JPH10168009A

JPH10168009A - ビナフタレン誘導体

Info

Publication number: JPH10168009A
Application number: JP8330690A
Authority: JP
Inventors: Mina Kanda; 三奈神田; Megumi Furui; 恵古井; Yuji Abe; 祐司阿部; Mayumi Shimada; 真弓島田
Original assignee: Mitsubishi Chemical Corp
Current assignee: Mitsubishi Chemical Corp
Priority date: 1996-12-11
Filing date: 1996-12-11
Publication date: 1998-06-23

Abstract

(57)【要約】【課題】ヘリコバクター・ピロリに対して抗菌活性を
有する新しい薬剤ならびに新しいセリンプロテアーゼ阻
害剤の提供。【解決手段】下記一般式（Ｉ）【化１】Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴：ＨまたはＣ₁〜Ｃ₃アルキル
基で表されるビナフタレン誘導体、その塩、それらの水
和物またはそれらの溶媒和物。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は新規なビナフタレン
誘導体に関し、より詳細には、抗ヘリコバクターピロリ
剤、セリンプロテアーゼ阻害剤等として有用なビナフタ
レン誘導体に関する。

【０００２】

【従来の技術および発明が解決しようとする課題】ヘリ
コバクター・ピロリは、近年、人の胃粘膜より分離され
たグリム陰性の微好気性細菌であり、消化管における潰
瘍の形成および再発との関連性、胃癌との関連性等が示
唆されている病源細菌である。これまで、消化性潰瘍の
治療には、Ｈ₂ブロッカーやプロトンポンプインヒビタ
ーなどの作用を有する薬剤が用いられてきたが、上述の
ヘリコバクターピロリが発症に関連していると示唆され
ており、アモキシシリン、クラリスロマイシンなどの抗
菌薬が併用されている。

【０００３】しかしながら、除菌効果が完全でない、あ
るいは耐性菌が出現しやすいといった問題点があり、ヘ
リコバクター・ピロリに対して抗菌活性を有する新しい
薬剤の開発が望まれている。また、カテプシンを代表と
するセリンプロテアーゼは、生体内で各種の疾患に関っ
ており、その阻害剤は、抗アレルギーなどを用途とする
薬剤として応用が可能である。従来より知られているセ
リンプロテアーゼ阻害剤は、天然物としては、血漿中の
α１−アンチキモトリプシンや微生物由来のキモスタチ
ン、非天然物としては、ジイソプロピルフルオロホスフ
ェートやα−トルエンスルホニルフルオライドなどがあ
る。しかし、いずれも阻害活性および特異性において満
足のいくものではない。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、微生物が
抗生物質などの生理活性物質を生産することに着目し、
微生物代謝産物中にヘリコバクター・ピロリに対して抗
菌活性を示す物質を探索した結果、キートミウム属微生
物の培養物中より、新規な構造を有する１，１′，８，
８′−テトラヒドロキシ−２，２′−ビナフタレンを見
出した。また、抗菌力をさらに強めることを目的とし、
上記化合物をリードとして誘導体化を行った結果、より
抗菌力の強い新規なビナフタレン誘導体を得ることがで
きた。さらにビナフタレン誘導体の生理活性を詳細に調
べたところ、カテプシン、キモトリプシンなどのセリン
プロテアーゼの酵素活性を阻害することがわかった。本
発明は、これらの知見に基いて完成されたものである。
即ち、本発明によれば、下記一般式（Ｉ）

【０００５】

【化２】

【０００６】（式中、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴はそ
れぞれ独立して水素原子またはＣ₁〜Ｃ₃のアルキル基
を示す。）で表されるビナフタレン誘導体、その塩、そ
れらの水和物またはそれらの溶媒和物が提供される。こ
の発明の好ましい態様によれば、式（Ｉ）中、Ｒ¹、Ｒ
²、Ｒ³およびＲ⁴がそれぞれ独立して水素原子または
メチル基である上記化合物；Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ ³およびＲ
⁴が水素原子である上記化合物；Ｒ¹およびＲ³が水素
原子であり、Ｒ²およびＲ⁴がメチル基である上記化合
物；Ｒ¹およびＲ⁴が水素原子でありＲ²およびＲ³が
メチル基である上記化合物；Ｒ¹、Ｒ³およびＲ⁴がメ
チル基であり、Ｒ²が水素原子である上記化合物；並び
にＲ¹、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴がメチル基である上記化
合物が提供される。

【０００７】また、本発明の別の態様によれば、上記化
合物よりなる医薬が提供される。この発明の好ましい態
様によれば、ヘリコバクターピロリ剤である上記医薬、
およびセリンプロテアーゼ阻害剤である上記医薬が提供
される。さらに、本発明の別の態様により、キートミウ
ム属に属し、１，１′，８，８′−テトラヒドロキシ−
２，２′−ビナフタレンを生産する能力を有する微生物
を培地で培養し、培養物から該化合物を採取することを
特徴とする１，１′，８，８′−テトラヒドロキシ−
２，２′−ビナフタレンの製造方法が提供される。この
発明の好ましい態様によれば、微生物がキートミウム・
ブラジリエンシスＰ５７８である上記製造方法が提供さ
れる。

【０００８】

【発明の実施の形態】本発明により提供される上記一般
式（Ｉ）で表される化合物において、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³
およびＲ⁴の定義中のＣ₁〜Ｃ₃のアルキル基として
は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル基が
挙げられ、これらの中でメチル基が好ましい。上記一般
式（Ｉ）で表される化合物のうち、好ましい化合物とし
て、Ｒ¹、Ｒ ²、Ｒ³およびＲ⁴がそれぞれ独立して水
素原子またはメチル基である化合物が挙げられ、特に好
ましい化合物として（１）Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴
が水素原子である化合物、（２）Ｒ¹およびＲ³が水素
原子であり、Ｒ²およびＲ⁴がメチル基である化合物、
（３）Ｒ¹およびＲ⁴が水素原子であり、Ｒ²およびＲ
³がメチル基である化合物、（４）Ｒ¹、Ｒ³およびＲ
⁴がメチル基であり、Ｒ ²が水素原子である化合物、
（５）Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴がメチル基である化
合物等が挙げられる。

【０００９】上記一般式（Ｉ）で表される本発明化合物
が形成しうる塩としては、例えば塩酸塩、臭化水素酸
塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩等の無
機酸塩、コハク酸塩、シュウ酸塩、フマル酸塩、マレイ
ン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、グリ
コール酸塩、メタンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸
塩等の有機酸塩等をあげることができる。また、上記一
般式（Ｉ）で表されるビナフタレン誘導体およびその塩
は任意の水和物または溶媒和物を形成することもでき
る。

【００１０】本発明の化合物は、それ自体既知の通常用
いられる方法によって化学合成することもできるが、通
常、上記式（Ｉ）中、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴が水
素原子である化合物、すなわち１，１′，８，８′−テ
トラヒドロキシ−２，２′−ビナフタレン（以下これを
「化合物Ｉ−１」と称することがある）を微生物により
生成せしめ、その誘導体化を行うことにより製造するこ
とができる。

【００１１】化合物Ｉ−１の製造に用いうる微生物とし
ては、キートミウム（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ）属に属
し、化合物Ｉ−１を生成し得る能力を有するものであれ
ば、いかなるものであっても良いが、例えばキートミウ
ム・ブラシリエンシス（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍｂｒａ
ｓｉｌｉｅｎｓｅ）Ｐ５７８等が挙げられる。キートミ
ウム・ブラシリエンシスＰ５７８は本発明者らにより土
壌から新たに分離された微生物であり、工業技術院生命
工学技術研究所にＦＥＲＭＰ−１５９６６として寄託
されている。キートミウム・ブラシリエンシスＰ５７８
の菌学的性状は以下の通りである。

【００１２】１．形態学的特徴コロニーはＬＣＡ培地上、２７℃、１週間培養で直径
４．５ｃｍに至る。コロニーは薄く広がり、はじめ無
色、のちに子実体の形成に伴ない暗い黄茶色を呈する。
栄養菌糸は幅３．１〜３．８μｍ、分枝し、隔壁を有
し、無色である。子実体（子のう殻）は培地表面上に多
数形成される。子のう殻をおおう頂毛は基部で波状、先
端部でラセン状に４〜７回まで巻き、隔壁を有し、粗
面、幅３〜４μｍ、オリーブ色、先端は丸くなる。子の
う殻側毛は真生または多り；波状、隔壁を有す、わずか
に粗面、幅３μｍ、オリーブ色、先端は丸くなる。子の
うは円筒形、８胞子性、長さ２８．０〜４０．６μｍ、
幅６．３〜７．５μｍ。子のう胞子は子のう内に一列に
配列する、幅広い卵形、６．６〜７．８×５．３〜６．
９μｍ、１細胞、平滑、淡いオリーブ褐色を呈する。一
方の極はやや細まってとがり発芽孔を形成する。アナモ
ルフステージは観察されない。

【００１３】２．各種培地上における性状（イ）ジャガイモ・ブドウ糖寒天培地（ＰＤＡ）上、２
７℃、２週間培養コロニーはビロード状、灰味がかった黄茶色を呈する。
裏面は茶灰色（砂色）を呈する。栄養菌糸は幅３．１〜
３．８μｍ、隔壁を有し、分枝し、無色〜淡褐色であ
る。培地表面上に多数の子実体を形成する。アナモルフ
の形成は観察されない。（ロ）麦芽寒天培地（ＭＡ）上、２７℃、２週間培養コロニーはビロード状、暗い黄茶色を呈する。裏面は茶
灰色（砂色）を呈する。栄養菌糸は幅２．８〜３．８μ
ｍ、隔壁を有し、分枝し、無色〜淡褐色である。培地表
面上に多数の子実体を形成する。アナモルフの形成は観
察されない。

【００１４】３．生理的性状（イ）最適成育範囲最適ｐＨ：４〜７（ＬＣＡ液体培地中、１０日間培養）最適温度：３７℃（ＰＤＡ寒天培地上、１０日間培養）（ロ）成育の範囲ｐＨ：４〜９（ＬＣＡ液体培地中、１０日間培養）温度：２０〜４０℃（ＤＡ寒天培地上、１０日間培養）

【００１５】４．分類学的考察本菌株（Ｐ５７８）は１）培地表面上に表在性の子嚢殻
を形成する、２）子嚢殻はラセン状に巻いた頂毛でおお
われる、３）子嚢は消失性で、子嚢胞子は子嚢殻腔内で
遊離し、粘塊となって放散する、４）子のう胞子は１細
胞性で、有色、発芽孔を生じる特徴を有することから、
Ｅ．ＭｉｉｌｌｅｒとＪ．Ａ．ｖｏｎＡｒｘ，Ｐｙｒｅ
ｎｏｍｙｃｅｔｅｓ：Ｍｅｌｉｏｌａｌｅｓ，Ｃｏｒｏ
ｎｏｐｈｏｒａｌｅｓ，Ｓｐｈａｅｒｉａｌｅｓｉｎ
ＴｈｅＦｕｎｇｉ，ｖｏｌ．４Ａ（ｅｄ，Ｇ．Ｃ．
Ａｉｎｓｗｏｒｔｈ等）、８７〜９８（１９７３）によ
って分類されている子のう菌亜門−核菌綱−タマカビ目
（Ｓｐｈａｅｒｉａｌｅｓ）−Ｍｅｌａｎｏｓｐｏｒａ
ｃｅａｅ科に帰属する。

【００１６】本菌株（Ｐ５７８）は１）子のう殻は開孔
型で、ラセン状に巻いた頂毛を有する、２）子のう胞子
は淡いオリーブ色を呈し、発芽孔を有する特徴を持つ。
これらの性状について、Ｅ．ＭｉｉｌｌｅｒとＪ．Ａ．
ｖｏｎＡｒｘ，Ｐｙｒｅｎｏｍｙｃｅｔｅｓ：Ｍｅｌ
ｉｏｌａｌｅｓ，Ｃｏｒｏｎｏｐｈｏｒａｌｅｓ，Ｓｐ
ｈａｅｒｉａｌｅｓｉｎＴｈｅＦｕｎｇｉ，ｖｏ
ｌ．４Ａ（ｅｄ，Ｇ．Ｃ．Ａｉｎｓｗｏｒｔｈ等）、９
８〜１３２（１９７３）の分類表によってＭｅｌａｎｏ
ｓｐｏｒａｃｅａｅ科の属の検索をしたところ、本菌株
（Ｐ５７８）はＣｈａｅｔｏｍｉｕｎ属に帰属すること
が判明した。

【００１７】さらに、Ｌ．Ｍ．ＡｍｅｓのＡＭｏｎｏ
ｇｒａｐｈｏｆｔｈｅＣｈａｅｔｏｍｉａｃｅａ
ｅ（ＢｉｂｌｉｏｔｈｅｃａＭｙｃｏｌｏｇｉｃａ
Ｂａｎｄ１７，６５ｐｐ１９６１）によればＣｈａ
ｅｔｏｍｉｕｎ属には８８種が記載されている。Ａｍｅ
ｓはこれらの種を頂毛の毛の先端（Ｔｅｒｍｉｎａｌｈ
ａｉｒｓ）の状態によって便宜的に１０群（Ｇｒｏｕｐ
Ｉ〜Ｘ）に大別している。本菌株の子嚢殻頂毛は一定に
ラセン状に巻いており、毛の先端は分枝することはない
ことからＧｒｏｕｐＸに含まれる種であることが判っ
た。ＧｒｏｕｐＸには７種（Ｃ．ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓ
ｅ，Ｃ．ｍｏｌｌｉｃｅｌｌｕｍ，Ｃ．ｃｏｎｔｒｏｒ
ｔｕｍ，Ｃ．ｃｒｉｓｐａｔｏｉｄｅｕｍ，Ｃ．ｍｉｃ
ｒｏｃｅｐｈａｌｕｍ，Ｃ．ｐｅｒｌｕｃｉｄｕｍ，
Ｃ．ｃｏｃｈｌｉｏｄｅｓ）が含まれる。本菌株は子嚢
殻頂毛が４〜７回ラセン状に巻いている。子嚢は円筒
形、子嚢胞子は子嚢内に単列し、幅広い卵形で一方の極
はやや細まってとがり発芽孔を形成する特徴を有する。
これらの性状について、ＧｒｏｕｐＸの種と比較したし
たところ、本菌株（Ｐ５７８）はＣｈａｅｔｏｍｉｕｎ
ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｅの性状によく合致した。従っ
て、本菌株の種はＣ．ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｅであると
同定し、本菌株をＣ．ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｅＰ５７
８と命名した。

【００１８】上記微生物を用いて、化合物Ｉ−１は次の
とおり製造することができる。本発明においては、前記
の菌を通常の微生物が利用しうる栄養物を含有する培地
で培養する。栄養源としてはグルコース、水あめ、デキ
ストリン、シュクロース、デンプン、糖蜜、動・植物油
等を使用できる。また窒素源として大豆粉、小麦胚芽、
コーンスティーブ・リカー、綿実粕、肉エキス、ペプト
ン、酵母エキス、硫酸アンモニウム、硝酸ソーダ、尿素
等を使用できる。

【００１９】その他必要に応じて、ナトリウム、カリウ
ム、カルシウム、マグネシウム、コバルト、塩素、リン
酸、硫酸及びその他のイオンを生成することのできる無
機塩類を添加することは有効である。また、菌の成育を
助け、化合物Ｉ−１の生産を促進するような有機及び無
機物を適当に添加することができる。

【００２０】本発明における培養法としては、好気的条
件下での培養法、特に米および寒天培地等を用いた固体
培養が最も適している。培養に適当な温度は、２０℃〜
３０℃であるが多くの場合、２７℃〜３０℃付近で培養
する。化合物Ｉ−１の生産は培地や培養条件により異な
るが寒天培地表面培養法では通常１０日〜２０日の間で
その蓄積が最高に達する。培養物中の化合物Ｉ−１の蓄
積量が最高になった時に培養を停止し、培養液から目的
物質を単離・精製する。

【００２１】化合物Ｉ−１は脂溶性物質であるので、培
養物から精製する際にはその特性を利用して行うことが
出来る。すなわち、酢酸エチル、クロロホルム等による
溶媒抽出法、シリカゲル、アルミナ、オクタデシルシリ
カゲル、ダイヤイオンＨＰ−２０［三菱化学（株）製］
等の合成吸着剤、またはセファデックスＬＨ−２０（フ
ァフマシア社製）等のゲル濾過剤等によるカラムクロマ
トグラフィー、さらにシリカゲル等を担体とした分取ク
ロマトグラフィー、場合によっては各種有機溶媒または
水による再結晶等が有効である。

【００２２】上記一般式（Ｉ）で表される化合物のう
ち、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴のいずれかがＣ₁〜Ｃ
₃のアルキル基である化合物（以下これを「アルキル化
体」と略称する）は、上記の方法にて得られた化合物Ｉ
−１を常法によりアルキル化することにより得ることが
できる。例えば化合物Ｉ−１のフェノキシドにヨウ化メ
チル等のハロゲン化メチルを作用させることによる合成
法、もしくは硫酸ジメチルを用いる合成法、あるいはジ
アゾメタン、またトリメチルシリルジアゾメタン等のジ
アゾ化合物を用いる合成法等によってアルキル化体を得
ることが出来るが、その中でもジアゾ化合物を用いる方
法が望ましい。さらに好ましくはメタノール等のアルコ
ール存在下、化合物Ｉ−１にトリメチルシリルジアゾメ
タンを作用させる事により、アルキル化体を得ることが
出来る。この反応液中にジイソプロピルエチルアミン等
の塩基性触媒を加えることは反応を促進する上で有効で
ある。反応溶媒としてはメタノールのみでも行うことが
出来るが、化合物Ｉ−１の溶解性を増すためジオキサン
等の有機溶媒を添加することも有効である。

【００２３】反応に用いる化合物Ｉ−１は培養物そのま
までも、培養物の粗精製物もしくは単離精製した化合物
Ｉ−１のいずれであってもよい。アルキル化体は脂溶性
物質であるので反応物中から単離精製する際にはその特
性を利用し、前記と同様な方法を用いることが出来る。
本発明の上記一般式（Ｉ）で表される化合物は、抗ヘリ
コバクターピロリ活性、キモトリプシンおよびカテプシ
ン等のセリンプロテアーゼ阻害活性等を有しており、抗
ヘリコバクターピロリ剤、セリンプロテアーゼ阻害剤、
抗アレルギー剤等の医薬として使用することができる。

【００２４】本発明の医薬としては、有効成分である上
記化合物それ自体を用いてもよいが、汎用の製剤用添加
物を用いて上記有効成分を含む医薬組成物を製造して用
いることが好ましい。このような医薬組成物としては、
錠剤、カプセル剤、細粒剤、丸剤、トローチ剤、液剤、
注射剤、坐剤、軟膏剤、貼付剤等を挙げることができ、
これらは経口的（舌下投与を含む）または非経口的に投
与される。

【００２５】経口用の医薬組成物は、混合、充填または
打錠等の従来汎用の方法により製造することができる。
また反復配合操作を用いて、多量の充填剤を使用した医
薬組成物中に有効成分を分布させてもよい。例えば、経
口投与に用いられる錠剤またはカプセル剤は単位投与物
として提供されることが好ましく、結合剤、充填剤、希
釈剤、打錠剤、滑沢剤、崩壊剤、着色剤、香味剤および
湿潤剤等の通常使用される製剤用担体を含有していても
よい。錠剤は、当業界において周知の方法に従って、例
えばコーティング剤を用いてコーティング錠としてもよ
い。

【００２６】好ましい充填剤としては、セルロース、マ
ンニトール、ラクトース等を挙げることができ、崩壊剤
であるでん粉、ポリビニルピロリドン、ナトリウムでん
粉グリコラート等のでん粉誘導体等や、滑沢剤であるラ
ウリル硫酸ナトリウム等を製剤用添加物として用いるこ
とができる。経口用の液剤形態の医薬組成物は、例え
ば、水性または油性懸濁液、溶液、エマルジョン、シロ
ップ剤もしくはエリキシル剤等の医薬組成物、あるいは
使用前に水または適当な媒体により再溶解され得る乾燥
医薬組成物として提供される。

【００２７】このような液剤には、通常の添加剤、例え
ばソルビトール、シロップ、メチルセルロース、ゼラチ
ン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセ
ルロース、ステアリン酸アルミニウムゲルまたは水素化
食用脂肪のような沈殿防止剤、レシチン、ソルビタンモ
ノオレエート、アラビアゴムのような乳化剤、アーモン
ド油、精留ココナッツ油、グリセリンエステル等の油状
エステル、プロピレングリコール、エチルアルコールの
ような（食用油も包含し得る）非水性媒体、ｐ−ヒドロ
キシ安息香酸のメチルエステル、エチルエステル、もし
くはプロピルエステル、またはソルビン酸のような保存
剤、および必要に応じて通常の香味剤または着色剤など
を配合することができる。

【００２８】非経口投与に適する医薬組成物としては、
上記の有効成分および滅菌媒体を含有する液体状の医薬
組成物あるいは座薬、貼付剤などの形態の医薬組成物を
製造することができる。例えば、媒体および濃度に応じ
て有効成分を懸濁、溶解または乳化させることができ、
例えば、非経口用の溶液状組成物は、好ましくは、有効
成分を媒体に溶解させて滅菌ろ過し、次に適当なバイア
ルまたはアンプルに充填して密封することにより製造す
ることができる。安定性を高めるために、水溶液状の組
成物を調製した後、凍結乾燥により水分を除去してもよ
い。

【００２９】非経口用の懸濁剤は、上記の非経口用の溶
液状組成物と実質的に同様の方法で製造されるが、例え
ば、有効成分を媒体に懸濁し、エチレンオキサイドなど
を用いて滅菌し、更に滅菌媒体中に懸濁させることによ
って製造することができる。懸濁剤などの製造にあた
り、有効成分が製剤中で均一に分布するように、必要に
応じて界面活性剤や湿潤剤等を添加してもよい。その他
の形態の医薬組成物も当業者に周知の方法で製造でき、
本発明の医薬の一態様である医薬組成物の形態および製
造方法は上記のものに限定されることはない。

【００３０】本発明の医薬は、ヘリコバクターピロリ感
染、アレルギー性疾患の予防及び／又は治療に有用であ
る。本発明の予防・治療剤の投与量は、患者の年齢、健
康状態、体重、膵臓疾患の重篤度、同時に行う治療・処
置の種類や頻度、所望の効果の性質等により適宜決定す
ればよい。一般的には、成人１回あたりの投与量を、有
効成分量として、１０〜３０００ｍｇ、好ましくは５０
〜１０００ｍｇとして、１日あたり１回ないしは数回投
与すればよい。

【００３１】

【実施例】以下、実施例により本発明をより具体的に説
明するが、本発明は以下の実施例によって限定されるも
のではない。

【００３２】実施例１米６０ｇと水道水２０ｍｌを含む５００ｍｌ三角フラス
コを２０本用意し、１２１℃で２０分間オートクレーブ
滅菌した。これにキートミウム・ブラジリエンシスＰ５
７８（ＦＥＲＭＰ−１５９６６）を３白金ずつ植菌
し、２７℃で１４日間静置培養した。得られた菌体を含
む固形培養物に、フラスコ１体あたり１６０ｍｌの５０
％アセトン水を加え、一昼夜放置後、菌体および培地固
形分を濾別して抽出液約２．３リットルを得た。

【００３３】得られたアセトン水溶液を減圧下１．３リ
ットルまで濃縮した。これを酢酸エチル１．３リットル
で抽出を行い、酢酸エチル層について減圧下酢酸エチル
を留去して０．３５ｇの残渣を得た。これをオクタデシ
ルシリカゲルを用いた逆層分配クロマトグラフィーに付
した。この残渣をＭＣｌＧＥＬＯＤＳ１ＭＹ１
ｇ［三菱化学（株）製］にまぶし、減圧乾燥後、ＭＣｌ
ＧＥＬＯＤＳ１ＭＹ１９ｇを充填して、水で平
衡化したカラムにのせた。カラムを水１００ｍｌ、アセ
トニトリル−水混液（１：４）１００ｍｌ、さらにアセ
トニトリル−水混液（２：３）１００ｍｌで洗浄した
後、アセトニトリル−水混液（３：２）１００ｍｌで溶
出した。溶出液を減圧下溶媒を留去し、１１８．１ｍｇ
の画分１を得た。この画分１をＹＭＣＰｏｌｙｍｅｒ
Ｃ１８カラム（３０×３００ｍｍ）［（株）ワイエム
シイ製］を装着した高速液体クロマトグラフィーにより
精製した。画分１を０．７ｍｌのメタノールに溶解し不
溶物を濾過した後、０．２％トリフルオロ酢酸を含むメ
タノールで平衡化した分取高速クロマトグラフィーに付
した。０．２％トリフルオロ酢酸を含むメタノール４２
３ｍｌで洗浄した後、０．２％トリフルオロ酢酸を含む
メタノール７２ｍｌで溶出し、溶出液を減圧下溶媒を留
去して２７．２ｍｇの画分２を得た。画分２をメタノー
ルでケン洗して化合物の粉末５．６ｍｇを得た。本化合
物の物理的性状は、下記の通りである。

【００３４】１）外観：微褐色粉末２）分子量：３１８［ＳＩＭＳｐｏｓｉｔｉｖｅ（Ｍ
＋Ｈ）⁺］３）赤外部吸収スペクトル：ＫＢｒ法 ν（ｃｍ−１）：３１２９、１６０９、１５７４、１４
００、１３６４、１３１４、１０３２、８２２４）水素核磁気共鳴スペクトル：重アセトニトリル中 δｐｐｍ：７．６０（４Ｈ，ｍ）、７．５０（４Ｈ，
ｍ）、７．００（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）５）炭素核核磁気共鳴スペクトル：重アセトニトリル中 δｐｐｍ：１５５．２、１５１．０、１３７．４、１３
０．７、１２８．２、１２１．５、１２０．５、１２
０．２、１１６．１、１１０．６上記物理化学的性状等から該化合物の化学構造は、下記
式（Ｉ−１）であることを確認した。

【００３５】

【化３】

【００３６】実施例２１９．４ｍｇの実施例１で得られた化合物を１０ｍｌの
メタノールに溶解し、ジイソプロピルエチルアミン８
５．０μｌを加えた後、トリメチルシリルジアゾメタン
の約１０％ヘキサン溶液５５７ｍｇを加え、室温で１２
時間反応させた。この反応液にさらにトリメチルシリル
ジアゾメタンの約１０％ヘキサン溶液５５７ｍｇを加え
室温で１時間反応した。さらに同様に、反応液にトリメ
チルシリルジアゾメタン約１０％ヘキサン溶液５５７ｍ
ｇを追加して、室温で１時間反応する操作を３回繰り返
した。この反応液を減圧下留去し、残渣をシリカゲルカ
ラムクロマトグラフィーに付した。５ｇのシリカゲルを
ｎ−ヘキサンでカラムに充填し、残渣をｎ−ヘキサンに
溶解しカラムにのせた。ｎ−ヘキサン１５ｍｌ、酢酸エ
チル−ｎ−ヘキサン混液（１：９）２０ｍｌで洗浄した
後、酢酸エチル−ｎ−ヘキサン混液（１：９）１０ｍｌ
で溶出し、減圧下濃縮乾固し２．４ｍｇの化合物を得
た。本化合物の物理的性状は、下記の通りである。

【００３７】１）外観：白色粉末２）分子量：３４６［ＡＰＣＩｐｏｓｉｔｉｖｅ（Ｍ
＋Ｈ）⁺］３）水素核核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中 δｐｐｍ：９．７５（２Ｈ，ｓ）、７．６７（２Ｈ，
ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ）、７．５３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．
２Ｈｚ）、７．３９（４Ｈ，ｍ）、６．９６（２Ｈ，
ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）、３．５９（６Ｈ，ｓ）４）炭素核核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中 δｐｐｍ：１５４．５、１５３．５、１３６．５、１２
９．１、１２８．２、１２５．１、１２４．７、１１
９．１、１１７．４、１１１．１、６１．９上記物理化学的性状等から該化合物の化学構造は、下記
式（Ｉ−２）であることを確認した。

【００３８】

【化４】

【００３９】実施例３実施例２のカラムを、さらに酢酸エチル−ｎ−ヘキサン
混液（１：９）１０ｍｌで洗浄した後、酢酸エチル−ｎ
−ヘキサン混液（１：９）１５ｍｌで溶出し、溶出液を
減圧下濃縮乾固し、１０．１ｍｇの化合物を得た。本化
合物の物理的性状は、下記の通りである。

【００４０】１）外観：白色粉末２）分子量：３４６［ＡＰＣＩｐｏｓｉｔｉｖｅ（Ｍ
＋Ｈ）⁺］３）水素核核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中 δｐｐｍ：９．８４（１Ｈ，ｓ）、９．７５（１Ｈ，
ｓ）、７．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ）、７．４
８（３Ｈ，ｍ）、７．３６（４Ｈ，ｍ）、６．９０（１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．８，２．６Ｈｚ）、６．８４（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ）、４．０７（３Ｈ，ｓ）、
３．５８（３Ｈ，ｓ）４）炭素核核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中 δｐｐｍ：１５６．４、１５４．３、１５３．７、１５
１．３、１３６．５、１３６．２、１３０．３、１３
０．１、１２７．４、１２６．１、１２５．９、１２
４．０、１２１．９、１１９．４、１１９．０、１１
８．９、１１７．５、１１５．２、１１０．４、１０
４．５、６２．０、５６．２上記物理化学的性状等から、該化合物の化学構造は、下
記式（Ｉ−３）であることを確認した。

【００４１】

【化５】

【００４２】実施例４実施例１で得られた化合物４．７ｍｇを２ｍｌのメタノ
ールに溶解し、ジイソプロピルエチルアミン１０３μｌ
を加えた後、トリメチルシリルジアゾメタンの約１０％
ヘキサン溶液６６３ｍｇを加え、室温で１６時間反応さ
せた。この反応液にさらにジイソプロピルエチルアミン
１０３μｌとトリメチルシリルジアゾメタンの約１０％
ヘキサン溶液６６３ｍｇを加え、室温で８時間反応し
た。この反応液を減圧下留去し、残渣をシリカゲルカラ
ムクロマトグラフィーに付した。５ｇのシリカゲルをｎ
−ヘキサンでカラムに充填し、残渣をｎ−ヘキサンに溶
解しカラムにのせた。ｎ−ヘキサン１０ｍｌ、酢酸エチ
ル−ｎ−ヘキサン混液（１：９）６０ｍｌで洗浄した
後、酢酸エチル−ｎ−ヘキサン混液（１：９）２０ｍｌ
で溶出し、減圧下濃縮乾固し２．３ｍｇの化合物を得
た。本化合物の物理的性状は、下記の通りである。

【００４３】１）外観：白色粉末２）水素核核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中 δｐｐｍ：７．６４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、
７．６０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ）、７．４７（２
Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ）、７．４０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝
７．９Ｈｚ）、６．９０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈ
ｚ）、４．０２（６Ｈ，ｓ）、３．５７（６Ｈ，ｓ）３）炭素核核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中 δｐｐｍ：１５６．４６、１５３．７１、１３７．１
０、１３０．５９、１２９．３６、１２６．１２、１２
３．３７、１２０．８８、１２０．５５、１０５．８
５、６１．５５、５６．１５上記物理化学的性状等から該化合物の化学構造は、下記
式（Ｉ−４）であることを確認した。

【００４４】

【化６】

【００４５】実施例５実施例４のカラムを、さらに酢酸エチル−ｎ−ヘキサン
混液（１：９）３５ｍｌで溶出し、溶出液を減圧下濃縮
乾固し、２．４ｍｇの画分３を得た。この画分２をＹＭ
ＣＰｏｌｙｍｅｒＣ１８カラム（３０×３００ｍ
ｍ）を装着した高速液体クロマトグラフィーにより精製
した。画分３を０．８ｍｌのメタノール−クロロホルム
混液（１：１）に溶解し、０．２％トリフルオロ酢酸を
含むメタノールで平衡化した分取高速クロマトグラフィ
ーに付した。０．２％トリフルオロ酢酸を含むメタノー
ル５９４ｍｌで洗浄した後、０．２％トリフルオロ酢酸
を含むメタノール４５ｍｌで溶出し、溶出液を減圧下溶
媒を留去して０．８ｍｇの化合物を得た。該化合物の物
理的性状は、下記の通りである。

【００４６】１）外観：白色粉末２）水素核核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中 δｐｐｍ：９．７（１Ｈ，ｓ）、７．６５（１Ｈ，ｄ，
Ｊ＝８．３Ｈｚ）、７．５（４Ｈ，ｍ）、７．４（３
Ｈ，ｍ）、６．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）、
６．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ）、４．０５（３
Ｈ，ｓ）、４．００（３Ｈ，ｓ）、３．５４（３Ｈ，
ｓ）３）炭素核核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中 δｐｐｍ：１５６．４０、１５６．３２、１５３．６
１、１５１．１５、１３７．０３、１３６．３０、１３
０．９４、１３０．１５、１２９．４４、１２６．０
２、１２５．６３、１２３．８８、１２１．８８、１２
０．８９、１２０．４４、１１８．２６、１１５．１
０、１０５．７６、１０４．１９、６１．８０、５６．
１０、５５．９７上記物理化学的性状等から該化合物の化学構造は、下記
式（Ｉ−５）であることを確認した。

【００４７】

【化７】

【００４８】試験例１抗ヘリコバクター・ピロリ活性
の評価ヒトより分離されたヘリコバクター・ピロリ３１Ａ株
（都立衛生研究所微生物部細菌第一研究科より入手）
を、牛胎児血清１０％を含むブレインハートインフュー
ジョン培地（Ｄｉｆｃｏ社製）５ｍｌを試験管に分注
し、３１Ａ株を接種、微好気条件下（Ｏ₂：５％，ＣＯ
₂：１０％，Ｎ₂：８５％）、３７℃で４８時間振とう
培養した。

【００４９】上記培養菌液を牛胎児血清１０％を含むブ
レインハートインフュージョン培地に５％接種し、別途
実施例１〜３で得られた化合物Ｉ−１、Ｉ−２、Ｉ−３
をそれぞれ１０％ジメチルスルホキシドにて溶解して添
加した。微好気下、３７℃、４８時間振とう培養し、ヘ
リコバクター・ピロリの成育を調べ、全く成育のみられ
なかった薬剤濃度を調べた。

【００５０】その結果、ヘリコバクター・ピロリの成育
が認められなかった濃度は、化合物Ｉ−１：２５μｇ／
ｍｌ、化合物Ｉ−２：１２．５μｇ／ｍｌ、化合物Ｉ−
３：１２．５μｇ／ｍｌであった。よって、本発明化合
物は、ヘリコバクター・ピロリに対して抗菌活性を有す
ることがわかった。

【００５１】試験例２キモトリプシン阻害活性評価５０ｍＭ、ｐＨ８．３に調製したトリス塩酸水溶液に
０．２％トライトンＸ−１００、５％アセトニトリルを
添加し、緩衝液とした。酵素液は、牛膵臓由来のキモト
リプシン（和光純薬製）を、０．２ユニット／ｍｌにな
るよう蒸留水で調製した。基質溶液は、市販の発色合成
基質Ｓ−２５８６（第一化学薬品製）を２ｍＭの濃度に
なるよう蒸留水に溶解したものを用いた。

【００５２】上記、緩衝液と蒸留水、基質溶液をそれぞ
れ試験管に１００μｌ、２０μｌ、２０μｌずつ分注
し、別途ジメチルスルホキシドにて溶解し、１００μＭ
になるよう調製した実施例１の化合物Ｉ−１およびジメ
チルスルホキシドのみの試料を２０μＭ添加、撹拌し、
さらに酵素液４０μＭを添加、直後に分光光度計にて４
０５ｎｍにおける吸光度を測定した。３０分間室温に放
置後、酵素液添加３０分後の４０５ｎｍにおける吸光度
を測定し、添加直後の吸光度を引き、ジメチルスルホキ
シドを測定試料としたものを１００％として、酵素阻害
活性を算出したところ、化合物Ｉ−１１０μＭにおけ
る阻害率は７０％であった。

【００５３】試験例３カテプシン阻害活性評価５０ｍＭ、ｐＨ７．５に調製したトリス塩酸水溶液に
０．２％トライトンＸ−１００、５％アセトニトリルを
添加し、緩衝液とした。酵素液は、カテプシンＧ（和光
純薬製）を、１０ユニット／ｍｌになるよう蒸留水で調
製した。基質溶液は、市販の発色基質［Ｓｕｃｃｉｎｙ
ｌ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ｐＮＡ］（シグ
マ製）を、１ｍＭの濃度になるよう１％ジメチルスルホ
キシドに溶解し、調製した。

【００５４】上記、緩衝液と蒸留水、基質溶液をそれぞ
れ試験管に１００μｌ、２０μｌ、２０μｌずつ分注
し、別途ジメチルスルホキシドにて溶解し、１００μＭ
になるよう調製した実施例１の化合物Ｉ−１およびジメ
チルスルホキシドのみの試料を２０μＭ添加、撹拌し、
さらに酵素液４０μＭを添加、直後に分光光度計にて４
０５ｎｍにおける吸光度を測定した。３０分間室温に放
置後、酵素液添加３０分後の４０５ｎｍにおける吸光度
を測定し、添加直後の吸光度を引き、ジメチルスルホキ
シドを測定試料としたものを１００％として、酵素阻害
活性を算出したところ、化合物Ｉ−１１０μＭにおけ
る阻害率は４０％であった。

【００５５】試験例２および３に示すように、本発明化
合物は、キモトリプシン、カテプシン等のセリンプロテ
アーゼに対して低濃度で阻害活性を有しており、セリン
プロテアーゼ阻害剤としての応用が期待される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＣ１２Ｐ 7/22 Ｃ１２Ｐ 7/22 //(Ｃ１２Ｐ 7/22 Ｃ１２Ｒ 1:645） (72)発明者島田真弓神奈川県横浜市青葉区鴨志田町1000番地三菱化学株式会社横浜総合研究所内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】下記一般式（Ｉ）【化１】（式中、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴はそれぞれ独立し
て水素原子またはＣ₁〜Ｃ₃のアルキル基を示す。）で
表されるビナフタレン誘導体、その塩、それらの水和物
またはそれらの溶媒和物。
【請求項２】Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴がそれぞれ
独立して水素原子またはメチル基である請求項１記載の
化合物。
【請求項３】Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴が水素原子
である請求項１記載の化合物。
【請求項４】Ｒ¹およびＲ³が水素原子であり、Ｒ²
およびＲ⁴がメチル基である請求項１記載の化合物。
【請求項５】Ｒ¹およびＲ⁴が水素原子であり、Ｒ²
およびＲ³がメチル基である請求項１記載の化合物。
【請求項６】Ｒ¹、Ｒ³およびＲ⁴がメチル基であ
り、Ｒ²が水素原子である請求項１記載の化合物。
【請求項７】Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴がメチル基
でる請求項１記載の化合物。
【請求項８】請求項１ないし７のいずれかに記載の化
合物よりなる医薬。
【請求項９】抗ヘリコバクターピロリ剤である請求項
８記載の医薬。
【請求項１０】セリンプロテアーゼ阻害剤である請求
項８記載の医薬。
【請求項１１】キートミウム属に属し、１，１′，
８，８′−テトラヒドロキシ−２，２′−ビナフタレン
を生産する能力を有する微生物を培地で培養し、培養物
から該化合物を採取することを特徴とする１，１′，
８，８′−テトラヒドロキシ−２，２′−ビナフタレン
の製造方法。
【請求項１２】微生物がキートミウム・ブラシリエン
シスＰ５７８である請求項１１記載の製造方法。