JPH10104230A - 核酸等の検出方法，並びに標識物質及び検出物質 - Google Patents
核酸等の検出方法，並びに標識物質及び検出物質Info
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- JPH10104230A JPH10104230A JP8280066A JP28006696A JPH10104230A JP H10104230 A JPH10104230 A JP H10104230A JP 8280066 A JP8280066 A JP 8280066A JP 28006696 A JP28006696 A JP 28006696A JP H10104230 A JPH10104230 A JP H10104230A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 アイソトープ法の安全上の欠点を解消し，検
出感度に優れた，核酸等の検出方法，並びに標識物質及
び検出物質を提供する。 【解決手段】 核酸，蛋白質等の被検体に，リンカーと
ハプテンとを有する標識物質を結合する。標識物質にお
けるハプテンに，抗ハプテン抗体を有し且つシグナルを
発生し得る検出物質を結合する。検出物質よりシグナル
を発生させ，該シグナルを検出する。ハプテンは，ジベ
レリン又はその誘導体である。リンカーは，原子数が１
０以上であり且つ直鎖状に配列した原子鎖を有する。検
出物質は，抗ハプテン抗体と結合してなり，且つシグナ
ル発生基質との反応により該シグナル発生基質よりシグ
ナルを発生させ得る酵素であること，又は自らシグナル
を発生し得るシグナル発生化合物であることが好まし
い。
出感度に優れた，核酸等の検出方法，並びに標識物質及
び検出物質を提供する。 【解決手段】 核酸，蛋白質等の被検体に，リンカーと
ハプテンとを有する標識物質を結合する。標識物質にお
けるハプテンに，抗ハプテン抗体を有し且つシグナルを
発生し得る検出物質を結合する。検出物質よりシグナル
を発生させ，該シグナルを検出する。ハプテンは，ジベ
レリン又はその誘導体である。リンカーは，原子数が１
０以上であり且つ直鎖状に配列した原子鎖を有する。検
出物質は，抗ハプテン抗体と結合してなり，且つシグナ
ル発生基質との反応により該シグナル発生基質よりシグ
ナルを発生させ得る酵素であること，又は自らシグナル
を発生し得るシグナル発生化合物であることが好まし
い。
Description
【０００１】
【技術分野】本発明は，分子生物学，生化学などの基礎
研究分野，臨床検査，環境中微生物の検出等の応用分野
において利用できる，核酸等の検出方法並びに，その検
出において用いる標識物質及び検出物質に関する。
研究分野，臨床検査，環境中微生物の検出等の応用分野
において利用できる，核酸等の検出方法並びに，その検
出において用いる標識物質及び検出物質に関する。
【０００２】
【従来技術】医学，生物学の分野においては，近年，核
酸断片検出法により，核酸配列を検出する方法が多用さ
れている。現在，広く用いられている検出方法として
は，核酸プローブを放射性同位元素を用いて標識し，こ
れと標的核酸とをハイブリダイズさせ，しかる後にオー
トラジオグラフィにより標的核酸の検出を行うアイソト
ープ法がある。
酸断片検出法により，核酸配列を検出する方法が多用さ
れている。現在，広く用いられている検出方法として
は，核酸プローブを放射性同位元素を用いて標識し，こ
れと標的核酸とをハイブリダイズさせ，しかる後にオー
トラジオグラフィにより標的核酸の検出を行うアイソト
ープ法がある。
【０００３】しかし，アイソトープ法には，多くの欠点
がある。その欠点とは， アイソトープにより映しだされた像はぼやけることが
あり，空間的解像力が低い。そのため，核酸ハイブリダ
イゼーションにおいて，近接した遺伝子同志が重なって
みえてしまい，遺伝子間の相対的位置関係を明らかにす
ることができない場合がある。 放射性同位体は放射能漏れのおそれがあるため，放射
能漏れを防止するための特別の設備を備えたアイソトー
プ実験室の中でしか実験できない。 人体が受ける影響が大きい。
がある。その欠点とは， アイソトープにより映しだされた像はぼやけることが
あり，空間的解像力が低い。そのため，核酸ハイブリダ
イゼーションにおいて，近接した遺伝子同志が重なって
みえてしまい，遺伝子間の相対的位置関係を明らかにす
ることができない場合がある。 放射性同位体は放射能漏れのおそれがあるため，放射
能漏れを防止するための特別の設備を備えたアイソトー
プ実験室の中でしか実験できない。 人体が受ける影響が大きい。
【０００４】検出時間が数週間から数カ月と非常に長
いため，迅速臨床診断への応用が困難である。 放射性同位体の放射活性は，一定の半減期をもって減
衰するため，放射性同位体の購入予定に合わせた実験計
画をたてる必要がある。また，わずかな日程のずれによ
って，放射性同位体や大規模な実験成果を無駄にするお
それがある。 放射性同位体は，極めて高価である。
いため，迅速臨床診断への応用が困難である。 放射性同位体の放射活性は，一定の半減期をもって減
衰するため，放射性同位体の購入予定に合わせた実験計
画をたてる必要がある。また，わずかな日程のずれによ
って，放射性同位体や大規模な実験成果を無駄にするお
それがある。 放射性同位体は，極めて高価である。
【０００５】かかる背景からアイソトープ法に代わる，
核酸プローブへの標識法が，従来，開発されている。例
えば，ＤＮＡラベリングキット（ベーリンガー社製）
は，ハプテンとしてディゴキシゲニンを用いている
（Ｋ．Ｍｕｈｌｅｇｇｅｒ ｅｔ．ａｌ．，Ｂｉｏｌ．
Ｃｈｅｍ．Ｈｏｐｐｅ−Ｓｅｙｌｅｒ，３７１，９５３
（１９９０））。しかし，上記ＤＮＡラベリングキット
の検出感度は４０ｆｇ（４×１０-14 ｇ）ＤＮＡであ
り，アイソトープ法の検出感度に比べて劣っている。
核酸プローブへの標識法が，従来，開発されている。例
えば，ＤＮＡラベリングキット（ベーリンガー社製）
は，ハプテンとしてディゴキシゲニンを用いている
（Ｋ．Ｍｕｈｌｅｇｇｅｒ ｅｔ．ａｌ．，Ｂｉｏｌ．
Ｃｈｅｍ．Ｈｏｐｐｅ−Ｓｅｙｌｅｒ，３７１，９５３
（１９９０））。しかし，上記ＤＮＡラベリングキット
の検出感度は４０ｆｇ（４×１０-14 ｇ）ＤＮＡであ
り，アイソトープ法の検出感度に比べて劣っている。
【０００６】本発明はかかる従来の問題点に鑑み，アイ
ソトープ法の安全上の欠点を解消し，検出感度に優れ
た，核酸等の検出方法，並びに標識物質及び検出物質を
提供しようとするものである。
ソトープ法の安全上の欠点を解消し，検出感度に優れ
た，核酸等の検出方法，並びに標識物質及び検出物質を
提供しようとするものである。
【０００７】
【課題の解決手段】請求項１の発明は，核酸，蛋白質等
の被検体に，リンカーとハプテンとを有する標識物質を
結合し，次いで，上記標識物質におけるハプテンに，抗
ハプテン抗体を有し且つシグナルを発生し得る検出物質
を結合し，次いで，上記検出物質よりシグナルを発生さ
せ，該シグナルを検出する，核酸等の検出方法であっ
て，上記ハプテンは，ジベレリン又はその誘導体であ
り，上記リンカーは，原子数が１０以上であることを特
徴とする核酸等の検出方法である。
の被検体に，リンカーとハプテンとを有する標識物質を
結合し，次いで，上記標識物質におけるハプテンに，抗
ハプテン抗体を有し且つシグナルを発生し得る検出物質
を結合し，次いで，上記検出物質よりシグナルを発生さ
せ，該シグナルを検出する，核酸等の検出方法であっ
て，上記ハプテンは，ジベレリン又はその誘導体であ
り，上記リンカーは，原子数が１０以上であることを特
徴とする核酸等の検出方法である。
【０００８】本発明において最も注目すべきことは，核
酸等の被検体に，リンカーとハプテンとを有する標識物
質を結合させることである。
酸等の被検体に，リンカーとハプテンとを有する標識物
質を結合させることである。
【０００９】次に，本発明の作用及び効果について説明
する。本発明において，上記リンカーは，ハプテンと被
検体との間を連結する連結材である。リンカーは，原子
数が１０以上である。そのため，リンカーは長い構造を
有していることとなる。それ故，被検体とハプテンとの
距離を十分に離すことができる。そのため，抗ハプテン
抗体は，ハプテンとの抗原抗体反応により結合する際
に，被検体による立体障害を受けにくくなり，ハプテン
と接触する機会が多くなり，結合反応を起こしやすくな
る。
する。本発明において，上記リンカーは，ハプテンと被
検体との間を連結する連結材である。リンカーは，原子
数が１０以上である。そのため，リンカーは長い構造を
有していることとなる。それ故，被検体とハプテンとの
距離を十分に離すことができる。そのため，抗ハプテン
抗体は，ハプテンとの抗原抗体反応により結合する際
に，被検体による立体障害を受けにくくなり，ハプテン
と接触する機会が多くなり，結合反応を起こしやすくな
る。
【００１０】それ故，ハプテンを有する標識物質は，抗
ハプテン抗体を有する検出物質と効率良く結合する。こ
のため，被検体には多量の検出物質が結合することとな
り，検出物質から強いシグナルを発生させることができ
る。従って，従来の非アイソトープ法に比べて優れた検
出感度を発揮することができ，少量の被検体でも十分に
検出することができる。
ハプテン抗体を有する検出物質と効率良く結合する。こ
のため，被検体には多量の検出物質が結合することとな
り，検出物質から強いシグナルを発生させることができ
る。従って，従来の非アイソトープ法に比べて優れた検
出感度を発揮することができ，少量の被検体でも十分に
検出することができる。
【００１１】また，本発明においては，ハプテンとして
ジベレリン又はその誘導体を用いている。ジベレリン又
はその誘導体は，抗ハプテン抗体としての抗ジベレリン
との親和力が大きい。そのため，ハプテンと抗ハプテン
抗体との結合効率が高く，被検体に対して効率よく検出
物質を結合することができる。従って，本発明によれ
ば，検出物質から，強いシグナルを発生させることがで
き，高い検出感度を得ることができる。
ジベレリン又はその誘導体を用いている。ジベレリン又
はその誘導体は，抗ハプテン抗体としての抗ジベレリン
との親和力が大きい。そのため，ハプテンと抗ハプテン
抗体との結合効率が高く，被検体に対して効率よく検出
物質を結合することができる。従って，本発明によれ
ば，検出物質から，強いシグナルを発生させることがで
き，高い検出感度を得ることができる。
【００１２】また，本発明によれば，ＤＮＡ，ＲＮＡ等
の核酸，酵素，ホルモン，ペプチド，蛋白質，糖類，脂
質，ビタミン，細胞，微生物，動植物組織等，生体物質
のあらゆる物質を被検体として検出することができる。
の核酸，酵素，ホルモン，ペプチド，蛋白質，糖類，脂
質，ビタミン，細胞，微生物，動植物組織等，生体物質
のあらゆる物質を被検体として検出することができる。
【００１３】次に，上記ハプテンは，ジベレリンである
ことが好ましく，とりわけ，請求項２の発明のように，
下記の「化１」に示されるジベレリンＡ４であることが
好ましい。これにより，ハプテンと抗ハプテン抗体との
親和力を更に高くすることができる。そのため，上記の
ように被検体に効率よく検出物質を結合させることがで
きる。従って，更に強いシグナルを発生させることがで
き，検出感度を一層高くすることができる。
ことが好ましく，とりわけ，請求項２の発明のように，
下記の「化１」に示されるジベレリンＡ４であることが
好ましい。これにより，ハプテンと抗ハプテン抗体との
親和力を更に高くすることができる。そのため，上記の
ように被検体に効率よく検出物質を結合させることがで
きる。従って，更に強いシグナルを発生させることがで
き，検出感度を一層高くすることができる。
【００１４】
【化１】
【００１５】次に，請求項３の発明のように，上記リン
カーは，非環式炭化水素，単環式炭化水素，架橋環式炭
化水素，スピロ炭化水素，環集合炭化水素，及び側鎖を
有する環式炭化水素のグループから選ばれる１種又は２
種以上からなる炭化水素基を有し，原子数が１０以上で
あり且つ直鎖状に配列した原子鎖を有することが好まし
い。これにより，被検体とハプテンとの距離を離すこと
ができ，ハプテンと抗ハプテン抗体との反応の際におけ
る，被検体による立体障害を更に抑制できる。
カーは，非環式炭化水素，単環式炭化水素，架橋環式炭
化水素，スピロ炭化水素，環集合炭化水素，及び側鎖を
有する環式炭化水素のグループから選ばれる１種又は２
種以上からなる炭化水素基を有し，原子数が１０以上で
あり且つ直鎖状に配列した原子鎖を有することが好まし
い。これにより，被検体とハプテンとの距離を離すこと
ができ，ハプテンと抗ハプテン抗体との反応の際におけ
る，被検体による立体障害を更に抑制できる。
【００１６】次に，請求項４の発明のように，上記炭化
水素基の間は，アルキル，エーテル，アミド，エステ
ル，アゾ，ニトリル，ニトロ，及びアミノのグループか
ら選ばれる１種又は２種以上の原子団により連結されて
いることが好ましい。これにより，リンカーの中の原子
団の間を直線状に結合でき，リンカーの長さを長くする
ことができる。そのため，ハプテンと抗ハプテン抗体と
の反応の際における，被検体による立体障害を更に抑制
できる。
水素基の間は，アルキル，エーテル，アミド，エステ
ル，アゾ，ニトリル，ニトロ，及びアミノのグループか
ら選ばれる１種又は２種以上の原子団により連結されて
いることが好ましい。これにより，リンカーの中の原子
団の間を直線状に結合でき，リンカーの長さを長くする
ことができる。そのため，ハプテンと抗ハプテン抗体と
の反応の際における，被検体による立体障害を更に抑制
できる。
【００１７】次に，請求項５の発明のように，上記リン
カーは，下記の「化２」の一般式により示されるもので
あることが好ましい。
カーは，下記の「化２」の一般式により示されるもので
あることが好ましい。
【００１８】
【化２】
【００１９】これにより，リンカーの全体長さを長くす
ることができる。そのため，ハプテンと抗ハプテン抗体
との反応の際における，被検体による立体障害を更に抑
制できる。
ることができる。そのため，ハプテンと抗ハプテン抗体
との反応の際における，被検体による立体障害を更に抑
制できる。
【００２０】また，被検体に標識物質を結合する際に，
被検体と結合可能な結合部位を有することが好ましい。
かかる結合部位は，被検体の種類によって異なる。例え
ば，被検体がＤＮＡの場合には，結合部位としては，ｄ
ＡＴＰ，ｄＧＴＰ，ｄＣＴＰ，ｄＴＴＰ，ｄＵＴＰ等を
用いることができる。また，蛋白質の場合には，アミノ
基を有するリジン等を用いることができる。
被検体と結合可能な結合部位を有することが好ましい。
かかる結合部位は，被検体の種類によって異なる。例え
ば，被検体がＤＮＡの場合には，結合部位としては，ｄ
ＡＴＰ，ｄＧＴＰ，ｄＣＴＰ，ｄＴＴＰ，ｄＵＴＰ等を
用いることができる。また，蛋白質の場合には，アミノ
基を有するリジン等を用いることができる。
【００２１】次に，請求項６の発明のように，上記検出
物質は，上記抗ハプテン抗体と，シグナル発生基質と反
応して該シグナル発生基質よりシグナルを発生させ得る
酵素とからなることが好ましい。これにより，容易且つ
迅速に検出することができる。
物質は，上記抗ハプテン抗体と，シグナル発生基質と反
応して該シグナル発生基質よりシグナルを発生させ得る
酵素とからなることが好ましい。これにより，容易且つ
迅速に検出することができる。
【００２２】次に，上記酵素は，アルカリ性ホスファタ
ーゼ，酸性ホスファターゼ，β−ガラクトシダーゼ，エ
ステラーゼ，パーオキシダーゼ，及び糖鎖切断酵素のグ
ループから選ばれる１種又は２種以上であることが好ま
しい。これにより，強いシグナルを発生させることがで
き，シグナルの検出を容易に行うことができる。
ーゼ，酸性ホスファターゼ，β−ガラクトシダーゼ，エ
ステラーゼ，パーオキシダーゼ，及び糖鎖切断酵素のグ
ループから選ばれる１種又は２種以上であることが好ま
しい。これにより，強いシグナルを発生させることがで
き，シグナルの検出を容易に行うことができる。
【００２３】次に，上記シグナル発生基質は，化学発光
基質，発色基質，蛍光基質，生物発光基質，又は電気発
生基質のいずれかであることが好ましい。これらの酵素
はシグナル発生基質との反応性が高いため，強いシグナ
ルを発生させることができ，検出感度が更に高くなるか
らである。
基質，発色基質，蛍光基質，生物発光基質，又は電気発
生基質のいずれかであることが好ましい。これらの酵素
はシグナル発生基質との反応性が高いため，強いシグナ
ルを発生させることができ，検出感度が更に高くなるか
らである。
【００２４】次に，請求項７の発明のように，上記検出
物質は，上記抗ハプテン抗体と，自らシグナルを発生し
得るシグナル発生化合物とからなることが好ましい。こ
れにより，容易且つ迅速に検出することができる。上記
シグナル発生化合物は，蛍光物質又は発色物質であるこ
とが好ましい。これらのシグナル発生化合物は強いシグ
ナルを発生させる。また，シグナルの検出を容易に行う
ことができる。
物質は，上記抗ハプテン抗体と，自らシグナルを発生し
得るシグナル発生化合物とからなることが好ましい。こ
れにより，容易且つ迅速に検出することができる。上記
シグナル発生化合物は，蛍光物質又は発色物質であるこ
とが好ましい。これらのシグナル発生化合物は強いシグ
ナルを発生させる。また，シグナルの検出を容易に行う
ことができる。
【００２５】次に，請求項８の発明は，核酸，蛋白質等
の被検体を標識し，且つシグナルを発生し得る検出物質
と結合するための標識物質において，上記標識物質は，
下記の「化１」に示される，ハプテンとリンカーとを有
してなり，該リンカーは，原子数が１０以上であり且つ
直鎖状に配列した原子鎖を有することを特徴とする標識
物質である。
の被検体を標識し，且つシグナルを発生し得る検出物質
と結合するための標識物質において，上記標識物質は，
下記の「化１」に示される，ハプテンとリンカーとを有
してなり，該リンカーは，原子数が１０以上であり且つ
直鎖状に配列した原子鎖を有することを特徴とする標識
物質である。
【００２６】
【化１】
【００２７】上記標識物質は，上記のごとく長い原子鎖
を有するリンカーをハプテンと結合されたものである。
そのため，被検体とハプテンとの距離を離し，被検体に
よる立体障害の影響を少なくすることができる。また，
ハプテンとして，上記ジベレリンＡ４を用いている。上
記ジベレリンＡ４は，抗ハプテン抗体との親和力の高
い。それ故，標識物質は，被検体に対して，抗ハプテン
抗体を有する検出物質を多量に付着させることができ，
感度を著しく上昇させることができる。
を有するリンカーをハプテンと結合されたものである。
そのため，被検体とハプテンとの距離を離し，被検体に
よる立体障害の影響を少なくすることができる。また，
ハプテンとして，上記ジベレリンＡ４を用いている。上
記ジベレリンＡ４は，抗ハプテン抗体との親和力の高
い。それ故，標識物質は，被検体に対して，抗ハプテン
抗体を有する検出物質を多量に付着させることができ，
感度を著しく上昇させることができる。
【００２８】また，上記標識物質は，被検体と結合可能
な結合部位を有することが好ましい。かかる結合部位
は，上記のごとく被検体の種類によって異なる。
な結合部位を有することが好ましい。かかる結合部位
は，上記のごとく被検体の種類によって異なる。
【００２９】次に，請求項９の発明は，核酸，蛋白質等
の被検体を検出するための検出物質において，上記検出
物質は，上記被検体を標識した下記の「化１」に示され
た標識物質のハプテンに対して，抗原抗体反応により結
合する抗ハプテン抗体と，シグナル発生基質と反応し得
る酵素とよりなることを特徴とする検出物質である。
の被検体を検出するための検出物質において，上記検出
物質は，上記被検体を標識した下記の「化１」に示され
た標識物質のハプテンに対して，抗原抗体反応により結
合する抗ハプテン抗体と，シグナル発生基質と反応し得
る酵素とよりなることを特徴とする検出物質である。
【００３０】
【化１】
【００３１】上記検出物質は，上記ジベレリンＡ４に対
する抗ハプテン抗体を有するため，ジベレリンＡ４を有
する標識物質に高効率で結合することができる。それ
故，酵素とシグナル発生基質との反応によって，強いシ
グナルを発生させることができ，検出感度が高い。
する抗ハプテン抗体を有するため，ジベレリンＡ４を有
する標識物質に高効率で結合することができる。それ
故，酵素とシグナル発生基質との反応によって，強いシ
グナルを発生させることができ，検出感度が高い。
【００３２】
【発明の実施の形態】本発明の実施形態例にかかる核酸
等の検出方法について，図１を用いて説明する。本例
は，蛍光法によるλＤＮＡの検出方法である。検出方法
の概要は，まず，被検体であるλＤＮＡに，リンカーと
ジベレリンＡ４とからなる標識物質を結合する。次い
で，標識物質に，アルカリ性ホスファターゼを標識した
抗ジベレリンＡ４抗体からなる検出物質を結合する。次
いで，アルカリ性ホスファターゼに蛍光基質を反応さ
せ，次いで励起光を照射して蛍光を発生させ，蛍光を検
出する。
等の検出方法について，図１を用いて説明する。本例
は，蛍光法によるλＤＮＡの検出方法である。検出方法
の概要は，まず，被検体であるλＤＮＡに，リンカーと
ジベレリンＡ４とからなる標識物質を結合する。次い
で，標識物質に，アルカリ性ホスファターゼを標識した
抗ジベレリンＡ４抗体からなる検出物質を結合する。次
いで，アルカリ性ホスファターゼに蛍光基質を反応さ
せ，次いで励起光を照射して蛍光を発生させ，蛍光を検
出する。
【００３３】リンカーとしては，アミノ−Ｏ−メチルア
ミドカプロン酸の塩酸塩を用いた。ジベレリンＡ４とリ
ンカーとからなる標識物質の化学式は，「化１」に示し
た。本例において，「化１」の中のリンカー（Ｒ）は，
Ｎ−Ｏ−メチルアミドカプロン酸−〔５−（アミドアリ
ル）−２’−デオキシウリジン−５’−三リン酸〕−四
ナトリウム塩である。リンカーの先端部分に結合してい
るデオキシウリジン−５’−三リン酸（ｄＵＴＰ）は，
被検体であるλＤＮＡとの結合部位である。
ミドカプロン酸の塩酸塩を用いた。ジベレリンＡ４とリ
ンカーとからなる標識物質の化学式は，「化１」に示し
た。本例において，「化１」の中のリンカー（Ｒ）は，
Ｎ−Ｏ−メチルアミドカプロン酸−〔５−（アミドアリ
ル）−２’−デオキシウリジン−５’−三リン酸〕−四
ナトリウム塩である。リンカーの先端部分に結合してい
るデオキシウリジン−５’−三リン酸（ｄＵＴＰ）は，
被検体であるλＤＮＡとの結合部位である。
【００３４】
【化１】
【００３５】次に，本例の検出方法の詳細について説明
する。 （１）標識物質の合成 ジベレリンＡ４誘導体の合成 １００ｍｌのナスフラスコ中で，ジベレリンＡ４を３３
２ｍｇ（１ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン／Ｈ2 Ｏ
（重量比；１：１）３５ｍｌに溶解し，これに酸化オス
ミウム１９ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）を氷冷しながら加え
た。１０分攪拌後，過ヨウ素酸ナトリウム４２７．８ｍ
ｇ（２ｍｍｏｌ）を加え，アルゴンガス封入後，室温で
１７時間攪拌して，反応させた。反応液の沈澱物を濾別
し，濾液を減圧濃縮して，テトラヒドロフランを留去し
て水溶液を得た。
する。 （１）標識物質の合成 ジベレリンＡ４誘導体の合成 １００ｍｌのナスフラスコ中で，ジベレリンＡ４を３３
２ｍｇ（１ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン／Ｈ2 Ｏ
（重量比；１：１）３５ｍｌに溶解し，これに酸化オス
ミウム１９ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）を氷冷しながら加え
た。１０分攪拌後，過ヨウ素酸ナトリウム４２７．８ｍ
ｇ（２ｍｍｏｌ）を加え，アルゴンガス封入後，室温で
１７時間攪拌して，反応させた。反応液の沈澱物を濾別
し，濾液を減圧濃縮して，テトラヒドロフランを留去し
て水溶液を得た。
【００３６】この水溶液に，６規定の硫酸を加えて，ｐ
Ｈ＝１．５に調整し，酢酸エチルで３回抽出して，１５
０ｍｌの酢酸エチル抽出液を得た。得られた酢酸エチル
抽出液に，無水硫酸ナトリウムを加えて，放置し，脱水
した後，無水硫酸ナトリウムを濾別し，濾液を濃縮し
た。
Ｈ＝１．５に調整し，酢酸エチルで３回抽出して，１５
０ｍｌの酢酸エチル抽出液を得た。得られた酢酸エチル
抽出液に，無水硫酸ナトリウムを加えて，放置し，脱水
した後，無水硫酸ナトリウムを濾別し，濾液を濃縮し
た。
【００３７】上記濃縮濾液を，シリカゲル吸着カラムク
ロマトグラフィで精製した。溶出液として，クロロホル
ム−酢酸エチル系を用い，クロロホルム１００％から酢
酸エチルを５％刻みで増やすステップワイズ溶出を行っ
た。１ステップ当たり，２０ｍｌずつ溶出させてこれを
分取した。ジベレリンＡ４−１７−ノルケトンを含むフ
ラクションを回収し，溶媒留去すると，ジベレリン誘導
体であるジベレリンＡ４−１７−ノルケトンを，収率５
５％で得た。この化合物は， 1Ｈ−ＮＭＲ，ＩＲ，ＭＳ
スペクトルにより構造を確認した。
ロマトグラフィで精製した。溶出液として，クロロホル
ム−酢酸エチル系を用い，クロロホルム１００％から酢
酸エチルを５％刻みで増やすステップワイズ溶出を行っ
た。１ステップ当たり，２０ｍｌずつ溶出させてこれを
分取した。ジベレリンＡ４−１７−ノルケトンを含むフ
ラクションを回収し，溶媒留去すると，ジベレリン誘導
体であるジベレリンＡ４−１７−ノルケトンを，収率５
５％で得た。この化合物は， 1Ｈ−ＮＭＲ，ＩＲ，ＭＳ
スペクトルにより構造を確認した。
【００３８】アミノ−Ｏ−メチルアミドカプロン酸の
塩酸塩の合成 １００ｍｌのナス型フラスコに，出発原料としてカルボ
キシメトキシアミンヘミハイドロクロライドを２．０７
２ｇ（１０．９ｍｍｏｌ）入れ，氷冷後飽和炭酸水素ナ
トリウム２０ｍｌ／テトラヒドロフラン１０ｍｌの混合
溶媒を加え，０℃で，１０分間攪拌した。出発原料は，
すぐに溶解するが，水とテトラヒドロフランは混合溶媒
と混ざらないため，２相系で反応を行った。
塩酸塩の合成 １００ｍｌのナス型フラスコに，出発原料としてカルボ
キシメトキシアミンヘミハイドロクロライドを２．０７
２ｇ（１０．９ｍｍｏｌ）入れ，氷冷後飽和炭酸水素ナ
トリウム２０ｍｌ／テトラヒドロフラン１０ｍｌの混合
溶媒を加え，０℃で，１０分間攪拌した。出発原料は，
すぐに溶解するが，水とテトラヒドロフランは混合溶媒
と混ざらないため，２相系で反応を行った。
【００３９】次いで，氷冷したまま１０分ごとに３回に
分けてベンジルカルボニルクロライド２．２２９ｇ（１
３．１ｍｍｏｌ）を加えた。次いで，氷冷したまま１時
間攪拌して，反応させた。反応後，反応液を減圧濃縮
し，テトラヒドロフランを留去して水溶液を得た。この
水溶液に，１規定の塩酸を加えて酸性となし，塩化メチ
レンで３回抽出して，合計１５０ｍｌの塩化メチレン抽
出液を得た。塩化メチレン抽出液を無水硫酸ナトリウム
を加え，放置し脱水し，その後無水硫酸ナトリウムを濾
別し，濾液を濃縮した。これにより，第１中間体である
ベンジルアミドカルボン酸を収率８３．２％で得た。こ
の化合物は， 1Ｈ−ＮＭＲ，ＩＲ，ＭＳスペクトルによ
る構造を確認した。
分けてベンジルカルボニルクロライド２．２２９ｇ（１
３．１ｍｍｏｌ）を加えた。次いで，氷冷したまま１時
間攪拌して，反応させた。反応後，反応液を減圧濃縮
し，テトラヒドロフランを留去して水溶液を得た。この
水溶液に，１規定の塩酸を加えて酸性となし，塩化メチ
レンで３回抽出して，合計１５０ｍｌの塩化メチレン抽
出液を得た。塩化メチレン抽出液を無水硫酸ナトリウム
を加え，放置し脱水し，その後無水硫酸ナトリウムを濾
別し，濾液を濃縮した。これにより，第１中間体である
ベンジルアミドカルボン酸を収率８３．２％で得た。こ
の化合物は， 1Ｈ−ＮＭＲ，ＩＲ，ＭＳスペクトルによ
る構造を確認した。
【００４０】次に，３０ｍｌナス型フラスコに上記第１
中間体を２５８ｍｇ（０．８ｍｍｏｌ）を入れ，フラス
コ内の空気をアルゴンガスで置換した後，脱水蒸留した
アセトニトリル溶媒を２．５ｍｌ加え，溶解させた。次
いで，室温のまま，Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド９３
ｍｇ（０．８ｍｍｏｌ）を脱水アセトニトリル２００μ
ｌに溶解させた溶液を加えた。更に続いて，ＤＣＣ
（Ｎ，Ｎ′−Ｄｉｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌｃａｒｂｏｄｉ
ｉｍｉｄｅを意味する。以下，同様である。）１７０ｍ
ｇ（０．８ｍｍｏｌ）を脱水アセトニトリル５００μｌ
に溶解させた溶液を加え，室温で１８時間攪拌した。薄
相クロマトグラフィーにより第２中間体であるスクシン
イミド体を確認し，精製せずに次の反応に用いた。
中間体を２５８ｍｇ（０．８ｍｍｏｌ）を入れ，フラス
コ内の空気をアルゴンガスで置換した後，脱水蒸留した
アセトニトリル溶媒を２．５ｍｌ加え，溶解させた。次
いで，室温のまま，Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド９３
ｍｇ（０．８ｍｍｏｌ）を脱水アセトニトリル２００μ
ｌに溶解させた溶液を加えた。更に続いて，ＤＣＣ
（Ｎ，Ｎ′−Ｄｉｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌｃａｒｂｏｄｉ
ｉｍｉｄｅを意味する。以下，同様である。）１７０ｍ
ｇ（０．８ｍｍｏｌ）を脱水アセトニトリル５００μｌ
に溶解させた溶液を加え，室温で１８時間攪拌した。薄
相クロマトグラフィーにより第２中間体であるスクシン
イミド体を確認し，精製せずに次の反応に用いた。
【００４１】次に，上記第２中間体が脱水アセトニトリ
ル溶液に溶解している溶液に，６−アミノヘキサン酸１
０４．９ｍｇ（０．８ｍｍｏｌ）をメタノール５ｍｌと
ｐＨ＝９．０のバッファー５０滴の混合溶媒に溶解さ
せ，その溶液を室温で加えた。次いで，室温で５分間攪
拌した後，４０℃程度の湯で加熱し１０分間攪拌して，
反応させた。反応後，沈澱により生成したＤＣＣウレア
を濾別し，濾液を減圧留去して溶媒を除いた。次いで，
１規定塩酸を加え，水相を酸性にし，塩化メチレンで３
回抽出を行った。次いで，塩化メチレン相を濃縮した。
ル溶液に溶解している溶液に，６−アミノヘキサン酸１
０４．９ｍｇ（０．８ｍｍｏｌ）をメタノール５ｍｌと
ｐＨ＝９．０のバッファー５０滴の混合溶媒に溶解さ
せ，その溶液を室温で加えた。次いで，室温で５分間攪
拌した後，４０℃程度の湯で加熱し１０分間攪拌して，
反応させた。反応後，沈澱により生成したＤＣＣウレア
を濾別し，濾液を減圧留去して溶媒を除いた。次いで，
１規定塩酸を加え，水相を酸性にし，塩化メチレンで３
回抽出を行った。次いで，塩化メチレン相を濃縮した。
【００４２】得られた濃縮液をシリカゲル吸着カラムク
ロマトグラフィーで精製した。溶出液として，クロロホ
ルム−メタノール系を用い，クロロホルム１００％から
メタノールを５％刻みで増やすステップワイズ溶出を行
った。１ステップ当たり，２０ｍｌずつ溶出させこれを
分取した。ベンジルアミドメチルアミドカプロン酸を含
むフラクションを回収し，溶媒留去して，第３中間体で
あるベンジルアミドメチルアミドカプロン酸を収率８５
％で得た。この化合物は， 1Ｈ−ＮＭＲ，ＩＲ，ＭＳス
ペクトルによる構造を確認した。
ロマトグラフィーで精製した。溶出液として，クロロホ
ルム−メタノール系を用い，クロロホルム１００％から
メタノールを５％刻みで増やすステップワイズ溶出を行
った。１ステップ当たり，２０ｍｌずつ溶出させこれを
分取した。ベンジルアミドメチルアミドカプロン酸を含
むフラクションを回収し，溶媒留去して，第３中間体で
あるベンジルアミドメチルアミドカプロン酸を収率８５
％で得た。この化合物は， 1Ｈ−ＮＭＲ，ＩＲ，ＭＳス
ペクトルによる構造を確認した。
【００４３】次に，３つ口の５０ｍｌ丸底フラスコに，
上記第３中間体１５０ｍｇ（０．３４ｍｍｏｌ）を入
れ，フラスコ内の空気をアルゴンガスで置換した。次い
で，エーテルを第３中間体が溶解するまで加えた。エー
テルの添加量は約２０ｍｌとなった。次いで，塩酸ガス
を導入し，薄相クロマトグラフィーにより第３中間体が
消え新しいスポットが原点に現れるまで，塩酸ガスを導
入し続けた。反応終了後，エーテルを減圧留去して，リ
ンカーとして用いるアミノ−Ｏ−メチルアミドカプロン
酸の塩酸塩を得た。この化合物は非常に不安定であるの
で，精製せずに次の反応に用いた。
上記第３中間体１５０ｍｇ（０．３４ｍｍｏｌ）を入
れ，フラスコ内の空気をアルゴンガスで置換した。次い
で，エーテルを第３中間体が溶解するまで加えた。エー
テルの添加量は約２０ｍｌとなった。次いで，塩酸ガス
を導入し，薄相クロマトグラフィーにより第３中間体が
消え新しいスポットが原点に現れるまで，塩酸ガスを導
入し続けた。反応終了後，エーテルを減圧留去して，リ
ンカーとして用いるアミノ−Ｏ−メチルアミドカプロン
酸の塩酸塩を得た。この化合物は非常に不安定であるの
で，精製せずに次の反応に用いた。
【００４４】ハプテンとリンカーとの結合反応 アミノ−Ｏ−メチルアミドカプロン酸の塩酸塩（リンカ
ー）１００．３ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ）が残留している
３つ口４０ｍｌ丸底フラスコ内の空気をアルゴンガスで
置換した。次いで，脱水ピリジンを０．６ｍｌ加えて，
上記リンカーを溶解させた。次いで，室温で，ジベレリ
ンＡ４誘導体１００ｍｇを脱水ピリジン０．１ｍｌに溶
解させた溶液を滴下した。次いで，５０℃で，１８時間
攪拌して，反応させた。反応終了後，塩酸を加えて，反
応を終了させた。次いで，酢酸エチルで３回抽出し，飽
和食塩水で中性になるまで酢酸エチル相を洗浄した。得
られた酢酸エチル抽出液を無水硫酸ナトリウムを加えて
放置し，脱水した後，無水硫酸ナトリウムを濾別し，濾
液を濃縮した。
ー）１００．３ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ）が残留している
３つ口４０ｍｌ丸底フラスコ内の空気をアルゴンガスで
置換した。次いで，脱水ピリジンを０．６ｍｌ加えて，
上記リンカーを溶解させた。次いで，室温で，ジベレリ
ンＡ４誘導体１００ｍｇを脱水ピリジン０．１ｍｌに溶
解させた溶液を滴下した。次いで，５０℃で，１８時間
攪拌して，反応させた。反応終了後，塩酸を加えて，反
応を終了させた。次いで，酢酸エチルで３回抽出し，飽
和食塩水で中性になるまで酢酸エチル相を洗浄した。得
られた酢酸エチル抽出液を無水硫酸ナトリウムを加えて
放置し，脱水した後，無水硫酸ナトリウムを濾別し，濾
液を濃縮した。
【００４５】濃縮液をシリカゲル吸着カラムクロマトグ
ラフィで精製した。溶出液として，クロロホルム−メタ
ノール系を用い，クロロホルム１００％からメタノール
を５％刻みで増やすステップワイズ溶出を行った。１ス
テップ当たり２０ｍｌずつ溶出してこれを分取した。ジ
ベレリンＡ４−Ｎ−Ｏ−メチルアミドカプロン酸を含む
フラクションを回収し，溶媒留去して，ハプテンとリン
カーとの結合体であるジベレリンＡ４−Ｎ−Ｏ−メチル
アミドカプロン酸を収率１５％で得た。この化合物は，
1Ｈ−ＮＭＲ，ＩＲ，ＭＳスペクトルによる構造を確認
した。
ラフィで精製した。溶出液として，クロロホルム−メタ
ノール系を用い，クロロホルム１００％からメタノール
を５％刻みで増やすステップワイズ溶出を行った。１ス
テップ当たり２０ｍｌずつ溶出してこれを分取した。ジ
ベレリンＡ４−Ｎ−Ｏ−メチルアミドカプロン酸を含む
フラクションを回収し，溶媒留去して，ハプテンとリン
カーとの結合体であるジベレリンＡ４−Ｎ−Ｏ−メチル
アミドカプロン酸を収率１５％で得た。この化合物は，
1Ｈ−ＮＭＲ，ＩＲ，ＭＳスペクトルによる構造を確認
した。
【００４６】結合部位の修飾 ジベレリンＡ４−Ｎ−Ｏ−メチルアミドカプロン酸４ｍ
ｇ（８μｍｏｌ）をジメチルスルホキシド６９μｌに溶
解した。次いで，ジメチルスルホキシドを１００ｍｇ／
ｍｌの濃度で溶解させたＮ−ヒドロキシサクシンイミド
溶液を９．２μｌ（８μｍｏｌ）加えた。次いで，ジシ
クロヘキシルカルボジイミド１．８μｌ（８μｍｏｌ）
を加え，室温で一夜反応させた。析出したジシクロヘキ
シル尿素を濾過により除去した。反応生成物であるジベ
レリンＡ４−Ｎ−Ｏ−メチルアミドカプロン酸−Ｎ−ヒ
ドロキシサクシンイミドエステルの反応液８０μｌ（８
μｍｏｌ）を，５−アリルアミノ−２’−デオキシウリ
ジン−５’−三リン酸−四ナトリウム塩１μｍｏｌが溶
解している０．１Ｍほう酸ナトリウム溶液（ｐＨ８．
５）０．４２ｍｌに加え，室温で一夜放置した。これに
より，目的物であるジベレリンＡ４−［１５］−ＵＴＰ
が，副生成物と共に生成した。
ｇ（８μｍｏｌ）をジメチルスルホキシド６９μｌに溶
解した。次いで，ジメチルスルホキシドを１００ｍｇ／
ｍｌの濃度で溶解させたＮ−ヒドロキシサクシンイミド
溶液を９．２μｌ（８μｍｏｌ）加えた。次いで，ジシ
クロヘキシルカルボジイミド１．８μｌ（８μｍｏｌ）
を加え，室温で一夜反応させた。析出したジシクロヘキ
シル尿素を濾過により除去した。反応生成物であるジベ
レリンＡ４−Ｎ−Ｏ−メチルアミドカプロン酸−Ｎ−ヒ
ドロキシサクシンイミドエステルの反応液８０μｌ（８
μｍｏｌ）を，５−アリルアミノ−２’−デオキシウリ
ジン−５’−三リン酸−四ナトリウム塩１μｍｏｌが溶
解している０．１Ｍほう酸ナトリウム溶液（ｐＨ８．
５）０．４２ｍｌに加え，室温で一夜放置した。これに
より，目的物であるジベレリンＡ４−［１５］−ＵＴＰ
が，副生成物と共に生成した。
【００４７】次に，上記反応混合物から目的物を分離し
た。目的物の分離は，高速イオン交換クロマトグラフィ
用充填カラムにＴＳＫゲルＤＥＡＥ−２ＳＷ（東ソー）
を充填した。溶出液として０Ｍから０．７Ｍの塩化ナト
リウム溶液を用い，この塩化ナトリウム溶液の濃度を直
線的に連続して０Ｍから０．７Ｍまで増加させた。
た。目的物の分離は，高速イオン交換クロマトグラフィ
用充填カラムにＴＳＫゲルＤＥＡＥ−２ＳＷ（東ソー）
を充填した。溶出液として０Ｍから０．７Ｍの塩化ナト
リウム溶液を用い，この塩化ナトリウム溶液の濃度を直
線的に連続して０Ｍから０．７Ｍまで増加させた。
【００４８】目的物のリテンションタイムは，主副生成
物である５−アリルアミノ−２’−デオキシウリジン−
５’−三リン酸よりも遅く，両者は明確に分離すること
ができる。目的物の溶出濃度が最も高いフラクションを
回収し，セファデックスＧ−１０（ファルマシア）によ
るゲル濾過により脱塩を行い，凍結，乾燥して，目的物
の標識物質であるジベレリンＡ４−Ｎ−Ｏ−メチルアミ
ドカプロン酸−［５−（アミドアリル）−２’−デオキ
シウリジン−５’−三リン酸］−四ナトリウム塩（ジベ
レリンＡ４−［１５］−ｄＵＴＰ）を得た。
物である５−アリルアミノ−２’−デオキシウリジン−
５’−三リン酸よりも遅く，両者は明確に分離すること
ができる。目的物の溶出濃度が最も高いフラクションを
回収し，セファデックスＧ−１０（ファルマシア）によ
るゲル濾過により脱塩を行い，凍結，乾燥して，目的物
の標識物質であるジベレリンＡ４−Ｎ−Ｏ−メチルアミ
ドカプロン酸−［５−（アミドアリル）−２’−デオキ
シウリジン−５’−三リン酸］−四ナトリウム塩（ジベ
レリンＡ４−［１５］−ｄＵＴＰ）を得た。
【００４９】（５）λＤＮＡの検出 ランダムプライムＤＮＡラベリングキット（ベーリンガ
ーマンハイム社）を用いて，λＤＮＡを上記ジベレリン
Ａ４−［１５］−ｄＵＴＰ（標識物質）により標識し
た。標識したλＤＮＡをそれぞれニシン精子ＤＮＡ１０
０ｎｇ／ｍｌを含むＤＮＡ希釈溶液により希釈した。図
１に示すごとく，λＤＮＡ希釈液１を，ナイロンメンブ
レン２上にスポットし，紫外線照射によりＤＮＡを固定
した。希釈の際に，一定量の１スポットの中に，それぞ
れ０，５，１０，２０，４０，８０，４００，２０００
ｆｇ（フェムトグラム）のλＤＮＡが含まれるようにし
た。０ｆｇは，ブランクテストである。
ーマンハイム社）を用いて，λＤＮＡを上記ジベレリン
Ａ４−［１５］−ｄＵＴＰ（標識物質）により標識し
た。標識したλＤＮＡをそれぞれニシン精子ＤＮＡ１０
０ｎｇ／ｍｌを含むＤＮＡ希釈溶液により希釈した。図
１に示すごとく，λＤＮＡ希釈液１を，ナイロンメンブ
レン２上にスポットし，紫外線照射によりＤＮＡを固定
した。希釈の際に，一定量の１スポットの中に，それぞ
れ０，５，１０，２０，４０，８０，４００，２０００
ｆｇ（フェムトグラム）のλＤＮＡが含まれるようにし
た。０ｆｇは，ブランクテストである。
【００５０】次に，ナイロンメンブレンをブロッキング
溶液に３０分間浸した後，アルカリ性ホスファターゼ標
識抗ジベレリンＡ４抗体（検出物質）をそれぞれ結合さ
せた。未結合の検出物質を洗浄により除去し，その後蛍
光基質ＨＮＰＰ（アイシンコスモス研究所製）にて反応
させた。反応後，励起光を照射して，λＤＮＡ希釈液の
スポットより発する蛍光を検出した。
溶液に３０分間浸した後，アルカリ性ホスファターゼ標
識抗ジベレリンＡ４抗体（検出物質）をそれぞれ結合さ
せた。未結合の検出物質を洗浄により除去し，その後蛍
光基質ＨＮＰＰ（アイシンコスモス研究所製）にて反応
させた。反応後，励起光を照射して，λＤＮＡ希釈液の
スポットより発する蛍光を検出した。
【００５１】また，比較例として，上記ジベレリンＡ４
−［１５］−ｄＵＴＰの代わりに，ディゴキシゲニン−
１１−ｄＵＴＰ（ＤＩＧ−１１−ｄＵＴＰ）を用いて，
λＤＮＡを同様の方法により検出した。
−［１５］−ｄＵＴＰの代わりに，ディゴキシゲニン−
１１−ｄＵＴＰ（ＤＩＧ−１１−ｄＵＴＰ）を用いて，
λＤＮＡを同様の方法により検出した。
【００５２】上記実験の結果を表１に示した。表１にお
いて，「＋」は検出可能，「±」は検出不明瞭，「−」
は検出不能を示す。同表より知られるごとく，ジベレリ
ン標識λＤＮＡは，１０ｆｇという極微量でも十分に検
出できた。これに対して，比較例のディゴキシゲニン標
識λＤＮＡは，４０ｆｇまでしか検出できなかった。
いて，「＋」は検出可能，「±」は検出不明瞭，「−」
は検出不能を示す。同表より知られるごとく，ジベレリ
ン標識λＤＮＡは，１０ｆｇという極微量でも十分に検
出できた。これに対して，比較例のディゴキシゲニン標
識λＤＮＡは，４０ｆｇまでしか検出できなかった。
【００５３】
【表１】
【００５４】
【発明の効果】本発明によれば，アイソトープ法の安全
上の欠点を解消し，検出感度に優れた，核酸等の検出方
法，並びに標識物質及び検出物質を提供することができ
る。
上の欠点を解消し，検出感度に優れた，核酸等の検出方
法，並びに標識物質及び検出物質を提供することができ
る。
【図面の簡単な説明】
【図１】実施形態例における，λＤＮＡの検出方法を示
す説明図。
す説明図。
１．．．λＤＮＡ希釈液， ２．．．ナイロンメンブレン，
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 鍵山 直人 愛知県刈谷市八軒町５丁目50番地 株式会 社アイシン・コスモス研究所内 (72)発明者 籾山 政慶 愛知県刈谷市八軒町５丁目50番地 株式会 社アイシン・コスモス研究所内 (72)発明者 近藤 恭光 愛知県刈谷市八軒町５丁目50番地 株式会 社アイシン・コスモス研究所内 (72)発明者 西谷内 美穂 愛知県刈谷市八軒町５丁目50番地 株式会 社アイシン・コスモス研究所内 (72)発明者 山田 幸生 愛知県愛知郡長久手町大字長湫字横道41番 地の１ 株式会社豊田中央研究所内 (72)発明者 浅見 修 愛知県愛知郡長久手町大字長湫字横道41番 地の１ 株式会社豊田中央研究所内 (72)発明者 杉山 英彦 愛知県愛知郡長久手町大字長湫字横道41番 地の１ 株式会社豊田中央研究所内
Claims (9)
- 【請求項１】 核酸，蛋白質等の被検体に，リンカーと
ハプテンとを有する標識物質を結合し，次いで，上記標
識物質におけるハプテンに，抗ハプテン抗体を有し且つ
シグナルを発生し得る検出物質を結合し，次いで，上記
検出物質よりシグナルを発生させ，該シグナルを検出す
る，核酸等の検出方法であって，上記ハプテンは，ジベ
レリン又はその誘導体であり，上記リンカーは，原子数
が１０以上であることを特徴とする核酸等の検出方法。 - 【請求項２】 請求項１において，上記ハプテンは，下
記の「化１」に示されるものであることを特徴とする核
酸等の検出方法。 【化１】 - 【請求項３】 請求項１又は２において，上記リンカー
は，非環式炭化水素，単環式炭化水素，架橋環式炭化水
素，スピロ炭化水素，環集合炭化水素，及び側鎖を有す
る環式炭化水素のグループから選ばれる１種又は２種以
上からなる炭化水素基を有し，原子数が１０以上であり
且つ直鎖状に配列した原子鎖を有することを特徴とする
核酸等の検出方法。 - 【請求項４】 請求項３において，上記炭化水素基の間
は，アルキル，エーテル，アミド，エステル，アゾ，ニ
トリル，ニトロ，及びアミノのグループから選ばれる１
種又は２種以上の原子団により連結されていることを特
徴とする核酸等の検出方法。 - 【請求項５】 請求項１〜４のいずれか一項において，
上記リンカーは，下記の「化２」の一般式により示され
ることを特徴とする核酸等の検出方法。 【化２】 - 【請求項６】 請求項１〜５のいずれか一項において，
上記検出物質は，上記抗ハプテン抗体と，シグナル発生
基質と反応して該シグナル発生基質よりシグナルを発生
させ得る酵素とからなることを特徴とする核酸等の検出
方法。 - 【請求項７】 請求項１〜５のいずれか一項において，
上記検出物質は，上記抗ハプテン抗体と，自らシグナル
を発生し得るシグナル発生化合物とからなることを特徴
とする核酸等の検出方法。 - 【請求項８】 核酸，蛋白質等の被検体を標識し，且つ
シグナルを発生し得る検出物質と結合するための標識物
質において，上記標識物質は，下記の「化１」に示され
る，ハプテンとリンカーとを有してなり，該リンカー
は，原子数が１０以上であり且つ直鎖状に配列した原子
鎖を有することを特徴とする標識物質。 【化１】 - 【請求項９】 核酸，蛋白質等の被検体を検出するため
の検出物質において，上記検出物質は，上記被検体を標
識した下記の「化１」に示された標識物質のハプテンに
対して，抗原抗体反応により結合する抗ハプテン抗体
と，シグナル発生基質と反応し得る酵素とよりなること
を特徴とする検出物質。 【化１】
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8280066A JPH10104230A (ja) | 1996-09-30 | 1996-09-30 | 核酸等の検出方法，並びに標識物質及び検出物質 |
| DE1997142949 DE19742949A1 (de) | 1996-09-30 | 1997-09-29 | Verfahren zur Erfassung einer Zielsubstanz sowie ein Label und ein Marker hierfür |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8280066A JPH10104230A (ja) | 1996-09-30 | 1996-09-30 | 核酸等の検出方法，並びに標識物質及び検出物質 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10104230A true JPH10104230A (ja) | 1998-04-24 |
Family
ID=17619836
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8280066A Pending JPH10104230A (ja) | 1996-09-30 | 1996-09-30 | 核酸等の検出方法，並びに標識物質及び検出物質 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH10104230A (ja) |
| DE (1) | DE19742949A1 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003065040A1 (fr) * | 2002-02-01 | 2003-08-07 | Nisshinbo Industries, Inc., | Procede de fixation d'une biomolecule sur un support |
| JP2016136150A (ja) * | 2006-11-01 | 2016-07-28 | ベンタナ・メデイカル・システムズ・インコーポレーテツド | ハプテン、ハプテンコンジュゲート、その組成物ならびにそれらの製造および使用の方法 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| US8840837B2 (en) | 2010-11-01 | 2014-09-23 | 3M Innovative Properties Company | Biological sterilization indicator and method of using same |
| BR112013010096B1 (pt) | 2010-11-01 | 2020-03-10 | 3M Innovative Properties Company | Método de detecção de uma atividade biológica |
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1996
- 1996-09-30 JP JP8280066A patent/JPH10104230A/ja active Pending
-
1997
- 1997-09-29 DE DE1997142949 patent/DE19742949A1/de not_active Ceased
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003065040A1 (fr) * | 2002-02-01 | 2003-08-07 | Nisshinbo Industries, Inc., | Procede de fixation d'une biomolecule sur un support |
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| JP2018040813A (ja) * | 2006-11-01 | 2018-03-15 | ベンタナ・メデイカル・システムズ・インコーポレーテツド | ハプテン、ハプテンコンジュゲート、その組成物ならびにそれらの製造および使用の方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE19742949A1 (de) | 1998-04-02 |
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