JPH10251163A - イヌパルボウイルスｄｎａワクチン - Google Patents
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 母系移行抗体陽性動物におけるパルボウイル
スに対する免疫応答の誘発に用いる医薬を製造するため
のＤＮＡワクチンを提供すること。 【解決手段】 該ＤＮＡワクチンは、プラスミドベクタ
ー、並びにパルボウイルス免疫原性ポリペプチドをコー
ドする１つ以上の単離されたヌクレオチド配列及び該配
列に操作可能に結合した転写調節配列を含む。
スに対する免疫応答の誘発に用いる医薬を製造するため
のＤＮＡワクチンを提供すること。 【解決手段】 該ＤＮＡワクチンは、プラスミドベクタ
ー、並びにパルボウイルス免疫原性ポリペプチドをコー
ドする１つ以上の単離されたヌクレオチド配列及び該配
列に操作可能に結合した転写調節配列を含む。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、動物においてパル
ボウイルスに対する防御免疫を刺激するためのＤＮＡワ
クチンに関する。より特定的に言えば、本発明は、母系
移行抗体〔ｍａｔｅｒｎａｌｌｙ ｄｅｒｉｖｅｄ ａｎ
ｔｉｂｏｄｙ（ＭＤＡ）〕陽性動物においてパルボウイ
ルスに対する免疫応答を誘発させるためのＤＮＡワクチ
ンの使用に関する。特に、本発明は、ＭＤＡ陽性イヌに
おいてイヌパルボウイルス（ＣＰＶ）に対する免疫応答
を誘発させるためのＤＮＡワクチンの使用に関する。本
発明はさらに、パルボウイルス、特にイヌパルボウイル
スに対するＤＮＡワクチンにおける使用に適したプラス
ミドベクターに関する。
ボウイルスに対する防御免疫を刺激するためのＤＮＡワ
クチンに関する。より特定的に言えば、本発明は、母系
移行抗体〔ｍａｔｅｒｎａｌｌｙ ｄｅｒｉｖｅｄ ａｎ
ｔｉｂｏｄｙ（ＭＤＡ）〕陽性動物においてパルボウイ
ルスに対する免疫応答を誘発させるためのＤＮＡワクチ
ンの使用に関する。特に、本発明は、ＭＤＡ陽性イヌに
おいてイヌパルボウイルス（ＣＰＶ）に対する免疫応答
を誘発させるためのＤＮＡワクチンの使用に関する。本
発明はさらに、パルボウイルス、特にイヌパルボウイル
スに対するＤＮＡワクチンにおける使用に適したプラス
ミドベクターに関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】ＣＰＶ
は主としてＣＡＮＩＤＡＥの腸内病原体である。ＣＰＶ
は、イヌ、特に若いイヌに感染し、しばしば、急性の下
痢、発熱、白血球減少を特徴とする腸疾患を引き起こ
す。ＣＰＶは感染した動物に高死亡率／高罹患率をもた
らし得る。ＣＰＶは、遺伝的・抗原的にネコ汎白血球減
少症ウイルス（ＦＰＶ）、ミンク腸炎ウイルス（ＰＥ
Ｖ）、アライグマパルボウイルス（ＲＰＶ）に近縁であ
り、これらのウイルスの宿主域変異体であると考えられ
ている。
は主としてＣＡＮＩＤＡＥの腸内病原体である。ＣＰＶ
は、イヌ、特に若いイヌに感染し、しばしば、急性の下
痢、発熱、白血球減少を特徴とする腸疾患を引き起こ
す。ＣＰＶは感染した動物に高死亡率／高罹患率をもた
らし得る。ＣＰＶは、遺伝的・抗原的にネコ汎白血球減
少症ウイルス（ＦＰＶ）、ミンク腸炎ウイルス（ＰＥ
Ｖ）、アライグマパルボウイルス（ＲＰＶ）に近縁であ
り、これらのウイルスの宿主域変異体であると考えられ
ている。
【０００３】イヌ、ネコ、ミンク、アライグマ及びウ
シ、特にイヌやネコのような標的動物のパルボウイルス
感染を予防するためのワクチンが開発された。ＣＰＶ及
びＦＰＶは、それぞれ生弱毒ＣＰＶ及びＦＰＶを用いた
予防接種により効果的に抑制することができる。子犬
は、母系移行抗体が存在する場合には、例えばＷＯ９１
０２０５４号に記載のような特別に開発された生弱毒ワ
クチンだけで防御し得る。そのようなワクチンは、接種
後に変性した生ワクチンウイルスが排出され得るという
不利点を有している。しかし、アジュバントを添加した
不活化製剤の使用は、接種後に生ウイルスが排出され得
ない程度に安全であると見なされ得る。特に母系移行抗
体（ＭＤＡ）の存在下に抗体応答を刺激するためには高
濃度の不活化ワクチンを必要とする。しかし、高力価の
ＭＤＡの存在は不活化ワクチンを用いた効果的な予防接
種を阻害し得る。
シ、特にイヌやネコのような標的動物のパルボウイルス
感染を予防するためのワクチンが開発された。ＣＰＶ及
びＦＰＶは、それぞれ生弱毒ＣＰＶ及びＦＰＶを用いた
予防接種により効果的に抑制することができる。子犬
は、母系移行抗体が存在する場合には、例えばＷＯ９１
０２０５４号に記載のような特別に開発された生弱毒ワ
クチンだけで防御し得る。そのようなワクチンは、接種
後に変性した生ワクチンウイルスが排出され得るという
不利点を有している。しかし、アジュバントを添加した
不活化製剤の使用は、接種後に生ウイルスが排出され得
ない程度に安全であると見なされ得る。特に母系移行抗
体（ＭＤＡ）の存在下に抗体応答を刺激するためには高
濃度の不活化ワクチンを必要とする。しかし、高力価の
ＭＤＡの存在は不活化ワクチンを用いた効果的な予防接
種を阻害し得る。
【０００４】ある種の子犬では、特定の抗原に対する受
動免疫がかなりの期間（４ヶ月以上）予防接種に干渉す
るに十分なレベルで存続し得る。ＭＤＡレベルが低下す
るにつれ、子犬の感染症及び疾患に対する防御が不十分
になるが、それでも予防接種に対して不応答であり得
る。従って、これらの子犬はその幼少期のかなりの期間
防御されない状態にいる。特に母系移行免疫が消失した
後では、同腹仔全部に感染する恐れがあるということは
重大なリスクをはらむ。ＭＤＡの存在による潜在的な感
染のリスクは、イヌに関しては公知であったが、最近、
他の動物の特定の新生仔、特にＭＤＡ陽性のネコや、ミ
ンク及びアライグマの子孫にも存在することが確認され
た。
動免疫がかなりの期間（４ヶ月以上）予防接種に干渉す
るに十分なレベルで存続し得る。ＭＤＡレベルが低下す
るにつれ、子犬の感染症及び疾患に対する防御が不十分
になるが、それでも予防接種に対して不応答であり得
る。従って、これらの子犬はその幼少期のかなりの期間
防御されない状態にいる。特に母系移行免疫が消失した
後では、同腹仔全部に感染する恐れがあるということは
重大なリスクをはらむ。ＭＤＡの存在による潜在的な感
染のリスクは、イヌに関しては公知であったが、最近、
他の動物の特定の新生仔、特にＭＤＡ陽性のネコや、ミ
ンク及びアライグマの子孫にも存在することが確認され
た。
【０００５】ワクチン分野での最近の進展により、免疫
原性タンパク質をコードするプラスミドＤＮＡの投与に
よる免疫の誘発に基づく新しいワクチン種が開発され
た。そのようなワクチンは、体液性及び細胞性免疫応答
を誘発させることにより病気に対する防御を保証し得、
現在使用されているワクチンに係わる多くの不利点がな
い。
原性タンパク質をコードするプラスミドＤＮＡの投与に
よる免疫の誘発に基づく新しいワクチン種が開発され
た。そのようなワクチンは、体液性及び細胞性免疫応答
を誘発させることにより病気に対する防御を保証し得、
現在使用されているワクチンに係わる多くの不利点がな
い。
【０００６】ＤＮＡ免疫の効力が母系移行抗体によって
低減することはないであろうと期待されが、実際には、
１日齢の子豚に仮性狂犬病のｇＤグリコタンパク質遺伝
子を組み込んだプラスミドＤＮＡを用いて仮性狂犬病の
予防接種を行ったが有意な防御は得られないことが判明
した。免疫成雌ブタから生まれた子豚は、チャレンジ後
の抗体動態によって示されたように、仮性狂犬病ウイル
スに対する抗体応答も発生しなかったし、免疫もされな
かった〔Ｍ．Ｍｏｎｔｅｉｌら，Ｖｅｔ．Ｒｅｓ．（１
９９６），２７，４４３−４５２〕。
低減することはないであろうと期待されが、実際には、
１日齢の子豚に仮性狂犬病のｇＤグリコタンパク質遺伝
子を組み込んだプラスミドＤＮＡを用いて仮性狂犬病の
予防接種を行ったが有意な防御は得られないことが判明
した。免疫成雌ブタから生まれた子豚は、チャレンジ後
の抗体動態によって示されたように、仮性狂犬病ウイル
スに対する抗体応答も発生しなかったし、免疫もされな
かった〔Ｍ．Ｍｏｎｔｅｉｌら，Ｖｅｔ．Ｒｅｓ．（１
９９６），２７，４４３−４５２〕。
【０００７】最近のアブストラクトに、「イヌパルボウ
イルスの主要キャプシドタンパク質（ＶＰ−１、ＶＰ−
２）をコードするプラスミドを種々の用量で用いてイヌ
を免疫すると、有意なレベルの抗パルボウイルス抗体が
用量依存的に出現した」ことが手短に報告された。その
後、毒性パルボウイルス株混合物でイヌをチャレンジす
ると、免疫されたイヌは全て感染症や病気から防御され
ることが証明された。該アブストラクトには、用いた構
築物の性質についての言及もないし、イヌの年令や免疫
状態についての記載もなかった。
イルスの主要キャプシドタンパク質（ＶＰ−１、ＶＰ−
２）をコードするプラスミドを種々の用量で用いてイヌ
を免疫すると、有意なレベルの抗パルボウイルス抗体が
用量依存的に出現した」ことが手短に報告された。その
後、毒性パルボウイルス株混合物でイヌをチャレンジす
ると、免疫されたイヌは全て感染症や病気から防御され
ることが証明された。該アブストラクトには、用いた構
築物の性質についての言及もないし、イヌの年令や免疫
状態についての記載もなかった。
【０００８】予防接種の主要な制約の１つは免疫雌の若
い子孫の予防接種に関する。全ての種において、母系移
行抗体の存在は若い子孫における免疫応答の誘発を妨げ
る強力な制約である。
い子孫の予防接種に関する。全ての種において、母系移
行抗体の存在は若い子孫における免疫応答の誘発を妨げ
る強力な制約である。
【０００９】
【課題を解決するための手段】このたび、ベクター、好
ましくはプラスミドベクター、並びにパルボウイルスポ
リペプチドをコードする１つ以上の単離されたヌクレオ
チド配列及び該配列に操作可能に結合した転写調節配列
を含むＤＮＡ分子を用いると、母系移行抗体の存在下で
さえ幼少期の子犬の免疫が首尾良く行われることが知見
された。従って、本発明はＭＤＡ陽性動物にパルボウイ
ルス感染に対する予防接種をする新規且つ有効な方法を
提供する。本発明のＤＮＡ分子を用いたＤＮＡワクチン
により、例えば、ＣＰＶ感染からイヌを、ＦＰＶ感染か
らネコを、またＭＥＶ感染症からミンクを容易に防御す
ることができる。
ましくはプラスミドベクター、並びにパルボウイルスポ
リペプチドをコードする１つ以上の単離されたヌクレオ
チド配列及び該配列に操作可能に結合した転写調節配列
を含むＤＮＡ分子を用いると、母系移行抗体の存在下で
さえ幼少期の子犬の免疫が首尾良く行われることが知見
された。従って、本発明はＭＤＡ陽性動物にパルボウイ
ルス感染に対する予防接種をする新規且つ有効な方法を
提供する。本発明のＤＮＡ分子を用いたＤＮＡワクチン
により、例えば、ＣＰＶ感染からイヌを、ＦＰＶ感染か
らネコを、またＭＥＶ感染症からミンクを容易に防御す
ることができる。
【００１０】本発明は、母系移行抗体の存在下における
動物の予防接種という予期せぬ利点に加えて、対応パル
ボウイルスの宿主域には限定されないＭＤＡ陽性動物の
予防接種法を提供する。該ＤＮＡ分子は、生ウイルスワ
クチンの場合のような細胞親和性による制限がないため
に、多岐にわたるＭＤＡ陽性動物に用いて好結果を得る
ことができる。例えば、ＣＰＶ免疫原性タンパク質をコ
ードするＤＮＡ分子の場合、該ＤＮＡ分子は、ＭＤＡ陽
性のイヌだけでなく、遺伝的・抗原的にＣＰＶに近縁の
パルボウイルス、例えば、ＦＰＶ、ＭＥＶ及びＲＰＶな
どの宿主である動物の予防接種に用い得る。
動物の予防接種という予期せぬ利点に加えて、対応パル
ボウイルスの宿主域には限定されないＭＤＡ陽性動物の
予防接種法を提供する。該ＤＮＡ分子は、生ウイルスワ
クチンの場合のような細胞親和性による制限がないため
に、多岐にわたるＭＤＡ陽性動物に用いて好結果を得る
ことができる。例えば、ＣＰＶ免疫原性タンパク質をコ
ードするＤＮＡ分子の場合、該ＤＮＡ分子は、ＭＤＡ陽
性のイヌだけでなく、遺伝的・抗原的にＣＰＶに近縁の
パルボウイルス、例えば、ＦＰＶ、ＭＥＶ及びＲＰＶな
どの宿主である動物の予防接種に用い得る。
【００１１】母系移行抗体（ＭＤＡ）は、血清陽性母親
からその子孫に受動移行し、子孫は、この循環性ＭＤＡ
により生後数週間受動的に防御される。新生仔は初乳を
介してそのＭＤＡの約９０％を受容するが、経胎盤移行
は全受動抗体の１０％に過ぎないと予想される。ＭＤＡ
の範囲は、新生仔毎に異なり、虚弱仔や最も小さい仔
は、乳のみ能力が劣ったり、乳のみの機会が少ないため
に、しばしば最低レベルのＭＤＡを有する。生まれたば
かりの「平均的な」新生仔の血清抗体レベルは、その母
親のレベルの５０％に等しい。このＭＤＡは約１０日の
半減期で指数的に低下してゆく。
からその子孫に受動移行し、子孫は、この循環性ＭＤＡ
により生後数週間受動的に防御される。新生仔は初乳を
介してそのＭＤＡの約９０％を受容するが、経胎盤移行
は全受動抗体の１０％に過ぎないと予想される。ＭＤＡ
の範囲は、新生仔毎に異なり、虚弱仔や最も小さい仔
は、乳のみ能力が劣ったり、乳のみの機会が少ないため
に、しばしば最低レベルのＭＤＡを有する。生まれたば
かりの「平均的な」新生仔の血清抗体レベルは、その母
親のレベルの５０％に等しい。このＭＤＡは約１０日の
半減期で指数的に低下してゆく。
【００１２】例えば、平均体液性抗体の力価が１：２５
６０（ＨＡＩ）の雌親から生まれた子犬は、生後１週目
には１：１２８０の範囲の力価のＭＤＡを含むと予測さ
れる。約７週齢になると、この抗体力価は、防御レベル
以下の１：２０〜１：４０に低下するが、それでも殆ど
の慣用ワクチンの作用を阻害するのに十分である。殆ど
（９０％以上）の子犬は、少なくとも１０週齢まではＭ
ＤＡを含んでいる。野外で生育したイヌの場合、実験室
育ちのイヌに比べて、既に野外のウイルスに暴露されて
いるか又は予防接種の結果、殆どの雌親は免疫が成立し
ており、従って、免疫雌親から生まれた１０週齢以下の
子犬はＭＤＡ陽性であると考えられる。特に、免疫母親
から生まれた８週齢以下の子犬は、本明細書に記載のＤ
ＮＡワクチンで防御し得るＭＤＡ陽性イヌと考えられ
る。
６０（ＨＡＩ）の雌親から生まれた子犬は、生後１週目
には１：１２８０の範囲の力価のＭＤＡを含むと予測さ
れる。約７週齢になると、この抗体力価は、防御レベル
以下の１：２０〜１：４０に低下するが、それでも殆ど
の慣用ワクチンの作用を阻害するのに十分である。殆ど
（９０％以上）の子犬は、少なくとも１０週齢まではＭ
ＤＡを含んでいる。野外で生育したイヌの場合、実験室
育ちのイヌに比べて、既に野外のウイルスに暴露されて
いるか又は予防接種の結果、殆どの雌親は免疫が成立し
ており、従って、免疫雌親から生まれた１０週齢以下の
子犬はＭＤＡ陽性であると考えられる。特に、免疫母親
から生まれた８週齢以下の子犬は、本明細書に記載のＤ
ＮＡワクチンで防御し得るＭＤＡ陽性イヌと考えられ
る。
【００１３】
【発明の実施の形態】本発明の１つの態様により、母系
移行抗体陽性動物におけるパルボウイルスに対する免疫
応答の誘発に用いる医薬を製造するためのＤＮＡ分子の
使用が提供され、該ＤＮＡ分子は、プラスミドベクタ
ー、並びにパルボウイルス免疫原性ポリペプチドをコー
ドする１つ以上の単離されたヌクレオチド配列及び該配
列に操作可能に結合した転写調節配列を含む。
移行抗体陽性動物におけるパルボウイルスに対する免疫
応答の誘発に用いる医薬を製造するためのＤＮＡ分子の
使用が提供され、該ＤＮＡ分子は、プラスミドベクタ
ー、並びにパルボウイルス免疫原性ポリペプチドをコー
ドする１つ以上の単離されたヌクレオチド配列及び該配
列に操作可能に結合した転写調節配列を含む。
【００１４】好ましくは、本発明は、母系移行抗体陽性
動物におけるイヌパルボウイルス及び抗原的に近縁のパ
ルボウイルスに対する免疫応答の誘発に用いる医薬を製
造するためのＤＮＡ分子の使用を提供し、該ＤＮＡ分子
は、プラスミドベクター、並びにＣＰＶ免疫原性ポリペ
プチドをコードする１つ以上の単離されたヌクレオチド
配列及び該配列に操作可能に結合した転写調節配列を含
む。
動物におけるイヌパルボウイルス及び抗原的に近縁のパ
ルボウイルスに対する免疫応答の誘発に用いる医薬を製
造するためのＤＮＡ分子の使用を提供し、該ＤＮＡ分子
は、プラスミドベクター、並びにＣＰＶ免疫原性ポリペ
プチドをコードする１つ以上の単離されたヌクレオチド
配列及び該配列に操作可能に結合した転写調節配列を含
む。
【００１５】より好ましくは、本発明は、母系移行抗体
陽性イヌにおけるイヌパルボウイルスに対する免疫応答
の誘発に用いる医薬を製造するためのＤＮＡ分子の使用
を提供し、該ＤＮＡ分子は、プラスミドベクター、並び
にＣＰＶ免疫原性ポリペプチドをコードする１つ以上の
単離されたヌクレオチド配列及び該配列に操作可能に結
合した転写調節配列を含む。
陽性イヌにおけるイヌパルボウイルスに対する免疫応答
の誘発に用いる医薬を製造するためのＤＮＡ分子の使用
を提供し、該ＤＮＡ分子は、プラスミドベクター、並び
にＣＰＶ免疫原性ポリペプチドをコードする１つ以上の
単離されたヌクレオチド配列及び該配列に操作可能に結
合した転写調節配列を含む。
【００１６】免疫応答の誘発に用いる医薬を製造するた
めのＤＮＡ分子に用いられる本発明の単離されたパルボ
ウイルスヌクレオチド配列は、ＣＰＶ、ＦＰＶ、ＭＥＶ
又はＲＰＶから選択されるのが好ましく、ＣＰＶ又はＦ
ＰＶであればなお好ましい。特に好ましいのは、ＣＰＶ
ヌクレオチド配列、特に、ＣＰＶ２型、２ａ型及び２ｂ
型から選択されるＣＰＶヌクレオチド配列である。
めのＤＮＡ分子に用いられる本発明の単離されたパルボ
ウイルスヌクレオチド配列は、ＣＰＶ、ＦＰＶ、ＭＥＶ
又はＲＰＶから選択されるのが好ましく、ＣＰＶ又はＦ
ＰＶであればなお好ましい。特に好ましいのは、ＣＰＶ
ヌクレオチド配列、特に、ＣＰＶ２型、２ａ型及び２ｂ
型から選択されるＣＰＶヌクレオチド配列である。
【００１７】好ましくは、本発明に用いられる単離され
たパルボウイルスヌクレオチド配列はＶＰ２タンパク質
をコードする。より好ましくは、該配列は、ＣＰＶのＶ
Ｐ２タンパク質をコードするＣＰＶヌクレオチド配列で
ある。特に、該単離されたヌクレオチド配列は、配列番
号２に示されているアミノ酸配列を有するポリペプチド
をコードするヌクレオチド配列を有する。より特定的に
言えば、該ヌクレオチド配列は配列番号１に示されてい
るヌクレオチド配列を有する。
たパルボウイルスヌクレオチド配列はＶＰ２タンパク質
をコードする。より好ましくは、該配列は、ＣＰＶのＶ
Ｐ２タンパク質をコードするＣＰＶヌクレオチド配列で
ある。特に、該単離されたヌクレオチド配列は、配列番
号２に示されているアミノ酸配列を有するポリペプチド
をコードするヌクレオチド配列を有する。より特定的に
言えば、該ヌクレオチド配列は配列番号１に示されてい
るヌクレオチド配列を有する。
【００１８】本発明のＤＮＡ分子は、パルボウイルスポ
リペプチドをコードする１つ以上の単離されたヌクレオ
チド配列を含み得る。従って、例えば、該ＤＮＡ配列
は、ＶＰ２タンパク質をコードするパルボウイルスポリ
ペプチドに加えて、パルボウイルスＶＰ１タンパク質、
好ましくはＣＰＶ ＶＰ１タンパク質をコードするヌク
レオチド配列をさらに含み得る。あるいは、該ＤＮＡ分
子は、異なる種、例えばＣＰＶ及びＦＰＶから選択され
るか、又は特定の種内の異なる型（株）、例えば、ＣＰ
Ｖ ２型、２ａ型及び２ｂ型から選択される１つ以上の
パルボウイルス由来のＶＰ２タンパク質をコードする単
離配列を含み得る。そのようなＣＰＶのヌクレオチド配
列及びアミノ酸配列の例は、Ｃ．Ｒ．Ｐａｒｒｉｓｈ
ら，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １６６，２９３−３０７，１９
８８；Ｕ．Ｔｒｕｙｅｎら，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ６
９，４７０２−４７１０，１９９５；及びＡ．Ｐ．Ｒｅ
ｅｄら，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ６２，２６６−２７
６，１９８８により公表されている。
リペプチドをコードする１つ以上の単離されたヌクレオ
チド配列を含み得る。従って、例えば、該ＤＮＡ配列
は、ＶＰ２タンパク質をコードするパルボウイルスポリ
ペプチドに加えて、パルボウイルスＶＰ１タンパク質、
好ましくはＣＰＶ ＶＰ１タンパク質をコードするヌク
レオチド配列をさらに含み得る。あるいは、該ＤＮＡ分
子は、異なる種、例えばＣＰＶ及びＦＰＶから選択され
るか、又は特定の種内の異なる型（株）、例えば、ＣＰ
Ｖ ２型、２ａ型及び２ｂ型から選択される１つ以上の
パルボウイルス由来のＶＰ２タンパク質をコードする単
離配列を含み得る。そのようなＣＰＶのヌクレオチド配
列及びアミノ酸配列の例は、Ｃ．Ｒ．Ｐａｒｒｉｓｈ
ら，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １６６，２９３−３０７，１９
８８；Ｕ．Ｔｒｕｙｅｎら，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ６
９，４７０２−４７１０，１９９５；及びＡ．Ｐ．Ｒｅ
ｅｄら，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ６２，２６６−２７
６，１９８８により公表されている。
【００１９】本発明のさらに別の代替態様において、ベ
クターは、別の病原体由来のタンパク質をコードする１
つ以上のヌクレオチド配列をさらに含み得る。該他の病
原体は、イヌ、ネコ及びムスセリド（ｍｕｓｃｅｌｉｄ
ｅ）の病原体から選択されるのが好ましい。プラスミド
中に組み込み得る他のイヌ病原体由来のタンパク質をコ
ードする適当なヌクレオチド配列は、例えば、イヌジス
テンパーウイルス融合体及び／又は赤血球凝集遺伝子、
イヌパラインフルエンザ遺伝子、狂犬病Ｇ遺伝子、アデ
ノウイルスヘキソン遺伝子、イヌコロナスパイク遺伝
子、イヌコロナ核タンパク質遺伝子である。プラスミド
中に組み込み得るネコ病原体由来のタンパク質をコード
する適当なヌクレオチド配列は、例えば、ＦＩＶ、ＦＨ
Ｖ、ＦｅＬＶ、ＦＩＰ、ＦＣＶなど由来の免疫原性タン
パク質をコードするヌクレオチド配列である。さらに、
サイトカインのようなコードされるパルボウイルスタン
パク質に対する免疫応答を増幅するタンパク質をコード
する遺伝子をプラスミド中に組み込んでもよい。
クターは、別の病原体由来のタンパク質をコードする１
つ以上のヌクレオチド配列をさらに含み得る。該他の病
原体は、イヌ、ネコ及びムスセリド（ｍｕｓｃｅｌｉｄ
ｅ）の病原体から選択されるのが好ましい。プラスミド
中に組み込み得る他のイヌ病原体由来のタンパク質をコ
ードする適当なヌクレオチド配列は、例えば、イヌジス
テンパーウイルス融合体及び／又は赤血球凝集遺伝子、
イヌパラインフルエンザ遺伝子、狂犬病Ｇ遺伝子、アデ
ノウイルスヘキソン遺伝子、イヌコロナスパイク遺伝
子、イヌコロナ核タンパク質遺伝子である。プラスミド
中に組み込み得るネコ病原体由来のタンパク質をコード
する適当なヌクレオチド配列は、例えば、ＦＩＶ、ＦＨ
Ｖ、ＦｅＬＶ、ＦＩＰ、ＦＣＶなど由来の免疫原性タン
パク質をコードするヌクレオチド配列である。さらに、
サイトカインのようなコードされるパルボウイルスタン
パク質に対する免疫応答を増幅するタンパク質をコード
する遺伝子をプラスミド中に組み込んでもよい。
【００２０】単離されたパルボウイルス配列に操作可能
に結合した転写調節配列は、同種由来でも異種由来でも
よい。同種とは、転写調節配列とヌクレオチド配列がパ
ルボウイルス、好ましくは同一のパルボウイルス由来の
ものとする。転写調節配列がパルボウイルス種由来でな
い場合、該配列は異種由来である。プラスミドは異種由
来の転写調節配列を含むのが好ましい。従って、例え
ば、プラスミドが１つ以上のＣＰＶヌクレオチド配列を
含む場合、転写調節配列は非ＣＰＶ由来であるのが好ま
しい。ＣＰＶ転写調節配列は、同種のＰ３．５及びＰ３
８プロモーターを含む。
に結合した転写調節配列は、同種由来でも異種由来でも
よい。同種とは、転写調節配列とヌクレオチド配列がパ
ルボウイルス、好ましくは同一のパルボウイルス由来の
ものとする。転写調節配列がパルボウイルス種由来でな
い場合、該配列は異種由来である。プラスミドは異種由
来の転写調節配列を含むのが好ましい。従って、例え
ば、プラスミドが１つ以上のＣＰＶヌクレオチド配列を
含む場合、転写調節配列は非ＣＰＶ由来であるのが好ま
しい。ＣＰＶ転写調節配列は、同種のＰ３．５及びＰ３
８プロモーターを含む。
【００２１】そのような異種転写調節配列の例として
は、（ヒト）サイトメガロウイルス即時（ｉｍｍｅｄｉ
ａｔｅ ｅａｒｌｙ）プロモーター（Ｂ．Ｓｅｅｄら，
Ｎａｔｕｒｅ ３２９，８４０−８４２，１９８７；
Ｅ．Ｆ．Ｆｙｎａｎら，ＰＮＡＳ９０，１１４７８−１
１４８２，１９９３；Ｊ．Ｂ．Ｕｌｍｅｒら，Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ ２５９，１７４５−１７４８，１９９３）、Ｒ
ｏｕｓ肉腫ウイルス ＬＴＲ（ＲＳＶ，Ｃ．Ｍ．Ｇｏｒ
ｍａｎら，ＰＮＡＳ ７９，６７７７−６７８１，１９
８２；Ｆｙｎａｎら，前掲；Ｕｌｍｅｒら，前掲）、Ｍ
ＰＳＶ ＬＴＲ（Ｓｔａｃｅｙら，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇ
ｙ ５０，７２５−７３２，１９８４）、ＳＶ４０即時
プロモーター（Ｊ．Ｓｐｒａｇｕｅら，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ
ｏｇｙ ４５，７７３，１９８３）、メタロチオネイン
プロモーター（Ｒ．Ｌ．Ｂｒｉｎｓｔｅｒら，Ｎａｔｕ
ｒｅ ２９６，３９−４２，１９８２）、Ａｄ２の主後
期プロモーター、β−アクチンプロモーター（Ｔａｎｇ
ら，Ｎａｔｕｒｅ ３５６，１５２−１５４，１９９
２）のようなプロモーターが挙げられる。
は、（ヒト）サイトメガロウイルス即時（ｉｍｍｅｄｉ
ａｔｅ ｅａｒｌｙ）プロモーター（Ｂ．Ｓｅｅｄら，
Ｎａｔｕｒｅ ３２９，８４０−８４２，１９８７；
Ｅ．Ｆ．Ｆｙｎａｎら，ＰＮＡＳ９０，１１４７８−１
１４８２，１９９３；Ｊ．Ｂ．Ｕｌｍｅｒら，Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ ２５９，１７４５−１７４８，１９９３）、Ｒ
ｏｕｓ肉腫ウイルス ＬＴＲ（ＲＳＶ，Ｃ．Ｍ．Ｇｏｒ
ｍａｎら，ＰＮＡＳ ７９，６７７７−６７８１，１９
８２；Ｆｙｎａｎら，前掲；Ｕｌｍｅｒら，前掲）、Ｍ
ＰＳＶ ＬＴＲ（Ｓｔａｃｅｙら，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇ
ｙ ５０，７２５−７３２，１９８４）、ＳＶ４０即時
プロモーター（Ｊ．Ｓｐｒａｇｕｅら，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ
ｏｇｙ ４５，７７３，１９８３）、メタロチオネイン
プロモーター（Ｒ．Ｌ．Ｂｒｉｎｓｔｅｒら，Ｎａｔｕ
ｒｅ ２９６，３９−４２，１９８２）、Ａｄ２の主後
期プロモーター、β−アクチンプロモーター（Ｔａｎｇ
ら，Ｎａｔｕｒｅ ３５６，１５２−１５４，１９９
２）のようなプロモーターが挙げられる。
【００２２】該調節配列はターミネーター及びポリアデ
ニル化配列をさらに含み得る。使用し得る配列には、周
知のウシ成長ホルモンポリアデニル化配列、ＳＶ４０ポ
リアデニル化配列、ヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭ
Ｖ）ターミネーター及びポリアデニル化配列が含まれ
る。
ニル化配列をさらに含み得る。使用し得る配列には、周
知のウシ成長ホルモンポリアデニル化配列、ＳＶ４０ポ
リアデニル化配列、ヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭ
Ｖ）ターミネーター及びポリアデニル化配列が含まれ
る。
【００２３】原則的には、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ
ら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， 第２版， Ｃｏｌｄ Ｓｐ
ｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅ
ｓｓ，１９８９に記載されているような、真核細胞中で
遺伝子の転写を調節し得る転写調節配列を用い得る。さ
らに、該調節配列は、コードされるタンパク質の発現を
増大させる作用を有するイントロン、例えば、ｈＣＭＶ
イントロンＡ（Ｂ．Ｓ．Ｃｈａｐｍａｎら，Ｎｕｃｌｅ
ｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓｅｒａｃｈ １９，３９７９−３
９８６，１９９１）を含み得る。
ら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， 第２版， Ｃｏｌｄ Ｓｐ
ｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅ
ｓｓ，１９８９に記載されているような、真核細胞中で
遺伝子の転写を調節し得る転写調節配列を用い得る。さ
らに、該調節配列は、コードされるタンパク質の発現を
増大させる作用を有するイントロン、例えば、ｈＣＭＶ
イントロンＡ（Ｂ．Ｓ．Ｃｈａｐｍａｎら，Ｎｕｃｌｅ
ｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓｅｒａｃｈ １９，３９７９−３
９８６，１９９１）を含み得る。
【００２４】パルボウイルス ＤＮＡ ワクチン、特にＣ
ＰＶ ＤＮＡワクチンに使用し得るベクターは、担体Ｄ
ＮＡフラグメントと、転写調節配列、標的遺伝子及び必
要なら他の調節配列を含む適当な発現カセットとを含
む。適当なベクターの例には、ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ１
８及びｐＵＣ１９、ｐＮｅｏ、ｐＳＶＬ、ｐＭＳＧ（Ｐ
ｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈから市販されてい
る）並びにｐＭＣ１ｎｅｏ、ｐＳＧ５、ｐＸＴ１及びｐ
ＢＸ（Ｓｔａｒａｔａｇｅｎｅから市販されている）が
含まれる。
ＰＶ ＤＮＡワクチンに使用し得るベクターは、担体Ｄ
ＮＡフラグメントと、転写調節配列、標的遺伝子及び必
要なら他の調節配列を含む適当な発現カセットとを含
む。適当なベクターの例には、ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ１
８及びｐＵＣ１９、ｐＮｅｏ、ｐＳＶＬ、ｐＭＳＧ（Ｐ
ｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈから市販されてい
る）並びにｐＭＣ１ｎｅｏ、ｐＳＧ５、ｐＸＴ１及びｐ
ＢＸ（Ｓｔａｒａｔａｇｅｎｅから市販されている）が
含まれる。
【００２５】本発明に用いたベクターはプラスミドｐ
Ｉ．１８であった。このプラスミドはＤｒ．Ｊ．Ｒｏｂ
ｅｒｔｓｏｎ（ＮＩＢＳＣ）から得たプラスミドｐＩ．
１７由来であった。ｐＵＣをベースとすると考えられる
このベクターはｈＣＭＶプロモーター及び−イントロン
Ａと、クローン化されたターミネーター配列を有してい
た。多クローニング部位をプラスミドｐＩ．１７中にク
ローン化してプラスミドｐＩ．１８を得た。
Ｉ．１８であった。このプラスミドはＤｒ．Ｊ．Ｒｏｂ
ｅｒｔｓｏｎ（ＮＩＢＳＣ）から得たプラスミドｐＩ．
１７由来であった。ｐＵＣをベースとすると考えられる
このベクターはｈＣＭＶプロモーター及び−イントロン
Ａと、クローン化されたターミネーター配列を有してい
た。多クローニング部位をプラスミドｐＩ．１７中にク
ローン化してプラスミドｐＩ．１８を得た。
【００２６】イヌＶＰ２遺伝子の１７５５ｂｐの全コー
ド配列（配列番号１）をプラスミドｐＩ．１８中にクロ
ーン化して、プラスミドベクターＶＰ２／ｐＩ．１８を
得た。このプラスミドを、１９９７年１月２８日に、ブ
ダペスト条約下Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏ
ｎ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ，Ｐｏ
ｒｔｏｎ Ｄｏｗｎ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍにア
クセス番号９７０１２８０１のもとに寄託した。
ド配列（配列番号１）をプラスミドｐＩ．１８中にクロ
ーン化して、プラスミドベクターＶＰ２／ｐＩ．１８を
得た。このプラスミドを、１９９７年１月２８日に、ブ
ダペスト条約下Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏ
ｎ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ，Ｐｏ
ｒｔｏｎ Ｄｏｗｎ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍにア
クセス番号９７０１２８０１のもとに寄託した。
【００２７】類似の技術を用い、パルボウイルスタンパ
ク質をコードする１つの単離されたヌクレオチド配列
を、適当なプラスミド、例えば、ｐＩ．１８中にクロー
ン化して、本発明のＤＮＡ分子を得ることができる。
ク質をコードする１つの単離されたヌクレオチド配列
を、適当なプラスミド、例えば、ｐＩ．１８中にクロー
ン化して、本発明のＤＮＡ分子を得ることができる。
【００２８】本発明の第２の態様により、Ｅｕｒｏｐｅ
ａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆＡｎｉｍａｌ Ｃｅｌ
ｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ，Ｐｏｒｔｏｎ Ｄｏｗｎ，ＵＫに寄
託された受託番号９７０１２８０１を特徴とするＣＰＶ
２ａ型のＶＰ２遺伝子をコードするＤＮＡ配列を含む
プラスミドベクターを提供する。
ａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆＡｎｉｍａｌ Ｃｅｌ
ｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ，Ｐｏｒｔｏｎ Ｄｏｗｎ，ＵＫに寄
託された受託番号９７０１２８０１を特徴とするＣＰＶ
２ａ型のＶＰ２遺伝子をコードするＤＮＡ配列を含む
プラスミドベクターを提供する。
【００２９】寄託されたプラスミドベクターは、母系移
行抗体陽性動物におけるイヌパルボウイルス及び抗原的
に近縁のパルボウイルスに対する免疫応答の誘発に用い
る医薬を製造するためのＤＮＡ分子として用い得る。好
ましくは、該プラスミドベクターは、母系移行抗体陽性
動物、好ましくは、イヌ、ネコ、ミンク及びアライグマ
におけるＣＰＶ、ＦＰＶ、ＭＥＶ及び／又はＲＰＶに対
する免疫応答の誘発に用いる医薬を製造するためのＤＮ
Ａ分子として用い得る。特に、該プラスミドベクター
は、母系移行抗体陽性イヌにおけるＣＰＶに対する免疫
応答の誘発に用いる医薬を製造するためのＤＮＡ分子と
して用い得る。
行抗体陽性動物におけるイヌパルボウイルス及び抗原的
に近縁のパルボウイルスに対する免疫応答の誘発に用い
る医薬を製造するためのＤＮＡ分子として用い得る。好
ましくは、該プラスミドベクターは、母系移行抗体陽性
動物、好ましくは、イヌ、ネコ、ミンク及びアライグマ
におけるＣＰＶ、ＦＰＶ、ＭＥＶ及び／又はＲＰＶに対
する免疫応答の誘発に用いる医薬を製造するためのＤＮ
Ａ分子として用い得る。特に、該プラスミドベクター
は、母系移行抗体陽性イヌにおけるＣＰＶに対する免疫
応答の誘発に用いる医薬を製造するためのＤＮＡ分子と
して用い得る。
【００３０】本発明は別の態様により、母系移行抗体陽
性動物の免疫に用いるためのパルボウイルスＤＮＡワク
チンを提供する。好ましくは、本発明は、それぞれＣＰ
Ｖ、ＦＰＶ、ＭＥＶ及びＲＰＶに対する母系移行抗体陽
性動物の免疫に用いるためのイヌパルボウイルスＤＮＡ
ワクチンを提供する。より好ましくは、本発明は、母系
移行抗体陽性イヌの免疫に用いるためのイヌパルボウイ
ルスＤＮＡワクチンを提供する。本発明の特定の態様に
おいて、本発明により提供され且つ上述されたＤＮＡワ
クチンは、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏ
ｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ，Ｐｏｒｔ
ｏｎ Ｄｏｗｎ，ＵＫに寄託された受託番号９７０１２
８０１を特徴とするプラスミドベクターを含む。
性動物の免疫に用いるためのパルボウイルスＤＮＡワク
チンを提供する。好ましくは、本発明は、それぞれＣＰ
Ｖ、ＦＰＶ、ＭＥＶ及びＲＰＶに対する母系移行抗体陽
性動物の免疫に用いるためのイヌパルボウイルスＤＮＡ
ワクチンを提供する。より好ましくは、本発明は、母系
移行抗体陽性イヌの免疫に用いるためのイヌパルボウイ
ルスＤＮＡワクチンを提供する。本発明の特定の態様に
おいて、本発明により提供され且つ上述されたＤＮＡワ
クチンは、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏ
ｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ，Ｐｏｒｔ
ｏｎ Ｄｏｗｎ，ＵＫに寄託された受託番号９７０１２
８０１を特徴とするプラスミドベクターを含む。
【００３１】本明細書において用語「免疫応答」とは、
例えば細胞毒性Ｔ細胞応答のような細胞性免疫応答、及
び、例えば抗原特異抗体の増大血清レベルのような体液
性免疫応答、又は、抗原に対する中和抗体の存在を指
す。
例えば細胞毒性Ｔ細胞応答のような細胞性免疫応答、及
び、例えば抗原特異抗体の増大血清レベルのような体液
性免疫応答、又は、抗原に対する中和抗体の存在を指
す。
【００３２】用語「転写調節配列」とは、コード配列の
転写を誘導する（即ち、例えばＣＰＶ ＶＰ２又はＶＰ
１タンパク質の産生を容易にする）ＤＮＡコード配列の
近傍のヌクレオチド配列を意味する。該調節ヌクレオチ
ド配列には、所望のコード配列（例えば、ＶＰ２又はＶ
Ｐ１）の十分な発現及び防御免疫が得られるように接種
を受けた動物の免疫系に対するタンパク質産物の提示を
促進する任意の配列が含まれる。
転写を誘導する（即ち、例えばＣＰＶ ＶＰ２又はＶＰ
１タンパク質の産生を容易にする）ＤＮＡコード配列の
近傍のヌクレオチド配列を意味する。該調節ヌクレオチ
ド配列には、所望のコード配列（例えば、ＶＰ２又はＶ
Ｐ１）の十分な発現及び防御免疫が得られるように接種
を受けた動物の免疫系に対するタンパク質産物の提示を
促進する任意の配列が含まれる。
【００３３】本明細書において用語「プロモーター」と
は、転写の誘導に十分な最小の配列を指す。上記のプラ
スミドベクターは、プロモーター配列と近接するか又は
近接していないエンハンサー配列をさらに含み得る。エ
ンハンサー配列は、プロモーター依存性遺伝子発現に影
響を与え、天然遺伝子の５′又は３′領域に位置し得
る。発現は、外来シグナル又は外来物質により構成性又
は誘発性である。場合によって、発現は細胞型特異的、
組織特異的又は種特異的である。
は、転写の誘導に十分な最小の配列を指す。上記のプラ
スミドベクターは、プロモーター配列と近接するか又は
近接していないエンハンサー配列をさらに含み得る。エ
ンハンサー配列は、プロモーター依存性遺伝子発現に影
響を与え、天然遺伝子の５′又は３′領域に位置し得
る。発現は、外来シグナル又は外来物質により構成性又
は誘発性である。場合によって、発現は細胞型特異的、
組織特異的又は種特異的である。
【００３４】添付図面を参照して本発明をさらに説明す
る。図１はプラスミドｐＩ．１８の概略図である。
る。図１はプラスミドｐＩ．１８の概略図である。
【００３５】配列番号１及び２は、それぞれＣＰＶ ２
ａ型ＶＰ２遺伝子及びタンパク質のＤＮＡ配列及びアミ
ノ酸配列を表す。
ａ型ＶＰ２遺伝子及びタンパク質のＤＮＡ配列及びアミ
ノ酸配列を表す。
【００３６】プラスミドベクター ＶＰ２／ｐＩ．１８
の作製 ウイルスＣＰＶ ＵＫ １０１９４（抗原型２ａ）をＡ72
細胞系上で増殖させ、ＭｃＭａｓｔｅｒら（Ｊ．Ｖｉｒ
ｏｌｏｇｙ ３８，３６８，１９８１）に記載のＨｉｒ
ｔ抽出により二本鎖複製形態のＤＮＡを単離した。ＶＰ
２の５′及び３′末端配列のセンス及びアンチセンスオ
リゴヌクレオチドプライマーを用い、ポリメラーゼ連鎖
反応により、ＶＰ２遺伝子の１７５５ｂｐの全コード配
列を増幅した。次のクローンニングを容易にするため
に、センスオリゴヌクレオチドにはＫｐｎＩ制限部位を
付加し、アンチセンスオリゴヌクレオチドにはＥｃｏＲ
Ｉ制限部位を付加した。
の作製 ウイルスＣＰＶ ＵＫ １０１９４（抗原型２ａ）をＡ72
細胞系上で増殖させ、ＭｃＭａｓｔｅｒら（Ｊ．Ｖｉｒ
ｏｌｏｇｙ ３８，３６８，１９８１）に記載のＨｉｒ
ｔ抽出により二本鎖複製形態のＤＮＡを単離した。ＶＰ
２の５′及び３′末端配列のセンス及びアンチセンスオ
リゴヌクレオチドプライマーを用い、ポリメラーゼ連鎖
反応により、ＶＰ２遺伝子の１７５５ｂｐの全コード配
列を増幅した。次のクローンニングを容易にするため
に、センスオリゴヌクレオチドにはＫｐｎＩ制限部位を
付加し、アンチセンスオリゴヌクレオチドにはＥｃｏＲ
Ｉ制限部位を付加した。
【００３７】ＰＣＲ産物をアガロースゲル上の電気泳動
にかけ、１．７ｋｂのフラグメントを精製した。精製さ
れたフラグメントをＫｐｎＩ及びＥｃｏＲＩで消化し、
プラスミドベクターｐＩ．１８のＫｐｎＩ及びＥｃｏＲ
Ｉ部位に連結した。エレクトロポレーションにより、連
結反応体を細菌宿主ＤＨ５αに形質転換した。形質転換
混合物をＬ寒天−アンピシリンプレート上に塗布し、３
７℃でインキュベートして、コロニーを取り出し、（ア
ンピシリンを含む）Ｌブイヨン中で増殖させた。「Ｍｉ
ｎｉ−ｐｒｅｐ」ＤＮＡを作製し、制限酵素分析により
ＶＰ２遺伝子を含む陽性クローンを同定した。
にかけ、１．７ｋｂのフラグメントを精製した。精製さ
れたフラグメントをＫｐｎＩ及びＥｃｏＲＩで消化し、
プラスミドベクターｐＩ．１８のＫｐｎＩ及びＥｃｏＲ
Ｉ部位に連結した。エレクトロポレーションにより、連
結反応体を細菌宿主ＤＨ５αに形質転換した。形質転換
混合物をＬ寒天−アンピシリンプレート上に塗布し、３
７℃でインキュベートして、コロニーを取り出し、（ア
ンピシリンを含む）Ｌブイヨン中で増殖させた。「Ｍｉ
ｎｉ−ｐｒｅｐ」ＤＮＡを作製し、制限酵素分析により
ＶＰ２遺伝子を含む陽性クローンを同定した。
【００３８】ＶＰ２−ｐＩ．１８と称される陽性クロー
ンを多重５００ｍｌ Ｌブイヨン培養中で増幅させ、プ
ラスミドＤＮＡをキアゲンギガ（ｑｉａｇｅｎ ｇｉｇ
ａ）カラム上で精製した。同様に、ｐＩ．１８プラスミ
ドベクターＤＮＡを大型Ｌブイヨン培養から精製した。
ＤＮＡの収率及び純度を分光光度計及びゲル電気泳動に
より測定した。組換えＶＰ２ ｐＩ．１８及びプラスミ
ドベクターｐＩ．１８をダルベッコのリン酸緩衝溶液に
稀釈した。
ンを多重５００ｍｌ Ｌブイヨン培養中で増幅させ、プ
ラスミドＤＮＡをキアゲンギガ（ｑｉａｇｅｎ ｇｉｇ
ａ）カラム上で精製した。同様に、ｐＩ．１８プラスミ
ドベクターＤＮＡを大型Ｌブイヨン培養から精製した。
ＤＮＡの収率及び純度を分光光度計及びゲル電気泳動に
より測定した。組換えＶＰ２ ｐＩ．１８及びプラスミ
ドベクターｐＩ．１８をダルベッコのリン酸緩衝溶液に
稀釈した。
【００３９】Ａ72細胞におけるＶＰ２発現の測定 約１μｇのｐＩ １８ＤＮＡをエレクトロポレーション
によりＡ72細胞中にトランスフェクトした。トランスフ
ェクトした細胞２００μｌ（２×１０5細胞／ｍｌ）を
９６ウエルプレート上に接種し、Ｗｅｌｌｃｏｍｅ修飾
イーグル培地上に維持した。３７℃で２４時間インキュ
ベートした後、培地を除去し、細胞を冷無水エタノール
で２時間−１８℃で固定した。エタノールを除去し、細
胞をｍＡｂ ＣＰＶ／１５／１／Ｃ＋Ｅ／２（腹水）と
共に３７℃で１時間、次いで（Ｅｖａｎｓ Ｂｌｕｅ対
比染色を含む）抗マウスＦＩＴＣ結合体と共に３７℃で
１時間インキュベートした。各インキュベーションステ
ップの後、細胞をＰＢＳで３回洗浄した。Ａ72細胞核と
結合した強い蛍光としてＶＰ２の発現を同定した。
によりＡ72細胞中にトランスフェクトした。トランスフ
ェクトした細胞２００μｌ（２×１０5細胞／ｍｌ）を
９６ウエルプレート上に接種し、Ｗｅｌｌｃｏｍｅ修飾
イーグル培地上に維持した。３７℃で２４時間インキュ
ベートした後、培地を除去し、細胞を冷無水エタノール
で２時間−１８℃で固定した。エタノールを除去し、細
胞をｍＡｂ ＣＰＶ／１５／１／Ｃ＋Ｅ／２（腹水）と
共に３７℃で１時間、次いで（Ｅｖａｎｓ Ｂｌｕｅ対
比染色を含む）抗マウスＦＩＴＣ結合体と共に３７℃で
１時間インキュベートした。各インキュベーションステ
ップの後、細胞をＰＢＳで３回洗浄した。Ａ72細胞核と
結合した強い蛍光としてＶＰ２の発現を同定した。
【００４０】転写調節配列と共に１つ以上の単離された
ＣＰＶヌクレオチド配列を含むプラスミドベクターは、
ＤＮＡの取得を促進するか又は接種部位に対する免疫系
細胞を補強する能力を有するアジュバント又は他の物質
の存在下に個体に投与又は接種し得る。ＣＰＶ ＤＮＡ
自体は、宿主細胞又はプラスミドベクターにより提供さ
れる転写因子により宿主細胞で発現するものと理解され
たい。
ＣＰＶヌクレオチド配列を含むプラスミドベクターは、
ＤＮＡの取得を促進するか又は接種部位に対する免疫系
細胞を補強する能力を有するアジュバント又は他の物質
の存在下に個体に投与又は接種し得る。ＣＰＶ ＤＮＡ
自体は、宿主細胞又はプラスミドベクターにより提供さ
れる転写因子により宿主細胞で発現するものと理解され
たい。
【００４１】個体には、任意の非経口経路を介して、例
えば、静脈内、腹腔内、皮内、皮下、吸入又は筋肉内経
路を介して接種し得る。動物は直接注射により都合よく
アクセスできる比較的大きな筋肉塊を有しているので、
筋肉はＤＮＡワクチンの投与及び発現に有用な部位であ
る。例えば、長期にわたり防御を持続させるために、多
重及び／又は反復注射により比較的大量のＤＮＡワクチ
ンを筋肉内に蓄積させることができる。
えば、静脈内、腹腔内、皮内、皮下、吸入又は筋肉内経
路を介して接種し得る。動物は直接注射により都合よく
アクセスできる比較的大きな筋肉塊を有しているので、
筋肉はＤＮＡワクチンの投与及び発現に有用な部位であ
る。例えば、長期にわたり防御を持続させるために、多
重及び／又は反復注射により比較的大量のＤＮＡワクチ
ンを筋肉内に蓄積させることができる。
【００４２】あるいは、該ＤＮＡワクチンは、表皮への
注射又は点鼻薬のような方法を用いて粘膜経路を介して
投与し得る。
注射又は点鼻薬のような方法を用いて粘膜経路を介して
投与し得る。
【００４３】ＤＮＡワクチン用の特定の製剤は必要な
い。ＤＮＡワクチンの個体への導入には、注射用の生理
食塩水のような任意の適切な生理的に適合し得る媒体が
適当である。
い。ＤＮＡワクチンの個体への導入には、注射用の生理
食塩水のような任意の適切な生理的に適合し得る媒体が
適当である。
【００４４】注射可能な形態での投与に有効なＤＮＡ用
量は、一般に、５０μｇ〜１ｍｇ／ｋｇの範囲である。
防御を維持するために、年１回追加免疫予防接種を行っ
てもよい。
量は、一般に、５０μｇ〜１ｍｇ／ｋｇの範囲である。
防御を維持するために、年１回追加免疫予防接種を行っ
てもよい。
【００４５】本発明のさらに別の態様により、パルボウ
イルス感染、特にＣＰＶ、ＦＰＶ、ＭＥＶ及びＲＰＶに
対して母系移行抗体陽性動物を防御する方法が提供さ
れ、該方法は、上述のＤＮＡワクチンを感受性動物に投
与することを含む。より好ましくは、ＣＰＶに対して母
系移行抗体陽性のイヌを防御する方法が提供され、該方
法は感受性のイヌに上述のＤＮＡワクチンを投与するこ
とを含む。
イルス感染、特にＣＰＶ、ＦＰＶ、ＭＥＶ及びＲＰＶに
対して母系移行抗体陽性動物を防御する方法が提供さ
れ、該方法は、上述のＤＮＡワクチンを感受性動物に投
与することを含む。より好ましくは、ＣＰＶに対して母
系移行抗体陽性のイヌを防御する方法が提供され、該方
法は感受性のイヌに上述のＤＮＡワクチンを投与するこ
とを含む。
【００４６】
【実施例】本発明を以下の実施例により説明する。
【００４７】実施例１ 野生型ＣＰＶ２ｂによるチャレンジに対するイヌの防御
におけるＶＰ２／ｐＩ．１８ＤＮＡ構築物の免疫原性及
び効力の測定実験８〜９週齢の１３匹のビーグル犬の子
犬を５匹ずつの２グループ及び３匹の１グループに分け
た。グループ１の５匹のイヌには、それぞれ総用量３ｍ
ｇのＶＰ２／ｐＩ．１８ＤＮＡを筋肉内接種（Ｉ／Ｍ）
した。グループ２の５匹のイヌには、それぞれ総用量１
ｍｇのＶＰ２／ｐＩ．１８ＤＮＡを接種（Ｉ／Ｍ）し、
グループ３の３匹のイヌには、それぞれ総用量３ｍｇの
ｐＩ．１８ＤＮＡ（プラシーボ）を接種（Ｉ／Ｍ）し
た。全てのイヌに、１ｍｇ／ｍｌの接種物濃度を用い
て、四頭大腿筋と二頭大腿筋の両方に接種した。グルー
プ１とグループ３のイヌにはそれぞれ筋肉当たり０．７
５ｍｌ、総用量３ｍｇを接種し、グループ２のイヌに
は、筋肉当たり０．２５ｍｌ、総用量１ｍｇを接種し
た。
におけるＶＰ２／ｐＩ．１８ＤＮＡ構築物の免疫原性及
び効力の測定実験８〜９週齢の１３匹のビーグル犬の子
犬を５匹ずつの２グループ及び３匹の１グループに分け
た。グループ１の５匹のイヌには、それぞれ総用量３ｍ
ｇのＶＰ２／ｐＩ．１８ＤＮＡを筋肉内接種（Ｉ／Ｍ）
した。グループ２の５匹のイヌには、それぞれ総用量１
ｍｇのＶＰ２／ｐＩ．１８ＤＮＡを接種（Ｉ／Ｍ）し、
グループ３の３匹のイヌには、それぞれ総用量３ｍｇの
ｐＩ．１８ＤＮＡ（プラシーボ）を接種（Ｉ／Ｍ）し
た。全てのイヌに、１ｍｇ／ｍｌの接種物濃度を用い
て、四頭大腿筋と二頭大腿筋の両方に接種した。グルー
プ１とグループ３のイヌにはそれぞれ筋肉当たり０．７
５ｍｌ、総用量３ｍｇを接種し、グループ２のイヌに
は、筋肉当たり０．２５ｍｌ、総用量１ｍｇを接種し
た。
【００４８】赤血球凝集阻害アッセイ このアッセイは記載のように実施した。
【００４９】イヌは予防接種前と予防接種後２１日目に
出血させた。
出血させた。
【００５０】結果 臨床的観察 全てのイヌは、予防接種後２１日間の観察期間を通して
臨床的に正常な状態を保った。接種部位での局所的反応
も認められなかったし、発熱応答も検出されなかった。
臨床的に正常な状態を保った。接種部位での局所的反応
も認められなかったし、発熱応答も検出されなかった。
【００５１】血清学結果 ＨＡＩテストの結果を以下の表に示す。全ての子犬を予
防接種１４日前に出血させ、ＭＤＡレベルを測定した。
全血液試料は予防接種時に採取し、力価を補外した。
防接種１４日前に出血させ、ＭＤＡレベルを測定した。
全血液試料は予防接種時に採取し、力価を補外した。
【００５２】
【表１】
【００５３】結果は、予防接種した２つのグループのイ
ヌはどちらもＣＰＶ ＶＰ２に対して同程度の赤血球凝
集抗体を産生したことを示している。プラシーボを接種
した全てのイヌはＣＰＶに対して抗体陰性のままであっ
た。予防接種したイヌの母系移行抗体レベルは、＜１：
４（陰性）〜１：３３の範囲であると予測された。
ヌはどちらもＣＰＶ ＶＰ２に対して同程度の赤血球凝
集抗体を産生したことを示している。プラシーボを接種
した全てのイヌはＣＰＶに対して抗体陰性のままであっ
た。予防接種したイヌの母系移行抗体レベルは、＜１：
４（陰性）〜１：３３の範囲であると予測された。
【００５４】結論 この実験により、プラスミドベクターｐＩ．１８中に挿
入されたＣＰＶ ＶＰ２で予防接種すると、ＭＤＡの存
在下でさえ若いイヌの抗体応答を首尾良く刺激した
（７、９、１１、１３及び１５番のイヌを参照された
い）。どのイヌにも予防接種後の副作用は認められなか
った。
入されたＣＰＶ ＶＰ２で予防接種すると、ＭＤＡの存
在下でさえ若いイヌの抗体応答を首尾良く刺激した
（７、９、１１、１３及び１５番のイヌを参照された
い）。どのイヌにも予防接種後の副作用は認められなか
った。
【００５５】ＶＰ２を予防接種したイヌの血清応答は、
多くの典拠（Ｌ．Ｅ．Ｃａｒｍｉｃｈａｅｌ，Ｐｒｏｃ
ｅｅｄｉｎｇｓ ＷＳＡＶＡ Ｃｏｎｇｒｅｓｓ １９９
６，２５２−２５８ページ）に示されている１：８０の
最小防御力価を超えていた。著しく対照的に、グループ
１のイヌ（３ｍｇ−ＶＰ２）と同じ拘留場所に置かれた
プラシーボを接種した３匹の動物は全て抗体陰性のまま
であり、これは、野生型のＣＰＶもワクチンのＣＰＶも
存在しなかったことを示している。
多くの典拠（Ｌ．Ｅ．Ｃａｒｍｉｃｈａｅｌ，Ｐｒｏｃ
ｅｅｄｉｎｇｓ ＷＳＡＶＡ Ｃｏｎｇｒｅｓｓ １９９
６，２５２−２５８ページ）に示されている１：８０の
最小防御力価を超えていた。著しく対照的に、グループ
１のイヌ（３ｍｇ−ＶＰ２）と同じ拘留場所に置かれた
プラシーボを接種した３匹の動物は全て抗体陰性のまま
であり、これは、野生型のＣＰＶもワクチンのＣＰＶも
存在しなかったことを示している。
【００５６】この新規なワクチンは、病気と感染を共に
阻止する完全な防御抗体力価を刺激すると共に、接触す
る動物に伝染せず、従って毒性への復帰が生じ得ないと
いう点で慣用ワクチンより有利である。
阻止する完全な防御抗体力価を刺激すると共に、接触す
る動物に伝染せず、従って毒性への復帰が生じ得ないと
いう点で慣用ワクチンより有利である。
【００５７】実施例２ 野生型ＣＰＶ２ｂによるチャレンジに対するＭＤＡ陽性
のイヌの防御におけるＶＰ２／ｐＩ．１８ＤＮＡ構築物
の免疫原性及び効力の測定実験 ５〜６週齢の１０匹のビーグル犬の子犬を５匹ずつの２
グループに分けた。グループ１の５匹のイヌには、それ
ぞれ総用量１ｍｇ／ｐＩ．１８ＤＮＡ（プラシーボ）を
筋肉内接種（Ｉ／Ｍ）した。グループ２の５匹のイヌに
は、それぞれ総用量１ｍｇのＶＰ２／ｐＩ．１８ＤＮＡ
（筋肉当たり０．２５）を接種（Ｉ／Ｍ）した。グルー
プ２の全てのイヌには、１ｍｇ／ｍｌの接種物濃度を用
いて、四頭大腿筋と二頭大腿筋の両方にを接種（筋肉当
たり０．２５）した。グループ１のイヌにはそれぞれ筋
肉当たり１ｍｌ、総用量１ｍｇを接種した。
のイヌの防御におけるＶＰ２／ｐＩ．１８ＤＮＡ構築物
の免疫原性及び効力の測定実験 ５〜６週齢の１０匹のビーグル犬の子犬を５匹ずつの２
グループに分けた。グループ１の５匹のイヌには、それ
ぞれ総用量１ｍｇ／ｐＩ．１８ＤＮＡ（プラシーボ）を
筋肉内接種（Ｉ／Ｍ）した。グループ２の５匹のイヌに
は、それぞれ総用量１ｍｇのＶＰ２／ｐＩ．１８ＤＮＡ
（筋肉当たり０．２５）を接種（Ｉ／Ｍ）した。グルー
プ２の全てのイヌには、１ｍｇ／ｍｌの接種物濃度を用
いて、四頭大腿筋と二頭大腿筋の両方にを接種（筋肉当
たり０．２５）した。グループ１のイヌにはそれぞれ筋
肉当たり１ｍｌ、総用量１ｍｇを接種した。
【００５８】赤血球凝集阻害アッセイ このアッセイは記載のように実施した。
【００５９】イヌは予防接種前と予防接種後７、１４及
び２１日目に出血させた。
び２１日目に出血させた。
【００６０】結果 臨床的観察 全てのイヌは、予防接種後２１日間の観察期間を通して
臨床的に正常な状態を保った。接種部位での局所的反応
も認められなかったし、発熱応答も検出されなかった。
臨床的に正常な状態を保った。接種部位での局所的反応
も認められなかったし、発熱応答も検出されなかった。
【００６１】血清学的結果 ＨＡＩテストの結果を以下の表に示す。全ての子犬を予
防接種当日と、予防接種後７、１４及び２１日目に出血
させてＭＤＡレベルを測定した。
防接種当日と、予防接種後７、１４及び２１日目に出血
させてＭＤＡレベルを測定した。
【００６２】
【表２】
【００６３】結果は、１：３２〜１：１２８の範囲の有
意なＭＤＡ力価を有する予防接種した子犬（グループ
２）は、予防接種後７日目には抗体力価の初期半減期を
示したが、予防接種後１４日目までに、力価が１：１０
２４のレベルに達する活性抗体を産生したことを示して
いる。予防接種後１４日目の全力価は防御レベルを十分
に超えていた。プラシーボを接種したイヌはＭＤＡの正
常な低下を示した。
意なＭＤＡ力価を有する予防接種した子犬（グループ
２）は、予防接種後７日目には抗体力価の初期半減期を
示したが、予防接種後１４日目までに、力価が１：１０
２４のレベルに達する活性抗体を産生したことを示して
いる。予防接種後１４日目の全力価は防御レベルを十分
に超えていた。プラシーボを接種したイヌはＭＤＡの正
常な低下を示した。
【００６４】配列表 配列番号：１ 配列の長さ：１７５２ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：不明 配列の種類：ＤＮＡ（ｇｅｎｏｍｉｃ） 配列
【００６５】
【化１】
【００６６】
【化２】
【００６７】
【化３】
【００６８】配列番号：２ 配列の長さ：５８４ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 配列
【００６９】
【化４】
【００７０】
【化５】
【００７１】
【化６】
【図面の簡単な説明】
【図１】プラスミドｐＩ．１８の概略図である。
Claims (14)
- 【請求項１】 母系移行抗体陽性動物におけるパルボウ
イルスに対する免疫応答の誘発に用いる医薬を製造する
ためのＤＮＡ分子の使用であって、該ＤＮＡ分子が、ベ
クター、好ましくはプラスミドベクター、並びにパルボ
ウイルス免疫原性ポリペプチドをコードする１つ以上の
単離されたヌクレオチド配列及び該配列に操作可能に結
合した転写調節配列を含むことを特徴とする使用。 - 【請求項２】 前記単離されたヌクレオチド配列がＣＰ
Ｖ免疫原性ポリペプチドをコードする、請求項１に記載
の使用。 - 【請求項３】 前記医薬がＣＰＶ又は抗原的に近縁のパ
ルボウイルスに対する免疫応答の誘発に用いられる、請
求項２に記載の使用。 - 【請求項４】 前記単離されたヌクレオチド配列がＶＰ
２タンパク質をコードする、請求項１から３のいずれか
一項に記載の使用。 - 【請求項５】 前記単離された配列が配列番号２に示さ
れているポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を
有する、請求項４に記載の使用。 - 【請求項６】 前記ＣＰＶポリペプチドがＣＰＶ ２
型、２ａ型及び２ｂ型から選択される、請求項３に記載
の使用。 - 【請求項７】 前記ベクターが別の病原体由来の遺伝子
をコードする１つ以上のヌクレオチド配列をさらに含
む、請求項１から６のいずれか一項に記載の使用。 - 【請求項８】 前記転写調節配列が、異種由来、好まし
くは非パルボウイルス由来、特に非ＣＰＶ由来である、
請求項１から７のいずれか一項に記載の使用。 - 【請求項９】 前記転写調節配列の少なくとも１つがサ
イトメガロウイル即時型プロモーターである、請求項８
に記載の使用。 - 【請求項１０】 前記調節配列がターミネーター及びポ
リアデニル化配列をさらに含む、請求項８又は９に記載
の使用。 - 【請求項１１】 ＤＮＡワクチンが、Ｅｕｒｏｐｅａｎ
Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ
Ｃｕｌｔｕｒｅ，Ｐｏｒｔｏｎ Ｄｏｗｎ，ＵＫにアク
セス番号９７０１２８０１のもとに寄託されているプラ
スミドベクターを含む、請求項１又は２に記載の使用。 - 【請求項１２】 Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉ
ｏｎ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ，Ｐ
ｏｒｔｏｎ Ｄｏｗｎ，ＵＫに寄託されている受託番号
９７０１２８０１であることを特徴とするイヌパルボウ
イルス２ａ型のＶＰ２遺伝子をコードするＤＮＡ配列を
含むプラスミドベクター。 - 【請求項１３】 Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉ
ｏｎ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ，Ｐ
ｏｒｔｏｎ Ｄｏｗｎ，ＵＫに寄託された受託番号９７
０１２８０１であることを特徴とするプラスミドベクタ
ーを含む、母系移行抗体陽性イヌの免疫に用いるための
イヌパルボウイルスＤＮＡワクチン。 - 【請求項１４】 請求項１から９及び１１のいずれか一
項に記載のＤＮＡワクチンを投与することを含む、イヌ
パルボウイルスに対して母系移行抗体陽性のイヌ、ネ
コ、ミンク及び／又はアライグマを防御する方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP97300889 | 1997-02-12 | ||
| GB97300889.9 | 1997-02-12 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10251163A true JPH10251163A (ja) | 1998-09-22 |
Family
ID=8229212
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10029627A Pending JPH10251163A (ja) | 1997-02-12 | 1998-02-12 | イヌパルボウイルスｄｎａワクチン |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6187759B1 (ja) |
| JP (1) | JPH10251163A (ja) |
| AU (1) | AU732885B2 (ja) |
| CA (1) | CA2223029A1 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008503211A (ja) * | 2004-06-17 | 2008-02-07 | ワイス | ３つの完全な転写単位を有するプラスミドおよびｈｉｖに対する免疫応答を誘発するための免疫原組成物 |
| JP2013507925A (ja) * | 2009-10-14 | 2013-03-07 | ザ・ボード・オブ・リージェンツ・フォー・オクラホマ・ステート・ユニバーシティ | アライグマからのイヌパルボウイルス−２に関連するウイルスの分離 |
| CN113861286A (zh) * | 2021-11-12 | 2021-12-31 | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 | 犬细小病毒纳米抗体cpv-vhh-d4及其应用 |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7294338B2 (en) * | 1996-07-19 | 2007-11-13 | Merial | Polynucleotide vaccine formula against canine pathologies, in particular respiratory and digestive pathologies |
| FR2751227B1 (fr) | 1996-07-19 | 1998-11-27 | Rhone Merieux | Formule de vaccin polynucleotidique contre les pathologies canines, notamment les pathologies respiratoires et digestives |
| US7576909B2 (en) * | 1998-07-16 | 2009-08-18 | Imra America, Inc. | Multimode amplifier for amplifying single mode light |
| US6852705B2 (en) | 2000-01-21 | 2005-02-08 | Merial | DNA vaccines for farm animals, in particular bovines and porcines |
| US7078388B2 (en) * | 2000-01-21 | 2006-07-18 | Merial | DNA vaccines for farm animals, in particular bovines and porcines |
| US20040002472A1 (en) * | 2000-01-21 | 2004-01-01 | Audonnet Jean-Christophe Francis | Vaccination or immunization using a prime-boost regimen |
| CN101815528A (zh) * | 2007-06-14 | 2010-08-25 | 俄克拉荷马州大学评议会 | 包含犬细小病毒遗传性变体的疫苗 |
| US8227583B2 (en) * | 2007-06-14 | 2012-07-24 | The Board Of Regents For Oklahoma State University | Vaccines containing canine parvovirus genetic variants |
| WO2012164372A1 (en) | 2011-06-01 | 2012-12-06 | Indian Immunologicals Limited | Recombinant anti-canine parvovirus antibody and uses thereof |
| EP4286002A3 (en) | 2015-09-29 | 2024-02-28 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Canine parvovirus (cpv) virus-like particle (vlp) vaccines and uses thereof |
| KR102117812B1 (ko) * | 2019-04-19 | 2020-06-03 | 대한민국(농림축산식품부 농림축산검역본부장) | 재조합 개파보바이러스 2a VP2 및 2b VP2 항원 단백질 및 이의 용도 |
| EP3868882A1 (en) | 2020-02-21 | 2021-08-25 | European Molecular Biology Laboratory | Archaeal pyrrolysyl trna synthetases for orthogonal use |
| CA3196668A1 (en) * | 2020-11-04 | 2022-05-12 | Intervet International B.V. | Canine parvovirus |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0117767A1 (en) | 1983-01-07 | 1984-09-05 | Mgi Pharma, Inc. | Production of parvovirus subunit vaccines |
| WO1988002026A1 (en) | 1986-09-08 | 1988-03-24 | Applied Biotechnology, Inc. | Empty viral capsid vaccines |
| US4971793A (en) | 1988-05-09 | 1990-11-20 | Boyce Thompson Institute For Plant Research, Inc. | Subunit canine parvovirus vaccine |
| DE69023140T2 (de) | 1989-08-08 | 1996-03-21 | Webster Arthur Pty Ltd | Attenuiertes hundeparvovirus (cpv), cpv enthaltender impfstoff und verfahren zur verhütung von infektionen durch cpv bei hunden. |
| ES2026827A6 (es) * | 1991-03-26 | 1992-05-01 | Ercros Sa | Procedimiento para la produccion de una vacuna subunidad contra el parvovirus porcino. |
| ES2026826A6 (es) | 1991-03-26 | 1992-05-01 | Ercros Sa | Procedimiento para la produccion de una vacuna subunidad contra el parvovirus canino y otros virus relacionados. |
| US5593972A (en) * | 1993-01-26 | 1997-01-14 | The Wistar Institute | Genetic immunization |
| JPH08116976A (ja) | 1994-10-20 | 1996-05-14 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | 免疫用核酸調製物およびこれを用いた免疫方法 |
| US5814510A (en) | 1994-11-08 | 1998-09-29 | Cornell Research Foundation, Inc. | Attenuated canine parvovirus vaccine |
| DK0914440T3 (da) * | 1996-04-19 | 2007-05-21 | Merial Ltd | Nukleinsyrevaccination mod parvovirusinfektioner |
| FR2751223B1 (fr) | 1996-07-19 | 1998-12-04 | Rhone Merieux | Formule de vaccin polynucleotidique felin |
| FR2751224B1 (fr) * | 1996-07-19 | 1998-11-20 | Rhone Merieux | Formule de vaccin polynucleotidique contre les pathologies respiratoires et de reproduction des porcs |
| FR2751227B1 (fr) | 1996-07-19 | 1998-11-27 | Rhone Merieux | Formule de vaccin polynucleotidique contre les pathologies canines, notamment les pathologies respiratoires et digestives |
-
1998
- 1998-02-11 CA CA002223029A patent/CA2223029A1/en not_active Abandoned
- 1998-02-12 JP JP10029627A patent/JPH10251163A/ja active Pending
- 1998-02-12 AU AU53898/98A patent/AU732885B2/en not_active Ceased
- 1998-02-12 US US09/022,949 patent/US6187759B1/en not_active Expired - Fee Related
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|---|---|---|---|---|
| JP2008503211A (ja) * | 2004-06-17 | 2008-02-07 | ワイス | ３つの完全な転写単位を有するプラスミドおよびｈｉｖに対する免疫応答を誘発するための免疫原組成物 |
| JP2013507925A (ja) * | 2009-10-14 | 2013-03-07 | ザ・ボード・オブ・リージェンツ・フォー・オクラホマ・ステート・ユニバーシティ | アライグマからのイヌパルボウイルス−２に関連するウイルスの分離 |
| CN113861286A (zh) * | 2021-11-12 | 2021-12-31 | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 | 犬细小病毒纳米抗体cpv-vhh-d4及其应用 |
| CN113861286B (zh) * | 2021-11-12 | 2022-10-25 | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 | 犬细小病毒纳米抗体cpv-vhh-d4及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US6187759B1 (en) | 2001-02-13 |
| AU732885B2 (en) | 2001-05-03 |
| AU5389898A (en) | 1998-08-20 |
| CA2223029A1 (en) | 1998-08-12 |
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