JPH099972A - 核多角体病ウイルスの感染力を増強するタンパク質及びその遺伝子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 顆粒病ウイルス（Granulosis virus）属に属
するウイルスであって、シロモンヤガ、ガンマキンウワ
バ、アワヨトウ、ショウブオオヨトウ、フキヨトウ、ホ
シミミヨトウ又はタンポキヨトウから分離されるウイル
スに由来し、核多角体病ウイルスの感染力を増強する分
子量約100 KDa のタンパク質。 【効果】 核多角体病ウイルスの感染力を増強するタン
パク質がシロモンヤガ等顆粒病ウイルスから分離精製さ
れ、さらにこの顆粒病ウイルスのゲノムＤＮＡ上に存在
するタンパク質の遺伝子が特定された。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、顆粒病ウイルスの封入
体中に存在する核多角体病ウイルスの感染力を増強する
タンパク質及びそれをコードする遺伝子に関する。

【０００２】

【従来の技術】核多角体病ウイルスは、農作物のチョウ
目害虫に対して感染し、害虫防除の効果を奏する。従
来、核多角体病ウイルスは、人工飼料で飼料で飼育した
各種害虫の幼虫にウイルスを感染させることによって生
産、製剤化され、それぞれのウイルスは単独で施用され
ていた。しかしながらこのようなウイルスは、害虫の種
類や生育状態によって感染率が低下し、安定した防除効
果が得られず、また施用から害虫の致死までに要する日
数が長いため防除作業後も加害が続くなどの問題を抱え
ていた。

【０００３】本発明者らは、核多角体病ウイルスの感染
力を増強する物質の探索を行い、北海道でヤガ科幼虫数
種（シロモンヤガ、ガンマキンウワバ、アワヨトウ、シ
ョウブオオヨトウ、フキヨトウ、ホシミミヨトウ、タン
ポキヨトウ）から分離した顆粒病ウイルス（Granulosis
virus）属に属するウイルス（以下、シロモンヤガ等顆
粒病ウイルス又はシロモンヤガ等ＧＶという。；後藤
ら，日本応用動物昆虫学会誌，29, p102-106, 1985、Go
toら, Journal of General Virology. 73. p1491-1497,
1992 ）をシロモンヤガ核多角体病ウイルスと混合して
シロモンヤガ幼虫に接種すると、核多角体病ウイルスの
感染率が上昇する現象を発見した（Goto,Applied Entom
ology and Zoology，25, p135-137, 1990）。

【０００４】しかし、シロモンヤガ等ＧＶは、それ自身
の感染力が強いため、発育初期の幼虫を用いた場合、核
多角体病ウイルスとシロモンヤガ等ＧＶとの間に競合が
生じ、シロモンヤガ等ＧＶのみに感染する幼虫の割合が
高くなる現象が認められた。シロモンヤガ等ＧＶに感染
した幼虫は、致死までの平均日数が核多角体病ウイルス
と比べて２倍以上となるため、作物加害期間が延長する
可能性が懸念され、シロモンヤガ等ＧＶの感染力増強作
用のみを利用する技術の開発が望まれた。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、シロ
モンヤガ顆粒病ウイルス及びそれに類似する顆粒病ウイ
ルス（シロモンヤガ等顆粒病ウイルス）由来の、核多角
体病ウイルスの感染力を増強するタンパク質（以下、感
染力増強物質という。）を分離するとともに、それらウ
イルスのゲノム上に存在する感染力増強物質をコードす
る遺伝子を特定して１次構造を決定することである。

【０００６】

【課題を解決するための手段】上記課題に鑑み、本発明
者は、シロモンヤガ顆粒病ウイルス及びそれに類似する
顆粒病ウイルス（シロモンヤガ等顆粒病ウイルス）由来
の感染力増強作用の特性解明と、感染力増強物質の分離
精製を行い、またその遺伝子を特定しプラスミドにクロ
ーニングした結果、感染力増強物質遺伝子の一次構造を
決定することができた。

【０００７】すなわち、本発明は、顆粒病ウイルス（Gr
anulosis virus）属に属するウイルスであって、シロモ
ンヤガ、ガンマキンウワバ、アワヨトウ、ショウブオオ
ヨトウ、フキヨトウ、ホシミミヨトウ又はタンポキヨト
ウから分離されるウイルスに由来し、核多角体病ウイル
スの感染力を増強する分子量約100 KDa のタンパク質で
ある。

【０００８】また、本発明は、顆粒病ウイルス（Granul
osis virus）属に属するウイルスであって、下記の制限
酵素切断地図を有するウイルスに由来し、核多角体病ウ
イルスの感染力を増強する分子量約100 KDa のタンパク
質である。

【０００９】

【化２】 上記（ａ）の制限酵素切断地図は、顆粒病ウイルスゲノ
ムをEcoRIのみで切断した際の切断地図であり、上記
（ｂ）の制限酵素切断地図は、顆粒病ウイルスゲノムを
BamHIのみで切断した際の切断地図であり、上記（ｃ）
の制限酵素切断地図は、顆粒病ウイルスゲノムをBg/II
のみで切断した際の切断地図である。

【００１０】更に、本発明は、前記タンパク質をコード
する遺伝子である。更に、本発明は、配列番号１に示さ
れるアミノ酸配列、又は配列番号１に示されるアミノ酸
配列において１もしくは複数のアミノ酸配列が付加、欠
失もしくは置換されたアミノ酸配列を有するものであっ
て、核多角体病ウイルスの感染力を増強する活性を示す
タンパク質及びそれをコードする遺伝子である。

【００１１】更に、本発明は、配列番号２に示される塩
基配列を有し、核多角体病ウイルスの感染力を増強する
活性を示すタンパク質をコードする遺伝子である。更
に、本発明は、前記遺伝子を含む組換えベクターであ
る。更に、本発明は、前記遺伝子又は組換えベクターで
形質転換された形質転換体である。

【００１２】以下、本発明を詳細に説明する。本発明の
タンパク質は、顆粒病ウイルス（Granulosis virus）属
に属し、シロモンヤガ、ガンマキンウワバ、アワヨト
ウ、ショウブオオヨトウ、フキヨトウ、ホシミミヨトウ
又はタンポキヨトウから分離されるウイルスに由来す
る。それぞれの害虫から分離されるウイルスは、遺伝子
的にほぼ同一のものであり、同種ウイルスの変異株であ
る（Gotoら, Journal of General Virology. 73. p1491
-1497, 1992 ）。

【００１３】ここでは、シロモンヤガ（Xestia c-nigru
m）から分離されるウイルスを例にとってシロモンヤガ
顆粒病ウイルスの感染力増強物質及びその遺伝子につい
て説明するが、本発明はこれに限定されるものではな
い。 〔シロモンヤガ顆粒病ウイルス（XcGV）封入体の調製〕
シロモンヤガ顆粒病ウイルスとしては、例えばシロモン
ヤガ顆粒病ウイルスα−４株を使用することができる。
このシロモンヤガ顆粒病ウイルスα−４株は、Smith an
d Crook (Virology 166. p240-244, 1988）に記載の方
法により純化した株であり、具体的には、野性株を希釈
し、シロモンヤガ又はアワヨトウの幼虫に経口接種する
ことを４回繰り返し、純化株としたものである。

【００１４】上記のようなシロモンヤガ顆粒病ウイルス
を、シロモンヤガ又はアワヨトウの幼虫に経口接種し
て、増殖させる。顆粒病ウイルスは、タンパク質を主成
分とする粒子、即ち封入体に包まれた状態で幼虫体内に
形成されるため、封入体の状態で、公知の方法、例えば
佐藤（植物防疫 38. p366-369, 1984）の方法に準じて
精製することができる。

【００１５】具体的には、顆粒病ウイルスに感染したシ
ロモンヤガ又はアワヨトウの幼虫の死体に蒸留水を加え
て磨砕した後、ガーゼと脱脂綿で濾過して遠心分離を繰
り返す。なお、夾雑物が多い場合は、45〜60％ (w/w)シ
ョ糖密度勾配遠心法を併用するのが好ましい。 〔シロモンヤガ顆粒病ウイルス（XcGV）の核多角体病ウ
イルス（NPV）感染力増強効果〕シロモンヤガ顆粒病ウ
イルス（XcGV）は、核多角体病ウイルス（NPV）感染力
増強効果を有する。このことは、上記のようにして得ら
れたXcGVの封入体又は封入体のアルカリ可溶性画分をNP
Vに添加し、ヤガ科害虫の幼虫に経口投与することによ
り分かる。これまでにXcGVによる感染力増強の効果が確
認された害虫種及び感染ウイルスの組み合わせは、後述
する実施例１の(2) に示すとおりである。

【００１６】感染力増強の効果の程度は、接種の条件に
よって異なるが、シロモンヤガ、アワヨトウ及びヨトウ
ガではXcGVの添加によってNPVの感染力が100 倍以上に
強化される。また、シロモンヤガではXcGVの添加により
感染から死亡に要する日数（致死日数）が短縮される。 〔感染力増強物質の精製〕シロモンヤガ顆粒病ウイルス
の感染力増強物質は、例えば以下のようにして精製する
ことができる。

【００１７】シロモンヤガ顆粒病ウイルス封入体か
ら、ウイルス粒子と不溶物を除去する。それには、例え
ばシロモンヤガ顆粒病ウイルス封入体を、0.02M のNaOH
中で１時間程度処理した後、超遠心分離（100,000ｇ，1
5分間程度）を行うことによりウイルス粒子と不溶物を
沈殿除去することができる。 上記で得られた溶液上清のpHを常法によりpH8.0 程
度に調整する。

【００１８】pHを調整した封入体上清を、カラムを用
いて溶出する。カラムとしては、例えば50mM Tris-HCl
(pH8.0)で平衡化したSephacryl S-300HR カラム（ファ
ルマシア社製）（2.5cm×65cm）を用いることができ
る。得られた画分の感染力増強活性を生物検定によって
調べ、活性画分を濃縮し、再度同カラムを用いて溶出す
る。２回のカラム溶出で得られた画分をイオン交換クロ
マトグラフィーにかけ、活性成分を分離する。このと
き、例えば1mM Tris-HCl(pH8.0) で平衡化したDEAE−セ
ルロースカラム（16mm×14cm）を用いることができる。

【００１９】なお、感染力増強活性を生物検定によって
調べるには、画分を上記のようにNPVに添加し、ヤガ科
害虫の幼虫に経口投与すればよい。 〔シロモンヤガ顆粒病ウイルスＤＮＡの調製〕シロモン
ヤガ顆粒病ウイルスＤＮＡの抽出は、公知の方法、例え
ばGotoら(Journal of General Virology 73. p1491-149
7, 1992)に記載の方法によって行うことができる。具体
的には、以下の手順で行うことができる。

【００２０】封入体（乾燥重で５mg程度）をマイクロ
テストチューブに入れ、１ml程度のアルカリ溶液（0.02
M NaOH）で30〜60分溶解させる。 超遠心機を用いて100,000ｇ程度で約15分遠心し、上
清を捨てる。 沈殿を、例えば 1/2×ＴＥバッファー（ＴＥ：10mM T
ris, 1mM EDTA, pH8.0）に懸濁し、例えばプロティネー
スＫとドデシル硫酸ナトリウム（SDS）をそれぞれ最終
濃度が約250 μｇ／mlと0.5 〜1.0 ％になるように加
え、37〜57℃で１時間程度反応させる。

【００２１】ＴＥ飽和フェノールでＤＮＡ抽出を３回
程度繰り返した後、エーテル抽出を行い、フェノールを
除去する。 エタノール沈殿させ、70％冷エタノール洗浄等により
洗浄した後、吸引乾燥する。得られたＤＮＡは、例えば
ＴＥバッファーに溶解すればよい。 〔プローブの調製〕プローブとしては、Trichoplusia n
i（米国産ヤガ科昆虫）顆粒病ウイルスのゲノムＤＮＡ
のEcoRI切断片プラスミドクローンのうち公知の感染力
増強物質（VEF）遺伝子（Hashimotoら,Journal of Gene
ral Virology.72. p2645-2651, 1992）を含むもの（Eco
-K）を用いることができる。

【００２２】Trichoplusia ni顆粒病ウイルスのゲノム
ＤＮＡEcoRI切断片プラスミドクローンからのVEF遺伝子
の抽出は、公知の方法、例えばモレキュラークローニン
グ 1.25-1.28 1989. に記載の方法によって行うことが
できる。このVEF遺伝子が抽出できたら、常法により放
射性標識を行う。 〔スクリーニング〕上記プローブを用い、シロモンヤガ
顆粒病ウイルスのVEF遺伝子をスクリーニングする。ス
クリーニングは、例えばサザーンハイブリダイゼーショ
ン（モレキュラークローニング 9.34-9.46 1989.）によ
って行うことができる。具体的には、以下のようにして
行うことができる。

【００２３】シロモンヤガ顆粒病ウイルスを、例えばBa
mHI、BglII、EcoRI等の適当な制限酵素を用いて消化
し、アガロースゲル電気泳動等により分離する。分離
後、サザーン・トランスファー法（モレキュラークロー
ニング, 9.34-9.46 1989）によりＤＮＡをナイロンフィ
ルター等にブロッティングする。ハイブリダイゼーショ
ンは、例えばラピッドハイブリダイゼーションバッファ
ー（アマシャム社製）を用いて65℃程度で行えばよい。

【００２４】〔シロモンヤガ顆粒病ウイルスのVEF遺伝
子のプラスミドクローンの作製〕上記のスクリーニング
により目的のシロモンヤガ顆粒病ウイルスのVEF遺伝子
が存在するＤＮＡ断片が特定できたら、シロモンヤガ顆
粒病ウイルスのゲノムＤＮＡをEcoRI等の制限酵素によ
り消化し、得られるＤＮＡ断片を、例えばEcoRIで消化
したpBluescriptII 等のプラスミドベクターに導入す
る。この組換え体ＤＮＡで宿主、例えば大腸菌 NM522株
のコンピテントセル等を形質転換し、目的のクローンを
得る。

【００２５】〔塩基配列の解析〕シロモンヤガ顆粒病ウ
イルスのVEF遺伝子の塩基配列の解析は、公知の方法に
よって行えばよく、例えば以下のようにして行うことが
できる。上記で形質転換した宿主を培養し、例えばモレ
キュラークローニング（1.25-1.28,1989）記載の方法に
従って２本鎖ＤＮＡを調製する。得られた２本鎖ＤＮＡ
によるシークエンシングを、市販の蛍光プライマーシー
クエンスキットを用いてＰＣＲ法によりサンプルを調製
し、自動シークエンサーによって行う。

【００２６】このシロモンヤガ顆粒病ウイルスの感染力
増強物質は、農作物の重要害虫に対する核多角体病ウイ
ルスの感染力を100 倍以上に増強する作用を有するた
め、その利用によってウイルスによる害虫防除の効果を
向上させることができ、生産コストの低減を図ることが
できる。現在、顆粒病ウイルスの生産は、宿主幼虫にウ
イルスを接種して感染死亡個体から増殖したウイルス封
入体を精製する方法で行われており、宿主幼虫の飼育及
び封入体精製等に多大なコストがかかる。本発明を利用
して封入体から感染力増強物質を精製する場合、コスト
低下のためには、封入体生産コストの縮小が望まれる。
本発明で得られた感染力増強物質遺伝子を用いて各種の
発現ベクターを利用することにより、感染力増強物質の
生産コスト低減が期待できる。

【００２７】なお、本発明でプローブとして用いたTric
hoplusia ni顆粒病ウイルスの感染力増強活性は、米国
に分布する害虫を用いて調べられており、日本産の主要
害虫としてはシロイチモジヨトウを用いた実験結果が公
表されている（Wangら、Journal of General Virology,
75. p1961-1967, 1994 ）が、その活性は高いものでは
なかった。また、Trichoplusia ni顆粒病ウイルスとシ
ロモンヤガ顆粒病ウイルスの感染力増強物質の活性は、
それぞれ異なった昆虫種を用いて調べられているため直
接比較することはできない。

【００２８】

【実施例】以下に実施例を挙げて更に具体的に本発明を
説明するが、本発明はこれらの実施例によって限定され
るものではない。 （実施例１） (1) シロモンヤガ顆粒病ウイルス（XcGV）封入体の調製 シロモンヤガ顆粒病ウイルスα−４株（Smith and Coo
k, Virology 166. p240-244, 1988 に準じて純化した
株；野性株を希釈し、シロモンヤガ又はアワヨトウの幼
虫に経口接種することを４回繰り返し、純化株を得
た。）を、シロモンヤガ又はアワヨトウの幼虫に経口接
種して、増殖させた。ウイルスは封入体の状態で、公知
の方法（佐藤, 植物防疫 38. p366-369, 1984）に準じ
て精製した。

【００２９】感染死体に蒸留水を加えて磨砕した後、ガ
ーゼと脱脂綿で濾過して500ｇで５分遠心分離し、その
上清を10,000ｇで30分遠心処理した。沈殿を蒸留水に懸
濁し、３回遠心洗浄を行い、再度蒸留水に懸濁した後、
1,000ｇで10分遠心分離し、その上清を10,000ｇで30分
遠心処理して封入体の沈殿を得た。 (2) シロモンヤガ顆粒病ウイルス（XcGV）の核多角体病
ウイルス（NPV）感染力増強効果 核多角体病ウイルス（NPV）の多角体に、(1) のように
して得られたXcGVの封入体又は封入体のアルカリ可溶性
画分を添加し、ヤガ科害虫の幼虫に経口投与したとこ
ろ、NPV感染率の顕著な上昇が認められた。これまでにX
cGVによる感染力増強の効果が確認された害虫種及び感
染ウイルスの組み合わせは以下のとおりである。 ────────────────────────────────── 対象害虫 感染力増強物質により増強された感染ウイルス名 ────────────────────────────────── シロモンヤガ シロモンヤガNPV（Tetra株(Goto, Applied Entomology and Zoology ，25, p135-137, 1990)）及び シロモンヤガNPV（Tri株（図１）） ガンマキンウワバ シロモンヤガNPV（Tri株（表１）） アワヨトウ シロモンヤガNPV（Tri株）、ヨトウガNPV（表２）及び アワヨトウNPV ヨトウガ シロモンヤガNPV（Tri株（表３））、ヨトウガNPV タバコガ ヨトウガNPV（図２） ──────────────────────────────────

【００３０】

【表１】

【００３１】

【表２】

【００３２】

【表３】

【００３３】感染力増強の効果の程度は、接種の条件に
よって異なるが、シロモンヤガ、アワヨトウ及びヨトウ
ガではXcGVの添加によってNPVの感染力が100 倍以上に
強化された。また、図１から明らかなように、シロモン
ヤガではXcGVの添加により感染から死亡に要する日数
（致死日数）の短縮が認められた。 (3) 感染力増強物質の精製 シロモンヤガ顆粒病ウイルスの感染力増強物質は、以下
のようにして精製した。

【００３４】シロモンヤガ顆粒病ウイルス封入体を、0.
02M のNaOH中で１時間処理した後、超遠心分離を行い
（100,000 ｇ，15分間）、ウイルス粒子と不溶物を沈殿
除去した。次いで、得られた溶液上清に1M Tris-HCl 及
び1M HClを加え、最終濃度50mMTris-HCl pH8.0 に調整
した（封入体上清）。この封入体上清を、50mM Tris-HC
l(pH8.0)で平衡化したSephacryl S-300HR カラム（ファ
ルマシア社製）（2.5cm×65cm）に添加し、流速0.9 ml/
minで同溶液により溶出した。各画分の感染力増強活性
を生物検定（アワヨトウ幼虫）によって調べ、活性画分
を濃縮した。濃縮液を更に同一条件でゲル濾過した。

【００３５】Sephacryl S-300HR カラムクロマトグラフ
ィーで得られた各画分のうち、強い感染力増強活性を示
したものをポリアクリルアミドゲル電気泳動（Laemmli,
Nature 227. p680-685. 1970）したところ、この画分
は分子量100KDa 付近に２本（ａ，ｂ）のバンドを含ん
でいた（図４）。この画分を濃縮し、再度同様のカラム
クロマトグラフィーを行ったが、ａとｂの成分を分離す
ることはできなかった。

【００３６】そこで、２回のクロマトグラフィーで得ら
れた活性成分を1mM Tris-HCl(pH8.0) で透析した後、同
緩衝液で平衡化したDEAE−セルロースカラム（16mm×14
cm）に添加し、イオン交換クロマトグラフィーを行っ
た。0.0 〜0.5M NaCl（同緩衝液中）の濃度勾配で溶出
したところ、各成分を単離することができた（図５）。
生物検定（アワヨトウ幼虫）の結果、成分ａには強い活
性が認められた。

【００３７】(4) シロモンヤガ顆粒病ウイルスＤＮＡの
調製 シロモンヤガ顆粒病ウイルスＤＮＡの抽出は、以下の方
法（Gotoら,Journal of Genaral Virology 73. p1491-1
497, 1992 ）により行った。封入体（乾燥重で５mg程
度）をマイクロテストチューブに入れ、１mlのアルカリ
溶液（0.02M NaOH）で30〜60分溶解させた。この溶液
を、卓上小型超遠心機（ベックマン社製）により100,00
0ｇで15分遠心し、上清を捨てた。得られた沈殿を 1/2
×ＴＥバッファー（ＴＥ：10mM Tris, 1mM EDTA, pH8.
0）に懸濁し、プロティネースＫとドデシル硫酸ナトリ
ウム（SDS）をそれぞれ最終濃度が250 μｇ／mlと0.5
％になるように加え、37℃又は57℃で１時間反応させ
た。

【００３８】次いで、ＴＥ飽和フェノールでＤＮＡ抽出
を３回繰り返した後、エーテル抽出を行い、フェノール
を除去し、更にエタノール沈殿及び70％冷エタノール洗
浄を行い、吸引乾燥した。このようにして得られたＤＮ
Ａを、ＴＥバッファーに溶解した。 (5) プローブの調製Trichoplusia ni顆粒病ウイルスのゲノムＤＮＡのEcoRI
切断片プラスミドクローンのうち公知の感染力増強物質
（VEF）遺伝子（Hashimotoら,Journal of General Viro
logy 72. p2645-2651,1992）を含むもの（Eco-K）か
ら、モレキュラークローニング 1989. 1.25-1.28に従っ
てＤＮＡを抽出し、 (α−³²P)dCTP（アマシャム社製）
及びランダムプライマーラベリングキット（宝酒造社
製）を用いて放射性標識を行った。

【００３９】(6) サザーンハイブリダイゼーション 上記(5) で作製したプローブを用い、シロモンヤガ顆粒
病ウイルスのVEF遺伝子をサザーンハイブリダイゼーシ
ョン（モレキュラークローニング 9.34-9.621989）によ
ってスクリーニングした。シロモンヤガ顆粒病ウイルス
ＤＮＡ１μｇを、制限酵素BamHI、BglII及びEcoRI（宝
酒造社製）を用いて37℃で５時間作用させて消化した
後、アガロースゲル電気泳動で分離した。泳動後、サザ
ーン・トランスファー法（モレキュラークローニング,
9.34-9.46 1989）によりＤＮＡをナイロンフィルター
（Hybound-N,アマシャム社製）にブロッティングした。
ハイブリダイゼーションは、ラピッドハイブリダイゼー
ションバッファー（アマシャム社製）を用いて65℃で行
った。

【００４０】(7) シロモンヤガ顆粒病ウイルスのVEF遺
伝子のプラスミドクローンの作製 上記(6) のサザーンハイブリダイゼーションの結果、Ec
o-Kプローブを用いた場合、シロモンヤガ顆粒病ウイル
スのEcoRIの消化物においては約７kbp の単一バンドが
確認された。また、BamHIでは５〜６kbp にバンドが確
認された。この結果、プローブとハイブリダイズする遺
伝子が、公知のシロモンヤガＧＶゲノム制限酵素切断地
図のEcoRI切断片ＨとBamHI切断片Ｇ（Gotoら、Journal
of General Virology 73. p1491-1497, 1992）の共通領
域に存在することが明らかになった。ここで、EcoRI切
断片ＨとBamHI切断片Ｇとの共通領域の制限酵素切断地
図を図３に示す。

【００４１】次に、シロモンヤガ顆粒病ウイルスＤＮＡ
20μｇをEcoRIを用いて37℃で５時間消化し、0.7 ％の
アガロースゲル電気泳動を行い、６〜８kbp の大きさの
ＤＮＡ断片を抽出し、精製した。一方、ベクターとして
pBluescriptII（ストラタジーン社製）を用い、これを
EcoRIで消化したのちアルカリフォスファターゼ（宝酒
造社製）で末端を脱リン酸化した。

【００４２】上記EcoRIの消化物６〜８kbp ＤＮＡ断片
２μｇ及びEcoRIで消化したpBluescriptII 0.2μｇを混
合し、タカラライゲーションキット（宝酒造社製）によ
り16℃で24時間作用させ、ライゲーションを行った。得
られた混合物を用いて、大腸菌 NM522株のコンピテント
セル（Hanahan J.Mol.Bio. 166. p557-580, 1983記載の
方法によって作製）をモレキュラークローニング 1.74-
1.84,1989記載の方法により形質転換し、形質転換体を
得た。

【００４３】これらの形質転換体から36個の形質転換体
を任意に選び、各々についてモレキュラークローニング
1.25-1.28,1989記載の方法に従って２mlの培養物を
得、この培養物から組換え体プラスミドＤＮＡを得た。
各々の組換え体プラスミドをEcoRI及びBamHIで消化し、
ゲル電気泳動で切断片の分子量算定を行い、シロモンヤ
ガ顆粒病ウイルスＤＮＡEcoRI切断片-Hを持つプラスミ
ドを特定した。この組換え体プラスミドをpEco20と命名
した。

【００４４】(8) 塩基配列の解析 上記(7) で得られた組換え体プラスミドpEco20を用い、
pBluescriptII Exo/Mung DNAシークエンスシステム（ス
トラタジーン社製）を用いて、組換え体プラスミド DNA
pEco20 に種々の欠失が導入されたプラスミドＤＮＡを
作製し、(7) と同様にして大腸菌 NM522株に形質転換し
た。

【００４５】このようにして得られた大腸菌を培養し、
モレキュラークローニング1.25-1.28,1989 記載の方法
に従って２本鎖ＤＮＡを調製した。得られた２本鎖ＤＮ
Ａによるシークエンシングは、蛍光プライマーシークエ
ンスキット（アプライドバイオシステム社製）を用いて
ＰＣＲ法によりサンプルを調製し、自動シークエンサー
（アプライドバイオシステム社製）によって行った。

【００４６】その結果、シロモンヤガＧＶゲノムEcoRI
切断片ＨとBamHI切断片Ｇとの共通領域には、アミノ酸8
98 残基からなるタンパク質をコードする2694塩基対の
オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）が存在し（配
列番号２に示される。）、シロモンヤガＧＶ感染力増強
物質遺伝子と考えられた。このＯＲＦの開始コドン上流
には、バキュロウイルスの後期プロモーター配列である
ATAAG（配列表中下線で示される。）が存在しており、
本遺伝子は顆粒病ウイルスの感染後期に発現すると推定
された。このＯＲＦとTrichoplusia ni顆粒病ウイルス
の感染力増強物質遺伝子との相同性は、塩基配列、アミ
ノ酸配列ともに約80％であった。また、シロモンヤガＧ
Ｖの感染力増強物質遺伝子がコードするタンパク質は、
Trichoplusia niＧＶの感染力増強物質遺伝子がコード
するタンパク質よりもアミノ酸が３残基少なかった。

【００４７】

【発明の効果】本発明によって、核多角体病ウイルスの
感染力を増強するタンパク質がシロモンヤガ等顆粒病ウ
イルスから分離精製され、更にこの顆粒病ウイルスのゲ
ノムＤＮＡ上に存在するタンパク質の遺伝子が特定され
た。

【００４８】

【配列表】

１．配列番号：１ （１）配列の長さ：898 （２）配列の型：アミノ酸 （３）トポロジー：直鎖状 （４）配列の種類：ペプチド （５）起源 （ａ）生物名：シロモンヤガ顆粒病ウイルス （ｂ）株名 ：α−４株 （７）配列： Met Ser Tyr Asn Val Ile Val Pro Thr Thr Val Leu Pro Pro Trp Leu 16 Arg Ile Gly Gln Asn Trp Ile Phe Ala Arg His Arg Arg Thr Glu Val 32 Gly Val Val Leu Pro Ala Asn Thr Lys Phe Arg Val Arg Ala Asp Phe 48 Ala Lys Trp Gly Ile Thr Arg Pro Val Ile Val Arg Leu Leu Asn Asn 64 Asn Arg Asn Thr Glu Arg Glu Ile Asn Leu Thr Asn Asp Gln Trp Ile 80 Glu Met Glu His Glu His Glu Cys Val Pro Phe Val Asp Trp Pro Val 96 Gly Glu Lys Asn Thr Met Ala Glu Val His Phe Glu Ile Asp Gly Pro 112 His Ile Gln Leu Pro Val Tyr Val Phe Asn Thr Arg Pro Val Glu Asn 128 Phe Lys Ser Glu Tyr Arg Gln Ser Ser Ser Gly Tyr Cys Phe Leu Tyr 144 Leu Asp Leu Val Cys Ile Leu Val Pro Pro Ala Ser Lys Asn Val Leu 160 Leu Asp Thr Asp Leu Phe Glu Leu His Gln Phe Tyr Asn Glu Ile Ile 176 Asn Tyr Tyr Asp Asp Leu Cys Gly Leu Val Glu Asp Thr Tyr Ala Asp 192 Thr Val Asp Ser Asn Leu Pro Asn Lys Ala Ala Phe Val Lys Ala Asp 208 Gly Gly Gly Pro Gly Gly Ala Tyr Tyr Gly Pro Phe Trp Thr Ala Pro 224 Ala Asn Thr Ser Leu Arg Asp Tyr Leu Val Val Ser Pro Thr Asn Trp 240 Met Val Ile His Glu Leu Gly His Ala Tyr Asp Phe Val Phe Thr Val 256 Asn Thr Arg Leu Ile Glu Ile Trp Asn Asn Ser Phe Cys Asp Arg Ile 272 Gln Tyr Thr Trp Met Asn Lys Thr Lys Arg Gln Gln Leu Ala Arg Ile 288 Tyr Glu Asn Gln Arg Pro Gln Lys Glu Ala Ala Ile Gln Ala Leu Ile 304 Asp Asn Asn Val Pro Phe Asp Asn Trp Asp Phe Phe Glu Lys Leu Ser 320 Ile Phe Ala Trp Leu Tyr Asn Pro Gln Arg Gly Leu Asp Thr Leu Arg 336 Asn Ile Asn His Ser Tyr Arg Val His Thr Thr Arg Val Pro Ser Thr 352 Pro Tyr Pro Gln Ile Trp Ala Trp Leu Met Ser Cys Gly Tyr Asp Asn 368 Phe Trp Leu Tyr Phe Asn Arg Ile Gly Leu Phe Pro Ala Asp Phe Tyr 384 Ile Asn Glu His Asp Lys Val Val His Phe Asn Leu His Leu Arg Ala 400 Leu Ala Leu Gly Gln Ser Val Arg Tyr Pro Ile Lys Tyr Ile Ile Thr 416 Asp Phe Asp Leu Val Gln Lys Asn Tyr Asp Ile Lys Gln Tyr Leu Glu 432 Ser Asn Phe Asp Leu Val Ile Pro Glu Glu Leu Arg Gln Thr Asp Leu 448 Val Ala Asp Val Arg Val Val Cys Val Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ile 464 Val Gly Glu Pro Phe Ser Leu Tyr Asp Gly Asn Glu Arg Val Phe Glu 480 Ser Thr Val Ala Thr Asp Gly Asn Met Tyr Leu Val Gly Val Gly Pro 496 Gly Val Tyr Thr Leu Arg Ala Pro Arg Gly Lys Asp Lys Arg Tyr Lys 512 Leu His Leu Ala His Ser Pro Lys Glu Pro Val His Pro Ala Asn Asp 528 His Met Tyr Leu Leu Ile Thr His Pro Tyr Tyr Asn Gln Thr Leu Thr 544 Tyr Thr Pro Tyr Val Tyr Ser Asp Leu Ala Val Asp Met Ala His Leu 560 Phe Gly Asn Asp Arg Ser Tyr Val Ala Thr Ile Tyr Phe Asn Thr Ile 576 Glu Gln Thr Ile Thr Val Tyr Leu Asn Asn Ile Arg Ala Gly Arg Ala 592 Tyr Asn Thr Thr Pro Tyr Phe Glu Met Val Ile Val Asn Gln Thr Asn 608 Gly Thr Ser Gln Thr Phe Thr Leu Leu Glu Asp Asn Glu Thr Met Arg 624 Gln Gly Tyr Tyr Thr Phe Arg Ala Val Thr Phe Ser Met Ile Arg Leu 640 Asn Ile Ser Thr Asn Asp Arg Leu Leu Leu Val Asp Gln Phe Leu Pro 656 Ala Gly Glu Thr Met Leu Phe Met Met Gln His Gln Leu Ile Gly Asn 672 Gly Ile Leu Pro Asp Gly Ser Ile Ile Asn Ser Thr Tyr Glu Arg Val 688 Lys Glu Gln Ala Ala Phe Ile Glu Ser His Lys Gln Leu Leu Tyr Ile 704 Glu Asn Glu Leu Arg Asp Ser Ile Tyr Leu Ala Ala Gln Phe Val Asp 720 Ser Thr Ser Asn Glu Phe Leu Lys Tyr Tyr Pro Asp Tyr Tyr Arg Asp 736 Pro His Thr Phe Val Tyr Leu Phe Arg Phe Arg Gly Leu Gly Asp Asn 752 Leu Leu Leu Asp Met Gln Ile Val Pro Val Leu Asn Leu Ala Thr Val 768 Arg Ile Asn Asn Tyr Gly Ser Gly Pro His Leu Tyr Phe Asp Thr Thr 784 Tyr Leu Gly Val Glu Val Leu Asp Ala Ser Asn Thr Val Val Phe Ser 800 Tyr Ser Arg Arg Gly Asn Glu Pro Met Ile His Glu Gln His Lys Phe 816 Glu Val Tyr Lys Gly Tyr Ala Ile His Leu Phe Ile Gln Glu Pro Gly 832 Asn Arg Leu Gln Leu Met Val Asn Lys Val Leu Asp Thr Ala Leu Pro 848 Arg Thr Gln Asn Ile Tyr Ala Arg Leu Thr Gln Thr Gln Leu Val Val 864 Gly Glu Gln Asn Ile Ile Ile Asn Asp Gly Tyr Thr Ser Ser Asn Ser 880 Asp Cys Gly Asp Gln Gln Ile Arg Val Val Glu Thr Leu Lys Met Ile 896 Ala Phe 898

【００４９】２．配列番号：２ （１）配列の長さ：2736 （２）配列の型：核酸 （３）鎖の数：二本鎖 （４）トポロジー：直鎖状 （５）配列の種類：Genomic DNA （６）起源 （ａ）生物名：シロモンヤガ顆粒病ウイルス （ｂ）株名 ：α−４株 （７）配列： ATT TTT ATG TTC TAT AAA CGG TAC ATT GGG ACG TAA GAA TAT AAG ATT -1 ATG TCG TAC AAC GTG ATT GTG CCT ACT ACC GTG CTG CCG CCG TGG CTG 48 Met Ser Tyr Asn Val Ile Val Pro Thr Thr Val Leu Pro Pro Trp Leu 16 AGG ATC GGT CAA AAT TGG ATA TTC GCT AGA CAC AGA CGC ACC GAA GTC 96 Arg Ile Gly Gln Asn Trp Ile Phe Ala Arg His Arg Arg Thr Glu Val 32 GGT GTG GTT TTA CCT GCA AAC ACA AAG TTT CGG GTT CGA GCC GAT TTC 144 Gly Val Val Leu Pro Ala Asn Thr Lys Phe Arg Val Arg Ala Asp Phe 48 GCT AAA TGG GGC ATC ACG AGG CCC GTG ATC GTG CGC CTC TTG AAC AAC 192 Ala Lys Trp Gly Ile Thr Arg Pro Val Ile Val Arg Leu Leu Asn Asn 64 AAC CGT AAC ACC GAG CGC GAG ATA AAT CTG ACC AAC GAC CAA TGG ATA 240 Asn Arg Asn Thr Glu Arg Glu Ile Asn Leu Thr Asn Asp Gln Trp Ile 80 GAG ATG GAG CAC GAG CAC GAG TGT GTG CCG TTC GTC GAC TGG CCG GTG 288 Glu Met Glu His Glu His Glu Cys Val Pro Phe Val Asp Trp Pro Val 96 GGT GAA AAG AAC ACC ATG GCC GAG GTG CAC TTC GAA ATC GAC GGA CCA 336 Gly Glu Lys Asn Thr Met Ala Glu Val His Phe Glu Ile Asp Gly Pro 112 CAC ATA CAG CTT CCC GTG TAC GTG TTT AAC ACG AGA CCC GTG GAA AAC 384 His Ile Gln Leu Pro Val Tyr Val Phe Asn Thr Arg Pro Val Glu Asn 128 TTT AAG AGC GAG TAC CGG CAG AGT TCG TCG GGC TAC TGC TTC CTG TAT 432 Phe Lys Ser Glu Tyr Arg Gln Ser Ser Ser Gly Tyr Cys Phe Leu Tyr 144 TTG GAC CTG GTG TGT ATT TTG GTG CCG CCG GCT AGT AAA AAC GTG TTA 480 Leu Asp Leu Val Cys Ile Leu Val Pro Pro Ala Ser Lys Asn Val Leu 160 CTA GAC ACG GAC CTG TTT GAG CTC CAT CAA TTT TAT AAC GAA ATT ATT 528 Leu Asp Thr Asp Leu Phe Glu Leu His Gln Phe Tyr Asn Glu Ile Ile 176 AAT TAC TAT GAC GAT TTG TGC GGT TTG GTC GAG GAC ACG TAC GCA GAC 576 Asn Tyr Tyr Asp Asp Leu Cys Gly Leu Val Glu Asp Thr Tyr Ala Asp 192 ACT GTG GAT TCA AAC CTA CCC AAC AAG GCG GCA TTC GTT AAA GCC GAT 624 Thr Val Asp Ser Asn Leu Pro Asn Lys Ala Ala Phe Val Lys Ala Asp 208 GGT GGT GGT CCA GGC GGT GCT TAC TAT GGG CCG TTC TGG ACG GCT CCG 672 Gly Gly Gly Pro Gly Gly Ala Tyr Tyr Gly Pro Phe Trp Thr Ala Pro 224 GCG AAC ACC AGC TTA CGG GAT TAT CTC GTG GTG TCA CCC ACA AAC TGG 720 Ala Asn Thr Ser Leu Arg Asp Tyr Leu Val Val Ser Pro Thr Asn Trp 240 ATG GTG ATT CAC GAG CTG GGC CAC GCT TAC GAT TTC GTG TTC ACC GTC 768 Met Val Ile His Glu Leu Gly His Ala Tyr Asp Phe Val Phe Thr Val 256 AAC ACT CGC CTC ATC GAA ATT TGG AAC AAC TCG TTC TGC GAT CGC ATC 816 Asn Thr Arg Leu Ile Glu Ile Trp Asn Asn Ser Phe Cys Asp Arg Ile 272 CAA TAC ACG TGG ATG AAC AAA ACC AAG AGA CAG CAA CTG GCT CGC ATC 864 Gln Tyr Thr Trp Met Asn Lys Thr Lys Arg Gln Gln Leu Ala Arg Ile 288 TAC GAG AAC CAA CGA CCC CAG AAG GAG GCG GCT ATT CAA GCA CTA ATC 912 Tyr Glu Asn Gln Arg Pro Gln Lys Glu Ala Ala Ile Gln Ala Leu Ile 304 GAC AAC AAC GTA CCG TTT GAT AAC TGG GAC TTT TTC GAG AAA CTG AGC 960 Asp Asn Asn Val Pro Phe Asp Asn Trp Asp Phe Phe Glu Lys Leu Ser 320 ATA TTC GCG TGG CTG TAC AAC CCG CAA AGA GGA CTT GAC ACG CTG CGT 1008 Ile Phe Ala Trp Leu Tyr Asn Pro Gln Arg Gly Leu Asp Thr Leu Arg 336 AAC ATT AAC CAT TCG TAC CGG GTG CAC ACT ACT CGC GTA CCT TCG ACG 1056 Asn Ile Asn His Ser Tyr Arg Val His Thr Thr Arg Val Pro Ser Thr 352 CCT TAC CCG CAA ATA TGG GCT TGG TTG ATG AGT TGT GGT TAC GAC AAC 1104 Pro Tyr Pro Gln Ile Trp Ala Trp Leu Met Ser Cys Gly Tyr Asp Asn 368 TTT TGG CTG TAC TTT AAC CGA ATA GGC CTG TTC CCT GCC GAT TTT TAC 1152 Phe Trp Leu Tyr Phe Asn Arg Ile Gly Leu Phe Pro Ala Asp Phe Tyr 384 ATA AAC GAA CAC GAC AAA GTT GTG CAC TTT AAT TTA CAC TTG CGC GCC 1200 Ile Asn Glu His Asp Lys Val Val His Phe Asn Leu His Leu Arg Ala 400 TTG GCG TTG GGA CAG AGT GTG CGT TAC CCT ATT AAA TAC ATC ATC ACC 1248 Leu Ala Leu Gly Gln Ser Val Arg Tyr Pro Ile Lys Tyr Ile Ile Thr 416 GAT TTT GAT CTA GTG CAA AAA AAC TAT GAT ATA AAA CAA TAT TTA GAG 1296 Asp Phe Asp Leu Val Gln Lys Asn Tyr Asp Ile Lys Gln Tyr Leu Glu 432 AGT AAC TTT GAT CTT GTG ATA CCG GAA GAA CTG CGA CAG ACC GAT CTG 1344 Ser Asn Phe Asp Leu Val Ile Pro Glu Glu Leu Arg Gln Thr Asp Leu 448 GTT GCG GAC GTG AGA GTG GTG TGC GTT ATC GAC GAT CCA TCG CAA ATT 1392 Val Ala Asp Val Arg Val Val Cys Val Ile Asp Asp Pro Ser Gln Ile 464 GTG GGC GAA CCG TTC AGT TTG TAC GAC GGT AAC GAG CGG GTG TTC GAG 1440 Val Gly Glu Pro Phe Ser Leu Tyr Asp Gly Asn Glu Arg Val Phe Glu 480 AGC ACG GTG GCC ACG GAT GGT AAC ATG TAT TTG GTG GGC GTG GGA CCG 1488 Ser Thr Val Ala Thr Asp Gly Asn Met Tyr Leu Val Gly Val Gly Pro 496 GGA GTG TAC ACG TTG CGT GCG CCT CGC GGC AAG GAC AAA CGT TAC AAA 1536 Gly Val Tyr Thr Leu Arg Ala Pro Arg Gly Lys Asp Lys Arg Tyr Lys 512 CTC CAT CTG GCA CAT TCG CCC AAA GAA CCC GTT CAT CCG GCA AAC GAC 1584 Leu His Leu Ala His Ser Pro Lys Glu Pro Val His Pro Ala Asn Asp 528 CAC ATG TAC CTG CTA ATT ACA CAT CCC TAC TAC AAC CAA ACG TTA ACC 1632 His Met Tyr Leu Leu Ile Thr His Pro Tyr Tyr Asn Gln Thr Leu Thr 544 TAC ACG CCG TAC GTA TAT TCG GAT CTA GCC GTC GAC ATG GCG CAT TTA 1680 Tyr Thr Pro Tyr Val Tyr Ser Asp Leu Ala Val Asp Met Ala His Leu 560 TTC GGC AAC GAC CGT AGT TAC GTG GCC ACG ATA TAT TTC AAT ACG ATA 1728 Phe Gly Asn Asp Arg Ser Tyr Val Ala Thr Ile Tyr Phe Asn Thr Ile 576 GAA CAA ACG ATA ACC GTG TAT CTG AAC AAC ATT CGT GCC GGC CGT GCA 1776 Glu Gln Thr Ile Thr Val Tyr Leu Asn Asn Ile Arg Ala Gly Arg Ala 592 TAC AAC ACC ACT CCG TAC TTT GAA ATG GTA ATA GTC AAT CAG ACC AAT 1824 Tyr Asn Thr Thr Pro Tyr Phe Glu Met Val Ile Val Asn Gln Thr Asn 608 GGT ACT TCG CAG ACG TTC ACT TTA CTC GAG GAC AAT GAA ACG ATG CGC 1872 Gly Thr Ser Gln Thr Phe Thr Leu Leu Glu Asp Asn Glu Thr Met Arg 624 CAG GGA TAT TAT ACC TTT AGG GCG GTC ACG TTC AGT ATG ATT CGT TTG 1920 Gln Gly Tyr Tyr Thr Phe Arg Ala Val Thr Phe Ser Met Ile Arg Leu 640 AAC ATT AGC ACA AAC GAT AGA CTG TTG TTG GTG GAC CAA TTT TTA CCG 1968 Asn Ile Ser Thr Asn Asp Arg Leu Leu Leu Val Asp Gln Phe Leu Pro 656 GCG GGC GAG ACA ATG CTA TTC ATG ATG CAG CAT CAG CTG ATC GGT AAC 2016 Ala Gly Glu Thr Met Leu Phe Met Met Gln His Gln Leu Ile Gly Asn 672 GGC ATT TTG CCC GAT GGG TCC ATT ATA AAC AGC ACG TAC GAG CGC GTA 2064 Gly Ile Leu Pro Asp Gly Ser Ile Ile Asn Ser Thr Tyr Glu Arg Val 688 AAA GAA CAG GCC GCG TTC ATA GAA TCG CAC AAA CAG TTG TTG TAC ATT 2112 Lys Glu Gln Ala Ala Phe Ile Glu Ser His Lys Gln Leu Leu Tyr Ile 704 GAG AAC GAG TTG CGC GAC AGC ATC TAT TTG GCA GCA CAG TTT GTC GAC 2160 Glu Asn Glu Leu Arg Asp Ser Ile Tyr Leu Ala Ala Gln Phe Val Asp 720 TCT ACG TCA AAC GAA TTT CTC AAG TAT TAT CCC GAC TAT TAC AGG GAC 2208 Ser Thr Ser Asn Glu Phe Leu Lys Tyr Tyr Pro Asp Tyr Tyr Arg Asp 736 CCA CAC ACG TTT GTA TAC TTA TTT CGC TTC AGG GGT CTG GGT GAT AAT 2256 Pro His Thr Phe Val Tyr Leu Phe Arg Phe Arg Gly Leu Gly Asp Asn 752 TTA TTG CTA GAT ATG CAG ATT GTG CCA GTG TTA AAT TTG GCT ACT GTC 2304 Leu Leu Leu Asp Met Gln Ile Val Pro Val Leu Asn Leu Ala Thr Val 768 CGA ATC AAC AAC TAT GGA AGC GGA CCT CAC TTG TAT TTC GAC ACT ACG 2352 Arg Ile Asn Asn Tyr Gly Ser Gly Pro His Leu Tyr Phe Asp Thr Thr 784 TAT CTA GGT GTG GAA GTG CTC GAC GCA AGC AAT ACA GTA GTA TTT TCG 2400 Tyr Leu Gly Val Glu Val Leu Asp Ala Ser Asn Thr Val Val Phe Ser 800 TAT TCG CGC CGC GGT AAC GAG CCT ATG ATA CAC GAA CAG CAC AAA TTC 2448 Tyr Ser Arg Arg Gly Asn Glu Pro Met Ile His Glu Gln His Lys Phe 816 GAG GTG TAC AAA GGT TAC GCG ATA CAC TTG TTC ATA CAA GAA CCC GGT 2496 Glu Val Tyr Lys Gly Tyr Ala Ile His Leu Phe Ile Gln Glu Pro Gly 832 AAC AGA TTA CAA TTA ATG GTC AAT AAA GTC CTT GAC ACA GCG TTA CCG 2544 Asn Arg Leu Gln Leu Met Val Asn Lys Val Leu Asp Thr Ala Leu Pro 848 CGC ACT CAA AAT ATC TAC GCC CGC CTC ACC CAA ACT CAG TTG GTG GTG 2592 Arg Thr Gln Asn Ile Tyr Ala Arg Leu Thr Gln Thr Gln Leu Val Val 864 GGA GAA CAG AAC ATT ATT ATT AAC GAT GGT TAC ACA TCA AGC AAC TCT 2640 Gly Glu Gln Asn Ile Ile Ile Asn Asp Gly Tyr Thr Ser Ser Asn Ser 880 GAT TGT GGC GAC CAG CAG ATA AGA GTT GTG GAA ACT TTA AAA ATG ATT 2688 Asp Cys Gly Asp Gln Gln Ile Arg Val Val Glu Thr Leu Lys Met Ile 896 GCG TTC TAG TTA TCA GTC AGT CAG TCA ATC GAG GCC GCG ACG AAA TGA 2736 Ala Phe ***

【図面の簡単な説明】

【図１】核多角体病ウイルスのシロモンヤガ５齢幼虫感
染死亡率に及ぼすシロモンヤガ顆粒病ウイルスの影響を
示すグラフである。

【図２】シロモンヤガ顆粒病ウイルス添加によるヨトウ
ガ核多角体病ウイルスの対タバコガ幼虫感染率の上昇を
示すグラフである。

【図３】シロモンヤガ顆粒病ウイルスゲノムの制限酵素
切断地図、同ゲノムのEcoRI-HとBamHI-G切断片の共通領
域の制限酵素切断地図、及び推定されるオープンリーデ
ィングフレームの位置を示す図である。

【図４】シロモンヤガ顆粒病ウイルス封入体のアルカリ
可溶性成分を、Sephacryl S-300HR カラムを用いてゲル
濾過して得られた各画分のＳＤＳポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動を示す図である。レーン左から、分子量マー
カー、レーンＳ：ゲル濾過前の封入体アルカリ可溶性成
分、レーンＡ：分画番号７から８の溶出液、レーンＢ：
分画番号10から13の溶出液、レーンＣ：分画番号18から
21の溶出液（分子量約100 KDa の２種類のタンパク質ａ
及びｂを含む）、レーンＤ：分画番号24から25の溶出
液、レーンＥ：分画番号27から29の溶出液、レーンＦ：
分画番号36から38の溶出液、レーンＧ：分画番号42から
43の溶出液。レーンＣで示した画分のみに高い核多角体
病ウイルス感染力増強活性が認められた。

【図５】タンパク質ａ及びｂを含む画分をＤＥＡＥ−セ
ルロースカラムを用いて溶出して得られた各画分のＳＤ
Ｓポリアクリルアミドゲル電気泳動を示す図である。レ
ーンＳ：ゲル濾過前の封入体アルカリ可溶性成分、レー
ン１，２：タンパク質成分ｂのみを含む画分、レーン
３，４：タンパク質ａ及びｂを含む画分、レーン５，
６：タンパク質成分ａのみを含む画分、レーン７，８，
９，10：タンパク質成分ａ及びgranulinタンパク質（封
入体の主成分である分子量約30KDa のタンパク質）を含
む画分。

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 顆粒病ウイルス（Granulosis virus）属
   に属するウイルスであって、シロモンヤガ、ガンマキン
   ウワバ、アワヨトウ、ショウブオオヨトウ、フキヨト
   ウ、ホシミミヨトウ又はタンポキヨトウから分離される
   ウイルスに由来し、核多角体病ウイルスの感染力を増強
   する分子量約100 KDa のタンパク質。
2. 【請求項２】 顆粒病ウイルス（Granulosis virus）属
   に属するウイルスであって、下記の制限酵素切断地図を
   有するウイルスに由来し、核多角体病ウイルスの感染力
   を増強する分子量約100 KDa のタンパク質。 【化１】
3. 【請求項３】 請求項１又は２記載のタンパク質をコー
   ドする遺伝子。
4. 【請求項４】 配列番号１に示されるアミノ酸配列、又
   は配列番号１に示されるアミノ酸配列において１もしく
   は複数のアミノ酸配列が付加、欠失もしくは置換された
   アミノ酸配列を有するものであって、核多角体病ウイル
   スの感染力を増強する活性を示すタンパク質。
5. 【請求項５】 配列番号１に示されるアミノ酸配列、又
   は配列番号１に示されるアミノ酸配列において１もしく
   は複数のアミノ酸配列が付加、欠失もしくは置換された
   アミノ酸配列を有するものであって、核多角体病ウイル
   スの感染力を増強する活性を示すタンパク質をコードす
   る遺伝子。
6. 【請求項６】 配列番号２に示される塩基配列を有し、
   核多角体病ウイルスの感染力を増強する活性を示すタン
   パク質をコードする遺伝子。
7. 【請求項７】 請求項３、５又は６記載の遺伝子を含む
   組換えベクター。
8. 【請求項８】 請求項３、５もしくは６記載の遺伝子又
   は請求項７記載の組換えベクターで形質転換された形質
   転換体。