JPH0987198A - 神経細胞伸長剤 - Google Patents
神経細胞伸長剤Info
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- JPH0987198A JPH0987198A JP7263616A JP26361695A JPH0987198A JP H0987198 A JPH0987198 A JP H0987198A JP 7263616 A JP7263616 A JP 7263616A JP 26361695 A JP26361695 A JP 26361695A JP H0987198 A JPH0987198 A JP H0987198A
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- neurocyte
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- nerve cell
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 従来、非常に困難であった神経細胞の伸長を
比較的容易に実施する方法及びその目的で使用する神経
細胞伸長剤を提供する。 【構成】 神経細胞膜表面に存在するｇｐ１３０蛋白質
を刺激することを特徴とする神経細胞伸長方法及び神経
細胞膜表面に存在するｇｐ１３０を刺激し得る物質を含
む、神経細胞伸長剤により前記目的を達成する。
比較的容易に実施する方法及びその目的で使用する神経
細胞伸長剤を提供する。 【構成】 神経細胞膜表面に存在するｇｐ１３０蛋白質
を刺激することを特徴とする神経細胞伸長方法及び神経
細胞膜表面に存在するｇｐ１３０を刺激し得る物質を含
む、神経細胞伸長剤により前記目的を達成する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、神経細胞膜表面に存在
するｇｐ１３０蛋白質（以下、単にｇｐ１３０と略す
る）を刺激することを特徴とする神経細胞伸長方法及び
神経細胞膜表面に存在するｇｐ１３０を刺激し得る物質
を含む神経細胞伸長剤に関するものである。
するｇｐ１３０蛋白質（以下、単にｇｐ１３０と略す
る）を刺激することを特徴とする神経細胞伸長方法及び
神経細胞膜表面に存在するｇｐ１３０を刺激し得る物質
を含む神経細胞伸長剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】ＮＧＦ（ｎｅｒｖｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆ
ａｃｔｏｒ）は、古くから知られている神経伸長因子で
ある。従って、リコンビナントＮＧＦなどを投与するこ
とによりＮＧＦの刺激を過剰に与えることを特徴とする
神経伸長剤が期待されてきたが、ビトロでの効果に比べ
何らかの原因でビボでの効果が弱いために現時点では新
しい薬剤として開発されるに至っていない。
ａｃｔｏｒ）は、古くから知られている神経伸長因子で
ある。従って、リコンビナントＮＧＦなどを投与するこ
とによりＮＧＦの刺激を過剰に与えることを特徴とする
神経伸長剤が期待されてきたが、ビトロでの効果に比べ
何らかの原因でビボでの効果が弱いために現時点では新
しい薬剤として開発されるに至っていない。
【０００３】ｇｐ１３０は、細胞膜上の分子量約１３万
の糖蛋白質で、標的細胞により多様なシグナルを伝える
分子であることが知られている。実際に、ｇｐ１３０を
シグナル伝達物質として用いるＬＩＦ（ｌｅｕｋｅｍｉ
ａ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｆａｃｔｏｒ）やＣＮＴＦ
（ｃｉｌｉａｒｙ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃ
ｔｏｒ）は神経細胞にシグナルを伝えることが知られて
いる（Ｉｐら、Ｃｅｌｌ、６９巻、ｐ１１２１、１９９
２年及びＳｔａｈｌら、Ｃｅｌｌ、７４巻、ｐ５８７、
１９９３年参照）。またインタ−ロイキン−６（ＩＬ−
６）も神経細胞にシグナルを伝えることが知られている
（Ｓｃｈｏｂｉｔｚら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃ
ｉ．、５巻、ｐ１４２６、１９９３年参照）。
の糖蛋白質で、標的細胞により多様なシグナルを伝える
分子であることが知られている。実際に、ｇｐ１３０を
シグナル伝達物質として用いるＬＩＦ（ｌｅｕｋｅｍｉ
ａ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｆａｃｔｏｒ）やＣＮＴＦ
（ｃｉｌｉａｒｙ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃ
ｔｏｒ）は神経細胞にシグナルを伝えることが知られて
いる（Ｉｐら、Ｃｅｌｌ、６９巻、ｐ１１２１、１９９
２年及びＳｔａｈｌら、Ｃｅｌｌ、７４巻、ｐ５８７、
１９９３年参照）。またインタ−ロイキン−６（ＩＬ−
６）も神経細胞にシグナルを伝えることが知られている
（Ｓｃｈｏｂｉｔｚら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃ
ｉ．、５巻、ｐ１４２６、１９９３年参照）。
【０００４】しかしながら、これらのサイトカインは種
々の作用を持つために、インビトロでの実験で上記効果
が確認されても、不均一な細胞が混在し、さらに分解な
どによる不活性化が起こり得るビボで同じ効果が再現で
きるかどうかは不明である。実際に動物にこれらのサイ
トカインを投与して神経を伸長させた例は報告されてお
らず、ｇｐ１３０を刺激することによる神経伸長剤の開
発が可能か否かは全く不明であった。
々の作用を持つために、インビトロでの実験で上記効果
が確認されても、不均一な細胞が混在し、さらに分解な
どによる不活性化が起こり得るビボで同じ効果が再現で
きるかどうかは不明である。実際に動物にこれらのサイ
トカインを投与して神経を伸長させた例は報告されてお
らず、ｇｐ１３０を刺激することによる神経伸長剤の開
発が可能か否かは全く不明であった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】従って本発明は、ｇｐ
１３０を刺激することにより神経細胞を伸長する方法及
び神経細胞の伸長剤を提供しようとするものである。
１３０を刺激することにより神経細胞を伸長する方法及
び神経細胞の伸長剤を提供しようとするものである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者は、ｇｐ１３０
の神経細胞に対する作用について研究を行うなかで、神
経の伸長や傷害を受けた神経の再生においてｇｐ１３０
を刺激することが極めて重要な意味を持つことを見出だ
し、本発明を完成するに至った。
の神経細胞に対する作用について研究を行うなかで、神
経の伸長や傷害を受けた神経の再生においてｇｐ１３０
を刺激することが極めて重要な意味を持つことを見出だ
し、本発明を完成するに至った。
【０００７】即ち本発明は、神経細胞膜表面に存在する
ｇｐ１３０を刺激することを特徴とする神経細胞伸長方
法である。また更に本発明は、神経細胞膜表面に存在す
るｇｐ１３０を刺激し得る物質を含む、神経細胞伸長剤
である。以下、本発明を詳細に説明する。
ｇｐ１３０を刺激することを特徴とする神経細胞伸長方
法である。また更に本発明は、神経細胞膜表面に存在す
るｇｐ１３０を刺激し得る物質を含む、神経細胞伸長剤
である。以下、本発明を詳細に説明する。
【０００８】ｇｐ１３０は、細胞膜上に存在する分子量
約13万の糖蛋白質で、標的細胞により多様なシグナルを
伝えることが明らかになっている（Ｔａｇａら、Ｃｅｌ
ｌ、５８、ｐ５７３、１９８９年参照）。現在までの知
見では、ｇｐ１３０がシグナル伝達物質として関与する
サイトカインとしてＩＬ−６、（インタ−ロイキン
６）、ＣＮＴＦ（Ｃｉｌｉａｒｙ Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐ
ｈｉｃ Ｆａｃｔｏｒ）、ＩＬ−１１（インタ−ロイキ
ン１１）、ＯＭ（Ｏｎｃｏｓｔａｔｉｎ Ｍ）、ＬＩＦ
（Ｌｅｕｋｅｍｉａ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ｆａｃｔ
ｏｒ）等が知られている。
約13万の糖蛋白質で、標的細胞により多様なシグナルを
伝えることが明らかになっている（Ｔａｇａら、Ｃｅｌ
ｌ、５８、ｐ５７３、１９８９年参照）。現在までの知
見では、ｇｐ１３０がシグナル伝達物質として関与する
サイトカインとしてＩＬ−６、（インタ−ロイキン
６）、ＣＮＴＦ（Ｃｉｌｉａｒｙ Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐ
ｈｉｃ Ｆａｃｔｏｒ）、ＩＬ−１１（インタ−ロイキ
ン１１）、ＯＭ（Ｏｎｃｏｓｔａｔｉｎ Ｍ）、ＬＩＦ
（Ｌｅｕｋｅｍｉａ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ｆａｃｔ
ｏｒ）等が知られている。
【０００９】以上に述べた各サイトカインの活性の発現
は、細胞膜上に存在するｇｐ１３０が刺激されることに
より生じるが、これらサイトカインのみでｇｐ１３０を
刺激することはできず、ｇｐ１３０以外に各サイトカイ
ン固有のレセプタ−が必要である。
は、細胞膜上に存在するｇｐ１３０が刺激されることに
より生じるが、これらサイトカインのみでｇｐ１３０を
刺激することはできず、ｇｐ１３０以外に各サイトカイ
ン固有のレセプタ−が必要である。
【００１０】従って、本発明において神経細胞膜上のｇ
ｐ１３０を刺激するためには、少なくとも上記サイトカ
イン等の固有のレセプタ−、即ちＩＬ−６レセプタ−
（ＩＬ−６固有のレセプタ−、以下ＩＬ−６Ｒ）、ＣＮ
ＴＦレセプタ−（ＣＮＴＦ固有のレセプタ−、以下ＣＮ
ＴＦＲ）、ＩＬ−１１レセプタ−（ＩＬ−１１固有のレ
セプタ−、以下ＩＬ−１１Ｒ）、ＬＩＦレセプタ−（Ｌ
ＩＦ固有のレセプタ−、ＬＩＦＲ）等を各サイトカイン
存在下で神経細胞と接触させれば良い。即ち、例えばＩ
Ｌ−６とＩＬ−６Ｒを同時に神経細胞と接触させる、等
である。
ｐ１３０を刺激するためには、少なくとも上記サイトカ
イン等の固有のレセプタ−、即ちＩＬ−６レセプタ−
（ＩＬ−６固有のレセプタ−、以下ＩＬ−６Ｒ）、ＣＮ
ＴＦレセプタ−（ＣＮＴＦ固有のレセプタ−、以下ＣＮ
ＴＦＲ）、ＩＬ−１１レセプタ−（ＩＬ−１１固有のレ
セプタ−、以下ＩＬ−１１Ｒ）、ＬＩＦレセプタ−（Ｌ
ＩＦ固有のレセプタ−、ＬＩＦＲ）等を各サイトカイン
存在下で神経細胞と接触させれば良い。即ち、例えばＩ
Ｌ−６とＩＬ−６Ｒを同時に神経細胞と接触させる、等
である。
【００１１】以上に述べたサイトカインの中でも、特に
ＩＬ−６とＩＬ−６Ｒは解析が最も進んだ物質で、大量
製造の容易さや後述の理由から、本発明の神経細胞を伸
長させる目的で使用する組み合わせとして好ましい。な
おＩＬ−６Ｒは、本来膜貫通領域等を有する蛋白質であ
るが、ｇｐ１３０を刺激するのに必要な部分のみからな
る可溶性ＩＬ−６Ｒ（以下ｓＩＬ−６Ｒ、アメリカ登録
特許第５１７１８４０号等参照）は分子量も小さく、可
溶性であるという特徴故に本発明で最も好ましい。
ＩＬ−６とＩＬ−６Ｒは解析が最も進んだ物質で、大量
製造の容易さや後述の理由から、本発明の神経細胞を伸
長させる目的で使用する組み合わせとして好ましい。な
おＩＬ−６Ｒは、本来膜貫通領域等を有する蛋白質であ
るが、ｇｐ１３０を刺激するのに必要な部分のみからな
る可溶性ＩＬ−６Ｒ（以下ｓＩＬ−６Ｒ、アメリカ登録
特許第５１７１８４０号等参照）は分子量も小さく、可
溶性であるという特徴故に本発明で最も好ましい。
【００１２】より具体的に、本発明において好適に使用
されるｓＩＬ−６レセプタ−は、ＩＬ−６Ｒの細胞外領
域である。ＩＬ−６Ｒは、膜に存在する分子量約８万の
糖蛋白質で、ＩＬ−６と結合するとさらに細胞膜上のｇ
ｐ１３０と結合して細胞内にシグナルを伝える。ＩＬ−
６との結合及びｇｐ１３０との結合に必要なのは、ＩＬ
−６Ｒの細胞外領域であるため、膜貫通領域や細胞内領
域を欠失したｓＩＬ−６Ｒでも、膜型（全長型）のＩＬ
−６Ｒと同様、ＩＬ−６と結合した後、更にｇｐ１３０
と結合することでシグナルを伝達することができる。
されるｓＩＬ−６レセプタ−は、ＩＬ−６Ｒの細胞外領
域である。ＩＬ−６Ｒは、膜に存在する分子量約８万の
糖蛋白質で、ＩＬ−６と結合するとさらに細胞膜上のｇ
ｐ１３０と結合して細胞内にシグナルを伝える。ＩＬ−
６との結合及びｇｐ１３０との結合に必要なのは、ＩＬ
−６Ｒの細胞外領域であるため、膜貫通領域や細胞内領
域を欠失したｓＩＬ−６Ｒでも、膜型（全長型）のＩＬ
−６Ｒと同様、ＩＬ−６と結合した後、更にｇｐ１３０
と結合することでシグナルを伝達することができる。
【００１３】ｓＩＬ−６Ｒとして例えば、細胞外領域の
３４４アミノ酸から構成されるリコンビナントヒトｓＩ
Ｌ−６Ｒ（Ｙａｓｕｋａｗａ、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、
１０８、１９９０年）を例示することができる。
３４４アミノ酸から構成されるリコンビナントヒトｓＩ
Ｌ−６Ｒ（Ｙａｓｕｋａｗａ、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、
１０８、１９９０年）を例示することができる。
【００１４】ｓＩＬ−６Ｒ等のサイトカインのレセプタ
−は、リコンビナント蛋白質及び天然からの精製物のど
ちらでもよいが、均一性においてリコンビナントのもの
が好ましい。例えばリコンビナントｓＩＬ−６Ｒとし
て、上記の細胞外領域の３４４アミノ酸から構成される
ものが知られている（Ｙａｓｕｋａｗａ、Ｊ．Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ．、１０８、１９９０年等）が、ＩＬ−６及びｇ
ｐ１３０との結合性を保持していれば、３４４以外のア
ミノ酸数から構成されるものでも良い。
−は、リコンビナント蛋白質及び天然からの精製物のど
ちらでもよいが、均一性においてリコンビナントのもの
が好ましい。例えばリコンビナントｓＩＬ−６Ｒとし
て、上記の細胞外領域の３４４アミノ酸から構成される
ものが知られている（Ｙａｓｕｋａｗａ、Ｊ．Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ．、１０８、１９９０年等）が、ＩＬ−６及びｇ
ｐ１３０との結合性を保持していれば、３４４以外のア
ミノ酸数から構成されるものでも良い。
【００１５】本発明が適用される神経細胞は、ヒト由来
の神経細胞はもちろん、マウス神経細胞等、その細胞表
面にｇｐ１３０を発現している神経細胞であれば良い。
従って、例えば前述のサイトカインが何等かの生理作用
を有する動物種の神経細胞であれば、本発明を適用し得
る。なお、ｇｐ１３０や各種サイトカインは、動物種間
でその構造等が類似していることから、本発明では例え
ばマウスの神経細胞の伸長を目的とする場合にマウスの
ＩＬ−６Ｒを使用することはもちろん、ヒトＩＬ−６Ｒ
やヒトｓＩＬ−６Ｒ等をも使用し得る。
の神経細胞はもちろん、マウス神経細胞等、その細胞表
面にｇｐ１３０を発現している神経細胞であれば良い。
従って、例えば前述のサイトカインが何等かの生理作用
を有する動物種の神経細胞であれば、本発明を適用し得
る。なお、ｇｐ１３０や各種サイトカインは、動物種間
でその構造等が類似していることから、本発明では例え
ばマウスの神経細胞の伸長を目的とする場合にマウスの
ＩＬ−６Ｒを使用することはもちろん、ヒトＩＬ−６Ｒ
やヒトｓＩＬ−６Ｒ等をも使用し得る。
【００１６】
【実施例】以下本発明をさらに詳細に説明するために実
施例を示すが、本発明はこれら実施例に限定されるもの
ではない。なおこれら実施例で用いたサイトカイン及び
そのレセプタ−は、全てヒト由来のものである。
施例を示すが、本発明はこれら実施例に限定されるもの
ではない。なおこれら実施例で用いたサイトカイン及び
そのレセプタ−は、全てヒト由来のものである。
【００１７】実施例１ 後根神経節からの神経細胞の伸
長に対するｓＩＬ−６Ｒの効果 １７日目のＩＣＲマウス胎児の後根神経節を取り出し、
１０％ＦＣＳ（牛胎児血清）を含む０．１％コラ−ゲ
ン、ＤＭＥ／ＨＡＭＦ１２培地（ギブコ社製）０．３ｍ
ｌ中に１個の後根神経節を加えた。
長に対するｓＩＬ−６Ｒの効果 １７日目のＩＣＲマウス胎児の後根神経節を取り出し、
１０％ＦＣＳ（牛胎児血清）を含む０．１％コラ−ゲ
ン、ＤＭＥ／ＨＡＭＦ１２培地（ギブコ社製）０．３ｍ
ｌ中に１個の後根神経節を加えた。
【００１８】ＩＬ−６Ｒ（２μｇ／ｍｌ）存在下
（Ｂ）、ｓＩＬ−６Ｒ（１μｇ／ｍｌ）存在下（Ｃ）、
ＩＬ−６Ｒ（２μｇ／ｍｌ）及びｓＩＬ−６Ｒ（１μｇ
／ｍｌ）存在下（Ｄ）、ＣＮＴＦ（２μｇ／ｍｌ）存在
下（Ｅ）、そしてこれらサイトカイン及びそのレセプタ
−非存在下（Ａ）で４日間培養した後、後根神経節の伸
長の様子を観察した。結果を図１に示す。
（Ｂ）、ｓＩＬ−６Ｒ（１μｇ／ｍｌ）存在下（Ｃ）、
ＩＬ−６Ｒ（２μｇ／ｍｌ）及びｓＩＬ−６Ｒ（１μｇ
／ｍｌ）存在下（Ｄ）、ＣＮＴＦ（２μｇ／ｍｌ）存在
下（Ｅ）、そしてこれらサイトカイン及びそのレセプタ
−非存在下（Ａ）で４日間培養した後、後根神経節の伸
長の様子を観察した。結果を図１に示す。
【００１９】図１から明らかなように、ＩＬ−６とｓＩ
Ｌ−６Ｒ共存下又はＣＮＴＦ存在下で神経細胞の伸長が
確認された。これにより、ｇｐ１３０の刺激が神経細胞
の伸長に重要であること及び神経細胞はｇｐ１３０を発
現しているがＩＬ−６Ｒの発現が不足または欠如してお
り、ＩＬ−６の刺激を十分に与えるためにはｓＩＬ−６
Ｒの添加が有効であることが分かる。
Ｌ−６Ｒ共存下又はＣＮＴＦ存在下で神経細胞の伸長が
確認された。これにより、ｇｐ１３０の刺激が神経細胞
の伸長に重要であること及び神経細胞はｇｐ１３０を発
現しているがＩＬ−６Ｒの発現が不足または欠如してお
り、ＩＬ−６の刺激を十分に与えるためにはｓＩＬ−６
Ｒの添加が有効であることが分かる。
【００２０】実施例２ ペントバルビタ−ル処理により催眠状態のマウスを仰向
けに寝かし、舌下神経を首筋の切開により露出し、舌骨
付近の神経の分岐点の中枢側のあたりを浮かせて、糸に
より結紮（けっさつ）した。１週間後、マウスの血管系
を５００ｍｌの０．１Ｍリン酸バッファ−（ｐＨ７．
４、ヘパリンを含む）でかんりゅうし、さらに７５０ｍ
ｌのリン酸バッファ−、４％パラホルムアルデヒドを含
む）でかんりゅうした。結紮により障害を受けた神経、
偽処置をした神経、及び脳幹を取り出して、２％パラホ
ルムアルデヒドと０．２％ピクリン酸を含む０．２Ｍリ
ン酸バッファ−で一晩固定し、さらに３０％部分脱水し
た。凍結切片をあらかじめゼラチンで覆ったスライドグ
ラスにのせて乾燥させ、更に１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１
００を含む０．１Ｍリン酸バッファ−（ｐＨ７）で５分
間水和した。更に切片を１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１０
０、１％牛血清アルブミンを含む０．１Ｍリン酸バッフ
ァ−（ｐＨ７）で３時間ブロックした。
けに寝かし、舌下神経を首筋の切開により露出し、舌骨
付近の神経の分岐点の中枢側のあたりを浮かせて、糸に
より結紮（けっさつ）した。１週間後、マウスの血管系
を５００ｍｌの０．１Ｍリン酸バッファ−（ｐＨ７．
４、ヘパリンを含む）でかんりゅうし、さらに７５０ｍ
ｌのリン酸バッファ−、４％パラホルムアルデヒドを含
む）でかんりゅうした。結紮により障害を受けた神経、
偽処置をした神経、及び脳幹を取り出して、２％パラホ
ルムアルデヒドと０．２％ピクリン酸を含む０．２Ｍリ
ン酸バッファ−で一晩固定し、さらに３０％部分脱水し
た。凍結切片をあらかじめゼラチンで覆ったスライドグ
ラスにのせて乾燥させ、更に１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１
００を含む０．１Ｍリン酸バッファ−（ｐＨ７）で５分
間水和した。更に切片を１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１０
０、１％牛血清アルブミンを含む０．１Ｍリン酸バッフ
ァ−（ｐＨ７）で３時間ブロックした。
【００２１】次にウサギ抗マウスＩＬ−６ポリクロ−ナ
ル抗体（５μｇ／ｍｌ）あるいはウサギ抗マウスＩＬ−
６Ｒポリクロ−ナル抗体（５μｇ／ｍｌ）を含む上記ブ
ロッキングバッファ−でひと晩反応させ、３回洗浄し
た。抗原と結合した抗体は、ビオチン結合抗ウサギ免疫
グロブリン抗体及び市販の試薬（ＶＥＣＴＡＳＴＡＩＮ
ＡＢＣリエ−ジェント、商品名、Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｉｅｓ社（ＵＳＡ）製）により検出した。
結果を図２、３に示す。
ル抗体（５μｇ／ｍｌ）あるいはウサギ抗マウスＩＬ−
６Ｒポリクロ−ナル抗体（５μｇ／ｍｌ）を含む上記ブ
ロッキングバッファ−でひと晩反応させ、３回洗浄し
た。抗原と結合した抗体は、ビオチン結合抗ウサギ免疫
グロブリン抗体及び市販の試薬（ＶＥＣＴＡＳＴＡＩＮ
ＡＢＣリエ−ジェント、商品名、Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｉｅｓ社（ＵＳＡ）製）により検出した。
結果を図２、３に示す。
【００２２】図２から明らかなように、結紮により障害
を受けた舌下神経の、結紮部位から５００μｍ末梢側に
離れた箇所は、ＩＬ−６が強く発現していることが分か
る。また図３から明らかなように、脳幹に局在する舌下
神経の細胞体では、ＩＬ−６とＩＬ−６Ｒの両方が強く
発現しているのが分かる。
を受けた舌下神経の、結紮部位から５００μｍ末梢側に
離れた箇所は、ＩＬ−６が強く発現していることが分か
る。また図３から明らかなように、脳幹に局在する舌下
神経の細胞体では、ＩＬ−６とＩＬ−６Ｒの両方が強く
発現しているのが分かる。
【００２３】以上の結果は、神経障害を受けた後、局部
発現したＩＬ−６とＩＬ−６Ｒが、未だに生存している
神経細胞に作用し、神経の再生を支持していることを示
唆する。
発現したＩＬ−６とＩＬ−６Ｒが、未だに生存している
神経細胞に作用し、神経の再生を支持していることを示
唆する。
【００２４】実施例３ 神経修復におけるＩＬ−６阻害
剤の効果 障害を受けた神経細胞の再生にＩＬ−６とＩＬ−６Ｒが
生体内で関与していることを調べるために、神経の切断
を行ったマウスに対して抗マウスＩＬ−６Ｒ抗体ＲＳ１
３（Ｓａｉｔｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４７巻、
ｐ１６８、１９９１年）を投与し、神経再生への影響を
調べた。
剤の効果 障害を受けた神経細胞の再生にＩＬ−６とＩＬ−６Ｒが
生体内で関与していることを調べるために、神経の切断
を行ったマウスに対して抗マウスＩＬ−６Ｒ抗体ＲＳ１
３（Ｓａｉｔｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４７巻、
ｐ１６８、１９９１年）を投与し、神経再生への影響を
調べた。
【００２５】左右の舌下神経を露出させ一方の神経を
０．５ｍｍ間隔で２箇所、はさみで切断し断片を除い
た。ＲＳ１３あるいはコントロ−ルのＩｇＧを腹くう内
に毎週１回計５回投与した。手術５週後に１μｌのフル
オロ金色素（Ｆｌｕｏｒｏｃｈｒｏｍｅ社（ＵＳＡ）
製）を舌の両側に投与し２日後マウスを屠殺した。脳を
ドライアイスで凍結し、新鮮な凍結切片を作製した。
０．５ｍｍ間隔で２箇所、はさみで切断し断片を除い
た。ＲＳ１３あるいはコントロ−ルのＩｇＧを腹くう内
に毎週１回計５回投与した。手術５週後に１μｌのフル
オロ金色素（Ｆｌｕｏｒｏｃｈｒｏｍｅ社（ＵＳＡ）
製）を舌の両側に投与し２日後マウスを屠殺した。脳を
ドライアイスで凍結し、新鮮な凍結切片を作製した。
【００２６】フルオロ金色素は蛍光顕微鏡（ニコン社
製）で可視化し、フルオロ金色素を含む神経細胞体を計
数した。神経細胞の修復度の指標には、手術した側の脳
幹に観察されたフルオロ金色素陽性舌下神経細胞数を、
偽手術側のそれと比較し、割合を算出して、これを用い
た。結果を図４に示す。
製）で可視化し、フルオロ金色素を含む神経細胞体を計
数した。神経細胞の修復度の指標には、手術した側の脳
幹に観察されたフルオロ金色素陽性舌下神経細胞数を、
偽手術側のそれと比較し、割合を算出して、これを用い
た。結果を図４に示す。
【００２７】図４から明らかなように、コントロ−ルの
ＩｇＧを投与したマウスでは術後５週で２３％の回復が
見られたが、ＲＳ１３を投与したマウスでは１４．８％
の回復しか見られず、有意な差が確認された。
ＩｇＧを投与したマウスでは術後５週で２３％の回復が
見られたが、ＲＳ１３を投与したマウスでは１４．８％
の回復しか見られず、有意な差が確認された。
【００２８】実施例４ 組織適合性抗原Ｈ−２Ｌdのプロモ−タ−をもつヒトＩ
Ｌ−６トランスジェニックマウス（以下、ＩＬ−６ＴＧ
マウス）とβアクチンプロモ−タ−をもつヒトＩＬ−６
ＲＴＧマウス（以下、ＩＬ−６ＲＴＧマウス）を掛け合
わせることにより、４種類のＴＧマウス、６＋６Ｒ＋Ｔ
Ｇ（ＩＬ−６及びＩＬ−６Ｒ遺伝子を有する）、６＋６
Ｒ−ＴＧ（ＩＬ−６遺伝子を有するがＩＬ−６Ｒ遺伝子
は有していない）、６−６Ｒ＋ＴＧ（ＩＬ−６Ｒ遺伝子
を有するがＩＬ−６遺伝子は有していない）、及び６−
６Ｒ−ＴＧ（ＩＬ−６及びＩＬ−６Ｒ遺伝子を有してい
ない）を作製し、月齢３カ月で体重約３０ｇのＴＧマウ
スを用いて実施例３と同様の実験を行った（Ｈｉｒｏｔ
ａら、Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．ＵＳＡ、９２巻、ｐ４８６２、
１９９５年参照）。結果を図５、６に示す。
Ｌ−６トランスジェニックマウス（以下、ＩＬ−６ＴＧ
マウス）とβアクチンプロモ−タ−をもつヒトＩＬ−６
ＲＴＧマウス（以下、ＩＬ−６ＲＴＧマウス）を掛け合
わせることにより、４種類のＴＧマウス、６＋６Ｒ＋Ｔ
Ｇ（ＩＬ−６及びＩＬ−６Ｒ遺伝子を有する）、６＋６
Ｒ−ＴＧ（ＩＬ−６遺伝子を有するがＩＬ−６Ｒ遺伝子
は有していない）、６−６Ｒ＋ＴＧ（ＩＬ−６Ｒ遺伝子
を有するがＩＬ−６遺伝子は有していない）、及び６−
６Ｒ−ＴＧ（ＩＬ−６及びＩＬ−６Ｒ遺伝子を有してい
ない）を作製し、月齢３カ月で体重約３０ｇのＴＧマウ
スを用いて実施例３と同様の実験を行った（Ｈｉｒｏｔ
ａら、Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．ＵＳＡ、９２巻、ｐ４８６２、
１９９５年参照）。結果を図５、６に示す。
【００２９】図５から明らかように６＋６Ｒ＋ＴＧと６
−６Ｒ−ＴＧマウスでは、神経の再生に大きな差が見ら
れた。すなわち術後４週の時点で、後者は平均して１
４．２％の回復であったのに対し、後者は４０％の回復
を示していた。
−６Ｒ−ＴＧマウスでは、神経の再生に大きな差が見ら
れた。すなわち術後４週の時点で、後者は平均して１
４．２％の回復であったのに対し、後者は４０％の回復
を示していた。
【００３０】更に図６から明らかなように、経時的な観
察によれば６＋６Ｒ＋ＴＧマウスの神経の回復度は他の
ＴＧマウスより有意に早かった。このことは、インビボ
でのＩＬ−６とＩＬ−６Ｒの神経伸長に対する効果が大
きいことを示す。
察によれば６＋６Ｒ＋ＴＧマウスの神経の回復度は他の
ＴＧマウスより有意に早かった。このことは、インビボ
でのＩＬ−６とＩＬ−６Ｒの神経伸長に対する効果が大
きいことを示す。
【００３１】
【発明の効果】本発明で提供される、例えばｓＩＬ−６
Ｒを主成分とする神経伸長剤は、脳神経系の研究、さら
にはそれらの成果に基づく新しい治療薬診断薬等の開発
等に大きな意義を持する。即ち、従来、神経細胞の伸長
は非常に困難な作業で、細胞培養に長期間を要していた
が、本発明によれば比較的短期間で効果的な伸長を達成
することが可能となる。
Ｒを主成分とする神経伸長剤は、脳神経系の研究、さら
にはそれらの成果に基づく新しい治療薬診断薬等の開発
等に大きな意義を持する。即ち、従来、神経細胞の伸長
は非常に困難な作業で、細胞培養に長期間を要していた
が、本発明によれば比較的短期間で効果的な伸長を達成
することが可能となる。
【図１】実施例１に記載した方法で、後根神経節細胞を
（Ａ）ファクタ−非存在下、（Ｂ）ＩＬ−６存在下、
（Ｃ）ｓＩＬ−６Ｒ存在下、（Ｄ）ＩＬ−６及びｓＩＬ
−６Ｒ存在下、（Ｅ）ＣＮＴＦ存在下で培養したとき
の、細胞の状態を示す図である。
（Ａ）ファクタ−非存在下、（Ｂ）ＩＬ−６存在下、
（Ｃ）ｓＩＬ−６Ｒ存在下、（Ｄ）ＩＬ−６及びｓＩＬ
−６Ｒ存在下、（Ｅ）ＣＮＴＦ存在下で培養したとき
の、細胞の状態を示す図である。
【図２】実施例２に記載した方法で、（Ａ）結紮により
傷害を受けた、又は（Ｂ）偽手術を施した舌下神経の、
結紮部位から５００μｍ離れた箇所あるいはそれに相当
する箇所を抗ＩＬ−６Ｒ抗体で免疫染色したときの細胞
の状態（染色状態、パタ−ン）を示す図である。
傷害を受けた、又は（Ｂ）偽手術を施した舌下神経の、
結紮部位から５００μｍ離れた箇所あるいはそれに相当
する箇所を抗ＩＬ−６Ｒ抗体で免疫染色したときの細胞
の状態（染色状態、パタ−ン）を示す図である。
【図３】実施例２に記載した方法で、施術後、脳幹に局
剤する舌下神経を、（Ａ）抗ＩＬ−６Ｒ抗体、（Ｂ）抗
ＩＬ−６抗体で免疫染色したときの術後１週目の細胞の
状態（染色状態、パタ−ン）を示す図である。
剤する舌下神経を、（Ａ）抗ＩＬ−６Ｒ抗体、（Ｂ）抗
ＩＬ−６抗体で免疫染色したときの術後１週目の細胞の
状態（染色状態、パタ−ン）を示す図である。
【図４】実施例３に記載した方法で施術後、、コントロ
−ル抗体（点刻のカラム）あるいは抗マウスＩＬ−６Ｒ
抗体ＲＳ１３（黒塗カラム）の投与を受けたマウスそれ
ぞれの脳幹における、フルオロ金色素を含む舌下神経の
数の、偽手術側の数に対する術後５週目の割合を示す図
である。
−ル抗体（点刻のカラム）あるいは抗マウスＩＬ−６Ｒ
抗体ＲＳ１３（黒塗カラム）の投与を受けたマウスそれ
ぞれの脳幹における、フルオロ金色素を含む舌下神経の
数の、偽手術側の数に対する術後５週目の割合を示す図
である。
【図５】実施例４に記載した方法により、手術後４週後
の６−６Ｒ−ＴＧマウス（Ａ）と６＋６＋ＴＧマウス
（Ｂ）の舌下神経を蛍光顕微鏡で見たときの細胞の状態
（パタ−ン）を示す図である。
の６−６Ｒ−ＴＧマウス（Ａ）と６＋６＋ＴＧマウス
（Ｂ）の舌下神経を蛍光顕微鏡で見たときの細胞の状態
（パタ−ン）を示す図である。
【図６】実施例４に記載した方法により、舌下神経の切
除を受けた６＋６Ｒ＋ＴＧマウス（ｎ＝１８、黒丸）、
６＋６Ｒ−ＴＧマウス（ｎ＝１５、白四角）、６−６Ｒ
＋ＴＧマウス（ｎ＝１５、白丸）及び６−６Ｒ−ＴＧマ
ウス（ｎ＝１５、白三角）の、フルオロ金を含む舌下神
経の数の偽手術側の数に対する割合の経時変化を示す図
である。
除を受けた６＋６Ｒ＋ＴＧマウス（ｎ＝１８、黒丸）、
６＋６Ｒ−ＴＧマウス（ｎ＝１５、白四角）、６−６Ｒ
＋ＴＧマウス（ｎ＝１５、白丸）及び６−６Ｒ−ＴＧマ
ウス（ｎ＝１５、白三角）の、フルオロ金を含む舌下神
経の数の偽手術側の数に対する割合の経時変化を示す図
である。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成８年１月１９日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図面の簡単な説明
【補正方法】変更
【補正内容】
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例１に記載した方法で、後根神経節細胞を
（Ａ）ファクタ−非存在下、（Ｂ）ＩＬ−６存在下、
（Ｃ）ｓＩＬ−６Ｒ存在下、（Ｄ）ＩＬ−６及びｓＩＬ
−６Ｒ存在下、（Ｅ）ＣＮＴＦ存在下で培養したとき
の、生物の形態を示す図である。
（Ａ）ファクタ−非存在下、（Ｂ）ＩＬ−６存在下、
（Ｃ）ｓＩＬ−６Ｒ存在下、（Ｄ）ＩＬ−６及びｓＩＬ
−６Ｒ存在下、（Ｅ）ＣＮＴＦ存在下で培養したとき
の、生物の形態を示す図である。
【図２】実施例２に記載した方法で、（Ａ）結紮により
傷害を受けた、又は（Ｂ）偽手術を施した舌下神経の、
結紮部位から５００μｍ離れた箇所あるいはそれに相当
する箇所を抗ＩＬ−６Ｒ抗体で免疫染色したときの生物
の形態（染色状態、パタ−ン）を示す図である。
傷害を受けた、又は（Ｂ）偽手術を施した舌下神経の、
結紮部位から５００μｍ離れた箇所あるいはそれに相当
する箇所を抗ＩＬ−６Ｒ抗体で免疫染色したときの生物
の形態（染色状態、パタ−ン）を示す図である。
【図３】実施例２に記載した方法で、施術後、脳幹に局
剤する舌下神経を、（Ａ）抗ＩＬ−６Ｒ抗体、（Ｂ）抗
ＩＬ−６抗体で免疫染色したときの術後１週目の生物の
形態（染色状態、パタ−ン）を示す図である。
剤する舌下神経を、（Ａ）抗ＩＬ−６Ｒ抗体、（Ｂ）抗
ＩＬ−６抗体で免疫染色したときの術後１週目の生物の
形態（染色状態、パタ−ン）を示す図である。
【図４】実施例３に記載した方法で施術後、、コントロ
−ル抗体（点刻のカラム）あるいは抗マウスＩＬ−６Ｒ
抗体ＲＳ１３（黒塗カラム）の投与を受けたマウスそれ
ぞれの脳幹における、フルオロ金色素を含む舌下神経の
数の、偽手術側の数に対する術後５週目の割合を示す図
である。
−ル抗体（点刻のカラム）あるいは抗マウスＩＬ−６Ｒ
抗体ＲＳ１３（黒塗カラム）の投与を受けたマウスそれ
ぞれの脳幹における、フルオロ金色素を含む舌下神経の
数の、偽手術側の数に対する術後５週目の割合を示す図
である。
【図５】実施例４に記載した方法により、手術後４週後
の６−６Ｒ−ＴＧマウス（Ａ）と６＋６＋ＴＧマウス
（Ｂ）の舌下神経を蛍光顕微鏡で見たときの生物の形態
（パタ−ン）を示す図である。
の６−６Ｒ−ＴＧマウス（Ａ）と６＋６＋ＴＧマウス
（Ｂ）の舌下神経を蛍光顕微鏡で見たときの生物の形態
（パタ−ン）を示す図である。
【図６】実施例４に記載した方法により、舌下神経の切
除を受けた６＋６Ｒ＋ＴＧマウス（ｎ＝１８、黒丸）、
６＋６Ｒ−ＴＧマウス（ｎ＝１５、白四角）、６−６Ｒ
＋ＴＧマウス（ｎ＝１５、白丸）及び６−６Ｒ−ＴＧマ
ウス（ｎ＝１５、白三角）の、フルオロ金を含む舌下神
経の数の偽手術側の数に対する割合の経時変化を示す図
である。
除を受けた６＋６Ｒ＋ＴＧマウス（ｎ＝１８、黒丸）、
６＋６Ｒ−ＴＧマウス（ｎ＝１５、白四角）、６−６Ｒ
＋ＴＧマウス（ｎ＝１５、白丸）及び６−６Ｒ−ＴＧマ
ウス（ｎ＝１５、白三角）の、フルオロ金を含む舌下神
経の数の偽手術側の数に対する割合の経時変化を示す図
である。
Claims (5)
- 【請求項１】 神経細胞膜表面に存在するｇｐ１３０蛋
白質を刺激することを特徴とする神経細胞伸長方法。 - 【請求項２】 神経細胞膜表面に存在するｇｐ１３０蛋
白質を刺激し得る物質を含む、神経細胞伸長剤。 - 【請求項３】 少なくともインタ−ロイキン−６レセプ
タ−を主成分とすることを特徴とする請求項２の神経細
胞伸長剤。 - 【請求項４】 インタ−ロイキン−６レセプタ−が可溶
性のインタ−ロイキン６レセプタ−であることを特徴と
する請求項３の神経細胞伸長剤。 - 【請求項５】 更にインタ−ロイキン−６をも主成分と
することを特徴とする請求項３又は４に記載の神経細胞
伸長剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7263616A JPH0987198A (ja) | 1995-09-19 | 1995-09-19 | 神経細胞伸長剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7263616A JPH0987198A (ja) | 1995-09-19 | 1995-09-19 | 神経細胞伸長剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0987198A true JPH0987198A (ja) | 1997-03-31 |
Family
ID=17392017
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7263616A Pending JPH0987198A (ja) | 1995-09-19 | 1995-09-19 | 神経細胞伸長剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0987198A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005514442A (ja) * | 2001-12-31 | 2005-05-19 | イエダ リサーチ アンド ディベロップメント カンパニー リミテッド | 神経細胞の再生におけるｉｌ６ｒ／ｉｌ６キメラの使用 |
-
1995
- 1995-09-19 JP JP7263616A patent/JPH0987198A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005514442A (ja) * | 2001-12-31 | 2005-05-19 | イエダ リサーチ アンド ディベロップメント カンパニー リミテッド | 神経細胞の再生におけるｉｌ６ｒ／ｉｌ６キメラの使用 |
| US7824670B2 (en) | 2001-12-31 | 2010-11-02 | Yeda Research And Development Co., Ltd. | Use of il6r/il6 chimera in nerve cell regeneration |
| JP4685354B2 (ja) * | 2001-12-31 | 2011-05-18 | イエダ リサーチ アンド ディベロップメント カンパニー リミテッド | 神経細胞の再生におけるｉｌ６ｒ／ｉｌ６キメラの使用 |
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