JPH10251287A - スフィンゴ糖脂質合成用高分子プライマーおよびその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【解決手段】 セリン誘導体の配糖体モノマー、該モノ
マーおよびアクリルアミドおよび／またはメタクリルア
ミドから製造された、高分子担体に、一般式（Ｉ）で表
される基が結合しているスフィンゴ糖脂質合成用高分子
プライマー、およびこれらの製造法、ならびに該高分子
プイライマーに糖ヌクレオチドの存在下に糖転移酵素を
作用させることにより、糖残基を該高分子プライマーに
転移させ、次いで糖残基が転移した高分子プライマー
に、セラミドの存在下にスフィンゴ糖脂質の糖とセラミ
ドとの間のグリコシド結合を加水分解する酵素を作用さ
せ、該高分子プライマーより、オリゴ糖残基をセラミド
に転移させることを特徴とするスフィンゴ糖脂質の製造
法。 【化１】

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明はセリン誘導体の配糖
体モノマー、該モノマーから製造されるスフィンゴ糖脂
質製造に有用な高分子プライマーおよびこれらの製造
法、ならびにスフィンゴ糖脂質合成用高分子プライマー
を使用したスフィンゴ糖脂質を製造する方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】糖は核酸や蛋白質と並んで生体を構成す
る主要な成分であるが、核酸や蛋白質と比べ、その構造
あるいは機能はあまりよく理解されていない。糖は通
常、糖鎖と呼ばれる重合体を形成し、さらに、それらが
蛋白質や脂質と結合して糖蛋白質、糖脂質あるいはプロ
テオグリカンと総称される極めて複雑な複合分子を形成
している。さらに、核酸あるいは蛋白質がその構成単位
であるヌクレオチドあるいはアミノ酸が直線的に結合し
た高分子であるのに対して、糖鎖は分子内に複数の分岐
点があるばかりでなく、その構成単位である単糖の結合
様式も多様であるため、その構造は核酸や蛋白質と比較
にならないほど複雑である。これら構造の複雑さが研究
の遅れの大きな原因の一つである。

【０００３】しかし、細胞認識、免疫、分化、受精、老
化、ガン化などに関与することが最近、徐々にわかって
くるにつれて、非常に注目される研究分野となってき
た。このような現状より、天然の構造を有する糖鎖や新
規な糖鎖を合成する試みが盛んになされている。核酸や
蛋白質については自動合成技術が確立されており、この
ことによりこの分野の研究が著しく進歩したことは誰も
が認めるところであり、糖鎖についてもその自動合成技
術の確立は切望されている。

【０００４】これまでに自動合成を試みたいくつかの報
告があり、その手法は大きく分けて２つある。１つは化
学合成によるものであるが、糖残基と糖残基を立体選択
的に結合させる方法が十分確立されておらず、さらに保
護基を結合させたり、あるいは脱離させたりと工程が煩
雑であるという問題がある。もう１つは酵素合成による
ものであり、保護基を必要とせず、また糖残基と糖残基
を立体選択的に結合させることができるので化学合成に
比べ、非常に有利である。C.-H. Wongらはアミノ化シリ
カに下記式１５の基を結合させたものをプライマーと
し、糖転移酵素を用い、糖鎖を伸長させた後、α−キモ
トリプシンの加水分解作用を利用し、伸長させた糖鎖を
切り出す方法を報告しているが(J. Am. Chem. Soc., 11
6, 1136 (1994)) 、得られるオリゴ糖鎖は糖ペプチドで
あり、スフィンゴ糖脂質を得ることはできない。

【０００５】

【化１５】 （式中、Ａｃはアセチル基、Ｂｏｃはｔ−ブトキシカル
ボニル基を示す）

【０００６】これ以外にもU. Zehavi ら(Reactive Poly
mers, 22, 171 (1994)) あるいはM. Meldal(J. Chem. S
oc., Chem. Commun., 1849 (1994))らも糖転移酵素を利
用した方法を報告しているが、いずれも得られるのはオ
リゴ糖あるいは糖ペプチドであり、スフィンゴ糖脂質を
得ることはできない。スフィンゴ糖脂質合成用のプライ
マーやプライマーを利用したスフィンゴ糖脂質の製造方
法は未だ知られていない。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、スフ
ィンゴ糖脂質合成に利用できるプライマーおよび該プラ
イマーを利用したスフィンゴ糖脂質の製造方法を提供す
ることにある。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明者らは前記問題点
を解決するために鋭意検討した結果、新規なスフィンゴ
糖脂質合成用プライマーを合成し、これに適当な糖ヌク
レオチド類の共存下、糖転移酵素を作用させることによ
り、糖ヌクレオチド類より該プライマーに糖残基を転移
させ、適当な回数この糖転移反応を繰り返した後、必要
に応じて副生したヌクレオチド類や未反応の糖ヌクレオ
チド類などを除去し、セラミド共存下、スフィンゴ糖脂
質のオリゴ糖とセラミドとの間のグリコシド結合を加水
分解する作用を有する酵素と反応させ、糖鎖の伸長した
該プライマーよりオリゴ糖残基をセラミドに転移させる
ことにより、前記問題点を解決できることを見いだし、
本発明を完成するに至った。

【０００９】すなわち、本発明は高分子担体上に一般式
（Ｉ）で表される基が結合していることを特徴とするス
フィンゴ糖脂質合成用高分子プライマーである。

【００１０】

【化１６】 （式中、Ｒ¹ およびＲ² はそれぞれ独立して、Ｈまたは
単糖残基あるいはオリゴ糖残基を示し、Ｒ³ は炭素数６
〜２０のアルキル基またはアルケニル基を示し、Ｒ⁴は
炭素数５〜１９のアルキレン基を示す。）

【００１１】また、本発明は高分子担体上に、一般式(I
I)で表される基が結合していることを特徴とするスフィ
ンゴ糖脂質合成用高分子プライマーである。

【００１２】

【化１７】 （式中、Ｒ¹ は炭素数６〜２０のアルキル基またはアル
ケニル基、Ｒ² は炭素数５〜１９のアルキレン基を示
す。）

【００１３】また、本発明はアクリルアミド残基および
／またはメタクルアミド残基および一般式(III) で表さ
れる残基から構成されるビニル系共重合体において、一
般式(III) で表される残基が全ビニル系共重合体中、５
〜９５モル％であるスフィンゴ糖脂質合成用水溶性高分
子プライマーである。

【００１４】

【化１８】 （式中、Ｒ¹ およびＲ² はそれぞれ独立して、Ｈまたは
単糖残基あるいはオリゴ糖残基を示し、Ｒ³ は炭素数６
〜２０のアルキル基またはアルケニル基を示し、Ｒ⁴ は
Ｈまたはメチル基を示す。）

【００１５】また、本発明はアクリルアミド残基および
／またはメタクルアミド残基および一般式(IV)で表され
る残基から構成されるビニル系共重合体において、一般
式(IV)で表される残基が全ビニル系共重合体中、５〜９
５モル％であるスフィンゴ糖脂質合成用水溶性高分子プ
ライマーである。

【００１６】

【化１９】 （式中、Ｒ¹ 、炭素数６〜２０のアルキル基またはアル
ケニル基を示し、Ｒ² はＨまたはメチル基を示す。）

【００１７】また、本発明は一般式(V)で表されるセリ
ン誘導体の配糖体モノマーである。

【００１８】

【化２０】 （式中、Ｒ¹ およびＲ² はそれぞれ独立して、Ｈまたは
単糖残基あるいはオリゴ糖残基を示し、Ｒ³ は炭素数６
〜２０のアルキル基またはアルケニル基を示し、Ｒ⁴ は
Ｈまたはメチル基を示し、ｎは５〜１９の整数を示
す。）

【００１９】また、本発明は一般式(VI)で表されるセリ
ン誘導体の配糖体モノマーである。

【００２０】

【化２１】 （式中、Ｒ¹ は炭素数６〜２０のアルキル基またはアル
ケニル基を示し、Ｒ² はＨまたはメチル基を示し、ｎは
５〜１９の整数を示す。）

【００２１】また、本発明は一般式(VII) で表される活
性化オリゴ糖と一般式(VIII)で表されるセリン誘導体と
を触媒存在下、縮合反応させた後、セリン残基部分のア
ミノ基の保護基を除去し、一般式(IX)で表されるアクリ
ルアミド誘導体あるいはメタクリルアミド誘導体と縮合
反応させ、さらにオリゴ糖部分の保護基を除去すること
により、一般式(V) で示されるセリン誘導体の配糖体モ
ノマーを製造することを特徴とするセリン誘導体の配糖
体モノマーを製造方法である。

【００２２】

【化２２】 （式中、Ｒ⁵ およびＲ⁶ はそれぞれ独立してアシル型保
護基、エーテル型保護基または水酸基を前記保護基で保
護した単糖残基あるいは水酸基を前記保護基で保護した
オリゴ糖残基を示し、Ｒ⁷ 、Ｒ⁸ 、Ｒ⁹ 、Ｒ¹⁰およびＲ
¹¹はそれぞれ独立してアシル型保護基またはエーテル型
保護基を示し、Ｘは活性化基を示す。）

【００２３】

【化２３】 （式中、Ｒ¹²は保護基を示し、Ｒ¹³は炭素数６〜２０の
アルキル基またはアルケニル基を示す。）

【００２４】

【化２４】 （式中、Ｒ¹⁴はＨまたはメチル基を示し、Ｙは水酸基、
臭素原子または塩素原子を示し、ｎは５〜１９の整数を
示す。）

【００２５】

【化２５】 （式中、Ｒ¹ およびＲ² はそれぞれ独立して、Ｈまたは
単糖残基あるいはオリゴ糖残基を示し、Ｒ³ は炭素数６
〜２０のアルキル基またはアルケニル基を示し、Ｒ⁴ は
Ｈまたはメチル基を示し、ｎは５〜１９の整数を示
す。）

【００２６】また、本発明は一般式(X) で表される活性
化糖と一般式(VIII)で表されるセリン誘導体とを触媒存
在下、縮合反応させた後、セリン残基部分のアミノ基の
保護基を除去し、一般式(IX)で表されるアクリルアミド
誘導体あるいはメタクリルアミド誘導体と縮合反応さ
せ、さらに活性化糖部分の保護基を除去することによ
り、一般式(VI)で示されるセリン誘導体の配糖体モノマ
ーを製造することを特徴とするセリン誘導体の配糖体モ
ノマーを製造方法である。

【００２７】

【化２６】 （式中、Ｒ¹⁵、Ｒ¹⁶、Ｒ¹⁷およびＲ¹⁸はそれぞれ独立し
て、アシル型保護基またはエーテル型保護基を示し、Ｘ
は活性化基を示す。）

【００２８】

【化２７】 （式中、Ｒ¹²は保護基を示し、Ｒ¹³は炭素数６〜２０の
アルキル基またはアルケニル基を示す。）

【００２９】

【化２８】 （式中、Ｒ¹⁴はＨまたはメチル基を示し、Ｙは水酸基、
臭素原子または塩素原子を示し、ｎは５〜１９の整数を
示す。）

【００３０】

【化２９】 （式中、Ｒ¹ は炭素数６〜２０のアルキル基またはアル
ケニル基を示し、Ｒ² はＨまたはメチル基を示し、ｎは
５〜１９の整数を示す。）

【００３１】また、本発明は上記セリン誘導体の配糖体
モノマーとアクリルアミドおよび／またはメタクリルア
ミドとを適当な触媒存在下、共重合させることを特徴と
するスフィンゴ糖脂質合成用水溶性高分子プライマーの
製造方法である。

【００３２】本発明はスフィンゴ糖脂質を製造する方法
であって （１）上記スフィンゴ糖脂質合成用高分子プライマー
に、糖ヌクレオチドの存在下、糖転移酵素を作用させる
ことにより、糖ヌクレオチドより、糖残基を該スフィン
ゴ糖脂質合成用高分子プライマーに転移させる工程、お
よび（２）工程（１）で得た糖残基が転移したスフィン
ゴ糖脂質合成用高分子プライマーに、セラミドの存在
下、スフィンゴ糖脂質の糖とセラミドとの間のグリコシ
ド結合を加水分解する酵素を作用させ、該スフィンゴ糖
脂質合成用高分子プライマーより、オリゴ糖残基をセラ
ミドに転移させる工程を含むことをと特徴とするスフィ
ンゴ糖脂質の製造方法である。

【００３３】さらに、本発明はスフィンゴ糖脂質を製造
する方法であって （１）上記スフィンゴ糖脂質合成用高分子プライマー
に、糖ヌクレオチドの存在下、糖転移酵素を作用させる
ことにより、糖ヌクレオチドより、糖残基を該スフィン
ゴ糖脂質合成用高分子プライマーに転移させる工程、
（２）工程（１）を１回または２回以上繰り返して、糖
鎖を伸長させる工程、（３）必要に応じて、副生したヌ
クレオチド類や未反応の糖ヌクレオチド類を除去する工
程、および（４）工程（１）〜工程（３）を複数回、繰
り返した後、複数の糖残基が転移して伸長したスフィン
ゴ糖脂質合成用高分子プライマーに、セラミドの存在
下、スフィンゴ糖脂質の糖とセラミドとの間のグリコシ
ド結合を加水分解する酵素を作用させ、該スフィンゴ糖
脂質合成用高分子プライマーより、複数の糖残基が伸長
したオリゴ糖残基をセラミドに転移させる工程を含むこ
とを特徴とするスフィンゴ糖脂質の製造方法。

【００３４】

【発明の実施態様】本発明のスフィンゴ糖脂質合成用高
分子プライマーは、高分子担体上に一般式(I) で表され
る基が結合しているものであり、式中、Ｒ¹ およびＲ²
はそれぞれ独立して、Ｈまたは単糖残基あるいはオリゴ
糖残基を示し、Ｒ³ は炭素数６〜２０のアルキル基また
はアルケニル基を示し、Ｒ⁴ は炭素数５〜１９のアルキ
レン基を示す。

【００３５】Ｒ¹ の単糖残基としては、αおよびβ−ガ
ラクトース残基、β−Ｎ−アセチルグルコサミン残基、
β−Ｎ−アセチルガラクトサミン残基またはα−シアル
酸残基などが例示され、Ｒ² の単糖残基としては、αお
よびβ−ガラクトース残基、β−Ｎ−アセチルガラクト
サミン残基などが例示される。ここでいうシアル酸はノ
イラミン酸のアシル誘導体の総称であり、Ｎ−アセチル
ノイラミン酸、Ｎ−グリコリルノイラミン酸、９−Ｏ−
アセチル−Ｎ−アセチルノイラミン酸などが含まれる。

【００３６】Ｒ¹ のオリゴ糖残基としては、例えば、Ｓ
ｉａα２→８Ｓｉａα２→、Ｇａｌβ１→３ＧｌｃＮＡ
ｃβ１→、Ｆｕｃα１→２Ｇａｌβ１→３ＧｌｃＮＡｃ
β１→、Ｇａｌβ１→３（Ｆｕｃα１→４）ＧｌｃＮＡ
ｃβ１→、Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→、Ｇａｌ
α１→４Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→、ＧａｌＮ
Ａｃβ１→３Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→、Ｓｉ
ａα２→３Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→、Ｓｉａ
α２→３Ｇａｌβ１→４（Ｆｕｃα１→３）ＧｌｃＮＡ
ｃβ１→、Ｓｉａα２→６Ｇａｌβ１→４（Ｆｕｃα１
→３）ＧｌｃＮＡｃβ１→などが例示される。

【００３７】Ｒ² のオリゴ糖残基としては、例えば、Ｇ
ａｌβ１→３ＧａｌＮＡｃβ１→、Ｆｕｃα１→２Ｇａ
ｌβ１→３ＧａｌＮＡｃβ１→、Ｇａｌα１→３Ｇａｌ
β１→３Ｇａｌα１→３Ｇａｌβ１→３ＧａｌＮＡｃβ
１→、Ｓｉａα２→３Ｇａｌβ１→３ＧａｌＮＡｃβ１
→、Ｓｉａα２→８Ｓｉａα２→３Ｇａｌβ１→３Ｇａ
ｌＮＡｃβ１→、ＧａｌＮＡｃα１→３ＧａｌＮＡｃβ
１→３Ｇａｌα１→などが例示される。式中、Ｆｕｃは
フコース残基、Ｇａｌはガラクトース残基、ＧａｌＮＡ
ｃはＮ−アセチルガラクトサミン残基、ＧｌｃＮＡｃは
Ｎ−アセチルグルコサミン残基、Ｓｉａはシアル酸残基
を示す。

【００３８】Ｒ³ の炭素数６〜２０のアルキル基として
は、ヘキシル基、オクチル基、ドデシル基、オクタデシ
ル基などが例示され、アルケニル基としては、シス−９
−オクタデセニル基などが例示される。

【００３９】Ｒ⁴ の炭素数５〜１９のアルキレン基とし
ては、ペンチレン基、ヘプチレン基、ノニレン基、ヘプ
タデシレン基などが例示される。

【００４０】本発明のスフィンゴ糖脂質合成用プライマ
ー高分子としては、Ｒ¹ 、Ｒ² 、Ｒ ³ およびＲ⁴ は任意
に組み合わせることができる。一般式(I) で表される基
は、例えば、以下の式で表される基などが挙げられる。

【００４１】

【化３０】

【００４２】

【化３１】

【００４３】

【化３２】 （式中、Ａｃはアセチル基を示す。）

【００４４】

【化３３】

【００４５】本発明の高分子担体上に一般式(II)で表さ
れる基が結合しているスフィンゴ糖脂質合成用高分子プ
ライマーは、式中、Ｒ¹ は一般式（Ｉ）のＲ³ と同じ基
であり、炭素数６〜２０のアルキル基またはアルケニル
基を示し、Ｒ² は一般式（Ｉ）のＲ⁴ と同じ基であり、
炭素数５〜１９のアルキレン基を示す。

【００４６】本発明のスフィンゴ糖脂質合成用高分子プ
ライマーとしては、Ｒ¹ およびＲ²は任意に組み合わせ
ることができる。

【００４７】本発明で利用できる高分子担体は、一般式
（Ｉ）あるいは(II)で表される基を結合させることがで
き、かつ、結合後、以下で述べるような糖転移酵素の作
用により一般式（Ｉ）あるいは(II)で表される基の糖残
基、例えばグルコース残基またはオリゴ糖残基に糖残基
を転移させることができるものであれば、特に制限はな
く、例えばアルキルアミノ化ガラス、ポリアクリルアミ
ド、ポリメタクリルアミド、アクリルアミドとメタクリ
ルアミドの共重合体またはアクリルアミドおよび／また
はメタクリルアミドと他のビニル系モノマーとの共重合
体、ジアミノ化ポリエチレングリコールのモノおよびジ
アクリロイル化体の重合体あるいは共重合体、Ｎ−アク
リロキシスクシンイミドの重合体あるいは共重合体など
が挙げられ、また、これらポリマーは適当な架橋剤で架
橋されていてもよい。他のビニル系モノマーとしては、
スチレン、ジビニルベンゼン、ビニルアルコール、アク
リル酸、メタクリル酸などが例示される。ここでいう高
分子担体は必ずしも水不溶性である必要はなく、水溶性
であってもよい。一般的な分子量は約10,000〜約5,000,
000 である。その形態は、水不溶性担体の場合、ビーズ
状、繊維状、膜状、フィルム状などが挙げられる。

【００４８】本発明の高分子担体上に一般式（Ｉ）ある
いは(II)で表される基が結合しているスフィンゴ糖脂質
合成用高分子プライマーは、一般式（Ｉ）あるいは(II)
で表される基を有する重合性モノマーを重合させたり、
または他の重合性モノマーと共重合させることにより得
ることができる。

【００４９】また、高分子担体の側鎖官能基と一般式(X
I)あるいは(XII) で表されるセリン誘導体の配糖体を反
応させることによっても得ることができる。また、ポリ
マーの側鎖官能基と一般式(XI)あるいは(XII) との結合
に際しては、必要に応じて適当なリンカーを用いてもよ
い。

【００５０】側鎖官能基を有する高分子担体としては、
アルキルアミノ化ガラス、Ｎ−アクリロキシスクシンイ
ミドの重合体あるいは共重合体、アクリル酸の重合体あ
るいは重合体あるいは共重合体、ジアミノ化ポリエチレ
ングリコールのモノおよびジアクリロイル化体の共重合
体などが挙げられる。

【００５１】

【化３４】 （式中、Ｒ¹ およびＲ² はそれぞれ独立して、Ｈまたは
単糖残基あるいはオリゴ糖残基を示し、Ｒ³ は炭素数６
〜２０のアルキル基またはアルケニル基を示し、Ｒ⁴ は
炭素数５〜１９のアルキレン基を示す。Ｘはアミノ基、
チオール基、カルボキシル基またはそれらの塩などの官
能基を示す。）

【００５２】

【化３５】 （式中、Ｒ¹ は炭素数６〜２０のアルキル基またはアル
ケニル基を示し、Ｒ² は炭素数５〜１９のアルキレン基
を示す。Ｘはアミノ基、チオール基、カルボキシル基ま
たはそれらの塩などの官能基を示す。） 前者の方法をアクリルアミド残基および／またはメタク
ルアミド残基および一般式(III) で表される残基から構
成されるビニル系共重合体であるスフィンゴ糖脂質合成
用高分子プライマーを例に、詳しく説明する。ここで、
一般式(III) で表される残基は全ビニル系共重合体中、
５〜９５モル％である。

【００５３】

【化３６】 （式中、Ｒ¹ およびＲ² はそれぞれ独立して、Ｈまたは
単糖残基あるいはオリゴ糖残基を示し、Ｒ³ は炭素数６
〜２０のアルキル基またはアルケニル基を示し、Ｒ⁴ は
Ｈまたはメチル基を示す。）

【００５４】一般式(III) で表される残基を含むビニル
系共重合体であるスフィンゴ糖脂質合成用高分子プライ
マーは、通常、一般式(V)で表されるセリン誘導体の配
糖体モノマーとアクリルアミドおよび／またはメタクリ
ルアミドと過硫酸アンモニウムや過硫酸カリウムなどの
ラジカル開始剤を触媒とし、共重合させることにより得
られる。

【００５５】

【化３７】 （式中、Ｒ¹ およびＲ² はそれぞれ独立して、Ｈまたは
単糖残基あるいはオリゴ糖残基を示し、Ｒ³ は炭素数６
〜２０のアルキル基またはアルケニル基を示し、Ｒ⁴ は
Ｈまたはメチル基を示し、ｎは５〜１９を整数示す。）

【００５６】一般式(V) で表されるセリン誘導体の配糖
体モノマーは、一般式(VII) で表される活性化オリゴ糖
と一般式(VIII)で表されるセリン誘導体とを適当な触媒
存在下、縮合反応させた後、セリン残基部分のアミノ基
の保護基を除去し、一般式(IX)で表されるアクリルアミ
ドあるいはメタクリルアミド誘導体と縮合反応させ、さ
らにオリゴ糖部分の保護基を除去することにより得られ
る。

【００５７】

【化３８】 （式中、Ｒ⁵ およびＲ⁶ はそれぞれ独立して、アシル型
保護基、エーテル型保護基または水酸基を前記保護基で
保護した単糖残基あるいは水酸基を前記保護基で保護し
たオリゴ糖残基を示し、Ｒ⁷ 、Ｒ⁸ 、Ｒ⁹ 、Ｒ¹⁰および
Ｒ¹¹はそれぞれ独立して、アシル型保護基またはエーテ
ル型保護基を示し、Ｘは活性化基を示す。）

【００５８】

【化３９】 （式中、Ｒ¹²は保護基を示し、Ｒ¹³は炭素数６〜２０の
アルキル基またはアルケニル基を示す。）

【００５９】

【化４０】 （式中、Ｒ¹⁴はＨまたはメチル基を示し、Ｙは水酸基、
臭素原子または塩素原子を示し、ｎは５〜１９を整数を
示す。）

【００６０】一般式(VII) において、アシル型保護基と
しては、アセチル基、ベンゾイル基などが例示される。
エーテル型保護基としては、ベンジル基、ｐ−メトキシ
ベンジル基、アリル基などが例示される。

【００６１】一般式(VII) において、水酸基を前記保護
基で保護した単糖残基とは、下記Ｒ ¹ およびＲ² の単糖
残基またはオリゴ糖残基の水酸基に上記保護基が結合し
たものである。

【００６２】Ｒ¹ の単糖残基としては、αおよびβ−ガ
ラクトース残基、β−Ｎ−アセチルグルコサミン残基、
β−Ｎ−アセチルガラクトサミン残基、α−シアル酸残
基などが例示され、Ｒ² の単糖残基としては、αおよび
β−ガラクトース残基、β−Ｎ−アセチルガラクトサミ
ン残基などが例示される。

【００６３】Ｒ¹ のオリゴ糖残基としては、例えば、Ｓ
ｉａα２→８Ｓｉａα２→、Ｇａｌβ１→３ＧｌｃＮＡ
ｃβ１→、Ｆｕｃα１→２Ｇａｌβ１→３ＧｌｃＮＡｃ
β１→、Ｇａｌβ１→３（Ｆｕｃα１→４）ＧｌｃＮＡ
ｃβ１→、Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→、Ｇａｌ
α１→４Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→、ＧａｌＮ
Ａｃβ１→３Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→、Ｓｉ
ａα２→３Ｇａｌβ１→４ＧｌｃＮＡｃβ１→、Ｓｉａ
α２→３Ｇａｌβ１→４（Ｆｕｃα１→３）ＧｌｃＮＡ
ｃβ１→、Ｓｉａα２→６Ｇａｌβ１→４（Ｆｕｃα１
→３）ＧｌｃＮＡｃβ１→などが例示される。

【００６４】Ｒ² のオリゴ糖残基としては、例えば、Ｇ
ａｌβ１→３ＧａｌＮＡｃβ１→、Ｆｕｃα１→２Ｇａ
ｌβ１→３ＧａｌＮＡｃβ１→、Ｇａｌα１→３Ｇａｌ
β１→３Ｇａｌα１→３Ｇａｌβ１→３ＧａｌＮＡｃβ
１→、Ｓｉａα２→３Ｇａｌβ１→３ＧａｌＮＡｃβ１
→、Ｓｉａα２→８Ｓｉａα２→３Ｇａｌβ１→３Ｇａ
ｌＮＡｃβ１→、ＧａｌＮＡｃα１→３ＧａｌＮＡｃβ
１→３Ｇａｌα１→などが例示される。式中、Ｆｕｃは
フコース残基、Ｇａｌはガラクトース残基、ＧａｌＮＡ
ｃはＮ−アセチルガラクトサミン残基、ＧｌｃＮＡｃは
Ｎ−アセチルグルコサミン残基、Ｓｉａはシアル酸残基
を示す。

【００６５】Ｘの活性化基としては、臭素（Ｂｒ）、フ
ッ素（Ｆ）、トリクロロアセトイミデート基などが挙げ
られる。

【００６６】一般式(VII)で表される活性化オリゴ糖
は、従来より行われている化学的な合成で得たものを利
用することができる。例えば、２，３，６，２’，
３’，４’，６’−Ｏ−ヘプタアセチルラクトシルブロ
ミド（下記式４１）、２，３，６，２’，３’，４’，
６’−Ｏ−ヘプタアセチルラクトシルトリクロロアセト
イミデート（下記式４２）などが挙げられる。

【００６７】

【化４１】 （式中、Ａｃはアセチル基を示す。）

【００６８】

【化４２】 （式中、Ａｃはアセチル基を示す。）

【００６９】一般式(VIII)で表されるセリン誘導体は、
式中、Ｒ¹²は保護基を示し、Ｒ¹³は炭素数６〜２０のア
ルキル基またはアルケニル基を示す。保護基としては、
ベンジルオキシカルボニル基、ｔ−ブトキシカルボニル
基、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基などの
基がある。

【００７０】このようなセリン誘導体としては、例え
ば、Ｎ−ベンジルオキシカルボニルセリンオクチルアミ
ド（下記式４３、参考例１）、Ｎ−ベンジルオキシカル
ボニルセリンラウリルアミド、Ｎ−ベンジルオキシカル
ボニルセリンステアリルアミド、Ｎ−ｔ−ブトキシカル
ボニルセリンオクチルアミド、Ｎ−ｔ−ブトキシカルボ
ニルセリンラウリルアミド、Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニ
ルセリンステアリルアミド、Ｎ−（９−フルオレニルメ
チルオキシカルボニル）セリンオクチルアミド、Ｎ−
（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）セリンラ
ウリルアミド、Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシカ
ルボニル）セリンステアリルアミドなどが例示される。

【００７１】

【化４３】

【００７２】活性化オリゴ糖とセリン誘導体の縮合に用
いることのできる触媒は、活性化基Ｘに応じて適宜選択
すればよく、例えば活性化基が臭素（Ｂｒ）の場合は、
通常、銀、水銀などの重金属塩、第４級アンモニウム塩
などを用いることができ、フッ素（Ｆ）の場合は塩化ス
ズ(II)と銀塩の組合せ、ジルコノセン錯体やハフノセン
錯体、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル
などを、トリクロロアセトイミデート基の場合はＢＦ₃
ＯＥｔ₂ 、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシ
リルなどを用いることができる。

【００７３】また、この縮合反応は通常、無水条件下で
行い、モレキュラシーブや無水硫酸カルシウム存在下で
反応させることが多い。

【００７４】溶媒としては、用いる基質（活性化オリゴ
糖およびセリン誘導体）に応じて適宜選択すればよく、
例えばジクロロメタン、１，２−ジクロロエタンなどの
ハロゲン化炭化水素、トルエン、ベンゼンなどの芳香族
炭化水素、ジエチルエーテルなどがよく用いられる。

【００７５】反応温度は活性化オリゴ糖の反応性によ
り、通常、−７０℃〜１００℃前後であるが、反応に差
し障りのない限り低温で行うのが望ましい。

【００７６】セリン残基部分のアミノ基の保護基の除去
方法は、保護基の種類により適宜選択され、例えばベン
ジルオキシカルボニル基の場合は水素化分解、ｔ−ブト
キシカルボニル基の場合はＨＢｒ／酢酸やＨＦ処理で、
９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基の場合はジ
エチルアミンなどの塩基処理で除去することができる。

【００７７】一般式(IX)で表されるアクリルアミドある
いはメタクリルアミド誘導体との縮合は、通常カルボジ
イミド類やＮ−エトキシカルボニル−２−エトキシ−
１，２−ジヒドロキノリンなどの縮合試薬を用いること
により行うことができる。

【００７８】

【化４４】 （式中、Ｒ¹⁴はＨまたはメチル基を示し、Ｙは水酸基、
臭素原子または塩素原子を示し、ｎは５〜１９の整数を
示す。）

【００７９】次に、オリゴ糖部分の保護基の除去も、除
去したい保護基の種類に応じて、適宜、その脱離条件を
選択すればよく、例えばアセチル基やベンゾイル基はメ
タノール中ナトリウムメトキシドで処理することによ
り、ベンジル基は水素化分解により、ｐ−メトキシベン
ジル基は水素化分解や２，３−ジクロロ−５，６−ジシ
アノ−ｐ−ベンゾキノンあるいは硝酸セリウムアンモニ
ウムなどの酸化剤で処理することにより、アリル基はカ
リウムｔ−ブトキシドまたはWilkinson 錯体でプロペニ
ル基へ異性化させた後、酸、水銀塩もしくはヨウ素で処
理することにより除去することができる。

【００８０】得られたモノマーは通常、カラムクロマト
グラフィーなどの精製方法により精製することができ
る。

【００８１】一般式(IV)で表される残基を含むビニル系
共重合体であるスフィンゴ糖脂質合成用プライマー高分
子も上記方法と同様の方法により得ることができる。す
なわち、上記方法で一般式(V) で表されるセリン誘導体
の配糖体モノマーの代わりに、一般式(VI)で表されるセ
リン誘導体の配糖体モノマーを用いることにより得るこ
とができ、一般式(VI)で表されるセリン誘導体の配糖体
モノマーは一般式(VIII)で表される活性化オリゴ糖の代
わりに、一般式(X)で表される活性化糖を用いることに
より得ることができる。

【００８２】

【化４５】 （式中、Ｒ¹ は炭素数６〜２０のアルキル基またはアル
ケニル基を示し、Ｒ² はＨまたはメチル基を示し、ｎは
５〜１９の整数である。）

【００８３】

【化４６】 （式中、Ｒ¹⁵、Ｒ¹⁶、Ｒ¹⁷およびＲ¹⁸はそれぞれ独立し
て、アシル型保護基またはエーテル型保護基を示し、Ｘ
は活性化基を示す。）

【００８４】次に、後者の方法について、高分子担体が
アルキルアミノ化ガラスの場合を例にとり説明する。上
記の方法と同様にして、一般式(VIII)で表される活性化
オリゴ糖あるいは一般式(X) で表される活性化糖と一般
式(IX)で表されるセリン誘導体とを適当な触媒存在下、
縮合させた後、セリン残基部分のアミノ基の保護基を除
去した後、一般式(IX)で表されるアクリルアミドあるい
はメタクリルアミド誘導体の代わりに一般式(XIII)で表
される二塩基酸を同様の方法で縮合させる。

【００８５】

【化４７】 （式中、Ｒは炭素数４〜１８のアルキレン基を示す。）

【００８６】縮合反応させた後、同様にオリゴ糖部分の
保護基を除去し、水溶液中で化学量論的に等量の炭酸セ
シウムなどのセシウム塩と接触させ、遊離のカルボキシ
ル基をセシウム塩とする。一方、アルキルアミノ化ガラ
スはモノヨード酢酸とカルボジイミド類やＮ−エトキシ
カルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン
などの縮合試薬を用いヨードアセトアミド化する。上記
セシウム塩とヨードアセトアミド化したアルキルアミノ
化ガラスとをジメチルホルムアミドなどの溶媒中で接触
させることにより縮合させ、目的とする高分子プライマ
ーを得ることができる。

【００８７】本発明のスフィンゴ糖脂質を製造する方法
は、（１）上記スフィンゴ糖脂質合成用高分子プライマ
ーに、糖ヌクレオチドの存在下、糖転移酵素を作用させ
ることにより、糖ヌクレオチドより、糖残基を該スフィ
ンゴ糖脂質合成用高分子プライマーに転移させる工程お
よび（２）工程（１）で得た、糖残基が転移したスフィ
ンゴ糖脂質合成用高分子プライマーに、セラミドの存在
下、スフィンゴ糖脂質の糖とセラミドとの間のグリコシ
ド結合を加水分解する酵素を作用させ、該スフィンゴ糖
脂質合成用高分子プライマーより、オリゴ糖残基をセラ
ミドに転移させる工程を含む。

【００８８】また、本発明のスフィンゴ糖脂質を製造す
る方法は、（１）上記スフィンゴ糖脂質合成用高分子プ
ライマーに、糖ヌクレオチドの存在下、糖転移酵素を作
用させることにより、糖ヌクレオチドより、糖残基を該
スフィンゴ糖脂質合成用高分子プライマーに転移させる
工程、（２）工程（１）を１回または２回以上繰り返し
て、糖鎖を伸長させる工程、（３）必要に応じて、副生
したヌクレオチド類または未反応の糖ヌクレオチド類を
除去する工程、および（４）工程（１）〜工程（３）を
複数回、繰り返した後、複数の糖残基が転移して伸長し
たスフィンゴ糖脂質合成用高分子プライマーに、セラミ
ドの存在下、スフィンゴ糖脂質の糖とセラミドとの間の
グリコシド結合を加水分解する酵素を作用させ、該スフ
ィンゴ糖脂質合成用高分子プライマーより、複数の糖残
基が伸長したオリゴ糖残基をセラミドに転移させる工程
を含む。

【００８９】糖ヌクレオチドより高分子プライマーへの
糖の転移は、通常、高分子プライマーと糖ヌクレオチド
とを含む中性の緩衝液中で、１０〜６０℃、好ましくは
２０〜４０℃で、１〜７２時間好ましくは２〜２４時
間、糖転移酵素と接触させることにより行われる。

【００９０】本発明で用いる糖転移酵素は、糖ヌクレオ
チドを糖供与体として利用できるものであればよく、特
に限定されない。このような酵素としてＬｅｌｏｉｒ経
路の糖転移酵素類が挙げられ、例えばガラクトース転移
酵素、Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素、Ｎ−アセチ
ルガラクトサミン転移酵素、フコース転移酵素、シアル
酸転移酵素などが挙げられる。本発明で用いる糖ヌクレ
オチド類は上記酵素が利用できるものであれば、特に限
定されず、例えばウリジン−５’−ジリン酸−ガラクト
ース、ウリジン−５’−ジリン酸−Ｎ−アセチルグルコ
サミン、ウリジン−５’−ジリン酸−Ｎ−アセチルガラ
クトサミン、グアノシン−５’−ジリン酸−フコース、
シチジン−５’−モノリン酸−Ｎ−アセチルノイラミン
酸およびこれらのナトリウム塩などが挙げられる。

【００９１】また、反応液中には必要に応じて金属塩を
添加してもよい。添加できる金属イオンとしては、例え
ばマグネシウム、マンガン、コバルト、ニッケル、銅、
亜鉛などがあり、通常、塩化物などの形で添加すること
ができる。

【００９２】必要に応じて副生したヌクレオチド類また
は未反応の糖ヌクレオチド類を除去する方法は、高分子
プライマーとヌクレオチドおよび糖ヌクレオチドとを分
離できる方法であれば、特に限定されず、例えばゲルろ
過クロマトグラフィーなどが挙げられる。

【００９３】複数の糖酸基を転移させ、伸長させるに
は、例えば水不溶性担体の場合、まず上記のような糖転
移酵素を作用させ、糖残基を１つ伸長させる。次いで、
高分子プライマーを洗浄することにより、ヌクレオチド
および糖ヌクレオチドを除く。これを繰り返すことによ
り、複数の糖残基を転移させ、伸長させることができ
る。

【００９４】糖鎖が伸長した高分子プライマーから、オ
リゴ糖残基のセラミドへの転移は、通常、該高分子プラ
イマーとセラミドとを界面活性剤を含む中性の緩衝液中
で、１０〜６０℃、好ましくは２０〜４０℃で、１〜７
２時間、好ましくは２〜２４時間、スフィンゴ糖脂質の
オリゴ糖とセラミドとの間のグリコシド結合を加水分解
する作用を有する酵素と接触させることにより行われ
る。

【００９５】本発明において用いるセラミドとしては、
スフィンゴシンあるいはその誘導体に脂肪酸が酸アミド
結合しているものであれば、特に制限はなく、製造する
スフィンゴ糖脂質の目的にあったものを適宜選択すれば
よい。例えば、スフィンゴシン誘導体としてはジヒドロ
スフィンゴシン、フィトスフィンゴシンなどが挙げら
れ、脂肪酸としては炭素数８〜２４の飽和脂肪酸、不飽
和脂肪酸、α−ヒドロキシ酸などが挙げられる。

【００９６】例えば、Ｎ−ステアロイルスフィンゴシン
（下記化４８）、Ｎ−パルミトイルスフィンゴシン（下
記化４９）、Ｎ−リグノセロイルスフィンゴシン、Ｎ−
オレオイルスフィンゴシン、Ｎ−リノレオイルスフィン
ゴシン、Ｎ−アラキノイルスフィンゴシン、Ｎ−ステア
ロイルジヒドロスフィンゴシン、Ｎ−パルミトイルジヒ
ドロスフィンゴシン、Ｎ−リグノセロイルジヒドロスフ
ィンゴシン、Ｎ−オレオイルジヒドロスフィンゴシン、
Ｎ−リノレオイルジヒドロスフィンゴシン、Ｎ−アラキ
ノイルジヒドロスフィンゴシン、Ｎ−ステアロイルフィ
トスフィンゴシン、Ｎ−パルミトイルフィトスフィンゴ
シンなどが挙げられる。

【００９７】

【化４８】

【００９８】

【化４９】

【００９９】本発明において用いるスフィンゴ糖脂質の
オリゴ糖とセラミドとの間のグリコシド結合を加水分解
する作用を有する酵素とは、該作用を有するものであれ
ば、特に制限はなく、「セラミドグリカナーゼ」あるい
は「エンドグリコセラミダーゼ」として市販しているも
のを用いることができる。例えば、ヒル由来のセラミド
グリカナーゼやロドコッカス属菌由来のエンドグリコセ
ラミダーゼなどが挙げられる。

【０１００】本発明において用いる界面活性剤として
は、特に制限はないが、トリトンＣＦ−５４、トリトン
Ｘ−１００などを挙げることができる。

【０１０１】得られたスフィンゴ糖脂質は、各種カラム
クラマトグラフィーなどの一般的な精製方法により分離
精製することができる。

【０１０２】

【発明の効果】本発明の糖脂質合成用高分子プライマー
を利用することにより容易に任意のスフィンゴ糖脂質を
得ることができ、スフィンゴ糖脂質の生理機能の解明に
利用することができる。

【０１０３】

【実施例】以下に、実施例により本発明をさらに詳細に
説明するが、本発明はかかる実施例に限定されるもので
はない。

【０１０４】参考例１ Ｎ−ベンジルオキシカルボニルセリンオクチルアミドの
合成 Ｎ−ベンジルオキシカルボニルセリン１２ｇ（５０．２
ｍｍｏｌｅ）をエタノール：ベンゼン＝１：１の混合溶
媒１２０ｍｌに溶解させた後、Ｎ−エトキシカルボニル
−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（以下、Ｅ
ＥＤＱと略する）１３．６ｇ（５５．０ｍｍｏｌｅ）お
よびオクチルアミン１１．１ｍｌ（５５．０ｍｍｏｌ
ｅ）を加えて室温で一晩撹拌した。反応液を減圧濃縮し
た後、トルエンから目的物を再結晶した。得られた結晶
を乾燥し、目的物１２．６４ｇを得た。

【０１０５】参考例２ Ｏ−（２，３，６，２’，３’，４’，６’−Ｏ−ヘプ
タアセチル）ラクトシル−Ｎ−ベンジルオキシカルボニ
ルセリンオクチルアミドの合成 よく乾燥させた参考例１で得たＮ−ベンジルオキシカル
ボニルセリンオクチルアミド４．０ｇ（１１．４ｍｍｏ
ｌｅ）をジクロロエタン８０ｍｌに溶解させ、活性化さ
せたモレキュラーシーブ４Ａ８．０ｇと２，３，６，
２’，３’，４’，６’−Ｏ−ヘプタアセチルラクトシ
ルブロミド１２．０ｇ（１７．２ｍｍｏｌｅ）を加え
た。氷冷下、トリフルオロメタンスルホン酸銀４．４０
ｇ（１７．２ｍｍｏｌｅ）を加え、徐々に室温に戻しな
がら、窒素気流下で一晩撹拌した。反応液をセライトで
ろ過し、ろ液を飽和食塩水で２回洗浄した後、無水硫酸
マグネシウムで乾燥させた。乾燥後、硫酸マグネシウム
をろ別し、ろ液を減圧濃縮後、シリカゲルカラムクロマ
トグラフィー（移動相、トルエン：酢酸エチル＝５：
１）にて目的物を分離した。目的物を含む溶出画分を減
圧乾固し、目的物５．３２ｇを得た。Ｏ−（２，３，
６，２’，３’，４’，６’−Ｏ−ヘプタアセチル）ラ
クトシル−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルセリンオクチ
ルアミドは、下記構造式を有する。

【０１０６】

【化５０】 （式中、Ａｃはアセチル基を示す。）

【０１０７】参考例３ Ｏ−（２，３，６，２’，３’，４’，６’−Ｏ−ヘプ
タアセチル）ラクトシルセリンオクチルアミドの合成 参考例２で得たＯ−（２，３，６，２’，３’，４’，
６’−Ｏ−ヘプタアセチル）ラクトシル−Ｎ−ベンジル
オキシカルボニルセリンオクチルアミド４．０ｇをメタ
ノール６０ｍｌに溶解させ、５％パラジウム−炭素を触
媒とし、室温下常圧で接触水素化還元を行なった。反応
後触媒をろ別し、反応液を減圧乾固し、目的物３．４２
ｇを得た。Ｏ−（２，３，６，２’，３’，４’，６’
−Ｏ−ヘプタアセチル）ラクトシルセリンオクチルアミ
ドは、下記構造式を有する。

【０１０８】

【化５１】 （式中、Ａｃはアセチル基を示す。）

【０１０９】参考例４ Ｏ−（２，３，６，２’，３’，４’，６’−Ｏ−ヘプ
タアセチル）ラクトシル−Ｎ−（６−アクリロイルアミ
ノ）カプロイルセリンオクチルアミドの合成 ６−アクリロイルアミノカプロン酸２７８ｍｇ（１．５
ｍｍｏｌｅ）とＥＥＤＱ３７１ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ
ｅ）をエタノール：ベンゼン＝１：１の混合溶媒４０ｍ
ｌに加え、十分溶解させ、参考例３で得たＯ−（２，
３，６，２’，３’，４’，６’−Ｏ−ヘプタアセチ
ル）ラクトシルセリンオクチルアミド１．１４ｇ（１．
３７ｍｍｏｌｅ）を加え、室温で一晩撹拌した。反応液
を減圧濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（移動
相、クロロホルム：メタノール＝１００：１）により目
的物を分離した。目的物を含む溶出画分を減圧乾固し、
目的物１．０６ｇを得た。Ｏ−（２，３，６，２’，
３’，４’，６’−Ｏ−ヘプタアセチル）ラクトシル−
Ｎ−（６−アクリロイルアミノ）カプロイルセリンオク
チルアミドは、下記構造式を有する。

【０１１０】

【化５２】 （式中、Ａｃはアセチル基を示す。）

【０１１１】実施例１（セリン誘導体の配糖体モノマ
ー）Ｏ−ラクトシル−Ｎ−（６−アクリロイルアミノ）カプ
ロイルセリンオクチルアミドの合成 参考例４で得たＯ−（２，３，６，２’，３’，４’，
６’−Ｏ−ヘプタアセチル）ラクトシル−Ｎ−（６−ア
クリロイルアミノ）カプロイルセリンオクチルアミド４
００ｍｇ（０．４ｍｍｏｌｅ）をテトラヒドロフラン：
メタノール＝１：１の混合溶媒に溶解させ、ナトリウム
メトキシド８．４９ｍｇ（０．１５７ｍｍｏｌｅ）を加
え、室温で２時間撹拌した。Ｈ+型の陽イオン交換樹脂
Ｄｏｗｅｘ５０Ｗ（ダウケミカル社製）を加えていき、
中和した。ろ過によりイオン交換樹脂を除き、ろ液を減
圧濃縮し、エタノールで再結晶し、目的物２７０ｍｇを
得た。Ｏ−ラクトシル−Ｎ−（６−アクリロイルアミ
ノ）カプロイルセリンオクチルアミドは、下記構造式を
有する。

【０１１２】

【化５３】

【０１１３】実施例２（スフィンゴ糖脂質合成用高分子
プライマー）Ｏ−ラクトシル−Ｎ−（６−アクリロイルアミノ）カプ
ロイルセリンオクチルアミド−アクリルアミド共重合体
の合成 実施例１で得たＯ−ラクトシル−Ｎ−（６−アクリロイ
ルアミノ）カプロイルセリンオクチルアミド１５０ｍｇ
（０．２１ｍｍｏｌｅ）とアクリルアミド６０．２５ｍ
ｇ（０．８４ｍｍｏｌｅ）をジメチルスルホキシド：水
＝１：１の混合溶媒に溶解し、テトラエチレンジアミン
１２．ｕｌ（８４ｕｍｏｌｅ）と過硫酸アンモニウム
７．６７ｍｇ（３３．６ｕｍｏｌｅ）を加え、５０℃で
一晩重合させた。目的物を蒸留水で平衡化したセファデ
ックスＧ−２５カラムクロマトグラフィーで精製した。
目的物の溶出画分を凍結乾燥し、目的物（分子量約500,
000）２００ｍｇを得た。得られたポリマー中のＯ−ラ
クトシル−Ｎ−（６−アクリロイルアミノ）カプロイル
セリンオクチルアミド残基は、下記構造式を含有する。
その含有量は２０モル％である。

【０１１４】

【化５４】

【０１１５】実施例３（高分子プライマーへの糖転移反
応）Ｏ−ラクトシル−Ｎ−（６−アクリロイルアミノ）カプ
ロイルセリンオクチルアミド−アクリルアミド共重合体
へのα２，３シアル酸転移酵素によるＮ−アセチルノイ
ラミン酸の転移 実施例２にて合成したＯ−ラクトシル−Ｎ−（６−アク
リロイルアミノ）カプロイルセリンオクチルアミド−ア
クリルアミド共重合体２２ｍｇ、シチジン−５’−モノ
リン酸−Ｎ−アセチルノイラミン酸１５ｍｇ、ウシ血清
アルブミン４ｍｇ、塩化マンガン０．６４ｍｇ、仔ウシ
由来アルカリフォスファターゼ２０単位、トリトンＣＦ
−５４を１０ｕｌ含む５０ｍＭカコジル酸ナトリウム緩
衝液（ｐＨ７．４）２ｍｌに、ブタ肝臓由来のα２，３
シアル酸転移酵素０．３単位を添加し、３７℃で３日間
反応させた。目的物を蒸留水で平衡化したセファデック
スＧ−２５カラムクロマトグラフィーで精製した。目的
物の溶出画分を凍結乾燥し、目的物であるＮ−アセチル
ノイラミン酸が転移したポリマー２２ｍｇを得た。得ら
れたポリマー中の１−Ｏ−（Ｎ−アセチルノイラミニル
−α−（２→３））ラクトシル−Ｎ−（６−アクリロイ
ルアミノ）カプロイルセリンオクチルアミド残基は、構
造式を有する。その含有量は２０モル％である。

【０１１６】

【化５５】 （式中、Ａｃは、アセチル基を示す。）

【０１１７】実施例４（スフィンゴ糖脂質）１−Ｏ−（Ｎ−アセチルノイラミニル−α−（２→
３））ラクトシル−Ｎ−ステアロイルスフィンゴシンの
合成 実施例３で得たＮ−アセチルノイラミン酸が転移したポ
リマー２２ｍｇ、Ｎ−ステアロイルスフィンゴシン５０
ｍｇ、トリトンＣＦ−５４を２０ｕｌ含む５０ｍＭクエ
ン酸緩衝液（ｐＨ６．０）１ｍｌに、ヒル由来セラミド
グリカナーゼ０．０１単位を添加し、３７℃で１７時間
反応させた。反応後クロロホルム：メタノール：水＝６
０：３０：５で平衡化したセファデックスＬＨ−２０カ
ラムを用いて、１−Ｏ−（Ｎ−アセチルノイラミニル−
α−（２→３））ラクトシル−Ｎ−ステアロイルスフィ
ンゴシンを分離した。目的物を含む溶出画分を減圧乾固
して、１−Ｏ−（Ｎ−アセチルノイラミニル−α−（２
→３））ラクトシル−Ｎ−ステアロイルスフィンゴシン
１３ｍｇを得た。該化合物は下記構造式を有する。

【０１１８】

【化５６】 （式中、Ａｃは、アセチル基を示す。）

【０１１９】参考例５ Ｏ−（２，３，６，２’，３’，４’，６’−Ｏ−ヘプ
タアセチル）ラクトシル−Ｎ−（５−カルボキシ）ペン
タノイルセリンオクチルアミドの合成 ６−アクリロイルアミノカプロン酸２７８ｍｇの代わり
にアジピン酸２１９ｍｇ（１．５ｍｍｏｌｅ）を用い、
参考例４と同様の方法で合成し、目的物０．８５ｇを得
た。Ｏ−（２，３，６，２’，３’，４’，６’−Ｏ−
ヘプタアセチル）ラクトシル−Ｎ−（５−カルボキシ）
ペンタノイルセリンオクチルアミドは、下記構造式を有
する。

【０１２０】

【化５７】 （式中、Ａｃは、アセチル基を示す。）

【０１２１】参考例６ Ｏ−ラクトシル−Ｎ−（５−カルボキシ）ペンタノイル
セリンオクチルアミドの合成 Ｏ−（２，３，６，２’，３’，４’，６’−Ｏ−ヘプ
タアセチル）ラクトシル−Ｎ−（６−アクリロイルアミ
ノ）カプロイルセリンオクチルアミド４００ｍｇの代わ
りに、参考例５で得たＯ−（２，３，６，２’，３’，
４’，６’−Ｏ−ヘプタアセチル）ラクトシル−Ｎ−
（５−カルボキシ）ペンタノイルセリンオクチルアミド
３８５ｍｇ（０．４ｍｍｏｌｅ）を用い、実施例１と同
様の方法で合成し、目的物２６０ｍｇを得た。Ｏ−ラク
トシル−Ｎ−（５−カルボキシ）ペンタノイルセリンオ
クチルアミドは、下記構造式を有する。

【０１２２】

【化５８】

【０１２３】参考例７ Ｏ−ラクトシル−Ｎ−（５−カルボキシ）ペンタノイル
セリンオクチルアミドセシウム塩の合成 参考例６で得たＯ−ラクトシル−Ｎ−（５−カルボキ
シ）ペンタノイルセリンオクチルアミド２００ｍｇ
（０．２１ｍｍｏｌｅ）を蒸留水１０ｍｌに溶かし、１
Ｍ炭酸セシウム水溶液で液が中性になるまで加えた。。
反応液を凍結乾燥させ、目的物２２８ｍｇを得た。

【０１２４】参考例８ アルキルアミノ化ガラスのヨードアセチル化 long chain alkylamine controlled pore glass （シグ
マ社）１ｇとモノヨード酢酸５０ｍｇを水１０ｍｌ中に
加え、ここに１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプ
ロピル）カルボジイミド塩酸塩５５ｍｇを加え、２４時
間室温で振とうした。振とう後、ガラスビーズを蒸留水
でよく洗浄した。得られたガラスビーズをよく乾燥させ
た後、ピリジン１０ｍｌを加え、さらに無水酢酸１ｍｌ
を振とうしながら滴下し、４時間反応させることによ
り、未反応のアミノ基をアセチル化した。反応後、ガラ
スビーズを蒸留水でよく洗浄し、目的物１ｇを得た。ヨ
ードアセチル化されたアルキルアミノ化ガラスは、下記
モデル構造式を有する。

【０１２５】

【化５９】

【０１２６】実施例５（スフィンゴ糖脂質合成用高分子
プライマー）ヨードアセチル化したアルキルアミノ化ガラスへのＯ−
ラクトシル−Ｎ−（ω−カルボキシ）ペンタノイルセリ
ンオクチルアミドの結合 参考例８で得たヨードアセチル化したガラスビーズ１０
０ｍｇと参考例７で得たＯ−ラクトシル−Ｎ−（５−カ
ルボキシ）ペンタノイルセリンオクチルアミドセシウム
塩３２ｍｇをジメチルホルムアミド５ｍｌに加え、室温
で４８時間振とうした。振とう後、ジメチルホルムアミ
ド、水、ジメチルホルムアミド、ジクロロメタンの順で
ガラスビーズを洗浄し、目的物１２８ｍｇを得た。Ｏ−
ラクトシル−Ｎ−（５−カルボキシ）ペンタノイルセリ
ンオクチルアミドが結合したアルキルアミノ化ガラス
は、下記モデル構造式を有する。

【０１２７】

【化６０】

【０１２８】実施例６（高分子プライマーへの糖転移反
応）アルキルアミノ化ガラスを担体とする高分子プライマー
へのα２，３シアル酸転移酵素によるＮ−アセチルノイ
ラミン酸の転移 Ｏ−ラクトシル−Ｎ−（６−アクリロイルアミノ）カプ
ロイルセリンオクチルアミド−アクリルアミド共重合体
２２ｍｇの代わりに、実施例５で得た、Ｏ−ラクトシル
−Ｎ−（５−カルボキシ）ペンタノイルセリンオクチル
アミドが結合したアルキルアミノ化ガラスビーズ６０ｍ
ｇを用い、実施例３と同様の反応を行った。反応後、ガ
ラスビーズを蒸留水でよく洗浄し、目的物６７ｍｇを得
た。該Ｎ−アセチルノイラミン酸の転移した生成物は、
下記モデル構造式を有する。

【０１２９】

【化６１】 （式中、Ａｃはアセチル基を示す。）

【０１３０】実施例７（スフィンゴ糖脂質）１−Ｏ−（Ｎ−アセチルノイラミニル−α−（２→
３））ラクトシル−Ｎ−ステアロイルスフィンゴシンの
合成 実施例３で得たポリマー２２ｍｇの代わりに、実施例６
で得たガラスビーズ６７ｍｇを用いて、実施例４と同様
の反応を行った。反応後、反応液を高速液体クロマトグ
ラフィーにて分析し、１−Ｏ−（Ｎ−アセチルノイラミ
ニル−α−（２→３））ラクトシル−Ｎ−ステアロイル
スフィンゴシンが生成していることを確認した。

【０１３１】参考例９ Ｏ−（２，３，４，６−Ｏ−テトラアセチル）グルコシ
ル−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルセリンオクチルアミ
ドの合成 ２，３，６，２’，３’，４’，６’−Ｏ−ヘプタアセ
チルラクトシルブロミド１２．０ｇの代わりに、２，
３，４，６−Ｏ−テトラアセチルグルコシルブロミド
７．０７ｇ（１７．２ｍｍｏｌｅ）を用い、参考例２と
同様の反応を行い、目的物３．５６ｇを得た。Ｏ−
（２，３，４，６−Ｏ−テトラアセチル）グルコシル−
Ｎ−ベンジルオキシカルボニルセリンオクチルアミド
は、下記構造式を有する。

【０１３２】

【化６２】 （式中、Ａｃはアセチル基を示す。）

【０１３３】参考例１０ Ｏ−（２，３，４，６−Ｏ−テトラアセチル）グルコシ
ルセリンオクチルアミドの合成 ２，３，６，２’，３’，４’，６’−Ｏ−ヘプタアセ
チルラクトシル−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルセリン
オクチルアミド４．０ｇの代わりに、参考例９で得たＯ
−（２，３，４，６−Ｏ−テトラアセチル）グルコシル
−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルセリンオクチルアミド
３．０ｇを用い、参考例３と同様の反応を行い、目的物
２．２１ｇを得た。Ｏ−（２，３，４，６−Ｏ−テトラ
アセチル）グルコシルセリンオクチルアミドは、下記構
造式を有する。

【０１３４】

【化６３】 （式中、Ａｃはアセチル基を示す。）

【０１３５】実施例８（セリン誘導体の配糖体のモノマ
ーの前駆体）Ｏ−（２，３，４，６−Ｏ−テトラアセチル）グルコシ
ル−Ｎ−（６−アクリ ロイルアミノ）カプロイルセリン
オクチルアミドの合成 Ｏ−（２，３，６，２’，３’，４’，６’−Ｏ−ヘプ
タアセチル）ラクトシルセリンオクチルアミド１．１４
ｇの代わりに、参考例１０で得たＯ−（２，３，４，６
−Ｏ−テトラアセチル）グルコシルセリンオクチルアミ
ド０．７５ｇ（１．３７ｍｍｏｌｅ）を用い、参考例４
と同様の反応を行い、目的物０．７３ｇを得た。Ｏ−
（２，３，４，６−Ｏ−テトラアセチル）グルコシル−
Ｎ−（６−アクリロイルアミノ）カプロイルセリンオク
チルアミドは、下記構造式を有する。

【０１３６】

【化６４】 （式中、Ａｃはアセチル基を示す。）

【０１３７】実施例９（セリン誘導体の配糖体モノマ
ー）Ｏ−グルコシル−Ｎ−（６−アクリルアミド）カプロイ
ルセリンオクチルアミドの合成 Ｏ−（２，３，６，２’，３’，４’，６’−Ｏ−ヘプ
タアセチル）ラクトシル−Ｎ−（６−アクリロイルアミ
ノ）カプロイルセリンオクチルアミド４００ｍｇの代わ
りに、実施例８で得たＯ−（２，３，４，６−Ｏ−テト
ラアセチル）グルコシル−Ｎ−（６−アクリルアミド）
カプロイルセリンオクチルアミド２８５ｍｇ（０．４ｍ
ｍｏｌｅ）を用い、実施例１と同様の反応を行ない、目
的物２０５ｍｇを得た。Ｏ−グルコシル−Ｎ−（６−ア
クリロイルアミノ）カプロイルセリンオクチルアミド
は、下記構造式を有する。

【０１３８】

【化６５】

【０１３９】実施例１０（スフィンゴ糖脂質合成用高分
子プライマー）Ｏ−グルコシル−Ｎ−（６−アクリロイルアミノ）カプ
ロイルセリンオクチルアミド−アクリルアミド共重合体
の合成 Ｏ−ラクトシル−Ｎ−（６−アクリルロイルアミノ）カ
プロイルセリンオクチルアミド１５０ｍｇの代わりに、
実施例９で得たＯ−グルコシル−Ｎ−（６−アクリロイ
ルアミノ）カプロイルセリンオクチルアミド１１５ｍｇ
（０．２１ｍｍｏｌｅ）を用いて、実施例２と同様の反
応を行い、目的物１６５ｍｇを得た。得られたポリマー
中のＯ−グルコシル−Ｎ−（６−アクリロイルアミノ）
カプロイルセリンオクチルアミド残基は、下記構造式を
有する。その含有量は２０モル％である。

【０１４０】

【化６６】

【０１４１】実施例１１（プライマー高分子への糖転移
反応）Ｏ−グルコシル−Ｎ−（６−アクリロイルアミノ）カプ
ロイルセリンオクチルアミド−アクリルアミド共重合体
へのβ１，４ガラクトース転移酵素によるガラクトース
の転移 Ｏ−グルコシル−Ｎ−（６−アクリロイルアミノ）カプ
ロイルセリンオクチルアミド−アクリルアミド共重合体
１７ｍｇ、ウリジン−ジリン酸−ガラクトース・２ナト
リウム塩１６ｍｇ、α−ラクトアルブミン０．５ｍｇ、
塩化マンガン０．６４ｍｇ、仔ウシ由来アルカリフォス
ファターゼ２０ｕｎｉｔ、トリトンＣＦ−５４を１０ｕ
ｌ含む５０ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ６．０）２ｍｌ
に、牛乳由来のβ１，４ガラクトース転移酵素１．０ｕ
ｎｉｔを添加し、３７℃で３日間反応させた。実施例３
と同様の方法で精製し、目的物を１７ｍｇ得た。該ポリ
マー中のＯ−ラクトシル−Ｎ−（６−アクリロイルアミ
ノ）カプロイルセリンオクチルアミド残基は、下記構造
式を有する。その含有量は２０モル％である。

【０１４２】

【化６７】

【０１４３】実施例１２（スフィンゴ糖脂質）１−Ｏ−ラクトシル−Ｎ−ステアロイルスフィンゴシン
の合成 実施例３で得たポリマー２２ｍｇの代わりに、実施例１
１で得たポリマー１７ｍｇを用い、実施例４と同様の反
応を行った。反応後、反応液を高速液体クロマトグラフ
ィーにて分析し、１−Ｏ−ラクトシル−Ｎ−ステアロイ
ルスフィンゴシンが生成していることを確認した。１−
Ｏ−ラクトシル−Ｎ−ステアロイルスフィンゴシンは、
下記構造式を有する。

【０１４４】

【化６８】

【０１４５】実施例１３（高分子プライマーへの糖転移
反応）ガラクトースが転移したＯ−グルコシル−Ｎ−（６−ア
クリロイルアミノ）カプロイルセリンオクチルアミド−
アクリルアミド共重合体へのα２，３シアル酸転移酵素
によるＮ−アセチルノイラミン酸の転移 実施例２で得たポリマー２２ｍｇの代わりに、実施例１
１で得たポリマー１７ｍｇを用い、実施例３と同様な反
応を行い、目的物１８ｍｇを得た。得られたポリマー中
の１−Ｏ−（Ｎ−アセチルノイラミニル−α−（２→
３））ラクトシル−Ｎ−（６−アクリロイルアミノ）カ
プロイルセリンオクチルアミド残基の含有量は２０モル
％であった。

【０１４６】実施例１４（スフィンゴ糖脂質）１−Ｏ−（Ｎ−アセチルノイラミニル−α−（２→
３））ラクトシル−Ｎ−ステアロイルスフィンゴシンの
合成 実施例３で得たポリマー２２ｍｇの代わりに、実施例１
３で得たポリマー１８ｍｇを用い、実施例４と同様な反
応を行った。反応後、反応液を高速液体クロマトグラフ
ィーにて分析し、１−Ｏ−（Ｎ−アセチルノイラミニル
−α−（２→３））ラクトシル−Ｎ−ステアロイルスフ
ィンゴシンが生成していることを確認した。

Claims (13)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 高分子担体上に、一般式（Ｉ）で表され
   る基が結合していることを特徴とするスフィンゴ糖脂質
   合成用高分子プライマー。 【化１】 （式中、Ｒ¹ およびＲ² はそれぞれ独立して、Ｈまたは
   単糖残基あるいはオリゴ糖残基を示し、Ｒ³ は炭素数６
   〜２０のアルキル基またはアルケニル基を示し、Ｒ⁴は
   炭素数５〜１９のアルキレン基を示す。）
2. 【請求項２】 高分子担体が、アルキルアミノ化ガラ
   ス、ポリアクリルアミド、ポリメタクリルアミドまたは
   アクリルアミドとメタクリルアミドの共重合体またはア
   クリルアミドおよび／またはメタクリルアミドと他のビ
   ニル系モノマーとの共重合体である請求項１記載のスフ
   ィンゴ糖脂質合成用高分子プライマー。
3. 【請求項３】 高分子担体上に、一般式(II)で表される
   基が結合していることを特徴とするスフィンゴ糖脂質合
   成用高分子プライマー。 【化２】 （式中、Ｒ¹ は炭素数６〜２０のアルキル基またはアル
   ケニル基、Ｒ² は炭素数５〜１９のアルキレン基を示
   す。）
4. 【請求項４】 高分子担体が、アルキルアミノ化ガラ
   ス、ポリアクリルアミド、ポリメタクリルアミドまたは
   アクリルアミドとメタクリルアミドの共重合体またはア
   クリルアミドおよび／またはメタクリルアミドと他のビ
   ニル系モノマーとの共重合体である請求項３記載のスフ
   ィンゴ糖脂質合成用高分子プライマー。
5. 【請求項５】 アクリルアミド残基および／またはメタ
   クルアミド残基および一般式(III) で表される残基から
   構成されるビニル系共重合体において、一般式(III) で
   表される残基が全ビニル系共重合体中、５〜９５モル％
   であるスフィンゴ糖脂質合成用水溶性高分子プライマ
   ー。 【化３】 （式中、Ｒ¹ およびＲ² はそれぞれ独立して、Ｈまたは
   単糖残基あるいはオリゴ糖残基を示し、Ｒ³ は炭素数６
   〜２０のアルキル基またはアルケニル基を示し、Ｒ⁴は
   Ｈまたはメチル基を示す。）
6. 【請求項６】 アクリルアミド残基および／またはメタ
   クルアミド残基および一般式(IV)で表される残基から構
   成されるビニル系共重合体において、一般式(IV)で表さ
   れる残基が全ビニル系共重合体中、５〜９５モル％であ
   るスフィンゴ糖脂質合成用水溶性高分子プライマー。 【化４】 （式中、Ｒ¹ は炭素数６〜２０のアルキル基またはアル
   ケニル基を示し、Ｒ² はＨまたはメチル基を示す。）
7. 【請求項７】 一般式(V) で表されるセリン誘導体の配
   糖体モノマー。 【化５】 （式中、Ｒ¹ およびＲ² はそれぞれ独立して、Ｈまたは
   単糖残基あるいはオリゴ糖残基を示し、Ｒ³ は炭素数６
   〜２０のアルキル基またはアルケニル基を示し、Ｒ⁴ は
   Ｈまたはメチル基を示し、ｎは５〜１９の整数を示
   す。）
8. 【請求項８】 一般式(VI)で表されるセリン誘導体の配
   糖体モノマー。 【化６】 （式中、Ｒ¹ は炭素数６〜２０のアルキル基またはアル
   ケニル基を示し、Ｒ² はＨまたはメチル基を示し、ｎは
   ５〜１９の整数を示す。）
9. 【請求項９】 一般式(VII) で表される活性化オリゴ糖
   と一般式(VIII)で表されるセリン誘導体とを触媒存在
   下、縮合反応させた後、セリン残基部分のアミノ基の保
   護基を除去し、一般式(IX)で表されるアクリルアミド誘
   導体あるいはメタクリルアミド誘導体と縮合反応させ、
   さらにオリゴ糖部分の保護基を除去することにより、一
   般式(V) で示されるセリン誘導体の配糖体モノマーを製
   造することを特徴とするセリン誘導体の配糖体モノマー
   の製造方法。 【化７】 （式中、Ｒ⁵ およびＲ⁶ はそれぞれ独立してアシル型保
   護基、エーテル型保護基または水酸基を前記保護基で保
   護した単糖残基あるいは水酸基を前記保護基で保護した
   オリゴ糖残基を示し、Ｒ⁷ 、Ｒ⁸ 、Ｒ⁹ 、Ｒ¹⁰およびＲ
   ¹¹はそれぞれ独立してアシル型保護基またはエーテル型
   保護基を示し、Ｘは活性化基を示す。） 【化８】 （式中、Ｒ¹²は保護基を示し、Ｒ¹³は炭素数６〜２０の
   アルキル基またはアルケニル基を示す。） 【化９】 （式中、Ｒ¹⁴はＨまたはメチル基を示し、Ｙは水酸基、
   臭素原子または塩素原子を示し、ｎは５〜１９の整数を
   示す。） 【化１０】 （式中、Ｒ¹ およびＲ² はそれぞれ独立して、Ｈまたは
   単糖残基あるいはオリゴ糖残基を示し、Ｒ³ は炭素数６
   〜２０のアルキル基またはアルケニル基を示し、Ｒ⁴ は
   Ｈまたはメチル基を示し、ｎは５〜１９の整数を示
   す。）
10. 【請求項１０】 一般式(X) で表される活性化糖と一般
    式(VIII)で表されるセリン誘導体とを触媒存在下、縮合
    反応させた後、セリン残基部分のアミノ基の保護基を除
    去し、一般式(IX)で表されるアクリルアミド誘導体ある
    いはメタクリルアミド誘導体と縮合反応させ、さらに糖
    部分の保護基を除去することにより、一般式(VI)で示さ
    れるセリン誘導体の配糖体モノマーを製造することを特
    徴とするセリン誘導体の配糖体モノマーの製造方法。 【化１１】 （式中、Ｒ¹⁵、Ｒ¹⁶、Ｒ¹⁷およびＲ¹⁸はそれぞれ独立し
    て、アシル型保護基またはエーテル型保護基を示し、Ｘ
    は活性化基を示す。） 【化１２】 （式中、Ｒ¹²は保護基を示し、Ｒ¹³は炭素数６〜２０の
    アルキル基またはアルケニル基を示す。） 【化１３】 （式中、Ｒ¹⁴はＨまたはメチル基を示し、Ｙは水酸基、
    臭素原子または塩素原子を示し、ｎは５〜１９の整数を
    示す。） 【化１４】 （式中、Ｒ¹ は炭素数６〜２０のアルキル基またはアル
    ケニル基を示し、Ｒ² はＨまたはメチル基を示し、ｎは
    ５〜１９の整数を示す。）
11. 【請求項１１】 請求項７または請求項８記載のセリン
    誘導体の配糖体モノマーとアクリルアミドおよび／また
    はメタクリルアミドとを適当な触媒存在下、共重合させ
    ることを特徴とするスフィンゴ糖脂質合成用水溶性高分
    子プライマーの製造方法。
12. 【請求項１２】 スフィンゴ糖脂質を製造する方法であ
    って （１）請求項１〜６のいずれか１項記載のスフィンゴ糖
    脂質合成用高分子プライマーに、糖ヌクレオチドの存在
    下に糖転移酵素を作用させることにより、糖ヌクレオチ
    ドより、糖残基を該スフィンゴ糖脂質合成用高分子プラ
    イマーに転移させる工程、および（２）工程（１）で得
    た糖残基が転移したスフィンゴ糖脂質合成用高分子プラ
    イマーに、セラミドの存在下、スフィンゴ糖脂質の糖と
    セラミドとの間のグリコシド結合を加水分解する酵素を
    作用させ、該スフィンゴ糖脂質合成用高分子プライマー
    より、オリゴ糖残基をセラミドに転移させる工程を含む
    ことをと特徴とするスフィンゴ糖脂質の製造方法。
13. 【請求項１３】 スフィンゴ糖脂質を製造する方法であ
    って （１）請求項１〜６のいずれか１項記載のスフィンゴ糖
    脂質合成用高分子プライマーに糖ヌクレオチドの存在下
    に転移酵素を作用させることにより、糖ヌクレオチドよ
    り、糖残基を該スフィンゴ糖脂質合成用高分子プライマ
    ーに転移させる工程、（２）工程（１）を１回または２
    回以上繰り返して、糖鎖を伸長させる工程、（３）必要
    に応じて、副生したヌクレオチド類や未反応の糖ヌクレ
    オチド類を除去する工程、および（４）工程（１）〜工
    程（３）を複数回、繰り返した後、複数の糖残基が転移
    して伸長したスフィンゴ糖脂質合成用高分子プライマー
    に、セラミドの存在下、スフィンゴ糖脂質の糖とセラミ
    ドとの間のグリコシド結合を加水分解する酵素を作用さ
    せ、該スフィンゴ糖脂質合成用高分子プライマーより、
    複数の糖残基が伸長したオリゴ糖残基をセラミドに転移
    させる工程を含むことを特徴とするスフィンゴ糖脂質の
    製造方法。