JPH10203969A - 抗腫瘍剤 - Google Patents
抗腫瘍剤Info
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- JPH10203969A JPH10203969A JP9085461A JP8546197A JPH10203969A JP H10203969 A JPH10203969 A JP H10203969A JP 9085461 A JP9085461 A JP 9085461A JP 8546197 A JP8546197 A JP 8546197A JP H10203969 A JPH10203969 A JP H10203969A
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Abstract
(57)【要約】
【解決手段】 アントラキノン誘導体およびその薬学的
に許容される塩を有効成分とする抗腫瘍剤。 【効果】 優れたトポイソメラーゼＩおよびＩＩ阻害作
用を示し、抗腫瘍剤として有用である。
に許容される塩を有効成分とする抗腫瘍剤。 【効果】 優れたトポイソメラーゼＩおよびＩＩ阻害作
用を示し、抗腫瘍剤として有用である。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、トポイソメラーゼ
ＩおよびＩＩ阻害活性を有し、抗腫瘍剤として有用なア
ントラキノン誘導体およびその薬学的に許容される塩に
関する。
ＩおよびＩＩ阻害活性を有し、抗腫瘍剤として有用なア
ントラキノン誘導体およびその薬学的に許容される塩に
関する。
【０００２】
【従来の技術】細胞の分裂・増殖の時に見られる細胞の
生活環は細胞周期といわれ細胞の増殖と分化の調節に深
く関わっている。従って、その制御機構の解明は、癌、
老化、細胞死等の生理現象、病理現象の分子機構の解明
につながるのみならず、細胞周期をターゲットとした抗
腫瘍剤等の医薬品の開発に大きな手がかりを与えるもの
と期待される。これまで開発されてきた数多くの抗腫瘍
剤についてその作用メカニズムが研究されてきた結果、
その多くが細胞周期にそれぞれ特徴的な阻害作用をもつ
ことが明らかとなった。例えば、５−フルオロウラシ
ル、６−メルカプトプリン、メトトリキセレートなどの
代謝拮抗剤は、ＤＮＡ合成に必須な前駆体を阻害するの
で細胞周期はＳ期で停止する。また、植物由来のビンプ
ラスチンやビンクリスチンなどのアルカロイド類、コル
ヒチン類縁体のコルセミド、カビ由来のリゾキシンなど
はＭ期に阻害点を持つ。また、アドレアマイシン、エト
ポシド、エリプテシンなどはトポイソメラーゼＩＩに作
用して複製の終了したＤＮＡの分配（Ｍ期）を阻害す
る。さらにまた、植物アルカロイドであるカンプトテシ
ン誘導体ＣＰＴ−１１は、トポイソメラーゼＩ型を阻害
する世界ではじめてのタイプで細胞周期をＧ２期で停止
させる。
生活環は細胞周期といわれ細胞の増殖と分化の調節に深
く関わっている。従って、その制御機構の解明は、癌、
老化、細胞死等の生理現象、病理現象の分子機構の解明
につながるのみならず、細胞周期をターゲットとした抗
腫瘍剤等の医薬品の開発に大きな手がかりを与えるもの
と期待される。これまで開発されてきた数多くの抗腫瘍
剤についてその作用メカニズムが研究されてきた結果、
その多くが細胞周期にそれぞれ特徴的な阻害作用をもつ
ことが明らかとなった。例えば、５−フルオロウラシ
ル、６−メルカプトプリン、メトトリキセレートなどの
代謝拮抗剤は、ＤＮＡ合成に必須な前駆体を阻害するの
で細胞周期はＳ期で停止する。また、植物由来のビンプ
ラスチンやビンクリスチンなどのアルカロイド類、コル
ヒチン類縁体のコルセミド、カビ由来のリゾキシンなど
はＭ期に阻害点を持つ。また、アドレアマイシン、エト
ポシド、エリプテシンなどはトポイソメラーゼＩＩに作
用して複製の終了したＤＮＡの分配（Ｍ期）を阻害す
る。さらにまた、植物アルカロイドであるカンプトテシ
ン誘導体ＣＰＴ−１１は、トポイソメラーゼＩ型を阻害
する世界ではじめてのタイプで細胞周期をＧ２期で停止
させる。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、トポイソメ
ラーゼＩおよびトポイソメラーゼＩＩの阻害作用を持つ
新規な抗腫瘍剤を提供することを目的とする。
ラーゼＩおよびトポイソメラーゼＩＩの阻害作用を持つ
新規な抗腫瘍剤を提供することを目的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するために鋭意検討した結果、一般式（１）で表
されるアントラキノン誘導体およびその塩が、優れたト
ポイソメラーゼＩおよびＩＩ阻害活性を持つことを見い
出し、本発明を完成した。
を解決するために鋭意検討した結果、一般式（１）で表
されるアントラキノン誘導体およびその塩が、優れたト
ポイソメラーゼＩおよびＩＩ阻害活性を持つことを見い
出し、本発明を完成した。
【０００５】すなわち、本発明は、次の一般式（１）
【０００６】
【化３】
【０００７】（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、
Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は、それぞれ水素原子、アルキル
基、アルケニル基、アルコキシ基、ヒドロキシ基、ヒド
ロキシアルキル基、ホルミル基、ハロゲン原子またはア
ミノ基を示す）で表されるアントラキノン誘導体および
その薬学的に許容される塩を有効成分とする抗腫瘍剤を
提供する。
Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は、それぞれ水素原子、アルキル
基、アルケニル基、アルコキシ基、ヒドロキシ基、ヒド
ロキシアルキル基、ホルミル基、ハロゲン原子またはア
ミノ基を示す）で表されるアントラキノン誘導体および
その薬学的に許容される塩を有効成分とする抗腫瘍剤を
提供する。
【０００８】
【発明の実施の形態】一般式（１）で表されるアントラ
キノン誘導体およびその塩は、フクギ（Ｇａｒｃｉｎｉ
ａ ｓｕｂｅｌｌｉｐｔｉｃａ）、ガルシニアプルプレ
ア（Ｇａｒｃｉｎｉａ ｐｕｒｐｕｒｅａ）、マンゴス
チン（Ｇａｒｃｉｎｉａ ｍａｎｇｏｓｔａｎａ Ｌｉ
ｎｎ．）、または、ガルシニアディオイカ（Ｇａｒｃｉ
ｎｉａｄｉｏｉｃａ Ｂｌ．）、カロフィルムイノフィ
ルム（Ｃａｌｏｐｈｙｌｌｕｍ ｉｎｏｐｈｙｌｌｕ
ｍ）・ネオナウクレアカリシナ（Ｎｅｏｎａｕｃｌｅａ
ｃａｌｙｔｃｉｎａ）を抽出し、単離することにより得
られる。
キノン誘導体およびその塩は、フクギ（Ｇａｒｃｉｎｉ
ａ ｓｕｂｅｌｌｉｐｔｉｃａ）、ガルシニアプルプレ
ア（Ｇａｒｃｉｎｉａ ｐｕｒｐｕｒｅａ）、マンゴス
チン（Ｇａｒｃｉｎｉａ ｍａｎｇｏｓｔａｎａ Ｌｉ
ｎｎ．）、または、ガルシニアディオイカ（Ｇａｒｃｉ
ｎｉａｄｉｏｉｃａ Ｂｌ．）、カロフィルムイノフィ
ルム（Ｃａｌｏｐｈｙｌｌｕｍ ｉｎｏｐｈｙｌｌｕ
ｍ）・ネオナウクレアカリシナ（Ｎｅｏｎａｕｃｌｅａ
ｃａｌｙｔｃｉｎａ）を抽出し、単離することにより得
られる。
【０００９】一般式（１）においてＲ１〜Ｒ８はそれぞ
れ水素原子、アルキル基、アルケニル基、アルコキシ
基、ヒドロキシ基、ヒドロキシアルキル基、ホルミル
基、ハロゲン原子またはアミノ基を示す。ここでアルキ
ル基としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、
イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｔ−ブ
チル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基等の炭素数１
〜８の直鎖または分岐鎖のアルキル基が挙げられる。本
発明においては、このうち、炭素数１〜６のアルキル基
が好ましい。
れ水素原子、アルキル基、アルケニル基、アルコキシ
基、ヒドロキシ基、ヒドロキシアルキル基、ホルミル
基、ハロゲン原子またはアミノ基を示す。ここでアルキ
ル基としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、
イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｔ−ブ
チル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基等の炭素数１
〜８の直鎖または分岐鎖のアルキル基が挙げられる。本
発明においては、このうち、炭素数１〜６のアルキル基
が好ましい。
【００１０】アルケニル基としては、ビニル基、アリル
基、クロチル基、α−ペンテニル基、２−ヘキセニル
基、３−メチル−２−ブテニル基、１、１−ジメチル−
２−プロペニル基、イソプレニル基、ゲラニル基、ラバ
ンドリル基等の炭素数２〜１４の直鎖または分岐鎖の二
重結合を１〜３個有するアルケニル基が挙げられる。
基、クロチル基、α−ペンテニル基、２−ヘキセニル
基、３−メチル−２−ブテニル基、１、１−ジメチル−
２−プロペニル基、イソプレニル基、ゲラニル基、ラバ
ンドリル基等の炭素数２〜１４の直鎖または分岐鎖の二
重結合を１〜３個有するアルケニル基が挙げられる。
【００１１】アルコキシ基としては、メトキシ基、エト
キシ基、プロポキシ基等の炭素数１〜６の直鎖または分
岐鎖のアルコキシ基が挙げられ、本発明においてはこの
うちメトキシ基が好ましい。
キシ基、プロポキシ基等の炭素数１〜６の直鎖または分
岐鎖のアルコキシ基が挙げられ、本発明においてはこの
うちメトキシ基が好ましい。
【００１２】ヒドロキシアルキル基としては、ヒドロキ
シメチル基、ヒドロキシエチル基、プロポキシ基等の炭
素数１〜６の直鎖または分岐鎖のアルコキシ基が挙げら
れる。
シメチル基、ヒドロキシエチル基、プロポキシ基等の炭
素数１〜６の直鎖または分岐鎖のアルコキシ基が挙げら
れる。
【００１３】ハロゲン原子としては、フッ素、塩素、臭
素、ヨウ素が挙げられる。
素、ヨウ素が挙げられる。
【００１４】さらに本発明における好ましい化合物とし
ては一般式（１）において、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、
Ｒ６およびＲ７はそれぞれ水素原子またはヒドロキシ
基、Ｒ２およびＲ８はそれぞれ水素原子またはアルケニ
ル基が好ましい。
ては一般式（１）において、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、
Ｒ６およびＲ７はそれぞれ水素原子またはヒドロキシ
基、Ｒ２およびＲ８はそれぞれ水素原子またはアルケニ
ル基が好ましい。
【００１５】アントラキノン誘導体（１）の塩として
は、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、過塩素酸塩等の無
機酸塩、ナトリウム塩、カリウム塩等が挙げられる。本
発明においてはこのうちナトリウム塩が好ましい。
は、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、過塩素酸塩等の無
機酸塩、ナトリウム塩、カリウム塩等が挙げられる。本
発明においてはこのうちナトリウム塩が好ましい。
【００１６】アントラキノン誘導体（１）は、フクギ
（Ｇａｒｃｉｎｉａ ｓｕｂｅｌｌｉｐｔｉｃａ）、ガ
ルシニアプルプレア（Ｇａｒｃｉｎｉａ ｐｕｒｐｕｒ
ｅａ）、マンゴスチン（Ｇａｒｃｉｎｉａ ｍａｎｇｏ
ｓｔａｎａ Ｌｉｎｎ．）、または、ガルシニアディオ
イカ（Ｇａｒｃｉｎｉａ ｄｉｏｉｃａ Ｂｌ．）、カ
ロフィルムイノフィルム（Ｃａｌｏｐｈｙｌｌｕｍ ｉ
ｎｏｐｈｙｌｌｕｍ）、ネオナウクレアカリシナ（Ｎｅ
ｏｎａｕｃｌｅａ ｃａｌｙｔｃｉｎａ）の果実、果
皮、樹皮、根皮、葉、根材等のうち１または２以上の箇
所（以下「原体」という）から溶剤により抽出し、単離
することにより得ることができる。すなわち原体を細片
に切断し、乾燥・粉砕し、これをベンゼン、酢酸エチ
ル、メタノール、アセトン等の有機溶媒で抽出し、減圧
下溶媒を濃縮してエキスを得る。得られたエキスを再結
晶、シリカゲルカラムクロマトグラフィー等により精製
し成分を単離することができる。
（Ｇａｒｃｉｎｉａ ｓｕｂｅｌｌｉｐｔｉｃａ）、ガ
ルシニアプルプレア（Ｇａｒｃｉｎｉａ ｐｕｒｐｕｒ
ｅａ）、マンゴスチン（Ｇａｒｃｉｎｉａ ｍａｎｇｏ
ｓｔａｎａ Ｌｉｎｎ．）、または、ガルシニアディオ
イカ（Ｇａｒｃｉｎｉａ ｄｉｏｉｃａ Ｂｌ．）、カ
ロフィルムイノフィルム（Ｃａｌｏｐｈｙｌｌｕｍ ｉ
ｎｏｐｈｙｌｌｕｍ）、ネオナウクレアカリシナ（Ｎｅ
ｏｎａｕｃｌｅａ ｃａｌｙｔｃｉｎａ）の果実、果
皮、樹皮、根皮、葉、根材等のうち１または２以上の箇
所（以下「原体」という）から溶剤により抽出し、単離
することにより得ることができる。すなわち原体を細片
に切断し、乾燥・粉砕し、これをベンゼン、酢酸エチ
ル、メタノール、アセトン等の有機溶媒で抽出し、減圧
下溶媒を濃縮してエキスを得る。得られたエキスを再結
晶、シリカゲルカラムクロマトグラフィー等により精製
し成分を単離することができる。
【００１７】このようにして得られるアントラキノン誘
導体は、トポイソメラーゼＩおよびＩＩ阻害活性を示す
ことから、抗腫瘍剤として有用である。
導体は、トポイソメラーゼＩおよびＩＩ阻害活性を示す
ことから、抗腫瘍剤として有用である。
【００１８】本発明のトポイソメラーゼ阻害剤の有効成
分であるアントラキノン誘導体を人体用の医薬として使
用する場合、投与量は成人１日当たり０．０１〜１００
０ｍｇ、好ましくは０．１〜１００ｍｇの範囲である。
分であるアントラキノン誘導体を人体用の医薬として使
用する場合、投与量は成人１日当たり０．０１〜１００
０ｍｇ、好ましくは０．１〜１００ｍｇの範囲である。
【００１９】また、動物用としての投与量は、処置すべ
き動物の体重１ｋｇ当たり０．００１〜１０００ｍｇ、
好ましくは０．１〜１００ｍｇの範囲である。
き動物の体重１ｋｇ当たり０．００１〜１０００ｍｇ、
好ましくは０．１〜１００ｍｇの範囲である。
【００２０】この１日量を１日１回、あるいは２〜４回
に分けて投与する。
に分けて投与する。
【００２１】本発明の有効成分として使用できるアント
ラキノン誘導体からなるトポイソメラーゼ阻害剤は投与
法に応じ適当な製剤を選択し、通常用いられている各種
製剤の調整法にて調整できる。本発明抗腫瘍剤の剤形と
しては例えば錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤や、溶液
剤、シロップ剤、エリキシル剤、油性ないし水性の懸濁
液等経口用製剤として例示できる。
ラキノン誘導体からなるトポイソメラーゼ阻害剤は投与
法に応じ適当な製剤を選択し、通常用いられている各種
製剤の調整法にて調整できる。本発明抗腫瘍剤の剤形と
しては例えば錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤や、溶液
剤、シロップ剤、エリキシル剤、油性ないし水性の懸濁
液等経口用製剤として例示できる。
【００２２】注射剤としては、製剤中に安定剤、防腐
剤、溶解補助剤を使用することもあり、これらの補助剤
を含むこともある溶液を容器に収納後、凍結乾燥等によ
って固形製剤として用時調整の製剤としても良い。また
一投与量を容器に収納しても良く、また多投与量を同一
の容器に収納しても良い。
剤、溶解補助剤を使用することもあり、これらの補助剤
を含むこともある溶液を容器に収納後、凍結乾燥等によ
って固形製剤として用時調整の製剤としても良い。また
一投与量を容器に収納しても良く、また多投与量を同一
の容器に収納しても良い。
【００２３】
【実施例】以下、実施例を挙げて本発明を説明するが、
本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００２４】実施例１ インドネシア、バリ島で採取したＮｅｏｎａｕｃｌｅａ
ｃａｌｙｃｉｎａ（Ｒｕｂｉａｃｅａｅ）の乾燥心材
（１Ｋｇ）を粉砕した後、ジクロロメタン（３Ｌ）、ア
セトン（３Ｌ）、７０％メタノール（３Ｌ）を用いて１
２時間３回室温にて順次抽出を行い、ジクロロメタン抽
出液を減圧下濃縮した。得られた残渣（２０ｇ）より析
出した混合物を濾過した後、その混合物をシリカケルカ
ラムクロマトグラフィー（クロロホルム系）に付し、２
−ホルミル−３−ヒドロキシ−１−メトキシアントラキ
ノン（ダムナカントール）（ｄａｍｎａｃａｎｔｈａ
ｌ）（８０ｍｇ）を得た。
ｃａｌｙｃｉｎａ（Ｒｕｂｉａｃｅａｅ）の乾燥心材
（１Ｋｇ）を粉砕した後、ジクロロメタン（３Ｌ）、ア
セトン（３Ｌ）、７０％メタノール（３Ｌ）を用いて１
２時間３回室温にて順次抽出を行い、ジクロロメタン抽
出液を減圧下濃縮した。得られた残渣（２０ｇ）より析
出した混合物を濾過した後、その混合物をシリカケルカ
ラムクロマトグラフィー（クロロホルム系）に付し、２
−ホルミル−３−ヒドロキシ−１−メトキシアントラキ
ノン（ダムナカントール）（ｄａｍｎａｃａｎｔｈａ
ｌ）（８０ｍｇ）を得た。
【００２５】
【化４】
【００２６】黄色非晶質 紫外線吸収スペクトル（以下 ＵＶ） ＵＶ λ（ｎｍ，ＭｅＯＨ）（ｌｏｇ ε）：２４８，
２５８ｓｈ，２７９，３０８ｓｈ，３７１． プロトン核磁気共鳴スペクトル（以下 １Ｈ ＮＭＲ）１ Ｈ ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＤＨＳＯ−ｄ６）δ：
３．９８（３Ｈ，ｓ），７．４９（１Ｈ，ｓ），７．８
７（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝８．０，２．０Ｈｚ），７．９３
（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝８．０，２．０Ｈｚ），８．１４
（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０，２．０Ｈｚ），８．１８
（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０，２．０Ｈｚ），１０．３８
（１Ｈ，ｓ），１２．１２（１Ｈ，ｂｒｓ）． 電子衝撃イオン化質量分析スペクトル（以下ＥＩＭＳ） ＥＩＭＳ ｍ／ｓ：２８２（Ｍ＋，４０），２６４（１
４），２５４（１００），２５５（２２），２０８（１
８），１９６（１６），１６８（１８），１３９（２
３）．
２５８ｓｈ，２７９，３０８ｓｈ，３７１． プロトン核磁気共鳴スペクトル（以下 １Ｈ ＮＭＲ）１ Ｈ ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＤＨＳＯ−ｄ６）δ：
３．９８（３Ｈ，ｓ），７．４９（１Ｈ，ｓ），７．８
７（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝８．０，２．０Ｈｚ），７．９３
（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝８．０，２．０Ｈｚ），８．１４
（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０，２．０Ｈｚ），８．１８
（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０，２．０Ｈｚ），１０．３８
（１Ｈ，ｓ），１２．１２（１Ｈ，ｂｒｓ）． 電子衝撃イオン化質量分析スペクトル（以下ＥＩＭＳ） ＥＩＭＳ ｍ／ｓ：２８２（Ｍ＋，４０），２６４（１
４），２５４（１００），２５５（２２），２０８（１
８），１９６（１６），１６８（１８），１３９（２
３）．
【００２７】実施例２ 実施例１と同様にして６−メチル−１，２，５−トリヒ
ドロキシアントラキノン（モリンドン）（ｍｏｒｉｎｄ
ｏｎｅ）（１０ｍｇ）を得た。
ドロキシアントラキノン（モリンドン）（ｍｏｒｉｎｄ
ｏｎｅ）（１０ｍｇ）を得た。
【００２８】
【化５】
【００２９】橙色非晶質 ＵＶ λ（ｎｍ，ＭｅＯＨ）（ｌｏｇ ε）：２１１，
２４５ｓｈ，２６３，２９９．１ Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ａｃｅｔｏｎｅ−ｄ６）
δ：２．３６（３Ｈ，ｓ），７．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
８．５Ｈｚ），７．６７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈ
ｚ），７．７５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．８
２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），９．５１（１Ｈ，ｂ
ｒｓ），１２．８９，１３．２９（１Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ）． ＥＩＭＳ ｍ／ｓ：２７０（Ｍ＋，１００），２４２
（１５），１３５（１６）．
２４５ｓｈ，２６３，２９９．１ Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ａｃｅｔｏｎｅ−ｄ６）
δ：２．３６（３Ｈ，ｓ），７．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
８．５Ｈｚ），７．６７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈ
ｚ），７．７５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．８
２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），９．５１（１Ｈ，ｂ
ｒｓ），１２．８９，１３．２９（１Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ）． ＥＩＭＳ ｍ／ｓ：２７０（Ｍ＋，１００），２４２
（１５），１３５（１６）．
【００３０】試験例１ トポイソメラーゼ Ｉ型阻害活
性測定 トポイソメラーゼ Ｉ（６ ｕｎｉｔ／ｍｌ）［宝酒造
（株）］を緩衝液（１×ＴｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅＩ
ｂｕｆｆｅｒ／０．０１％ＢＳＡ）で１／５倍希釈を
行ったものを測定に用いた。
性測定 トポイソメラーゼ Ｉ（６ ｕｎｉｔ／ｍｌ）［宝酒造
（株）］を緩衝液（１×ＴｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅＩ
ｂｕｆｆｅｒ／０．０１％ＢＳＡ）で１／５倍希釈を
行ったものを測定に用いた。
【００３５】エッペンドルフチューブに実施例１および
２で得られた各濃度のアントラキノン誘導体を１μｌ、
必要量のＭｉｌｌｉ Ｑ、１０×Ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒ
ａｓｅ Ｉ ｂｕｆｆｅｒ（３５０ ｍＭ Ｔｒｉｓ−
ＨＣｌ＜ｐＨ ８．０〉／７２０ ｍＭ ＫＣｌ／５０
ｍＭ ＤＴＴ／５０ ｍＭスペルミジン／５０ ｍＭ
ＭｇＣｌ２）、０．１％ＢＳＡ、ｓｕｐｅｒｃｏｉｌ
ＤＮＡ（ｐＵＣ １９）の順に混ぜたものを１２μｌ
各チューブに加えた後、ボルテックスと軽い遠心を行っ
た。次に、希釈したトポイソメラーゼＩを２μｌずつチ
ューブに加えた後、ボルテックスと軽い遠心を行った
（ただし、対照の反応系として作製した酵素とアントラ
キノン誘導体を含まない反応系にはＨｉｌｌｉ Ｑ ２
μｌと５０％ ＤＭＳＯ １μｌを、アントラキノン誘
導体を含まない反応系には５０％ＤＭＳＯ １μｌを代
わりに加えた）。
２で得られた各濃度のアントラキノン誘導体を１μｌ、
必要量のＭｉｌｌｉ Ｑ、１０×Ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒ
ａｓｅ Ｉ ｂｕｆｆｅｒ（３５０ ｍＭ Ｔｒｉｓ−
ＨＣｌ＜ｐＨ ８．０〉／７２０ ｍＭ ＫＣｌ／５０
ｍＭ ＤＴＴ／５０ ｍＭスペルミジン／５０ ｍＭ
ＭｇＣｌ２）、０．１％ＢＳＡ、ｓｕｐｅｒｃｏｉｌ
ＤＮＡ（ｐＵＣ １９）の順に混ぜたものを１２μｌ
各チューブに加えた後、ボルテックスと軽い遠心を行っ
た。次に、希釈したトポイソメラーゼＩを２μｌずつチ
ューブに加えた後、ボルテックスと軽い遠心を行った
（ただし、対照の反応系として作製した酵素とアントラ
キノン誘導体を含まない反応系にはＨｉｌｌｉ Ｑ ２
μｌと５０％ ＤＭＳＯ １μｌを、アントラキノン誘
導体を含まない反応系には５０％ＤＭＳＯ １μｌを代
わりに加えた）。
【００３６】上記のエッペンドルフチューブを３７℃で
３０分間放置した後に、氷中でＳＤＳ／ＰＫ／ＢＪ
（０．６６％ ＳＤＳ／０．３３ ｍｇ／ｍｌ Ｐｒｏ
ｔｅｉｎａｓｅ Ｋ／０．８８×ＢＪ＜２０％ ｆｉｃ
ｏｌｌ／０．２５％ＢＰＢ＞）を３μｌずつ各チューブ
に加え、５０℃で５分間放置してからボルテックスと遠
心を行ない、再び５０℃３０分間放置しボルテックスと
遠心を行なった。
３０分間放置した後に、氷中でＳＤＳ／ＰＫ／ＢＪ
（０．６６％ ＳＤＳ／０．３３ ｍｇ／ｍｌ Ｐｒｏ
ｔｅｉｎａｓｅ Ｋ／０．８８×ＢＪ＜２０％ ｆｉｃ
ｏｌｌ／０．２５％ＢＰＢ＞）を３μｌずつ各チューブ
に加え、５０℃で５分間放置してからボルテックスと遠
心を行ない、再び５０℃３０分間放置しボルテックスと
遠心を行なった。
【００３７】試験例２ トポイソメラーゼＩＩ型阻害活
性測定 Ａ，Ｒａｔ Ｉｎｆａｎｔ Ｂｒａｉｎ Ｎｕｃｌｅｉ
（ＩＢＮ）から粗トポイソメラーゼＩＩの抽出ＩＢＮ
（１１．９８ ｍｇ／ｍｌ ｉｎ ５０％ グリセロー
ル）を４．２μｌ分取し、遠心（３，０００×ｇ，１
分）によりグリセロールを取り除いた。ペレットをＮｕ
ｃｌｅａｒ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒ（２
０ ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ＜ｐＨ７．５〉，０．３
Ｍ ＮａＣｌ，１４０ ｍＭ ｂ−Ｍｅ，５０ｍｌ／ｍ
ｌ ＢＳＡ，２０ ｍＨ ＰＨＳＦ）１０μｌで懸濁
し、氷中で３０分インキュベートした。つぎに、遠心
（１０，０００×ｇ，１０分）により上清を分取し粗ト
ポイソメラーゼＩＩを得た。これを活性に応じて希釈し
た。
性測定 Ａ，Ｒａｔ Ｉｎｆａｎｔ Ｂｒａｉｎ Ｎｕｃｌｅｉ
（ＩＢＮ）から粗トポイソメラーゼＩＩの抽出ＩＢＮ
（１１．９８ ｍｇ／ｍｌ ｉｎ ５０％ グリセロー
ル）を４．２μｌ分取し、遠心（３，０００×ｇ，１
分）によりグリセロールを取り除いた。ペレットをＮｕ
ｃｌｅａｒ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒ（２
０ ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ＜ｐＨ７．５〉，０．３
Ｍ ＮａＣｌ，１４０ ｍＭ ｂ−Ｍｅ，５０ｍｌ／ｍ
ｌ ＢＳＡ，２０ ｍＨ ＰＨＳＦ）１０μｌで懸濁
し、氷中で３０分インキュベートした。つぎに、遠心
（１０，０００×ｇ，１０分）により上清を分取し粗ト
ポイソメラーゼＩＩを得た。これを活性に応じて希釈し
た。
【００３８】Ｂ，精製トポイソメラーゼＩＩ（Ｔｏｐ
ＧＥＮ，Ｉｎｃ）の希釈 トポイソメラーゼＩＩ（Ｔｏｐ ＧＥＮ，Ｉｎｃ）を、
０．７５ ｕｎｉｔ／ｍｌになるようにＮｕｃｌｅａｒ
ｅｘｔｒａｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒで希釈した。
ＧＥＮ，Ｉｎｃ）の希釈 トポイソメラーゼＩＩ（Ｔｏｐ ＧＥＮ，Ｉｎｃ）を、
０．７５ ｕｎｉｔ／ｍｌになるようにＮｕｃｌｅａｒ
ｅｘｔｒａｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒで希釈した。
【００３９】エッペンドルフチューブに各濃度のアント
ラキノン誘導体を１μｌ、必要量のＭｉｌｌｉ Ｑ、４
×Ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ ＩＩ ｂｕｆｆｅｒ
（２５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ＜ｐＨ ７．９＞，６
００ ｍＭ ＫＣＩ，５０ｍＭＨｇＣｌ２，０．５ ｍ
Ｍ ＥＤＴＡ，２．５ ｍＭ ＡＴＰ，１５０ ｍｇ／
ｍｌ ＢＳＡ）、ｋ ＤＮＡ（３１２ ｎｇ／ｍｌ）を
混合したｂｕｆｆｅｒ１８μｌを加え、ボルテックスと
軽い遠心を行った。次に、希釈した粗トポイソメラーゼ
ＩＩもしくは希釈した精製トポイソメラーゼＩＩ１μｌ
を加え、再びボルテックスと軽い遠心を行った（ただ
し、対照の反応系として作製した酵素とアントラキノン
誘導体を含まない反応系にはＭｉｌｌｉ Ｑ １μｌと
５０％ＤＭＳＯ １μｌを、アントラキノン誘導体を含
まない反応系には５０％ ＤＨＳＯ １μｌを代わりに
加えた）。
ラキノン誘導体を１μｌ、必要量のＭｉｌｌｉ Ｑ、４
×Ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ ＩＩ ｂｕｆｆｅｒ
（２５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ＜ｐＨ ７．９＞，６
００ ｍＭ ＫＣＩ，５０ｍＭＨｇＣｌ２，０．５ ｍ
Ｍ ＥＤＴＡ，２．５ ｍＭ ＡＴＰ，１５０ ｍｇ／
ｍｌ ＢＳＡ）、ｋ ＤＮＡ（３１２ ｎｇ／ｍｌ）を
混合したｂｕｆｆｅｒ１８μｌを加え、ボルテックスと
軽い遠心を行った。次に、希釈した粗トポイソメラーゼ
ＩＩもしくは希釈した精製トポイソメラーゼＩＩ１μｌ
を加え、再びボルテックスと軽い遠心を行った（ただ
し、対照の反応系として作製した酵素とアントラキノン
誘導体を含まない反応系にはＭｉｌｌｉ Ｑ １μｌと
５０％ＤＭＳＯ １μｌを、アントラキノン誘導体を含
まない反応系には５０％ ＤＨＳＯ １μｌを代わりに
加えた）。
【００４０】上記のエペンドルフチューブを粗トポイソ
メラーゼＩＩの場合は３０℃、精製トポイソメラーゼＩ
Ｉの場合は３７℃で３０分間放置した後、氷中でＳＤＳ
／ＰＫ／ＢＪを４μｌずつ入れた。その後、どちらの場
合も５０℃で５分間放置してからボルテックス・軽い遠
心を行ない、再度５０℃で３０分間放置してからボルテ
ックス・軽い遠心を行なった。
メラーゼＩＩの場合は３０℃、精製トポイソメラーゼＩ
Ｉの場合は３７℃で３０分間放置した後、氷中でＳＤＳ
／ＰＫ／ＢＪを４μｌずつ入れた。その後、どちらの場
合も５０℃で５分間放置してからボルテックス・軽い遠
心を行ない、再度５０℃で３０分間放置してからボルテ
ックス・軽い遠心を行なった。
【００４１】Ｃ，アガロースゲル電気泳動とデンシトメ
トリー 泳動用１×ＴＢＥ緩衝液（８９ ｍＭ Ｔｒｉｓ Ｂａ
ｓｅ／８９ ｍＭ ホウ酸／２ｍＭ ＥＤＴＡ２Ｎａ）
を用いたアガロースゲル電気泳動（−ＥｔＢｒ５０
Ｖ）を行い、泳動後に１×ＴＢＥ（０．１ｍｌ／ｍｌ
ＥｔＢｒ）でゲル染色を行い、ゲルの脱色後、ＵＶ照射
を行い、バンドを観察した。トポイソメラーゼ Ｉ型阻
害活性測定ではアガロースゲルの濃度を１．２％、ＩＩ
型活性測定では０．８％とした。
トリー 泳動用１×ＴＢＥ緩衝液（８９ ｍＭ Ｔｒｉｓ Ｂａ
ｓｅ／８９ ｍＭ ホウ酸／２ｍＭ ＥＤＴＡ２Ｎａ）
を用いたアガロースゲル電気泳動（−ＥｔＢｒ５０
Ｖ）を行い、泳動後に１×ＴＢＥ（０．１ｍｌ／ｍｌ
ＥｔＢｒ）でゲル染色を行い、ゲルの脱色後、ＵＶ照射
を行い、バンドを観察した。トポイソメラーゼ Ｉ型阻
害活性測定ではアガロースゲルの濃度を１．２％、ＩＩ
型活性測定では０．８％とした。
【００４２】酵素の反応量はアガロースゲルのバンドの
濃さをコンピューター＜ＮＩＨ Ｉｍａｇｅに付属して
いるマクロス（Ｇｅｌ Ｐｌｏｔｔｉｎｇ Ｈａｃｒｏ
ｓ）＞を用いて数値化し、定量した。Ｉ型活性測定では
ｓｕｐｅｒｃｏｉｌ ＤＮＡのバンドを、ＩＩ型活性測
定ではミニサークルＤＮＡのバンドをコンピューターに
取り込ませて数値化、算出により残存活性率を得た。そ
の値からグラフを作成し、トポイソメラーゼＩおよびＩ
Ｉの活性を５０％阻害するアントラキノン誘導体濃度
（ＩＣ５０）として表わした。結果を表１に示す。
濃さをコンピューター＜ＮＩＨ Ｉｍａｇｅに付属して
いるマクロス（Ｇｅｌ Ｐｌｏｔｔｉｎｇ Ｈａｃｒｏ
ｓ）＞を用いて数値化し、定量した。Ｉ型活性測定では
ｓｕｐｅｒｃｏｉｌ ＤＮＡのバンドを、ＩＩ型活性測
定ではミニサークルＤＮＡのバンドをコンピューターに
取り込ませて数値化、算出により残存活性率を得た。そ
の値からグラフを作成し、トポイソメラーゼＩおよびＩ
Ｉの活性を５０％阻害するアントラキノン誘導体濃度
（ＩＣ５０）として表わした。結果を表１に示す。
【００４３】
【表１】
【００４４】表１から、本発明のアントラキノン誘導体
は、トポイソメラーゼＩおよびＩＩの阻害活性を有して
いることが明らかである。
は、トポイソメラーゼＩおよびＩＩの阻害活性を有して
いることが明らかである。
【００４５】
【発明の効果】本発明のアントラキノン誘導体は、すぐ
れたトポイソメラーゼＩおよびＩＩ阻害活性を示し、抗
腫瘍剤として有用である。
れたトポイソメラーゼＩおよびＩＩ阻害活性を示し、抗
腫瘍剤として有用である。
Claims (2)
- 【請求項１】一般式（１） 【化１】 （式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７お
よびＲ８は、それぞれ水素原子、アルキル基、アルケニ
ル基、アルコキシ基、ヒドロキシ基、ヒドロキシアルキ
ル基、ホルミル基、ハロゲン原子またはアミノ基を示
す）で表されるアントラキノン誘導体およびその薬学的
に許容される塩を有効成分とする抗腫瘍剤。 - 【請求項２】一般式（１） 【化２】 （式中、Ｒ１は、水素原子、アルコキシ基またはヒドロ
キシ基、Ｒ２は、水素原子、ホルミル基またはアルキル
基、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６は、それぞれ水素原子または
ヒドロキシ基を示す）で表されるアントラキノン誘導体
およびその薬学的に許容される塩を有効成分とする抗腫
瘍剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9085461A JPH10203969A (ja) | 1997-01-27 | 1997-01-27 | 抗腫瘍剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9085461A JPH10203969A (ja) | 1997-01-27 | 1997-01-27 | 抗腫瘍剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10203969A true JPH10203969A (ja) | 1998-08-04 |
Family
ID=13859530
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9085461A Pending JPH10203969A (ja) | 1997-01-27 | 1997-01-27 | 抗腫瘍剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH10203969A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109134295A (zh) * | 2018-10-19 | 2019-01-04 | 山东大学 | 蒽二酮衍生物及其制备方法和应用 |
| WO2023068921A1 (en) * | 2021-10-18 | 2023-04-27 | Universiti Malaya | A medicament to suppress the expression of mutated kras and mutated p53 in colorectal cancer cell |
-
1997
- 1997-01-27 JP JP9085461A patent/JPH10203969A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109134295A (zh) * | 2018-10-19 | 2019-01-04 | 山东大学 | 蒽二酮衍生物及其制备方法和应用 |
| CN109134295B (zh) * | 2018-10-19 | 2020-03-27 | 山东大学 | 蒽二酮衍生物及其制备方法和应用 |
| WO2023068921A1 (en) * | 2021-10-18 | 2023-04-27 | Universiti Malaya | A medicament to suppress the expression of mutated kras and mutated p53 in colorectal cancer cell |
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