JPH10215887A - エリスリトールの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 食添認可品で安全かつ安価な窒素源を使用
し、工業的生産に適したエリスリトールの製造方法が求
められていた。 【解決手段】 発酵性糖質からエリスリトールを産生す
る能力を有する酵母を、発酵性糖質を主炭素源とする培
地で培養し、培養物よりエリスリトールを採取するエリ
スリトールの製造方法において、培地の主窒素源が硫酸
アンモニウムであることを特徴とするエリスリトールの
製造方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明はエリスリトールの製
造方法に関し、更に詳しくは、培地の主窒素源として硫
酸アンモニウムを使用することにより、発酵法により工
業的に有利にエリスリトールを製造する方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】エリスリトールの製造方法としては、ト
リゴノブシス属（Trigonopsis ）、キャンジダ属（Cand
ida ）の酵母をグリセロールを炭素源とし、カゼイン加
水分解物を窒素源とする培地に培養して製造する方法
（特公昭４７−４１５４９号公報）、キャンジダ属（Ca
ndida ）、トルロプシス属（Torulopsis）、ハンゼヌラ
属（Hansenula)の酵母を炭化水素などを炭素源とし、酵
母エキス、尿素を窒素源とする培地に培養して製造する
方法（特公昭５１−２１０７２号公報）が知られてい
る。しかしながら、これらの方法は、炭素源として使用
される原料が実際の工業的生産において適当でないた
め、未だ工業化されていない。

【０００３】また、モニリエラ・トメントサ・バール・
ポリニス（Moniliella tomentosa var. pollinis）をグ
ルコースなどの糖質を炭素源とし、コーンスティープリ
カー、尿素、酵母エキスを窒素源とする培地に培養して
製造する方法（特開昭６０−１１０２９５号公報な
ど）、エリスリトール生産菌を酵母エキス、コーンステ
ィープリカーを窒素源とする培地に培養して製造する方
法（特開平１−１９９５８４号公報）も知られている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】窒素源としては上記の
様な種々のものが知られている。しかしながら、尿素は
食添としては認可されておらず、食品としてのエリスリ
トールの製造方法には使用できない。酵母エキス、カゼ
イン加水分解物は非常に高価であり、工業的生産におい
ては必ずしも有利な方法とはいえない。また、コーンス
ティープリカーを主窒素源とした場合は、グリセリンが
副生したり、生産したエリスリトールが褐色に着色した
り、多量の塩が混在するため、精製工程での負荷が大き
くなり、経済的に不利である。そこで、本発明の目的
は、食添認可品で安全かつ安価な窒素源を使用し、工業
的生産に適したエリスリトールの製造方法を提供するこ
とにある。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決すべく研究を重ねた結果、主窒素源として硫安を
使用することにより目的が達成されることを見い出し、
本発明を完成するに至った。即ち、本発明の要旨は、発
酵性糖質からエリスリトールを産生する能力を有する酵
母を、発酵性糖質を主炭素源とする培地で培養し、培養
物よりエリスリトールを採取するエリスリトールの製造
方法において、培地の主窒素源が硫酸アンモニウムであ
ることを特徴とするエリスリトールの製造方法に存す
る。

【０００６】本発明の好ましい実施の態様によれば、培
地の窒素源として、窒素原子換算で窒素源の５０〜８５
％が硫酸アンモニウムである上記の製造方法；培地の窒
素源として、窒素原子換算で窒素源の５０〜８５％が硫
酸アンモニウム、残りの１５〜５０％がコーンスティー
プリカーである上記の製造方法；酵母が、モニリエラ属
（Moniliella）に属する酵母である上記の製造方法；酵
母が、モニリエラ・ポリニス（Moniliella pollinis ）
である上記の製造方法；酵母が、イエロビア属（Yarrow
ia）に属する酵母である上記の製造方法；酵母が、イエ
ロビア・リポリチカ（Yarrowia lipolytica）である上
記の製造方法；酵母が、トリコスポロノイデス属（Tric
hosporonoides ）に属する酵母である上記の製造方法；
酵母がトリコスポロノイデス・オエドセファリス（Tric
hosporonoides oedocephalis ）、トリコスポロノイデ
ス・ニグレッセンス（Trichosporonoides nigrescens
）および／またはトリコスポロノイデス・メガチリエ
ンシス（Tricosporonoidesmegachiliensis）である上記
の製造方法；発酵性糖質が、グルコース、フルクトース
および／またはグリセロールである上記の製造方法；培
地中の窒素源濃度が、０．１〜５．０％（Ｗ／Ｖ）であ
る上記の製造方法；培養液のｐＨを３．０〜７．０に保
持することを特徴とする上記の製造方法が提供される。

【０００７】

【発明の実施の形態】以下、本発明の実施の形態につい
て説明する。本発明で用いる酵母としては、発酵性糖質
からエリスリトールを産生する能力を有するものであれ
ばいかなる酵母であっても良い。具体的には、モニリエ
ラ属（Moniliella）、イエロビア属（Yarrowia）、トリ
コスポロノイデス属（Trichosporonoides ）に属する酵
母が挙げられ、モニリエラ属（Moniliella）に属する酵
母としては、例えばモリニエラ・ポリニス（Moniliella
pollinis ）、イエロビア属（Yarrowia）に属する酵母
としては、例えばイエロビア・リポリチカ（Yarrowia
lipolytica）、トリコスポロノイデス属（Trichosporon
oides ）に属する酵母としては、例えば、トリコスポロ
ノイデス・オエドセファリス（Trichosporonoides oed
ocephalis ）、トリコスポロノイデス・メガチリエンシ
ス（Tricosporonoides megachiliensis）、トリコスポ
ロノイデス・ニグレッセンス（Trichosporonoides nig
rescens ）が挙げられる。上記微生物は、ＵＶ照射、Ｎ
−メチル−Ｎ’−ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）処理、
エチルメタンスルホネート（ＥＭＳ）処理、亜硝酸処
理、アクリジン処理等による変異株、あるいは細胞融合
もしくは遺伝子組換え法などの遺伝学的手法により誘導
される組換え株などのいずれの株であってもよい。

【０００８】本発明の製造方法においては、上記微生物
を１種あるいは２種以上が用いられる。より具体的に
は、例えば、モニリエラ・ポリニスＣＢＳ４６１．６７
の変異株ＭＣＩ３３７１、モニリエラ・ポリニスＭＣＩ
３５５４の変異株であるモニリエラ・ポリニスＭＣＩ３
５５５、イエロビア・リポリチカＡＴＣＣ８６６１、ト
リコスポラノイデス・オエドファリスＣＢＳ５６８．８
５の変異株ＭＣＩ３４４０、トリコスポラノイデス・メ
ガチリエンシスＣＢＳ５６７．８５の変異株ＭＣＩ３３
６９、トリコスポラノイデス・ニグレッセンスＣＢＳ２
６８．８１の変異株ＭＣＩ３４３７を挙げることができ
る。

【０００９】イエロビア・リポリチカＡＴＣＣ８６６１
を除く上記の菌株は、国際寄託機関であるオランダ国の
Centraal Bureau voor Schimmelcultures（ＣＢＳ）
寄託されている菌株や発明者らが自然界から分離した菌
株から紫外線照射、Ｎーメチル−Ｎ’−ニトロ−ニトロ
ソグアニジン（ＮＴＧ）等の変異誘起剤処理により発泡
性を低減させた変異株であり、ＭＣＩ３３６９、ＭＣＩ
３３７１、ＭＣＩ３４３７、ＭＣＩ３４４０、ＭＣＩ３
５５４、ＭＣＩ３５５５はそれぞれ工業技術院生命工学
技術研究所にＦＥＲＭ ＢＰ−６１７２、ＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−６１７３、ＦＥＲＭ ＢＰ−６１７４、ＦＥＲＭ
ＢＰ−６１７５、ＦＥＲＭ ＢＰ−６１７０、ＦＥＲＭ
ＢＰ−６１７１として寄託されている。また、イエロ
ビア・リポリチカＡＴＣＣ８６６１株はアメリカのＡｍ
ｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅ
ｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）に寄託されているが、工業技術
院生命工学技術研究所にＦＥＲＭ ＢＰ−６１６９とし
ても寄託されている。ＭＣＩ３３６９、ＭＣＩ３３７
１、ＭＣＩ３４３７、ＭＣＩ３４４０、ＭＣＩ３５５４
およびＭＣＩ３５５５の菌学的性状は以下の通りであ
る。

【００１０】ＭＣＩ３３６９ ＭＣＩ３３６９株はＰＤＡ上、２４℃培養ではじめ白
色、後にオリーブがかった灰色、２週間以上の古い培養
ではオリーブ褐色に変色する。菌の生育は速く、酵母様
の出芽により増殖する。酵母様の細胞ははじめ無色、後
にはオリーブがかった褐色を呈する。栄養菌糸はよく発
達し、隔壁を有し分枝する、幅２〜３．８μｍ、はじめ
無色、後に若干厚膜化し褐色に変色する。気中菌糸の発
達は旺盛で、気中菌糸の側面より出芽型分生子を形成す
る。栄養菌糸、気中菌糸は断片状に切れて分節型の分生
子となる。分節型分生子は円筒形〜樽形、３．６〜２５
μｍ×２．２〜４．３μｍ、はじめ無色、後に淡褐色に
なる。出芽型分生子は単一または３〜４個の連鎖とな
る。分生子は細長い楕円形、大きさは３．４〜７．５μ
ｍ×１．９〜４．１μｍ（平均６．５±１．２μｍ×
３．８±０．６μｍ）、はじめ無色、後にオリーブがか
った褐色を呈する。本菌株（ＭＣＩ３３６９）の形態学
的性状は親株であるトリコスポロノイデスメガチリエン
シス（Trichosporonoides megachiliensis) ＣＢＳ５６
７．８５の基準株の特徴によく一致した。従って、本菌
株はトリコスポロノイデス メガチリエンシス（Tricho
sporonoides megachiliensis) と同定した。

【００１１】ＭＣＩ３３７１ ＭＣＩ３３７１株はＰＤＡ上、２４℃培養で始め白色〜
黄味白色、培地一週間後ににぶ黄色、さらに古い培養で
は黒褐色に変色する。菌の生育は速く、酵母様の出芽に
より増殖する。出芽細胞ははじめ薄膜でオリーブがかっ
た褐色を呈する、後に厚膜化して着色する。酵母様の出
芽と同時に栄養菌糸が伸長する。栄養菌糸は隔壁を有
し、分枝する。幅２〜４．５μｍ、はじめ無色、後に褐
色になる。菌糸は断片状に切れて分節型の分生子とな
る、または菌糸の側面あるいは先端部より出芽型の分生
子を形成する。分節型分生子は円筒形〜樽形、６〜３５
μｍ×２．５〜５．０μｍ、はじめ無色、後に褐色にな
る。出芽型分生子は単一または２〜３個の連鎖となって
形成される、卵形〜楕円形、あるいは亜球形、大きさは
４．７〜９．４μｍ×３．１〜５．６μｍ（平均６．８
±１．３μｍ×４．５±０．６μｍ）、はじめ無色、後
にオリーブがかった褐色となる。

【００１２】本菌株（ＭＣＩ３３７１）は分節型分生子
と出芽型分生子の二形性を有する、 ２）出芽型分生子は求頂的に形成され同調的に形成され
ない特徴を有する。これらの特徴に基づいてDe Hoog &
Hermanides-Nijhof (1977)のモノグラフに従って属の検
索を行ったところ、本菌株はモニリエラ（Moniliella)
属に帰属することが判明した。De Hoog (1979)の“The
Black yeasts, II：Moniliella and Allied Genera”St
udies in Mycology No.19,1 〜90によれば、モニリエラ
（Moniliella）属にはモニリエラ スアベオレンス バ
ー スアベオレンス（Moniliella suaveolens var. sua
veolens)、モニリエラ スアベオレンス バー ニゲル
（Moniliella suaveolens var. niger）、モニリエラ
アセトアブテンス（Moniliella acetoabutens ）および
モニリエラ ポリニス( Moniliella pollinis ）の３種
２変種が知られている。これらの種や変種は主として出
芽型分生子あるいは分節型分生子の形態学的特徴によっ
て区別されている。本菌株の形態学的性状を精査した結
果、本菌はモニリエラ ポリニス( Moniliella pollini
s ）の記載によく合致した。従って本菌株はモニリエラ
ポリニス( Moniliella pollinis ）と同定した。

【００１３】ＭＣＩ３４３７ ＭＣＩ３４３７株はＬＣＡ上、２４℃培養で初め白色〜
黄味白色、培養１週間後に黄褐色、２週間以上の古い培
養では暗い黄茶色に変色する。菌の生育は中程度、コウ
ボ様の出芽により増殖する。出芽細胞は初め、薄膜でオ
リーブがかった褐色を呈する、後に厚膜化して、黒褐色
に着色する、多極出芽により増殖する。１回から３〜４
回出芽して増殖する。コウボ様の出芽と同時に基底菌糸
が伸長する。基底菌糸は隔壁を有し、分枝する、幅２〜
４．５μｍ、初め無色、後に褐色になる。菌糸は断片状
に切れて分節型の分生子になる、あるいは菌糸の側面あ
るいは先端部より出芽型の分生子を形成する。分節型分
生子は円筒形〜樽型、長さは変化に富む、幅は２．５〜
５．０μｍ、初め無色、後に褐色になる。出芽型分生子
は基底菌糸の側面及び先端に形成する、単一あるいは
２、３の連鎖となって形成される、亜球形〜楕円形、
４．３〜９．２×３．８〜６．５μｍ、褐色、厚膜化す
る。３７℃では生育しない。

【００１４】本菌株（ＭＣＩ３４３７）は１）分節型分
生子と出芽型分生子の二形性を有する、２）出芽型分生
子は求頂的に形成され、同調的な形成をしない、特徴を
有する。これらの特徴に基づいて、Trichosporonoides
nigrescensの親株と対比すると共に、G. S. de Hoog
（1979）のモノグラフ及びA.D. Hocking & J.I. Pitt
（1981）の原記載に従って属および種の検索を行ったと
ころ、本生産菌の性状はTrichosporonoides nigrescens
の親株によく合致した。従って本菌株はT. nigrescens
と同定した。

【００１５】ＭＣＩ３４４０ ＭＣＩ３４４０株はＬＣＡ上、２４℃培養で初め白色〜
黄味白色、培養１週間後に茶色、２週間以上の古い培養
では暗い黄茶色に変色する。菌の生育は速い、コウボ様
の出芽により増殖する。出芽細胞は無色、多極出芽によ
り増殖する。１回から３〜４回出芽して増殖する。コウ
ボ様の出芽と同時に基底菌糸及び気中菌糸が伸長する。
基底菌糸と気中菌糸は隔壁を有し、分枝する、幅２〜
４．５μｍ、無色。菌糸は断片状に切れて分節型の分生
子になる、あるいは菌糸の側面あるいは先端部より出芽
型の分生子を形成する。ＬＣＡ及びＰＤＡ上で頂嚢は形
成されない。分節型分生子は円筒形〜樽型、長さは変化
に富む、幅は２．５〜５．０μｍ、無色。出芽型分生子
は基底菌糸の側面及び先端に形成する、単一あるいは
２、３の連鎖となって形成される、楕円形、４．７〜
８．１×２．５〜３．４μｍ、無色。３７℃で生育す
る。

【００１６】本菌株（ＭＣＩ３４４０）は１）分節型分
生子と出芽型分生子の二形性を有する、２）出芽型分生
子は基底菌糸及び気中菌糸上に求頂的に生じる特徴を有
する。Oedocephalis -typeの頂嚢を形成しない性状を有
す。Haskins & Spencer （1966）の原記載によれば、Tr
ichosporonoides oedocephalisは主として頂嚢を持つこ
とによって、他の種（T.spathulata、T.nigrescens、T.
madida及びT.megachiliensis）から識別されている。本
変異株（ＭＣＩ３４４０）はこの点がT. oedocephalis
と異なっている。しかし、T. oedocephalis の親株と対
比すると共に、G. S. de Hoog （1979）のモノグラフ及
びR.H. Haskins &J.F.T.Spencer （1966）の原記載に従
って属及び種の検索を行ったところ、Oedocephalis-typ
e の頂嚢を欠損している以外の形態学的性状はT.oedoce
phalisの親株によく合致した。従って本菌株は暫定的に
T.oedocephalisと同定した。

【００１７】ＭＣＩ３５５４ １）形態学的特徴：コロニーはＰＤＡ上、２４℃培養で
初め白色〜黄味白色、培養１週間後に黄褐色、２週間以
上の古い培養では暗い黄茶色に変色する。菌の生育は中
程度、コウボ様の出芽により増殖する。出芽細胞は初
め、無色、後にやや厚膜化して、淡褐色を呈する、楕円
形、卵形あるいは亜球形、３．８〜６．３×３．０〜
５．０μｍ。１回から３〜４回出芽して増殖する、多極
出芽。コウボ様の出芽と同時に基底菌糸と気中菌糸が伸
長する。基底菌糸および気中菌糸は幅２．２〜３．５μ
ｍ、隔壁を有し、分枝する、初め無色、後に褐色にな
る。菌糸は断片状に切れて分節型の分生子になる、菌糸
の側面あるいは先端部より出芽型の分生子を形成する。
分節型分生子は円筒形〜樽型、長さは変化に富む、９．
４〜１８．８μｍ×３．１〜４．１μｍ、初め無色、後
に褐色になる。出芽型分生子は基底菌糸の側面および先
端に形成される、単一あるいは２、３個の連鎖となって
形成される、亜球形〜楕円形、５．９〜１０．９×３．
８〜５．９μｍ、初め無色、後に褐色、やや厚膜化す
る。

【００１８】２）生理学的特徴： 生育温度：９℃〜３７℃（ＰＤＡ上、１０日間培養） 最適生育温度：２７℃〜３０℃ 生育ｐＨ：４〜９（ＬＣＡ液体培地上、１０日間培養） 最適生育ｐＨ：５〜６ 炭素源の利用（表−１に示す。） 糖からの発酵性（表−２に示す。） 窒素源の利用（表−３に示す。）

【００１９】３）分類学的考察 本菌株（ＭＣＩ３５５４）は1 ）コウボ状の出芽型細胞
を有する、2 ）分節型分生子と出芽型分生子の二形性を
有する、3 ）出芽型分生子は求頂的に形成され、同調的
に形成されない、特徴を有す。これらの特徴に基づい
て、G. S. de Hoog （1979）, ”The Black Yeasts, I
I: Moniliella and Allied Genera, Studies in Mycolo
gy No.19 , p1-36 ”のモノグラフの検索表およびG.S.
de Hoog & E. Gueho （1984）, Deoxyribonucleic acid
base cimposition and taxonomy ofMoniliella and al
lied genera, Antonie van Leeuwenhook,135-141のMoni
liella属に属する種の記載に従って、属及び種の検索を
したところ、本生産菌の性状はMoniliella pollinis の
記載によく合致した。さらにMoniliella pollinis のタ
イプストレイン（CBS 461.67）の性状と対比したとこ
ろ、本生産菌の性状はタイプストレインの性状にもよく
合致した。従って本菌株はMoniliella pollinis と同定
した。

【００２０】ＭＣＩ３５５５ １）形態学的特徴：本菌株（ＭＣＩ３５５５）はMonili
ella pollinis MCI3554 に由来する変異株で、コロニー
はＰＤＡ上、２４℃培養で初め白色〜黄味白色、培養１
週間後に黄褐色、２週間以上の古い培養では暗い黄茶色
に変色する。菌の生育は中程度、コウボ様の出芽により
増殖する。出芽細胞は初め、無色、後にやや厚膜化し
て、淡褐色を呈する、楕円形、卵形あるいは亜球形、
４．０〜７．８×３．５〜６．２μｍ。１回から３〜４
回出芽して増殖する、多極出芽。コウボ様の出芽と同時
に基底菌糸と気中菌糸が伸長する。基底菌糸及び気中菌
糸は幅１．３〜４．１μｍ、隔壁を有し、分枝する、初
め無色、後に褐色になる。菌糸は断片状に切れて分節型
の分生子になる、菌糸の側面あるいは先端部より出芽型
の分生子を形成する。分節型分生子は円筒形〜樽型、長
さは変化に富む、１３．４〜３２．８μｍ×２．５〜
４．１μｍ、初め無色、後に褐色になる。出芽型分生子
は基底菌糸の側面および先端に形成される、単一あるい
は２、３個の連鎖となって形成される、亜球形〜楕円
形、５．０〜９．４×４．４〜６．３μｍ、初め無色、
後に褐色、やや厚膜化する。

【００２１】２）生理学的特徴： 生育温度：９℃〜３７℃（ＰＤＡ上、１０日間培養） 最適生育温度：２７℃〜３０℃ 生育ｐＨ：４〜９（ＬＣＡ液体培地上、１０日間培養） 最適生育ｐＨ：５〜６ 炭素源の利用（表−１に示す。） 糖からの発酵性（表−２に示す。） 窒素源の利用（表−３に示す。）

【００２２】３）分類学的考察 本菌株（ＭＣＩ３５５５）は1 ）コウボ状の出芽型細胞
を有する、2 ）分節型分生子と出芽型分生子の二形性を
有する、3 ）出芽型分生子は求頂的に形成され、同調的
に形成されない、特徴を有す。これらの特徴に基づい
て、G. S. de Hoog （1979）, ”The Black Yeasts, I
I: Moniliella and Allied Genera, Studies in Mycolo
gy No.19 , p1-36 ”のモノグラフの検索表及びG.S. de
Hoog & E.Gueho （1984）, Deoxyribonucleic acid ba
se cimposition and taxonomy of Moniliella and alli
ed genera, Antonie van Leeuwenhook,135-141のMonili
ella属に属する種の記載に従って、属および種の検索を
したところ、本生産菌の性状はMoniliella pollinis の
記載によく合致した。さらにMoniliella pollinis のタ
イプストレイン（CBS 461.67）の性状と対比したとこ
ろ、本生産菌の性状はタイプストレインの性状にもよく
合致した。従って本菌株はMoniliella pollinis と同定
した。

【００２３】

【表１】

【００２４】

【表２】

【００２５】

【表３】

【００２６】

【表４】

【００２７】これらの酵母を培養するために使用される
培地の主炭素源としては、発酵性糖質であれば特に限定
されないが、グルコース、フルクトース、グリセロール
などの発酵性糖質が好ましく、特にグルコースが好まし
い。これらの発酵性糖質は、単独でも組み合わせても使
用できる。使用濃度は特に限定されないが、エリスリト
ールの生成を阻害しない範囲で可能な限り高くするのが
有利であり、好ましい濃度は２０〜５０％（Ｗ／Ｖ）、
好ましく３５〜４０％（Ｗ／Ｖ）はの範囲内である。

【００２８】窒素源としては、窒素原子換算で、窒素源
の５０〜８５％が硫酸アンモニウムであり、残りの１５
〜５０％は硫酸アンモニウム以外のアンモニウム塩、ペ
プトン、酵母エキス、コーンステープリカーなどの各種
の有機、無機の窒素化合物が用いられるが、残りの１５
〜５０％がコーンスティープリカーであることが好まし
い。硫酸アンモニウムが５０％以下の場合はグリセリン
が副生したり、生産したエリスリトールが褐色に着色し
たり、多量の塩が混在したりするため好ましくなく、ま
た８５％以上の場合はエリスリトールの収率が落ちるの
で好ましくない。無機塩としては各種リン酸塩、硫酸
塩、マグネシウム、カリウム、マンガン、鉄、亜鉛等の
金属塩が用いられる。また、ビタミン、ヌクレオチド、
アミノ酸などの酵母の生育を促進する因子を必要に応じ
て添加する。また、培養中の発泡を抑えるために市販の
消泡剤を適量添加しておくことが望ましい。

【００２９】発酵の初めの培地はｐＨ３〜７、好ましく
はｐＨ３〜４．５、特に好ましくはｐＨ３．５〜４．０
に調整する。また、培養中の温度は２５℃〜４０℃、好
ましくは３０℃〜３７℃に調節する。培養に際しては、
斜面培養から菌体を直接培地に接種しても構わないが、
液体培地で１日〜４日間の培養で得られる培養液を接種
するほうが望ましい。また、培養は、通気撹拌、振とう
などによる好気的条件下で行う。培養時間は主炭素源が
消費されるまで行われるのが望ましく、通常は３〜６日
の間で行われる。なお、培養液中のエリスリトール生成
量はガスクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフ
ィーなどの方法で測定することができる。

【００３０】このようにして培養液中に蓄積したエリス
リトールは常法に従って、培養物より分離・精製され
る。具体的には、遠心分離、ろ過等により菌体等の固形
物を除去した後、イオン交換樹脂、活性炭により脱塩、
脱色し、その溶液から結晶化することによりエリスリト
ールを分離・精製することができる。

【００３１】

【実施例】以下に、実施例により本発明を更に具体的に
述べるが、本発明はその要旨を越えない限り、以下の実
施例に限定されるものではない。 培養液の組成

【００３２】

【表５】 表−４ ─────────────────────────────────── グルコース ４０％ コーンスティープリカー（王子コーンスターチ社製） １．５％ 硫酸アンモニウム ０．８８６％ ２水素リン酸カリウム ０．１％ 硫酸亜鉛 ０．００５％ ビタミンＢ１ ０．００５％ 消泡剤 ０．０５％ ───────────────────────────────────

【００３３】上記表−４において、窒素源としての硫酸
アンモニウムとコーンステープリカーの割合は、窒素原
子換算で約４：１である。（コーンステープリカーの窒
素含有率：平均３％）

【００３４】実施例１〜３ グルコース３０％（Ｗ／Ｖ）、酵母エキス（アサヒビー
ル社製）１％を含む液体培地１００ｍｌを綿栓した５０
０ｍｌの三角フラスコにいれ、１２０℃、２０分間滅菌
したものに、常法により斜面培養したＭＣＩ３４３７
株、ＭＣＩ３４４０株、ＭＣＩ３５５５株をそれぞれ接
種し、３０℃で３日間振とう培養した（種培液）。上記
表−４に示す組成の培地５００ｍｌを入れた１リットル
容発酵槽に、種培養液１０ｍｌを接種し、温度３５℃、
通気量０．５ｖｖｍ、回転数８００ｐｐｍの条件で４日
間培養した。接種時の培地のｐＨは３．９〜４．０であ
り、培養中は３５％水酸化ナトリウム溶液を添加しｐＨ
を３．５〜３．７に保った。培養液中のエリスリトール
およびグリセリン濃度を高速液体クロマトグラフィー
で、培養終了後のブロスの上清液の着色度は４２０ｎｍ
の吸光度を分光光度計で測定した。その結果、各菌株の
エリスリトール生産量とグリセリン生成量と培地の着色
度は次の通りであった。

【００３５】

【表６】 表−５ ─────────────────────────────────── 実施例Ｎｏ 菌株 エリスリトール量 グリセリン量 着色度（Ａ４２０） ─────────────────────────────────── 例１ MCI3437 150.9g/L 66.6g/L 0.412 例２ MCI3440 124.5g/L 3.0g/L 0.552 例３ MCI3555 170.3g/L 4.5g/L 0.673 ───────────────────────────────────

【００３６】実施例４ グルコース３０％（Ｗ／Ｖ）、酵母エキス（アサヒビー
ル社製）１％を含む液体培地１００ｍｌを綿栓した５０
０ｍｌの三角フラスコにいれ、１２０℃、２０分間滅菌
したものに、常法により斜面培養したＭＣＩ３３６９株
を１白金耳植菌し、３５℃で３日間振とう培養した（得
られた種培養液を以下「種培養液Ａ」という）。グルコ
ース３０％（Ｗ／Ｖ）、酵母エキス（アサヒビール社
製）１％を含む液体培地１００ｍｌを綿栓した５００ｍ
ｌの三角フラスコにいれ、１２０℃、２０分間滅菌した
ものに、上記種培養液Ａ２ｍｌを接種し、３５℃で３日
間振とう培養した（得られた種培養液を以下「種培養液
Ｂ」という）。上記表−４に示す組成の培養液１５リッ
トルを入れた３０リットル容発酵槽に、種培養液Ｂ３０
０ｍｌを接種し、温度３５℃、通気量０．５ｖｖｍ、内
圧０．５Ｋｇ／ｃｍ²Ｇ、回転数３５０ｒｐｍの条件で
４日間培養した。接種時の培地のｐＨは３．９〜４．０
であり、培養中は３５％水酸化ナトリウム溶液を添加し
ｐＨを３．５〜３．７に保った。培養液中のエリスリト
ールおよびグリセリン濃度を高速液体クロマトグラフィ
ーで測定した結果、エリスリトール：対グルコース収率
４８．２％、グリセリン：対グルコース収率１．１％で
あった。また、培養終了後のブロスの上清液の着色度は
Ａ₄₂₀ で０．３６７あった。

【００３７】実施例５ グルコース３０％（Ｗ／Ｖ）、コーンスティープリカー
（王子コーンスターチ社製）３．７％、消泡剤０．１％
を含む液体培地１５リットルを入れた３０リットル容発
酵槽に、種培養液Ａ３００ｍｌを接種し、温度３５℃、
通気量０．５ｖｖｍ、内圧０．５Ｋｇ／ｃｍ² Ｇ、回転
数３３０ｒｐｍの条件で３日間培養した（得られた種培
養液を以下「種培養液Ｃ」という）。上記表−４に示す
組成の培養液１５リットルを入れた３０リットル容発酵
槽に、種培養液Ｂ３００ｍｌを接種し、温度３５℃、通
気量０．５ｖｖｍ、内圧０．５Ｋｇ／ｃｍ² Ｇ、回転数
３３０ｒｐｍの条件で４日間培養した。接種時の培地の
ｐＨは３．９〜４．０であり、培養中は３５％水酸化ナ
トリウム溶液を添加しｐＨを３．５〜３．７に保った。
培養液中のエリスリトール濃度を高速液体クロマトグラ
フィーで測定した結果、エリスリトール：対グルコース
収率４７．２％、グリセリン：対グルコース収率０．９
％であった。また、培養終了後のブロスの上清液の着色
度はＡ₄₂₀ で０．３９５であった。

【００３８】実施例６ 菌株をＭＣＩ３３７１株を用いた以外は実施例４と同様
にしてエリスリトールを生産した。エリスリトールの対
グルコース収率は４８．０％、グリセリンの対グルコー
ス収率は４．５％であった。また、培養終了後のブロス
の上清液の着色度はＡ₄₂₀ で０．３５３であった。

【００３９】実施例７ グルコース３０％（Ｗ／Ｖ）、酵母エキス（アサヒビー
ル社製）１％を含む液体培地１００ｍｌを綿栓した５０
０ｍｌの三角フラスコにいれ、１２０℃、２０分間滅菌
したものに、常法により斜面培養したＡＴＣＣ８６６１
株を植菌し、３０℃で３日間振とう培養した（種培
液）。上記表１に示す組成の培地２．５リットルを入れ
た５リットル容発酵槽に、種培養液１００ｍｌを接種
し、温度３０℃、通気量１ｖｖｍ、回転数９００ｐｍ、
内圧０．５Ｋｇ／ｃｍ² Ｇの条件で５日間培養した。接
種時の培地のｐＨは３．９〜４．０であり、培養中は３
５％水酸化ナトリウム溶液を添加しｐＨを３．５〜３．
７に保った。培養液中のエリスリトールおよびグリセリ
ン濃度を高速液体クロマトグラフィーで、エリスリトー
ル：対グルコース収率４３．９％であった。また、培養
終了後のブロスの上清液の着色度はＡ₄₂₀ で０．３６５
であった。

【００４０】実施例８〜１２ グルコース３０％（Ｗ／Ｖ）、酵母エキス（アサヒビー
ル社製）１％を含む液体培地１００ｍｌを綿栓した５０
０ｍｌの三角フラスコにいれ、１２０℃、２０分間滅菌
したものに、常法により斜面培養したＭＣＩ３５５５株
を植菌し、３０℃で３日間振とう培養した（種培液）。
上記表−４に示す組成の内コーンスチープリカーと硫酸
アンモニウムの表−６に示す量比に代えた培地５００ｍ
ｌを入れた１リットル容発酵槽に、種培養液１０ｍｌを
接種し、温度３５℃、通気量０．５ｖｖｍ、回転数８０
０ｐｍの条件で４日間培養した。接種時の培地のｐＨは
３．９〜４．０であり、培養中は３５％水酸化ナトリウ
ム溶液を添加しｐＨを３．５〜３．７に保った。

【００４１】

【表７】 表−６ ───────────────────────────── 実施例Ｎｏ コーンスチープリカー量 硫安量 ───────────────────────────── 例８ 3.0264% 0.5044% 例９ 2.5220% 0.6305% 例１０ 1.2610% 0.94575% 例１１ 0.7566% 1.07185% 例１２ 0.5044% 1.1349% ─────────────────────────────

【００４２】その結果、各菌株のエリスリトール生産量
とグリセリン生成量と培地の着色度は次の通りであっ
た。

【００４３】

【表８】 表−７ ─────────────────────────────────── 実施例Ｎｏ エリスリトール量 グリセリン量 着色度（Ａ４２０） ─────────────────────────────────── 例８ 160.5g/L 10.2g/L 1.585 例９ 180.5g/L 6.7g/L 1.318 例１０ 169.3g/L 4.8g/L 0.993 例１１ 135.2g/L 27.0g/L 0.721 例１２ 89.7g/L 45.0g/L 0.691 ───────────────────────────────────

【００４４】比較例の培地組成

【００４５】

【表９】 表−８ ─────────────────────────────────── グルコース ４０％ コーンスティープリカー（王子コーンスターチ社製） ８％ 消泡剤 ０．０５％ ───────────────────────────────────

【００４６】上記表−８において、窒素源はコーンステ
ープリカーのみであり、この窒素量は上記表−４の組成
の培養液中の窒素量と窒素原子換算で同量である。比較
例１〜３上記表−４に示す組成の培養液のかわりに、下
記表−９に示す組成の培養液を使用する以外は実施例１
〜３と同様にしてエリスリトールを生産した。エリスリ
トールの収率、グリセリン生成量、ブロス上清の着色度
は次の通りであった。

【００４７】

【表１０】 表−９ ─────────────────────────────────── 比較例Ｎｏ 菌株 エリスリトール量 グリセリン量 着色度(A420) ─────────────────────────────────── 例１ MCI3437 137.3g/L 76.2g/L 3.131 例２ MCI3440 109.3g/L 18.7g/L 2.707 例３ MCI3555 167.5g/L 14.5g/L 3.112 ───────────────────────────────────

【００４８】比較例４ 上記表−４に示す組成の培養液のかわりに、上記表−９
に示す組成の培養液を使用する以外は実施例４と同様に
してエリスリトールを生産した。エリスリトールの対グ
ルコース収率は３９．８％、グリセリンの対グルコース
収率は１９．５％であった。

【００４９】

【発明の効果】本発明の方法によれば、食添認可品で安
全かつ安価な窒素源を使用し、高収率で効率良くエリス
リトールを製造することができる。

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 発酵性糖質からエリスリトールを産生す
   る能力を有する酵母を、発酵性糖質を主炭素源とする培
   地で培養し、培養物よりエリスリトールを採取するエリ
   スリトールの製造方法において、培地の主窒素源が硫酸
   アンモニウムであることを特徴とするエリスリトールの
   製造方法。
2. 【請求項２】 培地の窒素源として、窒素原子換算で窒
   素源の５０〜８５％が硫酸アンモニウムである請求項１
   の製造方法。
3. 【請求項３】 培地の窒素源として、窒素原子換算で窒
   素源の５０〜８５％が硫酸アンモニウム、残りの１５〜
   ５０％がコーンスティープリカーである請求項１の製造
   方法。
4. 【請求項４】 酵母が、モニリエラ属に属する酵母であ
   る請求項１〜３のいずれかに記載の製造方法。
5. 【請求項５】 酵母が、モニリエラ・ポリニスである請
   求項１〜３のいずれかに記載の製造方法。
6. 【請求項６】 酵母が、イエロビア属に属する酵母であ
   る請求項１〜３のいずれかに記載の製造方法。
7. 【請求項７】 酵母が、イエロビア・リポリチカである
   請求項１〜３のいずれかに記載の製造方法。
8. 【請求項８】 酵母が、トリコスポロノイデス属に属す
   る酵母である請求項１〜３のいずれかに記載の製造方
   法。
9. 【請求項９】 酵母がトリコスポロノイデス・オエドセ
   ファリス、トリコスポロノイデス・ニグレッセンスおよ
   び／またはトリコスポロノイデス・メガチリエンシスで
   ある請求項１〜３のいずれかに記載の製造方法。
10. 【請求項１０】 発酵性糖質が、グルコース、フルクト
    ースおよび／またはグリセロールである請求項１〜９の
    いずれかに記載の製造方法。
11. 【請求項１１】 培地中の窒素源濃度が、０．１〜５．
    ０％（Ｗ／Ｖ）である請求項１〜１０のいずれかに記載
    の製造方法。
12. 【請求項１２】 培養液のｐＨを３．０〜７．０に保持
    することを特徴とする請求項１〜１１のいずれかに記載
    の製造方法。