JPH10147600A - 生理活性ペプチド及び癌転移抑制剤 - Google Patents
生理活性ペプチド及び癌転移抑制剤Info
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- JPH10147600A JPH10147600A JP9244260A JP24426097A JPH10147600A JP H10147600 A JPH10147600 A JP H10147600A JP 9244260 A JP9244260 A JP 9244260A JP 24426097 A JP24426097 A JP 24426097A JP H10147600 A JPH10147600 A JP H10147600A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 細胞接着阻害活性を有する新規なペプチドを
提供すること。 【解決手段】 本発明は、配列表の配列番号１３に記載
のアミノ酸配列を含み、かつ細胞接着阻害活性を有す
る、アミノ酸数が３０以下の新規な生理活性ペプチドで
ある。本発明のペプチドは、短いペプチドであり、それ
故、合成、取り扱い等が容易である。
提供すること。 【解決手段】 本発明は、配列表の配列番号１３に記載
のアミノ酸配列を含み、かつ細胞接着阻害活性を有す
る、アミノ酸数が３０以下の新規な生理活性ペプチドで
ある。本発明のペプチドは、短いペプチドであり、それ
故、合成、取り扱い等が容易である。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、細胞接着阻害活性
を有する新規なペプチドに関する。
を有する新規なペプチドに関する。
【０００２】
【従来の技術】癌の治療法に関してはこれまで数多くの
試みがなされており、いくつかの癌において著明な治療
効果が得られるようになってきた。しかしながら、癌の
転移を防止する治療法に関してはいまだ確立されていな
いのが現状である。
試みがなされており、いくつかの癌において著明な治療
効果が得られるようになってきた。しかしながら、癌の
転移を防止する治療法に関してはいまだ確立されていな
いのが現状である。
【０００３】癌と診断された場合の治療法としては、外
科的治療、放射線療法、化学療法が主要なものとして挙
げられる。患者が明らかな異常を訴えた場合、ほとんど
進行癌の状態となっていると考えられるのでその治療は
容易ではない。そのような状況をもたらすのは、一口に
癌の転移増殖に依るといっても過言ではない。患者の予
後はほとんどこの癌の転移の程度に依って支配されてい
る（Ｗｅｌｃｈ ｅｔａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｊ．Ｃａ
ｎｃｅｒ，４３，４４９，１９８９）。このような癌の
転移増殖が抑えられない限り、一度発生した癌を征圧す
ることは極めて困難である。例えば、胃癌が進行した状
況では、既にリンパ節や肝臓、肺、その他に転移してい
ることが少なくない。乳癌についても同様で、進行癌で
は近傍のリンパ節はもとより、骨髄や肺に転移している
という事実がある。特に、上皮性の癌の場合に予後を制
するのはリンパ節転移の程度である（塚越 茂、がん征
圧への化学、日本薬学会ファルマシアレビュー、Ｎｏ．
６）。
科的治療、放射線療法、化学療法が主要なものとして挙
げられる。患者が明らかな異常を訴えた場合、ほとんど
進行癌の状態となっていると考えられるのでその治療は
容易ではない。そのような状況をもたらすのは、一口に
癌の転移増殖に依るといっても過言ではない。患者の予
後はほとんどこの癌の転移の程度に依って支配されてい
る（Ｗｅｌｃｈ ｅｔａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｊ．Ｃａ
ｎｃｅｒ，４３，４４９，１９８９）。このような癌の
転移増殖が抑えられない限り、一度発生した癌を征圧す
ることは極めて困難である。例えば、胃癌が進行した状
況では、既にリンパ節や肝臓、肺、その他に転移してい
ることが少なくない。乳癌についても同様で、進行癌で
は近傍のリンパ節はもとより、骨髄や肺に転移している
という事実がある。特に、上皮性の癌の場合に予後を制
するのはリンパ節転移の程度である（塚越 茂、がん征
圧への化学、日本薬学会ファルマシアレビュー、Ｎｏ．
６）。
【０００４】以上のような理由から、癌転移の詳細なメ
カニズムを解明することで治療に応用しようとする試み
がこれまで数多くなされてきた。
カニズムを解明することで治療に応用しようとする試み
がこれまで数多くなされてきた。
【０００５】癌の転移は、癌細胞の原発巣からの離脱と
周辺組織への浸潤から、転移組織での増殖に至る複雑な
過程を経て成立している。また、これらの過程は癌細胞
側と宿主側の因子に影響される。前者において、原発巣
は、絶えざる遺伝子変化を伴い、増殖能、薬剤感受性、
免疫原性、形態などの異なった細胞形質を示す不均一な
細胞集団から構成されており、転移能、周辺組織への浸
潤能、転移性癌細胞からの自己増殖因子の産生などの要
因が関与している。宿主側の要因としては、血液中での
物理的あるいは解剖学的条件、免疫担当細胞による防御
機構、血管内皮細胞および血小板との接着相互作用、さ
らに転移周辺組織からの増殖因子の影響、などが考えら
れている。
周辺組織への浸潤から、転移組織での増殖に至る複雑な
過程を経て成立している。また、これらの過程は癌細胞
側と宿主側の因子に影響される。前者において、原発巣
は、絶えざる遺伝子変化を伴い、増殖能、薬剤感受性、
免疫原性、形態などの異なった細胞形質を示す不均一な
細胞集団から構成されており、転移能、周辺組織への浸
潤能、転移性癌細胞からの自己増殖因子の産生などの要
因が関与している。宿主側の要因としては、血液中での
物理的あるいは解剖学的条件、免疫担当細胞による防御
機構、血管内皮細胞および血小板との接着相互作用、さ
らに転移周辺組織からの増殖因子の影響、などが考えら
れている。
【０００６】癌転移形成の一連の過程のなかで、癌細胞
は宿主の正常細胞や癌細胞同士、あるいは細胞外マトリ
ックスを含む種々の生体成分の影響下で、癌細胞の転移
形質の発現と調節が決定されているものと考えられてい
る。癌細胞同士あるいは癌細胞と正常細胞との接着は、
細胞表面に発現されている細胞接着分子が介在してお
り、細胞接着分子としては、カドヘリン分子群（竹市雅
俊、組織構築の分子的基礎−細胞識別におけるカドヘリ
ンの役割−生化学、５９、１、１９８７）、免疫グロブ
リン分子群、及びセレクチン分子群（Ｓｐｒｉｎｇｅ
ｒ，Ｔ．Ａ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４６，４２５，１９９
０）などが知られている。一方、フィブロネクチン、ラ
ミニン、コラーゲンなどの糖蛋白質や、ヘパラン硫酸、
コンドロイチン硫酸などを結合したプロテオグリカンを
含む細胞外マトリックスと癌細胞の接着は、インテグリ
ン分子群を含む細胞表面上の接着分子などが関与してい
る。
は宿主の正常細胞や癌細胞同士、あるいは細胞外マトリ
ックスを含む種々の生体成分の影響下で、癌細胞の転移
形質の発現と調節が決定されているものと考えられてい
る。癌細胞同士あるいは癌細胞と正常細胞との接着は、
細胞表面に発現されている細胞接着分子が介在してお
り、細胞接着分子としては、カドヘリン分子群（竹市雅
俊、組織構築の分子的基礎−細胞識別におけるカドヘリ
ンの役割−生化学、５９、１、１９８７）、免疫グロブ
リン分子群、及びセレクチン分子群（Ｓｐｒｉｎｇｅ
ｒ，Ｔ．Ａ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４６，４２５，１９９
０）などが知られている。一方、フィブロネクチン、ラ
ミニン、コラーゲンなどの糖蛋白質や、ヘパラン硫酸、
コンドロイチン硫酸などを結合したプロテオグリカンを
含む細胞外マトリックスと癌細胞の接着は、インテグリ
ン分子群を含む細胞表面上の接着分子などが関与してい
る。
【０００７】最近、フィブロネクチンやラミニンなどの
細胞外マトリックス分子が癌の転移に深く関与している
ことが明らかにされた。細胞が腫瘍ウイルスや化学発癌
剤などにより悪性転換すると、細胞外マトリックス分
子、特にフィブロネクチンの合成や細胞外への蓄積が減
少すること（Ｙａｍａｄａ，Ｋ．Ｍ．ａｎｄ Ｏｌｄｅ
ｎ，Ｋ．，Ｎａｔｕｒｅ，２７５，１７９，１９７８）
や、インテグリン分子の発現量の減少、あるいはフィブ
ロネクチンへの接着性の低下が示されている（Ｐｌａｎ
ｔｅｆａｂｅｒ，Ｌ．Ｃ．ａｎｄ Ｈｙｎｅｓ，Ｒ．
Ｏ．，Ｃｅｌｌ，５６，２８１，１９８９）。また、フ
ィブロネクチンやラミニンは癌細胞の接着、移動能を促
進すること（ＭｃＣａｒｔｈｙ，Ｊ．Ｂ．，Ｊ．Ｃｅｌ
ｌ Ｂｉｏｌ．，９８，１４７４，１９８４）が報告さ
れている。
細胞外マトリックス分子が癌の転移に深く関与している
ことが明らかにされた。細胞が腫瘍ウイルスや化学発癌
剤などにより悪性転換すると、細胞外マトリックス分
子、特にフィブロネクチンの合成や細胞外への蓄積が減
少すること（Ｙａｍａｄａ，Ｋ．Ｍ．ａｎｄ Ｏｌｄｅ
ｎ，Ｋ．，Ｎａｔｕｒｅ，２７５，１７９，１９７８）
や、インテグリン分子の発現量の減少、あるいはフィブ
ロネクチンへの接着性の低下が示されている（Ｐｌａｎ
ｔｅｆａｂｅｒ，Ｌ．Ｃ．ａｎｄ Ｈｙｎｅｓ，Ｒ．
Ｏ．，Ｃｅｌｌ，５６，２８１，１９８９）。また、フ
ィブロネクチンやラミニンは癌細胞の接着、移動能を促
進すること（ＭｃＣａｒｔｈｙ，Ｊ．Ｂ．，Ｊ．Ｃｅｌ
ｌ Ｂｉｏｌ．，９８，１４７４，１９８４）が報告さ
れている。
【０００８】フィブロネクチンやラミニン分子はドメイ
ン構造をもち、分子内に多くの機能を分散させている。
生化学的あるいは遺伝子工学的手法により構造が明らか
にされるとともに、細胞接着部位の存在とそれに対する
レセプターも発見されている。フィブロネクチンの細胞
結合ドメイン内のＲＧＤ配列が細胞認識配列であり（Ｐ
ｉｅｒｓｃｈｂａｃｈｅｒ，Ｍ．Ｄ．，Ｎａｔｕｒｅ，
３０９，３０，１９８４）、多くの細胞接着関連分子中
にも存在、機能しており、その細胞受容体が、α５β１
インテグリンレセプターであることが同定されている
（Ｐｙｔｅｌａ，Ｒ．，Ｃｅｌｌ，４０，１９１，１９
８５）。
ン構造をもち、分子内に多くの機能を分散させている。
生化学的あるいは遺伝子工学的手法により構造が明らか
にされるとともに、細胞接着部位の存在とそれに対する
レセプターも発見されている。フィブロネクチンの細胞
結合ドメイン内のＲＧＤ配列が細胞認識配列であり（Ｐ
ｉｅｒｓｃｈｂａｃｈｅｒ，Ｍ．Ｄ．，Ｎａｔｕｒｅ，
３０９，３０，１９８４）、多くの細胞接着関連分子中
にも存在、機能しており、その細胞受容体が、α５β１
インテグリンレセプターであることが同定されている
（Ｐｙｔｅｌａ，Ｒ．，Ｃｅｌｌ，４０，１９１，１９
８５）。
【０００９】細胞接着分子と細胞との接着相互作用が明
らかにされるとともに、近年、細胞接着ペプチドを癌の
転移抑制に応用しようとする試みがなされている。Ｈｕ
ｍｐｈｒｉｅｓらは、フィブロネクチンの接着シグナル
としてのＧＲＧＤＳペプチドがメラノーマ細胞の肺への
実験的転移を抑制することを示している（Ｈｕｍｐｈｒ
ｉｅｓ，Ｍ．Ｊ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３３，４６７，
１９８６）。
らかにされるとともに、近年、細胞接着ペプチドを癌の
転移抑制に応用しようとする試みがなされている。Ｈｕ
ｍｐｈｒｉｅｓらは、フィブロネクチンの接着シグナル
としてのＧＲＧＤＳペプチドがメラノーマ細胞の肺への
実験的転移を抑制することを示している（Ｈｕｍｐｈｒ
ｉｅｓ，Ｍ．Ｊ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３３，４６７，
１９８６）。
【００１０】しかし、投与後の血中からの消失速度が速
く、また、酵素によって分解されやすい（Ｓａｉｋｉ，
Ｉ． ｅｔ ａｌ．，Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ
ｓ．，８４，５５８，１９９３）等、医薬品に応用され
るまでには解決すべき問題が多い。
く、また、酵素によって分解されやすい（Ｓａｉｋｉ，
Ｉ． ｅｔ ａｌ．，Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ
ｓ．，８４，５５８，１９９３）等、医薬品に応用され
るまでには解決すべき問題が多い。
【００１１】上記に示されるような癌転移阻害物質の探
索は、癌の征圧のために必要不可欠であるが、未だ特効
薬となるような物質が得られていないのが現状である。
索は、癌の征圧のために必要不可欠であるが、未だ特効
薬となるような物質が得られていないのが現状である。
【００１２】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記事情に
鑑みてなされたものであり、細胞接着阻害活性を有する
新たなペプチドを提供することを目的とする。
鑑みてなされたものであり、細胞接着阻害活性を有する
新たなペプチドを提供することを目的とする。
【００１３】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するために鋭意研究を重ねた結果、細胞接着阻害
活性を有する新規なペプチド、特には、配列表の配列番
号１３に記載のアミノ酸配列を含むペプチドを見い出す
ことに成功した。
を解決するために鋭意研究を重ねた結果、細胞接着阻害
活性を有する新規なペプチド、特には、配列表の配列番
号１３に記載のアミノ酸配列を含むペプチドを見い出す
ことに成功した。
【００１４】本発明は、配列表の配列番号１３に記載の
アミノ酸配列を含み、かつ細胞接着阻害活性を有するア
ミノ酸数が３０以下のペプチドである。
アミノ酸配列を含み、かつ細胞接着阻害活性を有するア
ミノ酸数が３０以下のペプチドである。
【００１５】本発明はまた、アミノ酸数が１３〜３０で
あることを特徴とする、配列表の配列番号１３に記載の
アミノ酸配列を含み、かつ細胞接着阻害活性を有するペ
プチドである。
あることを特徴とする、配列表の配列番号１３に記載の
アミノ酸配列を含み、かつ細胞接着阻害活性を有するペ
プチドである。
【００１６】本発明はまた、配列表の配列番号８に記載
のアミノ酸配列を含み、かつ細胞接着阻害活性を有する
アミノ酸数が３０以下のペプチドである。
のアミノ酸配列を含み、かつ細胞接着阻害活性を有する
アミノ酸数が３０以下のペプチドである。
【００１７】本発明はまた、配列表の配列番号１１に記
載のアミノ酸配列を含み、かつ細胞接着阻害活性を有す
るアミノ酸数が３０以下のペプチドである。
載のアミノ酸配列を含み、かつ細胞接着阻害活性を有す
るアミノ酸数が３０以下のペプチドである。
【００１８】本発明はまた、配列表の配列番号１２に記
載のアミノ酸配列を含み、かつ細胞接着阻害活性を有す
るアミノ酸数が３０以下のペプチドである。
載のアミノ酸配列を含み、かつ細胞接着阻害活性を有す
るアミノ酸数が３０以下のペプチドである。
【００１９】本発明はまた、前記ペプチドにおいて、１
若しくは複数のアミノ酸が付加、欠失若しくは置換され
ておりかつ細胞接着阻害活性を有するペプチドである。
若しくは複数のアミノ酸が付加、欠失若しくは置換され
ておりかつ細胞接着阻害活性を有するペプチドである。
【００２０】本発明はまた、前記ペプチドのうちの少な
くとも一つを含むことを特徴とする癌転移抑制剤であ
る。
くとも一つを含むことを特徴とする癌転移抑制剤であ
る。
【００２１】
【発明の実施の形態】本発明は、細胞阻害活性を有する
新規なペプチドであり、配列表の配列番号１３に記載の
アミノ酸配列を含むことを特徴とする。本発明のペプチ
ドは、非常に短いペプチドであり、それ故、合成が容易
であって、尿素処理等の変成処理を施すことなく強い細
胞接着阻害活性を提供する。
新規なペプチドであり、配列表の配列番号１３に記載の
アミノ酸配列を含むことを特徴とする。本発明のペプチ
ドは、非常に短いペプチドであり、それ故、合成が容易
であって、尿素処理等の変成処理を施すことなく強い細
胞接着阻害活性を提供する。
【００２２】本発明のペプチドである配列表の配列番号
１３に記載のアミノ酸配列は、フィブロネクチンの１８
４８〜１８５５番目のアミノ酸配列と同一である。
１３に記載のアミノ酸配列は、フィブロネクチンの１８
４８〜１８５５番目のアミノ酸配列と同一である。
【００２３】フィブロネクチンは、細胞接着活性を有す
ることが報告されている（Hynes, R.O.ら J. Cell Bio
l., 95, 369-377, 1982）。一方、フィブロネクチンＨ
ｅｐ２ドメイン由来の３０ｋＤａのフラグメント（以
下、Ｈｅｐ２）を尿素により変成させると強い細胞接着
阻害活性を持つようになることが報告されている（Ｆｕ
ｋａｉ，Ｆ． ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ．
Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２２０，３
９４，１９９６）。しかしながら、Ｈｅｐ２が有する細
胞接着阻害活性が、どのアミノ酸配列に起因するかにつ
いては何ら示唆も記載もされていない。さらに、Ｈｅｐ
２は２７１のアミノ酸よりなり、Ｈｅｐ２そのものを医
薬品に応用しようとすることは、分子量が大きいこと及
び細胞接着阻害活性に無関係なアミノ酸配列を含むこと
より望ましくない。即ち、分子量が大きいことより、そ
の合成及び調製が困難であり、さらにはＨｅｐ２に含ま
れる細胞接着阻害活性に無関係なアミノ酸配列が望まな
い生理活性を生じる恐れがある。また、尿素による処理
及び変成させた後の尿素の除去操作が非常に煩雑であ
る。さらには、大きな分子は生体中で容易に分解されや
すい。このような理由から、尿素で変成させたＨｅｐ２
そのものを医薬品に応用しようとすることは困難であ
る。
ることが報告されている（Hynes, R.O.ら J. Cell Bio
l., 95, 369-377, 1982）。一方、フィブロネクチンＨ
ｅｐ２ドメイン由来の３０ｋＤａのフラグメント（以
下、Ｈｅｐ２）を尿素により変成させると強い細胞接着
阻害活性を持つようになることが報告されている（Ｆｕ
ｋａｉ，Ｆ． ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ．
Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２２０，３
９４，１９９６）。しかしながら、Ｈｅｐ２が有する細
胞接着阻害活性が、どのアミノ酸配列に起因するかにつ
いては何ら示唆も記載もされていない。さらに、Ｈｅｐ
２は２７１のアミノ酸よりなり、Ｈｅｐ２そのものを医
薬品に応用しようとすることは、分子量が大きいこと及
び細胞接着阻害活性に無関係なアミノ酸配列を含むこと
より望ましくない。即ち、分子量が大きいことより、そ
の合成及び調製が困難であり、さらにはＨｅｐ２に含ま
れる細胞接着阻害活性に無関係なアミノ酸配列が望まな
い生理活性を生じる恐れがある。また、尿素による処理
及び変成させた後の尿素の除去操作が非常に煩雑であ
る。さらには、大きな分子は生体中で容易に分解されや
すい。このような理由から、尿素で変成させたＨｅｐ２
そのものを医薬品に応用しようとすることは困難であ
る。
【００２４】本発明の細胞接着阻害ペプチドは配列表の
配列番号１３に示される配列を含むことを特徴とし、前
記配列は、これまでに報告されてきたＲＧＤ配列を含む
ペプチド（Ｈｕｍｐｈｒｉｅｓ，Ｍ．Ｊ． ｅｔ ａ
ｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３３，４６７，１９８６，
Ｋｏｍａｚａｗａ，Ｈ． ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｌ．Ｐ
ｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，１６，１０，９９７，１９９
３）とは全く異なった配列を有しており、その細胞接着
阻害活性はＲＧＤペプチドが作用することが報告されて
いるレセプター（Ｐｙｔｅｌａ，Ｒ． ｅｔ ａｌ．，
Ｃｅｌｌ，４８，５４９，１９８７）を介した作用では
ないことが考えられる。それ故、本発明のペプチドは、
全く新しい、細胞接着阻害活性を有するペプチド配列で
ある。また、その細胞接着阻害活性は、ＲＧＤペプチド
と比較して数倍強いことが確認された（実施例参照）。
配列番号１３に示される配列を含むことを特徴とし、前
記配列は、これまでに報告されてきたＲＧＤ配列を含む
ペプチド（Ｈｕｍｐｈｒｉｅｓ，Ｍ．Ｊ． ｅｔ ａ
ｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３３，４６７，１９８６，
Ｋｏｍａｚａｗａ，Ｈ． ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｌ．Ｐ
ｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，１６，１０，９９７，１９９
３）とは全く異なった配列を有しており、その細胞接着
阻害活性はＲＧＤペプチドが作用することが報告されて
いるレセプター（Ｐｙｔｅｌａ，Ｒ． ｅｔ ａｌ．，
Ｃｅｌｌ，４８，５４９，１９８７）を介した作用では
ないことが考えられる。それ故、本発明のペプチドは、
全く新しい、細胞接着阻害活性を有するペプチド配列で
ある。また、その細胞接着阻害活性は、ＲＧＤペプチド
と比較して数倍強いことが確認された（実施例参照）。
【００２５】本発明の配列表の配列番号１３に記載のア
ミノ酸配列は、本発明において見いだされた細胞接着阻
害活性を発現したペプチドに共通する配列である。それ
故、本発明の細胞接着阻害活性を有するペプチドは、配
列表の配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含むことを
特徴とする。また、配列表の配列番号１３に記載のアミ
ノ酸配列を整数倍の繰り返し構造として含むペプチドは
さらに強い細胞接着阻害活性を有することが期待でき、
そのようなペプチドも本発明のペプチドに含まれる。ま
た、本発明のペプチドは、配列表の配列番号１３に記載
のアミノ酸配列を含むペプチドであれば、それ以外のア
ミノ酸配列は任意である。このような、アミノ酸も本発
明のペプチドに含まれる。また、本発明のペプチドの大
きさは、合成の効率、取り扱い性、安定性その他の点よ
り、３０アミノ酸数以下が好ましく、１３以上３０以下
のアミノ酸数がさらに好ましい。
ミノ酸配列は、本発明において見いだされた細胞接着阻
害活性を発現したペプチドに共通する配列である。それ
故、本発明の細胞接着阻害活性を有するペプチドは、配
列表の配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含むことを
特徴とする。また、配列表の配列番号１３に記載のアミ
ノ酸配列を整数倍の繰り返し構造として含むペプチドは
さらに強い細胞接着阻害活性を有することが期待でき、
そのようなペプチドも本発明のペプチドに含まれる。ま
た、本発明のペプチドは、配列表の配列番号１３に記載
のアミノ酸配列を含むペプチドであれば、それ以外のア
ミノ酸配列は任意である。このような、アミノ酸も本発
明のペプチドに含まれる。また、本発明のペプチドの大
きさは、合成の効率、取り扱い性、安定性その他の点よ
り、３０アミノ酸数以下が好ましく、１３以上３０以下
のアミノ酸数がさらに好ましい。
【００２６】さらに、本発明の細胞接着阻害活性を有す
るペプチドにおいては、本発明で言う細胞接着阻害活性
を損なわない限り、１若しくは複数のアミノ酸を付加、
欠失又は置換することが可能であり、そのようなペプチ
ドも本発明の範囲内である。上記の１若しくは複数のア
ミノ酸の付加、欠失又は置換は、部位特定変異誘発法(s
ite-directed mutagenesis)のような周知の方法を用い
て実施することができる。
るペプチドにおいては、本発明で言う細胞接着阻害活性
を損なわない限り、１若しくは複数のアミノ酸を付加、
欠失又は置換することが可能であり、そのようなペプチ
ドも本発明の範囲内である。上記の１若しくは複数のア
ミノ酸の付加、欠失又は置換は、部位特定変異誘発法(s
ite-directed mutagenesis)のような周知の方法を用い
て実施することができる。
【００２７】また、本発明の細胞接着阻害ペプチドとし
ては、配列表の配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含
むペプチドのみならず、これらの誘導体であっても同様
の効果が期待でき、このようなペプチド（誘導体）も本
発明の範囲内である。ペプチドの修飾方法としては、例
えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の高分子に
よる修飾や直鎖状ペプチドの環状化（Ｓａｉｋｉ，Ｉ．
ｅｔ ａｌ．，Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ
ｓ．，８４，５５８，１９９３）等が考えられるが、特
にこれらには限定されない。また、細胞接着阻害活性を
損なわない限り、本発明のペプチドを構成するアミノ酸
の側鎖を、例えば、エステル結合、エーテル結合を利用
して修飾し、本発明のペプチドを修飾することも可能で
ある。かかるペプチドも本発明の範囲内である。
ては、配列表の配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含
むペプチドのみならず、これらの誘導体であっても同様
の効果が期待でき、このようなペプチド（誘導体）も本
発明の範囲内である。ペプチドの修飾方法としては、例
えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の高分子に
よる修飾や直鎖状ペプチドの環状化（Ｓａｉｋｉ，Ｉ．
ｅｔ ａｌ．，Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ
ｓ．，８４，５５８，１９９３）等が考えられるが、特
にこれらには限定されない。また、細胞接着阻害活性を
損なわない限り、本発明のペプチドを構成するアミノ酸
の側鎖を、例えば、エステル結合、エーテル結合を利用
して修飾し、本発明のペプチドを修飾することも可能で
ある。かかるペプチドも本発明の範囲内である。
【００２８】本発明の配列表の配列番号１３に記載のア
ミノ酸配列を含むペプチドは、そのアミノ酸組成より疎
水性が高いことが判る。本発明においては、本発明のペ
プチドの親水性を高める目的で、本発明のペプチドに親
水性のアミノ酸、又は、親水性を有する基、例えばエチ
レングリコール、ポリエチレングリコール等を付加する
ことが可能である。これらの修飾されたペプチドもまた
本発明の範囲内である。
ミノ酸配列を含むペプチドは、そのアミノ酸組成より疎
水性が高いことが判る。本発明においては、本発明のペ
プチドの親水性を高める目的で、本発明のペプチドに親
水性のアミノ酸、又は、親水性を有する基、例えばエチ
レングリコール、ポリエチレングリコール等を付加する
ことが可能である。これらの修飾されたペプチドもまた
本発明の範囲内である。
【００２９】本発明の細胞接着阻害ペプチドは細胞接着
が関与する種々の疾病の研究及び治療に応用可能であ
る。それらの疾病とは、例えば、癌、リウマチ、喘息、
アレルギー疾患、血栓症、移植臓器拒絶反応、創傷治
癒、炎症、潰瘍性大腸炎等の腸炎症を含む免疫性炎症及
び自己免疫疾患等を挙げることができるが、これらに限
定されない。
が関与する種々の疾病の研究及び治療に応用可能であ
る。それらの疾病とは、例えば、癌、リウマチ、喘息、
アレルギー疾患、血栓症、移植臓器拒絶反応、創傷治
癒、炎症、潰瘍性大腸炎等の腸炎症を含む免疫性炎症及
び自己免疫疾患等を挙げることができるが、これらに限
定されない。
【００３０】本発明の細胞接着阻害ペプチドは静脈内投
与、患部への局所投与、経口投与等により投与可能であ
る。また、投与する際には必要に応じて安定化剤、溶解
補助剤等の添加物を加えることができる。
与、患部への局所投与、経口投与等により投与可能であ
る。また、投与する際には必要に応じて安定化剤、溶解
補助剤等の添加物を加えることができる。
【００３１】本発明の細胞接着阻害ペプチドは例えば、
固層合成法等の化学的合成法、又は配列番号１３に示さ
れるアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列をプラスミド
ベクターに挿入し大腸菌等の微生物を形質転換すること
により生産する遺伝子組み換え手法を用いた合成法等に
より合成することが可能である。化学的な合成は市販さ
れているペプチド合成装置（ペプチドシンセサイザー）
を用いて行なうのが最も一般的である。遺伝子組み換え
手法を用いた合成法では、細胞接着阻害ペプチドをコー
ドする遺伝子を、例えば、ＤＮＡ合成装置（ＤＮＡシン
セサイザー）により合成し、公知のプラスミドベクター
に該遺伝子を組み込み、得られた組み換えベクターを宿
主となる微生物に導入し、形質転換体を作成することに
より該細胞接着阻害ペプチドを生産することができる。
ここで用いられるプラスミドベクターはタンパク質生産
用の発現ベクターであれば特に限定なく用いることがで
きる。また、宿主は微生物に限定されることなく、ＣＯ
Ｓ細胞等の真核細胞を用いることができる。
固層合成法等の化学的合成法、又は配列番号１３に示さ
れるアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列をプラスミド
ベクターに挿入し大腸菌等の微生物を形質転換すること
により生産する遺伝子組み換え手法を用いた合成法等に
より合成することが可能である。化学的な合成は市販さ
れているペプチド合成装置（ペプチドシンセサイザー）
を用いて行なうのが最も一般的である。遺伝子組み換え
手法を用いた合成法では、細胞接着阻害ペプチドをコー
ドする遺伝子を、例えば、ＤＮＡ合成装置（ＤＮＡシン
セサイザー）により合成し、公知のプラスミドベクター
に該遺伝子を組み込み、得られた組み換えベクターを宿
主となる微生物に導入し、形質転換体を作成することに
より該細胞接着阻害ペプチドを生産することができる。
ここで用いられるプラスミドベクターはタンパク質生産
用の発現ベクターであれば特に限定なく用いることがで
きる。また、宿主は微生物に限定されることなく、ＣＯ
Ｓ細胞等の真核細胞を用いることができる。
【００３２】以下、実施例により本発明を具体的に説明
する。ただし、本発明はこれらの実施例によりその技術
範囲が限定されるものではない。
する。ただし、本発明はこれらの実施例によりその技術
範囲が限定されるものではない。
【００３３】
実験１：合成ペプチドの細胞接着阻害活性（細胞懸濁液
中に合成ペプチドを含んだ系） 実施例１〜３として、配列表の配列番号８に記載のアミ
ノ酸配列からなるペプチド（ペプチドIII１４−２）を
用いた。
中に合成ペプチドを含んだ系） 実施例１〜３として、配列表の配列番号８に記載のアミ
ノ酸配列からなるペプチド（ペプチドIII１４−２）を
用いた。
【００３４】比較例１として尿素非処理のＨｅｐ２フラ
グメント（Ｈｅｐ２）を用い、比較例２として尿素処理
したＨｅｐ２フラグメント（Ｈｅｐ２−ｕｒｅａ）を用
いた。Ｈｅｐ２フラグメントはＦｕｋａｉらの方法（Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕ
ｎ．，２２０，３９４−３９８，１９９６）に準じて調
製したものを用いた。尿素非処理のＨｅｐ２フラグメン
トは、上記方法で調整し、リン酸緩衝液に溶解した。尿
素処理Ｈｅｐ２フラグメントは、上記のＦｕｋａｉらの
方法に従って尿素処理後、リン酸緩衝液により透析する
ことで調製した。
グメント（Ｈｅｐ２）を用い、比較例２として尿素処理
したＨｅｐ２フラグメント（Ｈｅｐ２−ｕｒｅａ）を用
いた。Ｈｅｐ２フラグメントはＦｕｋａｉらの方法（Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕ
ｎ．，２２０，３９４−３９８，１９９６）に準じて調
製したものを用いた。尿素非処理のＨｅｐ２フラグメン
トは、上記方法で調整し、リン酸緩衝液に溶解した。尿
素処理Ｈｅｐ２フラグメントは、上記のＦｕｋａｉらの
方法に従って尿素処理後、リン酸緩衝液により透析する
ことで調製した。
【００３５】比較例３として、従来から細胞接着阻害ペ
プチドとして知られている細胞接着ドメインのＧＲＧＤ
ＳＰペプチド（岩城硝子より購入）（配列表の配列番号
９）を用いた。ＧＲＧＤＳＰペプチドは、リン酸緩衝液
に溶解した。
プチドとして知られている細胞接着ドメインのＧＲＧＤ
ＳＰペプチド（岩城硝子より購入）（配列表の配列番号
９）を用いた。ＧＲＧＤＳＰペプチドは、リン酸緩衝液
に溶解した。
【００３６】比較例４〜９として、配列表の配列番号１
（ペプチドIII１２−１）、配列番号２（ペプチドIII１
２−２）、配列番号３（ペプチドIII１２−３）、配列
番号４（ペプチドIII１３−１）、配列番号５（ペプチ
ドIII１３−２）、配列番号６（ペプチドIII１３−
３）、及び配列番号７（ペプチドIII１４−１）に記載
のアミノ酸配列から成るをペプチドを用いた。
（ペプチドIII１２−１）、配列番号２（ペプチドIII１
２−２）、配列番号３（ペプチドIII１２−３）、配列
番号４（ペプチドIII１３−１）、配列番号５（ペプチ
ドIII１３−２）、配列番号６（ペプチドIII１３−
３）、及び配列番号７（ペプチドIII１４−１）に記載
のアミノ酸配列から成るをペプチドを用いた。
【００３７】実施例１〜３及び比較例４〜９で用いたペ
プチドは全て、ＳＡＷＡＤＹ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ
ＣＯ．，ＬＴＤ．，Ｔｏｋｙｏに依頼し、ペプチドシン
セサイザー（Multiple Peptide Synthesizer (SYRO I
I)、MultiSynTec GmbH製）を用いて合成した。また、合
成されたペプチドの配列は、ペプチドシークエンサー
（Model 476A、Applied Biosystems製）により確認し
た。
プチドは全て、ＳＡＷＡＤＹ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ
ＣＯ．，ＬＴＤ．，Ｔｏｋｙｏに依頼し、ペプチドシン
セサイザー（Multiple Peptide Synthesizer (SYRO I
I)、MultiSynTec GmbH製）を用いて合成した。また、合
成されたペプチドの配列は、ペプチドシークエンサー
（Model 476A、Applied Biosystems製）により確認し
た。
【００３８】使用した合成ペプチドは、ＦＮ分子のへパ
リン結合ドメイン２に由来するフラグメントであるＨｅ
ｐ２フラグメント内の一部の配列に対応するペプチドで
ある。それぞれのペプチドの配列と、Ｈｅｐ２の配列の
関係を図１に示した。
リン結合ドメイン２に由来するフラグメントであるＨｅ
ｐ２フラグメント内の一部の配列に対応するペプチドで
ある。それぞれのペプチドの配列と、Ｈｅｐ２の配列の
関係を図１に示した。
【００３９】上記の合成ペプチドは、ｄｉｍｅｔｈｙｌ
ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ（ＤＭＳＯ：和光純薬社製）に溶
解させて実験に用いた。また、条件を同一にするため
に、対照、尿素非処理Ｈｅｐ２フラグメント、尿素処理
Ｈｅｐ２フラグメント及びＧＲＧＤＳＰペプチドのリン
酸緩衝溶液にもＤＭＳＯを添加した。すべての実験は、
ＤＭＳＯの最終濃度が０．２％になるようにして行っ
た。抗細胞接着活性の評価はＦｕｋａｉらの方法（Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕ
ｎ．，２２０，３９４−３９８，１９９６）に準じて行
った。すなわち、上記の種々の合成ペプチドの存在下ま
たは非存在下において、Ａ３７５メラノーマ細胞のプレ
ートへの接着阻害を検討した。Ａ３７５メラノーマ細胞
（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏ
ｌｌｅｃｔｉｏｎ：ＡＴＣＣ製）を、０．１％Ｏｖａｌ
ｂｕｍｉｎ（和光純薬社製）を含むＤｕｌｂｅｃｃｏ’
ｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｅａｇｌｅ ｍｅｄｉｕｍ（Ｄ
ＭＥＭ：ギブコ社製）に２×１０5個／ｍｌになるよう
に懸濁した。あらかじめ、Ｍｉｅｋｋａらの方法に従っ
て、１０μｇ／ｍｌに調製したｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ
（ＦＮ）リン酸緩衝溶液を１００μｌずつ９６ウェルプ
レートの各ｗｅｌｌに添加し、３７℃、５％ＣＯ2に
て、６０分間インキュベートした後、リン酸緩衝液で３
回洗うことにより、ＦＮをプレートにコートした。な
お、Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ（ＦＮ）はＭｉｅｋｋａら
の方法（Ｔｈｒｏｍｂ．Ｒｅｓ．，２７，１−１４，１
９８２）に準じて精製したものを用いた。この各ウェル
に、上記の細胞懸濁液１００μｌを添加し、３７℃、５
％ＣＯ2にて、６０分間インキュベートした（対照：合
成ペプチド非存在）。各ｗｅｌｌの細胞を５％フォルム
アルデヒド（和光純薬社製）で固定化した後、非接着細
胞を取り除き、各ｗｅｌｌ中の５つのエリアを無作為に
選択し顕微鏡下で細胞をカウントした。
ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ（ＤＭＳＯ：和光純薬社製）に溶
解させて実験に用いた。また、条件を同一にするため
に、対照、尿素非処理Ｈｅｐ２フラグメント、尿素処理
Ｈｅｐ２フラグメント及びＧＲＧＤＳＰペプチドのリン
酸緩衝溶液にもＤＭＳＯを添加した。すべての実験は、
ＤＭＳＯの最終濃度が０．２％になるようにして行っ
た。抗細胞接着活性の評価はＦｕｋａｉらの方法（Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕ
ｎ．，２２０，３９４−３９８，１９９６）に準じて行
った。すなわち、上記の種々の合成ペプチドの存在下ま
たは非存在下において、Ａ３７５メラノーマ細胞のプレ
ートへの接着阻害を検討した。Ａ３７５メラノーマ細胞
（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏ
ｌｌｅｃｔｉｏｎ：ＡＴＣＣ製）を、０．１％Ｏｖａｌ
ｂｕｍｉｎ（和光純薬社製）を含むＤｕｌｂｅｃｃｏ’
ｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｅａｇｌｅ ｍｅｄｉｕｍ（Ｄ
ＭＥＭ：ギブコ社製）に２×１０5個／ｍｌになるよう
に懸濁した。あらかじめ、Ｍｉｅｋｋａらの方法に従っ
て、１０μｇ／ｍｌに調製したｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ
（ＦＮ）リン酸緩衝溶液を１００μｌずつ９６ウェルプ
レートの各ｗｅｌｌに添加し、３７℃、５％ＣＯ2に
て、６０分間インキュベートした後、リン酸緩衝液で３
回洗うことにより、ＦＮをプレートにコートした。な
お、Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ（ＦＮ）はＭｉｅｋｋａら
の方法（Ｔｈｒｏｍｂ．Ｒｅｓ．，２７，１−１４，１
９８２）に準じて精製したものを用いた。この各ウェル
に、上記の細胞懸濁液１００μｌを添加し、３７℃、５
％ＣＯ2にて、６０分間インキュベートした（対照：合
成ペプチド非存在）。各ｗｅｌｌの細胞を５％フォルム
アルデヒド（和光純薬社製）で固定化した後、非接着細
胞を取り除き、各ｗｅｌｌ中の５つのエリアを無作為に
選択し顕微鏡下で細胞をカウントした。
【００４０】Ｈｅｐ２フラグメント及び各ペプチドの添
加は、それぞれが高濃度にて溶解された溶液を、それぞ
れ表１に示す最終濃度となるようにして、細胞懸濁液に
加えることにより行った。
加は、それぞれが高濃度にて溶解された溶液を、それぞ
れ表１に示す最終濃度となるようにして、細胞懸濁液に
加えることにより行った。
【００４１】結果を表１に示す。表１より、尿素非処理
のＨｅｐ２には細胞接着阻害活性が全くないが、尿素処
理を行うこと（Ｈｅｐ２−ｕｒｅａ）によりその活性が
認められた。ペプチドIII１４−２が最も細胞接着阻害
活性が高く、かつその活性は濃度依存的であった。
のＨｅｐ２には細胞接着阻害活性が全くないが、尿素処
理を行うこと（Ｈｅｐ２−ｕｒｅａ）によりその活性が
認められた。ペプチドIII１４−２が最も細胞接着阻害
活性が高く、かつその活性は濃度依存的であった。
【００４２】
【表１】
【００４３】実験２：合成ペプチドの細胞接着阻害活性
（コートしたＦＮ中に合成ペプチドを含んだ系 ペプチドIII１４−２中のどの配列が、細胞接着阻害活
性に寄与しているのかを検討した。
（コートしたＦＮ中に合成ペプチドを含んだ系 ペプチドIII１４−２中のどの配列が、細胞接着阻害活
性に寄与しているのかを検討した。
【００４４】合成ペプチドとしては、配列表の配列番号
８（ペプチドIII１４−２）、配列番号１０（ペプチドI
II１４−２Ａ）、配列番号１１（ペプチドIII１４−２
Ｂ）、及び配列番号１２（ペプチドIII１４−２Ｃ）に
記載のアミノ酸配列から成るペプチドを用いた。
８（ペプチドIII１４−２）、配列番号１０（ペプチドI
II１４−２Ａ）、配列番号１１（ペプチドIII１４−２
Ｂ）、及び配列番号１２（ペプチドIII１４−２Ｃ）に
記載のアミノ酸配列から成るペプチドを用いた。
【００４５】また比較対照として、実験１で用いたペプ
チドIII１２−２を用いた。
チドIII１２−２を用いた。
【００４６】上記ペプチドは全て、ＳＡＷＡＤＹ ＴＥ
ＣＨＮＯＬＯＧＹ ＣＯ．，ＬＴＤ．，Ｔｏｋｙｏに依
頼し、ペプチドシンセサイザー（Multiple Peptide Syn
thesizer (SYRO II)、MultiSynTec GmbH製）を用いて合
成した。また、合成されたペプチドの配列は、ペプチド
シークエンサー（Model 476A、Applied Biosystems製）
により確認した。
ＣＨＮＯＬＯＧＹ ＣＯ．，ＬＴＤ．，Ｔｏｋｙｏに依
頼し、ペプチドシンセサイザー（Multiple Peptide Syn
thesizer (SYRO II)、MultiSynTec GmbH製）を用いて合
成した。また、合成されたペプチドの配列は、ペプチド
シークエンサー（Model 476A、Applied Biosystems製）
により確認した。
【００４７】使用した合成ペプチドは、ＦＮ分子のへパ
リン結合ドメイン２に由来するフラグメントであるＨｅ
ｐ２フラグメント内の一部の配列に対応するペプチドで
ある。それぞれのペプチドの配列の関係を図２に示し
た。
リン結合ドメイン２に由来するフラグメントであるＨｅ
ｐ２フラグメント内の一部の配列に対応するペプチドで
ある。それぞれのペプチドの配列の関係を図２に示し
た。
【００４８】合成ペプチドは、リン酸緩衝液への溶解性
を高めるため、及び該ペプチドのプレートへのコーティ
ングを確実に行うために、すべてｍａｌｅｉｍｉｄｅ−
ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｋｅｙｈｏｌｅ Ｌｉｍｐｅｔ
Ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎｅ（ＫＬＨ：ＰＩＥＲＣＥ社製、
Ｕ．Ｓ．Ａ．）抱合した修飾体を用いた（この抱合によ
る細胞接着阻害活性に対する影響はない）。
を高めるため、及び該ペプチドのプレートへのコーティ
ングを確実に行うために、すべてｍａｌｅｉｍｉｄｅ−
ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｋｅｙｈｏｌｅ Ｌｉｍｐｅｔ
Ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎｅ（ＫＬＨ：ＰＩＥＲＣＥ社製、
Ｕ．Ｓ．Ａ．）抱合した修飾体を用いた（この抱合によ
る細胞接着阻害活性に対する影響はない）。
【００４９】ＦＮ溶解溶液中に所定の濃度となるように
上記の各種ＫＬＨ抱合合成ペプチドを加え、それを９６
ｗｅｌｌプレートにコートしたことを除き、実験１と同
様の操作を行った。また、合成ペプチド非存在下での実
験を対照（ペプチド濃度０μｇ／ｍｌ）とした。その結
果を図３に示す。図３より、ペプチドIII１４−２の一
部を含む３種（ペプチドIII１４−２Ａ、III１４−２Ｂ
およびIII１４−２Ｃ）のなかで、ペプチドIII１４−２
Ａはほとんど細胞接着阻害活性が認められないのに対し
て、他の２種（ペプチドIII１４−２ＢおよびIII１４−
２Ｃ）はペプチドIII１４−２とほぼ同等の強い細胞接
着阻害活性を示すことが判った。これらの結果から、ペ
プチドIII１４−２、III１４−２ＢおよびIII１４−２
Ｃの３種のペプチドに共通のアミノ酸配列（配列表の配
列番号１３のアミノ酸配列：ＹＴＩＹＶＩＡＬ）が細胞
接着阻害活性を発揮することが見いだされた。
上記の各種ＫＬＨ抱合合成ペプチドを加え、それを９６
ｗｅｌｌプレートにコートしたことを除き、実験１と同
様の操作を行った。また、合成ペプチド非存在下での実
験を対照（ペプチド濃度０μｇ／ｍｌ）とした。その結
果を図３に示す。図３より、ペプチドIII１４−２の一
部を含む３種（ペプチドIII１４−２Ａ、III１４−２Ｂ
およびIII１４−２Ｃ）のなかで、ペプチドIII１４−２
Ａはほとんど細胞接着阻害活性が認められないのに対し
て、他の２種（ペプチドIII１４−２ＢおよびIII１４−
２Ｃ）はペプチドIII１４−２とほぼ同等の強い細胞接
着阻害活性を示すことが判った。これらの結果から、ペ
プチドIII１４−２、III１４−２ＢおよびIII１４−２
Ｃの３種のペプチドに共通のアミノ酸配列（配列表の配
列番号１３のアミノ酸配列：ＹＴＩＹＶＩＡＬ）が細胞
接着阻害活性を発揮することが見いだされた。
【００５０】
【発明の効果】本発明のペプチドは、細胞接着阻害活性
を有するので、細胞接着が関与する種々の疾患の研究及
び治療に応用可能である。また、本発明のペプチドは、
従来の接着阻害物質に比べて同等以上の活性を有し、さ
らには、短いペプチドであるので、その合成、取り扱い
等が容易である。また、本発明のペプチドは、癌細胞の
接着阻害を示すので、癌転移抑制剤としても有用であ
る。
を有するので、細胞接着が関与する種々の疾患の研究及
び治療に応用可能である。また、本発明のペプチドは、
従来の接着阻害物質に比べて同等以上の活性を有し、さ
らには、短いペプチドであるので、その合成、取り扱い
等が容易である。また、本発明のペプチドは、癌細胞の
接着阻害を示すので、癌転移抑制剤としても有用であ
る。
【００５１】
【配列表】 配列番号：１ 配列の長さ：３１ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：合成ペプチド 配列の特徴：ヒト血漿由来フィブロネクチン、ヘパリン
結合部位の一部（１６００−１６３０）の配列 配列 1 5 10 15 Ala Ile Pro Ala Pro Thr Asp Leu Lys Phe Thr Gln Val Thr Pro Thr Ser Leu 20 25 30 Ser Ala Gln Trp Thr Pro Pro Asn Val Gln Leu Thr Gly 配列番号：２ 配列の長さ：２２ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：合成ペプチド 配列の特徴：ヒト血漿由来フィブロネクチン、ヘパリン
結合部位の一部（１６４７−１６６８）の配列 配列 1 5 10 15 Ile Asn Leu Ala Pro Asp Ser Ser Ser Val Val Val Ser Gly Leu Met Val Ala 20 Thr Lys Trp Glu 配列番号：３ 配列の長さ：２３ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：合成ペプチド 配列の特徴：ヒト血漿由来フィブロネクチン、ヘパリン
結合部位の一部（１６６９−１６９１）の配列 配列： 1 5 10 15 Val Ser Val Tyr Ala Leu Lys Asp Thr Leu Thr Ser Arg Pro Ala Gln Gly Val 20 Val Thr Thr Leu Glu 配列番号：４ 配列の長さ：２９ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：合成ペプチド 配列の特徴：ヒト血漿由来フィブロネクチン、ヘパリン
結合部位の一部（１６９２−１７２０）の配列 配列： 1 5 10 15 Asn Val Ser Pro Pro Arg Arg Ala Arg Val Thr Asp Ala Thr Glu Thr Thr Ile 20 25 Thr Ile Ser Trp Arg Thr Lys Thr Glu Thr Ile 配列番号：５ 配列の長さ：２５ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：合成ペプチド 配列の特徴：ヒト血漿由来フィブロネクチン、ヘパリン
結合部位の一部（１７２１−１７４５）の配列 配列： 1 5 10 15 Thr Gly Phe Gln Val Asp Ala Val Pro Ala Asn Gly Gln Thr Pro Ile Gln Arg 20 25 Thr Ile Lys Pro Asp Val Arg 配列番号：６ 配列の長さ：２５ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：合成ペプチド 配列の特徴：ヒト血漿由来フィブロネクチン、ヘパリン
結合部位の一部（１７４６−１７７０）の配列 配列： 1 5 10 15 Ser Tyr Thr Ile Thr Gly Leu Gln Pro Gly Thr Asp Tyr Lys Ile Tyr Leu Tyr 20 25 Thr Leu Asn Asp Asn Ala Arg 配列番号：７ 配列の長さ：２９ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：合成ペプチド 配列の特徴：ヒト血漿由来フィブロネクチン、ヘパリン
結合部位の一部（１７８７−１８１５）の配列 配列： 1 5 10 15 Asn Leu Arg Phe Leu Ala Thr Thr Pro Asn Ser Leu Leu Val Ser Trp Gln Pro 20 25 Pro Arg Ala Arg Ile Thr Gly Tyr Ile Ile Lys 配列番号：８ 配列の長さ：２１ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：合成ペプチド 配列の特徴：ヒト血漿由来フィブロネクチン、ヘパリン
結合部位の一部（１８３５−１８５５）の配列 配列： 1 5 10 15 Thr Glu Ala Thr Ile Thr Gly Leu Glu Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Ile Tyr Val 20 Ile Ala Leu 配列番号：９ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：合成ペプチド 配列の特徴：ヒト血漿由来フィブロネクチン、細胞結合
部位の配列 配列番号：１０ 配列の長さ：１３ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：合成ペプチド 配列の特徴：ヒト血漿由来フィブロネクチン、ヘパリン
結合部位の一部（１８２９−１８４１）の配列 配列： 1 5 10 Arg Pro Arg Pro Gly Val Thr Glu Ala Thr Ile Thr Gly 配列番号：１１ 配列の長さ：１９ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：合成ペプチド 配列の特徴：ヒト血漿由来フィブロネクチン、ヘパリン
結合部位の一部（１８４２−１８６０）の配列 配列 1 5 10 15 Leu Glu Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Ile Tyr Val Ile Ala Leu Lys Asn Asn Gln Lys 配列番号：１２ 配列の長さ：１３ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：合成ペプチド 配列の特徴：ヒト血漿由来フィブロネクチン、ヘパリン
結合部位の一部（１８４８−１８６０）の配列 配列 1 5 10 Tyr Thr Ile Tyr Val Ile Ala Leu Lys Asn Asn Gln Lys 配列番号：１３ 配列の長さ：８ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：合成ペプチド 配列の特徴：ヒト血漿由来フィブロネクチン、ヘパリン
結合部位の一部（１８４８−１８５５）の配列 配列 1 5 Tyr Thr Ile Tyr Val Ile Ala Leu
結合部位の一部（１６００−１６３０）の配列 配列 1 5 10 15 Ala Ile Pro Ala Pro Thr Asp Leu Lys Phe Thr Gln Val Thr Pro Thr Ser Leu 20 25 30 Ser Ala Gln Trp Thr Pro Pro Asn Val Gln Leu Thr Gly 配列番号：２ 配列の長さ：２２ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：合成ペプチド 配列の特徴：ヒト血漿由来フィブロネクチン、ヘパリン
結合部位の一部（１６４７−１６６８）の配列 配列 1 5 10 15 Ile Asn Leu Ala Pro Asp Ser Ser Ser Val Val Val Ser Gly Leu Met Val Ala 20 Thr Lys Trp Glu 配列番号：３ 配列の長さ：２３ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：合成ペプチド 配列の特徴：ヒト血漿由来フィブロネクチン、ヘパリン
結合部位の一部（１６６９−１６９１）の配列 配列： 1 5 10 15 Val Ser Val Tyr Ala Leu Lys Asp Thr Leu Thr Ser Arg Pro Ala Gln Gly Val 20 Val Thr Thr Leu Glu 配列番号：４ 配列の長さ：２９ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：合成ペプチド 配列の特徴：ヒト血漿由来フィブロネクチン、ヘパリン
結合部位の一部（１６９２−１７２０）の配列 配列： 1 5 10 15 Asn Val Ser Pro Pro Arg Arg Ala Arg Val Thr Asp Ala Thr Glu Thr Thr Ile 20 25 Thr Ile Ser Trp Arg Thr Lys Thr Glu Thr Ile 配列番号：５ 配列の長さ：２５ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：合成ペプチド 配列の特徴：ヒト血漿由来フィブロネクチン、ヘパリン
結合部位の一部（１７２１−１７４５）の配列 配列： 1 5 10 15 Thr Gly Phe Gln Val Asp Ala Val Pro Ala Asn Gly Gln Thr Pro Ile Gln Arg 20 25 Thr Ile Lys Pro Asp Val Arg 配列番号：６ 配列の長さ：２５ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：合成ペプチド 配列の特徴：ヒト血漿由来フィブロネクチン、ヘパリン
結合部位の一部（１７４６−１７７０）の配列 配列： 1 5 10 15 Ser Tyr Thr Ile Thr Gly Leu Gln Pro Gly Thr Asp Tyr Lys Ile Tyr Leu Tyr 20 25 Thr Leu Asn Asp Asn Ala Arg 配列番号：７ 配列の長さ：２９ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：合成ペプチド 配列の特徴：ヒト血漿由来フィブロネクチン、ヘパリン
結合部位の一部（１７８７−１８１５）の配列 配列： 1 5 10 15 Asn Leu Arg Phe Leu Ala Thr Thr Pro Asn Ser Leu Leu Val Ser Trp Gln Pro 20 25 Pro Arg Ala Arg Ile Thr Gly Tyr Ile Ile Lys 配列番号：８ 配列の長さ：２１ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：合成ペプチド 配列の特徴：ヒト血漿由来フィブロネクチン、ヘパリン
結合部位の一部（１８３５−１８５５）の配列 配列： 1 5 10 15 Thr Glu Ala Thr Ile Thr Gly Leu Glu Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Ile Tyr Val 20 Ile Ala Leu 配列番号：９ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：合成ペプチド 配列の特徴：ヒト血漿由来フィブロネクチン、細胞結合
部位の配列 配列番号：１０ 配列の長さ：１３ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：合成ペプチド 配列の特徴：ヒト血漿由来フィブロネクチン、ヘパリン
結合部位の一部（１８２９−１８４１）の配列 配列： 1 5 10 Arg Pro Arg Pro Gly Val Thr Glu Ala Thr Ile Thr Gly 配列番号：１１ 配列の長さ：１９ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：合成ペプチド 配列の特徴：ヒト血漿由来フィブロネクチン、ヘパリン
結合部位の一部（１８４２−１８６０）の配列 配列 1 5 10 15 Leu Glu Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Ile Tyr Val Ile Ala Leu Lys Asn Asn Gln Lys 配列番号：１２ 配列の長さ：１３ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：合成ペプチド 配列の特徴：ヒト血漿由来フィブロネクチン、ヘパリン
結合部位の一部（１８４８−１８６０）の配列 配列 1 5 10 Tyr Thr Ile Tyr Val Ile Ala Leu Lys Asn Asn Gln Lys 配列番号：１３ 配列の長さ：８ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：合成ペプチド 配列の特徴：ヒト血漿由来フィブロネクチン、ヘパリン
結合部位の一部（１８４８−１８５５）の配列 配列 1 5 Tyr Thr Ile Tyr Val Ile Ala Leu
【図１】Ｈｅｐ２フラグメントの配列及び実験１に用い
た各ペプチドの位置を示す。アミノ酸の番号は、フィブ
ロネクチン中でのアミノ酸の位置を示す。
た各ペプチドの位置を示す。アミノ酸の番号は、フィブ
ロネクチン中でのアミノ酸の位置を示す。
【図２】実験２で用いた、各ペプチドの関係を示す図で
ある。
ある。
【図３】実験２で行った、各ＫＬＨ抱合合成ペプチドの
細胞接着阻害活性を検討した結果である。
細胞接着阻害活性を検討した結果である。
Claims (7)
- 【請求項１】 配列表の配列番号１３に記載のアミノ酸
配列を含み、かつ細胞接着阻害活性を有する、アミノ酸
数が３０以下の生理活性ペプチド。 - 【請求項２】 アミノ酸数が少なくとも１３であること
を特徴とする請求項１に記載の生理活性ペプチド。 - 【請求項３】 配列表の配列番号８に記載のアミノ酸配
列を含み、かつ細胞接着阻害活性を有する、アミノ酸数
が３０以下の生理活性ペプチド。 - 【請求項４】 配列表の配列番号１１に記載のアミノ酸
配列を含み、かつ細胞接着阻害活性を有する、アミノ酸
数が３０以下の生理活性ペプチド。 - 【請求項５】 配列表の配列番号１２に記載のアミノ酸
配列を含み、かつ細胞接着阻害活性を有する、アミノ酸
数が３０以下の生理活性ペプチド。 - 【請求項６】 １若しくは複数のアミノ酸が付加、欠失
若しくは置換されておりかつ細胞接着阻害活性を有す
る、請求項１〜５のいずれか一つに記載の生理活性ペプ
チド。 - 【請求項７】 請求項１〜５のいずれか一つに記載の生
理活性ペプチドを含むことを特徴とする癌転移抑制剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9244260A JPH10147600A (ja) | 1996-09-19 | 1997-09-09 | 生理活性ペプチド及び癌転移抑制剤 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24824796 | 1996-09-19 | ||
| JP8-248247 | 1996-09-19 | ||
| JP9244260A JPH10147600A (ja) | 1996-09-19 | 1997-09-09 | 生理活性ペプチド及び癌転移抑制剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10147600A true JPH10147600A (ja) | 1998-06-02 |
Family
ID=26536649
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9244260A Pending JPH10147600A (ja) | 1996-09-19 | 1997-09-09 | 生理活性ペプチド及び癌転移抑制剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH10147600A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6620834B1 (en) | 1999-07-02 | 2003-09-16 | Hisamitsu Pharmaceutical Co., Inc. | Medicinal compositions for treating colorectal cancer |
| WO2012124641A1 (ja) | 2011-03-11 | 2012-09-20 | 学校法人東京理科大学 | 抗癌剤の活性増強剤 |
| WO2015194643A1 (ja) * | 2014-06-18 | 2015-12-23 | 学校法人東京理科大学 | Ｐｄｇｆ依存性細胞増殖抑制剤、ｐｄｇｆ依存性細胞増殖の抑制方法、細胞分散抑制剤、細胞分散の抑制方法、テモゾロミド活性増強剤及び抗腫瘍剤 |
-
1997
- 1997-09-09 JP JP9244260A patent/JPH10147600A/ja active Pending
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6620834B1 (en) | 1999-07-02 | 2003-09-16 | Hisamitsu Pharmaceutical Co., Inc. | Medicinal compositions for treating colorectal cancer |
| WO2012124641A1 (ja) | 2011-03-11 | 2012-09-20 | 学校法人東京理科大学 | 抗癌剤の活性増強剤 |
| US9327013B2 (en) | 2011-03-11 | 2016-05-03 | Tokyo University Of Science Foundation | Activity enhancer for anticancer agent |
| WO2015194643A1 (ja) * | 2014-06-18 | 2015-12-23 | 学校法人東京理科大学 | Ｐｄｇｆ依存性細胞増殖抑制剤、ｐｄｇｆ依存性細胞増殖の抑制方法、細胞分散抑制剤、細胞分散の抑制方法、テモゾロミド活性増強剤及び抗腫瘍剤 |
| JPWO2015194643A1 (ja) * | 2014-06-18 | 2017-04-20 | 学校法人東京理科大学 | Ｐｄｇｆ依存性細胞増殖抑制剤、ｐｄｇｆ依存性細胞増殖の抑制方法、細胞分散抑制剤、細胞分散の抑制方法、テモゾロミド活性増強剤及び抗腫瘍剤 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
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| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20070619 |