JPH10201477A - 蛋白質ｓａｐａｐ１ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 神経シナプス結合後部のＰＳＤの構成分子で
あるＰＳＤ-95/ＳＡＰ90に特異的に結合する未知分子を
提供する。 【解決手段】 配列番号１のアミノ酸配列を有する蛋白
質ＳＡＰＡＰ１および配列番号１と実質的に同一のアミ
ノ酸配列を有する動物性蛋白質。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】この発明は、神経シナプス結
合後部の構成分子ＰＳＤ-95/ＳＡＰ90およびその関連蛋
白質に特異的に結合する蛋白質ＳＡＰＡＰ１に関するも
のである。さらに詳しくは、この発明は、ヒトの神経系
の形成や発達、あるいは記憶、学習等のメカニズムの解
明、さらには神経系の機能的または構造的障害を原因と
する各種神経疾患の診断、予防および治療のための技術
開発等に有用な新規の蛋白質に関するものである。

【０００２】

【従来の技術とその課題】ヒトをはじめとする多細胞生
物の正常な機能維持には、秩序ある細胞接着とそれに引
き続く細胞間の情報交換を支える細胞間結合の成立、さ
らにその細胞間結合を通じて受け渡しされる情報に基づ
いて引き起こされる細胞の分化といった一連の生命現象
の時系制御が極めて重要である。多細胞生物に認められ
る細胞間結合は多彩であるが、それらに共通する構成分
子としてguanylate kinase配列を有する一群の蛋白質Ｍ
ＡＧＵＫ（membrane-associated guanylate kinase：膜
関連グアニル酸キナーゼ）が最近注目を集めている (Cu
rr. Biol., 8, 382-384, 1996)。

【０００３】ＭＡＧＵＫは、グアニル酸キナーゼ配列の
他に、蛋白質同士の結合モチーフであるＰＤＺ（ＤＨ
Ｒ）領域とＳＨ３領域をもち、このような特徴的構造を
有していることから細胞間結合における分子構造の維持
と、細胞接着に伴う情報伝達に重要な役割を果たしてい
ると想定されている。実際に、ショウジョウバエではＭ
ＡＧＵＫをコードする遺伝子の一つ(disc large tumor
suppressor gene:dlg-A)の突然変異により、septate ju
nctionにおける細胞の異常増殖や神経シナプス結合の構
造異常が引き起こされる。また、線虫ではcalmodulin k
inase様領域を有するＭＡＧＵＫであるlin-2の突然変異
により、ＥＧＦ類似分子lin-2に対する受容体であるlet
-23が本来の局在を失い陰門形成に異常を生じる。哺乳
動物では、赤血球膜に発現しているｐ55や、tight junc
tionに発現しているＺＯ-1／ＺＯ-2、神経シナプス結合
に発現しているＰＳＤ-95／ＳＡＰ90とそのアイソフォ
ーム、lin-2の哺乳動物ホモログと考えられるＣＡＳＫ
(J. neurosci., 16, 2488-2494)などがＭＡＧＵＫファ
ミリーの構成員として考えられている（以下、ＭＡＧＵ
Ｋファミリーに属する蛋白質をＭＡＧＵＫｓと記載する
ことがある）。例えば、ｐ55は、膜貫通蛋白質であるgl
ycophorin Ｃおよび膜裏打ち蛋白質であるband4.1 と三
者複合体を形成し、ＺＯ-1はＺＯ-2と複合体を形成して
膜貫通蛋白質であるoccludinに結合するとともに、α s
pectrinにも結合し、いずれも細胞膜ないし細胞間結合
の維持に関与している（図１参照）。

【０００４】このように、多細胞生物の細胞間結合は多
くの共通性を有するが、一方で細胞の種類による特異性
も存在し、とくに神経シナプス結合は他の細胞間結合と
は大きく異なる特徴を有している。第一に、神経シナプ
ス結合は極性を有し、その前部と後部では構造が著しく
異なる。前部は神経伝達物質の放出に関わる構造を有す
るのに対し、後部はpostsynaptic density (ＰＳＤ) と
呼ばれる特異な構造を有している。第二には、神経シナ
プス結合は一度成立した後にも神経刺激伝達に伴い結合
の性状の変化（可塑性）を示すということである。この
可塑性は、記憶・学習のメカニズムの基本を成す現象で
あると考えられており、正に神経シナプス結合を他の細
胞間結合から際立たせる特徴である。可塑性のメカニズ
ムの詳細は未だ明らかでないが、神経シナプス結合の前
部に依存する前シナプス可塑性と、後部に依存する後シ
ナプス可塑性の存在が知られている。いずれにしても神
経シナプス結合の特徴的な構造が深く関与していること
が予測され、この構造の解明が可塑性のメカニズム、さ
らには記憶・学習のメカニズム解明に必須であると考え
られている。

【０００５】神経シナプス結合の可塑性メカニズムに関
して、特に後部のＰＳＤについてはほとんど解明されて
いなかったが、最近になって、神経シナプス結合に特異
的なＭＡＧＵＫであるＰＳＤ-95/ＳＡＰ90が注目を集め
ている。これは、ＰＳＤ-95/ＳＡＰ90がそのＰＤＺ（Ｄ
ＨＲ）領域を介してＮＭＤＡ型グルタミン酸受容体のサ
ブユニット（ＮＭＤＡＲ2Ａ、2Ｂ）およびShaker型Ｋ⁺
チャネルのＣ末端に結合し、またnitric synthase(ＮＯ
Ｓ）のＰＤＺ（ＤＨＲ）領域とも結合して、これら受容
体やチャネルおよび神経シナプス可塑性に関わる分子の
クラスタリングに関与することが明らかにされたことに
よる（Cell 84, 659-662, 1996)。

【０００６】しかしながら、受容体やＮＯＳのクラスタ
リングは神経筋接合部でも認められる現象であり、これ
のみでは神経シナプス結合の可塑性を説明することはで
きない。そしてこのことは、ＰＳＤ-95/ＳＡＰ90に特異
的に結合し、しかも可塑性に関与するこれまでに同定さ
れていない分子の存在を強く示唆する。このような分子
の同定とその機能の解明は、ヒトの記憶・学習といった
高次脳機能の理解に大きな前進をもたらすばかりか、こ
の分子あるいはこの分子の活性、作用に影響する様々な
物質、化合物等は、中枢神経系の機能的または構造的障
害を原因とする様々な神経疾患の原因解明、並びにそれ
ら疾患の診断、予防および治療法等の開発に大きく寄与
するものと期待される。

【０００７】この発明は、以上のとおりの事情に鑑みて
なされたものであり、神経シナプス結合後部のＰＳＤの
構成分子であるＰＳＤ-95/ＳＡＰ90に特異的に結合する
未知分子を提供することを目的としている。

【０００８】

【課題を解決するための手段】この発明は、上記の課題
を解決するものとして、配列番号１のアミノ酸配列を有
する蛋白質ＳＡＰＡＰ１を提供する。またこの発明は、
配列番号１と実質的に同一なアミノ酸配列を有する動物
性蛋白質を提供する。

【０００９】さらにこの発明は、配列番号１のアミノ酸
配列または配列番号１と実質的に同一のアミノ酸配列を
コードするｃＤＮＡ配列と、このｃＤＮＡ配列またはそ
の一部配列がハイブリダイズするゲノムＤＮＡ配列をも
提供する。この発明の蛋白質ＳＡＰＡＰ１は、yeast tw
o-hybrid法を用いて以下のとおりに同定されたものであ
る。すなわち、ラットの脳ｃＤＮＡライブラリーから得
たｃＤＮＡ断片を含むベクター(prey vector)と、ＰＳ
Ｄ-95/ＳＡＰ90のＳＨ３領域とグアニル酸キナーゼ領域
をlexＡＤＮＡ結合領域に融合したベクター(bait becto
r)とを、lexＡオペロンの下流にβ−ガラクトシターゼ
をもつ酵母に導入し、β−ガラクトシターゼの活性を指
標としてＰＳＤ-95/ＳＡＰ90に結合するｃＤＮＡを同定
した。その結果、1.4 ×10⁶個のクローンから、６個の
独立のポジティブクローンを得た。各々について配列を
確認したところ、この中に互いに相同な配列をもつ４つ
のクローンが含まれていた。これらの４クローンのう
ち、さらにノーザンブロットで比較的メッセージが豊富
な２つについてクローニングを行なった。得られたクロ
ーンはそれぞれ992個と980個のアミノ酸からなる蛋白質
をコードし、互いに約60％の相同性を示した。しかしな
がら、既知の配列のなかには相同のものは発見されなか
ったことから、これらのｃＤＮＡがコードする蛋白質が
新規なものであると結論し、各々、ＳＡＰＡＰ（ＳＡＰ
90/ＰＳＤ-95-Ａssociated Ｐrotein）１および２と命
名した。ＳＡＰＡＰ１のアミノ酸配列は配列番号１に示
したとおりであり、この配列はＧeneＢankにＵ67137と
して登録されている。またＳＡＰＡＰ２の配列は配列番
号２のとおりであり、これもＧeneＢankにＵ67138とし
て登録されている（以下、ＳＡＰＡＰ１およびＳＡＰＡ
Ｐ２をＳＡＰＡＰｓと記載することがある）。

【００１０】

【発明の実施の形態】この発明の蛋白質ＳＡＰＡＰ１
は、発明者等がこの蛋白質の同定に用いたクローンのイ
ンサート（ｃＤＮＡ）を適当な発現ベクターに挿入し、
大腸菌等で発現させることによって取得することができ
る。また、上記のｃＤＮＡまたはその一部をプローブと
して用いることにより、ラット以外の動物のｃＤＮＡラ
イブラリー等から該当するｃＤＮＡを単離し、適当な宿
主−ベクター系で発現させることにより、動物種に固有
の蛋白質として取得することができる。なお、このよう
なラット以外の動物由来の蛋白質も配列番号１と実質的
に同一のアミノ酸配列を有する蛋白質である。

【００１１】この発明のｃＤＮＡ配列は、上記のとおり
のラットｃＤＮＡおよびその他の動物由来のｃＤＮＡを
含むものである。また、この発明のゲノムＤＮＡ配列
は、全ての動物種の遺伝子ＤＮＡを含むものである。以
上のとおりの方法によって取得することのできるこの発
明の蛋白質ＳＡＰＡＰ１は、神経シナプス結合後部のＰ
ＳＤの構成分子であるＰＳＤ-95/ＳＡＰ90およびその関
連蛋白質に特異的に結合する蛋白質である。この点につ
いて以下のとおり例証する。 （１）ＳＡＰＡＰｓとＭＡＧＵＫｓとの結合 ＳＡＰＡＰ１および２の各々をコードするｃＤＮＡが、
ＰＳＤ-95/ＳＡＰ90以外のＭＡＧＵＫｓ（ＳＨ３領域と
グアニル酸キナーゼ領域を含む蛋白質）と結合するか否
をyeast two-hybrid法により検討した。その結果、両Ｓ
ＡＰＡＰｓのｃＤＮＡクローンとも、ＰＳＤ-95/ＳＡＰ
90だけではなく、ＳＡＰ97、ＰＳＤ-95/ＳＡＰ90関連蛋
白質１（ＰＳＲＰ１）およびdlg-Ａにも結合した。しか
しながら、それ以外のＭＡＧＵＫｓ、すなわちＺＯ-1、
ｐ55、ＣＡＳＫには結合しなかった。

【００１２】ＭＡＧＵＫｓのなかでも、ＰＳＤ-95/ＳＡ
Ｐ90、ＳＡＰ97、ＰＳＲＰ１およびdlg-Ａは、ＺＯ-1、
ｐ55およびＣＡＳＫとは異なるファミリーを構成するこ
とから、ＳＡＰＡＰ１および２は、ＰＳＤ-95/ＳＡＰ90
と密接に関連した蛋白質ファミリーと結合することが確
認された。 （２）ＳＡＰＡＰｓに結合するＰＳＤ-95/ＳＡＰ90の領
域 ＳＡＰＡＰ１および２の各々をコードするｃＤＮＡが、
ＰＳＤ-95/ＳＡＰ90およびそのファミリー蛋白質のどの
領域に結合するかを調べた。その結果、いずれのｃＤＮ
Ａとも、ＰＳＤ-95/ＳＡＰ90、ＳＡＰ97、ＰＳＲＰ１お
よびdlg-Ａのグアニル酸キナーゼ領域には結合したが、
ＳＨ３領域には結合しなかった。従って、ＰＳＤ-95/Ｓ
ＡＰ90およびそのファミリー蛋白質のグアニル酸キナー
ゼ領域がＳＡＰＡＰｓの結合部位であることが確認され
た。

【００１３】さらに、ＰＳＤ-95/ＳＡＰ90のＳＨ３領域
またはグアニル酸キナーゼ領域と、ＳＡＰＡＰ１の全長
ｃＤＮＡとの結合を調べたが、このｃＤＮＡもグアニル
酸キナーゼ領域にのみ結合した。 （３）in vitroにおけるＰＳＤ-95/ＳＡＰ90とＳＡＰＡ
Ｐｓの結合 蛋白質ＳＡＰＡＰｓそれ自体がＰＳＤ-95/ＳＡＰ90と結
合するか否かを、BIAcore(surface plasmon resonance)
システムを用いて調べた。ＳＡＰＡＰｓの一部（ＰＳＤ
-95/ＳＡＰ90との結合領域と思われる部分）とＧＳＴと
の融合蛋白質またはＧＳＴそれ自体をＧＳＴ抗体を介し
てBIAcoreセンサチップに固定し、ＰＳＤ-95/ＳＡＰ90
のグアニル酸キナーゼ領域とＭＢＰとの融合蛋白質と、
上記ＧＳＴまたはＧＳＴ融合蛋白質との親和性（結合の
程度）を測定した。結果は図２に示したとおりであり、
ＧＳＴ融合蛋白（ＳＡＰＡＰｓを含む）は約１０^-7〜１
０ ^-6という高いＫｍ値でＭＢＰ融合蛋白（ＰＳＤ-95/Ｓ
ＡＰ90を含む）と結合した。 （４）ＣＯＳ細胞でのＳＡＰＡＰｓの発現 ＳＡＰＡＰ１および２の各々のポリクローナル抗体を調
製し、ＣＯＳ細胞で発現させた両ＳＡＰＡＰｓと各抗体
との結合を調べることにより、ＳＡＰＡＰｓをコードす
るｃＤＮＡが全長クローンであるか否かを検討した。そ
の結果、図３Ａに示したとおり、ＳＡＰＡＰ１に対する
抗体（Ａｎｔｉ−ＳＡＰＡＰ１）は、ＳＡＰＡＰ１のコ
ード領域をトランスフェクトしたＣＯＳ細胞で発現され
た分子量約140ＫＤの蛋白質を検出したが、ＳＡＰＡＰ
２を導入した細胞からの発現産物は検出しなかった。一
方、図３Ｂのとおり、ＳＡＰＡＰ２に対する抗体（Ａｎ
ｔｉ−ＳＡＰＡＰ２）は、ＳＡＰＡＰ２のコード領域を
トランスフェクトしたＣＯＳ細胞で発現された分子量約
140ＫＤの蛋白質を検出したが、ＳＡＰＡＰ１を導入し
た細胞からの発現産物は検出しなかった。これらの抗体
で脳内から検出された蛋白質も同一分子量（約140Ｋ
Ｄ）を有しており、これらは計算された分子量とは異な
っていた。従って、ＳＡＰＡＰ１および２をコードする
ｃＤＮＡクローンは、それらの全長ｃＤＮＡであること
が確認された。 （５）脳内におけるＳＡＰＡＰｓの特異的発現 ＳＡＰＡＰ１および２の各々のコード領域をプローブと
するノーザンブロット分析の結果、図４Ａ、Ｂに示した
とおり、ＳＡＰＡＰ１および２は、脳でのみ特異的に発
現していることが確認された。また、ＳＡＰＡＰ１に対
するポリクローナル抗体を用いたウエスタンブロット分
析の結果も、ＳＡＰＡＰ１が脳でのみ特異的に発現する
ことを示した（図４Ｃ）。ＳＡＰＡＰ２についても同様
の結果が得られた。 （６）ニューロンにおけるＳＡＰＡＰｓの特異的発現 ＳＡＰＡＰｓがニューロン蛋白質であるか否かを調べる
ため、ラットの胎児から得た海馬ニューロンの初代培養
系を各々の抗体を用いて染色した。その結果、ＳＡＰＡ
Ｐ１抗体は海馬ニューロンの樹状突起および細胞体に反
応したが、グリア細胞には反応しなかった。なお、この
反応パタンは、ＰＳＤ-95/ＳＡＰ90に対する抗体のそれ
とよく一致した。 （７）ＰＳＤにおけるＳＡＰＡＰｓの局在 ラット脳の細分化した画分をウエスタンブロット分析し
た結果、図５に示したとおり、ＳＡＰＡＰ１抗体により
検出された蛋白質は、シナプス画分（Ｐ２）に局在して
いた。このシナプス画分をさらに細分化したシナプス小
胞画分（ｐ３）、細胞ゾル画分（Ｓ３）およびシナプス
膜画分（ＳＰＭ）についても同様に分析した結果、ＳＡ
ＰＡＰ１はＳＰＭに豊富に含まれれいることが確認され
た。また、このＳＰＭはＰＳＤ-95/ＳＡＰ90の抗体およ
びＮＭＤＡ受容体２Ａ／Ｂの抗体とも良く反応し、これ
らを豊富に含むことも確認された。さらに、ＴritonＸ-
100による抽出によってＳＰＭからＰＳＤを調製して調
べたところ、ＳＡＰＡＰ１はＰＳＤにより豊富に含まれ
ていることも確認された。なお、ＳＡＰＡＰ２について
も同様の結果が得られた。 （８）正常細胞におけるＳＡＰＡＰｓとＰＳＤ-95/ＳＡ
Ｐ90との結合 ＳＡＰＡＰｓが正常細胞において実際にＰＳＤ-95/ＳＡ
Ｐ90と結合するか否かを調べるため、ＳＡＰＡＰｓとＰ
ＳＤ-95/ＳＡＰ90とを様々に組み合わせて２９３細胞で
発現させた。その結果、単独で発現されたＰＳＤ-95/Ｓ
ＡＰ90は細胞ゾルに位置し、一方ＳＡＰＡＰ１は細胞の
プラズマ膜に位置するのに対し、ＳＡＰＡＰ１とＰＳＤ
-95/ＳＡＰ90が共に発現した場合には、ＰＳＤ-95/ＳＡ
Ｐ90は細胞のプラズマ膜に移動した。この結果から、Ｓ
ＡＰＡＰ１が細胞内において実際にＰＳＤ-95/ＳＡＰ90
と結合していることが確認された。なお、ＳＡＰＡＰ２
についてもほぼ同様の結果が得られた。

【００１４】

【発明の効果】以上詳しく説明したとおり、この発明の
ＳＡＰＡＰ１は神経シナプス結合後部の構成分子ＰＳＤ
-95/ＳＡＰ90およびその関連蛋白質に特異的に結合する
新規な動物性蛋白質であり、この蛋白質はヒトをはじめ
とする動物の神経系の発生や発達、あるいは記憶、学習
等のメカニズムの解明、さらには神経系の機能的または
構造的障害を原因とする各種神経疾患の診断、予防およ
び治療のための技術開発等に有用である。

【００１５】

【配列表】

配列番号：１ 配列の長さ：992 配列の型：アミノ酸 配列の種類：蛋白質 配列 Met Lys Gly Leu Ser Gly Ser Arg Ser His His His Gly Ile Thr Cys 1 5 10 15 Glu Ser Ala Cys Asp Ser Leu Ser His His Ser Asp His Lys Pro Tyr 20 25 30 Leu Leu Ser Pro Val Asp His His Pro Ala Asp His Pro Tyr Tyr Thr 35 40 45 Gln Arg Asn Ser Phe Gln Ala Glu Cys Val Gly Pro Phe Ser Asp Pro 50 55 60 Leu Ala Ser Ser Thr Phe Pro Arg Arg His Tyr Thr Ser Gln Gln Glu 65 70 75 80 Leu Lys Asp Glu Ser Ala Leu Val Pro Arg Thr Leu Ala Thr Lys Ala 85 90 95 Asn Arg Leu Pro Thr Asn Leu Leu Asp Gln Phe Glu Arg Gln Leu Pro 100 105 110 Leu Ser Arg Asp Gly Tyr His Thr Leu Gln Tyr Lys Arg Thr Ala Val 115 120 125 Glu His Arg Ser Asp Ser Pro Gly Arg Ile Arg His Leu Val His Ser 130 135 140 Val Gln Lys Leu Phe Thr Lys Ser His Ser Leu Glu Gly Ala Ser Lys 145 150 155 160 Gly Gly Val Asn Gly Gly Lys Ala Ser Pro Asp Gly Ser Gln Thr Val 165 170 175 Arg Tyr Gly Lys Arg Ser Lys Ser Lys Glu Arg Arg Ser Glu Pro Lys 180 185 190 Ala Arg Ser Asn Ala Ser Asn Ala Ser Pro Thr Ser Pro Ser Trp Trp 195 200 205 Ser Ser Asp Asp Asn Leu Asp Gly Asp Met Cys Leu Tyr His Thr Pro 210 215 220 Ser Gly Val Met Thr Met Gly Arg Cys Pro Asp Arg Ser Val Ser Gln 225 230 235 240 Tyr Phe Met Gly Ala Tyr Asn Thr Ile Ser Glu Gln Ala Val Lys Ala 245 250 255 Ser Arg Ser Asn Asn Asp Val Lys Cys Ser Thr Cys Ala Asn Leu Pro 260 265 270 Val Thr Leu Asp Ala Pro Leu Leu Lys Lys Ser Ala Trp Ser Ser Thr 275 280 285 Leu Thr Val Ser Arg Ala Arg Glu Val Tyr Gln Lys Ala Ser Val Asn 290 295 300 Met Asp Gln Ala Val Val Lys Ser Glu Ala Cys Gln Gln Glu Arg Ser 305 310 315 320 Cys Gln Tyr Leu Gln Val Pro Gln Asp Glu Trp Thr Gly Tyr Thr Pro 325 330 335 Arg Gly Lys Asp Asp Glu Ile Pro Cys Arg Arg Met Arg Ser Gly Ser 340 345 350 Tyr Ile Lys Ala Met Gly Asp Glu Asp Ser Gly Asp Ser Asp Thr Ser 355 360 365 Pro Lys Pro Ser Pro Lys Val Ala Ala Arg Arg Glu Ser Tyr Leu Lys 370 375 380 Ala Thr Gln Pro Ser Leu Thr Glu Leu Thr Thr Leu Lys Ile Ser Asn 385 390 395 400 Glu His Ser Pro Lys Leu Gln Ile Arg Ser His Ser Tyr Leu Arg Ala 405 410 415 Val Ser Glu Val Ser Ile Asn Arg Ser Leu Asp Ser Leu Asp Pro Ala 420 425 430 Gly Leu Leu Thr Ser Pro Lys Phe Arg Ser Arg Asn Glu Ser Tyr Met 435 440 445 Arg Ala Met Ser Thr Ile Ser Gln Val Ser Glu Met Glu Val Asn Gly 450 455 460 Gln Phe Glu Ser Val Cys Glu Ser Val Phe Ser Glu Leu Glu Ser Gln 465 470 475 480 Ala Val Glu Ala Leu Asp Leu Pro Met Pro Gly Cys Phe Arg Met Arg 485 490 495 Ser His Ser Tyr Val Arg Ala Ile Glu Lys Gly Cys Ser Gln Asp Asp 500 505 510 Glu Cys Val Ser Leu Arg Ser Ser Ser Pro Pro Arg Thr Thr Thr Thr 515 520 525 Val Arg Thr Ile Gln Ser Ser Thr Gly Val Ile Lys Leu Ser Ser Ala 530 535 540 Val Glu Val Ser Ser Cys Ile Thr Thr Tyr Lys Lys Thr Pro Pro Pro 545 550 555 560 Val Pro Pro Arg Thr Thr Thr Lys Pro Phe Ile Ser Ile Thr Ala Gln 565 570 575 Ser Ser Thr Glu Ser Ala Gln Asp Ala Tyr Met Asp Gly Gln Gly Gln 580 585 590 Arg Gly Asp Met Ile Ser Gln Ser Gly Leu Ser Asn Ser Thr Glu Ser 595 600 605 Leu Asp Ser Met Lys Ala Leu Thr Ala Ala Ile Glu Ala Ala Asn Ala 610 615 620 Gln Ile His Gly Pro Ala Ser Gln His Met Gly Ser Asn Ala Ala Ala 625 630 635 640 Val Thr Thr Thr Thr Thr Ile Ala Thr Val Thr Thr Glu Asp Arg Lys 645 650 655 Lys Asp Phe Lys Lys Asn Arg Cys Leu Ser Ile Gly Ile Gln Val Asp 660 665 670 Asp Ala Glu Glu Ser Glu Lys Met Ala Glu Ser Lys Thr Ser Ser Lys 675 680 685 Phe Gln Ser Val Gly Val Gln Val Glu Glu Glu Lys Cys Phe Arg Arg 690 695 700 Phe Thr Arg Ser Asn Ser Val Thr Thr Ala Val Gln Ala Asp Leu Asp 705 710 715 720 Phe His Asp Asn Leu Glu Asn Ser Leu Glu Ser Ile Glu Asp Asn Ser 725 730 735 Cys Pro Gly Pro Met Ala Arg Gln Phe Ser Arg Asp Ala Ser Thr Ser 740 745 750 Thr Val Ser Ile Gln Gly Ser Gly Asn His Tyr His Ala Cys Ala Ala 755 760 765 Asp Asp Asp Phe Asp Thr Asp Phe Asp Pro Ser Ile Leu Pro Pro Pro 770 775 780 Asp Pro Trp Ile Asp Ser Ile Thr Glu Asp Pro Leu Glu Ala Val Gln 785 790 795 800 Arg Ser Val Cys His Arg Asp Gly His Trp Phe Leu Lys Leu Leu Gln 805 810 815 Ala Glu Arg Asp Arg Met Glu Gly Trp Cys Lys Gln Met Glu Arg Glu 820 825 830 Glu Arg Glu Asn Asn Leu Pro Glu Asp Ile Leu Gly Lys Ile Arg Thr 835 840 845 Ala Val Gly Ser Ala Gln Leu Leu Met Ala Gln Lys Phe Tyr Gln Phe 850 855 860 Arg Glu Leu Cys Glu Glu Asn Leu Asn Pro Asn Ala His Pro Arg Pro 865 870 875 880 Thr Ser Gln Asp Leu Ala Gly Phe Trp Asp Met Leu Gln Leu Ser Ile 885 890 895 Glu Asn Ile Ser Met Lys Phe Asp Glu Leu His Gln Leu Lys Ala Asn 900 905 910 Asn Trp Lys Gln Met Asp Pro Leu Asp Lys Lys Glu Arg Arg Ala Pro 915 920 925 Pro Pro Val Pro Lys Lys Pro Ala Lys Gly Pro Ala Pro Leu Ile Arg 930 935 940 Glu Arg Ser Leu Glu Ser Ser Gln Arg Gln Glu Ala Arg Lys Arg Leu 945 950 955 960 Met Ala Ala Lys Arg Ala Ala Ser Val Arg Gln Asn Ser Ala Thr Glu 965 970 975 Ser Ala Glu Ser Ile Glu Ile Tyr Ile Pro Glu Ala Gln Thr Arg Leu 980 985 990 配列番号：２ 配列の長さ：980 配列の型：アミノ酸 配列の種類：蛋白質 配列 Met Lys Gly Leu Thr Gly Ser Arg Asn Gln Pro Gln Leu Cys Val Gly 1 5 10 15 His Thr Cys Gly Leu Ser Pro Thr Asp Glu Cys Glu His Pro His Asp 20 25 30 His Val Arg His Gly Pro Asp Val Arg Gln Pro Tyr Leu Leu Ser Pro 35 40 45 Ala Glu Ser Cys Pro Met Asp His His Arg Cys Ser Pro Arg Ser Ser 50 55 60 Val His Ser Glu Cys Met Met Met Pro Val Met Leu Gly Asp His Val 65 70 75 80 Ser Ser Ser Thr Phe Pro Arg Met His Tyr Ser Ser His Tyr Asp Thr 85 90 95 Arg Asp Asp Cys Ala Thr Ser His Ala Ser Thr Lys Val Asn Arg Ile 100 105 110 Pro Ala Asn Leu Leu Asp Gln Phe Glu Lys Gln Leu Pro Leu His Arg 115 120 125 Asp Gly Phe His Thr Leu Gln Tyr His Arg Ala Ser Ala Ala Thr Glu 130 135 140 Gln Arg Asn Glu Ser Pro Gly Arg Ile Arg His Leu Val His Ser Val 145 150 155 160 Gln Lys Leu Phe Thr Lys Ser His Ser Leu Glu Gly Ser Ser Lys Ser 165 170 175 Asn Ile Asn Gly Thr Lys Ser Glu Gly Arg Met Asp Asp His His Gln 180 185 190 Ser His Leu Ser Lys His Ser Lys Arg Ser Lys Ser Lys Glu Arg Lys 195 200 205 Pro Glu Ser Lys His Lys Ser Gly Met Ser Ser Trp Trp Ser Ser Asp 210 215 220 Asp Asn Leu Asp Ser Asp Ser Thr Tyr Arg Thr Pro Ser Val Ala His 225 230 235 240 Arg His His Met Asp His Ile Pro His Cys Tyr Pro Glu Ala Leu Gln 245 250 255 Ser Pro Phe Gly Asp Leu Ser Leu Lys Thr Ser Lys Ser Asn Ser Asp 260 265 270 Val Lys Cys Ser Ala Cys Glu Gly Leu Ala Leu Thr Pro Asp Thr Arg 275 280 285 Tyr Met Lys Arg Ser Ser Trp Ser Thr Leu Thr Val Ser Gln Ala Lys 290 295 300 Glu Ala Tyr Arg Lys Ser Ser Leu Asn Leu Asp Lys Pro Leu Val His 305 310 315 320 Pro Glu Ile Lys Pro Ser Leu Gln Pro Cys His Tyr Leu Gln Val Pro 325 330 335 Gln Asp Asp Trp Gly Ala Tyr Pro Thr Gly Gly Lys Glu Glu Glu Ile 340 345 350 Pro Cys Arg Arg Met Arg Ser Gly Ser Tyr Ile Lys Ala Met Gly Asp 355 360 365 Glu Glu Ser Gly Glu Ser Asp Ser Ser Pro Lys Thr Ser Pro Thr Val 370 375 380 Ala Leu Arg Pro Glu Pro Leu Leu Lys Ser Ile Ile Gln Arg Pro Leu 385 390 395 400 Gly Asp His Gln Thr Gln Ser Tyr Leu Gln Ala Ala Thr Glu Val Pro 405 410 415 Val Gly His Ser Leu Asp Pro Ser Val Asn Tyr Asn Ser Pro Lys Phe 420 425 430 Arg Ser Arg Asn Gln Ser Tyr Met Arg Ala Val Ser Thr Leu Ser Gln 435 440 445 Ala Ser Cys Val Ser Gln Met Ser Glu Ala Glu Val Asn Gly Gln Phe 450 455 460 Glu Ser Val Cys Glu Ser Val Phe Ser Glu Val Glu Ser Gln Ala Met 465 470 475 480 Asp Ala Leu Asp Leu Pro Gly Cys Phe Arg Thr Arg Ser His Ser Tyr 485 490 495 Leu Arg Ala Ile Gln Ala Gly Tyr Ser Gln Asp Asp Glu Cys Ile Pro 500 505 510 Val Met Thr Pro Ser Asn Met Thr Ser Thr Ile Arg Ser Thr Ala Ala 515 520 525 Val Ser Tyr Thr Asn Tyr Lys Lys Thr Pro Pro Pro Val Pro Pro Arg 530 535 540 Thr Thr Ser Lys Pro Leu Ile Ser Val Thr Ala Gln Ser Ser Thr Glu 545 550 555 560 Ser Thr Gln Asp Ala Tyr Gln Asp Ser Arg Ala Gln Arg Met Ser Pro 565 570 575 Trp Pro Gln Asp Ser Arg Gly Gly Leu Tyr Asn Ser Met Asp Ser Leu 580 585 590 Asp Ser Asn Lys Ala Met Asn Leu Ala Leu Glu Ser Ala Ala Ala Gln 595 600 605 Arg His Ala Ala Asp Thr Gln Ser Ser Ser Thr Arg Ser Ile Asp Lys 610 615 620 Ala Val Leu Val Ser Lys Ala Glu Glu Leu Leu Lys Ser Arg Cys Ser 625 630 635 640 Ser Ile Gly Val Gln Asp Ser Glu Phe Pro Asp His Gln Pro Tyr Pro 645 650 655 Arg Ser Asp Val Glu Thr Ala Thr Asp Ser Asp Thr Glu Ser Arg Gly 660 665 670 Leu Arg Glu Tyr His Ser Val Gly Val Gln Val Glu Asp Glu Lys Arg 675 680 685 His Gly Arg Phe Lys Arg Ser Asn Ser Val Thr Ala Ala Val Gln Ala 690 695 700 Asp Leu Glu Leu Glu Gly Phe Pro Gly His Val Ser Met Glu Asp Lys 705 710 715 720 Gly Leu Gln Phe Gly Ser Ser Phe Gln Arg His Ser Glu Pro Ser Thr 725 730 735 Pro Thr Gln Tyr Gly Ala Leu Arg Thr Val Arg Thr Gln Gly Leu Phe 740 745 750 Ser Tyr Arg Glu Asp Tyr Arg Thr Gln Val Asp Thr Ser Thr Leu Pro 755 760 765 Pro Pro Asp Pro Trp Leu Glu Pro Ser Leu Asp Thr Val Glu Thr Gly 770 775 780 Arg Met Ser Pro Cys Arg Arg Asp Gly Ser Trp Phe Leu Lys Leu Leu 785 790 795 800 His Thr Glu Thr Lys Lys Met Glu Gly Trp Cys Lys Glu Met Glu Arg 805 810 815 Glu Ala Glu Glu Asn Asp Leu Ser Glu Glu Ile Leu Gly Lys Ile Arg 820 825 830 Ser Ala Val Gly Ser Ala Gln Leu Leu Met Ser Gln Lys Phe Gln Gln 835 840 845 Phe Tyr Trp Leu Cys Gln Gln Asn Met Asp Pro Ser Ala Met Pro Arg 850 855 860 Pro Thr Ser Gln Asp Leu Ala Gly Tyr Trp Asp Met Leu Gln Leu Ser 865 870 875 880 Val Glu Asp Val Ser Met Lys Phe Asp Glu Leu His Gln Leu Lys Leu 885 890 895 Asn Asp Trp Lys Ile Met Glu Ser Pro Glu Arg Lys Glu Glu Arg Lys 900 905 910 Ile Pro Pro Pro Ile Pro Lys Lys Pro Pro Lys Gly Lys Phe Pro Ile 915 920 925 Thr Arg Glu Lys Ser Leu Asp Leu Pro Asp Arg Gln Arg Gln Glu Ala 930 935 940 Arg Arg Arg Leu Met Ala Ala Lys Arg Ala Ala Ser Phe Arg Gln Asn 945 950 955 960 Ser Ala Thr Glu Arg Ala Asp Ser Ile Glu Ile Tyr Ile Pro Glu Ala 965 970 975 Gln Thr Arg Leu

【図面の簡単な説明】

【図１】様々な細胞間結合におけるＭＡＧＵＫｓの作用
を例示した模式図である。

【図２】この発明のＳＡＰＡＰｓとＰＳＤ-95/ＳＡＰ90
とのin vitroにおける結合を示したBIAcoreシステムに
よる分析結果である。

【図３】Ａ、Ｂは、ＣＯＳ細胞におけるＳＡＰＡＰｓの
発現を示すウエスタンブロット分析の結果である。

【図４】ラットの各組織におけるＳＡＰＡＰｓの発現を
示すノーザンブロット分析（Ａ、Ｂ）およびウエスタン
ブロット分析（Ｃ）の結果である。

【図５】ニューロンにおけるＳＡＰＡＰｓの局在を示す
ウエスタンブロット分析の結果である。

フロントページの続き (72)発明者 竹内 勝一 兵庫県神戸市西区大津和１−１−８ ハイ ツ大津和511号

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号１のアミノ酸配列を有する蛋白
   質ＳＡＰＡＰ１。
2. 【請求項２】 配列番号１と実質的に同一のアミノ酸配
   列を有する動物性蛋白質。
3. 【請求項３】 配列番号１のアミノ酸配列または配列番
   号１と実質的に同一のアミノ酸配列をコードするｃＤＮ
   Ａ配列。
4. 【請求項４】 請求項３のｃＤＮＡ配列またはその一部
   配列がハイブリダイズするゲノムＤＮＡ配列。