· Compusul cu formula (VII) în care J = D-Abu, K =NMeArg, L = Gly, M = Asp, R¹⁰ = Me).

Compusul din titlu este preparat prin procedeul general în fază de soluție descris mai sus pentru ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb), cu excepția că se se utilizează 4,4'-dinitrobenzofenonoximă. Peptida ciclică (13Q mg, 0,16 mmoli) este deprotejată cu un exces de acid fluorhidric în prezența anisolului pentru purjare. Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă pe o coloană preparativă Vydac C18 de 2,5 cm, utilizând 1,0%/min gradient de 10 la 38% acetonitril conținând 0,1% acid trifluoracetic pentru a se obține sarea TFA a compusului din titlu (31 mg, 28%) sub formă de produs solid, alb ^{1 2}H RMN (06-DLS0): 8,76 (d, 1H], 8,40 (d, 1H), 8,30 (t, 1H).

7,50 (m, 1H), 7,45 (m, 1H), 7,15 (q, 2H), 7,05 (s, 1H), 7,00 (brs, 4H), 5,15 (dd, 1H), 4,65 (q, 1H), 4,45 (m, 2H), 3,65 (dd, 1H), 3,10 (q, 2H), 3,05 (s, 3H], 2,75 (dd, 1H). 2,50 (m. 1H). 2,30 (s, 3H), 2,00 (m, 1H), 1,75 (m, 2H), 1,60 (m, 1H), 1,35 (m, 2H], 0,95 (t, 3H); FAB-MS: (M+H) = 575,4.

COjH

COjH

H-Οχ, DCC, DMAP, EtOAc eoc-Asp(OcHex)-NH

1. TFA, CHaCtj

2. Boc-A»p(OcH«x), T8TU, iPfjNEt, EtOAc

NM«Arg(To«)-8oc-0-Va(

I

2. Boc-O-Vat—

NMe Arg(Toa)-Giy, TBTU, iPfjNEt, OMF

Ox

1. TFA, CHjClî

2. AcOH, iPfjNEt OMF, 60° C

N-Me(Toa)Arg

NH

'''Aap(OcHex) \ 1. HF, PhOMa

Schema 5. Procedeu de sinteză a compusului intermediar ciclic.

RO 114895 Bl

Compusul intermediar ciclic 101; Sinteza în fază solidă; Acidul ciclo-fD-ValNMeArq-Glv-Asp-3-aminometil-4-iodo-benzoicl. Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris mai sus pentru ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb).

Metoda DCC/DMAP este utilizată pentru legarea Boc-iodo-Mamb la rășinoximă. 4525 Peptida este preparată pe scală de 1,05 mmoli pentru a obține peptida ciclică protejată (460 mg, 46,8%). Peptida (438 mg) și 0,5 ml anisol se tratează cu acid fluorhidric anhidru la 0°C, timp de 30 min, Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvat în acid acetic soluție apoasă și liofilizat pentru a genera compusul din titlu (340 mg, 95,6%, calculat ca sare, acetat). Purificarea se realizează prin HPLC în fază re- 4530' versă pe o coloană preparativă Vydac C18 de 2,5 cm, utilizând 0,23%/min gradient de 12,6 la 22,5% acetonitril conținând 0,1% acid trifluoracetic și apoi se liofilizează pentru a se obține sarea de TFA a compusului din titlu, sub formă de produs solid alb, pufos. (39,7% recuperare, randament total 16,6%; ¹H RMN (D6-DMS0) 9,05 (d,

1H], 8,55 (d, 1H), 8,55 (t, 1H), 7,90 (d, 1H], 7,65 (d, 1H), 7,55 (t, 1H), 7,20 (d, 4535 1H), 7,15 (s, 1H], 7,00 (br s, 4H], 5,15 (dd, 1H), 4,50 (q, 1H), 4,30 (m, 3H], 3,95 (dd, 1H), 3,60 (d, 1H), 3,10 (m, 2H), 3,00 (s, 3H), 2,75 (dd, 1H), 2,55 (dd, 1H),

2,10 (m, 2H), 1,60 (m, 1H), 1,35 (m, 2H), 1,10 (d. 3H), 0,90 (d, 3H); FAB-MS:

(M+H) = 701.37.

Sinteza în fază de soluție a compusului intermediar ciclic 102. Acidul cliclo-fD- 4540 Val-NMeArq-Glv-Asp-3-aminometil-6-iodo-benzoic]. Compusul din titlu este preparat conform metodei prezentată în schema 6 .

COjH Boe-A»p(OeH»x}-OSu

N»HCO„T>F/KjO

4545

H-Οχ, OCC EtOAc

HM«ArgfToi) - Boc-O-Val «

Gly

A«p(OcH«x>NH’^|j^^^^COîO,t

1-TFA.C^CI,

2. AcOH, IPfțNEl, OMF, 60' C

4550

1. TFA,C^aj i- i

2. Boc-O-Val— NM*Arg(To«>-Gly, THTU, IPrjWEt, OMF

CFjCOjH· ciy

N-MaArg'^ ^*A«p

1. HF, PhOMe / \

2. TFA, HPLC °·^ν·'

4555

4560

1. Acidul Boc-Asp (0cHex)-3-aminometil-6-iodobenzoic. La o suspensie de acid 4565

3-aminometil-6-iodobenzoic.HCI (4,9 g, 16 mmoli) în apă (16 ml], se adaugă bicarbonat de sodiu (3,9 g, 47 mmoli), apoi o soluție de Boc-Asp (ocHex)-OSu (5,9 g, 14 mmoli] în 16 ml de tetrahidrofuran. Amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei până a doua zi, se filtrează, se diluează cu apă, se acidulează cu acid clorhidric 1N și se extrage cu acetat de etil. Extractele sunt spălate cu apă, cu o 4570

RO 114895 Bl soluție salină, apoi sunt uscate pe sulfat de magneziu și evaporate la sicitate sub presiune redusă. Acest material este triturat apoi cu eter, pentru a obține compusul din titlu (6,7 g, 82%), pulbere albă.

¹H RMN d (D6-DMS0); 8,45 (br t, 1H), 7,90 (d, 1H), 7,60 (s, 1H), 7,15 (m, 2H),

4,65 (m, 1H), 4,35 (m, 1H), 4,25 (d, 2H), 2,70 (m, 1H), 2,55 (m, 1H), 1,70 (m, 4H), 1,40 (s, 9H), 1,35 (m, 6H).

2. 4,4'-Pinitrobenzofenonoxima. Compusul din titlu este preparat prin modificarea procedeelor menționate în literatură (Chapman and Fider (1936). J. Chem. Soc. 448; Kulin and Leffek (1973), Can. J. Chem. 51: 687). O soluție de anhidridă cromică (20 g, 200 mmoli) în 125 ml apă, se adaugă prin picurare în timp de peste 4 h, la o suspensie de bis (4-nitrofenil]metan (25 g, 97 mmoli) în 300 ml de acid acetic încălzit la reflux. Amestecul de reacție este încălzit la reflux, timp de o oră, apoi este răcit la temperatura camerei și turnat în apă. Produsul solid este colectat prin filtrare, spălat cu apă, cu o soluție de bicarbonat de sodiu 5%, apă și apoi se usucă în aer pentru a se obține un amestec în părți egale de bis (4-nitrofenil) metan și 4,4'dinitrobenzofenonă; prin analiza ¹H RMN. Acest material este oxidat cu o a doua porțiune de anhidridă cromică (20 g, 200 mmoli), apoi printr-un procedeu identic, obținând produsul brut. Prin triturare cu 200 ml de benzen încălzit la temperatura de reflux timp de 16 h, se obține 4,4'-dinitrobenzofenona (20,8 g, 79%) ca pulbere galbenă.

O soluție de clorhidrat de hidroxilamină (10,2 g, 147 mmoli) se adaugă la o suspensie de 4,4'-dinitrobenzofenonă (19 g, 70 mmoli) în 100 ml de etanol. Amestecul de reacție este încălzit la temperatura de reflux timp de 2 h, răcit la temperatura camerei și produsul solid este colectat prin filtrare. Prin recristalizare din etanol, se obține compusul din titlu (14,0 g, 70%), sub formă de cristale galben pal, cu punctul de topire la 194°C. ¹H RMN (D6-DMS0) d 12,25 (s, 1H), 8,35 (d. 2H), 8,20 (d, 2H). 7,60 (d, 4H).

3. 4,4'-Qinitrobenzofenonoxima Boc-Asp(0cHex1-3-amino-metil-6-iodobenzoat.

La o soluție răcită pe gheață, formată din 3,3 g (5,7 mmoli) de acid Boc-Asp-(OcHex)3-aminometil-6-iodobenzoic și 1,7 g (5,9 mmoli), 4,4'-dinitrobenzo-fenonoxima în 32 ml de acetat de etil, se adaugă DCC (1,2 g, 5,8 mmoli). Amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei timp de 3 h, filtrat, diluat cu acetat de etil, spălat cu o soluție saturată de bicarbonat de sodiu, apă, soluție salină, apoi se usucă pe sulfat de magneziu și se evaporă la sicitate sub presiune redusă. Acest material este purificat pe o coloană cromatografică pe silica gel (EM Science, 230...400 ochiuri), utilizând ca eluant un amestec de 10 părți diclormetan și 1 parte acetat de etil, obținând compusul din titlu (1,8 g, 36%) ca produs cristalin galben pal. ¹H RMN (D6-DMS0): d 8,40 (dd, 5H), 7,90 (m, 5H), 7,45 (s, 1H), 7,20 (m, 2H), 4,65 (m, 1H), 4,35 (m, 1H), 4,20 (m, 2H), 2,75 (dd, 1H), 2,50 (dd. 1H), 1,70 (m, 4H), 1,40 (s, 9H), 1,35 (m, 6H).

4. Boc-Val-NMeArq(Tos)-Glv. La un amestec de Boc-NMeArg(Tos) (11,07 g, 25 mmoli) și Gly-OBzl tosilat (10,10 g, 30 mmoli) în 25 ml de diclormetan, se adaugă HBTU (9,48 g, 25 mmoli) și DIEA (9,69 g, 75 mmoli). Amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei timp de o oră, concentrat sub vacuum înalt, diluat cu acetat de etil, spălat cu acid citric 5%, apă, o soluție saturată de bicarbonat de sodiu, o soluție salină, apoi este uscat pe sulfat de magneziu anhidru și evaporat la sicitate sub presiune redusă. Produsul uleios rezultat este triturat cu eter de petrol pentru a se obține Boc-NMEArg (Tos)-Gly-OBzl (14,7 g, 100%); FAB-MS; (M+H) = 590,43. Acest material este utilizat în continuare fără altă purificare.

RO 114895 Bl soluție de Boc-NMeArg(Tos)-Gly-OBzl (14,5 g, 24,6 mmoli) în 30 de ml de 4620 acid trifluoracetic este agitată la temperatura camerei timp de 5 min și se evaporă la sicitate sub presiune redusă. Reziduul uleios este diluat cu acetat de etil rece, spălat cu o soluție rece de bicarbonat de sodiu, apoi faza apoasă este extrasă cu acetat de etil. Straturile organice combinate se spală cu o soluție salină, se evaporă la sicitate sub presiune redusă și uleiul rezultat este triturat cu eter, apoi se usucă în 4625 desicator cu vacuum pentru a se obține NMe Arg (Tos)-Gly- OBzI (10,3 g, 86%); FABMs: (M+H)=490.21. Acest material este utilizat fără o altă purificare.

La o soluție de NMeArg(Tos)-Gly-OBzl (4,80 g, 9.8 mmoli) și Boc-D-Val (2,13 g, 9,8 mmoli) în 10 ml de diclormetan, răcită pe o baie de gheață, se adaugă HBTU (3,79 g 10,0 mmoli) și DIEA (2,58 g, 20,0 mmoli). Amestecul de reacție este agitat 4630 la temperatura camerei timp de 48 h, apoi se diluează cu acetat de etil, se spală cu f acid citric 5%, cu o soluție salină, apoi se usucă pe sulfat de magneziu anhidru, și se evaporă la sicitate sub presiune redusă. Uleiul rezultat este triturat cu eter pentru a se obține Boc-D-Val-NMeArg (Tos)-Gly-QBzl (4,58 g, 68%); FAB-MS: (M+H) = 689,59.

Acest material este utilizat fără o altă purificare. 4635

O soluție de Boc-D-Val-NMe(Tos)-Gly-OBzl (4,50 g, 6,53 mmoli) în 80 ml de metanol, este purjată cu azot gazos, apoi se adaugă 1,30 g de catalizator paladiu pe cărbune 10% și prin amestecul de reacție este trecut apoi hidrofe gazos. După o oră, catalizatorul este îndepărtat prin filtrare pe un pat de Celită și solventul este îndepărtat sub presiune redusă. Produsul solid rezultat este triturat cu eter, filtrat și spă- 4640 lat cu eter de petrol, pentru a se obține Boc-D-Val-NMeArg(Tos)-Gly (3,05 g,78%); ¹H RMN (D6-DMS0) d 7,90 (br t, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,30 (d, 2H), 7,00 (d, 1H), 6,85 (br d. 1H), 6,60 (br s, 1H), 5,00 (dd, 1H), 4,15 (t. 1H), 3,70 (m, 2H), 3,05 (m,

2H). 2,90 (s, 3H). 2,35 (s. 3H), 1,90 (m, 2H), 1,55 (m, 1H), 1,35 (s, 9H), 1,25 (m, 2H), 0,80 (br t, 6H); FAB-MS: (M+H) = 599,45. 4645

5. 4,4'-Dinitrobenzofenonoximă Boc-D-Val-NMeArqfTos)-Gly-Asp[OcHex)-3aminometil-6-iodobenzoat. La o soluție de 4,4'-dfinitrobenzofenonoximă Boc-Asp(OcHex)-3-aminometil-6-iodobenzoat (0,5 g, 0,59 mmoli) într-un ml de diclormetan, se adaugă 0,5 ml de acid trifluoracetic. Amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei timp de 90 min, diluat cu diclormetan și evaporat la sicitate sub pre- 4650 siune redusă. Reziduul uleios se concentrează la vacuum înalt pentru îndepărtarea urmelor în exces de acid trifluoracetic. La o soluție de sare TFA brută și Boc-D-ValNMeArg(Tos)-Gly (0,52 g, 0,87 mmoli) în 3,8 ml de dimetilformamidă se adaugă TBTU (0,28 g, 0,87 mmoli) și DIEA (0,33 g, 2,58 mmoli). Amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei până a doua zi, concentrat sub vacuum înalt diluat cu 4655 acetat de etil, spălat cu acid citric 5%, apă, soluție salină, apoi este uscat pe sulfat de magneziu anhidru și evaporat la sicitate sub presiune redusă. Acest material este triturat cu eter obținând compusul din titlu (0,48 g 61%) sub formă de pulbere. Acest material este utilizat fără altă purificare.

6. Acidul ciclo-(D-Val-NMeArqfTos)-Glv-Asp(0cHex)-3-amino-metil-6-iodobenzoic)· 4660 La o soluție de 4,4'-dinitrobenzofenonoxima Boc-D-Val-NMeArg(Tos}-Gly-Asp(OcHex)-3aminometil-6-iodobenzoat (0,48 g, 0,36 mmoli) într-un ml de diclormetan, se adaugă

0,5 ml de acid trifluoracetic. Amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei timp de 45 min, diluat cu diclormetan și evaporat la sicitate sub presiune redusă. Reziduul uleios este concentrat sub vacuum înalt pentru a se îndepărta urmele de acid 4665 trifluoracetic în exces.

La o soluție de sare TFA brută în 38 ml de dimetilformamidă, se adaugă acid acetic (0,09 ml, 1,57 mmoli) și DIEA (0,26 ml, 1,49 mmoli). Amestecul de reacție

RO 114895 Bl este agitat la temperatura de 60°C timp de 3 zile, concentrat sub vacuum înalt, diluat cu acetat de etil, spălat cu acid citric 5%, cu o soluție salină, uscat pe sulfat de magneziu anhidru și evaporat la sicitate sub presiune redusă. Acest material este purificat pe o coloană cromatografică pe silicagel (EM Science, 230...400 ochiuri) utilizând un amestec format din 10 părți cloroform și o parte izopropanol, pentru a se obține compusul rubricat (0,13 g, 38%) ca o pulbere; ¹H RMN (D6-DMS0) d 8,95 (d, 1H), 8,50 (t, 1H), 8,45 (d, 1H), 7,70 (d, 1H), 7,60 (d, 2H), 7,30 (d, 3H), 7,05 (d, 1H), 7,00 (s, 1H), 6,80 (br s, 1H), 6,60 (br s, 1H), 5,10 (dd, 1H), 4,65 (m, 1H), 4,45 (m, 1H). 4,35 (m, 1H), 4,00 (m. 1H), 3,55 (dd, 1H). 3,05 (m, 2H), 3,00 (s, 3H), 2,70 (dd, 1H), 2,55 (dd, 1H), 2,35 (s, 3H). 2,05 (m, 1H), 1,90 (m, 1H), 1.75 (m, 1H),

1,65 (m, 1H), 1,35 (m, 1H), 1,15 (d, 3H), 0,85 (d, 3H). FAB (GLYC)-MS: (M+H) = 937.

7. Acidul ciclo-(D-Val-NMeArq-Glv-Asp-3-aminometil-6-iodo-benzoic)· Peptida ciclică (490 mg, 0,52 mmoli) este deprotejată cu un exces de acid fluorhidric în prezență de anisol ca agent de purjare. Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă pe o coloană preparativă Vydac C18 de 2,5 cm, utilizând 0,8% pe min, gradient de la 10 la 38% acetonitril conținând 0,1% acid trifluoracetic, pentru a se obține sarea TFA a compusului din titlu (194 mg, 46%) ca produs solid, alb, pufos. ¹H RMN (D6-SMS0): d 12,30 (br s, 1H), 9,00 (d, 1H), 8,40 (m, 2H). 7,70 (d, 1H),

7,50 (m, 1H), 7,30 (m, 1H),.7,05(d, 1H), 7,00 (s, 1H), 7,00 (br s, 4H), 5,15 (dd, 1H), 4,40 (d, 1H), 4,40 (q,2H), 4,0 (m, 2H), 3,55 (dd, 1H), 3,15 (q, 2H), 3,10 (s, 3H), 2,70 (dd, 1H), 2,50 (m. 1H), 2,05 (m, 2H), 1.65 (m, 1H), 1.35 (m, 2H), 1,15 (d, 3H), 0,90 (d, 3H); FAB-MS: (M+H)= 701.

Tabelul A arată FAB-MS care se obține pentru anumiți compuși intermediari ciclici.

Tabelul A

Gly,

	N-MeArg^ /	^Asp \
	/ R	NH
		s
Numărul compusului	R	X		Z	FAB- MS(M+ bl
intermediar ciclic
101	D-Val		I	H	701,37
98,102	D-Val		H	I	701
103	D-Abu		I	H	687,33
104	D-Abu		H	I	687,3
105	D-Val		CI	H	609
106	D-Val		H	CI	609
107	D-Abu		H	CI	595,4
108	D-Val		Me	H	589
109	D-Val		H	Me	589
110	D-Abu		H	Me	575,4
111	D-Val		MeO	H	623 (+H20)
112	D-VAI		H	MeO	605

RO 114895 Bl

Alte jumătăți de ciclizare substituite la ciclu pot fi sintetizate așa cum este prezentat în schemele următoare și în discuția de mai jos. Jumătatea formulei de mai sus în care Z = NH₂ poate fi sintetizată prin cel puțin două metode, diferite. De exemplu, plecând de la acidul 4-acetamidobenzoic (Aldrich Chemical Co.), o alchilare FriedelCrafts cu N-hidroximetil-dicloracetamida duce la obținerea derivatului dicloracetil al aci- 4725 dului 3-aminometil-4-acetamidobenzoic (Felder, Pitre and Fumagalli (1964), Helv.

Chim. Acta, 48, 259-274). Hidroliza celor două amine duce la obținerea acidului 3aminometiM-aminobenzoic.

CO-iH

Di-t-butil Dicirbonat

EtjN. MeOH

4730

4735

Alternativ, plecând de la compusul 3-ciano-4--nitrotoluen, prin oxidare cu 4740 trioxidul de crom, urmată de reducere, se obține acidul 3-aminometil-4-aminobenzoic.

OH kA <kw^CN

NQ

a] CrO₃

NCfe

NH4745

b] H₂-catalizator

Jumătate din formula de mai sus în care Y = CH₂NH₂ poate fi sinterizată din 4750 3,5-dicianotoluen, prin oxidarea grupei metil cu trioxidul de crom, după care are loc reducerea.

H,C

CN

CN

CN

4755

4760

a) CrO₃

b) catalizator H

2*

Jumătate din formula de mai sus în care Z = CH₂-NH₂, poate fi sintetizată plecând de la acidul 3-ciano-4-metilbenzoic (K & K Rare anf Fine Chemicals}. Prin bromurare, utilizând N-bromsuccinimida, se poate obține acidul 4-bromometil-3-cianobenzoic. 4765 O reacție de substituție nucleofilă în poziția brommetil, utilizând un anion de amină, poate produce o amină protejată. Anionii amidei care se pot utiliza în această reacție, includ ftalimida de potasiu (sinteza Gabriel] și anionul trifluoracetamidei (Usui (1991), Nappon Kagaku Kaishi, 206...212) utilizat în acest exemplu.

RO 114895 Bl

Reducerea nitrilului poate produce o grupă aminometilică secundară, care ar putea fi protejată prin reacția cu compusul di-t- butii dicarbonat.

Prin îndepărtarea grupei de protecție trifluoracetamidă, utilizând piperidina în soluție apoasă, poate fi obținută jumătatea din formula menționată mai sus.

NHTfa

Boc-HN ^C°^2H IM Piperidina BoC-HN ^C0₂H ί

NHTfa

NH-,

Alternativ, jumătatea poate fi preparată din acidul 4-brombenzoic, așa cum este arătat în schema următoare.

Aceste jumătăți de ciclizare substituite la ciclu, pot fi utilizate pentru a sintetiza compusul intermediar ciclic.

Compusul intermediar ciclic 13 Ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-l\/lamb(4-NH2).

NH

O

NH

RO 114895 Bl

Acest compus poate fi preparat utilizând procedeul descris mai sus pentru Ciclo-(D-\/al-NMeArg-Gly-Asp-Mamb substituind jumătatea de ciclizare substituită în 4820 ciclu, în care Z = NH₂.

Compușii intermediari ciclici 114, 115 și 116.

4825

4830

X., = 2-propil, etil sau para-hidroxifenilmetil

Xg = H

Compușii ciclo (D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb (5-CH₂NHXg), cyclo (D-AbuNMeArg-Gly-Asp-Mamb (5-CH₂NHX₂) și cyclo (D-Tyr-NMeArg-Gly-Asp-Mamb (5- 4835 CH₂NHX₂), pot fi preparați prin metodele descrise mai sus, utilizând jumătatea de ciclizare substituită în ciclu în care Y = CH₂NH₂.

Compușii intermediari ciclici 117, 118 și 119.

X, = 2-propil, etil sau para-hidroxifenilmetil; X₂ = H

Compușii ciclo(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb (4-CH₂NHX2), ciclo (D-Abu-NMeArgGly-Asp-Mamb (4-CH₂NHX2) și ciclo (D-Tyr-NMeArg-Gly-Asp-Mamb (4-CH₂NHX2] pot fi preparați prin procedeele descrise mai sus utilizând jumătatea de ciclizare substituită 4850 în ciclu, în care Z = CH₂NH₂.

Alte jumătăți de ciclizare R³¹. Alternativele la utilizarea Mamb ca jumătăți de ciclizare R³¹ în cazul peptidelor ciclice ale prezentei invenții, includ acidul aminoalchilnaftoic și reziduul acestuia, precum și reziduul acidului aminoalchiltetrahidronaftoic.

Compușii intermediari reprezentativi acidul aminoalchil naftoic și acidul 4855 aminoalchiltetrahidronaftoic utilizați în sinteza peptidelor ciclice ale prezentei invenții, sunt descrise în continuare.

Sinteza acestor compuși intermediari este prezentată mai jos, în schema 7.

RO 114895 Bl

4860

4865

4870

4875

4880

4885

NaOCI. NaOH

II

MOC

NaOAc

NH/X-HCI

ΜβΟΗΛ-feO

72%

COjH

«=!

N-OH

AIC4_y NaCI Δ 85%

4890

4895

4900

4905

Clorhidratul acidului amino-5.6,7,8-tetrahidro-2-naftoic f8K,Compusul din titlu este preparat conform modificării procedeelor standard menționate înainte în literatură [Earnest I, Kalvoda J, Rihs, G and Mutter M, Tett. Lett., voi. 31 nr.28, pag.4011...4014 (1990).

Așa cum este menționat în schema 7 de mai sus, acidul 4-fenilbutiric (1) este transformat în esterul etilic (2) care este acilat cu ajutorul clorurii de aluminiu și acetilclorura, pentru a se obține esterul etilic al acidului 4-acetil-fenilbutiric (3). Acest ester este supus la saponificare, obținând acidul 4-acetil fenilbutiric (4). In mod suplimentar, grupa acetil este oxidată obținând acidul 4-carboxifenilbutiric (5) care este transformat în acidul 1-tetralin-7-carboxilic (6), utilizând clorură de aluminiu, prin ciclizare Friedel-Crafts, cu un randament rezonabil ridicat. La acest stadiu tetralona este separată în două porțiuni și o parte este trasnformată în oximă (7) utilizând acetatul de sodiu și clorhidratul de hidroxilamină. Oxima este supusă la hidrogenoliză pentru a se obține amestecul racemic al acidului 8-amino-5,6,7-tetrahidro-2-naftoic, sub formă de clorhidrat (8) pentru utilizare ca compus intermediar pentru încorporarea în peptida ciclică.

Partea A. □ soluție de acid 4-fenilbutiric (50,0 g, 0,3 mmoli) în (140 ml) de etanol cu acid sulfuric concentrat (0,53 ml) se agită la temperatura de reflux timp de

RO 114895 Bl peste 5 h. Soluția răcită a fost turnată în apă cu gheață și extrasă cu acetat de etil. Straturile organice combinate sunt spălate din nou cu o soluție salină, uscate pe sulfat de magneziu anhidru și evaporate la sicitate sub presiune redusă, obținând esterul 4910 etilic al acidului 4-fenilbutiric (56,07 g, 0,29 mmoli, 97%) ca lichid galben. ¹H RMN (CDCIg) d 7,3-7,1 (m, 5H), 4,1 (q, 2H, J = 7,1 Hz], 2.7 (t, 2H, J = 7,71 Hz), 2,3 (t,

2H. J = 7,5 Hz), 1,95 (quintet, 2H, J=7,5 Hz), 1,25 (t. 3H, J=7,1 Hz).

Partea B. La o soluție de clorură de aluminiu (153 g, 1,15 mmoli] și clorură de acetil (38,5 ml, 42,5 g, 0,54 mmoli) în 1500 ml de diclormetan, se adaugă în 4915 picături o soluție de ester etilic al acidului 4-fenilbutiric (50,0 g în 1250 ml de apă. Amestecul este agitat la reflux timp de peste 4 h. Soluția este concentrată la jumătate de volum și acidulată la pH egal 1,0 utilizând acid clorhidric (1N).

Precipitatul rezultat este colectat și spălat cu apă, pentru a se obține acidul

4-acetilfenilbutiric (53,76 g, 0,26 mmoli, 99%) ca produs solid, alb, cu punctul de 4920 topire la 50-52°C. ¹H RMN (CDCI₃) d 7,9 (d, 2H, J = 8,1 Hz], 7,25 (d, 2H, J = 9,1 Hz], 2,75 (t, 2H, J = 7,7 Hz], 2,6 (s, 3H), 2,4 (t, 2H, J = 7,3 Hz), 2,0 (quintet. 2H,

J = 7.4 Hz).

Partea D. La o soluție de hipoclorit de sodiu (330 ml, 17,32 g, 0,234 mmoli) într-o soluție de hidroxid de sodiu (50%, 172 ml) încălzită la 55°C, se adaugă în 4925 porțiuni produsul solid acidul 4-acetilfenilbutiric (16,0 g, 0,078 mmoli] în timp ce temeperatura este menținută între 60 și 70°C. Amestecul este agitat la 55°C timp de peste 20 h. Soluția răcită este stinsă prin adăugarea sub formă de picături a unei soluții de bisulfit de sodiu (25%, 330 ml). Amestecul este apoi transferat într-un flacon și acidulat prin adăugarea cu atenție a acidului clorhidric concentrat. Produsul solid 4930 este colectat, spălat cu apă și uscat, apoi triturat secvențial cu clorbutan și hexan, pentru a obține acidul 4-carboxifenilbutiric (15,31 g, 0,074 mmoli, 95%) ca produs solid, alb cu punct de topire de 19O...195°C. ¹H RMN (DMSO) d 12,55 (bs, 1H], 8,1 (s, 1H), 7,85 (d. 2H, J=8,1 Hz), 7,3 (d. 2H], J=8,1 Hz, 2,7 (t, 2H, J=7,5 Hz], 2,2 (t, 2H], J=7,4 Hz), 1,8 (quitet, 2H, J=7,5 Hz). 4935

Partea E. Un amestec de acid 4-carboxifenilbutiric (10,40 g, 0,05 mmoli), clorură de aluminiu (33,34, 0,25 mmoli] și clorură de sodiu (2,90 g, 0,05 mmoli) se încălzește cu agitare continuă la 190°C timp de peste 30 min. Odată ce amestecul s-a răcit la 60°C, se adaugă cu atenție acid clorhidric rece (1N, 250 ml). Amestecul este extras cu diclormetan. Straturile organice combinate sunt spălate din nou cu acid 4940 clorhidric diluat și apă, uscat pe sulfat de magneziu anhidru și evaporat la sicitate sub presiune redusă. Produsul solid rezultat este triturat cu clorbutan, pentru a se obține acidul 1-tetralon-7-carboxilic (9,59 g, 0,05 mmoli, 1OO%), ca produs solid brun, cu punctul de topire la 210...215°C. ¹H RMN (DMSO): d 8,4 (s, 1H), 8,1 (d, 2H, J =

8,0 Hz), 7,5 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 3,0 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 2,65 (t, 2H, J = 6,6 Hz], 4945 2,1 (quintet, 2H, J=6,3 Hz).

Partea F. O soluție de acid 1-tetralon-7-carboxilic (1,0 g, 0,0053 mmoli] și acetat de sodiu (1,93 g, 0,024 mmoli) și clorhidrat de hidroxilamină (1,11 g, 0,016 mmoli) într-un amestec de metanol și apă (1:1, 15 ml) se aduce sub agitare la reflux timp de peste 4 h. Amestecul este răcit și apoi se mai adaugă apă (50 ml). Produsul 4950 solid este colectat, spălat cu apă și uscat, apoi triturat cu hexan, pentru a se obține acidul 1-tetralonoxima-7-carboxilic (0,78 g, 0,0038 mmoli, 72%), ca produs solid alb, cu punctul de topire de 205...215°C. ¹H RMN (DMSO) d 11,3 (d, 1H, J=7,7 Hz), 2,8 (t. 2H, J=5,9 Hz), 2,7 (d, 2H, J=6,6 Hz), 1,9-1,7 (m, 2H).

Partea G. Un amestec de acid 1-tetralonoxima-7-carboxilic (0,75g, 0,0037 4955 mmoli) în metanol (25 ml) cu acid clorhidric concentrat (0,54 ml, 0,20 g, 0,0056

RO 114895 Bl

4960

4965

4970

4975

4980

4985

4990

4995

5000

5005 mmoli) și catalizator paladiu pe cărbune (0,10 g, paladiu pe cărbune 5%) se agită timp de 20 h la temperatura ambiantă în atmosferă de hidrogen (4,20 kgf/cm² (60 psi)). Amestecul de reacție este filtrat pe Celită și spălat cu metanol. Filtratul este evaporat la sicitate sub presiune redusă și reziduul este purificat prin cromatografie flash utilizând ca eluant un amestec în părți egale de hexan și acetat de etil, obținând amestecul racemic de clorhidrat al acidului 8-amino-5,6,7,8-tetrahidro-2-naftoic (0,225 g, 0,001 mmoli, 27%), ca produs solid alb, cu punctul de topire de

289...291 °C. ¹H RMN (DMSO) d 8,55 (bs, 3H), 8,2-8,1 (m, 1H), 7,85-7,8 (m, 1H), 7.35-7,25 (m. 1H), 4,5 (m. 1H), 2,9-2,8 (m, 2H), 2,1-1,9 (m, 3H). 1,85-1,7 (m, 1H).

Acidul N-fBoc)-8-aminometil-5,6,7,8-tetrahidro-2-naftoic f12). Așa cum s-a arătat în schema 7, tetralona rămasă este transformat în esterul metilic (9), utilizând procedeul din Gregory G.B. and Johnson, A.L.JOC, 1990, 55, 1479, esterul tetralon metilic (9) este transformat întâi în cianohidrină prin tratare cu trimetilsililcianură și iodură de zinc și apoi, prin dehidrogenrae in situ cu oxiclorură de fosfor în piridină, trece în metil-8-ciano-5,6-dihidro-2-naftoat (ii). Acest naftoat este divizat în două porțiuni și o parte se supune hidrogenolizei, N-BOC-protecției și saponificării, pentru a se obține N-(Boc)-8-aminoetil-5,6,7,8-tetrahidro-2-naftoic acidul (12) ca compus intermediar pentru încorporare în peptida ciclică.

Partea A. Un amestec de acid 1-tetralon-7-carboxilic (7.0 g, 0,037 moli] în metanol (13,6 ml, 10,8 g, 0,30 mmoli] cu o cantitate catalitică de acid clorhidric (0,07 ml), 0,12 g, 0,0012 mmoli] se agită la reflux timp de peste 5 h. Amestecul de reacție este turnat pe gheață cu apă și extras cu acetat de etil. Straturile organice combinate sunt spălate din nou cu apă și soluție salină, uscate pe sulfat de magneziu anhidru și evaporate la sicitate sub presiune redusă. Produsul solid rezultat este purificat prin cromatografie flash utilizând un amestec de 75 părți hexan și 25 părți acetat de etil. Produsul rezultat este triturat cu hexan, pentru a se obține esterul acidului 1-tetralon-7-carboxilic (3,61 g, 0,018 mmoli, 49%). ca produs solid galben, cu punctul de topire la 170...172°C.

¹HRMN (CDCI₃) d 8.7 (s. 1H), 8,15 (d, 1H, J=8,1 Hz], 7,35 (d, 1H, J=8,1 Hz), 3,95 (s, 3H), 3,05 (d, 2H, J= 6.1 Hz], 2,7 (t, 2H, J=6,4 Hz). 2,15 (quintet, 2H, J=6,2 Hz).

Partea B. O soluție de ester metilic al acidului 1 -tetralon-7-carboxilic (3,50 g, 0,017 mmoli), trimetilsililcianură (1,98 g, 0,02 mmoli) și iodură zinc (0,10 g) în benzen (20 ml) se agită la temperatura ambiantă timp de peste 15 h. Se adaugă apoi secvențial și sub formă de picături, 20 ml de piridină și oxiclorură de fosfor (4,0 ml. 6,55 g, 0,0425 mmoli. Amestecul de reacție este agitat la temperatura de reflux timp de peste o oră și apoi este evaporat la sicitate sub presiune redusă. Reziduul este luat cu cloroform, spălat din nou cu apă, uscat pe sulfat de magneziu anhidru și evaporat la sicitate sub presiune redusă, pentru a se obține 8-ciano-5,6-dihidro-2naftoatul de metil (1,70 g, 0,008 mmoli, 47%) ca produs solid galben, cu punctul de topire la 73...75°C. ¹H RMN (CDCIJ d 8,0-7,9 (m, 1H), 7,3-7,2 (m, 1H), 6,95 (t, 1H, J=4,8 Hz), 3,95 (s, 3H), 2,9 (t, 2H, J = 3Hz), 2,6-2,4 (m, 3H).

Partea C. Un amestec de 8-ciano-5,6-dihidro-2-naftoat de metil (0,80 g, 0,0038 mmoli) în 25 ml de metanol în 0,56 ml acid clorhidric concentrat și catalizator paladiu pe cărbune 5% 0,40 g, se agită timp de 20 h la temperatura ambiantă în atmosferă de hidrogen (3,5 kgf/cm²). Amestecul de reacție este filtrat pe Celită și spălat cu metanol. Filtratul este evaporat la sicitate sub presiune redusă și reziduul este triturat cu hexan pentru a se obține amestecul racemic de 8RO 114895 Bl aminometil-5,6,7,8-tetrahidro-2-naftoat de metil (0,80 g, 0,0037 mmoli, 97%), ca produs solid alb, cu punct de topiree la 172...179°C; ¹H RMN (DMSO) d 8,2 (m, 4H),

7,9-7,7 (m, 6H), 7,5-7,2 (m, 4H), 3,9-3,8 (m, 7H), 3,3-2,7 (m, 10H), 2,0-1,6 (m,

8H).

Partea D. O soluție de 8-aminometil-5,6,7,8-tetrahidro-2-naftoat de metil (0,78 5010 g, 0,0036 mmoli) și trietilamină (0,55 ml, 0,40 g, 0,004 mmoli) în 75 ml tetrafuran soluție apoasă 50%, se adaugă în porțiuni la 0,99 g (0,004 mmoli) de 2-(terțiarbutoxicarboniloxiimino)-2-fenilacetonitril solid. Amestecul obținut este agitat la temperatura ambiantă timp de peste 3 h. Soluția este concentrată la o jumătate de volum și extrasă cu dietiletar. Stratul apos este apoi acidulat la pH = 1,0 utilizând acid 5015 clorhidric 1N și apoi este extras cu acetat de etil. Straturile organice combinate sunt uscate pe sulfat de magneziu anhidru și evaporate la sicitate sub presiune redusă. Reziduul este purificat prin flash cromatografie, utilizând un amestec de 8 părți hexan și 2 părți acetat de etil, când se obține N-(Boc)-8-aminometil-5,6,7.8-tetrahidro-2naftoatul de metil (0,54 g, 0,0017 mmoli, 47%) ca produs solid, alb, cu punctul de 5020 topire la 72...80°C; ¹H RMN (DMSO) d 13,8 (s, 1H), 7,8-7,65 (m, 3H), 7,6-7,5 (m,

3H), 7,25-7,20 (m, 1H), 7,15-7,05 (m, 1H), 3,9-3,8 [m, 1H). 3,2-2,8 (m, 4H), 1,8-1,6 (m, 3H), 1,4 (s, 6H).

Partea E. La o soluție de N-(Boc]-8-aminometil-5,6,7,8-tetrahidro-2-naftoat de metil (0,50 g, 0,0016 mmoli] în 12,5 ml de etanol, se adaugă sub formă de picături, 5025 o soluție de 0,50 g hidroxid de sodiu în 12,5 ml apă. Amestecul este agitat la reflux timp de peste 4 h. Amestecul de reacție este concentrat la jumătate de volum și apoi este acidulat la pH = 1,0 utilizând acid clorhidric 1N. Reziduul este purificat prin cromatografie flash, utilizând un gradient format din hexan și acetat de etil în părți egale, pentru a se obține un amestec racemic din compusul din titlu, acidul N-(Boc)-2- 5030 aminometil-5,6,7,8-tetrahidro-2-naftoic (0,19 g, 0,00062 mmoli, 39%) ca produs solid alb, cu punctul de topire la 172...176°C. ¹H RMN (DMSO) d 7,8 (s, 1H), 7,65 (d, 1H, J=8,1 Hz], 7,15 (d, 1H, J=8,1 Hz), 7,1-7,0 (m, 1H], 3,2-3,1(m, 2H], 3.02.7 (m. 4H), 1,8-1,6 (m, 4H], 1,4 (s, 9H).

Acidul N-fBoc]-8-aminometil-2-naftoic (141. Naftoatul rămas (11) este tratat cu 5035 2,3-diclor-5,6-diciano-1,4-benzochinonă (DDQ]în dioxan, pentru aromatizarea ciclului adiacent, obținând 8-ciano-2-naftoatul de metil (13], Apoi, nitrilul este redus prin hidrogenare și esterul metilic este saponificat la acid carboxilic. Acest acid este apoi N-Bocprotejat pentru a obține acidul N-(Boc)-8-aminometil-2-naftoic (14), compusul intermediar pentru încorporare în peptida ciclică. 5040

Partea A. O soluție de 8-ciano-5,6-dihidro-2-naftoat de metil (1,0 g, 0,007 mmoli) și 2,3-diclor-5,6-diciano-1,4-benzochinona (1,07 g, 0,0047 mmoli) în 50 ml dioxan se agită la 120°C, timp de peste 16 h. Amestecul de reacție este turnat în apă cu gheață și extras cu acetat de etil. Straturile combinate organice se usucă pe sulfat de magneziu anhidru și se evaporă la sicitate sub presiune redusă. Reziduul este apoi 5045 purificat prin cromatografie flash utilizând acetat de etil, pentru a obține 8-ciano- naftoatul de metil (0,72 g, 0,0034 mmoli, 73%) sub formă de produs solid cafeniu, cu punctul de topire la 178...182°C. ¹H RMN (COCI³) d 8,95 (s, 1H), 8,3-8,2 (m,

1H), 8,15-8,10 (m, 1H], 8,0-7,95 (m, 2H), 7,7-7,6 (m, 1H], 4,05 (s, 1H).

Partea B. Un amestec de 8-ciano-2-naftoat de metil (1,0 g, 0,0047 mmoli] în 5050 25 ml de metanol cu 0,69 ml acid clorhidric concentrat, catalizator de paladiu pe cărbune 5% 0,20 g, se agită timp de 6 h la temperatura ambiantă în atmosferă de hidrogen (3,50 kgf/cm²]. Amestecul de reacție este filtrat pe Celită și spălat cu metanol. Filtratul este evaporat la sicitate sub presiune redusă și reziduul este triturat

RO 114895 Bl cu hexan pentru a se obține 8-aminometil-2-naftoatul de metil (0,76 g, 0,0035 mmoli,

75%) sub formă de ulei. Ή AMN (DMSO) d 8,75 (s, 1H), 8,5 (br, 2H), 8,2-8,05 (m,

3H), 7,75-7,70 (m, 2H), 4,6 (s, 2H), 3,95 (m, 3H).

Partea C. La o soluție de 8-aminometil-2-naftoat de metil (0,75 g, 0,0035 mmoli) în tetrahidrofuran uscat, 50 ml răcit la 0°C, se adaugă o soluție de hidroxid de litiu (0,5 N, 5,83 ml). Amestecul este agitat la temperatura ambiantă timp de peste 20 h. Se mai adaugă o altă parte de hidroxid de litiu și amestecul este agitat un timp adițional de 20 de h. Produsul solid se colectează și se filtrează, iar filtratul este evaporat la sicitate sub presiune redusă. Produsul solid este triturat cu ester dietilic, pentru a se obține acidul 8-aminometil-2-naftoic (0,67 g, 0,0033 mmoli, 95%) ca produs solid alb, cu punctul de topire la 223...225°C. ¹H RMN (DMSO) d 8,6 (s, 1H), 8,1-7,9 (m. 4H), 7,55-7,5 (m, 1H), 7,45-7,35 (m, 2H), 4,2 (s, 2H).

Partea D. O soluție de acid 8-aminometil-2-naftoic (0,50 g, 0,00025 mmoli) și trietilamină (0,038 ml, 0,028 g, 0,000275 moli) în 5 ml 50% tetrafuran soluție apoasă, se adaugă în porțiuni la produsul solid 2-{terțiar-butoxicarbonil-oxiimino)-2-fenil· acetonitril (0,068 g, 0,000275 mmoli). Amestecul este agitat la temperatura ambiantă timp de peste 5 h. Soluția este concentrată la jumătate de volum și extrasă cu dietileter. Stratul apos este apoi acidulat la pH=1,0 utilizând acidul clorhidric (1N) și apoi este extras cu acetat de etil. Straturile organice combinate sunt uscate pe sulfat de magneziu anhidru și evaporate la sicitate sub presiune redusă, pentru a se obține compusul rubricat, acidul N-(Boc)-8-aminometil-2-naftoic (0,050 g, 0,00017 mmoli) ca produs solid alb, cu punctul de topire la 190...191 °C. ¹H RMN (DMSO) d 13,1 (bs, 1H), 8,8 (s, 1H), 8,0 (q, 2H, J= 7,9 Hz), 7,9 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 7,6 (t,

1H, J=7,5 Hz), 7,65 -7,55 (m, 2H), 4.6 (d, 2H, J=5,5 Hz), 1,4 (s, 9H).

Compușii intermediari ciclici 89a si 89b. Acidul cilco (D-Val-NMeArg-Gly-Aspaminotetralin-carboxilic); compusul cu formula (VIII) în care J=D-Val, K=NMeArg, L=Gly, M=Asp, R¹=R² = H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris mai sus pentru ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb) (compusul intermediar ciclic 4). Metoda DCC/DMAP este utilizată pentru legarea acidului Boc-aminotetralin-carboxilic la oxim rășină. Peptida este preparată pe saclă de 0,164 mmoli pentru a se obține peptida -ciclică protejată (69 mg, 49,3%).- Peptida (69 mg) și 0,069 ml de anisol se tratează cu acid fluorhidric anhidru la 0°C, timp de 30 min. Materialul brut este precipitat cu eter, redizolvat în acetonitril soluție apoasă și liofilizat, pentru a genera compusul rubricat (59,7 mg, mai mult decât randamentul cantitativ, calculat ca sare, fluorură). Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă pe coloană cromatografică preparativă Vydac C18 de 2,5 cm, utilizând 0,23%/min gradient de 16,2 la 27% acetonitril conținând 0,1% TFA și apoi se liofilizează obținând sarea TFA a compusului din titlu, ca produs solid, alb, pufos. Au fost obținuți 2 izomeri: izomerul #1 (12,5% recuperare randament total 6,2%, FAB-MS: [M+H]=615,34, izomerul #2 (18,6% recuperare, randament total 9,3%).

FAB-MS : (Μ + H) = 615,35.

Compusul intermediar ciclic 89 c. Acidul ciclo (D-Val-NMeArg-Gly-Asp-aminometilnaftoic); compusul cu formula (IX) în care J=D-Val, K=NMeArg, L=Gly, M=Asp, R¹=R² = H.

Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris mai sus pentru ciclo-(D-Val-NMEarg-Gly-Asp-Mamb) (compusul intermediar ciclic 4). Metoda

DCC/DMAP este utilizată pentru legarea acidului Boc-aminometil-naftoic la oxim rășină. Peptida este preparată pe scală de 0,737 mmoli pentru a se obține peptida ciclică

RO 114895 Bl protejată (463 mg, 73,1%). Peptida (463 mg) și 0,463 ml de anisol se tratează cu acid fluorhidric anhidru la 0°C, timp de 20 min. Materialul brut este precipitat cu eter, 5105 redizolvat în acetonitril soluție apoasă și liofilizat, pentru a genera compusul rubricat (349 mg, mai mult decât randamentul cantitativ, calculat ca sare, fluorură). Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă pe coloană preparativă Vydac C18 de 2,5 cm, utilizând 0,45%/min gradient de 4,5 la 22,5% acetonitril conținând 0,1%

TFA și apoi prin liofilizare se obține sarea TFA a compusului din titlu, ca produs solid, 5110 alb, pufos (12,1% recuperare, randament total 7,8%).

FAB-MS : (Μ + H) = 625,32.

Sinteza compușilor intermediari ciclici linkeri modificați. Compușii intermediari ciclici linkeri modificați pot fi sintetizați fie prin încorporarea unui linker protejat corespunzător în jumătatea de ciclizare și apoi sintetizarea compusului intermediar ciclic 5115 linker modificat sau prin legarea linkerului la compusul intermediar solid.

Jumătățile de ciclizare linker modificate. Jumătățile de ciclizare linker modificate pot fi sintetizate fie prin legarea linkerului la jumătatea de ciclizare substituită în ciclu așa cum s-a descris mai sus sau prin încorporarea unui linker protejat corespunzător în sinteza jumătății de ciclizare. 5120

De exemplu, jumătatea de ciclizare substituită în ciclu descrisă mai sus în care X = NH₂, poate reacționa cu linkerul succinimidil sau cu RCOOSu (R = -(CH₂)₅-NH₂ sau CH₂-C₆H₅-p-NH₂), pentru a se obține linkerul legat la poziția X prin grupa amido.

OH OH OH 5125

a) Boc-ON, b) RCOOSu

5130

Jumătatea de ciclizare substituită în ciclu cu X = OH, poate reacționa cu linkerul derivat de la tetraetilenglicol. Linkerul constă din patru unități etilenice separate prin grupe eterice și care are grupa amino de protejare Z la unul din capetele tetraedrului și care conține o grupă labilă cum ar fi tosilatul la celălalt capăt al tetraedrului. Aceasta va forma un linker legat la poziția X, prin grupa eterică. 5135

Jumătatea de ciclizare substituită la ciclu cu Z=NH₂ poate reacționa cu (Z-NH (CH₂)₅C0)₂0 pentru a da linkerul legat la poziția Z prin grupa amido.

_ Boc-NHYY^C°2^H _514Q

H₂N^^ Z-NH(CH₂)₅CONH^^

Linkerii pot fi legați la jumătatea de ciclizare substituită la ciclu, cu Z=OH. Atașarea linkerilor la ciclu necesită ca linkerul să aibă o grupă labilă convenabilă pentru reacție cu ion fenolatul. Astfel de grupe labile includ halogenurile, arii sulfonații 5145 (de exemplu tosilatul) și alchil tosilații (de exemplu mesilatul). De exemplu, catena alchil, o grupare tosil la unul din capetele catenei și o amină protejată la celălalt capăt, această catenă alchil fiind utilizată. Literatura prevede diferite exemple de alchilare la gruparea fenolică în prezența unei grupări de acid carboxilic în prezența acestei grupări conform Brockmann, Kluge and Muxfeldt (1957), Ser. Deutsch. Chem. Ges, 90, 5150 2302.

RO 114895 Bl

I Ij Z-NH-(CH₂),.CH₂-OTs. HO^ -NaOH

Βθ€-ΝΗ'^γ^γ'^<2θ3Η

Z-NH-(CH₂)_nCH₂O'^zk^^x>

Jumătatea de ciclizare substituită cu Z = CH₂NH_P, poate reacționa cu ZNH(CH_P)_n-COOSu pentru a se obține linkerii atașați la poziția Z prin grupa amidometil.

Boc-HN

CO₂H

Boc-HN

CO₂H nh₂

Z-NH-(CH₂)„-CONH

Exemplele precedente au demonstrat utilizarea linkerilor care se termină printro grupă amino protejată. Linkerii care se termină prin grupe de acid carboxilic sau esteri, pot fi așadar dezirabili. Diferiți astfel de linkeri pot fi atașați la jumătățile de ciclizare descrise mai sus. De exemplu, în schema următoare, acidul 3-aminometiMhidroxibenzoic t-Boc protejat este tratat cu cloracetatul de benzii și baza pentru introducerea unui linker scurt ca terminație, într-un ester.

Boc-NH

COîH

Cl-CHjCCb-Bzl

NaOH

Z-NH ^COî-Bzl

Un linker poate fi atașat la jumătatea de cicliczare substituită la ciclu, când Y = NH_P. Așa cum se arată în schema 8, hidroliza eșterului metilic al 3-aminometil-5aminobenzoatului de metil t-Boc protejat în condiții bazice blânde, urmată de tratarea cu acrilat de benzii (Lancaster Synthesis. Inc.] și catalizator acidul acetic, poate produce un produs de adiție Michael. Chiar dacă această jumătate de ciclizare cu linker modificat conține o amină secundară neprotejată, aceasta ar putea fi utilizată prin tratarea.cu benzii cloroformiat și o bază slabă.

CO₂-Bzl

CO₂H

AcOH. 60°C

Boc-NH

Z-Cl. NaHCO3 (opțional)

CO₂-Bz1

Boc

RO 114895 Bl

Linkerul poate fi așadar încorporat în sinteza jumătăților de ciclizare. Un exemplu este sinteza jumătății de ciclizare cu linker modificat 5-Aca-Mamb.

Sinteza Boc-MambfZ-5-Aca]. Sinteza este prezentată conform schemei 9, prezentată în continuare.

Partea A; 3-nitro-5-hidroximetilbenzoatul de metil. La o soluție de 3-nitroizoftalat 5205 de monometil (396,0 g, 1,76 mmoli) în 1000 ml de tetrahidrofuran anhidru, se adaugă prin picurare 2,0 M BMS (complex metilsulfură de boran) în 880 ml de tetrahidrofuran (1,76 mmoli) timp de peste o oră. Soluția rezultată este încălzită la temperatura de reflux timp de 12 h și apoi se adaugă lent 750 ml de metanol, pentru terminarea reacției. Soluția este apoi concentrată pentru a se obține un produs solid galben 5210 care este recristalizat din toluen (297,5 g, 80%). ¹H RMN (CDCI₃): 8,71-8,70 (m,

1H], 8,41-8,40 (m, 1H), 8,31-8,30 (m, 1H), 4,86 (s, 2H), 396 (s, 3H), 2,47 (s,

1H). Punctul de topire la 76,5...77,5°C C;DCI-MS: (M+H)=212.

Partea B; Metansulfonatul de 3-carbometoxi-5-nitrobenzil. 3-Nitro-5-hidroximetilbenzoatul de metil (296,0 g, 1,40 mmoli) și proton spongios (360,8 g, 1,68 mmoli), 5215 se dizolvă în 150 ml de diclorură de etilen. Anhidrida triflică (292,3 g, 1,68 mmoli) se dizolvă în 800 ml de diclorură de etilen care se aduce sub formă de picături la suspensie timp de peste 90 min și amestecul este lăsat sub agitare 18 h în atmosferă de azot. Amestecul de reacție este terminat prin adăugare de 2000 ml de apă, apoi cele două straturi sunt separate și stratul organic este spălat cu 1000 ml de 5220 acid clorhidric 1N în porțiuni, cu apă, o soluție saturată de bicarbonat de sodiu, cu apă și o soluție saturată de clorură de sodiu. Stratul organic este uscat pe sulfat de magneziu și concentrat sub presiune redusă. Produsul galben care rezultă este recristalizat din toluen, obținând compusul rubricat, solid, cafeniu (366,8 g, 91%).¹H RMN (CDCI₃): 8,84-8,85 (m, 1H), 8,45-8,46 (m, 1H), 8,40-8,39 (m, 1H), 5,35 (s, 5225 2H], 3,98 (s, 3H), 3,10 (s, 3H); MP= 96,..97°C. DCI-MS: (M+NHJ = 307.

Partea C; 3-Azidometil-5-nitrobenzoatul de metil. O cantitate de 300,0 g (1,04 mmoli) de metansulfonat de 3-carbometoxi-5-nitrobenzil și 81,0 g (1,25 mmoli) azidă de sodiu se suspendă în 1700 ml dimetilformamidă și se agită la temperatura camerei timp de 5 h. Amestecul de reacție este diluat cu 2000 ml acetat de etil, spălat cu 5230 1000 ml de apă, de două ori, în porțiuni și odată cu o soluție saturată de NaCl, apoi este uscat pe sulfat de magneziu și concentrat sub presiune redusă. Siropul rezultat de culoarea chihlimbarului este uscat sub vacuum la 40°C pentru a se obține compusul rubricat, solid, cafeniu (226,5 g, 92%). ¹H RMN (CDCI₃): 8,60 (s, 1H), 8,26 (s,

1H), 8,20 (s, 1H), 4,52 (s, 2H), 3,88 (s, 3H), cu punctul de topire la temperatura 5235 de 44...46°C.

Partea D; 3-Amino-5-aminometilbenzoatul de metil. O soluție de 15,50 g, 6%, mmoli de 3-azidometil-5-nitro-benzoat de metil și acid benzen sulfonic (22, 14 g,

140 mmoli] în 320 ml de metanol cald, se aduce într-un flacon sub agitare de tip Parr și amestecul este purjat cu azot timp de 15 min. Se adaugă catalizatorul paladiu pe 5240 carbon 10% 4,0 g și amestecul este în continuare purjat prin 7 cicluri de presurizareevacuare și apoi se lasă sub agitare timp de 18 h în care timp este consumată cantitatea de hidrogen necesară. Catalizatorul este îndepărtat prin filtrare pe un pat de Celită și filtratul este concentrat sub presiune redusă, obținând un ulei cafeniu. Prin triturare de două ori cu câte 150 ml de EtOAc la reflux și apoi prin răcire timp de 12 5245 h la -50°C, se obține produsul solid care este colectat prin filtrare, spălat de două ori cu câte 50 ml de EtOAc și uscat sub vacuum, (când se obțin 25,82 g produs; 80%).

¹H RMN (CD₃0D): 8,25-8,23 (m, 1H), 8,07-8,06 (m, 1H), 7,86-7,80 (m, 5H, 7,49RO 114895 Bl

5250

5255

5260

5265

5270

5275

5280

5285

7,42 (m, 6H), 4,29 (s, 2H), 3,97 (s, 3H).

Partea E; Metil 3-amino-5-f£-butoxicarbonilaminolmetil-benzoat. O soluție de 3amino-5-aminometilbenzoat de metil (19,32 g, 39,0 mmoli), TFA (7,89 g, 78,0 mmoli) și drt-butil dicarbonat (8,51 g, 39,0 mmoli) în 350 ml de metanol, se lasă să reacționeze 24 h la temperatura camerei și se concentrează, pentru a se produce un produs solid incolor. Prin purificare prin cromatografie flash pe silica gel, utilizând ca eluant un amestec în părți egale de hexan și EtOAc, se obține prosusul din titlu (9,21 g, 84%) solid, incolor. ¹H RMN (CDCI₃): 7,26-7,25 (m, 2H), 6,86-6,85 (m. 1H), 4,16 (s, 2H), 3,88 (s, 3H), 1,48 (s, 9H); Punctul de topire la 57...65°C. ESI-MS: (M+H) = 281.

Partea F; Boc-Mamb (Z-5-Aca)-0Me. Acidul N-CBZ-e-aminocaproic (7/71 g, 29,3 mmoli) și TEA (2,97 g, 29,3 mmoli) sunt dizolvate în 250 ml de tetrahidrofuran și răcite la -20°C. Izobutil cloroformiatul (4,00 g, 29,3 mmoli) se adaugă în picături și amestecul este menținut să reacționeze timp de 5 min la -20°C. Compusul 3-amino5-{tbutoxicarbonilamino) metilbenzoatul de metil (8,20 g, 29,3 mmoli) dizolvat în 50 ml de solvent tetrahidrofuran, se răcește la -20°C și se adaugă apoi la reacție. Amestecul de reacție este lăsat să se încălzească lent la temperatura camerei și apoi se agită un timp adițional de 2 zile. Produsul solid este îndepărtat prin filtrare și filtratul este concentrat sub presiune redusă. Reziduul rezultat este dizolvat în 125 ml de EtOAc și spălat cu două porțiuni a 50 ml de acid clorhidric 0,2 N, apoi cu o soluție saturată de bicarbonat de sodiu și o soluție saturată de clorură de sodiu. Stratul organic este uscat pe sulfat de magneziu și concentrat sub presiune redusă. Produsul brut este purificat prin cromatografie flash, pe silica gel, eluare cu un amestec din 1 parte hexan și 2 părți EtOAc, și prin recristalizare din CCI₄, se obține compusul rubricat (10,09 g, 65%), produs solid incolor. ¹H RMN (CDCI₃): 8,03-7,63 (m, 3H). 7,327,28 (m, 5H), 5,12^,92 (m, 4H). 4,27-4,35 (m, 2H), 3,85 (s, 3H), 3,17-3,12 (m, 2H). 2,34-2,28 (m, 2H), 1,72-1,66 (m, 2H), 1,48-1_;S3{m, 2H), 1,43 (s, 9H), 1,36-1,34 (m, 2H); punctul de topire la 52...54°C. ESI-MS: (M+H)=528.

Partea G; Boc-Mamb (Ζ-5-Aca). Boc-Mamb(Z-5-Aca)OMe (22,58 g, 43,0 mmoli) se dizolvă în 500 ml amestec în părți egale de hidroxid de sodiu 1N și metanol și se lasă sub agitare 18 h la temperatura camerei. Amestecul de reacție este porționat între 300 ml de EtOAc și 200 ml de apă și cele două straturi se separă. pH-ul stratului apos este micșorat la 4,5 și precipitatul uleios rezultat este extras de două ori cu câte 300 ml de EtOAc. Extractul organic este uscat pe sulfat de magneziu și concentrat într-un produs solid galben. Produsul solid este triturat cu refluxare, utilizând câte 100 ml de tetraclorură de carbon CCI₄, pentru 3 triturări, și astfel se obține produsul din titlu (14,17 g, 63%), produsul solid incolor. ¹H RMN (CD₃0D): 8,04 (s, 1H), 7,71-7,66 (m, 2H), 7,30-7,23 (m, 5H). 5,02 (s, 2H), 4,24 (s, 2H), 3,32 (s, 3H), 3,11 (t, J=6,8 Hz, 2H), 2,34 (t, J=6,8 Hz, 2H), 1,74-1,35 (m, 15 H). Punctul de topire este la temperatura de 168...169°C. DCI-MS: (M+NH₄) = 531.

RO 114895 Bl

M_SO-VV^C°^2CH3

5230

C₆H₅SO₃H

HO-.C

CO->CH-.

1) BHț.SMt;

2) Anhidrida metansulfonlcă, sponge proton ’

NOr>

NaN,

DMr ^C°2^CH3 HK^V^CO;CH,

H₂. PdTC.MeOH ’ ^{1 11}

Acid benzensulfonlc

NH,

5295

Di-i-buul Dicarbonai Boc-NH

EtjN. MeOH '’SSjX

CO₂CH₃

NH,

Z-NH(CH₂)₃CO₂H

Anhidrida amestecată cuplare

Boc-NH

co₂ch₃

NaOH. MeOH

Z-NH(CH₂)jCONH

Schema 9

Boc-NH-^^y^C°^2H

Z-NH(CH₂)_sCONH

5300

In schema 10 care urmează, se arată cum este atașat linkerul la jumătatea de ciclizare, cu ajutorul unei grupe funcționale amidice reverse, aceasta fiind de asemenea sintetizată.

Reducerea grupării nitro a 3-nitroizoftalatului de monometil (Fluka), utilizând paladiu pe carbon catalizator, când se poate obține monometil 3-aminoizoftalatul, și care poate fi transformat apoi în nitrilul corespunzător, prin procedeul Sandmeyer. Tratamentul acestui ester cu o diamină monoprotejată, poate duce la obținerea amidei corespunzătoare.

Gruparea de protecție a diaminei trebuie să fie stabilă în condițiile de hidrogenare. Schema demontrează utilizarea grupării Teoc (2-trimetilsililetiloxicarbonil), dar pot fi utilizate de asemenea și alte grupe familiare menționate în literatura de specialitate.

Reducerea nitrilului utilizând catalizatorul paladiu pe cărbune, poate duce la obținerea jumătății de ciclizare a linkerului modificat.

5305

5310

5315

O,N

co₂ch₃

CO₂H

H₂. Pd/C h₂n

co₂ch₃ co₂h

5320

Schema 10

5325

5330

5335

RO 114895 Bl

Linkerii atașați în poziția Y a jumătăților de ciclizare substituite la cilcu, prin legătura de eter pot fi sintetizați, plecând de la acidul 3-hidroxi-5-aminobenzoic. Reacția Sandmayer poate fi utilizată pentru transformarea aminei în acidul 3-hidroxi-5cianobenzoic. Alchilarea ca cea de mai sus duce la introducerea linkerului. Reacția nitrilului utilizând reducerea cu ajutorul catalizatorului de paladiu pe cărbune, duce la obținerea grupei aminoetilic. Protecția aminei cu gruparea t-Boc utilizând d/-t-butil dicarbonatul, va determina obținerea jumătăților de ciclizare cu linker modificat, gata de utilizare, într-o fază de sinteză solidă. Aceasta este prezentată în schema 11.

h₂n co₂h

1) NaNOj. H* ,CO₂H

Teoc-NH-CCHj^CHj-OTs,

OH

2) CuCN

OH

N«OH

COjH

H₂.P<VC

H₂N co₂h

Teoc-NH-iCHj^CHjO

Teoc-NH-(CH₂)„CH₂0

Di-t-buiil

Dicubonai

Boc-NH

CO₂H

Teoc-NH-(CH₂)_rCH₂O Schema 11

Linkerii terminali în grupa de acid carboxilic pot fi sintetizați, utilizând anhidride ciclice. Schema 12 ilustrează o astfel de sinteză, utilizând anhidrida succinică.

Reacția 3-aminometil-5-aminobenzoatului de metil t-Boc protejat cu anhidrida succinică va duce la obținerea linkerului acid carboxilic. Activarea acidului carboxilic și condensarea cu benzii carbazat (Lancaster Synthesis, Inc.) ar duce la obținerea hidrazidei protejate. Hidrazida servește pentru protejarea acidului carboxilic, în timpul apariției resturilor de sinteză. Hidroliza esterului metilic duce la obținerea jumătății de ciclizare a linkerului modificat în formă gata protejată pentru a fi utilizată în faza de sinteză solidă.

După ce sinteza este completă, prin îndepărtarea grupei de protecție Cbz din hidrazidă, se deschide calea preparării-unei azide și cuplarea azidei la chelator - (Hofmann, Magee and Lindenmann 81950, J. Amer. Chem. Soc. 72, 2814).

Aceasta este arătată în schema 12 care urmează.

o

o

Schema 12

RO 114895 Bl

Linkerii pot fi așadar încorporați în sinteza jumătăților de ciclizare alternate. De exemplu, un linker modificat în jumătatea de ciclizare heterociclică poate fi sintetizat plecând de la 4-amino-6-carbetoxi-1-hidroximetilpirimidină (Boger, 1994, J.Amer.Chem.Soc. 116,82...92). 5395

Alcoolul poate fi transformat în amină, în trei faze.

Prima fază corespunde tratării cu clorură de toluensulfonil și baza utilizată poate fi tosilatul, care prin tratare cu azida de sodiu, duce la obținerea azidei. Reducerea azidei pe catalizatorul de paladiu pe cărbune poate duce la obținerea diaminei.

Marea diferență în ceea ce privește nucleofilicitatea celor două amine va per- 5400 mite protecția selectivă a grupei aminometil, utilizând d/-t-butil bicarbonatul. Legarea linkerului de protecție, cum ar fi Ζ-5-Aca, la amina care rămâne, se poate realiza utilizând un amestec de anhidridă sau chimia anhidridei simetrice. In final, hidroliza esterului etilic ar putea duce la obținerea jumătății de ciclizare heterociclice cu linker modificat gat de cuplare pentru sinteza rășinii în fază solidă. 5405

Această sinteză este prezentată în schema 13 de mai jos:

Z-NH(CH₂)îCONH Z.NH(CH_2)îCONH

5415

Schema 13

Linkerii

Prepararea tetraetilenglicoleterului discutat mai sus este prezentată așa cum se arată în schema 14. Sinteza începe cu 1-amino-11-azido-3,6,9-trioxaundecan (Bertozzi and Bednarski, 1990, J.Org.Chem. 56, 4326...4329). Reducerea azidei 5420 cu catalizatorul paladiu pe cărbune duce la obținerea aminei, care este protejată cu gruparea Cbz (desemnată aici ca “Z” în schema 14 și în continuare).

Alcoolul este acum transformat în tosilat, utilizând clorură de toluensulfonil și baza.

1) h₂. Pd/c 5425

N₃-(CH₂CH₂O)₄-H -- Z-NH-(CH₂CH₂O)₄-H

2) Z-Cl, EtjN

Ts-Cl. Et₃N

Z-NH-(CH₂CH₂O)₄-Ts

5430

Schema 14

Un al doilea tip de linkeri compuși din etilenglicoî în unități este arătat în schema următoare. Acest linker are o grupă de acid carboxilic la unul din capete, permițând astfel să fie legat la jumătățile de ciclizare conținând grupe funcționale 5435

RO 114895 Bl amine. Sinteza începe cu alcoolul amino Cbz protejat descris mai sus. Tratarea alcoolului cu diazoacetatul de etil și rodiu (II) dimer acetat poate duce la obținerea esterului acidului glicolic având terminația tetraetilenglicolică. Hidroliză esterului etilic poate duce la obținerea linkerului gata de cuplare la jumătatea de ciclizare. Aceasta este prezentată în schema 15.

N2CH2CO2E1

Z-NH-(CH₂CH2O)4-H -- Z-NH-(CH2CH₂O)₄-CH2CO2Ei

Rh₂(OAc)₄

NaOH. HO

-— Z-NH-(CH2CH₂O)₄-CH₂CO2H

Schema 15

Așa cum se prezintă în continuare, acești linkeri modificați în jumătățile de ciclizare pot fi utilizați pentru sintetizarea compușilor intermediari ciclici cu linkeri modificați.

Compusul ciclic 1 cu linker modificat.

Ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb (5-Aca)).

Sinteza compusului din titlu este prezentată în schema 16 de mai jos.

Intr-un vas de reacție de 60 ml pentru peptide, se aduc 1,61 g de oximrășină (nivel de substituție = 0,62 mmoli)/g). Rășina este mărită printr-o spălare cu 30 ml de dimetil-formamidă. Intr-un vas de reacție, se aduc Boc-Mamb (Ζ-5-Aca) 513 mg (1,0 mmoli), HBTU (379 mg (1,0 mmoli) și DIEA (0,52 ml, 3 mmoli). Suspensia astfel obținută este omogenizată la temperatura camerei timp de 96 h. Rășina este spălată imediat cu porțiuni de 30 ml de dimetil formamidă, de trei ori, apoi odată cu metanol, de trei ori cu DOM, de două ori cu metanol și de 3 ori cu DCM. Nivelul de substituție este determinat a fi de 0,381 mmoli/g, prin testul cu acid picric. Grupările oxima nereacționate sunt blocate prin tratare cu 30 ml de 0,5 M trimetilacetilclorură/0,5 M DIEA în dimetilformamidă timp de 2 h.

Se realizează în continuare, următoarele faze:

Faza 1. Rășina este spălată de trei ori cu porțiuni de 30 ml de dimetilformamidă, apoi odată cu metanol, de trei ori cu DCM, de două ori cu metanol și de trei ori cu DCM.

Faza 2. Rășina este spălată cu 30 ml de TFA 50% în DCM și gruparea t-Boc este deprotejată utilizând 30 de ml de TFA 50% în DCM, timp de 30 min.

Faza 3. Rășina este spălată de trei ori cu DCM în întregime, apoi o dată cu metanol, apoi de două ori cu DCM, de trei ori cu metanol și de trei ori cu dimetilformaidă.

Faza 4. Boc-Asp (Obzl) (0,982 g, 3,04 mmoli), HBTU 1,153 g, 3,04 mmoli], DIEA (1,59 ml, 9,14 mmoli] și cu 14 ml de dimetilformamidă se adaugă la rășină și reacția este lăsată să acționeze timp de 22 h.

Faza 5. Completarea reacției de cuplare este monitorizată prin testul cu acid picric.

Fazele 1-5 sunt repetate până când secvența dorită a fost atinsă.

După ce peptida lineară este asamblată, grupa t-Boc-N-terminală este îndepărtată, mai întâi prin spălare cu TFA 50% în DCM, urmând apoi tratarea cu 30 ml de TFA 50% în DCM timp de 30 min. Rășina este spălată de trei ori cu DCM, apoi de două ori cu metanol, apoi de trei ori cu DCM și în final, este neutralizată cu porțiuni de 30 ml de 1O DIEA în DCM (de două ori câte un min). Rășina este spălată de trei ori cu DCM și de două ori cu metanol și apoi se usucă sub vacuum, obținând astfel

RO 114895 Bl

1,955 g de rășină de culoare brună. Rășina este ciclizată prin suspendare în 20 ml 5485 de dimetilformamidă conținând HOAc (35 pl, 0,609 mmoli) și apoi se încălzește la temperatura de 50°C timp de 72 h. Rășina este filtrată, într-o pâlnie de sticlă scintered și spălată în întregime de trei ori cu câte 10 ml de dimetilformamidă.

Filtratul de dimetilformamidă este evaporat și uleiul rezultat este redizolvat în 20 ml de amestec în părți egale de acetonitril și apă și apoi este liofilizat pentru a se obține 5490 peptida ciclică protejată, în cantitate de 342 mg.

Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă pe o coloană cromatografică Vydac C18 preparativă de 2,1 cm și se utilizează o fază mobilă izocratică de amestec în părți egale de acetonitril și apă conținând 0,1%. Liofilizarea fracțiunii de produs duce la obținerea peptidei protejate purificate. în cantitate de 127 mg. 5495

Peptida (120 mg, 0,11 mmoli) este deprotejată prin tratarea cu 1 ml de TFA și 1 ml de acid triflic conținând anisol (0,2 ml) timp de 3 h la temperatura de -10°C. Peptida este precipitată prin adăugare de eter și răcire la -35°C timp de 1,5 h. Peptida este colectată prin filtrare, spălată cu eter și uscată. Produsul solid rezultat este dizolvat în 12 ml amestec în părți egale de acetonă și apă și pH-ul este ajustat 5500 la 4...6 prin tratare cu Bio-Rad AGI-8X acetat rășină schimbătoare de ioni. Rășina este filtrată și spălată cu apă. Filtratul este liofilizat și purificat prin HPLC obținând peptida pură (75 mg, randament total 13,5%) FAB-MS: (M+H) = 703,3951.

1. 25% TFA/CHjClj

5505

5510

1. 25% TFA/CHjClj

2, Boc-AspfOBzl)-OH. HBTU. DIEA, DMF

1. 25%TFA/CH2a₂

2. Boc-Gly-OH. HBTU. DIEA. DMF

2. Boc-N-MeArg(Toi)-OH, HBTU. DIEA. DMF

5515

1. 25% TFA/CH₂C1₂

2. Boc-D-Val-OH, HBTU. DIEA. DMF

Boc-D-Va! —N-MeArg(Tos) — Gly \

Asp(OBzl)

1. TFA.CHjCU

2. DIEA

3. HOAc. DMF 50°C

5520

1. TFA. TFMSA.

Anisol

2. TFA. HPLC

O hH ♦2CF₃CO₂H

5530

Schema 16

5535

RO 114895 Bl

Compusul ciclic 2 cu linker modificat.

Ciclo-{D-Abu-NMeArg-Gly-Asp-Mamb(5-Aca)). Compusul din titlu este preparat utilizând procedeul general descris mai sus pentru ciclo-D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb (5-Aca). Peptida este preparată pe scală de 1,35 mmoli, obținând peptida protejată ciclică brută (1,05 g, 73%). Peptida (500 ml) este deprotejată prin tratare cu 4 ml TFA și 4 ml acid triflic conținând 0,8 ml de anisol timp de 3 h, la -10°C. Peptida este precipitată prin adiție de eter și răcită la -30°C timp de 1,5 h. Peptida este colectată prin filtrare, spălată cu eter și uscată. Produsul solid rezultat este dizolvat în 50 ml amestec în părți egale de acetonă și apă și apoi este liofilizat. Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă pe o coloană preparativă Vydac C18 de 2,1 cm, utilizând 0,36%/min gradient de la 9 la 18% acetonitril conținând 0,1% TFA și apoi se liofilizează, obținând sarea TFA a compusului din titlu ca produs solid incolor pufos (218 mg, 69% recuperare, randament total 37%). FAB-MS; (M+H)= 689,3735.

Compușii ciclo 3-8 cu linker modificat.

NH

R=-(CH₂)₅-NH₂ sau CH₂-C₆H₅-p-NH₂

X_a=2 propil, etil sau para-hidroxifenilmetil

Compușii ciclo(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb (4-NHCOR), ciclo (D-Abu-NMeArgGly-Asp-Mamb (4-NHCOR) și ciclo (D-Tyr-NMeArg-Gly-Asp-Mamb(4-NHC0R) pot fi preparați prin procedeul descris mai sus.

Linkerii pot fi încorporați în sinteza compușilor intermediari ciclici.

Compușii ciclici 9, 10 și 11 cu linkeri modificați

NH

X = CH₂CH₂,

CH₂CH₂CH₂, CH₂CH₂CH₂CH₂

RO 114895 Bl

Ciclo (O-2-aminoetil-D-Tyr)-NMeArg-Gly-Asp-Mamb),

Ciclo (O-3-aminopropilO-Tyr]-NMeArg-Gly-Asp-Mamb], 5585

Ciclo (O-4-amino-butil-D-Tyr)-NMeArg- Gly-Asp-Mamb:

Acești compuși pot fi preparați prin utilizarea procedeului descris mai sus pentru Ciclof D-Tyr-NMeArg-Gly-Asp-Mamb] folosind linkerul modificat D-Tyr. Compusul O-derivatizat D-Tyr poate fi preparat prin alchilare boc-D-Tyr cu 2-brometilamina aminoprotejată (sau cu 3-brompropilamina sau 4-brombutilamina), în prezența unei baze. 5590

Linkerii pot fi de asemenea atașați la compușii intermediari ciclici.

Compusul ciclic 12 cu linker modificat.

Ciclof D-Lysf 5-Aca ]-N MeArg-Gly-Asp-Mamb)

Prepararea compusului din titlu este prezentată în schema 17 care urmează:

O soluție de ciclofO-Lys-NMeArg-Gla-Asp-Mamb) (100 ml, 0,12 mmoli), esterul 5595 acidului Boc-5-aminocaproic cu hidroxilsuccinimida (47 mg, 0,144 mmoli) și EtgN (50 pl, 0,36 mmoli) în 1,50 ml dimetilformamidă, se lasă să reacționeze la temperatura camerei timp de 60 min. Progresul reacției este monitorizat prin cromatografie în strat subțire TLCÎn fază normală, utilizând ca eluant un amestec format din 90 părți cloroform, 8 părți metanol și 2 părți HOAc și apoi testele cu ninhidrină și testul 5600 Sakaguchi. Dimetilformamidă este îndepărtată sub presiune redusă. Produsul brut conjugat este tratat cu 3 ml de TFA la temperatura camerei timp de 45 min, pentru îndepărtarea grupei t-Boc de protecție. TFA este îndepărtat sub presiune redusă și produsul conjugat este purificat, utilizând cromatografia HPLC în fază reversă, cu o coloană preparativă Vydac C18 de 2,1 cm, utilizând 5% acetonitril conținând 0,1% 5605 TFA, timp de 20 min, urmată apoi de gradient 3,0%/min de la 6 la 36% acetonitril conținând 0,1% TFA și apoi se liofilizează obținând sarea TFA a compusului din titlu sub formă de produs solid incolor, pufos, în cantitate de 80 mg, cu un randament de 80%. (M+H) =

NH i-Â ^{HiN H HN}x^

NH HN O

1) Boc-5-Aca-OSu. DMF

2) TFA

NH

5610

5615

5620

Schema 17

Compusul ciclic 13 cu linker modificat.

Ciclof (3f4-hidroxifenil)propil-D-Lys]-NMeArg-Gly-Asp-Mamb).

O soluție de 0,022 g (0,08 mmoli] de N-succinimidil-3f4-hidroxifenil) propionat 5625

RO 114895 Bl (reactiv Bolton-Hunter) și DIEA (0,02 ml, 0,10 mmoli) în 5 ml de dioxan, se adaugă la o soluție de ciclo (D-Lys-N-MeArg-Gly-Asp-Mamb) (0,026 g, 0,04 mmoli) în 5 ml de fosfat tampon la pH = 9 și amestecul de reacție este menținut sub agitare timp de 2 zile la temperatura camerei. Soluția este liofilizată și produsul solid alb rezultat este purificat prin cromatografie HPLC pe o coloană preparativă în fază reversă de tip Vydac C18, de 2,1 cm, utilizând 0,36%/min gradient de la 9 la 18% acetonitril conținând 0,1 % TFA, pentru a se obține produsul dorit în cantitate de 0,018 g (randament de 60%) sub formă de substanță solidă incoloră, cu punctul de topire la temperatura de 146...155°C.

ESI-MS: (M) = 751

Compusul ciclic 14 cu linker modificat.

Ciclo (N-E Tyr-D-Lys)-NMeArg-Gly-Asp-Mamb)

NH

Compusul dorit poate fi preparat prin reacția dintre ciclo (D-Lys-NMeArg-GlyAsp-Mamb) cu Boc-Tyr-OSu într-un solvent cum ar fi de exemplu dimetilformamidă în prezența unei baze, ca de exemplu trietilamina, urmată de deprotejare.

Compusul ciclic 15 cu linker modificat Ciclo((N-E(4-aminofenilacetil)-D-Lys)-NMeArg-Gly-Asp-Mamb).

NH

Compusul dorit poate fi preparat prin reacția între ciclo (O-Lys-NMeArg-Gly-AspMamb) și succinimidil fmoc-4-amino-fenilacetat într-un solvent ca de exemplu dimetilformamidă în prezența unei baze ca de exemplu trietilamina, urmată de deprotejare.

Compusul ciclic 16 cu linker modificat

Ciclo((N-E-(4-amino-2-hidroxibenzoil)-D-Lys)-NMeArg-Gly-Asp-Mamb)

RO 114895 Bl

5675

NH

5680

5685

Compusul dorit poate fi preparat prin reacția dintre Ciclo-(D-l_ys-NMeArg-GlyAsp-Mamb] cu 4-amino-2-hidrobenzoat de succimidil, într-un solvent cum ar fi exemplu dimetilformamidă sau tetrahidrofuranul, în prezența unei baze ca de exemplu trietilamina.

varietate de compuși ciclici linkeri modificați, pot fi preparați prin sinteză, utili- 5690 zând reactivi bifuncționali de legare încrucișați care se dezvoltă pentru derivatizarea proteinelor. Acești reactivi constau în două grupe electrofile, cum ar fi de exemplu esterii activi sau izocianații, separați printr-o legătură. Reactivii pot fi homobifuncționali, adică atunci când două grupe reactive sunt identice sau heterobifuncționali. Legătura poate fi alifatică sau aromatică și poate conține o funcționalitate adițională pentru 5695 modificarea lipofilicității produselor conjugate sau poate permite descompunerea catenei. Următoarele exemple vor ilustra utilizarea diferiților reactivi comerciali convenabili cu legături încrucișate, utilizând un punct de start prin compusul ciclic intermediar sintetizat cu o unitate 4-aminometil Mamb.

în primul exemplu, compusul ciclic este tratat cu un exces de DSS 5700 (disuccinimidil suberat, Pierce Chemical Co.) fie cu un solvent apos sau cu un solvent organic la pH cuprins între 7 și 9. Acestea sunt condiții de reacție tipice pentru acești reactivi cu legături încrucișate. Excesul de linkeri încrucișați reduce la minim cantitatea de specii dimerice formate. Valoarea de pH=7...9 permite ca amina să reacționeze într-un grad rezonabil, dar nu produce nici o hidroliză apreciabilă a grupei reactiv 5705

- secunde și previne reacția cu grupa guanidino asupra argininei.

Esterul activ de la sfârșitul linkerului este stabil destul pentru a permite purificarea prin cromatografie HPLC sau prin cromatografie flash. Odată purificat, compusul ciclic cu linker modificat poate fi conjugat la un chelator care conține o grupă nucleofilă, cum ar fi de exemplu o amină sau un tiol. 5710

Reacția are loc conform schemei următoare 18:

5715

Schema 18

5720

RO 114895 Bl

Reactivii bifuncționali sunt tipic utilizați pentru obținerea unei activări selective a peptidelor și proteinelor. In următoarele exemple SMPB (succinimidil 4-(parsmaleimidofeniljbutiratul, Pierce Chemical Co.) Este utilizat pentru modificarea unui compus ciclic conținând amină și prepararea acestuia prin reacția de cuplare la chelatorul conținând gruparea tiol.

Tratarea compusului ciclic cu SMPB în condiții de bazicitate slabă, duce la obținerea compusului ciclic cu linker modificat, în care terminațiile linkerului sunt printr-o grupă maleimido. Selectivitatea este obținută deoarece grupele amino și dimerizarea este redusă la minimum. După purificare, grupa maleimido poate fi cuplată cu un chelator care conține grupa tiolică.

Această reacție este prezentată în schema 19.

O

Schema 19

Linkerii conținând grupele funcționale interioare, pot fi preparați cu reactivii prezenți în schema 20.

EGS (etilenglicol bis (succinimidilsuccinimidat), Sigma Chemical Co.) Este un ester bis- succinimidil care reacționează preferențial cu aminele. Dimetil 3,3'ditiobispropionimidatul (DTBP, de asemenea denumit reactivul Wang și Richard, Pierce Chemical Corn.) care reacționează preferențial cu aminele. Bisulfura este descompusă prin tioli. Meares și colaboratorii au arătat [Int.J. Cancer. Supliment 2, 1988, 99... 102], că produsele conjugate cu anticorp chelat marcat 111 In, se leagă la linkerii conținând bisulfura, prezentând o evidentă mult mai rapidă a radioactivității la șoarece, față de produsele conjugate care nu conțin linkerul care se descompune. Al treilea exemplu din schema 20 demonstrează utilizarea BSOCOES (b/s(2succinimidooxi-carboniloxi)etil]sulfona, Pierce Chemical Co.), un linker încrucișat homobifuncțional care conține o grupă sulfonă interioară.

Acest reactiv produce grupa carbamat prin conjugare cu amina.

RO 114895 Bl

5775

5780

5785

Ή-,Ν

MeO y-iCHjh-S·

MeO

Asp

NH

NH

5790

5795 (Su-OCO_:CH₂CH2)₂SO₂ /Gly

N-MeAxg D-Val

Su-O.

5800

5805

Schema 20 5810

Schema ilustrează utilizarea bisizocianaților și bisizotio-cianaților la prepararea compușilor ciclici linker modificați.

Acești reactivi reacționează cu aminele pentru grupele uree și tiouree respectiv. Reactivii se vor utiliza în exces pentru a reduce la minimum formarea dime- 5815 rilor. Izocianatul și izotiocianatul, grupei care se află la capătul linkerilor sunt suficient de stabile pentru a permite purificarea produselor.

RO 114895 Bl

5820

5825

583Q

5835

5840

5845

5850

5855

5860

5865

QCN-(CH₂)_n-NCO

SCN-CCHîVNCS

Schema 21

Chelatori

Prezenta invenție se referă așadar la noi reactivi utilizați pentru prepararea produselor radiofarmaceutice.

Acești reactivi constau în chelatorul C_h, legat prin grupa de legătură la compusul intermediar ciclic Q. Acești reactivi pot fi sintetizați pe diferite căi, fie prin atașarea chelatorului la compusul intermediar ciclic cu linker modificat, sau prin atașarea chelatorului care are grupa de legătură la compusul intermediar ciclic. De preferință, chelatorul este legat la compusul intermediar ciclic cu linker modificat.

Orice chelator poate fi utilizat în prezenta invenție pentru a se obține în forma sa stabilă, sub formă de complex, față de izotopul reactiv. Tipic, izotopul radioactiv este un metal sau un metal de tranziție și complexul cu chelator este un complex chelat metalic, exemplele de complecși chelați metalici pot fi găsiți în literatura recentă (S.Jurisson et al.. Chem. Rev., 1993, 93 1137...1156) încorporați prin referință.

Chelatorii pot fi atașați la linkeri, printr-o varietate de mijloace cunoscute în literatura de specialitate. In general, o grupă reactivă a linkerului poate reacționa cu chelatorul sau alternativ o grupă reactivă a chelatorului poate reacționa cu linkerul. Astfel de grupe reactive convenabile pot include de exemplu, esterii activi, izotiocianații, halogenurile alchilice și arilice, aminele, tiolii, hidrazinele, maleimidele și alți compuși aemănători. Diferiți compuși ciclici cu linker modificat, care au grupe reactive, sunt descrise în exemplele de mai jos.

Chelatorii reprezentativi includ:

Acidul dietilentriamin-pentaacetic (DTPA), acidul etilen-diamintetraacetic (EDTA), acidul 1,4,7,1O-tetraazaciclododecan-N,N’,N,N”’-tetraacetic (DOTA), acidul 1,4,7,10tetraaza-ciclododecan-Ν,Ν’, N”-triacetic, acidul hidroxibenzil-etilen-diamin diacetic, N,N’b/slpiridoxil-5-fosfat) etilen diamina, Ν,Ν’-diacetat, acidul 3,6,9-triaza-12-oxa-3,6-9RO 114895 Bl tricarboxi-metilan-10carboxi-13-fenil-tridecanoic, acidul 1,4,7-triaza-ciclononanN, N’,N-triacetic, acidul 1,4,8,11-tetraazaciclo-tetradecan-N,Ν’, N”, N”’-tetraacetic, acidul 2,3 bis (S-benzoic] mercaptoacetamidopropanoic și chelatorii descriși mai jos. 5870 Alți chelatori pot include porțiuni de legare a metalului, derivate de la proteinele de legare a metalului, ca de exemplu metalotionații care sunt proteine sulfhidril citoplasmatice bogate în sulfhidril, prezente în vertebrate, nevertebrate și fungi.

Sinteza chelatorilor.

Sinteza acidului 4,5 bis (S-benzoil) mercaptoacetamido] pentanoic 5875

Chelatorul este sintetizat așa cum s-a descris de Fritzberg et al., Appl. Radiat.

Isot., 1991, 42, 525...530.

Sinteza (S-benzoil) mercaptoacetilglicilglicilglicinei (MaG3)

Chelatorul este sintetizat așa cum s-a descris de Brandau, W. et al., Appl.

Radiat. Isot. 1988, 39, 121...129. 5880

Sinteza succinimidil 6-Boc-hidrazinopiridin-3-carboxi-latului (SHNH)

Chelatorul este sintetizat așa cum s-a descris de Schwartz et al., 1990.,

EP, A, 90301949.5.

Sinteza esterului N-(4-carboxibenzil)-N-N'-b/'s ((2-trifenil-metiltio]etil) glicinamida

N-hidroxisuccinimidei. Sinteza compusului din titlu este prezentată mai jos în 5885 schema 22.

Partea A; S-Trifenilmetil-2-aminoetanetiol. O soluție de clorhidrat de cistamină (79,5 g, 0,7 mmoli) în 500 ml de TFA, se tratează cu trifenilmetanol (182 g, 0,7 mmoli] și se agită la temperatura camerei timp de o oră. TFA este îndepărtat sub presiune redusă la temperatura de 45°C și uleiul portocaliu închis rezultat este dizolvat 5890 în 700 ml de EtOAc. Soluția de EtOAc este spălată de trei ori cu câte 350 ml de hidroxid de sodiu 2N rece, apoi de două ori cu câte 350 ml apă, odată cu 350 ml soluție saturată de bicarbonat de sodiu și o dată cu 350 ml soluție saturată de clorură de sodiu. Apele de spălare combinate sunt extrase din nou cu 350 ml de EtOAc. Straturile organice combinate se usucă apoi pe sulfat de magenziu și se concentrează 5895 pentru a se obține un produs solid galben. Prin triturare cu eter 500 ml, se obține produsul dorit (97,2 g, 43%), ca produs solid incolor, cu punctul de topire de

9O...92°C. (D. Brenner et al., J.Inorg.Chem., 1984, 23, 3793...3797, punctul de topire la 93 ..94°C). Prin concentrarea eterului triturant la un volum de 100 ml și prin răcire, se produce o cantitate adițională de produs de 40,9 g, cu punctul de topire 5900 la 89,..91°C, pentru un randament combinat de 62%.

Partea B: N-2-bromacetil-&-trifenilmetil-2-aminoetantiol. O soluție de Strifenilmetil-2-aminoetantiol (48 g 0,15 mmoli) și EtjN (20,9 ml, 0,15 mmoli) în DCM (180 ml], se adaugă la o soluție sub agitare de bromură de bromacetil (13,9 ml,

O, 15 mmoli] în 100 ml DCM la temperatura de -20°C. Amestecul de reacție este 5905 lăsat să se încălzească la temperatura camerei timp de peste o oră. Amestecul de reacție este spălat cu porțiuni de 500 ml de apă, cu acid clorhidric 0,2 N, cu o soluție saturată de bicarbonat de sodiu și cu o soluție saturată de clorură de sodiu. Soluția organică este uscată pe sulfat de magneziu și concentrată la ulei. Acest ulei este cristalizat dintr-un amestec de DCM și hexan pentru a se obține produsul din titlu 5910 (54,9 g, 83%) sub formă de produs solid incolor, cu punctul de topire la 137...139,

5°C (J.A.Wolff, Ph.D.Theis, Massachusetts Insitute of Technology, February 1992, punctul de topire la 13O...135°C.

Partea C; N.N'-b/sf(2-trifenilmetiltio]etillglicinamida. O soluție de Ν-2-bromacetilS-trifenilmetil-2-aminoetan-tiol (35, 2 g, 0,08 mmoli], S-trifenilmetil-2-aminoetantiol 5915 (25,5 g, 0,08 mmoli) și EtgN (16,7 ml, 0,12 mmoli) în DCM (375 ml) se menține la

RO 114895 Bl temperatura camerei timp de 24 h. Soluția este spălată în porțiuni cu 200 ml apă, de două ori cu soluție saturată de bicarbonat de sodiu, apoi cu apă și cu o soluție saturată de clorură de sodiu, apoi se usucă pe sulfat de magneziu și se concentrează pentru a se obține un ulei vâscos. Uleiul este dizolvat în 150 ml de amestec din 70 părți DCM și 30 părți EtOAc și se răcește pe baia de gheață. Produsul solid format este îndepărtat prin filtrare, filtratul este concentrat la ulei vâscos. Acest ulei este apoi purificat prin cromatografie flash pe 200...400 ochiuri, 60 Â silica gel, utilizând un amestec de 70:30 de DCM: EtOAc fază mobilă, pentru a se obține produsul din titlu (34,4 g, 63%, solid amorf, ca o spumă incoloră. ¹H RMN (CDCI₃) 7,42-7,18 (m, 30 H), 3,12-3,01 (m, 4H), 2,48-2,27 (m, 6HJ.

Partea D; Metil-4-fmetansulfonilmetil)benzoatul. O soluție de metil 4(hidroximetil)benzoat (10,8 g, 0,065 mmoli) și proton spongios (19,5 g, 0,091 mmoli) în 200 de ml DCM, se tratează cu anhidridă metansulfonică (13,94 g, 0,08 mmoli] și se agită la temperatura camerei timp de 20 h. Amestecul de reacție este spălat cu porțiuni de 100 ml de apă, de două ori cu acid clorhidric 1N, odată cu apă, o dată cu soluție saturată de bicarbonat de sodiu și o dată cu apă. Faza organică este uscată pe sulfat de magneziu și concentrată, pentru a se obține 15,5 g de produs solid galben. Prin recristalizare din 150 ml de tetraclorură de carbon CCI₄, utilizând cărbune pentru decolorare, se obține produsul din titlu în cantitate de 14,2 g, cu randament de 90%, sub formă de ace incolore cu punctul de topire la temperatura de 91...94°C.

Partea E; N-(4-(carbometoxi)benzil1-N,N’-b/sf(2-trifenil-metiltio1etinqlicinamida.

O soluție de N,N*-b/s[(2-trifenilmetiltio]etil]glicinamidă (16,27 g, 0,024 mmoli] și 4(metansulfonilmetil)benzoatul de metil (4,88 g, 0,02 mmoli) în 200 ml de diclorură de etilen se încălzește la temperatura de reflux timp de 28 h. Amestecul de reacție este spălat cu 200 ml soluție saturată de bicarbonat de sodiu în porțiuni și apoi cu apă, apoi se usucă pe sulfat de sodiu în porțiuni și apoi cu apă, apoi se usucă pe sulfat de magneziu și se concentrează, obținându-se astfel 30 g de ulei brun deschis. Acest ulei este apoi purificat prin cromatografie flash pe 200...400 ochiuri 60 Â silica gel, utilizând o fază mobilă de DCM.EtOAc, pentru a se obține produsul din titlu (9,9 g, 60%) solid, incolor, ca o spumă amorfă. ¹H RMN (CDCI₃) 7,90 (d, 2H, J=6,5 Hz], 7,49-7,18 (m, 32H), 3,91 (s, 3H], 3,47 (s,_2H), 3,01 (q, 2H, J=6,2 Hz), 2,88 (s, 2H), 2,43 (t, 2H, J=6,2 Hz), 2,39-2,27 (m, 4H).

Partea F; N-f4-fcarboxinbenzin-N-N’-b/sf(2-trifenil-metiltioletinqlicinamida. Un amestec de N-[4-{carbometoxi)benzil]-N,N’-b/s[(2-tri-fenilmetiltio)-etil]glicinamida (6,00 g, 7,26 mmoli] în 65 ml dioxan și 65 ml soluție 1N de hidroxid de sodiu, se aduce sub agitare la temperatura camerei timp de 24 h. Amestecul este acidulat cu 100 ml acid citric 2,5 M și astfel se obține un precipitat sub formă de gumă care este apoi extras în 400 ml de EtOAc. Soluția de EtOAc este splată de trei ori cu câte 200 ml apă și cu 1OO ml soluție saturată de clorură de sodiu, apoi se usucă pe sulfat de magenziu și se concentrează, obținând produsul din titlu (5,90 g, 100%) ca un produs solid incolor sub formă de spumă amorfă.

¹H RMN (CDCI₃): 7,96 (d, 2H, J=8,1 Hz), 7,40-7,16 (m, 32 H), 3,71 (s, 3H). 3,49 (s, 2H), 3,00 (q, 2H, J= 5,4 Hz], 2,91 (s, 2H], 2,44 (t, 2H, J=5,4 Hz), 2,38-2,30 (m, 4H).

Partea G; Esterul N414-fcarboxi1benzin-N,N'-b/s (2-tri-fenilmetiltio)etiDqlicinamida N-hidroxisuccinimidei. O soluție formată din 450 mg (0,55 mmoli] N-(4(carboxi)benzil)-N,N’-b/s (2-trifenilmetiltio)etil)-glicinamidă și 76 mg (0,66 mmoli) Nhidroxisuccinimidă în 10 mililitrti de DCM, se tratează cu o soluție de WSCD.HCI (122 mg,

RO 114895 Bl

0,66 mmoli) în 7 ml de DCM și apoi se agită la temperatura camerei timp de 22 h. Amestecul de reacție este concentrat și produsul solid este redizolvat în 60 ml de EtOAc. Soluția de EtOAc este spălată apoi de două ori cu câte 25 ml apă, cu 35 ml soluție de hidroxid de sodiu 0,1 N și cu 35 ml de soluție saturată de clorură de sodiu, apoi se usucă pe sulfat de magneziu și se concentrează pentru a se obține produsul 5970 din titlu, solid incolor, în cantitate de 469 mg, cu un randament de 93%.

j-NH₂ ^SH

PhiCOH

TFA nh₂ s

I

Tr

Bromoacail bromurâ

TEA, 15 min \ 5975

NH Br

S

I

Tr

5980 nh₂ ș

Tr

CO2CH3 ^NHHfL

I I

Tr Tr

IN NaOH

Dioxan

HOSu, WSCI>HCI

M s OC H ₂ C O₂CH₃

C1CH₂CH₂C1,65°C /-O-CO2H ^NH Ν-η \=/

I I

Tr Tr ° /—\ \ \ y—CO₂Su ^NH N·^ \=/

5985

5990

5995 'S

I

Tr sI

Tr

Schema 22

6000

Sinteza compusului N-f2-benzoiltio)propionil1qlicilqlicil-q-amino butiric acid (Bz-MeMAGg-qaba). Compusul din titlu este preparat conform schemei 23, plecând de la N(2-mercaptopropionil)-glicină (1), produs disponibil comercial. Protejarea grupei tiol în compusul 1 este obținută prin reacția cu clorură de benzoil în condiții bazice, pentru a se obține compusul 2. Grupa carboxilică poate fi activată prin formarea esterului 6005 succinimidic al acesteia (3) care reacționează apoi cu acidul glicil-g-aminobutiric în metanol 90% soluție, pentru a se obține compusul benzoil protejat Me-MAG_P-gaba (4).

Prin analizele spectrale (infraroșu, ¹H RMN și Fab-MS) se obțin date care demonstrează consistența completă, conform formulei propuse.

Schema 23: Sinteza compusului Me-MAG₂-gaba, benzoil protejat.

6010

RO 114895 Bl

COOH

Faza 1. N-(2-(benzoiltiol)propionil glicină (2). O cantitate de 4,5 g (0,109 mmoli) hidroxid de sodiu și 8,20 g (0,05 mmoli] N-(2-mercaptopropionil]glicină, se dizolvă întrun amestec de 40 ml apă și 30 ml toluen. Temperatura se scade la 5...15°C, utilizând o baie de gheață. Clorura de benzii [4,6 ml, 0,051 mmoli] în 10 ml toluen, se adaugă sub formă de picături sub agitare viguroasă.

După adiție, amestecul este agitat la temperatura de 15°C un timp suplimentar de 30 min și apoi la temperatura camerei, timp de 2 h. Stratul organic este separat, spălat de două ori cu câte 20 ml de apă și îndepărtat. Fracțiunile apoase sunt combinate și acidulate la pH = 1,5 utilizând acid clorhidric concentrat, obținând astfel un produs solid, alb. Precipitatul este colectat prin filtrare, spălat cu apă și o cantitate mică de etanol și apoi se usucă sub vacuum. Randamentul este de 97%, obținând 13,0 g produs.

Analiza calculată și găsită pentru compusul care are formula brută C₁₂H₁₃N0₄S: C53, 90 (53,89); H 4,90 (4,81); N 5,24 (5,22). IR (Kbr disc, în cm’¹]: 3375 (s, m _N+l) 3200-2500 (br, n^); 1745 (vs, ticeaster n_M); 1663, 1625 (vs, amida și gruparea carboxilică n_c=o).

¹H RMN (DMS0-d6 în părți pe milion): 1,47 (d, 3H, CH₃, J = 7,0 Hz); 3,79 (d, 2H, CH_P, J=5,9 Hz); 4,40 (q, 1H), CH, J=7,0 Hz); 7,35 (m, 2H, =CH); 7,69 (m, 1H =CH); 7,90 (dd, 2H, =CH, J=8,0 Hz); 8,59 (t, 1H, NH, J=5,8 Hz); 12,6 (bs, 1H, CQOH).DCI-MS: m/z = 268 (M+H) +).

Faza 2. Esterul N-[2-(benzoiltio]propionil]glicină succinimidic (3). La o suspensie de 5,80 g (0,05 mmoli) de N-hidroxisuccinimidă și 13,35 g (0,05 mmoli) de NȚ2(benzoiltiol)propionil)glicină în 400 ml de tetrahidrofuran, se adaugă 12,0 g DCC (0,052 mmoli] în același solvent, 100 ml de tetrahidrofuran la temperatura de

5...10°C. Amestecul este agitat la temperatura de 5,..10°C timp de 2 h și apoi este răcit la temperatura camerei timp de două zile. La amestecul de reacție, se adaugă apoi 2...3 ml acid acetic și apoi se agită un timp suplimentar de două ore. Produsul solid se filtrează, se spală de două ori cu câte 150 ml de tetrahidrofuran. Fracțiunile organice sunt combinate și solventul este îndepărtat sub presiune redusă, pentru a se obține produsul solid, care este colectat, spălat cu eter dietilic și uscat la aer. Se obțin 14,5 g cu un randament de 80%.

Analiza calculată și găsită pentru C₁₆H₁₆N₂0₆S: C52, 72 (52,70); H 4,43 (4,21); N 7,69 (7.69).

RO 114895 Bl

IR (Kbr disc, în cm'¹): 3290 (s, n _N+l) 1820 (m succinimidă n qJ; 1785 (m, ester ⁿc==ol· ¹H RMN (CDCI₃, d în părți pe milion): 1,57 (d, 3H, CH₃, J = 7,0 Hz); 2,79 (s, 4H,

CHJ; 4,33 (q, 1H, CH. J=7,0 Hz): 4,39 (m, 2H, CHJ; 7,00 (t, 1H, NH, J=5,8 Hz);

7,44 (m, 2H, =CH); 7,59 (m, 1H, =CH); 7,93 (dd, 2H, =CH, J=7,0 Hz).DCl-MS: m/z 6065 = 365 (M+H)⁺).

Faza 3. Acidul N-[2-(benzoiltio)propionil]glicilglicil-g-amino-butiric (Bz-Me-MAG₂gaba, 4). Esterul succinimidic al [(benzoiltio)-propionil]glicinei (1,82 g, 5 mmoli) și acidul glicil-g-aminobutiric (0,80 g, 5 mmoli) se suspendă într-un amestec de metanol (150 ml și în 30 ml de apă. Amestecul este încălzit apoi la reflux timp de 5 h, în care 6070 timp amestecul opac devine o soluție clară. Soluția este apoi răcită la temperatura î camerei și menținută sub agitare până a doua zi.

Evaporarea solvenților sub presiune duce la obținerea unui produs solid alb, care este purificat prin spălare cu apă, și apoi este uscat sub vacuum. Se obțin 1,85 g produs cu un randament de 93%. 6075

Analiza calculată și găsită pentru C18H₂₃N₃0₆S: C 52,78 (52,69); H, 5,66 (5,70); N 10,27 (10,17).

IR (disc Kbr, în cm'¹]: 3380, 3320(s, n _Hl(); 3100-2500 (br, n qJ; 1725 (vs, tioester n_c,J; 1680, 1640, 1624 (vs, amida n_c=J.

¹H RMN (DMS0-d6, dîn părți pe milion): 1,49 (d, 3H, CH₃, J=7,0 Hz); 1,62 (qin, 2H, 6080 CH₂, J=7,1 Hz); 2,21 (t, 2H CH₂C00H, J=7,5 Hz); 3,05 (qart, 2H, NH-CH₂, J=7,0 Hz); 3,67 (d. 2H, NH-CH₂, J=5,7 Hz); 3,75 (d, 2H, NH-CH₂, J=7,0 HZ); 3,67 (d, 2H, NH-CH₂, J=5,7 Hz); 3,75 (d, 2H, NH-CH₂, J=7,0 Hz); 4,42 (q, 1H, CH, J=7,O Hz);

7,57 (m, 2H, =CH); 7,70 (m, 1H, =CH); 7,80 (t, 1H, NH, J=3,0 Hz); 7,90 (dd, 2H, =CH, J=7,0 Hz); 8,14 (t, 1H, NH. J=5,70 Hz); 8,57 (t. 1H, NH, J= 5,90 Hz), 12,0 6085 (bs, 1H, C00M].DCI-MS: m/z = 410 ((M+Hf).

Sinteza N-(2-fbenzoiltio1propioninglicilglicilglicinei (Bz-Me-MAGJ. Compusul din titlu este sintetizat așa cum s-a descris pentru Bz-Me-MAG₂-gaba, prin substituirea glicilclicinei cu acidul glicil-y-aminobutiric. Randament 83%.

Analiza calculată (găsită] pentru C₁₆HtgN₃0₆S: C 50,39 (50,59); H 5,02 (5,78); M 11,02 (10,70).

IR (disc Kbr în cm'¹): 3380, 3300 (s, n N-H); 3100-2500 (br, n 0-H); 1738 (vs, tioester n_c=o); 1680 (vs, amida n_c=0).

¹H RMN (DMS0-d6, d în părți pe milion): 1,48 (d, 3H, CH₃, J=7.05 Hz); 3,78 (m,

4H, CHJ; 3,85 (bd, 2H, CH₂, J=6,00 Hz); 4,41 (m, 1H, CH); 7,52 (m, 2H, =CH);

7,70 (m, 1H, =CH); 7,80 (m, 2H, =CH); 8,15 (t, 1H, NH, J=3,00 Hz); 8,51 (t, 1H,

NH, J=3,00 Hz); 8,80 (t, 1H, NH, J= 3,00 Hz). FAB-MS: m/z = 382 ((M+H)+).

Sinteza acidului N-f2-(benzoiltio)propionil)qlicilqlicil-4-amino-metilciclohexan carboxilic (Bz-Me-MAG_g-Aca). Sinteza Bz-Me-MAG₂-ACA cuprinde mai multe faze (schema 24).

Compusul poate fi ușor transformat în sarea sa clorhidrică 2, care reacționează cu acidul 4-trans-amino-metilciclohexan carboxilic, pentru a se obține compusul

3. Prin deprotejarea compusului 3 utilizând hidrazină în etanol, urmată de adiție de acid clorhidric, duce la obținerea compusului 4. Prin reacția compuslui 4 cu Bz-MeMAG-Succ în metanol în prezență de EtgN, se obține Mz-Me-MAG₂-ACA 5.

Schema 24. Sinteza compusului Bz-Me-MAG₂-ACA.

6090 :

6095

6100

6105

RO 114895 Bl

COOH

Faza 1. Clorură de ftaloilglicil. O cantitate de 40 g de ftaloilglicină se suspendă în 400 ml de clorură, după care se adaugă 60 ml de clorură de tionil. Amestecul este încălzit la temperatura de reflux timp de 2 h, în care timp amestecul începe să devină o soluție omogenă, clară. Solventul și excesul de clorură de tionil este îndepărtat sub presiune redusă, obținând un produs solid albicios care este uscat apoi în vacuum și care se utilizează mai departe, fără purificare.

¹H RMN este consistent cu structura propusă.

Faza 2. 4-trans. Acidul (ftaloilglicil)aminometil) ciclohexan carboxilic.

O cantitate de 7,85 g (50 mmoli] de acid 4-trans-aminometilciclohexan carboxilic și (5 g, 50 mmoli] de carbonat de potasiu, se suspendă în 150 ml de dimetilfomamidă. La această suspensie se adaugă 11,85 g (50 mmoli) de clorură de ftaloilglicil în 150 ml de acetonitril. Amestecul de reacție este refluxat apoi timp de 3 h și apoi este filtrat imediat cald. Solvenții sunt îndepărtați sub presiune redusă, când se obține un produs uleios. După adiția a 50 ml de eter dietilic, se formează un produs alb solid. Acest produs solid este apoi colectat prin filtrare, spălat cu eter dietilic și uscat la aer. Se obțin 10,32 g produs, cu randament de 60%.

¹H RMN (in DMS0-d6, d în părți pe milion relativ la TMS): 0,87-2,00 (m, 9H, CH₂ și CH din ciclohexan ciclu); 2,10 (m, 1H, CHCOOH); 2,92 (t, 2H, J=4,6 Hz); 4,19 (s, 2H, CH₂)7,85 (m, 4H, -CH=); 8,21 (t, 1H. NH. J=4,1 Hz).

Faza 3. Clorhidratul acidului glicil-4-trans-(aminometil) ciclohexan carboxilic (GlyACA.HCI). La o suspensie de 10,32 g (30 mmoli) de acid 4-trans-((ftaloilglicil)aminometil]ciclohexan carboxilic în 300 ml de etanol, se adaugă 85% hidrat de hidrazină, 100 de ml. Amestecul este încălzit la reflux timp de 1 h, în care timp se formează un precipitat alb. După ce solventul este îndepărtat, se adaugă 200 ml de acid clorhidric 2N, la reziduul format. Amestecul este apoi încălzit peste 60...70^0, timp de 20 min și produsul solid este filtrat și îndepărtat. Filtratul este concentrat la 1/3 din volumul original. Amestecul este răcit pe o baie de gheață timp de 2 h. Precipitatul este colectat prin filtrare, spălat cu o cantitate mică de apă și etanol și apoi se usucă sub vacuum. Se obțin 3,45 g cu un randament de 45%.

¹H RMN (în D₂0, d în părți pe milion relativ la TMS): 1,04 (m, 2H, CH₂); 1,45 (m, 2H,

CH₂); 1,57 (m, 1H(, CH), 1,81-2,05 (m, 4H), CH₂); 2,35 (m, 1H, CHCOOH); 3,15 (d, 2H, CH₂, J= 4,9 Hz); 3,84 (s, 2H. CH₂).

Faza 4. Acidul N-(2-benzoiltio)propioni) glicilglicil - 4 - amino - metilciclohexan

RO 114895 Bl carboxilic (Bz-Me-MAG₂-ACA). Gly-ACA.HCI (1,25 g, 5 mmoli), EtgN (1,0 g, 10 mmoli) se suspendă într-un amestec de metanol, 200 ml și acetonitril, 100 ml. Amestecul este refluxat până a doua zi. Solvenții sunt îndepărtați sub presiune redusă, când se obține produsul solid alb cu un reziduu, la care se mai adaugă 10 ml de acid clorhidric 6160 6N. Produsul solid este filtrat, spălat cu apă și o cantitate mică de etanol și se usucă la vacuum. Se obțin 1,35 g produs cu randament de 58%.

Analiza calculată (găsită) pentru C₂₂H_2gN₃O₆S: C 57,00 (58,41); H 6,31 (6,70); N 9,06 (9,72).IR (disc de Kbrîn cm·¹]: 3600-2000 (br, OH-N); 3270 (s, n N-H); 1720, 1655, 1625 și 1565 (vs, n C-0); FAB-MS: m/z = 464 (M + L). 6165¹H RMN (în DMS0-d6, d în părți pe milion relativ la TMS); 0,8, 1,90 (m, 9H, CH₂ și CH din ciclul ciclohexan); 1,48 (d, 3H, CH₃, J = 5,2 Hz), 2,10 (t, 1H], CHCOOH,

J=9,0 Hz); 2,91 (t, 2H, CH₂, J=4,6 Hz); 3,68 (d, 2H, CH₂, 4,2 Hz); 3,75 (d, 2H,

CH₂, J=4,1 Hz); 4,42 (q, 1H, CH, J=5,2 Hz); 7,50 (t, 2H, -CH=, J=5,8 Hz); 7,71 (t,

2H, -CH=, J=5,4 Hz), 7,91 (d, 1H, -CH=, J=6,4 Hz); 8,14 (t, 1H, NH, J= 2Hz); 8,60 6170 (t, 1H, NH. J=4,1 Hz); 12,00 (bs, 1H, COOH).

Sinteza acidului 3,4-b/sf3-benzoiltioacetil]amino1benzoic (Bz-MAMB), La o soluție de clorură de S-benzoiltioacetil (8,69 g, 40 mmoli) se adaugă acid S-benzoiltioacetic proaspăt preparat, cu exces de clorură de tionil în cloroform, în 300 ml de tetrahidrofuran, apoi se adaugă 3,04 g (20 mmoli] acid 3,4-diaminobenzoic în timp ce 6175 soluția devine brună. Soluția este refluxată peste noapte în care timp se formează un precipitat. Amestecul este răcit și produsul solid este separat prin filtrare, apoi este spălat cu tetrahidrofuran, cu etanol și eter dietilic și uscat cu vacuum, când se obține un produs cenușiu pal. Se obțin astfel 5,8 g, cu randament de 54%.

Analiza calculată (găsită) pentru C^H^NgOgS^ C 59,04, (58,82); H 3,96 6180 (4,04); N 5,51 (5,46).IR (disc cu Kbr, în cm¹); 3600-2000 (br, OH-N); 3340 (s, n N-H); 1690, 1670, 1655, 1610 și 1595 (s sau m, n_c=0). Fab-MS: m/z = 509 (M+1).

¹H RMN (în CDCI₃, d în părți pe milion relativ la TMS): 4,12 și 4,14 (s, 4H. CH₂); 7,50-8,30 (m, 13 H, aromatic H’s); 9,85 și 9,89 (s, 2H, NH); 12,99 (bs, 1H, 6185 COOH).

Sinteza esterului 2-fS-itrifenilmetilmercapto] etilamino-acetil-S-trifenilmetil-Lcisteină etilic (Tr_?-MA-MAMA).

EtOOC/^NH HN

6190

6195

6200 ^STr TrS^

Schema 25

6205

RO 114895 Bl a: Trifenilmetanol, TFA;

b=bromură de bromacetil TEA, THF;

c=S-trifenilmetil-2-aminoetantiol, TEA, clorură de metilen.

Esterul etilic al S-trifenilmetil-cisteinei (2];

La o soluție de clorhidrat al esterului etilic al L-cistinei (18,6 g, 0,1 mmoli) în 200 ml de TFA, se adaugă 52 g (0,2 mmoli) de trifenolmetanol. Soluția brun închis, rezultată, este menținută sub agitare timp de 2 h la temperatura camerei sub azot. Solventul este îndepărtat în vacuum la care se adaugă 100 ml de etanol la reziduu. Se mai adaugă o soluție de etoxid de sodiu 1M la soluția etanolică și apoi se agită timp de 90 min în care timp soluția devine tulbure. Amestecul este filtrat, iar filtratul este spălat și concentrat în vacuum, obținând un reziduu uleios. Prin cromatografie flash utilizând eluant amestec de acetat de etil și hexan 1:1 se obține produsul dorit (conținând urme de acetat de etil care sunt dificil de îndepărtat) care este menținut sub vacuum.

Esterul etilic al N-bromacetil-S-trifenilmetil-L-cisteinei (31. O soluție de ester etilic al S-trifenilmetil-L-cisteinei (18 g, 46 mmoli) și trietilamină (6,4 ml, 46 mmoli), în 250 ml THF uscat în atmosferă de azot, se răcește la 0°C. O soluție de bromură de bromacetil (9,28 g, 46 mmoli) în 60 ml THF uscat se adaugă în picături, în timp ce soluția devine tulbure. Amestecul de reacție este agitat la 0°C, timp de o oră și apoi la temperatura camerei o oră. Amestecul de reacție este filtrat și filtratul este concentrat în vacuum, obținând un ulei. Uleiul este repartizat între clorură de metilen și apă (60 ml fiecare), stratul organic este spălat cu HCI 5% NaHC0₃, uscat pe sulfat de magneziu, filtrat și substanțele volatile se îndepărtează obținând produsul dorit (69%).

Esterul etilic al 2-{S-trifenilmetilmercapto)etilamino-acetil-S-trifenilmetil-L-cisteinei (4): La o soluție de ester etilic N-bromacetil-S-trifenilmetil-L-cisteină (1,0 g, 1,98 mmoli) și trietilamină (0,4 ml, 2,9 mmoli) în 10 ml clorură de metilen, se adaugă 0,64 g, 2,0 mmoli de S-trifenilmetil-2-aminoetantiol. Amestecul de reacție este menținut sub agitare la temperatura camerei timp de 7 zile. Se adaugă apoi 10 ml apă. Stratul organic este spălat de două ori cu 10 ml NaHC0₃, de două ori cu 10 ml apă, cu 10 ml soluție salină, apoi se usucă pe sulfat de magneziu și se concentrează la produs spumos. Prin cromatografie flash, cu eluant acetat de etil și hexan (3:1), se obține produsul cu 22% randament. MS (M+H) = 751, calculat 751,3.

Sinteza chelatorului având o singură grupă de acid carboxilic capabilă de legare a linkerului este arătată în schema 26. Sinteza începe cu N-alchilarea Cys(Acm)Ome cu dimetilacetatul bromacetaldehidei. Amina secundată a produsului de alchilare este acum protejată de o altă reacție, cu grupa Teoc. Pot fi utilizate și alte grupe de protecție care sunt stabilite pentru acidul slab și baza slabă și pot fi îndepărtate în prezența sulfului. Grupa Teoc este introdusă prin utilizarea carbonatului de 2-(trimetilsilil) etil p-nitrofenil. Acetatul este acum hidrolizat cu un acid slab, apos și aldehida este reductiv aminată cu S-trifenilmetil-2-aminoetantiolul.

O singură amină liberă a chelatorului este protejată cu grupa Teoc a chelatorului și esterul metilic este hidrolizat cu o bază soluție apoasă pentru a da acidul carboxilic pregătit pentru reacția cu grupa reactivă a compusului ciclic cu linker modificat.

RO 114895 Bl

H2N\^CC>2Me

I

Acm

Teoc-OpNP

BrCH₂CH(OMe)2 (MeO)₂CH-^Ț^eoc

N^CO₂Me

S

Acm

C^H J s s

I I

Acm Acm

Teoc

N CO₂Me (MeO)₂CH1) Teoc-OpNP

2) NaOH. H₂0

Schema 26 £>x^-CO2Me

Acm

1) H₂O, H⁺

2) NaCNBH₃

Acm-S

Teoc ,—

NH₂

Teoc

6255

6260

6265 s

i t

Acm Acm

Κ^00₂Η

6270

Un chelator având o amină adițională convenabilă pentru conjugare la compusul. ciclic cu linker modificat, poate fi sintetizat conform procedeului din schema 27.

Acidul tioglicolic Acm protejat se poate cupla la N-t43utoxicarboniletilendiamină utilizând oricare din metodele standard de cuplare ale sintezei de peptide. 6275

Grupa de protecție Boc va fi îndepărtată prin utilizarea TFA și amina rezultată va fi cuplată la Boc-Cys(Acm)-OH.

îndepărtarea grupei de protecție Boc duce la obținerea chelatorului S-protejat într-o formă apropiată pentru reacția cu grupa reactivă a compului ciclic cu linker modificat. 6280

Aon

Boc-Cys(Acm)-OH

HBTU

6285

H2NCH₂CH₂NH-Boc

HBTU

Aon ¹

Acm

6290

6295

Schema 27

Așadar, subiectul prezentei invenții sunt reactivii cu formula (Q L^Ct, pentru radiomarcare, care conțin mai mult decât un linker al compusului intermediar ciclic cu linker modificat, legat la un chelator, ca și la reactivi cu formula (Q]_dL_n-C_h, având 6300 doi sau mai mulți compuși intermediari ciclici legați la un linker comun care poartă de

RO 114895 Bl

6305 asemenea un chelator.

Un exemplu de r schemele 28 și 29.

Alte exemple reprezentative sunt arătate în schemele următoare.

In aceste scheme, grupele amino din compușii intermediari cu doi linkeri, reacționează cu cele două grupe de ester activate, prezentate mai sus, pentru a se obține compusul conform prezentei invenții cu formula (QLJpC,,.

6310

I

6315

6320

6325

6330

6335

6340

Schema 28

Grupa de protecție sulf, Pg arătată mai sus, ca și grupele Pg în totalitate, revendicate în prezenta invneție, pot fi orice grupe de protecție capabile de a fi dislocuite, după reacția cu nuclida metalică.

Astfel de grupe de protecție sunt bine cunoscute în literatura de specialitate. Exemplele convenabile pentru protejare sunt prezentate în brevetele US 4897255, 4965392 și 4980147, fiecare din acestea fiind încorporate în prezenta invenție, prin referințe.

RO 114895 Bl

6345

|oeprotectie

6350

6355

6360

QL,

Q 99my _nJU^{NH ΗΝ}^Α_ηο——

SH HS'

6365

Schema 29

Chelatorii utilizați în sinteza acestor reactivi sunt descriși în Chervu ș.a., brevet US 4883862 și Bergstein ș.a., brevet US 5279811. Sinteza altor chelatori folosi- 6370 tori este descrisă în schemele următoare.

Următoarele exemple ilustrează modul de preparare al celor trei chelatori. Schema 30 subliniază sinteza ligantului N₂S₂ având o grupă de doi acizi carboxilici la care compusul ciclic țintă poate fi conjugat.

Sinteza începe cu o reacție de alchilare cu două amine ale acidului DL-2,3- 6375 diaminosuccinic (Sigma Chemical Co.), utilizând S-trifenilmetil-2-brometantiolul.

Aminele secundare trebuie protejate acum pentru a se evita autocondensarea atunci când sunt activați acizii carboxilici.

Aceasta se poate realiza cu orice grupă de protecție amino standard.

Grupa Z va fi o alegere bună deoarece aceasta poate fi îndepărtată în condiții 6380 acid (HBr/HOAc sau TFA/acidul trifluormetansulfonic), în același timp cu protejarea tritil a sulfului.

Schema 30

6390

RO 114895 Bl

Sinteza grupei secunde N₂S₂ având două grupe de acid carboxilic, este arătată în schema 31.

Alchilarea acidului etilendiamin-N,N’-dipropionic (American Tokyo Kasei) cu Strifenilmetil-2-brometantiol, poate duce la obținerea N₂S₂ pentru conjugare. Aminele sunt terțiare și astfel nu mai este necesară o protecție adițională.

i i

Tr Tr

Schema 31

Schema 32 reprezintă sinteza ligantului N₂S₂ având două grupe amino adiționale pentru conjugare la compușii ciclici țintă care au grupe electrofile reactive -(de exemplu esterii activi).

O reacție de aminare reductivă între benzilamină și glioxal, ar putea duce la obținerea N, N’-dibenzil-etilendiaminei.

Alchilarea celor două amine cu N-(3-brompropil)ftalimidă ar duce la o completă protejare a tetraminei. Protecția cu benzii a celor două amine secundare ar putea fi înlăturată prin reducerea catalitică și amina liberă ar putea apoi să fie alchilată cu Strifenimetil-2-brometantiol, pentru a se obține ligantul protejat complet.

Deprotejarea selectivă a aminelor primare ar putea fi realizată cu hidrazina.

Phih-N-(CH₂)₃-Br

HCO-CHO n*cnbh₃

Bzl-NH .NH-Bzl

Bzl

H₂. Pd'C

N-Phih

Phih-N

1) NH₂NH₂

2) NaOH

Schema 32

RO 114895 Bl

Reactivii având două grupe țintă și un chelator legat la un linker obișnuit, poate fi sintetizat conform unei metode prezentate în schema 33.

Reacția benzilaminei cu N-(3-brompropil) ftalimida, duce la obținerea N,N’ bis 6445 (3-ftalmidopropil) benzilaminei (Niitsu and Samejima,(1986, Chem. Pharm. But. 34,

1032...1038).

Tratarea cu hidrazină poate îndepărta grupele de protecție ftalimido. N,N-b/s (3 aminopropil) benzilamina ar putea apoi să reacționere cu anhidrida succinică pentru a se obține diacidul care ar putea fi convertit în esterul bisactiv, cu DOC și N- 6450 hidroxisuccinimida. Acest ester bis activ poate fi apoi conjugat cu compusul ciclic cu linker modificat.

Hidrogenarea pentru îndepărtatea grupei de protecție benzii și conjugarea cu chelatorul activat pot duce la obținerea produsului final.

6455

Brl-NH;

Phth-(CH₂)₃-Br

N-Phth

1) NH₂NH₂

2) NaOH

H_;N nh₂

SuO₃C

Bii

1) Anhidridă succinică

2) HOSu. DCC

O

CO₂Su

Q. DMF

6460

Q-CO

O

6465

1. H₂. Catalizator

2. Chelator activat

O O

Chelator

Schema 33

6470

Mai mult de doi compuși Q și mai mult decât un chelator, se pot lega împreună utilizând un starburst sau dendrimeri în cascadă, ca linkeri.

Dendrimerii sunt construiți prin adăugarea segmentelor ramificate la nucleul de funcționalizare, producând un produs având două grupe de numere funcționale ca nucleu original. 6475

Această adiție a unității ramificate poate fi efectuată prin mai milte generații, pentru a produce molecule polifuncționale mari.

Un exemplu este PAMAM (poliamidoamina) dendrimneri (Aldrich Chemical Co.,) care utilizează etilendiamina ca nucleu inițiator.

Schema 34 arată prepararea generalizată a produselor radiofarmaceutice pe 6480 baza dendrimerilor PAMAM conținând compușii ciclici țintă și chelatorii în proporție de 2:1.

RO 114895 Bl

6485

Pentru această structură, o generație = O (n = 1) de dendrimer va avea doi cpi

Raportul și numărul absolut al compușilor ciclici țintă și chelatorilor va fi controlat prin stoichiometria reacțiilor conjugate.

6490 j

6495

echivalent chelator activat

6500

65056510

Schema 34

Un sistem similar, numit peptida antigen multiplă (MAP) ca sistam, a fost descris de Posnett, McGrath and Tam, J.Bol.Chem. 263, 1988, 1719] pentru a facilita generarea anticorpilor. Acest sistem construiește o legătură ramificată pe un suport solid utilizând două grupări amino ale lizinei. Deoarece cele două grupe amino diferite de pe lizină pot fi protejate ortogonal, acest sistem permite un nivel ridicat de control al reacțiilor de conjugare.

In schema 35, sistemul MAP care este terminat prin patru grupe lizină, este conjugat primul la cei patru compuși ciclici țintă, la grupările alfa amino și apoi la patru chelatori la grupele epsilon amino.

RO 114895 Bl

Fmoc

1) TFA

2) Q

3) El_?NH

4) Chelator activat

6515

6520

6525

6530

6535

Schema 35

6540

Sinteza compușilor radiomarcați. Compușii llb/llla glicoproteici ai plachetelor ciclice radiomarcate, conform prezentei invenții, pot fi sintetizați utilizând metode standard sintetice cunoscute în literatura de specialitate, utilizând radioizotopii halogenilor (ca de exemplu clorul, bromul și iodul], tecnețiu și indiul, și alți compuși asemănători. Radioizotopii de preferință includ ¹²³l, ¹²⁵l, ¹³¹l, ^99mTc și ”¹ln. 6545

Compușii llb/lla al glicoproteinei plachetei ciclice, conform prezentei invenții, pot fi marcați direct (adică prin încorporarea directă a radiomarkerului în compuși) sau indirect (adică prin încorporarea radiomarkerului în compuși] cu ajutorul unui chelator care a fost încorporat în compuși. Pentru marcarea directă, așa cum este menționat în literatură, markerul poate fi izotopic sau neizotopic. 6550

Cu marcarea izotopică, o grupă deja prezentă în compusul ciclic este substituită cu radioizotopul (pentru schimbare).

Cu marcarea neizotopică, radioizotopul este adăugat la compușii ciclici fără substituirea cu o grupare deja existentă (pentru schimbare).

In general, compușii marcați sunt preparați prin procedee care introduc atomul 6555 marcat într-un stadiu întârziat al sintezei.

Aceasta permite randamente radiochimice maxime și reduce timpul de manipulare al materialelor radioactive. Când se comportă ca izotopi cu timp de înjumătățire scurt, o considerație majoră este timpul necesar pentru a conduce procedeele sintetice și metodele de purificare. 6560

Protocoalele pentru sinteza produselor radiofarmaceutice sunt descrise de

Tubis și Wolf, în Eds, Radiopharmacy, Wiley - Interscience, New York, 1976; Wolf,

RO 114895 Bl

Christman, Fowler, Lambrecht, Synthesis of Radiopharmaceuticals and Labeled Compounds, Using Short-Lived Isotopes, voi 1, pag. 345...381 (1973, descrierile

6565 acestora fiind încorporate în prezenta invenție prin referințe, în totalitatea lor.

Diferitele procedee pot fi utilizate la prepararea compușilor radiomarcați ai prezentei invenții în care radiomarkerul este halogen. Unele metodologii comune sintetice pentru marcare cu halogeni izotopici ai compușilor aroamtici, cum ar fi de exemplu tipul prezent în această invenție, ca de exemplu: iododediazonizarea, iododeborobarea,

6570 iododetanilarea, iododesilarea, iododetalarea și reacțiile de schimb cu halogeni. Cea mai comună metodologie sintetică pentru marcarea neizotopilor halogenici a cornii pușilor aromatici, de exemplu ca tipul prezentei invenții, se prezintă aici iododeprotenizarea sau reacțiile de substituție aromatice electrofilice. Aceste metode și procedeele adiționale sunt decrise în Merkushev, Synthesis, 923 (1988) and Seevers et al.,

6575 Chem. Rev. 82: 575, 1982, descrierile acetora fiind încorporate în întregimea lor, prin referințe.

Cu titlu de exemplu, derivații acidului 4,5 și 6 halo-t-butiloxicarbonil-3-aminometilbenzoic radiomarcați, pot fi preparați, utilizând procedeele generale descrise mai sus, pentru sinteza compușilor nemarcați. Pentru realizarea unei astfel de radio6580 marcări, este important ca, timpul de înjumătățire al izotopului ales, să fie mult mai mare decât timpul de manipulare a secvențelor reacției. Materialele de pornire în aceste reacții cunoscute, includ acizii 2, 3 și 4-iodobenzoici (1231, 1251 și 1311).

Derivații iodoradiomarcați Mamb pot fi așadar preparați izotopic, din aniline, prin reacția Sandmeyer, așa cum s-a descris în Eklis et al., Aust. J. Chem. 26:907,

6585 1973.

Alternativ, astfel de compuși pot fi preparați pe calea marcării izotopice, plecând de la derivații de brom sau iod nemarcați prin diferite secvențe de reacție în două faze, cum ar fi de exemplu cele utilizate cu sintoni trialchilsilic, așa cum s-a descris de Wilson et al., J. Org. Chem. 51: 483, 1986, and Wilbur et al., J. Labei

6590 Compound Radiopharm. 19: 1171, 1982, utilizarea trialchilsilil sintonilor, așa cum s-a descris de Chumpradit ș.a., J. Med. Chem. 34: 877 (1991) și Chumpradit ș.a., Med. Chem. 32:1431 (1989) și utilizarea sintonilor acidului boric, așa cum este descris de Kabalka ș.a., J. Labei. Compound, Radiopharm. 19:797 (1982) și Koch et al., Chem. Ber. 124:2091 81991). Aceste transformări sintetice sunt prezentate

6595 în schema 36, următoare:

RO 114895 Bl

6600

1. HNOj

2. CuBror K1

6605

6610

Schema 36

Așadar, protocolul prezentat mai sus poate fi utilizat pentru prepararea compușilor radiomarcați conform prezentei invenții, pentru creșterea la maxim a randa- 6615 mentelor radiochimice, pentru a reduce timpul de manipulare a materialelor radioactive și pentru prepararea compușilor marcați cu halogeni cu timp de înjumătățire scurt, fiind preferabil de a realiza marcarea cu halogen izotopic ca una din ultimile faze în sinteza compușilor ciclici.

In continuare, sunt prezentate următoarele exemple de procedee pentru 6620 această marcare într-o ultimă fază.

Compușii cu iod nemarcați sunt precursorii multilaterali care pot fi transformați în derivați marcați, prin oricare din cele două secvențe de reacții pe faze, descrise mai sus. Funcționalitatea utilă pentru încorporarea în porțiunea Mamb a compusului ciclic, include grupe ca, borul, nitro, trialchilsilil, trialchiltin și acidul boric. Sinteza și aplicarea 6625 fiecăruia din acești precursori este descrisă mai sus.

Cel puțin un complex reprezintă radioiodurarea compușilor ciclici, conform prezentei invenții, prin marcare izotopică în timpul stadiilor finale ale preparării, prin substituirea iodului radioactiv pentru a avea deja un atom de iod stabil în moleculă. Aceasta se poate realiza de obicei prin încălzirea compusului cu iod radioactiv într-un 6630 solvent convenabil, așa cum este descris de Ellis et al. Aust., J. Chem. 26:907,

1973.

Atunci când se aplică la ioduri aromatice, cantități extrem de mici și se utilizează concentrații scăzute de iod radioactiv, se ajunge la încorporarea numai a unei

6635

RO 114895 Bl activități specifice modeste. Această secvență de reacție este prezentată în schema 37.

6640

6645

6650

6655

6660

6665

Schema 37

Compușii ciclici pot fi așadar iodomarcați izotopic în timpul fazelor finale ale preparării acestor compuși, din aniline, prin reacția Sandmeyer, așa cum este descris de Ellis et al., Aust. J. Chem. 26:907, 1973. Acest procedeu duce la compusul ciclic marcat, cu o activitate specifică superioară. Pentru evitarea complicațiilor în sinteza compusului ciclic, grupa nitro prevede un sinton ideal pentru anilină.

Alternativ, compușii ciclici pot fi marcați izotopic în finalul schemei de reacție, din derivații de brom sau iod nemarcați, prin oricare din cele două secvențe pe faze de reacție, așa cum s-a descris mai sus, cum ar fi de exemplu prin utilizarea sintonilor trialchilsilil, așa cum este descris de Wilsun et al., J. Org. Chem. 51:4833,1986 și Wilbur etal., J. Labei. Compound, Fadiopharm. 19:1171, 1982, prin utilizarea sintonilor trialchilsilil, așa cum s-a descris în Chumpradit ș.a., J. Med. Chem., 234: 877 (1991) și Chumpradit ș.a., J. Med. Chem. 32 : 1431,1989, și prin utilizarea sintonilor acidului boric, așa cum este descris de către Kabalka ș.a., J. Labei. Compound. Fladiopharm. 19:795,1982 și Koch etal., Chem.Ber. 124: 2091, 1991.

Una din metodele prezentate în care radiomarcarea cu izotopi de halogen cuprinde transformarea derivaților Mamb substituiți în compuși ciclici, care a încorporat deja grupele trialchilsilil, trialchilstaniu sau acidul boric.

Sinteza fiecărui derivat Mamb a fost descrisă mai sus.

Transformările sintetice în compușii ciclici, precedente, sunt prezentate în schema 38.

RO 114895 Bl

6670 / \

6675

N-U«(To«)Arg /

O-Val

6680

6685

6690

6695

Gly ''‘AtpțOcHalj \

6700

Schema 38

6705

Derivații marcați cu iod pot fi preparați de asemenea fără izotopi din grupele amino, hidroxi sau metoxi substituiente ale compușilor ciclici, așa cum s-a descris de către Arora ș.a., J. Med. Chem. 30:918,1987. Reacțiile de substituție aromatice 6710 electrofile sunt intensificate prin prezența unor astfel de substituenți donatori de electroni. Această secvență sintetică este subliniată în schemele 39 și 40.

RO 114895 Bl

6715

Gly

N-M»<Toi)Arg^ '''^A«p(OcH«x) z \

6720

672$

6730

6735

6740

6745

6750

Schema 39

6755

RO 114895 Bl

N-M«(To«)Arg' /

'A^p(OcHax)

Gly

Cloramină -T

Nai*

N-MafToaJArg' /

6760

CFjCOjH Gly

N-MeArg^* ^Axp / \

Cloramină -T

Nat*

Gly ‘^•p(OcHex)

CFjCOjH- _Gly

N-MeArg ^Asp / \

6765

6770

D-Val ^^OH-^OMe 6775

Schema 40 metodă alternativă de încorporare a halogenului radiomarcat este aceea prin care compușii ciclici substituiți la metil pot fi transformați în derivatul a-halotoluen cu 6780 NBS în condiții de halogenare a radicalilor liberi. Halogenurile benzilice pot fi ușor înlocuite prin iodură radiomarcată cu ajutorul unei reacții de substituție nucleofilă.

Această secvență sintetică este prezentată în schema 41.

H-MefToxIArg·^ ''^A«p(OcHex) / \

D-Val	NI	1.NSS.ROOR
2. Har
		3.MF; HPLC
	CHj

CFjCOjH·

N-MeArg' /

,Gly

6785

6790

Schema 41

Așa cum este ilustrat în primul rând pentru compușii cu iod radiomarcați, procedeul chimic descris mai sus poate fi utilizat pentru prepararea oricărui izotop de ha- 6795 logen radioactiv.

Derivații ¹⁸F ai acestor compuși ciclici, pot fi preparați prin conjugarea compușilor intermediari fenil funcționalizați ¹⁸F. compușii ciclici funcționalizați ¹⁸F, pot fi preparați așa cum se arată în schema 42 (R.H.Mash at al., J. Med. Chem.AQțtâ, 36,

3707...3720). 6800

Reacția para-trimetilamoniu-benzaldehidei cu (¹⁸F)C_SF/ dimetilformamidă soluția apoasă la temperatura de 120°C timp de 10 min (se poate utiliza de asemenea (¹⁸F)KF/kriptofix/ACN în soluție apoasă, pentru generarea compușilor ¹⁸F-fenil, din grupele trimetilamoniu sau nitro corespunzătoare), la care se adaugă LAH/ THF/ pentan și o soluție apoasă 57% HI pentru a se obține iodură para-¹⁸F-benzil. 6805

RO 114895 Bl

CHO

CHO

CH-

N(CH₃)₃* 0ΤΓ ¹⁸F ^ieF

Schema 42

Reacția cu compusul ciclic intermediar ciclo (D-Lys-NMeArg-Gly-Asp-Mamb) cu funcționalitate de amină sau cu un compus ciclic cu linker modificat ciclo (D-ValNMeArg-Gly-Asp-Mamb) poate duce la obținerea produselor marcate ¹⁸F, convenabile pentru utilizare în tomografia de emisie cu pozitron (PETJ:

NH

(Γ V

N

H

O

NH

ISp

Se pot utiliza diferite procedee pentru prepararea compușilor radiomarcați, conform prezentei invenții, în care radiomarkerul este un metal, cum ar fi de exemplu, cazul în care radiomaekerul este tecnețiu sau indiu. Aceste procedee sunt utilizate pentru compușii marcați, conform prezentei invneții, cu formulele următoare:

(QUA ?i (Q)_dL_n-C_h. Exemplele de procedee pentru o astfel de marcare cu tecnețiu sau indiu, sunt descrise de exemplu de Cerquiera ș.a., Circulation, voi. 85, nr.1, pag. 298...304, 1992, Pak ș. a., J. Nuci. Med.,voi 30, nr.5, pag. 793 36 th

Ann.Meet.Soc.Nuci.Med., 1989, Epps ș.a., J. Nuci. Med.,vo\ 30, nr.5 pag. 794, 36 th Ann, Meet.Soc.Nuci.Med., 1989, Paketal., J.Nucl. Med., voi. 30, nr.5 pag. 794,

RO 114895 Bl

36* Ann.Meet.Soc.Nucl.Med. (1989) and Dean et al. J.Nucl. Med. Voi 30, No.5 pag. 6855 794 36* Ann.Meet.Soc.Nucl.Med., 1989; discuțiile privind aceste procedee sunt încorporate prin referințe în totalitate, iar procedeele specifice sunt prevăzute în exemplele de mai jos.

O altă metodă folositoare pentru marcarea compușilor ciclici, conform prezentei invenții, cuprind prepararea chelatorului ^99mTc (la nivelul atomilor marcați] și conju- 6860 garea, fie la compusul intermedair ciclic, fie la compusul ciclic cu linker modificat.

Această metodă este intitulată metoda prechelată. Așa cum s-a arătat de exemplu în schema de mai jos, acidul 4,5-b/s(S-benzoil)mercapto-acetamidopentanoic (1) este complexat cu ^mTc0₄în condiții de reducere, pentru a forma compusul (2).

Apoi compusul (2) este trasnformat în esterul activ (3) conținând grupa tetrafluorfenil. 6865 Complexul (3) poate reacționa apoi cu compusul intermedar ciclic convenabil cum este i! compusul (5) sau compusul (6), pentru obținerea compușilor radiomarcați (4).

Un alt chelator de tecnețiu convenabil este acidul 2,3-bis (s-benzoil)marcaptoacetamido-propanoic (7). Prin cromatografie HPLC, se realizează purificarea complexului ^99mȚc, la fiecare fază. 6870

Această metodă este prezentată în schema 43.

(3) <<>

6875

6880

6885

ΜΗ O NH O

RNHj i

HjN

xC^S'^COîH

6890

COjH f—(

I I Bz Bz

Bz z B«nzolt (7)

Schema 43

6895

RO 114895 Bl

Se dau, în continuare, exemple de realizare a invenției, în legătură și cu fig. 1a și 1b, care reprezintă:

-fig. 1a, ilustrează imagini tipice ale compusului radiofarmaceutic din exemplul 12, administrat intravenos la 1 mCi/kg la un model de tromboză venoasă la un canin adânc, la acest model, trombii au fost formați în venele jugulare, în timpul unei perioade de stază, care a fost urmată prin recirculare. Compușii au fost administrați la începutul perioadei de recirculare. Acești compuși sunt adsorbiți într-un trombus venos cu desvoltare rapidă, la 15, 60 și 120 min după administrare;

- fig. 1b, reprezintă imaginile tipice cu referire la compusul radiofarmaceutic din exemplul 19, administrat la 1 mCi/kg, intravenos, la modelul de tromboză venoasă la un canin adânc, la acest model, trombii sunt formați în venele jugulare, în timpul perioadei de stază care este urmată prin recirculare. Compușii sunt administrați la începutul perioadei de recirculare. Compușii sunt absorbiți într-un trombus cu dezvoltare rapidă, la 15, 60 și 120 de min după administrare.

Secțiunea A. Agenți pentru radiomarcare

Exemplul 1. Cicio-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb(5-Aca))-N-i4-(carboxi]benziI]N,N’-bis[(2-trifenil-metiltio)etil]-glicinamidă conjugată.

O soluție de ester N-[4-(carboxi)benzil]-N,N’-bis[(2-trifenilmetiltio)etil]-glicinamidăN-hidroxi-succinimidă (0,017 mmol), ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb(5-Aca]] (13,9 mg, 0,015 mmoli], și EtgN (6,25 pl, 0,045 mmoli) în DMF (350 pl) s-a încălzit la temperatura camerei timp de 14 h. Evoluția reacției a fost monitorizată prin fază normală TLC/90:8:2 CHCI₃;MeOH:AcOH), utilizând anhidridă și teste Sakaguchi. DMF a fost îndepărtată sub presiune redusă.

Compusul conjugat a fost purificat utilizând faza reversă HPLC cu o coloană preparativă Vydac C18 (2,1 cm) utilizând gradient 1,0%/min de 18...36 acetonitril conținând 0,1% TFA și apoi liofilizarea acestuia pentru a se obține TFA sare a compusului din titlu ca un solid pufos colorat (11 mg, 53%); FAB-MS: [M+H]=

Exemplul 2. Ciclo-(D-Lys-NMeArg-Gly-Asp-Mamb)-N-I4-(carboxi)benzil]-N,N’-bis [(2-trifenil-metiltio]etil]-glicinamidă conjugată.

O soluție de ester N-(4-(carboxi)benzil]-N,N’-bis[(2-trifeniImetiltio]etil]-glicinamidă N-hidroxisuccinimidă (30 mg,O,33 mmoli), ciclo-(D-Lys-NMeArg-Gly-Asp-Mamb) (23,8 mg, 0,029 mmoli) și EtgN (12 pl, 0,087 mmoli) și DMF (0,60 ml) a fost încălzită la temperatura camerei timp de 63 h. Evoluția reacției a fost monitorizată prin fază normală TLC (90:8:2 CHCI₃:MeoH:AcOH) utilizând anhidridă și teste Sakaguchi. DMF a fost îndepărtată sun presiune redusă.

Compusul conjugat a fost purificat utilizând cromatografia HPLC în fază reversă pe o coloană preparativă Vydac C18 de 2,1 cm, utilizând 0,9%/min gradient de la 18 la 36% acetonitril conținând 0,1 % TFA și apoi se liofilizează pentru a se obține sarea TFA a compusului din titlu, ca produs solid incolor pufos, în cantitate de 24 mg, cu randament de 60%; Esi-MS: (M]=1397,3.

Exemplul 3. Sarea TFA a ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb (N-hidrazinonicotinil-5-Aca]).

Partea A: Sinteza sării TFA a compusului ciclo (D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb (N-boc-hidrazino-nicotinil-(5-Aca]].

La o soluție de ciclo(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb (5-Aca) 10 mg, 0,11 mmoli, apoi 4,6 mg (0,0132 mmoli] de boc-hidrazinonicotinat succinimidil în 0,3 ml de dimetilformamidă, se adaugă 0,0061 ml (0,044 mmoli) de trietilamină și amestecul de reacție este menținut sub agitare la temperatura camerei în atmosferă de azot

RO 114895 Bl timp de 24 h. Solventul este îndepărtat sub vacuum și reziduul este dizolvat într-o so- 6950 luție de acetonitril și apă și apoi este liofilizat până a doua zi, obținând produsul solid albicois. Purificarea unei părți din produs este realizată prin HPLC în fază reversă pe o coloană preparativă Vydac C18, apoi se utilizează 2,0%/min gradient de la 6,3 la 72% soluție apoasă de acetonitril conținând 0,1% TFA și se liofilizează pentru a se obține sarea TFA a compusului din titlu sub formă de produs solid pufos. 6955

MS (M+H = 938, 4849, calculat 938, 4848],

Partea B: Deprotejarea sării TFA a compusului ciclo (D-Val-NMeArg-Gly-AspMamb (N-hidrazinonicotinil-5-Aca).

Sarea TFA a compusului ciclo (D-Val-NMeArg- Gly-Asp-Mamb (N-bochidrazinonicotinil-5-Aca) este dizolvată într-un amestec de 98 părți TFA și 2 părți anisol 6960 (2 ml) și amestecul de reacție este agitat 15 min. Solventul este îndepărtat în vacuum și reziduul este dizolvat într-o soluție de acetonitril și apă și liofilizat, obținând un produs solid, alb.

Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă pe o coloană preparativă Vydac C18, utilizând 2,0%/min gradient de la 6,3-72% acetonitril soluție apoasă 6965 conținând 0,1% TFA și se liofilizează obținând sarea TFA a compusului din titlu, ca produs solid pufos.MS (M+H = 838, 4324, calculat 838,4324).

Exemplul 4. Sarea TFA a compusului (D-Abu-NMeArg-Gly-Asp-Mamb (Nhidrazinonicotinil-5-Aca]).

La o soluție de sare TFA a compusului ciclo (D-Abu-NMeArg-Gly-Asp-Mamb (5- 6970 Aca] 10 mg, 0,0109 mmoli, apoi 4,55 mg (0,0131 mmoli) boc-hidrazinonicotinat succinimidil în 0,4 ml de dimetilfomamidă, se adaugă 0,0061 ml (0,044 mmoli] de trietilamină și amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei în atmosferă de azot timp de 24 h.

Solventul este îndepărtat în vacuum și reziduul este dizolvat într-o soluție de 6975 acetonitril și apă și apoi este liofilizat până a doua zi, pentru a se obține produsul solid albicios.

Purificarea parțială a produsului este realizată prin HPLC în fază reversă pe o coloană preparativă Vydac C-18, utilizând 2,0%/min gradient de la 6,3 la 62% acetonitril soluție apoasă conținând TFA a compusului din titlu, solid pufos, cu MS(M+H= 6980 924, 4699, calculat 924, 4692).

Partea B; Deprotejarea sării TFA a compusului ciclo (D-Abu-NMeArg-Gly-AspMamb (N-hidrazino-nicotinil-5-Aca)].

Sarea TFA a compusului ciclo(D-Abu-NMeArg-Gly-Asp-Mamb (N-hidrazinonicotinil-(5-Aca)): 6985

Sarea TFA a compusului ciclo-D-Abu-NMeArg-Gly-Asp-Mamb (N-boc-hidrozinonicotinil-5-Aca]] se dizolvă într-un amestec format din 98 părți TFA și 2 părți anisol (2 ml) și amestecul de reacție este agitat timp de 15 min. Solventul este îndepărtat în vacuum și reziduul este dizolvat într-o soluție de acetonitril și apă și apoi este liofilizat când se obține produsul solid, alb. Purificarea este efectuată prin HPLC în fază 6990 reversă pe o coloană preparativă Vydac C18 utilizând 2,07%/min gradient de

6,3...85,5% acetonitril soluție apoasă conținând 0,1% TFA și apoi se liofilizează obținând sarea TFA a compusului rubricat, ca produs solid pufos. MS (Μ + H = xx, calculat xx).

Exemplul 5. Sarea TFA a compusului ciclo((N-E-hidrazinonicotinil-D-Lys)- 6995 NMeArg-Gly-Asp-Mamb).

Partea A: Sinteza sării TFA a compusului ciclo((N-E-Boc-hidrazinonicotinil-D-Lys)NMeArg-Gly-Asp-Mamb).

RO 114895 Bl

La o soluție de ciclo (D-Lys-NMeArg-Gly-Asp-Mamb). 2TFA (4,2 mg, 0,005 mmoli) succinimidil boc-hidrazino-nicotinat (2,1 mg, 0,006 mmoli) în 0,15 ml de dimetilformamidă, se adaugă trietilamină (0,003 ml. 0,02 mmoli) și amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei în atmosferă de azot timp de 48 h. Solventul este îndepărtat în vacuum și reziduul este dizolvat într-o soluție de acetonitril și apă și apoi este liofilizat până a doua zi, pentru a se obține produsul solid albicios. Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă pe o coloană preparativă Vydac C-18, utilizând 1,7%/min gradientul de 6,3 la 3,85% acetonitril soluție apoasă conținând 0,1% TFA și apoi se liofilizează pentru a se obține sarea TFA a compusului rubricat ca produs solid pufos. MS (M+H = 839, 4157, calculat 839, 4164).

Partea B: Deprotejarea sării TFA a compusului ciclo((N-E-hidrazinonicotinil-D-Lys(NMeArg-Gly-Asp-Mamb).

Sarea TFA a compusului ((N-E-hidrazinonicotinil-D-Lys)-NMeArg-Gly-Asp-Mamb): se utilizează 3 mg de sare TFA a compusului ciclo ((N-E-boc-hidrazinonicotinil-O-Lys)NMeArg-Gly-Asp-Mamb), care se dizolvă în 2 ml amestec din 98 părți TFA și 2 părți anisol și amestecul de reacție este agitat timp de 15 min. Solventul este îndepărtat în vacuum și reziduul este dizolvat într-o soluție de acetonitril și apă și apoi este liofilizat pentru a se obține un produs solid, alb. Purificarea este realizată prin HPLC în fază reversă pe o coloană preparativă Vydac C18 utilizând 2,0%/min gradient de la 6,3 la 72% acetonitril soluție apoasă conținând □, 1% TFA și prin liofilizare se obține sarea TFA a compusului rubricat, solid pufos.

MS (Μ + H = 739, 3629, calculat 739,3640).

Exemplul 6. Conjugatul compusului ciclo-((DTPA-D-Lys)-NMeArg-Gly-Asp-Mamb).

La o soluție de 250 mg (2 mmoli) de ciclo (D-Lys-NMeArg-Gly-Asp-Mamb) în 208 ml de borat 0,1M (pH 9,88) la temperatura camerei se adaugă anhidrida DTPA (743 mg, 10 mmoli) sub agitare constantă. Amestecul de reacție este lăsat sub agitare timp de 2 h. Amestecul brut de produse obținut după îndepărtarea solventului, se purifică prin cromatografie HPLC preparativă pe o coloană Vydac C18, utilizând gradientul de 0-50% AXN conținând 0,1% TFA timp de peste 60 de min, cu un debit de 20 ml pe min. Se izolează două componente majore. Componenta A este ciclo ((DTPA-D-Lys)-NMeArg-Gly-Asp-Mamb).MS:979,1 (M+H⁺).

Exemplul 7. Conjugatul compusului (Ciclo-(D-LYs-NMeArg-Gly-Asp-Mamb))2DTPA.

Componentul B din sinteza descrisă în exemplul 6 este (Ciclo-(D-LYs-NMeArgGly-Asp-Mamb))2-DTPA.MS:1565,4 (M⁺).

Secțiunea B. Compuși radiomarcați. Marcare directă

Exemplul 8. Compusul ciclo-((¹²⁵l)D-Tyr-NMeArg-Gly-Asp-Mamb).

Intr-o fiolă de 5 ml, se adaugă 22 mCi (45 pl) soluție apoasă de Na¹²⁵l, 100 pl 0,5 fosfat tampon 0,5 M la pH=7,5, 4,5 μΙ 1N Hcl, 75 μg din compusul intermediar ciclic ciclo-(D-Tyr-NMeArg-Gly-Asp-Mamb) dizolvat în 75 pl 0,1% TFA soluție apoasă și 50 pg cloramină dizolvată în 50 μΙ apă. Amestecul de reacție este lăsat să reacționeze timp de 1 min după care se adaugă 50 pg metabisulfit de sodiu dizolvat în apă. Produsul este purificat prin HPLC preparativ (coloană Zorbax-Rx C₁₈, cu debit de 1 ml pe min, gradient de la 100% A la 100% B timp de peste 30 de min; solventul A=0,1% TFA în apă. Solventul B=40% etanol în A. produsul are timpul de retenție de 30 de min.

Exemplul 9. Compusul ((¹²⁵l)N-3-(4-hidroxifenil)propionil-ciclo-(O-Lys-NMeArg Gly-Asp-Mamb).

RO 114895 Bl

La o fiolă de 5 ml, se aduc 11,4 mCi (25 pl] soluție apoasă de Na ¹²⁵l, 100 pl 0,5 M tampon fosfat la pH=7,5, 4,5 pl HCI 1N, 50 pg din compusul ciclic cu linker modificat (N-3-(4-hidroxifenil)propionil]-ciclo-(D-Tyr-NMeArg-Gly-Asp-Mamb) dizolvat în 7050 50 pl 0,1% soluție apoasă TFA și 50 pg cloramină T dizolvată în 50 pl apă. Amestecul de reacție este lăsat să reacționeze timp de 1 min, apoi se adaugă 50 pg metabisulfit de sodiu dizolvat în apă. Produsul este purificat prin HPLC preparativă, utilizând condițiile descrise în exemplul 10. Produsul are un timp de retenție de 32 min.

7055

Marcarea indirectă

Exemplul 10. Compusul ^99mTcO (MAMAJ-cicloȚD-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb) (5-Aca)).

Partea A. Deprotejarea. Grupele de protecție tritil pe reactivul descris în exemplul 1, sunt îndepărtate; într-o fiolă de separare curată, de 10 cm³, se adaugă 7060 reactivul și 0,1 ml acid trifluoracetic (TFA) produsul solid dizolvat duce la obținerea unei soluții galbene.

Partea B. Sinteza compusului ^99mTc-glucoheptonat. O fiolă de Glucosan® este reconstituită cu 1,0 ml de Milli-Q H₂0. Se adaugă apoi soluția (0,2 ml soluție se îndepărtează) în fiola de 10 cm³, curată urmată de ~ 200 mCi ^99mTcO4'. Reacția are loc 7065 la temperatura camerei timp de 20 de min.

Partea C. Sinteza compusului ^99mTcO (MAMA)-ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-AspMamb (5-Aca)). La soluția reactivului deprotejat din partea A, se adaugă 0,2 ml soluție 5N de hidroxid de sodiu și 0,4 ml de soluție tampon fosfat 0,2 M pentru a atinge pHul cu valoarea 6. 7070

Această soluție este adăugată imediat la fiola cu soluția de ^99mTc-glucoheptonat, concentrată și încălzită la 100°Ctimp de 15 min. După răcire timp de 2 min, se analizează 20 pl de soluție, prin HPLC utilizând metoda 1(vezi tabelul 1).

Exemplul 11. Compusul ^99mTcO (MAMA)-ciclo-(D-Lys-NMeArg-Gly-Asp-Mamb).

Partea A. Deprotejarea. Grupele de protecție tritil la reactivul descris în exem- 7075 piui 2 sunt îndepărtate: pentru separare se utilizează o fiolă de 10 cm³ curată la care se adaugă reactivul și 0,1 ml de acid trifluoracetic (TFA). Produsul solid este dizolvat pentru a se obține astfel o soluție galbenă.

Partea B. Sinteza compusului ^99mTcO (MAMA)-ciclo-(D-Lys-NMeArg-Gly-Asp- Mamb). La o soluție a reactivului deprotejat din partea A se adaugă 0,2 ml soluție 5 7080 N hidroxid de sodiu și 0,4 ml de 0,2 M fosfat tampon pentru pH=6. PH-ul este măsurat apoi și ajustat la valoarea 6. Această soluție este imediat adăugată la fiola cu soluția de ^99mTc-glucoheptonat, generată așa cum s-a descris în exemplul 11, partea B, soluția este concentrată și încălzită la 100°C timp de 15 min. După răcire timp de 2 min, 20 pl din soluție se analizează prin HPLC prin metoda 1. (tabelul 1) 7085

Exemplul 12. Compusul ^99mTc (tricină)2-ciclo(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb (hidrazino-nicotinil-5-Aca)).

La o soluție de 70 mg tricină în 1,0 ml de apă, se adaugă 0,05 ml 1,0 M soluție de hidroxid de sodiu pentru a se ajunge la pH=7. Se adaugă apoi 0,1 ...1,0 ml de ^mTc04-în soluție salină (10...100 mCi), apoi 10 pg din reactivul descris în 7090 exemplul 3, dizolvat în 100 pl de acid clorhidric 0,1 N și 100 pg de clorură de staniu SnCI₂.2H₂0 dizolvată în 0,1 acid clorhidric 0,1 N. Reacția se desfășoară la temperatura camerei timp de 45 de min. Produsul este analizat prin HPLC, utilizând metoda 1 și prin cromatografie în strat subțire TLC, utilizând metoda 2 (vezi tabelul 1).

Exemplul 13. Compusul ^mTc(EDDA)-Ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb(hidra 7095

-zinonicotinil-5-Aca).

RO 114895 Bl

7100

7105

7110

7115

7120

7125

7135

La o soluție de 10 mg de acid etilendiamino-N.N’-diacetic (EDDA) într-un ml de apă, se adaugă 0,05 ml hidroxid de sodiu 1,0 N pentru a se ojunge la pH=7. Se adaugă apoi 50 pg din reactivul descris în exemplul 3, dizolvat în 100 pl acid clorhidric 0,1 N și 100 pg SnCI₂.2H₂0 dizolvat în acid clorhidric 0.1 N. Reacția se desfășoară la temperatura camerei timp de 45 de min. Produsul este analizat prin HPLC utilizând metoda 1 și prin cromatografie în strat subțire TLC, utilizând metoda 2 (vezi tabelul 1).

Exemplul 14. Compusul ^99mTc (tricina)2-ciclo(D-Abu-NMeArg-Gly-Asp-Mamb (hidrazino-nicotinil-5-Aca)].

La o soluție de 70 mg de tricină într-un ml de apă, se adaugă 0,05 ml de hidroxid de sodiu 0,1 N pentru a se ajunge la pH=7. Se mai adaugă 0,1 ...1,0 ml de ^99mTcO₄4n soluție salină (10... 100 mCi), apoi 10 pg din reactivul descris în exemplul 4 dizolvat în 100 pl acid clorhidric 0,1N și 100 pg de clorură de staniu SnCI₂.2H₂0 dizolvată în acid clorhidric 0,1N.

Reacția se desfășoară la temperatura camerei timp de 45 de min.

Produsul este analizat prin HPLC, utilizând metoda 1 și prin TLC, utilizând metoda 2 (vezi tabelul 1).

Exemplul 15. Compusul ^99mTc (tricină) 2-ciclo(D-Lys-NMeArg-Gly-Asp-Mamb (hidrazino-nicotinil-5-Aca).

La o soluție de 70 mg de tricină într-un ml de apă se adaugă 0,05 ml soluție de hidroxid de sodiu 1,0 N pentru a ajunge la pH=7. Se mai adaugă 0,1 ...1,0 ml de ^mTc0₄în soluție salină (10... 100 mCi) apoi 10 pg din reactivul descris în exemplul 5, dizolvat în 100 pl de acid clorhidric 0,1 N și 100 pg de SnCI₂.2H₂0 dizolvat în acid clorhidric 0,1 N.

Reacția se desfășoară la temperatura camerei timp de 45 de min. Produsul este analizat prin HPLC, utilizând metoda 1 și prin TLC, utilizând metoda 2 (vezi tabelul 1).

Tabelul 1

7130

Date analitice și randamente pentru reactivi marcați ^99mTc

	HPLC Timp de reacție min	Randament %
Exemplul 10	204	66
Exemplul 11	196	95
Exemplul 12	134	95
Exemplul 13	115	60
Exemplul 14	115	97
Exemplul 15	88	90

Exemplul 16. Compusul ciclo-((¹¹¹ln-DTPA-D-Lys]-NMeArg-Gly-Asp-Mamb] pl de ¹¹¹ln CI₃-(-100mCi/ml în 0,05 M HCI) obținuți din produsele DuPont-NEM, Billerica, MA, se combină cu un volum egal de acetat de amoniu 1,0 M proaspăt preparat. După aproximativ 5 min, 0,1 ...1 mg din reactivul descris în exemplul 6 dizolvat în 0,25 ml apă, se adaugă în amestecul de reacție. Reacția este desfășurată la temperatura camerei timp de 30 de min. Produsul este analizat prin HPLC prin metoda 3.

Exemplul 17. Compusul ¹¹¹ln-DTPA-[ciclo-(D-NMeArg-Gly-Asp-Mamb)]₂.

7140

RO 114895 Bl

La 0,5 ml soluție a reactivului descris în exemplul 7, în apă (0,8 mg/1 ml) se adaugă ¹¹¹ln CL₃ ( ~3 mCi) în 0,5 ml de soluție NH₄0Ac 1N. Amestecul de reacție este lăsat în repaus la temperatura camerei timp de 30 de min, apoi se analizează prin HPLC, utilizând metoda 3 (vezi tabelul 2). 7145

Tabelul 2

Date analitice și randamente pentru reactivii marcați¹¹¹ In

	HPLC Timp de retenție min	Randament %
Exemplul 16	133	97
Exemplul 17	145	98

Secțiunea C. Reactivi marcati ⁹⁹ⁿⁱTc cu ajutorul pre-chelatilor.

Reactivi marcați ^99mTc descriși în aceste exemple sunt sintetizați utilizând metoda prechelaților. Metoda prechelaților cuprinde fazele: (1) chelarea ^99mTc cu un chelator, (2) activarea grupării carboxilice necoordonate pe complexul rezultat prin forma- 7155 rea esterului tetrafluorfenilic (TEP) și (3) conjugarea complexului ester-ΤΕΡ prin formarea unei legături amidice cu compusul intermediar ciclic sau cu compusul ciclic cu linker modificat.

Exemplul 18. Compusul ciclo-((^99m TcO(mapt)-D-Lys)-NMeArg-Gly-Asp-Mamb).

Partea A. Chelarea ^99mTc. Intr-o fiolă curată de 10 cm³ se adaugă 0,35 ml Bz- 7160 mapt (3,0 mg/ml hidroxid de sodiu 1N) 0,10 ml SnCI2.2H20 (10 mg/ml în acid clorhidric 1N) și 200 mCi ^99mTcO4- în soluție salină. Fiola este fixată și plasată într-o baie cu apă la 100°C timp de 25 de min. După răcire timp de -2 min, 10 pl de soluție este analizată prin HPLC, utilizând metoda 1.

Partea B. Activarea. La o soluție din partea A, se aduc 0,3 ml de fosfat de 7165 sodiu 0,5 M la pH=6, 0,3 ml de 2,3,5,6-tetrafluorfenol (100 mg/ml în acetonitril de 90%), 0,3 ml de 1-(3-dimetilamino-propil)-3-etil-carbodiimida (100 mg per ml acetonitril 90%) și -0,1 ml acid clorhidric 1N. pH-ul este ajustat dacă este necesar, la 6. Fiola este fixată și încălzită 25 min la temperatura de 40°C.

După răcire - 2 min, 20 μΙ de soluție este analizată prin HPLC, utilizând metoda 7170

1.

Partea C. Conjugarea. 1,0...2,5 mg din compusul ciclic intermediar Ciclo-(DLys-NMeArg-Gly-Asp-Mamb) se dizolvă în 0,3 ml fosfat tampon 0,5 M la pH = 9 și se adaugă la soluția preparată în partea B. Utilizând hidroxid de sodiu 1N, pH-ul este ajustat la valoarea 9. Amestecul de reacție este încălzit la 40°C timp de 30 de min. 7175 După răcire timp de 2 min, se iau 25 μΙ de soluție și se analizează prin HPLC, utilizând metoda 1 (vezi tabelul 3).

Exemplul 19. Compusul ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb) (^99mTcO (mapt)) -5-{Aca)).

1,0...2,5 mg din compusul ciclic cu linker modificat ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly- 7180 Asp-Mamb(5-Aca)) se dizolvă în 0,3 ml de fosfat tampon 0,3 ml 0,5 M la pH = 9 și se adaugă la soluția din exemplul 18, partea B. Utilizând hidroxid de sodiu 1N. pH-ul este ajustat la valoarea 9. Amestecul de reacție este încălzit la temperatura de 40°C timp de 30 de min. După răcire timp de 2 min, se prelevează o probă de 20 μΙ care se analizează prin HPLC, utilizând metoda 1 (vezi tabelul 3). 7185

Exemplul 20. Compusul ciclo-(D-Abu-NMeArg-Gly-Asp-Marnb((^99mTcO (mapt)-5Aca)).

1,0...2,5 mg din compusul ciclic cu linker modificat ciclo-(D-Abu-NMeArg-GlyRO 114895 Bl

Asp-Mamb(5-Aca) sunt dizolvate în 0,3 ml de fosfat tampon 0,5 M la pH=9 și se adaugă la soluția din exemplul 18, partea B. Utilizând soluția de hidroxid de sodiu 1N, se ajustează pH-ul la valoarea 9. Amestecul de reacție este apoi încălzit la 40°C, timp de 30 de min. După 2 min de răcire, se prelevează 25 pl din soluție care se analizează prin HPLC, utilizând metoda 1. (Vezi tabelul 3).

Exemplul 21. Compusul ciclo(((^99mTcO(mapt)]-5-Aca)D-Lys)-NMeArg-Gly-AspMamb).

Se utilizează 1,0...2,5 mg din compusul ciclic cu linker modificat ciclo-(5-Aca)DLys-NMeArg-Gly-Asp-Mamb) se dizolvă în 0,3 ml de fosfat tampon 0,5 M la pH=9 și se adaugă la o soluție preparativă ca în exemplul 18 partea B. Utilizând hidroxid de sodiu 1N pH-ul se ajustează la 9. Amestecul de reacție este încălzit la 40°C timp de 30 de min. După răcire două min, se prelevează 25 pl de soluție care se analizează prin HPLC, utilizând metoda 1 (vezi tabelul 3).

Exemplul 22. Compusul ciclo-(((^99mTcO(MeMAG2gaba)-D-Lys)-NMeArg-Gly-AspMamb).

Partea A. Chelatarea. Intr-o fiolă de 10 ml capacitate, se adaugă 100...250 mCi ^99mTc0₄- în soluție salină 1,0 ml, apoi 1,0 ml soluție de Bz-MeMAG2gaba (1 mg/1 ml în fosfat tampon 0,5 M la pH=12], după care se adaugă o soluție de 0,15...0,20 ml SnCI₂.2H₂0 (15 mg/3 ml în acid clorhidric 1N). pH -ul este ajustat la valoarea 11 și amestecul de reacție este încălzit timp de 30 de min la 100°C. Soluția este analizată prin HPLC, utilizând metoda 1.

Partea B. Activarea. La soluția din partea A, se adaugă 0,2 ml acid clorhidric 1N, 0,5 ml soluție de tetrafluorfenol (100 mg/ml în CH₃Cn 90%] și 0,5 ml de soluție (1-[3-dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimidă clorură) (100 mg per ml în CH₃Cn 90%). pH-ul este ajustat la 6,0 și amestecul este încălzit la 50°C timp de 30 de min.

Partea C. Conjugarea. 1,0...2,5 mg din compusul ciclic intermediar ciclo-(DLys-NMeArg-Gly-Asp-Mamb] se dizolvă în 0,3 ml de fosfat tampon 0.5 M la pH=9 și se adaugă la soluția din partea B. Utilizând hidroxid de sodiu 1N se ajustează pH-ul la valoarea 9.

Amestecul de reacție este încălzit la 40°C timp de 30 de min.

După răcire timp de 2 min, se prelevează 25 pl din soluție și se analizează prin HPLC, utilizând metoda 1 (vezi tabelul 3).

Exemplul 23. Compusul ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb([⁹⁹ⁿⁱTcO(MeMAG₂ gaba)] -5-Aca)].

1,0...2,5 mg din compusul ciclic cu linker modificat ciclo-(D-Val-NMeArg-GlyAsp-Mamb (5-Aca)) este dizolvat în 0,3 ml de 0,5 M fosfat tampon la pH=9 și se adaugă la soluția din exemplul 22, partea B. Utilizând hidroxid de sodiu 1N, se ajustează pH-ul la valoarea 9. Amestecul de reacție este încălzit la 40°C timp de 30 de min. După răcire timp de două min, se prelevează 25 pl din soluția care se analizează prin HPLC prin metoda utilizată, 1 (vezi tabelul 3).

Exemplul 24. Compusul ciclo (D-Abu-NMeArg-Gly-Asp-Mamb([^99mTcO(MeMAG₂ gaba)]-5-Aca)J.

1,0...2,5 mg din compusul ciclic cu linker modificat ciclo (D-Abu-NMeArg-GlyAsp-Mamb (5-Aca)) se dizolvă în 0,3 ml fosfat tampon 0,5 M la pH=9 și se adaugă la soluția din exemplul 22, partea B. Utilizând hidroxid de sodiu 1N, pH-ul este ajustat la valoarea 9. Amestecul de reacție este încălzit la 40°C timp de 30 de min. După răcire timp de 2 min, se prelevează 25 pl din soluție care se analizează prin HPLC, utilizând metoda 1 (vezi tabelul 3).

Exemplul 25. Compusul ciclo-((^99mTcO(IVIAG]3)-D-Lys)-NIVIeArg-Gly-Asp-Mamb).

RO 114895 Bl

Acest exemplu este sintetizat, urmând procedeul descris în exmplul 22, substituind Bz-MAG₃, ca chelator (vezi tabelul 3).

Exemplul 2G. Compusul ciclo([[^99mTcO(Me-MAG₃] -O-Lys]-NMeArg-Gly-Asp- 7240 Mamb],

Acest exemplu este sintetizat, urmând procedeul descris în exemplul 22, substituind Bz-Me-MAG₃, ca chelator (vezi tabelul 3).

Exemplul 27. Compusul ciclo-(D-Val-NI\/leArg-Gly-Asp-Mamb((^99mTcO(MeMAG₂ ACA))' -5-Aca)). 7245

Compusul rubricat este preparat conform procedeului descris în exemplul 22, substituind Bz-Me-MAG₂-ACA, ca chelator în partea A și utilizând compusul ciclo-{D-ValNMeArg-Gly-Asp-Mamb (5-Aca)), ca compus cilic cu linker modificat în partea C (tabelul 3],

Exemplul 28. Compusul ciclo ((^99mTcO(MABA))-D-Lys))-NMeArg-Gly-Asp-Mamb). 7250

Partea A. Chelarea. Intr-o fiolă de 10 ml, se aduc 50...300 mCi ^99mTc0₄în 0,5 ml soluție salină, urmată de 0,5 ml soluție Bz-MABA (1 mg/1 ml în 0,5 M fosfat tapon la pH=12) și 0,15 ml de soluție Na₂S₂0₄ (5 mg/ml în 0,5 M fosfat tampon la pH=11,5); pH-ul este ajustat la 10...12, utilizând hidroxid de sodiu 1N și amestecul este încălzit la 100°C timp de 30 de min, apoi este analizat prin HPLC utilizând 7255 metoda 1.

Partea B. Activarea. La o soluție preparată în partea A, se adaugă 0,2 ml de acid clorhidric 1N, 0,5 ml soluție TEP (50 mg/0,5 ml în CH₃CN 90%), și 0,5 ml soluție DCI (50 mg în 0,5 ml în 90% CH₃CN). pH-ul este ajustat la valoarea 6 dacă este necesar și amestecul de reacție este încălzit la 45...50°C timp de 30 de min, apoi 7260 este analizat prin HPLC, utilizând metoda 1.

Partea C. Conjugarea. La o soluție preparată în partea B, se adaugă 2-3 mg din compusul intermediar ciclic ciclo-(D-Lys-NI\/leArg-Gly-Asp-Mamb) dizolvat în 0,5 ml 0,5 M fosfat tampon la pH=9 și pH-ul este ajustat la 9,5...10. Soluția este încălzită la 50°C timp de 30 de min, apoi se analizează prin HPLC, utilizând metoda 1 (tabelul 7265 3).

Exemplul 29. Compusul ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb)^99mTcO(MABA)-5Aca).

Compusul din titlu este sintetizat, urmând procedeul descris în exemplul 28, substituind compusul ciclic cu linker modificat CicloȚD-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb (5- 7270 Aca)) cu compusul ciclic intermediar cicloȚD-Lys-NMeArg-Gly-Asp-Mamb) conform procedurii din partea C.

Exemplul 30. Compusul ciclo-(D-Abu-NMeArg-Gly-Asp-Mamb((^99mTcC(MABA)-5Aca)).

Compusul din titlu este sintetizat, urmând procedeul descris în exemplul 28, 7275 substituind compusul ciclic modificat linker ciclo (D-Abu-NMeArg-Gly-Asp-Mamb (5Aca)) cu compusul intermediar ciclic ciclo-(D-Lys-NMeArg-Gly-Asp-Mamb) conform procedurii din partea C.

Exemplul 31. Compusul ciclo-((^99mTcO(MA-MAMA))-D-Lys-NMeArg-Gla-AspMamb). 7280

Partea A. Deprotejarea. Grupele tritil de chelatorul MA-MAMA sunt îndepărtate prin dizolvarea a 6 mg într-un ml acid trifluoracetic anhidru (TFA). Soluția galbenă rezultată este lăsată în repaus la temperatura camerei timp de 5 min și 0,5 ml de trietilsilan se adaugă la soluția galbenă, pentru a se obține un amestec clar, format din două straturi. Substanțele volatile sunt îndepărtate sub presiune redusă, obținând 7285 un reziduu alb.

RO 114895 Bl

7290

7295

7300

J)

7305

7310

7315

7325

Partea B. Hidroliză esterului etilic. La reziduul alb obținut în partea A, se adaugă 0,5 ml soluție de hidroxid de sodiu 5N și 1 ml de tetrahidrofuran. Amestecul este încălzit în baia de apă la 100°C timp de 5 min, în care timp majoritatea tetrahidrofuranului este evaporat. La amestecul de reacție, se adaugă 3 ml de 0,5 M fosfat tampon la pH=11,5. pH-ul este ajustat la 10...12 și se adaugă apoi 15...30 mg de ditionit de sodiu. Amestecul este filtrat și volumul total este ajustat la pH=11,5, utilizând fosfat tampon 6 ml 0,5 M.

Partea C. Chelatarea. La o fiolă de 10 ml, se aduce 50...150 mCi ^mTc0₄în 0,5 ml soluție salină, urmată de 0,5 ml soluție ligand preparată în partea B. pH-ul este ajustat la 10...12, utilizând o soluție de hidroxid de sodiu 1N și amestecul este încălzit timp de 30 min la 100°C, apoi este analizat prin HPLC, utilizând metoda 1.

Partea D. Activarea. La soluția preparată în partea C, se aduc 0,2 ml acid clorhidric 1N 0,5 ml soluție TFP (50 mg/0,5 ml CH₃CN 90%) și 0,5 ml soluție DCI (50 mg în 0,5 ml CH₃CN 90%). pH-ul este ajustat la valoarea 6, dacă este necesar, și amestecul este încălzit la 45...50°C timp de 30 de min și apoi se analizează prin HPLC, utilizând metoda 1.

Partea E. Conjugarea. La soluția din partea D, se adaugă 2,5 mg din compusul intermediar ciclic ciclo (D-Lys-NMeArg-Gly-Asp-Mamb) dizolvat în 0,5 ml fosfat tampon 0,5 M la pH=9 și pH-ul este ajustat apoi la valoarea 9,5...10. După încălzire la 50°C timp de 30 de min, soluția este analizată prin HPLC, utilizând metoda 1.

Exemplul 32. Compusul ciclo(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb ([^99mTcO(MAMAMA)]-5-Aca)).

Compusul din titlu este sintetizat, urmând procedeul descris în exemplul 31, substituind compusul ciclic cu linker modificat ciclo-(D-Val-NMeArg-Gly-Asp-Mamb(5Aca) cu compusul intemediar ciclic ciclo-(D-Lys-NMeArg-Gly-Asp-Mamb) preparat în partea E.

Tabelul 3

7320

7330

Date analitice și randamente pentru reactivii marcați ^99mTc

	HPLC Timpul de retenție Min	Randament%
Exemplul 18	150	60
Exemplul 19	162	45
Exemplul 20	153	35
Exemplul 21	155	55
Exemplul 22	143	44
Exemplul 23	155	34
Exemplul 24	145	70
Exemplul 25	132	50
Exemplul 26	130	55
Exemplul 27	143	40
Exemplul 28	182	10
Exemplul 29	191	22
Exemplul 30	193	22
Exemplul 31	148	23
Exemplul 32	162	34

RO 114895 Bl

Metodele analitice

7335

HPLC Metoda 1

Coloană Vydac C18, 250 mmx 4,6 mm, 300 Â dimensiunea porului Solventul A: mM fosfat de sodiu, pH=6,0 Solventul B: 100% acetonitril Gradient:

0% B O'

30% B 15'

75% B 25'

Debit: 1,0 ml/min

Detectare prin proba cu iodură de sodiu

TLC Metoda 2

ITLC-SG strip, 1 cm x 7,5 cm dezvoltat în apă-acetonă 1:1 HPLC Metoda 3

Coloană: Vydac C18, 250 mm x 4,6 mm, 300 Â dimensiunea porilor Solventul A: 10 mM fosfat de sodiu, pH=6,0 Solventul B: 75% acetonitril în solventul A Gradient:

5% B O'

5% B 5'

100%B

10'

7340

7345

7350

Debit: 1,0 ml/min

Detectarea prin proba cu iodură de sodiu

Compușii radiomarcați, conform prezentei invenții, sunt utilizați ca produse radiofarmaceutice pentru vizualizarea unui trombus care ar putea fi prezent la un pacient cu angină instabilă, infarct miocardic, atacul ischemic tranzitoriu, strok, atero- 7355 scleroză, diabet, tromboflebita, embolia pulmonară sau valvele protetice cardiace, cum ar fi de exemplu valvele inimii și astfel pot fi utilizați pentru diagnosticul unor tulburări prezente sau potențiale. Pacientul poate fi orice tip de mamifer, dar de preferință omul. Compușii radiomarcați pot fi utilizați ca atare sau pot fi utilizați sub forma unei compoziții cu un suport acceptabil radiofarmaceutic și/sau în combinație cu alți agenți 7360 de diagnostic sau terapeutici. Astfel de substanțe suport radiofarmaceutice convenabile și cantități convenabile ale acestora sunt cunoscute bine în literatura de specialitate, de exemplu Remington’s Pharmaceutical Sciences, Gennaro, A.R. ed. Mack Publishing Company, Easton, PA (1985] și The United States Pharmacopia, The National Formulary, 22 nd Revision, Mack Printing Company, Easton, PA (1990], 7365 textele standard de referință în domeniul farmaceutic. Alte materiale pot fi adăugate, ca fiind convenabile, pentru stabilirea compoziției, așa cum este recunoscut în literatură, incluzând agenții antioxidanți, cum ar fi de exemplu bisulfitul de sodiu, sulfitul de sodiu, acidul ascorbic, acidul gentisic sau acidul citric (sau sărurile lor) sau acidul sodiu etilendiamino tetraacetic (sodiu EDTA), care sunt cunoscuți în literatură. Aceste 7370 alte materiale cât și cantitățile convenabile de asemenea sunt descrise în Remington’s Pharmaceutical Sciences and The United States Pharmnacopia - The National Formulary, citate mai sus.

Se pot realiza, de asemenea truse(kituri) radiofarmceutice conținând compușii marcați conform invenției. Astfel de truse pot conține compușii marcați în formă 7375 liofilizată sterilă și pot include un container steril al unui lichid de reconstituire acceptabil radiofarmaceutic. Lichidele de reconstituire convenabile sunt descrise în Remington’s Pharmaceutical Sciences and The United States Pharmacopia - The National Formulary citate mai sus. Astfel de truse pot conține alternativ un container steril al compoziției compușilor radiomarcați, conform prezentei invenții. Astfel de 7380

RO 114895 Bl truse pot include de asemenea, dacă se dorește, alte componente ale kiturilor convenționale, ca de exemplu unul sau mai multe substanțe suport, una sau mai multe fiole adiționale pentru omogenizare. Instrucțiunile, fie ca inserte, fie ca marcaje, indicând cantitățile de compuși marcați și componentele și protocoalele pentru administrarea compușilor, pot fi de asemenea incluse în kituri. Sterilizarea containerele și orice materiale incluse în kituri și liofilizarea (se referă așadar la uscare prin congelare) pentru compușii marcați conform prezentei invenții se pot efectua utilizând metodologii convenabile de sterilizare și liofilizare, cunoscute în literatura de sepcialitate.

Pentru efectuarea metodei conform invențiie, compușii radiomarcați sunt în general administrați intravenos, cu ajutorul bolusului injectabil: așadar aceștia pot fi administrați prin orice mijloace care produc contactul compușilor cu plachetele.

Cantități convenabile pentru administrare, adecvate, vor fi incluse în prezenta invenție. Dozajul administrat, desigur va fi variabil dependent de factori cunoscuți pentru administrarea compușilor speciali, ca vârsta, starea sănătății și greutatea sau natura și extinderea oricăror simptome experimentate de pacient, cantitatea de radiomarcare, radionuclida specială utilizată ca marker, gradul de clearanță a compușilor radiomarcați din sânge.

Gradele acceptabile pentru administrarea materialelor radiomarcate sunt în tabelele de exemplu din The Physicians Desk Peference (PDP] for Nuclear Medicîne, published by Medical Exonomics Company, ca și textul referință. O discuție a câtorva considerații menționate mai sus este prevăzută în Ecalman et al., Nuci. Med.,voi. 209, pag. 350...357 (1979). Ca informare generală, gradul de dozare al compușilor radiomarcați conform prezentei invenții și poate fi cuprins între aproximativ 1 și aproximativ 40 mCi.

Odată ce compușii radiomarcați, conform prezentei invenții, sunt administrați, prezența trombilor poate fi vizualizată utilizând sistemul de vizualizare radioscintografic standard, cum ar fi de exemplu, o cameră gamma sau un dispozitiv tomografie calculator pentru detectarea tulburărilor tromboembolitice. Sistemele acestea de vizualizare sunt bine cunoscute în literatura de specialitate și sunt discutate de exemplu de Macovscki A., Medical Imaging Systems, Information and Systems Science Series, Kailath, T ed.Prentice-Hall, Inc. Englewood Cliffs, NJ (1983). Sunt preferați în special (SPECT) tomografia computerizată cu emisie de un singur foton și (PET) tomografia de emisie cu pozitroni. In mod specific, vizualizarea este realizată prin scanarea întregului pacient sau scanarea regiunii speciale a pacientului suspendat ca având o formațiune trombus, utilizând sistemul radioscintografic și detectarea semnalului radioizotopic. Semnalul detectat este apoi transformat în imaginea trombusului, prin acest sistem. Imaginile rezultante pot fi citite de către un observator cu experiență, cum ar fi de exemplu un fizician de medicină nucleară. Procedeul menționat de referă așadar la “vizualizarea” pacientului. In general, vizualizarea este efectuată timp de aproximativ 1 min până la aproximativ 48 h după administrarea compusului radiomarcat conform prezentei invenții. Coordonarea în timp precisă a imaginii va depinde de diferiți factori, cum ar fi, de exemplu, utilizarea timpului de înjumătățire al radioizotopului folosit și gradul de clearanță al compusului administrat este asemănător în mod clar cu cel menționat în literatura de specialitate. De preferință, vizualizarea este efectuată între aproximativ 1 min și aproximativ 4 h după administrare.

Avantajul utilizării compușilor radiomarcați conform prezentei invenții, care au proprietatea de localizare specifică și cu o afinitate ridicată pentru trombi, pentru a detecta prezența trombilor și/sau pentru diagnosticarea tulburărilor tromboembolice la pacient, apare cu relevanță în prezenta descriere de invenție.

RO 114895 Bl

Modul de shunt arteriovenos. Se utilizează câini mongrel adulți de orice sex de 7430 9 la 13 kg, care sunt anesteziați cu pentobarbital sodic (35 mg/kg, cu administrare intravenoasă) și care se ventilează cu aer din cameră printr-un tub endotracheal (12 bătăi pe min, 25 ml per kg). Pentru determinarea presiunii arteriale, artera carotidă stângă este canulată cu cateterul de polietilen umplut cu soluție salină (PE-240) și conectat la un transductor de presiune Staham (P23ID), (Oxnard, CA). Presiunea 7435 sanghină arterială medie este determinată prin dampingul presiunii cu semnal pulsatil.

Ritmul inimii este monitorizat utilizând un cardiotachometru (Biotech, Grass Quicy,

MA) activat de la electrocardiograma principală II generată de venele brațului. Vena jugulară este canulată (PE-240) pentru administrarea medicamentului. Ambele artere femurale și venele femurale sunt canulate cu silicon tratat (Sigmacote, Sigma 7440 Chemical Co. St.Louis, MO), prin umplerea tuburilor de polietilenă cu soluție salină (PE200) și conectarea cu o secțiune de 5 cm în tuburile de silicon tratate (PE-240) pentru formarea shunturilor arterio-venoase extracorporale (A-V). Puterea shuntului este monitorizată utilizând sistemul debitului doppler (model VF-1, Crystal Biotech Inc.Hopkinton, MA) și debitul probei (2-2,3 mmi, Titronisc Med.lnst, lowa City, IA], 7445 plasat aproximativ la locusul shuntului. Toți parametrii sunt monitorizați continuu pe poligraful recorder (model 7G Grass) la o viteză a hârtiei de 10 mm pe min sau 25 mm/s. In completarea perioadei de stabilizare post chirurgicală de 15 min, se formează un trombus oclusiv prin introducerea suprafeței trombogenice (4-0 fir de mătase pentru legătură se utilizează în lungime de 5 cm, Ethicon Inc. Simerville, NJ] 7450 pentru a fi adus de la un shunt la altul, în scopul de a servi drept control. Se utilizează două perioade de shunt consecutiv de 1 h, cu agentul de testare administrat sub formă de infuzie timp de peste 5 min, începând cu 5 min înainte de inserția suprafeței trombogenice. La sfârșitul fiecărei perioade de shunt de 1 h, firul de mătase este îndepărtat cu atenție și cântărit, determinându-se procentul de încorporare, acesta 7455 fiind bine calculat. Greutatea trombusului este calculată prin scăderea greutății firului de mătase înainte de a se plasa în test, din greutatea totală a firului de mătase după îndepărtare din shunt. Rezultatele sunt prezentate în tabelul 4. Sângele arterial este extras înainte de primul shunt și la fiecare 30 de min apoi, pentru determinarea clearanței sanghine, pentru calcularea cantității totale sanghine în care are loc 7460 agregarea plachetară indusă de colagen, degranularea plachetelor induse de trombină (eliberarea plachetelor ATP], timpul de protrombină și calculul plachetelor. Modelul timpului de sângerare este de asemenea realizat la intervale de 30 de min.

Modelul de tromboză la vena adâncă la canin. Acest model încorporează triada evenimentelor (stadiul de hipercoagulabilitate, perioada de stază, zone cu efort slab), 7465 acestea fiind esențiale pentru fomarea trombusului cu dezvoltare bogată, activ în zona de fibrină a venei. Procedeul are loc astfel :cCâinele mongrel adult de orice sex (9...13 kilograme) este anesteziat cu fenobarbital sodic (35 mg/kg, pe cale intravenoasă și ventilat în aerul din cameră prin tubul, endotraheal (12 bătăi pe min, 25 ml/kg).

Pentru determinarea presiunii arteriale, artera femurală dreaptă este canulată cu 7470 cateter de polietilen plin cu soluție salină (PE-240] și care se concectează la un transductor de presiune Statham (P23ID): Oxnard, CA). Presiunea arterială medie este determinată prin dampingul semnalat presiunii pulsatile. Ritmul inimii este monitorizat utilizând un cardiotahometru (Bioch, Grass Quincy, MA) activat de la electrocardiograma generată la vena II, la venele brațului. Vena femurală dreaptă este 7475 canulată (PE-240) pentru administrarea medicamentului. Un segment de 5 cm din ambele vene jugulare este izolat, eliberat de fascie și circumscris cu sutura de mătase. Proba microtermister este adusă pe vasul care servește ca o măsură indirectă

RO 114895 Bl

7480

7485 a debitului venos. Un cateter tip balon pentru embolectomie este utilizat pentru a induce perioada de 15 min de stază, utilizând stadiul de hipercoagulabilitate indus în acest timp, și apoi se folosește 5U trombină (American Dioagnosticia, Greenwich TC) administrat în segmentul ocluzionat. După 15 min, debitul este restabilit prin micșorarea balonului. Agentul este apoi infuzat în timpul primelor 5 min de reflux și gradul de încorporare monitorizat se controlează prin scintigrafie gamma. Rezultatele exemplelor 12 și 19 sunt prezentate în fig. 1.

Exemplul 33.

Tabelul 4

7490

II

7495

7500

Datele experimentale din modelul shunt arteriovenos (Media ± SEM, T/B = trombus/mediu)

Exemplul	Condiții venoase		Condiții arteriale
	asimilare (%id/g)	T/B raport	asimilare (%iD/g)	raport T/B
8	0,25+0,15	19±9	1,81 ±0,18	173±22
9	0,45±9,11	8±3	2,60±0,05	44±4
10	0,16±0,02	7±0,02	5,00±0,51	221±16
12	0,46±0,19	7,0±2	6,15±0,66	111±6
13	1,64±1,32	33±27	8,50±0,20	163±14
16	8	14	0,95±0,29	128±28
18	0,04±0,01	13±3	0,47±0,12	147±44
19	0,58±0,22	13±4	5,75±1,28	142±24
21	0,06±0,03	4,0±2	1,6±O,12	11,3±1
22	0,045±0,02	7±4	1,28±0,44	158±5
23	0,21 ±0,05	7±0,4	5,41 ±0,70	195±39
32	0	0	74	102.

7505

7510

7515

Analiza agregării plachetare. Sângele canin este colectat în tuburi Vacutainer citrați, de 1O ml. Sângele este centrifugat timp de 15 min la 150 x g la temperatura camerei și plasma bogată plachetar (PRP) este îndepărtată. Sângele rămas este centrifugat timp de 15 min la 1500 x g la temperatura camerei și plasma săracă plachetar este îndepărtată (PPP). Probele sunt analizate pe agregometru (PAP-4 Platelet Aggregation Profiler), utilizând PPP ca blank (transmitanță 100%). Se adaugă 200 pl de PRP, la fiecare tub test micro și transmitanța este stabilită la 0%. Se adaugă apoi 20 pl din fiecare agonist (ADP, colagen, arahidonat, epinefrină, trombin), la fiecare tub și profilele de agregare sunt înregistrare (% transmitanță în raport cu timpul). Rezultatele sunt exprimate ca procente de inhibiție de agregare a plachetelor, indusă de agonist. Pentru evaluarea IC₅₀, compușii de testare sunt adăugați în diferite concentrații înainte de activarea plachetelor.

Analiza legării fibrinoqenului la plachete. Legarea ¹²⁵l-fibrinogenului la plachete este realizată așa cum se descrie de Bennett et al. (1983), Proc. Natl. Acad, Sci.

USA 80; 2417...2422, cu unele modificări, așa cum este descris mai sus PRP uman (h-PRP) este aplicat la o coloană Sepharose pentru purificarea fracțiunilor de plachete.

7520

RO 114895 Bl

Alicoți ai plachetelor (5 x 10⁸ celule) împreună cu clorură de calciu 1 mM se adaugă pentru îndepărtarea celor 96 concavități ale plăcilor înainte de activarea plachetelor purificate din gel, umane (h-GPP). Activarea plachetelor purificate din gel, umane, a fost obținută utilizând ADP, colagen, arahidonat, epinefrină și/sau trombină în prezența ligantului ¹²⁵l-fibrinogen. ¹²⁵l-fibrinogenul legat la plachetele activate a fost sepa- 7525 rat din forma liberă prin centrifugare și apoi este numărat prin calculator gamma.

Pentru evaluarea IC_5O, compușii de testare sunt adăugați la diferite concentrații înainte de activarea plachetelor.

Compușii noi, ciclici, glicoproteinici llb/llla și compușii prezentei invenții pot avea așadar eficacitate trombolitică, adică, sunt capabili de liză (rupere) a chiagurilor san- 7530 ghine cu fibrină bogate în plachete, deja formate și astfel pot fi folositori în tratarea formării trombusului, așa cum s-a evidențiat prin activitatea lor în testele descrise mai jos. Compușii ciclici preferați, conform prezentei invenții, pentru utilizare în tromboliză, vor include acei compuși având valoarea IC^ (adică concentrația molară a compusului ciclic capabil de obținere a lizei la 50% din cheag) de mai puțin de aproxiamtiv 1 mM, 7535 mult mai preferabil valoarea IC₅₀ este mai mică de aproxiamtiv 0,1 mM, chiar mult mai preferabil valoarea IC^ de mai puțin de aproximativ 0,01 mM, mult mai preferabil valoarea IC^ mai puțin decât aproximativ 0,001 mM și mult mai preferabil valoarea IC₅₀ de aproximativ 0,0005 mM.

Determinările IC₅₀ pot fi realizate utilizând analiza standard a trombolizei, așa 7540 cum se descrie mai jos. O altă clasă preferată de compuși trombolitici, conform prezentei invenții, va include acei compuși care au Kd de <100 mM, de preferință <10 nM, mult mai preferabil de 0,1 până la 1,0 nM.

Analiza trombolitică. Sângele venos este obținut din brațul unui donor uman sănătos care este liber de medicamente și liber de aspirină cu cel puțin două săptă- 7545 mâni înainte de colectarea sângelui și se aduce în tuburi Vacutainer citrat de 10 ml. Sângele este centrifugat timp de 15 min la 1500 x g la temperatura camerei și plasma bogată în plachete (PRP) este îndepărtată. Se adaugă apoi la PRP 1 χ 1O³ M de agonist ADP, epinefrină, colagenul, arahidonatul, serotonina sau trombină sau amestecul acestora și PRP se incubează timp de 30 de min. PRP se centrifughează 7550 timp de 12 min la 2500 x g la temperatura camerei. Supernatanul este apoi îndepărtat și plachetele care rămân în tubul de testare sunt resuspendate în plasma săracă în plachete (PPP), care servește ca sursă de plasminogen. Suspensia este apoi analizată pe Counter Coulter (Coulter Electronics, Inc. Hialeah, FL), pentru a determina numărul plachetelor la punctul de timp zero. După obținerea punctului de timp zero, 7555 compușii de testare sunt adăugați la diferite concentrații. Probele de testare sunt luate la diferite puncte de timp și plachetele sunt numărate utilizând Coulter Counter.

Pentru determinarea procentului de liză, numărul plachetelor la punctul de timp următor adiției compusul de testare, este scăzut din numărul plachetelor la punctul de timp zero și numărul rezultat este divizat prin numărul de plachete la punctul de 7560 timp zero. Multiplicând aceste rezultate cu 100, se obține procentajul lizei ciot obținută prin compusul de testare.

Pentru evaluarea IC₅₀, compușii de testare sunt adăugați la diferite concentrații și procentajul lizei produs de compușii de testare este calculat.

Claims (70)

Revendicări

1...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O și în care compusul radiomarcat este selectat dintr-o grupă: ¹²³l, ¹²⁵l, ¹³¹l, ¹⁸F, ¹¹C, ¹³N, ¹⁵0, ⁷⁵Br. 9085

1 ...2 aminoacizi substituiți cu o grupă amino de protecție;

K este un L-izomer al unui aminoacid cu formula;

-N(CH₃)CH(R⁷]C)=0E în care: R⁷ este -{CH₂]₃NHC(=NH](NH₂);

L este -NHCH₂C(=0)- și

M este un izomer D sau un izomer L al unui aminoacid cu structura:

_NR¹⁷-Cn-C(=O)(CH(R⁴) )_q.

L .

R^e , in care q este 1;

R⁴ este H sau CH3; R¹⁷ este H; R⁸ este -C02H, -S0₃H.

1...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O;

un amidoester ciclic de bor în care catena sau ciclul conțin de la 2 la 20 atomi de carbon și opțional, 1...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O.

1. Reactiv pentru prepararea unui produs radiofarmaceutic, caracterizat prin aceea că prezintă formulele generale următoare:

RO 114895 Bl (OL_n)_dC_h; (QJ^-C,, în care d este 1 ...3, cf este 2...20, Ln este o grupă de legătură, C_h este un metal de chelatare și Q este un compus cu formula generală (I):

7570

7575

7580 ι

i

7585

7590

7595

7600

7605

7610

7615 (R²² (R²³

J /

r32

I )C (I) sau o sare a acestuia acceptabilă farmaceutic sau o formă de promedicament a acestuia, în care:

R³¹ este un sistem ciclic carbociclic ^6^14 saturat, parțial saturat sau aromatic, substituit cu O...4 R¹⁰ sau R^10a și care este opțional legat la L,, ; un sistem ciclic heterociclic, opțional substituit cu O...4 R¹⁰ sau R^1Oa și este legat opțional la Lj R³² este selectat dintre; -C=(0)-; -C(=S)-; -S(=0)₂-; -S(=0)-; -P(=Z)(ZR¹³)-; Z este S sau O;

n”și n'sunt independent O...2;

R¹ și R²² sunt independent selectați dintr-una din grupările: hidrogen, alchil 0.,-Cg substituit cu O...2 R¹¹; alchenil C2-C8 substituit cu 0...2 R¹¹; alchinil C2-C₈ substituit cu O...2 R¹¹; cicloalchil C₃-C_1O substituit cu O...2 R¹¹; o legătură la Luării substituit cu O...2 R¹²; un sistem ciclic heterociclic cu 5... 10 membri conținând 1 ...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S și O, acest ciclu heterociclic fiind substituit cu O...2 R¹²;

=0, F, CI, Br, I, -CF₃, -CN--C0₂R¹³, -C(=0)R¹³, -C(=0)N(R¹³)2, -CHO, -CH20R¹³, -OC(=0)R¹³, -0C(=0)0R^13a, OR¹³, -OC(=O)N(R¹³)P, -NR¹³C(=0)R¹³, -NR¹⁴C(=0)R^13a, NR¹³C(=0)N(R¹³]2, -NR¹⁴S02N(R¹³)p ,-NR¹⁴S02R^13a, -S0₃H, -S0₂R^13a, -SR¹³,

-S(=0)R^13a, -S02N(R¹³)2, -N(R¹³)2, -NHC(=NH)NHR¹³, -C(=NH)NHR¹³, =N0R¹³, N02, -C(=0)NH0R¹³, -C(=0)NHNR¹³R^13a, -0CH_PC0₂H, 2-(1-morfolino) etoxi;

R¹ și R²¹ se leagă alternativ pentru a forma un ciclu carbociclic cu 3...7 membri substituiți cu O...2 R¹²;

când n'este 2, radicalii R¹ sau R²¹ pot fi alternativ luați împreună cu atomul de carbon adiacent pentru a forma o legătură directă, deci pentru a forma o legătură dublă sau triplă între acești atomi de carbon;

R²¹ și R²³ sunt independent selectați dintre un atom de hidrogen, un radical alchil (C^ C₄) opțional substituit cu 1...6 atomi de halogen; benzii;

R²² și R²³ pot fi legați alternativ pentru a forma un ciclu carbociclic cu 3...7 membri substituiți cu O...2 R¹²; iar când rf este 2, R²² sau R²³ pot fi luați împreună, alternativ, cu R²² sau R²³ la atomul de carbon adiacent pentru a forma o legătură dublă sau triplă între atomii de carbon adiacenți;

R¹ și R², în care R²¹ este H, pot alternativ, să formeze un ciclu carbociclic cu 5...8 membri, substituit cu O...2 R¹²;

R¹¹ este selectat din una sau mai multe din următoarele grupe:

=0, F, CI, Br, I, -CF₃, -CN, -CO_PR¹³, -C(=O)R¹³, -C(=0)N(R¹³)₂, -CHO, -CH_P0R¹³,

-0C(=0)R¹³, -0C(=0]0R^13a, -OR¹³, -OC(=O)N(R¹³)2, -NR¹³C(=0)R¹³, -NR¹⁴C(=0)0R^13a, NR¹³C(=0)N(R¹³)2, -NR¹⁴S0₂N(R¹³y -NR¹⁴SO,R^13a, -SO^H, -SO,R^13a. -SR¹³, -S(=0)R^13a,

-S0₂N(R¹³)2, -N(R¹³y -NHC(=NH)NHR¹³, -C(=NH)NHR¹³, =N0R¹³, NQ, -C(=0)NH0R¹³,

-C(=0)NHNR¹³R^13a, -0CH₂C0₂H, 2-(1-morfolino)-etoxi, un radical alchil (Ο,-ίΣ^], alchenil

RO 114895 Bl (C₂-C₄), cicloalchil (Cg-CJ, cicloalchilmetil (Cj-QJ, alcoxialchil (k-QJ, cicloalcoxi (Cj-QJ, alchil (C.,-C₄), radicalul alchil fiind substituit cu 1 ...5 grupe selectate dintre: -NR¹³R¹⁴, 7620 -CF₃, N0₂, -SOpR¹³³ sau -S(=0]R^13a, arii substituit cu O...2 R¹², un sistem heterociclic cu 5...10 membri conținând 1...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S și O, acest ciclu heterociclic fiind substituit cu 0...12 R¹²;

R¹² este selectat dintr-una sau mai multe dintre următoarele grupe: fenil, benzii, fenetil, fenoxi, benziloxi, halogen, hidroxi, nitro, ciano, alchil (0.,-CJ, cicloalchil (C3-C6), 7625 cicloalchilmetil (C3-CJ, arilalchil (C7-C10), alcoxi (C^-Cs), -C02R¹³, -C(=0)NH0R^13a, -C(=0]NHN(R¹³}2, =N0R¹³, -BIR³⁴) (R³⁵). cicloalcoxi (C3-CJ, -0C(=0)R13, -C(=0]R¹³, -0C(=0)0R^13a, -OR¹³, -(alchil 0,-CJ-OR¹³, -N(R¹³)2, -0C(=0)N(R¹³)2, -NR¹³C(=0)R¹³, -NR¹³C(=0)0R¹³, -NR¹³C(=0)0R^13a, -NR¹³C(=0)N(R¹³)2, -NR¹³S02N(R¹³]2, -NR¹³S0₂R^13a,

-S0₃H, -S0₂R^13a, -S(=0)R^13a, -SR¹³, -S02N(R¹³)2, alcolxialchil (C₂-CJ, metilendioxi, 7630 etilendioxi, haloalchil (0_η-0₄), haloalcoxi (C.,-C₄), alchilcarboniloxi (0,-CJ, alchilcarbonil (0.,-CJ, alchilcarbonilamino (C.,-C₄), -0CH₂C0₂H, 2-(1-morfolino]etoxi, alchil (C.,-C₄) (radicalul alchil fiind substituit cu -N(R¹³)₂, -CF_a, N0₂ sau -S(=0)(R^13a);

R¹³ este selectat independent dintre: H, alchil (C-,-C₁₀), cicloalchil (C₃-C₁₀), alchilcicloalchil (C₄-C₁₂), arii, -(alchilC^^) arii sau alcoxialchil (C₃-C₁₀); 7635

R^13a este alchil (Ο.,-Ο_ηο), cicloalchil (C3-C₁₀), alchil (C₄-C₁₂) cicloalchil, arii, alchil (C,-C_1O) arij, sau alcoxi (C₃-C_1o)alchil; când cele două grupări R¹³ sunt legate la un singur N, aceste grupări R¹³ pot fi alternativ luate împreună pentru a forma

-(CHJ₂_₅- sau -(CH₂)0(CH₂)-;

R¹⁴ este OH, H, alchil (C.,-C₄) sau benzii; R² este H sau alchil (0.,-CJ; 7640

R¹⁰ și R^10a sunt selectați independent din una sau mai multe dintre grupele următoare:fenil, benzii, fenetil, fenoxi, benziloxi, halogen, hidroxi, nitro, ciano, alchil (0.,-CJ, cicloalchil (C3-CJ, cicloalchil (C3-CJ metil, arilalchil (C7-C10), alcoxi (0.,-CJ, -C02R¹³, -C(=0)N(R¹³)2, -C(=0)NH0R^13a, -C(=0)NHN(R¹³)2, =N0R¹³, -BiFPJfR³⁵), cicloalcoxilCj-QJ, -0C(=0)R¹³, -C(=0)R¹³, -0C(=0)0R^13a, OR¹³, -(C1-C4alchil)-0R¹³ , NIR¹³^, OC(=0)N(R¹³, 7645 -NR¹³C(=0)R¹³, -NR¹³C(=0)0R^13a, -NR¹³C(=O)N(R¹³)2, -NR¹³SO2N(R¹²)2, -NR¹³S0₂R^13a,

-S0₃H, -S0₂R^13a, -S(=0)R^13a, -SR¹³, -S02N(R¹³)2, alchil (C₂-C₆) alcoxi, metilendioxi, etilendioxi, haloalchil (0,-CJ (incluzând -CvFwîn care v = 1 la 3 și w = 1 la (2v + 1]], haloalcoxi (C.,-C₄), alchil (C.,-C₄) carboniloxi, alchil (0,-CJ carbonil, alchil (C₁-C₄) carbonilamino, -OCH₂CO₂H, 2-{1-morfolino)etoxi, alchil (0,-CJ (radicalul alchil fiind 7650 substituit cu -N(R¹³]₂, -CF₃, N0₂ sau -S(=0]R^13a);

J este β-Ala sau un L-izomer sau D-izomer al aminoacidului cu structura:

-N (R³) C (R⁴) (R⁵) C (=0)-, în care:

R³ este H sau alchil (0.,-CJ, R⁴ este H sau alchil (0.,-CJ; R⁵ este selectat dintre: hidrogen,alchil(C.,-CJ substituit cu O...2 R¹¹;alchenil (C₂-C₈) substituit cu O...2 R¹¹; 7655 alchinil (C₂-CJ substituit cu 0...2 R¹¹; cicloalchil (Cg-C^J substituit cu O...2 R¹¹; o legătură la Luării substituit cu O...2 R¹²; un sistem de inel heterociclic cu 5...10 membri conținând 1...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O, acest ciclu heterociclic fiind substituit cu O...2 R¹²;

=0, F, Cl, Br, I, -CF₃, -CN, -C0₂R¹³, -C(=0]R¹³, -C(=0)N(R¹³)₂, -CHO, - CH₂0R¹³, 7660

OC(=0]R¹³, -OC(=0)OR^13a, -OR¹³, -0C(=0)N(R¹³)2, -NR¹³C(=0)R¹³, -NR¹⁴C(=0)0R^13a, -NR¹³C(=0]N(R¹³)p, -NR^SOpNtR¹³^, -NR¹⁴SO,R^3a, -SOjH, -SO,R^3a, -SF?³ , -S(=Q)R^3a . -S02N(R¹³)2, -NfR¹³)^, -NHC(=NH)NHR¹³, -C(=NH]NHR¹³, =N0R¹³, NO,, -C(=0]NH0R¹³ , -C(=0)NHNR¹³R^13a, =N0R¹³, -B(R³⁴)(R³⁵), -0CH₂C0₂H, 2-{1-morfolino] etoxi,

-SC(=NH]NHR¹³, N₃, -Si(CHJ₃, (C.,-C₅ alchil)NHR¹⁶; -(Co-Cg alchilJX; 7665

RO 114895 Bl

-(CH₂)<

în care q este independent O sau 1;

ch₂x

-(CH₂)_mS (O)p' (CH₂)₂X, în care m este 1 sau 2 și p'este O...2; și în care X este definit ca mai sus;

R³ și R⁴ pot fi luați de asemenea împreună pentru a forma;

<CH₂)_nX

-ch₂chch₂~, în care n = O sau 1 și X este;

N (R¹³)R¹ .

R³ și R⁵ pot fi luați alternativ împreună pentru a forma:

-(CH₂)t- sau -CH₂S(0)_p.C(CH3)₂-. în care t= 2...4 și p' = O...2 sau

R⁴ și R⁵ pot fi luați alternativ împreună pentru a forma:

-(CH_a]_u-, în care u = 2...5;

R¹⁶ este selectat dintre: o grupă de protecție amino; 1...2 aminoacizi; 1...2 aminoacizi substituiți cu o grupă de protecție amino;

K este D-izomer sau L-izomer al unui aminoacid cu structura:

-N(R⁶]CH(R⁷]C(=0)- în care:

R⁶ este H sau (C.,-C₈) alchil;

R⁷ este selectat dintre: -{C^-C? alchilJX;

(CH₂) _q-X^ în care fiecare q este independent O...2 și substituția la grupa fenii este în poziția 3 sau 4;

^(CH ) ^{v 2}‘ <5 , în care fiecare q este independent O...2 și substituția la grupa ciclohexil este în poziția 3 sau 4;

-{CH₂)_rnQ-(C₁-C₄ alchil)-Xîn care m este 1 sau 2;

-(CH₂)_mS(0)p’-{C₁-C₄ alchilJ-X, în care m = 1 sau 2 și p’= O, 2; și X este selectat dintre:

RO 114895 Bl .NR¹³

-NK-C*' 7715

N(R¹³)R¹³; __N(R13)r13.

-C(=NH](NH₂); -SC(=NH)-NH₂; -NH-C(=NH)(NHCN);

-NH-C(=NCN)(NH₂); -NH-C(=N-0R¹³)(NH₂);

R⁶ și R⁷ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma; 7720 (CH₂)_nX (CH₂) qCH (CH₂) q , τ_{η cgre} fj_ecare q _est_e independent 1 sau 2 și în care n = o sau 1 și X este -NH₂ sau: 7725 .NR¹³ —NH—C

N(R¹³)R¹³;

7730

L este -Y(CH₂)_VC(=O)-, în care:

Y este NH, N(C.,-C₃ alchil), O sau S și v= 1 sau 2;

M este un izomer D sau un izomer L al unui aminoacid cu structura:

-NR¹⁷-CH-C(=O)I / / do (CH(R⁴) ) q.

R⁸ în care: q’este O...2; R¹⁷ este H, alchil (C.,-C₃);

R^a este selectat dintre: 7740

-C0₂R¹³, -SOaR¹³, -SO^NHR¹⁴, -BfR^XR³⁵], -NHSQ,CF3, -CONHNHSOgCFg, -POfOR¹³^, -P0(0R¹³]R¹³, -SO2NH-heteroaril, acest heteroaril având 5...10 membri și 1...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O, -SO₂NH-heteroaril, acest heteroaril având 5...10 membri și 1...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O, -SO₂NHC0R¹³, -C0NHS02R^13a, -CH2C0NHS0₂R^13a, -NHS0₂NHC0R^13a, 7745

-NHC0NHS0₂R^13a, -S0₂NHC0NHR¹³;

R³⁴ și R³⁵ sunt independent selectați dintre: -OH, -F, -N(R¹³)₂ sau alcoxi (0.,-Cg);

R³⁴ și R³⁵ pot alternativ fi luați împreună pentru a forma: un ester ciclic al borului în care această catenă sau ciclu conține de la 2 la 20 atomi de carbon și opțional, 1 ...4 heteroatomi independent selectați dintre N, S sau O; o amidă de bor ciclică bivalentă 7750 în care această catenă sau ciclu conține de la 2 la 20 atomi de carbon și opțional,

2 și

9055

9060

9065

9070

2, în care q este O sau 1;

8050

RO 114895 Bl

-(CH₂)_rXîn care r este 3...6;

ch₂x ch₂x

-(CHg^SiCHglpX, în care m este 1 sau 2;

- alchil (C₃-C₇) - NH - alchil (Ο,-Οβ)

- alchil- (Cj-C^

0-3

-tCH₂]_m-0- alchil (C^J - NH - alchil (C_rC₆), în care m = 1 sau 2;

-(CH₂)_m-S-alchil (Ο,-CJ - NH - alchil (0,-Q). în care m este 1 sau 2; și X este -NF^ sau -NHC(=NH](NH₂), cu condiția ca X să fie diferit de -NH₂ atunci când r = 4 sau R⁶ și R⁷ sunt alternativ luați împreună pentru a forma;

(CH₂)_nX

-CH₂CH-CH₂- , în care n = 0, 1 și X este

-NH₂ sau -NHC(=NH)(NH₂);

L este -Y(CH₂]_vC(=0)-, în care; Y este NH, 0 sau S și veste 1 sau 2; M este un izomer D sau un izomer L al unui aminoacid cu structura;

-NR^1?-CK-C(=0)- în care: g'este O...2; R¹⁷ este H, alchil (C₁-C₃),

R⁸ este selectat din:

-C0₂R¹³, -SOgR¹³, -SO^NHR¹⁴, -BfR^KR³⁵), -NHSOjCFg, -C0NHNH6C^CF3, -POfOR¹³^. -P0(0R¹³)R¹³, -SOaNH-heteroaril (acest heteroaril având 5...10 membri și 1...4 heteroatomi selectați independent din N, 5 sau O, -S0₂NH-heteroaril (acest heteroaril având 5...10 membri și 1...4 heteroatomi selectați independent dintre: N, S sau O, -S0₂NHC0R¹³, -CONHeOgR¹³³, -CF^C0NH5Q3R^13a, -NH5O,NHC0R^13a, -NHCONHSO, F?³³ și grupa -60₂NHC0NHR¹³.

2. Reactiv conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că, R³¹ este legat 7755 la (C(R²³)R²²)n” și (C(R²¹)R¹)_n. , la doi atomi diferiți pe ciclul carbociclic.

3. Reactiv conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că, n este O și n' este O; n este O și n' este 1; n este O și n’ este 2; n”este 1 și n'este O; n“ este 1 si n’ este 1;

7760

RO 114895 Bl πeste 1 și n’este 2; n” este 2 și n' este O;

n este 2 și n’ este 1; sau n”este 2 și n'este 2.

4. Reactiv, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că, R⁶ este un radical metil, etil sau propii.

5. Reactiv, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că, R³² este selectat dintre: -C(=0)-; -C(=S]-; -S(=0)₂-;

R¹ și R²² sunt independent selectați din grupele următoare: hidrogen, alchil (Ο,-Οθ) substituit cu O...2 R¹¹; alchenil (Cy-Cg) substituit cu 0...2 R¹¹; alchinil (C2-C8) substituit cu O...2 R¹¹; cicloalchil (C3-C₈) substituit cu O...2 R¹¹; bicicloalchil (C₆-C₁₀) substituit cu O...2 R¹¹; o legătură la L^; arii substituit cu O...2 R¹²; un sistem cu inel heterociclic cu 5...10 membri conținând 1...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O, acest ciclu heterociclic fiind substituit cu O...2 R¹²;

-0C(=0)R¹³, -0C(=0]R^13a, -OR¹³, -0C(=0)N(R¹³)₂, -NR¹³C(=0)R¹³, -NR¹⁴C(=0)0R^13a,

-NR¹³C(=0)(R¹³)2, -NR¹⁴S02N(R¹³)2, -NR¹⁴S02R^13a, -S0₃H, -S0₂R^13a, -SR¹³, -S(=0)R^13a, -S02N(R¹³)2, -CH₂N(R¹³)₂, -N(R¹³)2, -NHC(=NH)NHR¹³, -C(=NH)NHR¹³, N02;

R¹ și R²¹ pot fi uniți alternativ pentru a forma un ciclu carbociclic cu 5...7 membri substituiți cu O...2 R¹²;

când n'este 2, R¹ sau R²¹ pot alternativ fi luați împreună cu R¹ sau R²¹ la atomul de carbon adiacent, formând astfel o legătură dublă sau triplă între acești atomi de carbon;

R²² și R²³ pot fi uniți alternativ pentru a forma un ciclu carbociclic cu 3...7 membri substituiți cu O...2 R¹²;

când π este 2, R²² sau R²³ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma cu R²² sau R²³ o legătură directă, obținându-se astfel o legătură dublă sau triplă între acești atomi de carbon; R¹ și R², când R²¹ este H, pot fi alternativ uniți pentru a forma un ciclu carbociclic cu 5...8 membri substituiți cu O...2 R¹²;

R¹¹ este selectat din una sau mai multe din grupele;

alchil (0_Ί-0₅), alchenil (C₂-C₄), cicloalchil(C₃-Cg)l, cicloalchil(C₃-C₆)lmetil, alcoxi (C₂-C₆) alchil, alchil (CȚ-CJ, substituit cu -NR¹³R¹⁴, -CF₃, N0₂, -S0₂R¹³ sau -S(=0)R^13a, arii substituit cu 0-2 R¹², un sistem ciclic heterociclic cu 5...10 membri conținând 1 ...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O, acest ciclu heterociclic fiind substituit cu O...2 R¹²; R³ este H sau CH₃;

R⁵ este H, alchil (Ο,-Cg), cicloalchiȚCg-C^), cicloalchiltCj-Q)! metil, cicloalchil (C,-Ql· etil, (CH₂)_SNHC (=NH](NH₂), (CH₂)_sNHR^1b, în care s este 3...5; o legătură la

R³ și R⁵ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma -(CH₂)_t în care t = 2...4 sau

-CH₂SC(CH₃)₂-; sau R⁷ este selectat dintre:

alchilJX;

<CK₂)_q-X

RO 114895 Bl în care fiecare q este independent O...2 și substituirea grupei fenil este în poziția 3 sau 4;

7815

-ÎCH₂)_q-< χξ \' (CH₂)_q-X în care fiecare t

independent O - 2 și substituția la ciclohexil este în poziția 3 sau 4;

q este

- (C₁-C₆)alchil)

7820

-(CH₂)_mO-alchil (Cf-CJ-Xîn care m este 1 sau 2;

-(CH₂)_mS-alchil (0_η-0₄)-Χ în care m este 1 sau 2 și

X este selectat dintre: -NH-C(=NH)(NH₂), -NHR¹³, -C(=NH)(NH₂), -SC(NH)-NH₂; R⁶ și R⁷ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma:

7825 (CH₂)_nX

I

-CH₂CHCK₂- _f î_{n care} n = o _sau 1 și X este -NH₂ sau -NH-C(=NH](NH₂];

L este -Y(CH₂]_VC(=O)-, în care Y este NH, N(alchil Cf-Cg], O sau S și v= 1 sau 2; 7830

M este un izomer L sau un izomer D al unui aminoacid cu structura:

-NR^1?-CH-C (=0) (CH (R⁴) )_q, | ⁴ 7835

R⁸ · în care g'este O...2; R¹⁷ este H, alchil (C-,-C₃);

R⁸ este selectat dintre : -C02R¹³, -S03R¹³, -S02NHR¹⁴, -B(R³⁴)(R³⁵), -NHS02CF₃, C0NHNHS0₂CF₃, -P0(0R¹³)2, -P0(0R¹³)R¹³, -SO2NH-heteroaril (acest heteroaril fiind de 5...10 membri și având 1...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O), -S0₂NH-heteroaril (acest heteroaril fiind selectat independent dintre un heteroaril 7840 cu 5...10 membri și având 1...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O], -S0₂NHC0R¹³, -C0NHS02R^13a, -CH2C0NHS0₂R^13a, -NHS0₂NHC0R^13a,

-NHC0NHS0₂R^13a, -S0_PNHC0NHR¹³;

R³⁴ și R³⁵ sunt independent selectați dintre, -OH, -F, - NR¹³R¹⁴ sau alcoxi (Ο-,-Οθ);

R³⁴ și R³⁵ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma: 7845 un ester ciclic de bor, în care catena sau ciclul conține de la 2 la 20 atomi de carbon și opțional 1 ...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O; o amidă de bor ciclică bivalentă în care catena menționată sau ciclul conțin de la 2 la 20 atomi de carbon și opțional 1...4 heteroatomi independent selectați dintre N, S sau O;

un ester amidă ciclică de bor în care catena sau ciclul conțin de la 2 la 20 atomi de 7850 carbon și opțional 1...4 heteroatomi independent selectați dintre N, S sau O.

6. Reactiv conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că, R³¹ este selectat dintr-o grupă care constă din:

a) un inel carbociclic cu 6 membri, saturat, parțial saturat sau aromatic, substituit cu

O...3 R¹⁰ sau R^10a și care poate avea opțional o legătură la L_n; 7855

b) un ciclu carbociclic cu 8...11 membri saturat, parțial saturat sau aromatic biciclic condensat, substituit cu O...3 R¹⁰ sau R^10a și opțional purtând o legătură la L_n sau

c) un ciclu carbociclic triciclic condensat, cu 14 membri, saturat, parțial saturat sau aromatic, substituit cu O...3 R¹⁰ sau R^10a și opțional având o legătură la L_n.

RO 114895 Bl

7860

7. Reactiv conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că, R³¹ este selectat dintr-o grupă care constă din:

a) un ciclu carbociclic cu 6 membri, saturat, parțial saturat sau aromatic, având formula:

7865

7870 în care orice legături formate cu ciclul carbociclic pot fi o legătură simplă sau o legătură dublă și în care acest ciclu carbociclic este substituit cu O...3 R¹⁰ și opțional are o legătură la

b] un ciclu carbociclic biciclic cu 10 membri, saturat, parțial saturat sau aromatic, având formula:

7875

7880 în care orice legătură care se formează cu ciclu carbociclic poate fi o legătură simplă sau o legătură dublă, în care acest ciclu carbociclic este substituit independent cu O...4 R¹⁰ și opțional are o legătură la

c) un ciclu carbociclic biciclic cu 9 membri, saturat, parțial saturat sau aromatic, având formula:

7885

7890 în care orice legături care se formează în ciclul carbociclic pot fi legături simple sau duble, în care ciclul carbociclic este substituit independent cu O...4 R¹° și opțional poate avea o legătură la L_n.

8. Reactiv conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că,

R³¹ este selectat dintre radicalii cu formulele de mai jos în care legătura activă poate fi o legătură simplă sau dublă:

7895

7900

7905

RO 114895 Bl în care R³¹ poate fi independent substituit cu O...3 R¹⁰ sau R^10a și opțional poate avea o legătură la L_n; 7910 n“este O sau 1 și rieste 0...2.

9. Reactiv conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că, R¹ și R²² sunt selectați independent dintre un radical fenil, benzii, fenetil, fenoxi, benziloxi, halogen, hidroxi, nitro, ciano, alchil (C,-C5), cicloalchil (C3-C6), cicloalchilmetil (C3-C6), arilalchil (07-0,0), alcoxi(C,-Cy, -CQjR¹³, -C(=0)NH0R^13a, -C(=0)NHN(R¹³y =N0R¹³, -B(R³⁴)(R³⁵), 7915 cicloalcoxi (C3-C₆), -0C(=0)R¹³, -C(=0)R¹³, -0C(=0)0R^13a, -OR¹³, -tC,-C₄J alchil -OR¹³,

-N(R¹³)2, -OC(=O)N(R¹³)2, -NR¹³C(=0)R¹³, -NR¹³C(=0)0R^13a, -NR¹³C(=0)N(R¹³)2, -NR¹³S02N(R¹³)2, -NR¹³S02R^13a, -S03H, -S02R^13a, -S(=O)R^13a, -SR¹³, -S02N(R¹³)2, alcoxialchil (C2-CB), metilendioxi, etilendioxi, haloalchil (C,-C4), haloalcoxi (0,-04), alchilcarboniloxi (C,-C4), alchilcarbonil (C,-C4), alchil (0,-04) carbonilamino, -OCF^CCȚH, 7920 2-(1-morfolino)etoxi, alchil (C,-C4) (radicalul alchil fiind substituit cu -N(R¹³)2, -CF₃, N0₂ sau -S(=0)R^13a).

..10 .NR¹³ -NH-C'

N(R¹³)R¹³;

-C(=NH)(NH₂); -SC(=NH)-NH₂; -NH - C(=NH)(NHCN);

-NH - C(=NCN)(NH₂); -NH - C(=N-0R¹³)(NH₂);

R⁶ și R⁷ pot fi luați alternativ împreună pentru a forma:

(CH₂)_nX I

- (CH₂) _qCH-(CH₂) _q- , în care fiecare q este independent 1 sau în care: n =0 sau 1 și X este -NH₂ sau .NR¹³

N(R¹³)R¹ .

L este -Y(CH₂)_vC(=0), în care:

Y este NH, N (C^-Cg alchil), O sau S și v=1 sau 2;

M este un D-izomer sau L-izomer al unui aminoacid cu structura:

-NR¹⁷-CH-C(=O)(CH(R⁴) )q<

R⁸ în care: q’este O...2; R¹⁷ este H, alchil (C.,-C₃);

R⁸ este selectat dintre:

-C0₂R¹³, -S0₃R¹³, -S02NHR¹⁴, -B(R³⁴)(R³⁵), -NHS02CF₃, -C0NHNHS0₂CF₃,

-P0(0R¹³)2, -P0(0R¹³)R¹³, -SO2NH-heteroaril (acest heteroaril fiind format din 5 membri și având 1 ...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O),

-SO_PNH- heteroaril (acest heteroaril având 5...10 membri și 1...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O), -S0₂NHC0R¹³, -C0NHS0₂R^13a,

-CH₂C0NHSC₂R^13a, -NHS02NHC0R^13a, -NHC0NHS02R^13a, -S0₂NHC0NHR¹³; 9075

R³⁴ și R³⁵ sunt independent selectați dintre o grupă, ca: -OH, -F, -N(R¹³)₂ sau alcoxi (C^-Cg);

R³⁴ și R³⁵ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma: un ester ciclic de bor în care catena sau ciclul conțin de la 2 la 20 atomi de carbon și opțional 1...4 heteroatomi independent selectați dintre N, S sau O; o amidă ciclică de bor bivalent în care catena 9080 sau ciclul menționat conține de la 2 la 20 atomi de carbon și opțional 1...4 heteroatomi independent selectați dintre N, S sau O; o ester-amidă ciclică de bor în care catena sau ciclul menționat conține de la 2 la 20 atomi de carbon și opțional

10. Reactiv conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că, R³¹ este selectat dintre un radical având formulele de mai jos:

7925

7930

7935 în care R³¹ poate fi substituit independent cu O...3 R¹° sau R^10a și poate fi opțional legat la L^;

R³² este -0(=0)-: n“ este O sau 1; ri este O...2;

R¹ și R²² sunt selectați independent dintre H, alchil (C,-C₄). fenil, benzii, fenil -(C₂C₄)alchil, alcoxi(C,-C₄) și o legătură la Ι_„; -- 7940

R²¹ și R²³ sunt independent H sau alchil (C,-C₄);

R² este H sau un radical alchil (C,-C_e);

R¹³ este selectat independent dintre: H, alchil (C,-C,_o), cicloalchil (C₃-C₁₀), alchilcicloalchil (C₄-C₁₂), arii, - alchil(C,-C,₀)aril sau alcoxialchii (C₃-C,_o) ;

R^13a este alchil (C,-C,_o), cicloalchil (C₃-C,_o), alchilcicloalchil (C₄-C₁₂), arii, 7945

- alchil(C,-C,₀)aril sau alcoxialchil (C₃-C,_o) când cele două grupe R¹³ sunt legate la un singur N, aceste grupe R¹³ pot fi alternativ luate împreună pentru a forma:

-(CH₂)₂.₅- sau -(CH₂)0(CH₂)-;

R¹⁴ este OH, H, alchil (C,-C₄) sau benzii;

R^1Q și R^10a sunt selectați independent dintre: H, alchil (C,-Cg), fenil, halogen sau alcoxi 7950 (C,-C₄);

J este β-Ala sau un izomer L sau izomer D al unui aminoacid cu structura:

-N(R³)C(R⁴)(R⁵)C (=0)-, în care:

R³ este H sau CH3; R⁴ este H sau alchil (C,-C3);

R⁵ este H, alchil (C,-Cg), cicloalchil (Cg-Cy, cicloalchilmetill (C^-C^), cicloalchiletill (0,-Q), 7955 fenil, fenilmetil, CH20H, CH2SH, CH20CH3, CH2SCH3, CH2CH2SCH3, (CH2)SNH2, -(0Η2)3ΝΗ0(=ΝΗ)(ΝΗ2)-, -(CH2)SNHR¹⁶ în care s = 3...5 și o legătură la Ln; sau R³ și

RO 114895 Bl

R⁵ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma -(CH2)- (t= 2...4) sau -CH2SC(CH3]2sau R⁴ și R⁵ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma -{CH2)_U-, în care u=2...5; R¹⁶ este selectat dintre: o grupă de protecție amino, 1...2 aminoacizi sau 1...2 aminoacizi substituiți cu o grupă amino de protecție;

K este un izomer L al unui aminoacid cu structura:

-N(R⁶)CH(R⁷)C(=0)-, în care: R⁶ este H sau alchil (C.,-C₈);

R⁷ este:

-(CH₂)_r X, în care r = 3...6;

-ÎCH₂]_mS (CH₂)₂X, în care m = 1 sau 2; -(C₃-C₇ alchil) - NH - (C.,-C₆ alchil);

- (C₁-C₄alchll)

ȚCHJJJȚCȚ-CȚ alchilȚNHȚCȚ-CȚ alchil), în care m este 1 sau 2; -(CFȚ^-S-alchil (6,-Q) -NH-alchil (C₁-C₆), în care m este 1 sau 2 și X este -NH₂ sau -NHC(=NH)(NH₂) sau R⁶ și R⁷ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma:

(CH₂)_nX

I

-CH₂CH-CH₂- , în care n = O sau 1 și X este -NH₂ sau -NHC(=NH)(NH_P); L este Y(CH₂)_V C(=0] - în care: Y este NH, O sau S; și veste 1 sau 2;

M este un D-izomer sau L-izomer al unui aminoacid cu structura:

-NR¹⁷-CH-C(=0)' (CH(R⁴) )_q·

R⁸ în care: g'este O...2; R¹⁷ este H, alchil (C.,-C₃];

R⁸ este selectat dintre:

-CO_aR¹³, -S0₃R¹³, -S02NHR¹⁴, -B(R³⁴)(R³⁵), -NHS02CF₃, -C0NHNHS0₂CF₃,

-P0(0R¹³) ₂, - P0(0R¹³)R¹³, -SOgNH-heteroaril (acest heteroaril având 5...10 membri și 1...4 heteroatomi, selectați independent dintre N, S sau O) , -SO_PNH-heteroaril (acest heteroaril având 5...10 membri și 1...4 heteroatomi selectați independent

RO 114895 Bl dintre N, S sau O), -S0_PNHC0R¹³, -C0NHS0₂R^13a,

-CH₂C0NHS0₂R^13a, -NHS02NHC0R^13a, -NHC0NHS02R^13a și grupa -S0₂NHC0NHR¹³.

11. Reactiv conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că este un compus 1,3-fenil disubstituit având formula generală II: 8010 /

J \

0=C (II)

8015

8020 în care ciclul fenilic poate fi substituit cu O...3 R¹⁰ si poate avea opțional o legătură la k;

R¹° este selectat independent dintre H, alchil (C₁-C_a), fenil, halogen sau alcoxi (C.,-C₄);

R¹ este H, alchil (0.,-CJ, fenil, benzii, fenil -(C^J-alchil sau o legătură la R² este H sau metil; 8025

R¹³ este selectat independent dintre: H, alchil (0.,-Cy, cicloalchil (C₃-C₁₀), alchilcicloalchil (C₄-C₁₂), arii, -{Ο,-Ο,ο alchil) arii sau alcoxialchil (C₃-C_1O);

R^13a este alchil (0,-Cy, cicloalchil (Cg-Cy, alchilcicloalchil (C4-C12), arii, -(C.,-C10 alchil) arii sau alcoxialchil (C3-Cy; când cele două grupe R¹³ sunt legate împreună la un singur N, aceste grupe R¹³ pot fi alternativ luate la un loc pentru a forma -{CH2)₂.₅- sau 8030

-(CH₂)O(CH₂)-;

R¹⁴ este OH, H, alchil (0.,-CJ sau benzii;

J este β-Ala sau un izomer L sau izomer O al unui aminoacid cu structura

-N(R³)C(R⁴)(R⁵)C(=0]-, în care:

R³ este H sau CH₃; R⁴ este H sau alchil (0,-Cg); 8035

R⁵ este H, alchil (Ο,-Ca). cicloalchil (Cycy, cicloalchilfCg-Cymetil, cicloalchil (C,-Q)- etil, fenil. fenilmetil, CH₂0H, CH₂SH, CH₂0CH₃, CH₂SCH₃, CH₂CH₂SCH₃, (CH₂)_SNH₂, -(CH₂)_sNHC(=NH)(NH₂), -(CH₂)_sNHR¹⁶, în care s= 3...5 sau o legătură la L,,;

R³ și R⁵ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma -CH2CH2CH2- sau R⁴ și R⁵ pot fi alternativ luați împreună, pentru a forma -(CH2)_U, în care u = 2...5; 8040

R¹⁶ este selectat dintre: o grupă amino de protecție, 1...2 aminoacizi sau 1...2 aminoacizi substituiți cu o grupă amino de protecție;

K este un L-izomer al unui aminoacid având structura:

-N(R⁶)CH(R⁷)C(=0)-, în care:

R⁶ este H sau alchil (C.,-C₈); 8045 — (CH₂)_q //

12. Reactiv conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că este reprezentat de compusul fenil 1,3-disubstituit având formula generală II:

NR² /

CHR¹ (II)

RO 114895 Bl unui aminoacid cu structura:

-NR^1?-CH-C(=0)(CH(R⁴) )_q.

I_e

R⁸ în care q'este 1; R¹⁷ este H, alchil (C.,-C₃);

R⁸ este selectat din: -C0₂H sau -S0₃R¹³.

13. Reactiv conform revendicării 1, caracterizat prin aceea ca este reprezentat de compusul cu formula generală II, în care ciclul fenil are o legătură la E și poate fi apoi substituit cu O...2 R¹⁰ sau R^10a;

R¹⁰ sau R^1Oa sunt selectați independent dintre: H, alchil (C₁-C_s), fenil, halogen sau alcoxi R¹ este H; R² este H;

R¹³ este selectat independent dintre: H, alchil (0_ηΌ_1ο), cicloalchil (C₃-C₁₀), alchilcicloalchil (C₄-C₁₂), arii, -{C^^ alchil)-aril sau alcoxialchil (C₃-C_1O);

R^13a este alchil (C.,-Cia], cicloalchil (C3-C10), alchil(C4-C12)cicloalchil, arii - (C.,-C10 alchil) arii sau alcoxialchil (C3-C10); când cele două grupări R¹³ sunt legate la un singur N, aceste grupe R¹³ pot fi alternativ luate împreună pentru a forma -(CH2)₂₅- sau -(CH₂)0(CH₂);

R¹⁴ este OH, H, alchil (C.,-C₄) sau benzii;

J este β-Ala sau L-izomerul sau D-izomerul aminoacidului cu formula;

- N(R³]CH(R⁵)C(=0) -, în care:

R³ este H și R⁵ este H, CH3, CH2CH3, CH(CH3]2, CH(CH3)CH2CH3, CH2CH2CH3, CH2CH2CH2CH3, CH2CH2SCH3, CH2CH(CH3)2, (CH2]4NH2, (Ca-Cs alchiDNHR¹⁶; sau R³ este CH3 și R⁵ este H sau R³ și R⁵ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma: -CH₂CH₂CH₂-; R¹⁶ este selectat dintre: o grupă amino de protecție, 1 ...2 aminoacizi;

14. Reactiv conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că este reprezentat de compusul cu formula generală II de mai sus, în care ciclul fenil are o legătură la k;

R¹ și R² sunt independent selectați dintre; H, metil, J este selectat dintre D-Val, acid D-2-aminobutiric, D-Leu, D-Ala, Gly, D-Pro, D-Ser, D-Lys, β-Ala, Pro, Phe, NMeGly, D-NIe, D-Phg, D-ile, D-Phe, D-Tyr, Ala, NLp-azidobenzoil-D-Lys, ^-p-benzoilbenzoil-D-Lys, N^-triptofanil-D-Lys, N⁵-o-benzilbenzoil-D-Lys, IXf-p-acetilbenzoil-D-Lys, N--dansil-D-Lys, l\fglicil-D-Lys, N^-glicil-p-benzoilbenzil-D-Lys, N^p-fenilbenzoil-D-Lys, N^m-benzoilbenzoil-DLys, N^-o-benzoilbenzoil-D-Lys;

K este selectat din NMeArg, Arg; L este selectat din Gly, β-Ala, Ala; M este selectat din Asp.aMeAsp; βΜβΑβρ; NMeAsp; D-Asp.

15. Reactiv conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că, în formula generală l:

RO 114895 Bl în care ciclul fenil poate fi substituit cu O...3 R¹⁰ sau R^1Oa;

R¹⁰ sau R^10a sunt selectați independent dintre: H, alchil (C,-C₈) fenil, halogen sau alcoxi (C,-C₄); 8105

R¹ este H, alchil (C,-C₄), fenil, benzii sau fenil alchil (C₂-C₄);

R^a este H sau metil; R¹³ este selectat independent dintre: H, alchil (C,-C10), cicloalchil (C3-C10), alchil (C4-C12) cicloalchil, arii, -(C1-C10 alchil) arii sau alcoxialchil (C3-C1O); când cele două grupe R¹³ sunt legate la un singur N, aceste grupe R¹³ pot fi alternativ luate împreună pentru a forma o grupă -(CH2)_{2 5}- sau -(CH₂)0(CH₂)-; 8110

R^13a este alchil (C₁-C₁₀], cicloalchil (Cg-C^), alchilcicloalchil (C₄-C₁₂), arii - (C,-C₁₀ alchil) arii sau alcoxialchil (C₃-C,_o);

R¹⁴ este OH, H, alchil (0,-0,,] sau benzii;

J este β-Ala sau un L-izomer sau D-izomer al unui aminoacid cu structura

-N(R³]C(R⁴)(R⁵)C(=0], în care: R³ este H sau CH₃; R⁴ este H; 8115

R⁵ este H, alchil (C,-C8), cicloalchil(C3-C6)metil, cicloalchil(C,-C6]etil, fenil, fenilmetil, CH20H, CH2SH, 0Η200Η3, CHgSCl·^, ΟΗ,ΟΗ,δΟ/, (CH2i NH,, (041 NHC(=NH)(N4 ), (CH2)SR¹⁶, în care s = 3...5; sau o legătură 'a Ln;

R³ și R⁵ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma o grupă -CH₂CH₂CH₂-;

R¹⁶ este selectat dintre: o grupă de protecție amino, 1...2 aminoacizi; 1...2 8120 aminoacizi substituiți cu o grupă de protecție amino;

K este un L izomer al aminoacidului cu structura:

-N(R⁶)CH(R⁷]C(=0)-, în care:

R^s este H sau alchil (C₃-C₈):

8125

8130 /=\ '-' ^wn2, in care q este O sau1;

-{ΟΗ^,Χ, în care r = 3. ..6;

8135

8140

-(CH₂)_mS(CH₂)₂X, în care m = 1 sau 2; -(C₄-C₇ alchil)-NH-(C,-C₆ alchil); - (Cj-C₄alchil)

8145

-(CH₂)_rn-0-(C₁-C₄alchil)-NH-(C₁-C₆ alchil) în care m =1 sau 2;

-tCH₂)_m-S-(C,-C₄ alchil)-NH-(C,-C₆ alchil) în care m =1 sau 2;

și X este -NH₂ sau -NHC(=NH](NH₂] cu condiția ca X să fie diferit de - NH₂ când r =4 8150 sau L este -YCH₂C(=O]- în care: Y este NH sau O; M este un O-izomer sau L-izomer al

RO 114895 Bl

R³¹ poartă o legătură la L_n;

R¹ și R² sunt independent selectați dintre H, metil;

J este selectat dintre: D-Val, acidul D-2-aminobutiric, D-Leu, D-Ala, Gly, D-Pro, D-Ser, D-Lys, β-Ala, Pro, Phe, NMeGly, D-NIe, D-Phg, D-lle, D-Phe, D-Tyr, Ala;

K este selectat din NMeArg;

L este Gly;

M este selectat dintre.Asp; aMeAsp; βΜθΑερ; NMeAsp; D-Asp.

8205

16. Reactiv conform revendicării selectat din grupa; _xW-_A2 A¹ W-a²-^ A¹ A³ A¹- ._w aV Z \₂ ν/Λν 1 I A< .A² w I A² I \ I z^w w- A³

, caracterizat prin aceea că, C_h este

8210

8215

8220 yr „A²-W-A\ w w w.

A⁵.

8225 a²—w— a³-w- A⁴-W- a⁵x yr _A2_W_ _A3-w- A<-W- _A6

V

A'-VV w

I

A* a² w^a >

'a³-sv-a⁴-w-a⁶ ,νν t w I

A^{5 A}X\'

I

V7 w f ι

L A³ A² A“

8230

8235

A z w

A?-w

A² /^Q w I

A¹-V<

z \

8240 '\ z w—Aț w

/ \ Z W—A³

8245

RO 114895 Bl .A²—W—a³—w—a⁴—w— a⁵—w— a* \⁷

A²—W—A³—W—A⁴—W—A^s<-W—A₇ /^W \ ¹ v ^:

A²—w—A³—W—A⁴ — W—A⁶—W—A⁷

W' ,A²—W—a³—W—a⁶—W—_A7

I w

A⁴

I w

I

A¹ W

L _A2__W_ _A4_ _w_ _a5_ W—_A7 .A²— W— _A4—W—_A6—W—A⁷ w

A³ w

Â^s

A⁵

-w

-w

A²' ,w ^XA⁶ wZ \

w /

wîn care A¹, A², A³, A⁴, A⁵, A⁶ și A⁷ sunt independent selectați în fiecare caz, dintr-o grupă aleasă dintre:

NR⁴⁰R⁴¹, S, SH, S(Pg), O, OH, PR⁴²R⁴³, P(0)R⁴²R⁴³, P(S)R⁴²R⁴³, P(NR⁴⁴)R⁴²R⁴³;

W este o legătură, CH sau o grupare în spațiu selectată dintre:

C₁-C_1O alchil substituit cu O...3 R⁵², arii substituit cu O...3 R⁵², cicloalchil substituit cu O...3 R⁵², heterocicloalchil substituit cu O...3 R⁵², aralchil substituit cu O...3 R⁵² și alcaril substituit cu O...3 R^5a;

W^a este o grupă alchil (C.,-C₁₀] sau un carbociclu (C₃-C₁₄);

R⁴°, R⁴¹, R⁴², R⁴³ și R⁴⁴ sunt fiecare independent selectați dintr-o grupă ca:

o legătură la L,,, hidrogen, alchil (G,-C₁₀) substituit cu O...3 R⁵², arii substituit cu O...3

R⁵², cicloalchil substituit cu O...3 R⁵²,heterocicloalchil substituit cu O...3 R⁵², aralchil substituit cu O...3 R⁵²,alcaril substituit cu O...3 R⁵² substituit cu O...3 R⁵² și

RO 114895 Bl un electron, cu condiția ca, atunci când unul dintre R⁴⁰ sau R⁴¹ reprezintă un electron, celălalt este de asemenea un electron și cu condiția ca, atunci când unul dintre R⁴² 8300 sau R⁴³ este un electron, celălalt este de asemenea un electron; adițional R⁴⁰ și R⁴¹ se pot uni pentru a forma grupa;

=0(Ο,-0₃ aIchil](C.,-C₃-aIchil);

R⁵² este selectat independent în fiecare caz, dintr-o grupă: o legătură la L^, =0, F, Cl,

Br, I, -CF₃, -CN, -C0₂R⁵³, -C(=0)R⁵³, -C(=0)N(R⁵³)₂, -CHO, -CH₂0R⁵³, -0C(=0)R⁵³, 8305

-0C(=0)0R^53a, -OR⁵³, -0C(=0)N(R⁵³)₂, -NR⁵³C(=0)R⁵³, -NR⁵⁴C(=0)0R^53a,

-NR⁵³C(=0)N(R⁵³]p, -NR⁵⁴S02N(RF³)b, -NFf⁵⁴SO5FF^3a, -SOjH, -S0,FF^3a, -SFf³, -S(=0)FF^3a, -SO2N(R⁵³}2, -NtR⁵³^, -NHC(=NH)NHPP³, -C(=NH)NHFγ , =NOF?³ , NO,, -C(=0)NH0tf³ , -C(=0]NHNR⁵³R^53a, -0CH2C0₂H, 2-(1-morfolino) etoxi, alchil (C^), alchenil (C₂-C₄), cicloalchil (C₃-C₆), cicloalchilmetil (C₃-C₆), alcoxialchil (C₂-C₆), arii substituit cu O...2 8310 R⁵³,un sistem ciclic heterociclic cu 5...10 membri, conținând 1...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S și O;

R⁵³, R^53a și R⁵⁴ sunt selectați independent la fiecare caz, dintr-o grupă:

o legătură la L,,, alchil (0_Ί-0θ), fenil, benzii, alcoxi (C.,-C₆], halogenură, nitro, ciano și trifluormetil și Pg este o grupă de protecție tiol capabilă de a fi dislocuită după reacție 8315 cu o radionuclidă.

17. Reactiv conform uneia dintre revendicările 1 la 15, caracterizat prin aceea că, C_h este selectat dintr-o grupă ca:

,W-_A* ,W-A*-W

A¹^ W^a A³

8320 ,W ,_â^A³-W-A⁴-W-A^e \v |

A²' W ;

A⁵ _A2-w—a⁴-W-A³-w—a⁷

W I \ .A²—W—a⁴—w—a⁶—w—a⁷

8325

W

A³ w

z, w

Â⁵

8330

A⁵ /

w l

A¹-W

Z \

A¹-w

8335

A²^ ^XA⁶ w

/ \

W /

8340

A⁷ în care A¹, A², A³, A⁴, A⁵, A⁶ și A⁷ sunt independent selectați în fiecare caz, dintr-o grupă: NR⁴⁰R⁴¹, S, SH, S(Pg), OH; 8345

W este o legătură, CH, sau o grupă spațială selectată dintre alchil substituit cu O...3 R⁵²;

RO 114895 Bl

W⁹ este o grupă metilen sau un carbociclu (C₃-C₆);

R⁴°, R⁴¹, R⁴², R⁴³ și R⁴⁴ sunt fiecare selectați independent dintr-o grupă: o legătură la Ln, hidrogen, alchil (C1-C10) substituit cu O...3 R⁵² și un electron, cu condiția ca, atunci când unul dintre R⁴⁰ sau R⁴¹ este un electron, celălalt este de asemenea un electron, și cu condiția ca, atunci când unul dintre R⁴² sau R⁴³ este un electron, atunci celălalt este de asemenea un electron; adițional R⁴⁰ și R⁴¹ pot fi uniți pentru a forma grupa =C(C.,-C3 alchil)(C.,-C₃ alchil);

R⁵² este selectat independent în fiecare caz dintr-o grupare:

o legătură la =0, F, CI, Br, I, -CF₃, -CN, -C0₂R⁵³, -C(=0)R⁵³, -C(=)0N(R⁵³)2, -CHO, -CH20R⁵³, -OC(=O)R⁵³, -OC(=O)OR^53a, -OR⁵³, -0C(=0]N(R⁵³)2, -NR⁵³C(=0)R⁵³, -NR⁵⁴C(=0)0R^53a, -NR⁵³C(=0)N(R⁵³)2, -NR⁵⁴S02N(RP³)2, -NRP⁴SQ,RF^3a, -SOjH, -S0^RP^3a, -SR⁵³, -S(=0]R^53a, -S02N(R⁵³)2, -N(R⁵³)a, -NHC(=NH)NHR⁵³, -C(=NH)NHR⁵³, =N0R⁵³, N02, -C(=0)NH0R⁵³, -C(=0)NHNR⁵³R^53a, -OCH2CO₂H, 2-{1 -morfolinojetoxi și R⁵³, R^53a și R⁵⁴ sunt independent selectați în fiecare caz dintr-o grupă: o legătură la L„, alchil (Ci-C_e).

18. Reactiv conform uneia din revendicările 1 la 15, caracterizat prin aceea că este reprezentat de un compus cu formula generală:

(QLJd c_h, în care d este 1 și C_h este reprezentat de formula:

în care: A¹și A⁴ sunt SH sau Spg; A² și A³ sunt NR⁴¹;

W este selectat independent dintr-o grupă:

CHR⁵², CHsCHR⁵², CHgCHjCHR⁵² și CHFFOO și R¹¹ și R⁵² sunt selectați independent din hidrogen și o legătură la L,, și _ZW-A²

A¹ t

în care: A¹ este NH₂ sau N^C,^ alchil) (C.,-C₃ alchil);

W este o legătură;

A² este NHR⁴⁰, în care R⁴⁰ este heterociclu substituit cu R⁵² în care heterociclul este selectat dintre grupele: piridină, pirazină, prolină, furan, tiofuran, tiazol și diazină și R⁵² este o legătură la L_n;

19. Reactiv conform uneia din revendicările 1 la 15, caracterizat prin aceea că este reprezentat de un compus cu formula generală:

(QLn)d C_h.

în care d este 1 și C_h este:

_zW-a²

A¹ t

în care, A¹ este NH₂ sau N=C(C₁-C₃ alchil) (C₇-C₃ alchil);

W este o legătură;

A² este NHR⁴⁰, în care R⁴⁰ este un heterociclu substituit cu R⁵² în care heterociclul este selectat dintre piridină și tiazol și R⁵² este o legătură la L_n.

20. Reactiv conform uneia din revendicările 1 la 15, caracterizat prin aceea că, Q, este o legătură între Q și C_h, sau un compus cu formula: M¹[Y¹(CR⁵⁵R⁵⁶)h(Z¹)h.Y²]h-M², în care: M¹ este -[(CH2)_gZ¹lfl.-[Z¹(CR⁵⁵R⁵⁶)g.-;

RO 114895 Bl

M² este <CR⁵⁵R⁵⁶)g--[Z¹(CH2)g]g·-; g este independent O... 10;

cf este independent 0...1; geste O...10; h este O...10; h'este O...10, //'este 0...1,

Y¹ și Y² în fiecare caz sunt independent selectați dintre: o legătură, O, NR⁵⁶, C=0,

0(=0)0, 0C(=0)NH-, C=NR⁵⁶, S, SO, S02, S03, NHC(=O), (NH)2C(=0), (NH)PC=S; 8400 Z¹ este independent selectat în fiecare caz dintre un sistem C6-C₁₄ ciclic carbociclic saturat, parțial saturat sau aromatic substituit cu O...4 R⁵⁷; un ciclu heterociclic, acest sistem fiind substituit opțional cu O...4 R⁵⁷;

R⁵⁵ și R⁵⁶ sunt independent selectați în fiecare caz, dintre:

hidrogen, alchil (C.,-C₁₀) substituit cu O...5 R⁵⁷; 8405 (C_q-C₁₀ alchil) arii în care arii este substituit cu O...5 R⁵⁷;

R⁵⁷ este independent selectat în fiecare caz dintr-o grupă:

hidrogen, OH, NHR⁵⁸, C(=0)R⁵⁸, OC^OJR⁵⁸, OC^OJOR⁵⁹, C(=0)0R⁵⁸, C^OjNR⁵⁸, ON,

SR⁵⁸, SOR⁵⁸, SO^⁸, NHC(=O)RP⁸, NHC(=0)NHRP⁸, NHC(=S)NHFF⁸ sau alternativ când sunt atașați la o moleculă Q adițională, R⁵⁷ este independent selectat în fiecare caz 8410 dintr-o grupă ca: O, NR⁵⁸, C=0, 0(=0)0, 00(=0)0, C(=0)N-, C=NR⁵⁸, S, SO, S0₂, S0₃, NHC(=O), (NH)₂C(=0), (NH)₂C=S și R⁵⁸ este independent selectat în fiecare caz dintr-o grupă:

hidrogen, alchil (C₁<3₆), benzii și fenil.

21. Reactiv conform revendicării 16, caracterizat prin aceea că, L,, este un 8415 compus cu formula M¹-[Y¹(CR⁵⁵R^5B)h(Z¹)h.(Y²)_n-M², în care:

M¹ este -((CH2)gZ¹)g.-(CR⁵⁵R⁵⁸)_g.-;

M² este -ÎCR⁵⁵FP⁶)g.-(Z¹ (CHP)g^.-; g este independent O... 10; g’ este independent O... 1; g este O... 10; h este O... 10; h‘ este O... 10; h“ este O... 1; Y¹ și Y² în fiecare caz sunt independent selectați dintre o legătură, O, NR⁵⁶, C=0, 0(=0)0, 00(=0)0, C(=0)NH-, 8420 C=NR⁵⁶, S, SO, S0₂, S0₃, NHC(=O), (NH)₂C(=0), (NH)₂C=S;

Z¹ este independent selectat în fiecare caz dintre un sistem ciclic carbociclic C₆-C₁₄ saturat, parțial saturat sau aromatic, substituit cu O...4 R⁵⁷; un sistem ciclic heterociclic opțional substituit cu O...4 R⁵⁷;

R⁵⁵ și R⁵⁶ sunt independent selectați în fiecare caz dintre: 8425 hidrogen, alchil (C.,-C₁₀) substituit cu O...5 R⁵⁷;

(C₁-C_1O alchil) arii în care grupa arii este substituită cu O...5 R⁵⁷;

R⁵⁷ este independent selectat în fiecare caz dintre o grupă:

hidrogen, OH, NHR⁵⁸, C(=0)R⁵⁸, 0C(=0)R⁵⁸, 00(=0)00⁵⁸. C(=0)0RP⁸, C(=O)NFP⁸-, C^N,

SR⁵⁸, SOR⁵⁸, S02R⁵⁸, NHC(=0)R⁵⁸, NHC(=0)NHR⁵⁸, NHC(=S)NHR⁵⁸ sau alternativ, 8430 când sunt atașați la o moleculă adițională Q, R⁵⁷ este independent selectat în fiecare caz dintr-o grupă: O, NR⁵⁸. 0=0, 0(=0)0, 00(=0)0, C(=0)N-, C=NR⁵⁸, S, SO, S02, S0₃, NHC(=0), (NH)₂C(=0), (NH)₂C=S și R⁵⁷ este legat la o moleculă Q și R⁵⁸ este independent selectat în fiecare caz dintre grupele: hidrogen, alchil (C₁-C₆), benzii sau fenil. 8435

22. Reactiv, conform revendicării 17, caracterizat prin aceea că, Ln este: -(CR⁵⁵R^5B)g4Y¹(CRP⁵PP⁶l1^>»^el-(VFÎ⁵FF^Bi.-încare: g”este 1 ...10; h este O... 10; /7'este 1 ...10; Y¹ și Y² în fiecare caz sunt selectați independent dintre o legătură, O, NR⁵⁶,

0=0, 0(=0)0, 00(=0)0, C(=0)NH-, C=NR⁵⁸, S, SO, S0₂, S0₃, NHC(=0), (NH)₂C(=0), (NH)_PC=S; 8440

R⁵⁵ și R⁵⁶ sunt selectați în fiecare caz independent, dintre hidrogen, alchil (C_q-C₁₀) substituit cu O. ..5 R⁵⁷;

(C₁-C₁₀ alchil) arii în care grupa arii este substituită cu 0...5R⁵⁷;

R⁵⁷ este independent selectat în fiecare caz dintre grupele:

hidrogen, OH, NHR⁵⁸, C(=0)R⁵⁸, OC(=O)R⁵⁸, 0C(=0)0R⁵⁸, 0(=0)0ΡΡ⁸, C(=0)NR⁵⁸, C=N, 8445

RO 114895 Bl

SA⁵⁸, SOR⁵⁸, S02R⁵⁸, NHC(=0)R⁵⁸, NHC(=0)NHR⁵⁸, NHC(=S)NHR⁵⁸ sau, alternativ când este atașat la o moleculă adițională Q, R⁵⁷ este independent selectat în fiecare caz dintre o grupă: O, NR⁵⁸, C=o’, 0(=0)0, 00(=0)0, C(=O)N-, C=NR⁵⁸, S, SO, S02, S0₃, NHC(=0), (NH)₂C(=0), (NH)₂C=S și R⁵⁷ este atașat la o moleculă adițională Q și R⁵⁸ este independent selectat în fiecare caz dintre o grupă ca:

hidrogen, alchil (C.,-C₆), benzii și fenil;

23. Reactiv conform revendicării 18, caracterizat prin aceea că, L_n este: -(CR⁵⁵R⁵⁶)g--Y¹(CR⁵⁵R⁵⁶)hY^a)h-(CR⁵⁵R⁵⁶)g--, în care: g'este 1...5; Λ este O...5; Λ'este 1 ...5; Y¹ și Y^a în fiecare caz sunt independent selectați dintre:

O, NR⁵⁶, 0=0, 0(=0)0, 00(=0)0, C(=O)NH-, C=NR⁵⁶, S, SO, S0₂, S0₃, NHC(=O), (NH)_PC(=O), (NH)₂C=S;

R⁵⁵ și R⁵⁶ sunt independent selectați în fiecare caz dintre:

hidrogen alchil (C_q-C₁₀); (C₁-C₁₀ alchil) arii;

24. Reactiv conform revendicării 19, caracterizat prin aceea că, L_n este:

-(CR⁵⁵R⁵⁶)g--(Y¹(CR⁵⁵R⁵⁶)hY²)h.-(CR⁵⁵R⁵⁶)g.-:

în care: geste 1...5; h este O...5; b'este 1...5; Y¹ și Y² sunt în fiecare caz selectați dintre:

O, NR⁵⁶, 0=0, 0(=0)0, 00(=0)0, C(=O)NH-, C=NR⁵⁶, S, NHC(=O), (NH)₂C(=0), (NH)₂C=S;

R⁵⁵ și R⁵⁶ sunt independent selectați de fiecare dată hidrogen.

25. Reactiv conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că are una din următoarele formule:

RO 114895 Bl

8495

NH

8500

8505

8510

8515

8520

8525

8530

8535

8540

RO 114895 Bl

26. Reactiv conform revendicării 23, caracterizat prin aceea că, într-o cantitate predeterminantă, sub formă sterilă, acceptabilă farmaceutic, se utilizează pentru prepararea unui produs radiofarmaceutic.

27. Reactiv conform revendicării 24, caracterizat prin aceea că, într-o cantitate predeterminantă, sub formă sterilă, acceptabilă farmaceutic, se utilizează pentru prepararea unui produs radiofarmaceutic.

28. Reactiv conform revendicării 25, caracterizat prin aceea că, într-o cantitate predeterminantă, sub formă sterilă, acceptabilă farmaceutic, se utilizează pentru prepararea unui produs radiofarmaceutic.

29. Produs radiofarmaceutic. caracterizat prin aceea că conține un complex de reactivi cu formula generală I, având caracteristicile definite în revendicările 1 la 15 și o radionuclidă, selectată dintr-o grupă ca; ^99mTc, “Tc, ⁹⁵Tc, ¹¹¹ln, Cu, ⁴³Sc, ⁴⁵Ti, Ga, Ga, ⁹⁷Ru, ⁷²As, Rb și ²⁰¹TI.

30. Produs radiofarmaceutic. caracterizat prin aceea că conține un complex de reactivi, având caracteristicile definite în revendicarea 16 și o radionuclidă selectată dintre o grupă ^99mTc, “^mTc, ⁹⁵Tc, ¹¹¹ln, ⁶²Cu, ⁴³Sc, ⁴⁵Ti, Ga, Ga, ⁹⁷Ru, ⁷²As, Rb și ^Tl.

31. Produs radiofarmaceutic. caracterizat prin aceea că conține un complex de reactivi, având caracteristicile definite în revendicarea 17 și o radionuclidă selectată dintre o grupă ^99mTc, ^94mTc, ⁹⁵Tc, ¹¹¹ln, Cu, ⁴³Sc, ⁴⁵Ti, Ga, Ga, ⁹⁷Ru, ⁷²As, Rb și ²⁰¹TI.

32. Produs radiofarmaceutic. caracterizat prin aceea că conține un complex de reactivi, având caracteristicile definite în revendicarea 18 și o radionuclidă selectată dintre o grupă ^99mTc, ^94mTc, ⁹⁵Tc, ¹¹ Ίη. Cu, ⁴³Sc, ⁴⁵Ti, Ga, Ga, Ru, ⁷²As, Rb și ^Tl.

33. Produs radiofarmaceutic. caracterizat prin aceea că conține un complex de reactivi, având caracteristicile definite în revendicarea 19 și o radionuclidă selectată dintre o grupă ^99mTc, “^mTc, ⁹⁵Tc, ¹¹ Ίη, Cu, ⁴³Sc, ⁴⁵Ti, Ga, Ga, Ru, ⁷²As, ⁹²Rb și ²⁰¹TI.

34. Produs radiofarmaceutic. caracterizat prin aceea că conține un complex de reactivi, având caracteristicile definite în revendicarea 20 și o radionuclidă selectată dintre o grupă ^99mTc, “Tc, ⁹⁵Tc, ¹¹Ίη, Cu, ⁴³Sc, ⁴⁵Ti, Ga, Ga, Ru, ⁷²As, Rb și ²⁰¹TI.

35. Produs radiofarmaceutic. caracterizat prin aceea că conține un complex de reactivi, având caracteristicile definite în revendicarea 21 și o radionuclidă selectată dintre o grupă ^99mTc, ¹¹ Ίη și Cu.

36. Produs radiofarmaceutic. caracterizat prin aceea că conține un complex de reactivi, având caracteristicile definite în revendicarea 22 și o radio-nuclidă selectată dintre o grupă ⁹⁹Tc, ¹¹ Ίη și Cu.

37. Produs radiofarmaceutic. caracterizat prin aceea că conține un complex de reactivi având caracteristicile definite în revendicarea 23 și o radionuclidă selectată dintre o grupă ^99mTc, ¹¹ Ίη și Cu.

38. Produs radiofarmaceutic. caracterizat prin aceea că conține un complex de reactivi având caracteristicile definite în revendicarea 24 și o radionuclidă selectată dintre o grupă ^99mTc și ¹¹¹ln.

RO 114895 Bl

39. Produs radiofarmaceutic. conform revendicării 29, caracterizat prin aceea că, este reprezentat de una din formulele de mai jos;

8590 h₂nNH

NH

C/\J ^KNY^V°^H

HN^O °

8595

NH

Λ

8600

8605

8610

H₂N

CL·

Λ *τ ·· If1Τ γ~γ

X Ο

8615

N O N ^=^{7 H}

ΝΗ ΗΝΌ

6620

Ο„ tf I

HO OH HO²

OH

8625

8630

RO 114895 Bl

8635

8640

8645

8650

8655

8660

8665

8670

RO 114895 Bl

8675

O

8680

8685

8690

8695

8700

8705

8710

RO 114895 Bl

NH

RO 114895 Bl

8760

NH

8765

8770

8775

8780

8785

8790

8795

RO 114895 Bl \m/

A

NH .o .NHj ♦K

RO 114895 Bl

40. Metodă de vizualizare a poziției depozitului plachetar la un mamifer, prin radiovizualizare, caracterizată prin aceea că, (i] se administrează la acel mamifer o cantitate eficientă din produsul radiofarmaceutic având caracteristicile definite la 8850 revendicarea 29, după care are loc (ii) scanarea mamiferului, utilizând un dispozitiv de radiografiere.

41. Metodă de vizualizare a poziției depozitului plachetar la un mamifer, prin radiovizualizare, caracterizată prin aceea că, (i) se administrează la acel mamifer o cantitate eficientă din produsul radiofarmaceutic având caracteristicile definite la 8855 revendicarea 30, după care are loc (ii) scanarea mamiferului, utilizând un dispozitiv de radiografiere.

42. Metodă de vizualizare a poziției depozitului plachetar la un mamifer, prin radiovizualizare, caracterizată prin aceea că, (i) se administrează la acel mamifer, o cantitate eficientă din compusul radiofarmaceutic având caracteristicile definite la 8860 revendicarea 31, după care are loc (ii), scanarea mamiferului, utilizând un dispozitiv de radiografiere.

43. Metodă de vizualizare a poziției depozitului plachetar la un mamifer, prin radiovizualizare, caracterizată prin aceea că, (i) se administrează la acel mamifer, o cantitate eficientă din compusul radiofarmaceutic având caracteristicile definite la 8865 revendicarea 32, după care are loc (ii), scanarea mamiferului, utilizând un dispozitiv de radiografiere.

44. Metodă de vizualizare a poziției depozitului plachetar la un mamifer, prin radiovizualizare, caracterizată prin aceea că, (i) se administrează la acel mamifer, o cantitate eficientă din compusul radiofarmaceutic având caracteristicile definite la 8870 revendicarea 33, după care are loc (ii), scanarea mamiferului, utilizând un dispozitiv de radiografiere.

45. Metodă de vizualizare a poziției depozitului plachetar la un mamifer, prin radiovizualizare, caracterizată prin aceea că, (i) se administrează la acel mamifer, o cantitate eficientă din compusul radiofarmaceutic având caracteristicile definite la 8875 revendicarea 34, după care are loc (ii), scanarea mamiferului, utilizând un dispozitiv de radiografiere.

46. Metodă pentru vizualizarea poziției depozitului plachetar la un mamifer, prin radiovizualizare, caracterizată prin aceea că, (i) se administrează la acel mamifer o cantitate eficientă din compusul radiofarmaceutic având caracteristicile definite la 8880 revendicarea 35, după care are loc (ii), scanarea mamiferului, utilizând un dispozitiv de radiografiere.

47. Metodă de vizualizare a poziției depozitului plachetar la un mamifer, prin radiovizualizare, caracterizată prin aceea că, (i) se administrează la acel mamifer, o cantitate eficientă din compusul radiofarmaceutic având caracteristicile definite la 8885 revendicarea 36, după care are loc (ii), scanarea mamiferului, utilizând un dispozitiv de radiografiere.

48. Metodă pentru vizualizarea poziției depozitului plachetar la un mamifer, prin radiovizualizare, caracterizată prin aceea că, (i) se administrează la acel mamifer, o cantitate eficientă din compusul radiofarmaceutic având caracteristicile definite la 8890 revendicarea 37, după care are loc (ii), scanarea mamiferului, utilizând un dispozitiv de radiografiere.

49. Metodă pentru vizualizarea poziției depozitului plachetar la un mamifer, prin radiovizualizare, caracterizată prin aceea că, (i) se administrează la acel mamifer, o cantitate eficientă din compusul radiofarmaceutic având caracteristicile definite la 8895 revendicarea 38, după care are loc (ii), scanarea mamiferului, utilizând un dispozitiv

RO 114895 Bl de radiografiere.

50. Metodă pentru vizualizarea poziției depozitului plachetar la un mamifer, prin radiovizualizare, caracterizată prin aceea că, (i) se administrează la acel mamifer, o cantitate eficientă din compusul radiofarmaceutic având caracteristicile definite la revendicarea 39, după care are loc (ii), scanarea mamiferului, utilizând un dispozitiv de radiografiere.

51. Compus radiomarcat direct, caracterizat prin aceea că prezintă formula generală I:

.K—/

J /

_R32 l

NR² (R²² (R²³)C / 2! ! C(R²¹)R¹)_n.

(I) sau o sare acceptabilă farmaceutic sau o formă promedicament al acestuia, în care: R³¹ este un sistem ciclic carbociclic (C₆-C₁₄) saturat, parțial saturat sau aromatic, substituit cu O...4 R¹⁰ sau R^10a;

R³² este selecționat dintre:

-C(=0)-; C(=S)-; -S(=0)₂-; -S(=0)-; -P(=Z)(ZR¹³)-;

Z este S sau O; n”și n'sunt independent O...2;

R¹ și R²² sunt independent selectați din următoarele grupări: hidrogen, alchil (^-Cg) substituit cu O...2 R¹¹; alchenil (C2-Cg) substituit cu O...2 R¹¹; achinil (C^-Cg) substituit cu O...2 R¹¹; cicloalchil C3-C₁₀ substituit cu O...2 R¹¹; arii substituit cu O...2 R¹²; un sistem ciclic heterociclic cu 5...10 membri conținând 1...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O, acest ciclu heterociclic fiind substituit cu O...2 R¹²; =0, F, CI, Br, I, -CF3, -CN. -C0PR¹³, -C(=0)R¹³, -C(=0)N(R¹³)2, -CHO, -CH_P0R¹³, -OC(=O)R¹³, -0C(=0)0R^13a, -OR¹³, -0C(=0)N(R¹³)_P, -NR¹³C(=0)R¹³, -NR¹⁴C(=0)0R^13a, -NR¹³C(=0)N(R¹³)2, -NR¹⁴S02N(R¹³)g, -ΝΡ^δΟ,Ρ³³, -SCȚH, -S^R¹³³. -SR¹³ , -S(=0)Ff^3a, -S0_PN(R¹³)P, -NfR¹³^-, -NHC(=NH)NHR¹³, -C(=NH)NHR¹³, =N0R¹³, NO,, -C(=0)NH0R¹³, -C(=0)NHNR¹³R^13a, -0CH2C0₂H, 2-(1-morfolino)etoxi;

R¹ și R²¹ pot fi alternativ legați pentru a forma un ciclu carbociclic cu 3...7 membri, substituit cu O...2 R¹²;

când n'este 2, R¹ sau R²¹ pot fi alternativ luați împreună cu R¹ sau R²¹ la un atom de carbon adiacent, pentru a forma o legătură directă, prin care se formează apoi o legătură dublă sau triplă între acești atomi de carbon;

R²² și R²³ se pot uni alternativ pentru a forma un ciclu carbociclic cu 3...7 membri, substituit cu O...2 R¹²;

când neste 2, R²² sau R²³ pot fi alternativ uniți cu R²² sau R²³ la atomul de carbon adiacent, pentru a forma o legătură directă, prin care se formează o legătură dublă sau triplă între atomii de carbon adiacenți;

R¹ și R², în care R²¹ este H, pot fi alternativ uniți pentru a forma un ciclu carbociclic cu 5...8 membri, substituit cu O...2 R¹²;

R¹¹ este selectat dintr-unul sau mai mulți dintre radicalii:

=0. F, CI, Br, I, -CF₃, -CN, -C0_PR¹³, -C(=0)R¹³, -C(=0)N(R¹³)₂, -CHO, -CH_P0R¹³,

-0C(=0)R¹³, -OC(=0)0R^13a,- OR¹³, -OC(=O)N(R¹³)_P, -NR¹³C(=0)R¹³, -NR¹⁴C(=0)0R^13a,

-NR¹³C(=O)N(R¹³)2, -NR¹⁴S02N(R¹³)2, -NR¹⁴S02N(R¹³)2, -NR¹⁴S02R^13a, -S0₃H,

-S0₂R^13a, -SR¹³, -S(=0)R^13a, -S02N(R¹³)2, -N(R¹³)_a, -NHC(=NH)NHR¹³, -C(=NH)NHR¹³,

RO 114895 Bl =N0R¹³, N02, -C(=0)NH0R¹³, -C(=0)NHNR¹³R^13a, -OCH2CO₂H, 2-(1-morfolino)etoxi; alchil (^-Cs), alchenil (C^-CXJ, cicloalchil (Cg-Cy, cicloalchil (Cg-Cy metil, alcoxialchil (CgC₆), cicloalcoxi (C₃-C₆], alchil (C^CJ radicalul alchil fiind substituit cu 1...5 grupe selectate independent dintre: NR¹³R¹⁴, -CF₃, NO_P, -SO_PR^13a sau -5(=0)R^13a, arii substituit cu O. ..2 R¹², un sistem ciclic heterociclic cu 5...10 membri, conținând 1...4 8950 heteroatomi selectați independent dintre N, S și O, acest ciclu fiind substituit cu O...2 R¹²;

R¹² este selectat dintr-una sau mai multe din următoarele grupe: fenil, benzii, fenetil, fenoxi, benziloxi, halogen, hidroxi, nitro, ciano, alchil (0_η-0₅], cicloalchil (C₃-C₆), cicloalchil(C₃-C₆)metil, arilalchil (C₇-C_1O), alcoxi (C.,-C₅), -C0₂R¹³, -C(=0)NH0R^13a, 8955

-C(=0)NHN(R¹³]2, =N0R¹³, -B(R³⁴)(R³⁵], cicloalcoxi (C3-CJ, -0C(=0)R¹³, -C(=0)R¹³, -0C(=0)0R^13a, OR¹³, -(0^4 alchil) - OR¹³, -N(R¹³)2, -OC(=O]N(R¹³)2, -NR¹³C(=0)R¹³, -NR¹³C(=0]0R^13a, -NR¹³C(=0]N(R¹³]2, -NR¹³S02N(R¹³]2, -NR¹³5O,R^13a, -SOgH, ^R¹³³, -S(=0)R^13a, -SR¹³, -S02N(R¹³)2, alcoxialchil (Cg-Cy, metilendioxi, etilendioxi, haloalchil (C,C4), haloalcoxi (C.,-C₄), alchil (C.,-C₄] carboniloxi, alchil (C.,-C₄] carbonil, alchil (C.,-C₄] 8960 carbonilamino, -0CH₂C0₂H, 2-(1-morfolino)etoxi, alchil (C.,-C₄) (alchilul fiind substituit cu -N(R¹³)_P, -CF₃, N0₂ sau -5(=0)R^13a);

R¹³ este selectat independent dintre: H, alchil (Ο,-Ο,ο), cicloalchil (C₃-C₁₀), alchil- (C₄C₁₂)cicloalchil, arii, -(0,-0^ alchil) arii sau alcoxialchil (C₃-C₁₀);

R^13a este alchil (C.,-Cy .cicloalchil (Cg-Cy, alchil(C₄-C₁₂)cicloalchil, arii, -(Ο,-Ο,ο alchil) 8965 arii sau alcoxialchil (C₃-C₁₀);

când cele două grupe R¹³ sunt legate la un singur N, acestea pot fi alternativ legate împreună pentru a forma -(CH₂)₂.₅- sau -(CH₂]0(CH₂]-;

R¹⁴ este OH, H, alchil (C.,-C₄) sau benzii;

R²¹ și R²³ sunt independent selectate dintre: hidrogen, alchil (0,-0₄) opțional substituit 8970 cu 1...6 atomi de halogen, benzii,

R² este H sau alchil (0.,-Cg);

rio p-ioa _sunț. _se|_ectgt_e independent din una sau mai multe grupe: fenil, benzii, fenetil, fenoxi, benziloxi, halogen, hidroxi, nitro, ciano, alchil (C.,-C₅), cicloalchil (C₃-C₆), cicloalchil (C₃-C₆) metil, arilalchil (C₇-C₁₀), alcoxi (C.,-C₅], -C0₂R¹³, -C(=0)N(R¹³)₂, 8975

-C(=0]NH0R^13a, C(=0)NHN(R¹³)2, =N0R¹³ -B(R³⁴)(R³⁵), cicloalcoxi (C3-C₆), -OC(=0)R¹³, -C(=0]R¹³, -0C(=0)0Rl^3a, -OR¹³, -(C,^ alchil] - OR¹³, -N(R¹³]P, -0C(=0]N(R¹³)P,

-NR¹³C(=0]R¹³, -NR¹³C(=0)0R^13a, -NR¹³C(=0)N(R¹³]2, -NR¹³S02N(R¹³)2, -NR¹³S02R^13a,

-S0₃H, -50₂R^13a, -S(=0)R^13a, -SR¹³, -60PN(R¹³)2, alcoxialchil (C₂-Cy, metilendioxi, etilendioxi, haloalchil (C.,-C₄),(incluzând -CvFw în care v=1 la 3 și w - 1 la (2v+1)], 8980 haloalcoxi (0_η-0₄], alchil (C.,-C₄) carboniloxi, alchil- (C.,-C₄)carbonil, alchil-(C.,C₄]carbonilamino, -0CH₂C0₂H, 2-(1-morfolinojetoxi, alchil (C.,-C₄) (radicalul alchil fiind substituit cu -N(R¹³)₂, -CF₃, N0₂ sau -S(=0)R^13a);

J este β-Ala sau L-izomer sau D-izomer al unui aminoacid cu structura: -N(R³)C(R⁴](R⁵)C(=0)-, în care: 8985

R³ este H sau alchil (C^-Cg); R₄ este H sau alchil (0.,-0₃);

R⁵ este selectat dintre: hidrogen, alchil (0.,-Cy substituit cu O...2 R¹¹; alchenil (Cg-Cy substituit cu O...2 R¹¹; alchinil (C2-C8) substituit cu O...2 R¹¹; cicloalchil (C3-C₁₀) substituit cu O...2 R¹¹; arii substituit cu O...2 R¹²;

un sistem ciclic heterociclic cu 5...10 membri conținând 1 ...4 heteroatomi selectați 8990 independent dintre N, S sau O, acest ciclu heterociclic fiind substituit cu O...2 R¹²;

=0, F, CI, Br, I, -CF₃, -CN, -C0₂R¹³, -C(=0)R¹³, -C(=0)N(R¹³)₂, -CHO, -CH₂0R¹³,

-0C(=0]R¹³, -OC(=0)0R^13a, OR¹³, -0C(=0)N(R¹³)P, -NR¹³C(=0)R¹³, -NR¹⁴C(=0)0R^13a, -NR¹³C(=0)N(R¹³)2, HR^S^NIR¹³/ -NR^SO.R’³³, -6(¾ H, -5(¾ R¹³³, -SR¹³ , -S^OJR¹³³,

RO 114895 Bl

-SO₂N(R¹³)2, -N(R¹%, -NHC(=NH)NHR¹³, -C(=NH)NHR¹³. =N0R¹³, NO,, -C(=0)NH0R¹³, -C(=0)NHNR¹³R^13a, =N0R¹³, -B(R³⁴)(R³⁵) -OCH2CO₂H, 2-(1-morfoli no) etoxi, -SC(=NH)NHR¹³, N₃, -Si(CH₃)₃ , (C^-Cg alchil)NHR¹⁶; -(Co-Cg alchilJX;

-(CH₂) q y—(CH₂) q-X î_n care q _est_e independent O sau 1;

— ch₂ -O-^c^

-(CH₂)_mS(0)_p, (CH₂)₂Xîn care m este 1, 2 și p’este O...2;

în care X este definit mai jos și R³ și R⁴ pot fi luați împreună pentru a forma:

(CH₂)_nX

I

-CH₂CH-CH₂- , în care n este O sau 1 și X este:

.NR¹³ —NH—

NiR¹³)^ ;

R³ și R⁵ pot fi luați alternativ împreună pentru a forma:

-(CH₂)_t- sau -CH₂S(0]_p.C(CH₃]₂-, în care t= 2...4 și p’ = O...2; sau

R⁴ și R⁵ pot fi luați alternativ împreună pentru a forma:

-{CH₂)_u-, în care u = 2...5;

R¹⁶ este selectat dintre: o grupă amino de protecție; 1...2 aminoacizi; 1...2 aminoacizi substituiți cu o grupă amino de protecție; K este un D-izomer sau L-izomer al unui aminoacid cu formula de structură: -N(R⁶)CH(R⁷]C(=0)-, în care: R⁶ este H sau alchil (0_η-0₈); R⁷ este selectat dintre : -{CȚ-Cy alchilJX;

—^<CK2’q~ ‘(CH₂) q-X în care fiecare q este independent O...2 și substituirea la fenil este în poziția 3 sau 4;

—(CH,) ’O (CH₂) _q-X în care fiecare q este independent selectat din O...2 și substituirea la ciclohexil se face în poziția 3 sau 4; - (Cj-Cg)alchil)

-(CH₂]_m0- (C.,-C₄ alchilJ-X, în care m = 1 sau 2;

-ÎCH₂)_mS(0)p.- (C,-C₄ alchil)-X, în care m este 1 sau 2 și p’este O...2 și X este selectat dintre:

RO 114895 Bl

9045

9050

52. Compus radiomarcat, conform revendicării 51, caracterizat prin aceea că, R³¹ este legat la (C(R²³)R²²)n și (C(R²¹)R¹)n. la doi atomi diferiți din ciclul carbociclic.

53. Compus radiomarcat, conform revendicării 51, caracterizat prin aceea că, n este O și n' este O; n este O și n’ este 1; n“ este O și n‘ este 2; n este 1 și n’este O; neste 1 și n’este 1; neste 1 și n'este 2; neste 2 și n'este O; neste 9090 2 si n'este 1; sau neste 2 si n'este 2.

RO 114895 Bl

9095

9100 i

»

9105

54. Compus radiomarcat, conform revendicării 51, caracterizat prin aceea că, R^B este un radical metil, etil sau propil;

55. Compus radiomarcat, conform revendicării 51, caracterizat prin aceea că, R³¹ este selectat dintr-o grupă care constă din:

(a) un ciclu carbociclic cu 6 membri, saturat, parțial saturat sau aromatic, substituit cu O...3 R¹⁰ sau R^10a;

(b) un ciclu carbociclic biciclic condensat având 8...11 membri, saturat, parțial saturat sau aromatic, substituit cu O...4 R¹° sau R^10a; sau (c) un ciclu carbociclic triciclic condensat cu 14 membri, saturat, parțial saturat sau aromatic, substituit cu O...4 R¹⁰ sau R^1Oa;

56. Compus radiomarcat, conform revendicării 51, caracterizat prin aceea că, R³¹ este selectat dintr-o grupă care constă din: a) un ciclu carbociclic cu 6 membri, saturat, parțial saturat sau aromatic, având formula:

9110

9115 în care oricare legătură care formează ciclul carbociclic poate fi o legătură simplă sau dublă, și în care acest ciclu carbociclic este substituit independent cu O...4 R¹°; b) un ciclu carbociclic cu 10 membri, saturat, parțial saturat sau aromatic, având formula:

9120

9125 în care orice legături formatoare de ciclu carbociclic pot fi o legătură simplă sau o legătură dublă și în care acest ciclu carbociclic este independent substituit cu O...4 R¹° sau R^1Oa;

c) un ciclu carbociclic biciclic având 9 membri, saturat, parțial saturat sau aromatic având formula:

9130

9135

9140 în care orice legături care formează ciclul carbociclic, pot fi legături simple sau duble și în care acest ciclu carbociclic este substituit independent cu O...4 R¹⁰ sau R^1Oa.

57. Compus radiomarcat, conform revendicării 51, caracterizat prin aceea că, R³¹ este selectat dintre radicalii având formulele următoare, în care legătura de bază este o legătură simplă sau dublă:

RO 114895 Bl

9145

9150

9155

9160

9165 π”este O sau 1; și n'este O...2;

58. Compus radiomarcat, conform revendicării 51, caracterizat prin aceea că, R¹ și R²² sunt independent selectați dintre:

fenil, benzii, fenetil, fenoxi, benziloxi, halogen, hidroxi, nitro, ciano, alchil (0,-0^, cicloalchil (C₃-C₆), cicloalchil(C₃-C₆]metil, arilalchil (C /3 J, alcoxi (C Ț3 1 -CO F|¹³, -C(=0)NHQR^13a, -C(=0)NHN(R¹³)2, =N0R¹³ -B(R³⁴)(R³⁵), cicloalcoxi (C3-C₆], -0C(=0]R¹³, -C(=0]R¹³, 0C(=0)0R^13a, OR¹³, -(C.-Q* alchil) - OR¹³. -N(R¹³)S, -OC(=0)N(R¹³)2,

-NR¹³C(=0)R¹³, -NR¹³C(=0)0R^13a, -NR¹³C(=0)N(R¹³)2, -NR¹³S02N(R¹³)2, -NR¹³S02R^13a,

-S0₃H, -S0₂R^13a, -S(=0)R^13a, -SR¹³, -S0aN(R¹³)a, alcoxialchil (C₂-C₆), metilendioxi, etilendioxi, haloalchil (C.,-C₄), haloalcoxi (C.,-C₄], alchil(C₁-C₄)carboniloxi, alchil(C.,CJcarbonil, alchil(C₁-C₄)carbonilamino, -0CH₂C0₂H, 2-t1-morfolino)etoxi, (Ο,-CJ alchil (radicalul alchil fiind substituit cu -N(R¹³)₂, -CF₃, N0₂ sau -S(=0)R^13a).

59. Compus radiomarcat, conform revendicării 51, caracterizat prin aceea 9170 că, R³¹ este selectat dintre radicalii având următoarele formule:

9175

9180

9185

9190

RO 114895 Bl

3195

9200 ț

9205

9210

9215

9220

9225

9230

9235 în care R³¹ poate fi substituit independent cu O...3 R¹⁰ sau R^10a; R³² este -C(=0); n este O sau 1; n'este O...2; R¹ și R²² sunt independent selectați dintre H, alchil (C,C₄), fenil, benzii, fenil - (C₂-C₄) alchil, alcoxi (C,-C₄);

R²¹ și R²³ sunt independent H sau alchil (C,-C₄);

R² este H sau alchil (C,-C₈);

R¹³ este selectat independent dintre: H, alchil (C,-C,_o), cicloalchil (C₃-C₁₀), alchil- (C₄C,₂)cicloalchil, arii, -(C,-C,_o alchil) arii, -(0,-0,0 alchil) arii sau alcoxialchil (C₃-C,_o);

R^13a este alchil (C,-C,o), cicloalchil (C3-C10), alchil(C4-C,2)cicloalchil, arii, -(C,-C,o alchil] arii sau alcoxialchil (C3-C,o); când două grupe R¹³ sunt legate la un singur N, acestea pot fi luate alternativ împreună pentru a forma -(CH2)₂_₅- sau -(CH₂)0(CH₂)-;

R¹⁴ este OH, H, alchil (C,-C₄) sau benzii;

R¹⁰ și R^10a sunt selectați independent dintre: H, alchil (Ο,-Cg), fenil, halogen sau alcoxi (C,-C₄);

J este β-Ala sau un L-izomer sau D-izomer al unui aminoacid cu structura: -N(R³)C(R⁴)(R⁵]C(=0)-în care:

R³ este H sau CH3; R⁴ este H sau alchil (C,-C3);

R⁵ este H, alchil (C,-C₈), cicloalchil (C₃-C₆), cicloalchil (C₃-C₆)metil, cicloalchil (C,-C₆) etil, fenil, fenilmetil, CH₂OH, CH₂SH, CH₂0CH₃, CH₂SCH₃, CH₂CH₂SCH₃, (CH₂)_SNH₂, -(CH₂)_SNHC(=NH)(NH₂), -(CH₂]_SNHR,₆, în care s= 3....5 sau

R^1S este selectat dintre: o grupă de protecție amino; 1...2 aminoacizi sau 1...2 aminoacizi substituiți cu o grupă de protecție amino;

R³ și R⁵ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma:

-(CH₂]_t- (t = 2...4) sau CH₂SC(CH₃)₂- s.au:

R⁴ și R⁵ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma -(CH_a)_u-în care u = 2...5;

K este un L-izomer al aminoacidului cu structura:

-N(R⁶) CH(R⁷) C(=0), în care: R⁶ este H sau alchil (C,-C₈);

-(CH₂]_mS(CH₂)₂X, în care m = 1 sau 2; -alchil (C₃-C₇)-NH-alchil (C,-C₆) ,NH

0-3

RO 114895 Bl

-{CHa^-CH^-Q, alchilJ-NH-ÎC^-Qj alchil), în care m= 1 sau 2; -(CHJ^C,-^ alchil)-NH- 9240 (Ο,,-Οθ alchil), în care m = 1 sau 2; și X este -NH₂ sau -NHC(=NH)(NH₂) sau;

R⁶ și R⁷ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma;

(CH₂)_nX

-CH₂CH-CH₂- , în care n = O sau 1 și X este -NH₂ sau -NHC(=NH)(NH₂); 9245 L este -Y(CH₂)_vC(=0)- în care:

Y este NH, O sau S și v= 1 sau 2;

M este un D-izomer sau L-izomer al aminoacidului cu structura;

-NR¹⁷-CH-C(=0)(CH(R⁴) ) q’

9250 în care; q'este O...2; R¹⁷ este H, alchil (C.,-C₃);

R⁸ este selectat dintre; 9255

-C0₂R¹³, -SCLjR¹³, -SOgNHR¹⁴, -B(R³⁴)(R³⁵), -NHSOgCFg, -CONHNHSO^CF3, -POfOR¹³^, -P0(0R¹³)R¹³, -S02NH-heteroaril (acest heteroaril având 5...10 membri și 1...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O), - S0₂NH-heteroaril (acest heteroaril având 5...10 membri și 1...4 heteroatomi selectați independent dintre N,

S sau O), -S0₂NHC0R¹³, -C0NHS02R^13a, -CH2C0NHS0₂R^13a, -NHC0NHS02R^13a, 9260 -NHS02NHC0R^13a, -S0₂NHC0NHR¹³.

60. Compus radiomarcat, conform revendicării 51, caracterizat prin aceea că este compusul 1,3-fenil disubstituit radiomarcat, având formula generală II:

/

J \

0=C

9265

9270 (II) în care ciclul fenii poate fi substituit cu O...3 R¹⁰; 9275

R¹⁰ este selectat independent dintre: H, alchil (C₁-C_a), fenii, halogen sau alcoxi (C,-C₄);

R¹ este H, alchil (C.,-C₄), fenii, benzii sau fenii -(C₁-C₄)-alchil; R² este H sau metil;

R¹³ este selectat independent dintre; H, alchil (C.,-C₁₀), cicloalchil (C₃-C₁₀), alchil- (C₄C₁₂)ciclocalchil, arii, -(0,-0^ alchil) arii sau alcoxialchil (C₃-C₁₀);

R¹³ este alchil (C₁-C₁₀), cicloalchil (C₃-C₁₀), alchil(C₄-C₁₂)cicloalchil, arii, -(0,-0^ alchil) 9280 arii sau alcoxialchil (C₃-C₁₀);

când cele două grupe R¹³ sunt legate la un singur N, aceste grupe R¹³ pot fi alternativ luate împreună pentru a forma -{CH2)2.5- sau -(CH2) O (CHg)-; R¹⁴ este OH, H, alchil (O, C4) sau benzii;

J este β-Ala sau L-izomerul sau D-izomerul aminoacidului cu structura: 9285

-N(R³) C (R⁴)(R⁵) C(=0), în care:

R³ este H sau CH3; R⁴ este H sau alchil (C.,-C3);

R⁵ este H, alchil (Ο,-Cg), cicloalchil (Cg-Cy, cicloalchi (Cj-C^Jmetil, cicloalchil (0,-Q)- etil,

RO 114895 Bl

9290

9295 fenil, fenilmetil, CH₂OH, CH₂SH, CH₂0CH₃ CH^CH₃ CHf3H^CH₃ (CHJJMH₂ (CH₂)_SNHC(=NH)(NH₂), -(CH₂)_SNHR¹⁶, în care s= 3...5 sau:

R¹⁶ este selectat dintre:

o grupă de protecție amino, 1...2 aminoacizi sau 1...2 aminoacizi substituiți cu o grupă de protecție amino;

R³ și R⁵ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma o grupă -CH2CH2-CH2- sau R⁴ și R⁵ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma o grupă -(CH2)_u-în care u = 2...5; K este un L-izomer al unui aminoacid cu structura:

-N(R⁶] CH(R⁷) C(=0)-, în care:

R⁶ este H sau alchil (C₁-C_s); R⁷ este:

9300

II

9305

9310

9315

9320

-fCHg^SfCHglaX, ^în care ^m = 1 ^sau fC₃-C₇ alchill-NH-fCȚ-Ce alchil)

9325

-(CH₂)_m-O-(C₁-C₄ alchilJ-NH-ÎCy-Cg alchil) în care m = 1 sau 2

-{CH₂)_m-S(C₁-C₄ alchiO-NH-ÎC-j-Ce alchil] în care m = 1 sau 2 și X este -NH_P sau -NHC(=NH](NH₂), cu condiția ca X să fie diferit de -NH₂, când r = 4 sau R⁶ și R⁷ sunt alternativ luați împreună pentru a forma:

(CH₂)_nX

9330

9335

-CH₂CH-CH₂- , în care n = 0 sau 1 și X este -NH_P sau -NHC(=NH)(NH₂);

L este -Y(CH₂)_vC(=0)-, în care:

Y este NH, O sau S; și v= 1 sau 2;

M este un izomer D sau un izomer L al unui aminoacid cu structura: -NR¹⁷-CH-C(=0)(CH (R⁴) )_q.

R^e în care: g’este O...2; R¹⁷ este H, alchil (C.,-C₃);

R⁸ este selectat dintre:

RO 114895 Bl

-C0₂R¹³, -SOgR¹³, -SQjNHR¹⁴, -B(R³⁴)(R³⁵], -NHSQ,CF3, -C0NHNHS0^CF3, -POfOR¹³^, -P0(0R¹³)R¹³, -SO2NH-heteroaril, acest heteroaril având 5...10 membri și 1...4 heteroatomi selectați independent dintre N, S sau O, -SO₂NH-heteroaril, acest 9340 heteroaril având 5...10 membri și 1...4 heteroatomi selectați independent dintre N,

S sau O, -S0₂NHC0R¹³, -C0NHS02R^13a, -CH2C0NHS0₂R^13a, -NHS02NHC0R^13a, -NHC0NHS02R^13a, -S0₂NHCONHR¹³.

61. Compus radiomarcat, conform revendicării 51, caracterizat prin aceea că este 1,3-fenil disubstituit radiomarcat având formula generală II: 9345 /

J \

0=C (II)

9350

9355 în care ciclul fenil în formula (II] poate fi substituit cu O...3 R¹⁰ sau R^10a;

R¹⁰ sau R^10a sunt selectați independent dintre: H, alchil (C₁-C_B], fenil, halogen sau alcoxi (C.,-C₄];

R¹ este H, alchil (C.,-C₄), fenil, benzii sau fenialchil (C₂-C₄);

R² este H sau metil; R¹³ este selectat independent dintre: 9360

H, alchil (C_q-C_1Q), cicloalchil (C^-C^), alchil(C₄-C,₂]cicloalchil, arii, -(C,-C,_o alchil) arii sau alcoxialchil(C₃-C_1o);

când cele două grupe R¹³ sunt legate la un singur N, aceste grupe R¹³ pot fi alternativ luate împreună pentru a forma o grupă:

-(CH₂)_{2 5}- sau -(CH₂) O (CH₂)-; 9365

R^13a este alchil (C₁-C₁₀), cicloalchil (C₃-C₁₀), alchil(C₄-C₁₂]cicloalchil, arii, -(0.,-0.,0 alchil] arii sau alcoxialchil (C₃-C_1O);

R₁₄ este OH, H, alchil (C₁-C₄) sau benzii;

J este β-Ala sau un L-izomer sau un D-izomer al unui aminoacid cu structura

-N(R³) C(R⁴)(R⁵) C(=0)-, în care: R³ este H sau CH₃; R⁴ este H; 9370

R⁵ este H, alchil (Ο,-Cg), cicloalchil (Cg-QJ, cicloalchilfCj-Q) metil, cicloalchil (0,-C^)- etil, fenil, fenilmetil, CH₂0H, CH₂SH, CH₂0CH₃, CH₂SCH₃, CH₂CH₂SCH₃, (CH₂)_SNH₂, (CH₂)_sNHC(=NH)(NH₂), (CH₂)_sR¹⁶. în care s= 3...5;

R³ și R⁵ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma o grupă -CH₂CH₂-CH₂-; R¹⁶ este selectat dintre: o grupă de protecție amino, 1...2 aminoacizi: 1...2 aminoacizi 9375 substituiți cu o grupă de protecție amino;

K este L-izomer al unui aminoacid cu structura:

-N(R⁶) CH(R⁷) C(=0]-în care:

R⁶ este H sau alchil (C₃-C₈); R⁷ este:

9385

RO 114895 Bl

-{ΟΗ^,Χ, în care r = 3...6;

CH₂X

-(CH₂)_mS(CH₂)₂X, în care m = 1 sau 2; -(C₄-C₇ alchilJ-NH-iC^e alchil)

- (C₁-C₄alchil)

NH

0-3

-iCH₂)_m-0-(C.,-C₄ θΙοΝΙ)-ΝΗ-(Ο_η-0₆ alchil) în care m = 1 sau 2;

-(CH^-S-tCȚ-Cț, alchilȚNH-tCȚ-Cg alchil) în care m = 1 sau 2 și X este -NH₂ sau

-NHC(=NH)(NH₂), cu condiția ca X să fie diferit de -NH₂, când r= 4 sau L este -YCH₂C(=0)- în care Y este NH sau O;

M este un D-izomer sau L-izomer al unui aminoacid cu structura:

-NR¹⁷-CH-C(=0)- în care q'este 1; R¹⁷ este H, alchil (C,-C3); R⁸ este selectat dintre: -C02H sau -S0₃R¹³.

62. Compus radiomarcat, conform revendicării 51, caracterizat prin aceea că este compusul radiomarcat cu formula generală II de mai sus, în care ciclul fenil poate fi substituit cu O...2 R¹⁰ sau R^10a;

R¹° sau R^1Oa sunt selectați independent dintre: H, alchil (Ο,-Cg), fenil, halogen sau alcoxi (C,-C₄);

R¹ este H, R² este H;

R¹³ este selectat independent dintre: H, alchil (C.,-C_1O), cicloalchil (C₃-C_1O), alchil- (C₄C₁₂)cicloalchil, arii, -(C.,-C_1O alchil) arii sau.alcoxialchil (C₃-C_1O);

R^13a este alchil (Ο,-Ο,θ). cicloalchil (C₃-C₁₀), alchil(C₄-C₁₂)cicloalchil, arii, -fC,-C₁₀ alchil)aril sau alcoxialchil (C₃-G_1O);

când cele două grupe R¹³ sunt legate la un singur atom de N, aceste grupe R¹³ pot fi luate alternativ împreună pentru a forma o grupă -(CH₂)₂.₅ sau:

-(CH₂) O (CH₂):

R¹⁴ este OH, H, alchil (C,-C₄) sau benzii;

J este β-Ala sau un L-izomer sau D-izomer al unui aminoacid cu formula:

-N(R³) CH(R⁵) C(=O)-în care:

R³ este H și R⁵ este H, CH3, CH2CH3, CH(CH3)2, CH(CH3)CH2CH3, CH2CH2CH3, CH2CH2CH2CH3, CH2CH2SCH3, CH2CH(CH3)2, (CH2)4NH2, (Cjj-Cș alchil)NHR¹⁶: sau R³ este CH3 și R⁵ este H; sau R³ și R⁵ pot fi alternativ luați împreună pentru a forma: CH₂CH₂CH₂-;

R¹⁶ este selectat dintre: o grupă amino de protecție, 1...2 aminoacizi; 1...2 aminoacizi substituiți cu o grupă amino de protecție;

K este un izomer L al unui aminoacid cu formula:

-N(CH₃) CH(R⁷) C(=0)-, în care: R⁷ este -{CH₂)₃- NHC(=NH)(NH₂); și L este NHCH₂C(=O)- și M este D-izomer sau L-izomer al unui aminoacid cu structura:

RO 114895 Bl

-NR¹⁷-CH-C(=0)(CHiR⁴) )_q.

i_E

R^e în care: <7'este 1; R⁴ este H sau CH3; R¹⁷ este H; R⁸ este -CO2H, -SO₃H. 9440

63. Compus radiomarcat, conform revendicării 51, caracterizat prin aceea că este compusul radiomarcat cu formula generală II sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, în care:

R¹ și R² sunt independent selectați dintre H, metil;

J este selectat dintre D-Val, acidul D-2-aminobutiric, D-Leu, D-Ala, Gly, D-Pro, D-Ser, 9445 D-Lys, β-Ala, Pro, Phe, NMeGly, D-NIe, D-Phg, D-lle, D-Phe, D-Tyr, Ala, Ν^ξ-ρazidobenzoil-D-Lys, N^-p-benzoilbenzoil-D-Lys, N^-triptofanil-D-Lys, N^o-benzil benzoil-DLys, N^-p-acetilbenzoil-D-Lys, N^-dansyl-D-Lys, N^licil-D-Lys, N^c-glicil-para-benzoilbenzoilD-Lys, Nⁱ-parafenil-benzoil-D-Lys, N^c-m-benzoilbenzoil-D-Lys, NOi-benzoilbenzoil-D-Lys;

K este selectat dintre NMeArg, Arg; 9450

K este ales dintre NMeArg, Arg;

L este selectat dintre Gly, β-Ala, Ala;

M este selectat dintre Asp; aMeAsp; pMeAsp; D-Asp.

64. Compus radiomarcat, conform revendicării 51, caracterizat prin aceea că este compusul radiomarcat cu formula generală II sau o sare a acestuia 9455 acceptabilă farmaceutic, în care:

R¹ șî R² sunt independent selectați dintre H, metil;

J este selectat dintre: D-Val, acidul D-2-aminobutiric, D-Leu, D-Ala, Gly, D-Pro, D-Ser,

D-LYs, β-Ala, Pro, Phe, NMeGly, D-NIe, D-Phg, D-lle, D-Phe, D-Tyr, Ala; K este selectat din NMeArg; 9460

L este Gly;

M este selectat dintre: Asp, aMeAsp, PMeAsp, NMeAsp; D-Asp.

65. Compus radiomarcat, conform revendicării 51, caracterizat prin aceea că este reprezentat de:

compusul radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este D-Val; K 9465 este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este acidul D-2aminobutiric; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este D-Leu; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp; 9470 compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este D-Ala, K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este Gly; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este D-Pro; K 9475 este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este D-Lys; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este β-Ala, K este NMeArg; L este Gly și M este Asp; 948Q compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este NMeGly;

K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ este metil (izomerul 1); R² sunt

H; J este D-Val; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

RO 114895 Bl compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ este metil (izomerul 2); R² este H; J este D-Val; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compusul radiomarcat cu formula generală ll în care R¹ este fenil (izomerul 1); R² este H; J este D-VAI; K este NMeArg; L este Gly; și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care J este D-Met, K este NMeArg, L este Gly, M este Asp, R¹ este H, R² este H;

compus radiomarcat cu formula generală II în care J=D-Abu, K = diNMe-guanidinil-Orn, L=Gly, M=Asp, R¹ este H, R² este H;

compus radiomarcat cu formula generală II în care J este D-Abu, K este diNMe-Lys, L este Gly, M este Asp, R¹ șî R² sunt H;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este N^-paraazidobenzoil-D-Lysina; K este NMeArg, L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este Ν^ξ-ρbenzoilbenzoil-D-Lysină; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este N-⁵ triptofanil-D-Lysină; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este Ν^ξ-οbenzilbenzoil-D-Lysină; K este NMeArg; L este Gly și M este As;.

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este Ν^ξ-ρacetilbenzoil-D-Lysină; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este IX^-dansyl-DLysină; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este N^-glycil-DLysină; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este N⁵-glicilpara-benzoilbenzoil-D-Lysină; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este Ν^ζ-ρfenilbenzoil-D-Lysină; K este NMeArg; L este Gly; și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este N^-mbenzoilbenzoil-D-Lysină; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt Η; K este MMeArg;

J este N^-o-benzoilbenzoil-D-Lysină; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală III în care R¹ și R² sunt H; J este D-Val; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este D-Val; K este D-NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este D-NIe; K este NMeArg; L este Gly; și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este D-Phg; K

RO 114895 Bl este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este D-Phe; K 9535 este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală V în care R¹ și R^a sunt H; J este D-lie; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

K /

J \

O=C

NR

9540 (CHR²²)_nCHR

9545 // (V) compus radiomarcat cu formula generală V în care n“ = 1, R¹, R² și R⁹² sunt H; J 9550 este D-Val; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală Vîn care n” = O, R¹ și R² sunt H; J este DVal; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

9555

9560 compus radiomarcat cu formula generală VI în care R¹ și R²² sunt H; J este D-Val; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

9565

9570 compus radiomarcat cu formula generală VII în care R¹, R² și R¹⁰ sunt H; R^10a este Cl; J este D-Val; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus cu formula generală VII, radiomarcat, în care R¹, R^a și R¹⁰ sunt H; R^1Oa este

I; J este D-Val; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală VII în care R¹, R^a și R¹⁰ sunt H; R^1Oa este 9580

I; J este D-Abu; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală VII în care R¹, R^a și R¹⁰ sunt H; R^1Oa este

RO 114895 Bl

Me; J este D-Val; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală VII în care R¹, R² și R^1Oa sunt H; R¹⁰ este CI; J este D-Val; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală VII în care R¹, R² și R^10a sunt H; R¹° este MeO; J este D-Val; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp; compus radiomarcat cu formula generală VII în care R¹, R² și R^10a sunt H; R¹⁰ este Me; J este D-Val; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală VII în care R¹, R² și R¹⁰ sunt H; R^10a este CI; J este D-Abu; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală VII în care R¹, R^a și R¹⁰ sunt H; R^1Oa este I; J este D-Abu; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală VII în care R¹, R² și R¹⁰ sunt H; R^1Oa este Me; J este D-Abu; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp; compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este D-Tyr; K este NMeArg; L este Gly; și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este D-Val; K este NMeAmf; L este Gly; și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ și R² sunt H; J este D-Val; K este NMeArg; L este Gly; și M este pMeAsp;

compus radiomarcat cu formula generală II în care R¹ este H; R² este CH₃; J este DVal; K este NMeArg; L este Gly; și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală III în care R¹ și R² sunt H; J este D-Val; K este NMeArg; L este Gly; și M este Asp;

compus radiomarcat cu formula generală VIII în care J este D-Val; K este NMeArg; L este Gly și M este Asp;

NH

HO

NH

HO.

125,.

.OH .OK

66. Compus radiomarcat, conform uneia dintre revendicările 51...65, caracterizat prin aceea că, radiomarcarea este selectată dintr-o grupă ¹⁸F, ¹¹C, ¹²³l, 125|

67. Compus radiomarcat, conform revendicării 66, caracterizat prin aceea că, radiomarcarea este o grupă ¹²³l.

RO 114895 Bl

68. Compus radiomarcat, conform revendicărilor 51 ...67, caracterizat prin aceea că se utilizează la determinarea depozitului plachetar la un mamifer.

69. Compus radiomarcat, conform revendicărilor 51 ...67, caracterizat prin aceea că se utilizează la diagnoza tulburărilor asociate cu depozitul plachetar la un 9635 mamifer.

70. Compus radiomarcat, conform revendicărilor 51 ...67, caracterizat prin aceea că se utilizează la determinarea depozitului plachetar la un mamifer sau la diagnoza tulburărilor asociate cu depozitul plachetar la un mamifer sub formă de compoziție farmaceutică, constituită dintr-o cantitate eficientă de compus radiomarcat 9640 având caracteristicile definite în revendicările 51 ...67 asociat cu un vehicul acceptabil radiofarmaceutic.