JPH1014565A - 造血幹細胞濃縮材、造血幹細胞濃縮フィルターおよび造血幹細胞濃縮方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 細胞集団からの造血幹細胞の選択的濃縮を、
医療現場において安全、安価、簡便にしかも実用レベル
の回収率で実施できる、造血幹細胞の濃縮材、濃縮フィ
ルター及び濃縮方法を提供する。 【解決手段】 平均繊維径１．０μｍ以上１０．０μｍ
以下の繊維塊からなることを特徴とする造血幹細胞濃縮
材。平均繊維径１．０μｍ以上１０．０μｍ以下の繊維
塊を液体流入口と液体流出口を有する容器に充填したこ
とを特徴とする造血幹細胞濃縮フィルター。細胞液の全
処理白血球数と繊維塊を充填したフィルターの繊維表面
積比が１×１０⁶ 個／ｍ² 以上２×１０⁸ 個／ｍ² 以下
になる様に細胞液を調製し、該フィルターに該細胞液を
導入した後、該フィルターに洗液を注入して造血幹細胞
を回収することを特徴とする造血幹細胞濃縮方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、骨髄あるいは末梢血な
どの、赤血球、造血幹細胞および／または造血前駆細胞
（以下、「造血幹細胞」と言う）、リンパ球、単球、顆
粒球等を含む細胞集団から造血幹細胞を選択的に濃縮
（ここで言う濃縮とは、全細胞中における造血幹細胞含
有率増加のことである）する材料、該材料を用いたフィ
ルター及び該フィルターを用いた造血幹細胞濃縮方法に
関する。

【０００２】

【従来の技術】白血病などの造血器腫瘍及び固形癌の化
学療法における副作用である造血障害に対して、骨髄移
植療法が広く施行されている。骨髄移植療法とは、移植
骨髄による致死的造血障害の回復法であるため、患者に
とって致死的な大量放射線及び／または大量化学療法
（以下、「大量化学療法」と言う）の施行が可能とな
り、白血病や固形癌の治療につながる。また、近年、骨
髄と同様に末梢血中にも、これらの治療に必要な造血幹
細胞が含まれていることが明らかになった。通常、造血
幹細胞の末梢血中での含有率はかなり低値であり、採取
して骨髄移植の代わりに用いることは困難であるが、抗
癌剤及び／またはＧ−ＣＳＦ（顆粒球コロニー刺激因
子）等のサイトカインを投与することにより、その含有
率が増大することが明らかにされ、骨髄採取と比べる
と、全身麻酔が不要で安全なことから、さかんに臨床応
用が行われている。更に近年、臍帯血中には末梢血より
もはるかに高濃度で造血幹細胞が含有されていることが
明らかになり、臨床応用が始まった。以下、本明細書で
は末梢血、臍帯血を用いる移植も、骨髄移植という語で
代表させることにする。

【０００３】ここで、移植法は細胞を誰から得るかによ
って同種移植と自家移植に分けられる。前者は健康な他
人（血縁者または非血縁者）の細胞を用いるもので、後
者は患者本人の細胞を用いるものである。同種移植（臍
帯血を用いる場合を除く）が主に移植当日（大量化学療
法後）に細胞が採取され、すぐに移植されることが多い
のに対し、自家移植においては大量化学療法前に患者自
身の細胞を採取して造血幹細胞分画に濃縮して凍結保存
し、その後、大量化学療法を行い、凍結保存しておいた
細胞を解凍後、移植する事が通常行われる。また、臍帯
血を用いる同種移植の場合は、出産によって得られる臍
帯から採取した臍帯血を、前述した自家移植と同様、造
血幹細胞分画に濃縮して凍結保存し、大量化学療法後に
解凍して移植することが行われる。ここで、凍結保存に
際し、造血幹細胞濃縮が行われるのは、解凍時の破壊赤
血球の輸注による腎障害等の副作用を防止するととも
に、混入顆粒球による凝集を防止するためである。更に
近年、モノクローナル抗体固定器具を用いて更なる細胞
分離（目的：同種移植においては合併症の原因となる細
胞の除去、自家移植においてはＣＤ３４陽性造血幹細胞
の選択的採取など）を行うことが盛んに検討され始めて
いるが、このような細胞分離においては前処理として造
血幹細胞濃縮が必須である。

【０００４】造血幹細胞濃縮の方法は、通常、密度勾配
遠心法と呼ばれる比重液（例えば、ファルマシア社製Ｆ
ｉｃｏｌｌ）を用いた遠心分離法が用いられる。該方法
は非常に煩雑で処理時間が長く、比重液に細胞浮遊液を
重層する際に決して液面を乱してはならないなど、非常
に熟練を要する。また、比重液を用いることから、コス
ト高である。更に、細胞浮遊液重層操作はクリーンベン
チ内で行われるが、開放系であるため、細胞による汚染
が危惧されている。上記方法の煩雑さを克服するため
に、多くの試みがなされている（例えば、特開昭６１−
８４５５７、特開平２−１３４５６４など多数）。しか
しながら、これらも、比重液と遠心分離器を用いる点で
は何ら従来法と変わらず、簡便、低コスト、処理時間が
短く、閉鎖系の造血幹細胞濃縮システムが待望されてい
た。また、従来の方法では、血小板、単球を効率良く除
去することはできない。これらの細胞も顆粒球と同様、
凝集の原因となることから、これらの細胞の簡便かつ有
効な除去法が待望されていた。更に、従来法では比重で
細胞を分離するので、造血幹細胞と比重が同じであるリ
ンパ球を除去することは全く不可能であった。ところ
で、特開昭５４−１１９０５には白血球を捕捉するフィ
ルターで、白血球と他の血球を分離した後、上記フィル
ターに捕捉された白血球を回収し、次にこの白血球以外
の成分の細胞が少ない白血球浮遊液を、顆粒球、単球を
捕捉するフィルターに通し、顆粒球、単球を除去し、リ
ンパ球以外の成分の少ないリンパ球浮遊液を得る方法が
開示されている。しかしながら、同公報では造血幹細胞
の記述はない。そして、同公報で達成しようとしている
技術は、リンパ球の組成をなるべく変えることなく回収
する方法であり、リンパ球の除去は最小限に抑えられて
いる。したがって、同公報に記載の技術では造血幹細胞
を濃縮することは困難である。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、医療現場に
おいて安価、簡便に用いることができ、かつ、実用レベ
ルの回収率が維持されている造血幹細胞の濃縮材、濃縮
フィルター及び濃縮方法を提供することを課題とする。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは上記の課題
を解決するため鋭意研究を重ねた結果、医療用途に汎用
されている繊維塊のうち特定繊維径のものが造血幹細胞
を効果的に濃縮できることを見出し、更に特定の細胞数
と繊維表面積の比率を選択することにより、その濃縮性
能が向上することを見出し、本発明を完成するに至っ
た。即ち、本発明は平均繊維径１．０μｍ以上１０．０
μｍ以下の繊維塊からなる造血幹細胞濃縮材に関する。
また、該繊維塊を液体流入口と液体流出口を有する容器
に封入した造血幹細胞濃縮フィルターに関する。更に、
全処理白血球数と該フィルターの繊維塊表面積比が１×
１０⁶ 個／ｍ² 以上２×１０⁸ 個／ｍ² 以下になる様に
細胞液を調製し、該フィルターに該細胞液を導入した
後、該フィルターに洗液を注入して造血幹細胞を回収す
ることを特徴とする造血幹細胞濃縮方法に関する。

【０００７】本発明に用いる繊維塊は平均繊維径１．０
μｍ以上１０．０μｍ以下である。繊維径が１．０μｍ
未満では捕捉した造血幹細胞の選択的回収が困難とな
り、１０．０μｍを超えると造血幹細胞の捕捉が困難と
なり、造血幹細胞の損失が大となる。その結果、いずれ
の場合でも造血幹細胞濃縮の特異性が低下する。更に好
ましくは１．４μｍ以上７．０μｍ以下、望ましくは
２．０μｍ以上７．０μｍ以下である。本発明による繊
維塊の形態としては繊維、多孔質体及び多孔膜体、不織
布等があげられるが、単位表面積が大きく、操作の簡便
さより不織布が好ましい。本発明による繊維塊の素材と
しては、水不溶性であればいかなる材質も使用可能であ
るが、成型性や、医療用具として必要な滅菌時の安定
性、安全性を考慮し、好ましいものを例示すると、ポリ
エステル、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレ
ン、ナイロン、セルロース等があげられるが、これらに
限定されるものではない。更に、本発明の繊維塊に、細
胞回収率の向上、細胞浮遊液の流れ性向上を目的とし
て、親水性官能器による表面修飾で親水性を表面に付与
することが好ましい。表面修飾法を例示すると、共有結
合、イオン結合、コーティング、放射線グラフト等があ
げられるが、これらに限定されるものではない。親水性
官能器の例を示すと、繰り返し単位が２〜１００のポリ
エチレングリコール鎖、水酸基、アミド基、エーテル
基、エステル基等があえられるが、これらに限定される
ものではない。具体的には特開昭５５−１２９７５５で
開示されている繊維表面に抗血栓性材料をコートしたフ
ィルターを用いる方法、ＷＯ８７／０５８１２で開示さ
れている、繊維に非イオン性親水基と塩基性含窒素官能
基を含有するフィルターを用いる方法などがある。本発
明に用いる原料細胞液としては、骨髄、末梢血、臍帯血
あるいはこれらを遠心分離基により粗分離したものがあ
げられる。本発明に用いるフィルター容器としては液体
流入口と液体流出口を有するものであればよく、市販の
血液バッグ、シリンジなどがあげられるが、濃縮した造
血幹細胞を臨床用途で用いるには、滅菌可能なものが好
ましい。

【０００８】本発明による造血幹細胞濃縮方法は、全処
理白血球数と上記の繊維塊を充填したフィルターの繊維
表面積比が１×１０⁶ 個／ｍ² 以上２×１０⁸ 個／ｍ²
以下になる様に細胞浮遊液を調製し、該フィルターに該
細胞液を導入する。全白血球数とフィルター表面積１ｍ
² 当たりの比が２×１０⁸ 個を越えると、回収細胞液に
単球、顆粒球、Ｂリンパ球、ＮＫ細胞が混入してくるた
め、造血幹細胞濃縮の特異性が低下する。この理由は明
らかではないが、本発明者らは、繊維塊表面に粘着した
造血幹細胞が他の細胞（単球、顆粒球、Ｂリンパ球、Ｎ
Ｋ細胞）と凝集塊を形成するためと推測している。ま
た、１×１０⁶ 個／ｍ² 未満では造血幹細胞濃縮は認め
られるものの、造血幹細胞の損失（絶対数の減少）が多
くなり好ましくない。即ち、本発明の全白血球数とフィ
ルターの表面積比は、１×１０⁶ 個／ｍ² 以上２×１０
⁸ 個／ｍ² 以下、好ましくは１×１０⁷ 個／ｍ² 以上１
×１０⁸ 個／ｍ² 以下、より好ましくは２×１０⁷ 個／
ｍ² 以上１×１０⁸ 個／ｍ²以下である。原料細胞液か
ら調製した細胞浮遊液をフィルターに注入すると、赤血
球は該フィルターから流出するが、造血幹細胞を含有す
る白血球分画はフィルター内に保持される。しかしなが
ら若干の赤血球がフィルター内に残存することがあるの
で、洗液を導入し、残存赤血球を洗い流すことが好まし
い。次にフィルターに洗液をシリンジなどで勢い良く注
入して造血幹細胞を回収する。ここで、造血幹細胞以外
の細胞は、フィルター内に保持されてほとんど出てこな
い。フィルター内への洗液の注入は入口側から、あるい
は出口側からのいずれでも良いが、出口側から注入した
場合、造血幹細胞の回収率が良く、入口側から注入した
場合、造血幹細胞の純度が良い傾向があるが、その理由
は明らかではない。また、シリンジで、洗液を吸引する
ことでも細胞を回収することができる。洗液としては生
理食塩水、ハンクス液（ＨＢＳＳ）、ダルベッコリン酸
緩衝液（Ｄ−ＰＢＳ）などの緩衝液に、必要に応じてヒ
ト血清アルブミンなどの蛋白あるいはＡＣＤ（Ａｃｉｄ
−Ｃｉｔｒａｔｅ−Ｄｅｘｔｒｏｓｅ）などの抗凝固剤
を添加したものが用いられる。なお、ここで注入する洗
液量はフィルター内容積の２分の１以上２００倍以下が
好ましい。ここで、２分の１未満では造血幹細胞の回収
が充分ではなく、また２００倍を超えると、膨大な洗液
量のため造血幹細胞の濃度が大幅に低下するため、遠心
分離等で濃縮を行う際に大幅な細胞ロスを生じる危険性
があるため好ましくない。また、より好ましくは１以上
１００倍以下である。本発明により造血幹細胞が濃縮さ
れた細胞集団は、遠心分離等、必要な操作を加えた後、
患者に輸注されるか、また、凍結保存可能な容器に充填
され、凍害防止剤等を添加して凍結保存された後、患者
に輸注されるか、あるいは何らかの更なる細胞処理（モ
ノクローナル抗体を用いた精密分離等）を施された後、
保存または輸注される。更に、本発明の用途としては前
述した骨髄移植に限らず、養子免疫療法、遺伝子治療の
細胞ソースの調製等、幅広い用途がある。

【０００９】

【実施態様】以下に実施例で本発明を詳細に説明する
が、本発明はこれらにより限定されるものではない。

【００１０】

【実施例１】 フィルター 有効濾過部寸法２．１５×２．１５ｃｍのハウジングに
平均繊維径２．３μｍ（電子顕微鏡による測定）のポリ
エステル不織布を表面積１．０ｍ² 、寸法が１．８×
１．８ｃｍとなるように切断して充填した。このフィル
ターに親水性を付与する目的で、ヒドロキシエチルメタ
クリレートとジメチルアミノエチルメタクリレートのモ
ノマーをモル組成比９７：３にて、通常のラジカル重合
したポリマー（以下ＨＭ−３と称す）をエタノールに１
ｗｔ％となるように溶解した溶液を注入後、窒素ガスに
より乾燥させてコーティングとした。酸化エチレンガス
滅菌を行い、実験用フィルターとした。このフィルター
嵩密度は０．２ｇ／ｃｍ³ であった。 実験用検体 化学療法及びＧ−ＣＳＦ投与後の悪性腫瘍患者からＣＯ
ＢＥ社製「Ｓｐｅｃｔｒａ」成分採血装置を用いて常法
により末梢血幹細胞を含む末梢血を採取し、ＡＣＤ−Ａ
液２０ｍｌに浮遊させたものを実験用検体とした。な
お、本検体は白血球濃度５．０×１０⁵ 個／ｍｌ、白血
球数１．０×１０⁷ 個、白血球中の造血幹細胞含有率
（ＣＤ３４陽性細胞をフローサイトメーターにより測
定）１．３％であった。この時の全処理白血球数と繊維
表面積比は１．０×１０⁷ 個／ｍ² であった。 濃縮操作及び結果 実験用検体をシリンジポンプにて５ｍｌ／ｍｉｎでフィ
ルターの入口側から注入し、出口側から流出した赤血球
含有液をコニカルチューブで回収した。その後生理食塩
水２５ｍｌを５ｍｌ／ｍｉｎで入口側から注入し、フィ
ルター内の残存赤血球を前述のコニカルチューブに洗い
流した。次にフィルターの入口側と出口側を逆にして、
生理食塩水６０ｍｌをフィルターの出口側からペリスタ
ーポンプを用いて５０ｍｌ／ｍｉｎで注入し、入口側か
ら流出した造血幹細胞含有液を別のコニカルチューブに
て回収した。本操作により、白血球数１．６×１０⁶
個、白血球中の造血幹細胞含有率５．５％となった。ま
た、細胞回収率＝１００×フィルター処理後／フィルタ
ー処理前細胞数として各細胞の回収率を算出したとこ
ろ、造血幹細胞回収率は６７．７％となり、高率に造血
幹細胞が回収されていた。更に、造血幹細胞濃縮倍率＝
処理後の造血幹細胞含有率／処理前の造血幹細胞含有率
として、造血幹細胞濃縮倍率を計算すると、約４．２倍
となり、造血幹細胞が効率よく濃縮されたことが明らか
になった。

【００１１】

【実施例２】 フィルター 実施例１と同一のフィルターを用いた。 実験用検体 健常人から常法により採取した２００ｍｌの末梢全血を
遠沈管に入れ、日立社製遠心分離器ＣＲ７Ｂ３により３
５００ｒｐｍで５分間、遠心分離を行った。上層の血漿
層をピペットで廃棄した後、ピペットでバフィーコート
層を採取した。なお、このバフィーコートの性状は赤血
球数２．１×１０¹¹個、白血球数５．０×１０⁸ 個、血
小板数１．４×１０¹¹個であった（自動血球計算器にて
測定）。このバフィーコートをＡＣＤ−Ａ液で、全処理
白血球数と繊維表面積の比が１．４×１０⁸ 個／ｍ² と
なるように希釈して実験用検体とした。なお、本実験用
検体は赤血球数７．０×１０¹⁰個、血小板数４．２×１
０¹⁰個、白血球数１．４×１０⁸ 個、（以上、自動血球
計算器にて測定）、白血球亜分画では顆粒球４９％、単
球８％、リンパ球４３％（塗沫標本を検鏡で測定）、白
血球中の造血幹細胞含有率０．３％（ＣＤ３４陽性細胞
をフローサイトメーターにより測定）であった。 濃縮操作及び結果 実施例１と同様な操作を行った。得られた造血幹細胞含
有液の性状は赤血球数３．９×１０⁸ 個、血小板数１．
３×１０⁸ 個、白血球数４．０×１０⁷ 個、白血球亜分
画では顆粒球１８％、単球２％、リンパ球８０％、白血
球中の造血幹細胞含有率１．０％となった。実施例１と
同様に造血幹細胞濃縮倍率を計算したところ３．０倍と
なり、造血幹細胞が効率よく濃縮されていることが分か
った。また各細胞の回収率を計算したところ、赤血球回
収率０．５５％、血小板回収率０．３０％、顆粒球回収
率１０．５％、単球回収率７．１％、リンパ球回収率５
３．２％、造血幹細胞回収率９５．２％となり、他の細
胞に比して造血幹細胞が高率に回収できていることが明
らかになった。

【００１２】

【実施例３】 フィルター 実施例１のフィルターでＨＭ−３未コートのものを用い
た。 実験用検体 実施例２と同様の検体を用いた。全処理白血球数と繊維
表面積比は１．４×１０⁸ 個／ｍ² であった。 濃縮操作及び結果 実施例１と同様な操作を行った。得られた造血幹細胞含
有液の性状は赤血球数４．１×１０⁸ 個、血小板数２．
６×１０⁹ 個、白血球数２．７×１０⁷ 個、白血球亜分
画では顆粒球２８％、単球４％、リンパ球６８％、白血
球中の造血幹細胞含有率１．５％であった。実施例１と
同様に造血幹細胞濃縮倍率を計算したところ５．０倍と
なり、造血幹細胞が効率よく濃縮されていることが分か
った。また各細胞の回収率を計算したところ、赤血球回
収率０．６０％、血小板回収率６．２％、顆粒球回収率
１１％、単球回収率９．６％、リンパ球回収率３０．５
％、造血幹細胞回収率９６．４％となった。実施例２と
比べると血小板の混入率が若干高く、また回収白血球数
が若干低かった。これは本実施例ではＨＭ−３をコート
していないフィルターを用いたためと考えられる。以上
の結果より、本フィルターを用いると造血幹細胞を高率
に濃縮することが可能となることが分かる。また、各種
細胞回収率の値において、顆粒球、単球の回収率に比
し、リンパ球回収率が高く、更に、リンパ球回収率に比
し造血幹細胞回収率が高いことから、本条件では顆粒
球、単球とリンパ球の分離における差別化はもちろん、
従来、困難であったリンパ球と造血幹細胞の分離におけ
る差別化も達成していることが分かる。

【００１３】

【実施例４】 フィルター 不織布の繊維径を７．０μｍとする以外は実施例１と同
様のフィルターを用いた。 実験用検体 実施例２と同様の検体を用いた。全処理白血球数と繊維
表面積比は１．４×１０⁸ 個／ｍ² であった。 濃縮操作及び結果 実施例１と同様な操作を行った。得られた造血幹細胞含
有液の性状は赤血球数３．９×１０⁸ 個、血小板数２．
２×１０⁸ 個、白血球数２．０×１０⁷ 個、白血球亜分
画では顆粒球２５％、単球３％、リンパ球７２％、白血
球中の造血幹細胞含有率１．８％となった。実施例１と
同様に造血幹細胞濃縮倍率を計算したところ６．０倍と
なり、造血幹細胞が効率よく濃縮されていることが分か
った。また各細胞の回収率を計算したところ、赤血球回
収率０．５６％、血小板回収率５．２％、顆粒球回収率
７．２％、単球回収率５．５％、リンパ球回収率２３
％、造血幹細胞回収率８５．７％となった。実施例２と
比べると造血幹細胞回収率が若干低いが、これは捕捉さ
れた造血幹細胞の回収率が実施例２より低かったのでは
なく、実施例２よりも繊維径が若干太いため、最初の注
入時及び残存赤血球の洗流の際に、造血幹細胞が漏出し
たためであると考えた。

【００１４】

【比較例１】全処理白血球数と繊維表面積比を４．６×
１０⁸ 個／ｍ² とする以外は実施例２と同様な実験を行
った。なお、本実験用検体は赤血球数４．６×１０
¹¹個、血小板数１．４×１０¹¹個、白血球数４．６×１
０⁸ 個、白血球亜分画では顆粒球４５％、単球１０％、
リンパ球４５％、白血球中の造血幹細胞含有率０．３５
％であった。得られた造血幹細胞含有液の性状は赤血球
数２．３×１０¹⁰個、血小板数９．４×１０⁹ 個、白血
球数２．０×１０⁸ 個、白血球亜分画では顆粒球４７
％、単球８％、リンパ球４５％、白血球中の造血幹細胞
含有率０．４２％となった。実施例１と同様に造血幹細
胞濃縮倍率を計算したところ１．２倍と低値であった。
また各細胞の回収率を計算したところ、赤血球回収率
５．０％、血小板回収率６．７％、顆粒球回収率４５．
７％、単球回収率３４．８％、リンパ球回収率４６．６
％、造血幹細胞回収率５２．２％となり、造血幹細胞の
回収率は比較的高かったものの、他の細胞の混入も多
く、幹細胞移植のためには更に何らかの方法で、造血幹
細胞の含有率を高めてやる必要がある。これは、全処理
白血球数と繊維表面積比が４．６×１０⁸ 個／ｍ² と高
く、造血幹細胞が粘着性の強い顆粒球、単球、Ｂリンパ
球、ＮＫ細胞と凝集塊を形成したためと考えた。

【００１５】

【比較例２】不織布の繊維径を３３μｍとし、フィルタ
ー嵩密度は０．２０ｇ／ｃｍ³ とする以外は実施例２と
同様な実験を行った。なお、本実験用検体の性状は赤血
球数５．５×１０⁹ 個、血小板数２．３×１０⁹ 個、白
血球数３．７×１０⁷ 個、白血球亜分画では顆粒球４４
％、単球８％、リンパ球４８％、白血球中の造血幹細胞
含有率０．２２％であり、全処理白血球数とフィルター
繊維の表面積比は１．２×１０⁸ 個／ｍ² であった。得
られた造血幹細胞含有液の性状は赤血球数１．７×１０
⁶ 個、血小板数１．６×１０⁶ 個、白血球数３．１×１
０⁶ 個、白血球亜分画では顆粒球３０％、単球８％、リ
ンパ球６２％、白血球中の造血幹細胞含有率０．３９％
であり、造血幹細胞濃縮倍率は１．７倍と低値であっ
た。また各細胞の回収率を計算したところ、赤血球回収
率０．０３％、血小板回収率０．０７％、顆粒球回収率
５．７％、単球回収率８．４％、リンパ球回収率１０．
８％、造血幹細胞回収率１４．８％となり、顆粒球、単
球とリンパ球の回収率に、さらにはリンパ球と造血幹細
胞の回収率には大差が無かったことが低濃縮倍率の原因
と考えた。また、全体的に、白血球回収率が低値である
のは繊維径が３３．０μｍと太いため、白血球の捕捉が
不十分であったためと考えた。

【００１６】

【比較例３】不織布の繊維径を０．５μｍとする以外は
実施例２と同様な実験を行った。なお、本実験用検体の
性状は赤血球数６．７×１０¹⁰個、血小板数３．３×１
０¹⁰個、白血球数４．６×１０⁷ 個、白血球亜分画では
顆粒球４３％、単球７％、リンパ球５０％、白血球中の
造血幹細胞含有率０．３３％であり、全処理白血球数と
フィルター繊維の表面積比は４．６×１０⁷ 個／ｍ² で
あった。得られた造血幹細胞含有液の性状は赤血球数
５．４×１０⁹ 個、血小板数９．９×１０⁸ 個、白血球
数２．８×１０⁶ 個、白血球亜分画では顆粒球３０％、
単球９％、リンパ球６１％、白血球中の造血幹細胞含有
率０．６３％であり、造血幹細胞濃縮倍率は１．９０倍
であった。また各細胞の回収率を計算したところ、赤血
球回収率８．０％、血小板回収率３．０％、顆粒球回収
率４．２％、単球回収率７．８％、リンパ球回収率７．
４％、造血幹細胞回収率１１．６％となり、造血幹細胞
の低回収率が低濃縮倍率の原因と考えた。これは繊維径
が０．５μｍと細いため、捕捉された造血幹細胞が回収
時にも捕捉されたままで充分に回収できなかったためと
考えた。

【００１７】

【実施例５】白血球処理細胞数と繊維表面積比を７．０
×１０⁶ 個／ｍ² とする以外は実施例２と同様な実験を
行った。なお、本実験用検体は赤血球数２．３×１０¹¹
個、血小板数７．０×１０¹⁰個、白血球数２．３×１０
⁸ 個、白血球亜分画では顆粒球４５％、単球１０％、リ
ンパ球４５％、白血球中の造血幹細胞含有率０．３５％
であった。得られた造血幹細胞含有液の性状は赤血球数
１．１×１０¹⁰個、血小板数４．７×１０⁹ 個、白血球
数８．０×１０⁷ 個、白血球亜分画では顆粒球２７％、
単球４％、リンパ球６９％、白血球中の造血幹細胞含有
率１．１％となった。実施例１と同様に造血幹細胞濃縮
倍率を計算したところ約３．１倍となった。また各細胞
の回収率を計算したところ、赤血球回収率４．８％、血
小板回収率６．７％、顆粒球回収率５．３％、単球回収
率３．５％、リンパ球回収率１３．３％、造血幹細胞回
収率３４．７％となり、造血幹細胞の濃縮倍率は高かっ
たものの、造血幹細胞の回収率が若干低かった。表１に
実施例１〜５、比較例１〜３のまとめを示す。 実験３以外はＨＭ−３コート有り

【００１８】

【発明の効果】以上示したように、本発明による造血幹
細胞の濃縮方法は、安価、簡便かつ効果的に造血幹細胞
を濃縮することができ、更に、回収率も実用レベルを維
持しているので、安全性の向上した、かつ省力化された
骨髄移植を臨床現場において実現することが可能とな
る。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 平均繊維径１．０μｍ以上１０．０μｍ
   以下の繊維塊からなることを特徴とする造血幹細胞濃縮
   材。
2. 【請求項２】 平均繊維径１．０μｍ以上１０．０μｍ
   以下の繊維塊を液体流入口と液体流出口を有する容器に
   充填したことを特徴とする造血幹細胞濃縮フィルター。
3. 【請求項３】 細胞液の全処理白血球数と繊維塊を充填
   したフィルターの繊維表面積比が１×１０⁶ 個／ｍ² 以
   上２×１０⁸ 個／ｍ² 以下になる様に細胞液を調製し、
   該フィルターに該細胞液を導入した後、該フィルターに
   洗液を注入して造血幹細胞を回収することを特徴とする
   造血幹細胞濃縮方法。