JPH09510350A - 新規殺虫剤組成物及びバチルスチューリンギエンシス株 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、バチルスチューリンギエンシスの新規株であって、この株の本質的に全ての殺虫活性がこの株の発酵上清中に存在する新規株に関する。この株は、鞘翅目の害虫に対する活性を有し、かつバチルス関連殺虫剤の殺虫活性を増強する物質を産生する。本発明は、さらに、前記物質及び殺虫剤担体、又は前記物質及びバチルス関連殺虫剤、化学殺虫剤及び／又は殺虫特性を有するウイルスを含む殺虫剤組成物並びにこの殺虫剤組成物を害虫の駆除に用いる方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】 新規殺虫剤組成物及びバチルスチューリンギエンシス株 発明の分野 本発明は、バチルスチューリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎ ｇｉｅｎｓｉｓ）の新規株であって、この株の本質的に全ての殺虫活性がこの株 の発酵上清中に存在する新規株に関する。この株は、鞘翅目の害虫に対する活性 を有し、かつバチルス関連殺虫剤の殺虫活性を増強する物質を産生する。本発明 は、さらに、前記物質及び殺虫剤担体、又は前記物質及びバチルス関連殺虫剤、 化学殺虫剤及び／又は殺虫特性を有するウイルスを含む殺虫剤組成物並びにこの 殺虫剤組成物を害虫の駆除に用いる方法に関する。発明の背景 食糧、織物及び様々な栽培植物を含む、世界の商業上重要な農作物の多くの部 分が、毎年、害虫発生により失われ、数百万ドルの損害を生じている。このよう な害虫を駆除する試みに、様々な戦略が用いられている。 戦略の１つは、広スペクトルの殺虫剤、すなわち、広範囲の活性を有する化学 殺虫剤を用いることである。しかしながら、 このような化学殺虫剤の使用には多くの不都合な点がある。特に、それらの広ス ペクトルの活性のために、これらの殺虫剤は、有益な昆虫及び害虫の寄生生物の ような非標的生物を殺してしまう可能性がある。加えて、これらの化学殺虫剤は しばしば動物及び人間にとって毒性であり、標的昆虫は、このような物質に繰り 返し晒されると、しばしば耐性を身に付ける。 別の戦略は、作物に対する昆虫、カビ及び雑草の加害の抑制に天然の病原体を 用いる、生物殺虫剤の使用に関与している。生物殺虫剤は、害虫に対して毒性の 物質である毒素を産生する細菌を含む。生物殺虫剤は、一般に、化学殺虫剤より も、全体的には非標的生物及び環境に対して有害ではない。 最も広く用いられている生物殺虫剤は、バチルスチューリンギエンシス（Ｂａ ｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）（Ｂ．ｔ．）である。Ｂ．ｔ．は 、広範に分布する、棒状で、好気性の胞子形成微生物である。その胞子形成サイ クルの期間中、Ｂ．ｔ．は、昆虫の幼虫を殺す、結晶δ−エンドトキシンとして 知られる蛋白質を産生する。したがって、Ｂ．ｔ．は農薬として非常に有用であ る。 幾つかの株、例えば、バチルスチューリンギエンシス・クル スタキ亜種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｋｕｒｓｔａｋｉ）及びバチルスチューリンギエンシス・アイザワイ亜種（Ｂａ ｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｓｕｂｓｐ． ａｉｚａｗａｉ） は、鱗翅目に特異的であることが見出されている。バチルスチューリンギエンシ ス・イスラエレンシス亜種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｉｓｒａｅｌｅｎｓｉｓ）は、双翅目に特異的であることが見出 されている（Ｇｏｌｄｂｅｒｇ、米国特許４，１６６，１１２号）。他の株、例 えば、バチルスチューリンギエンシス・テネブリオニス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔ ｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｔｅｎｅｂｒｉｏｎｉｓ）（Ｋｒｉ ｅｇら、１９８９、米国特許４，７６６，２０３号）は、鞘翅目に特異的である ことが見出されている。他の鞘翅目に毒性のバチルスチューリンギエンシス株の 単離が１９８６年に報告された（Ｈｅｒｎｎｓｔａｄｔ ｅｔ ａｌ． Ｂｉｏ ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｖｏｌ．４， ３０５−３０８， １９８６、米国特 許４，７６４，３７２号、１９８８）。“バチルスチューリンギエンシス・サン ・ディエゴ亜種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓ ｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｓａｎ ｄｉｅｇｏ）”、Ｍ−７と呼ばれるこの株は、Ｎ ＲＲＬ Ｂ−１５９３９の登録番号でノーザン・リージョナル・リサーチ・ラボ ラトリー（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｒｅｇｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏ ｒａｔｏｒｙ）、ＵＳＡに寄託されている。しかしながら、“３７２号特許の譲 受人であるマイコジェン社（Ｍｙｃｏｇｅｎ， Ｃｏｒｐ．）は、バチルスチュ ーリンギエンシス・サン・ディエゴ亜種がバチルスチューリンギエンシス・テネ ブリオニス亜種であることを公式に認めている。さらに、“３７２号特許はノボ ・ノルディクスＡ／Ｓ（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ Ａ／Ｓ）に譲渡されている 。加えて、鱗翅目及び鞘翅目に対して毒性のＢ．ｔ．株が開示されている（ＰＣ Ｔ出願ＷＯ９０／１３６５１）。ＰＣＴ出願ＷＯ９０／１３６５１に開示される 毒素は８１ｋｄの分子量を有している。 その胞子形成サイクルの期間中、Ｂ．ｔ．は、２７−１４０ｋｄの範囲をとる 分子量を有し、その摂取に際して昆虫の幼虫を殺す、結晶δ−エンドトキシン（ 類）として知られる結晶形態の蛋白質（類）を産生する。毒性活性は、所定のＢ ．ｔ．株における１以上のそのようなδ−エンドトキシンに存在し得る。 ほとんどのδ−エンドトキシンは、標的昆虫中腸において蛋白分解的により小さ い毒性（切り詰められた）ポリペプチドに転 ｙ， １９８９， Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． Ｒｅｖ． ５３： ２４２−２５５ ）。これらのδ−エンドトキシン類はｃｒｙ（結晶蛋白質）遺伝子によってコー ドされる。ｃｒｙ遺伝子は、構造類似性及び殺虫特異性に基づいて、６つのクラ スと幾つかのサブクラスに分けられている。主なクラスは、鱗翅目特異的（ｃｒ ｙＩ）；鱗翅目及び双翅目特異的（ｃｒｙＩＩ）；鞘翅目特異的（ｃｒｙＩＩＩ ）；双翅目特異的（ｃｒｙＩＶ）（Ｈ ｒｏｂｉｏｌ． Ｒｅｖ． ５３： ２４２−２５５）；鞘翅目及び鱗翅目特異 的（Ｔａｉｌｏｒ ｅｔ ａｌ．， １９９２， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｉｃ ｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ６： １２１１−１２１７によってｃｒｙＶと呼ばれる） ；及び（Ｆｅｉｔｅｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， １９９２， Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈ ｎｏｌｏｇｙ １０： ２７１−２７５によってｃｒｙＶ及びｃｒｙＶＩと呼ば れる）線虫特異的遺伝子である。δ−エンドトキシン類は組換えＤＮＡ法によっ て製造さ れている。組換えＤＮＡ法によって製造されるδ−エンドトキシン類は、結晶形 態であるかもしれないし、そうではないかもしれない。 Ｂ．ｔ．δ−エンドトキシンはアルカリ性ｐＨを除いて水に不溶性であり、ほ とんど常にプラスミドがコードするものである。バチルスチューリンギエンシス の幾つかの株は、単独で殺虫性を有する、β−エキソトキシンもしくはスリンギ エンシン（ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｎ）として知られる、熱安定性殺虫性アデ ニン−ヌクレオチド類似体を産生することが示されている（Ｓｅｂｅｓｔａ ｅ ｔ ａｌ．， ｉｎ Ｈ． Ｄ． Ｂｕｒｇｅｓ （ｅｄ．）， Ｍｉｃｒｏｂ ｉａｌ Ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｐｅｓｔｓ ａｎｄ Ｐｌａｎｔ Ｄｅｓｅａ ｓｅｓ， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ｐ． ２４９ −２８１， １９８１）。β−エキソトキシンは、幾つかのバチルスチューリン ギエンシス培養物の上清中に見出されている。これは７８９の分子量を有し、ア デノシン、 ａｌ．， ｉｎ Ｋｕｒｓｔａｋ （ｅｄ．）， Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｎｄ Ｖｉｒａｌ Ｐｅｓｔｉｃｉｄｅｓ， Ｍ ａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９８２， ｐｐ３５−７ ２）。そのホスト範囲には、イエバエ（Ｍｕｓｃａ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ）、マ メストラ・コンフィグラタ・ウォーカー（Ｍａｍｅｓtｒａ ｃｏｎｆｉｇｕｒ ａｔａ Ｗａｌｋｅｒ）、テトラニカス・ウルティカエ（Ｔｅｔｒａｎｙｃｈｕ ｓ ｕｒｔｉｃａｅ）、ドロソフィラ・メラノガスター（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）、及びテトラニカス・チンナバリヌス（Ｔｅｔｒ ａｎｙｃｈｕｓ ｃｉｎｎａｂａｒｉｎｕｓ）が含まれるが、これらに限定され るものではない。β−エキソトキシンの毒性は、ＡＴＰとの競合によるＤＮＡ指 向性ＲＮＡポリメラーゼの阻害によるものと考えられている。β−エキソトキシ ンは５つのバチルスチューリンギエンシス（Ｂ．ｔ．）株中のＣｒｙプラスミド によってコードされ、β−エキソトキシンをＩ型又はＩＩ型β−エキソトキシン に分類し得ることが示されている（Ｌｅｖｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， １９９ ０， Ｊ． Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ． １７２： ３１７２−３１７９）。β−エ キソトキシンＩ型は、Ｂ．ｔ．チューリンギエンシス亜種（Ｂ．ｔ． ｓｕｂｓ ｐ． ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）血清型１、Ｂ．ｔ．トルウォ ルチ亜種（Ｂ．ｔ． ｓｕｂｓｐ． ｔｏｌｗｏｒｔｈｉ）血清型９、及びＢ． ｔ．ダルムスタディエンシス（Ｂ．ｔ． ｓｕｂｓｐ． ｄａｒｍｓｔａｄｉｅ ｎｓｉｓ）血清型１０によって産生されることが見出された。β−エキソトキシ ンＩＩ型は、Ｂ．ｔ．モリソニ亜種（Ｂ．ｔ． ｓｕｂｓｐ． ｍｏｒｒｉｓｏ ｎｉ）血清型８ａｂによって産生されることが見出され、これはＬｅｐｔｉｎｏ ｔａｒｓａ ｄｅｃｅｍｌｉｎｅａｔａ（コロラドハムシ）に対して活性である 。Ｂ．ｔ．から単離されている他の水溶性物質には、イエバエの幼虫に対して毒 ＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． Ｌｅｔｔ． ８： １−７）；レシチナーゼ類、 キチナーゼ類及びプロテアーゼ類を含む様々な蛋白分解酵素であり、その効果が β−エキソトキシン又はδ−エンドトキシンと組み合わせてのみ現れるγ−エキ ソトキシン類（Ｆｏｒｓｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．， １９７６， Ｂａｃｉｌｌ ｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ： Ｉｔｓ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ Ｅｎｖ ｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｑｕａｌｉｔｙ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃ ｈ Ｃｏｕｎｃｉｌ ｏｆ Ｃａｎａｄａ， ＮＲＣ Ａｓｓｏｃｉａｔｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｑｕａｌｉｔｙ， Ｓｕｂｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｓ ｏｎ Ｐｅｓｔｉｃｉｄｅｓ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｓ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｈｅｎｏｍｅｎａ）；β−エキソトキシ ンに類似する構造を有し、レプチノタルサ・デセムリネアタに対しても活性であ るσエキソトキシン（Ａｒｇａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．， １９９１， Ｊ． Ｅ ｎｔｏｍｏｌ． Ｓｃｉ． ２６： ２０６−２１３）；及び無水スリンギエン シン（Ｃｏｌｌ． Ｃｚｅｃｈｏｓｌｏｖａｋ Ｃｈｅｍ． Ｃｏｍｍ． ４０ ， １７７５， １９７５）が含まれる。 ＷＯ９４／０９６３０は、バチルスチューリンギエンシス・クルスタキ変種及 びバチルスチューリンギエンシス・アイザワイ変種の活性を増強させる水溶性物 質を開示する。 Ｓｔｏｎａｒｄら（１９９４， Ｉｎ Ｎａｔｕｒａｌ ａｎｄ Ｅｎｇｉｎ ｅｅｒｅｄ Ｐｅｓｔ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ Ａｇｅｎｔｓ， Ｐａｕｌ Ａ ． Ｍａｎｎ， Ｒｏｂｅｒｔ Ｍ． Ｈｏｌｌｉｎｇｗｏｒｔｈ， ｅｄｓ． ， ＡＣＳ， Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ， Ｄ． Ｃ．， ｐｐ．２５−３ ６）は、下記構造を有するディアブロチシン類（ｄｉａｂｒｏｔｉｃｉｎｓ）を 開示している。 １Ｒ、Ｒ₁、Ｒ₂＝Ｈ、Ｒ₃＝ＯＨ ディアブロチシンＡ ２Ｒ、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃＝Ｈ ディアブロチシンＢ ディアブロチシン類は枯草菌から単離されたものであり、ディアブロチカ・ウ ンデシムプンクタタ（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ ｕｎｄｅｃｉｍｐｕｎｃｔａｔａ ）、レプチノタルサ・デセムリネアタ、アンソムス・グランディス・ボーマン（ Ａｎｔｈｏｍｕｓ ｇｒａｎｄｉｓ Ｂｏｈｅｍａｎ）、蚊の幼虫、黄色ブドウ 球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、及びミクロコッカス・ ルテア（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｌｕｔｅａ）に対する活性は有するが、ヨー ロッパ・トウモロコシ穿孔虫（Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｃｏｒｎ ｂｏｒｅｒ）、 大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、枯草菌、及び緑膿菌（Ｐｓｅｕ ｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）に対する活性は有していない。他の害 虫に対する活性は、Ｓｔｏｎａｒｄらには開示されていなかった。ディアブロチ シンＡもまた、Ｂ．セレウス（Ｂ． ｃｅｒｅｕｓ）の発酵ブロスから単離され た。 当該技術分野では、高い致死率のＢ．ｔ．製剤の実現を求める努力がなされて いる。その手段には、高い致死率を有する新規の株の探査、現存する株の加工処 理、及びＢ．ｔ．胞子及び／又は結晶を新規の殺虫剤担体又は化学殺虫剤と組み 合わせることによるより効果的な製剤の設計が含まれている。 公知のＢ．ｔ．製剤の殺虫活性を改善することが本発明の目的である。 また、公知の殺虫生成物の新規用途を見出すことに加えて、殺虫剤の殺虫活性 を増強することも本発明の目的である。 バチルスチューリンギエンシスの新規の株を単離して、所定の害虫に対するよ り広いスペクトルを有する生物殺虫剤が存在するように新規物質を生成すること が有利である。発明の要約 本発明は、新規バチルスチューリンギエンシス株であって、前記株の実質的に 全ての殺虫活性が前記株の発酵上清に存在する新規バチルスチューリンギエンシ ス株に関する。本発明のバチルスチューリンギエンシス株の発酵により得られる 結晶蛋白質及び胞子は、いかなる殺虫活性をも有していない。特定の態様におい て、この株は、ＮＲＲＬ Ｂ−２１０９０の識別特徴を有するＥＭＣＣ−００７ ７、もしくはＥＭＣＣ−００７７と同じ特性を実質的に有するそれらの変異体、 ＮＲＲＬ Ｂ−２１０９１の識別特徴を有するＥＭＣＣ−００７８、もしくはＥ ＭＣＣ−００７８と同じ特性を実質的に有するそれらの変異体、ＮＲＲＬ Ｂ− ２１０９２の識別特徴を有するＥＭＣＣ−００７９、もしくはＥＭＣＣ−００７ ９と同じ特性を実質的に有するそれらの変異体、ＮＲＲＬ Ｂ−２１０９３の識 別特徴を有するＥＭＣＣ−００８０、もしくはＥＭＣＣ−００８０と同じ特性を 実質的に有するそれらの変異体、及びＮＲＲＬ Ｂ−２１０９４の識別特徴を有 するＥＭＣＣ−００８１、もしくはＥＭＣＣ−００８１と同じ特性を実質的に有 するそれらの変異体からなる群より選択される。 甲虫目の害虫に対する殺虫活性を有し、害虫に対する異なる バチルス関連殺虫剤と共に、例えば、増強物質もしくは相乗作用物質として作用 する物質が、前記株の発酵上清から得られる。好ましい態様において、この物質 は、レプチノタルサ・テキサナ（Ｌｅｐｔｉｎｏｔａｒｓａ ｔｅｘａｎａ）に ついて全物質１ｇ当り活性成分１２６μｇのＬＣ₅₀（ＬＣ₅₀は害虫の５０％を殺 すのに必要とされる所定の殺虫物質の濃度である）を有する。前記株の発酵物の ペレットのＬＣ₅₀は、生物検定による検定で、活性成分約３０００μｇ超／全物 質のｇである。 別の態様において、前記物質は、甲虫目の昆虫に対する殺虫活性を有する。最 も具体的な態様において、前記物質は、甲虫目のＩｐｓ カリグラフス（Ｉｐｓ ｃａｌｌｉｇｒａｐｈｕｓ）、ポピリア・ジャポニクス（Ｐｏｐｉｌｌｉａ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）、エピラクナ・バリバスチス（Ｅｐｉｌａｃｈｎａ ｖａ ｒｉｖａｓｔｉｓ）、レプチノタルサ・デセムリネアタ、及びデンドロクトヌス ・フロンタリス（Ｄｅｎｄｒｏｃｔｏｎｕｓ ｆｒｏｎｔａｌｉｓ）種の害虫に 対する驚くべき活性に加えて、ディアブロチカ・ウンデシムプンクタタ、レプチ ノタルサ・テキサナ、アンソムス・グランディア種の害虫に対する殺虫活性を有 している。 特定の態様においては、前記物質は、害虫に対するバチルスチューリンギエン シス結晶δエンドトキシン（類）の殺虫活性を増強する。具体的な態様において は、前記物質は、甲虫目の害虫に対するバチルスチューリンギエンシス・テネブ リオニス亜種の殺虫活性を増強する。 ここで定義されるところでは、“バチルス関連殺虫剤”はバチルス（例えば、 バチルスチューリンギエンシス又は枯草菌）株又は胞子である。また、バチルス 関連殺虫剤は、バチルスから誘導される物質、例えば、害虫に対する活性を有し 、もしくは害虫を殺す蛋白質又はそれらの断片；植物を保護する物質、例えば、 摂取阻害物質；又は、害虫に対する活性を有し、もしくは害虫を殺すバチルス蛋 白質又はそれらの断片（例えば、チューリンギエンシスバチルスδ−エンドトキ シン）をコードするバチルス遺伝子を発現することが可能な微生物及び許容し得 る担体（組成物についての次の項を参照）であってもよい。害虫は、例えば、昆 虫、線虫、ダニまたは巻き貝であってもよい。害虫に対する活性を有し、もしく は害虫を殺すバチルス蛋白質又はそれらの断片をコードするバチルス遺伝子を発 現することが可能な微生物は、フィロプレーン（植物の葉の表面）及び／ 又は根域（植物の根を取り巻く土壌）及び／又は水性環境に生息しており、特定 の環境（作物及び他の昆虫の生息環境）において野生型微生物とうまく競合する ことが可能であり、害虫に対する活性を有し、もしくは害虫を殺すバチルス蛋白 質又はそれらの断片をコードするバチルス遺伝子の安定な維持と発現を提供する 。そのような微生物の例には、細菌、例えば、バチルス、シュードモナス、エル ウィニア（Ｅｒｗｉｎｉａ）、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、クレブシエラ（ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、キサントモナス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ）、ストレ プトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）、リゾビウム（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ） 、ロドシュードモナス（Ｒｈｏｄｏｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、メチロフィリウ ス（Ｍｅｔｈｙｌｏｐｈｉｌｉｕｓ）、アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔ ｅｒｉｕｍ）、アセトバクター（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）、ラクトバチルス（ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、アルスロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ）、アゾトバクター（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ）、ロイコノストク（Ｌｅｕｃｏ ｎｏｓｔｏｃ）、アルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）、及びクロストリ ジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）属、藻類、例えば、サイア ノフィセアエ（Ｃｙａｎｏｐｈｙｃｅａｅ）、プロクロノフィセアエ（Ｐｒｏｃ ｈｌｏｎｏｒｏｐｈｙｃｅａｅ）、ロドフィセアエ（Ｒｈｏｄｏｐｈｙｃｅａｅ ）、ディノフィセアエ（Ｄｉｎｏｐｈｙｃｅａｅ）、クリソフィセアエ（Ｃｈｒ ｙｓｏｐｈｙｃｅａｅ）、プリムネシオフィセアエ（Ｐｒｙｍｎｅｓｉｏｐｈｙ ｃｅａｅ）、キサントフィセアエ（Ｘａｎｔｈｏｐｈｙｃｅａｅ）、ラフィドフ ィセアエ（Ｒａｐｈｉｄｏｐｈｙｃｅａｅ）、バチラリオフィセアエ（Ｂａｃｉ ｌｌａｒｉｏｐｈｙｃｅａｅ）、ユースチグマトフィセアエ（Ｅｕｓｔｉｇｍａ ｔｏｐｈｙｃｅａｅ）、クリプトフィセアエ（Ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｅａｅ）、 ユーグレノフィセアエ（Ｅｕｇｌｅｎｏｐｈｙｃｅａｅ）、プラシノフィセアエ （Ｐｒａｓｉｎｏｐｈｙｃｅａｅ）、及びクロロフィセラ（Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙ ｃｅａｅ）科、及び真菌、特に酵母、例えば、サッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒ ｏｍｙｃｅｓ）、クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、クルイベロ ミセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）、スポロボロミセス（Ｓｐｏｒｏｂｏｌ ｏｍｙｃｅｓ）、ロドロルラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ）、及びオーレオバシジ ウム（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ）属が含まれるが、これら に限定されるものではない。 ここで定義されるところでは、“殺虫活性”は、害虫を殺し、もしくは害虫の 成長を阻止し、もしくは害虫の襲撃から植物を保護することによる害虫に対する 活性の量を示す。 さらに、本発明は、前記物質及びバチルス関連殺虫剤を含有する殺虫剤組成物 及びこの殺虫剤組成物の害虫の駆除への使用に関する。 さらに、本発明は、“実質的に純粋な”本発明の物質を得る方法であって、 （ａ）バチルスチューリンギエンシス株を適切な成長培地で培養し、 （ｂ）（ａ）の上清を回収し、かつ （ｃ）工程（ｂ）の上清をカラムクロマトグラフィーにかけて物質を精製する 、 ことを包含する方法を指向する。 ここで定義されるところでは、“実質的に純粋な”物質は、５％未満の汚染物 質、例えば、δ−エンドトキシン蛋白質を含む物質を意味する。図面の簡単な説明 これら、もしくは他の本発明の特徴、側面及び利点は、以下の記述、添付の請 求の範囲、及び添付の図面に関してより理解されるようになるであろう。ここで 、 図１は、構造Ｉを得るための合成反応図を示し、 図２は、誘導体Ａ及びＢの構造を示し、 図３は、レプチノタルサ・デセムリネアタに対するＩａ／Ｉｂ及びＮＯＶＯＤ ＯＲ^TM相乗作用の効力を示す。発明の詳細な説明 物質の獲得 この物質は、ＮＲＲＬ Ｂ−２１０９０の識別特徴を有するＢ．ｔ．株ＥＭＣ Ｃ−００７７、もしくはＥＭＣＣ−００７７と同じ特性を実質的に有するそれら の変異体、ＮＲＲＬ Ｂ−２１０９１の識別特徴を有するＥＭＣＣ−００７８、 もしくはＥＭＣＣ−００７８と同じ特性を実質的に有するそれらの変異体、ＮＲ ＲＬ Ｂ−２１０９２の識別特徴を有するＥＭＣＣ−００７９、もしくはＥＭＣ Ｃ−００７９と同じ特性を実質的に有するそれらの変異体、ＮＲＲＬ Ｂ−２１ ０９３の識別特徴を有するＥＭＣＣ−００８０、もしくはＥＭＣＣ−００８０と 同じ特性を実質的に有するそれらの変異体、及びＮＲＲＬ Ｂ−２１０９４の識別特徴を有するＥＭＣＣ−００８１、もしくはＥＭＣＣ−０ ０８１と同じ特性を実質的に有するそれらの変異体を含み、しかしこれらに限定 されるものではない、バチルスチューリンギエンシス発酵物の上清から得ること ができる。 この物質は甲虫目の害虫に対する活性を有し、バチルス関連殺虫剤と共に、例 えば、増強物質又は相乗作用物質として作用する。具体的な態様において、この 物質は下記構造（Ｉ）を有する。 ここで、 Ｒ₁は、アミノ、ヒドロキシ、アルキル（Ｃ_1-10）、アルキル（Ｃ_1-10）エス テル、アリール（例えば、ベンゾイル、ニトロベンゾイル、ジニトロベンゾイル 、ハロベンゾイル）エステル、ハロゲン、Ｃ_1-5アルコキシ、又は、アラニル、 バリニル、 ロイシニル、イソロイシニル、フェニルアラニル、グリシニル及びフェニルグリ シニルを含み、しかしこれらに限定されるものではないアミノ酸であり、 Ｒ₂は、アルキル（Ｃ_1-10）であり、 Ｒ₃は、水素、アミノ、ヒドロキシ、アルキル（Ｃ_1-10）、アルキル（Ｃ_1-10 ）エステル、アリール（例えば、ベンゾイル、ニトロベンゾイル、ジニトロベン ゾイル、ハロベンゾイル）エステル、ハロゲン、Ｃ_1-5アルコキシ、メチルアミ ン、ジメチルアミン、チオニル、メチルチオニル、シアノ、又は、これらのリン 酸塩、硫酸塩、酢酸塩、炭酸塩及び硝酸塩を含み、しかしこれらに限定されるも のではないそれらの塩であり、 Ｒ₄は、水素、アミノ、ヒドロキシ、アルキル（Ｃ_1-10）、アルキル（Ｃ_1-10 ）エステル、アリール（例えば、ベンゾイル、ニトロベンゾイル、ジニトロベン ゾイル、ハロベンゾイル）エステル、ハロゲン、Ｃ_1-5アルコキシ、又は、これ らのリン酸塩、硫酸塩、酢酸塩、炭酸塩及び硝酸塩を含み、しかしこれらに限定 されるものではないそれらの塩であり、 Ｒ₅は、水素、メトキシ、アミノ、ヒドロキシ、アルキル（Ｃ_1-10）、アルキ ル（Ｃ_1-10）エステル、アリール（例えば、 ベンゾイル、ニトロベンゾイル、ジニトロベンゾイル、ハロベンゾイル）エステ ル、ハロゲン又はＣ_1-5アルコキシであり、 Ｒ₆は、アミノ、ヒドロキシ、アルキル（Ｃ_1-10）、アルキル、エステル、ハ ロゲン又はＣ_1-5アルコキシであり、 Ｒ₇は、水素、アミノ、ヒドロキシ、アルキル（Ｃ_1-10）、アルキル（Ｃ_1-10 ）エステル、アリール（例えば、ベンゾイル、ニトロベンゾイル、ジニトロベン ゾイル、ハロベンゾイル）エステル、ハロゲン、Ｃ_1-5アルコキシ、又は、これ らのリン酸塩、硫酸塩、酢酸塩、炭酸塩及び硝酸塩を含み、しかしこれらに限定 されるものではないそれらの塩であり、 Ｒ₈は、水素、アミノ、ヒドロキシ、アルキル（Ｃ_1-10）、アルキル（Ｃ_1-10 ）エステル、アリール（例えば、ベンゾイル、ニトロベンゾイル、ジニトロベン ゾイル、ハロベンゾイル）エステル、ハロゲン、Ｃ_1-5アルコキシ、メチルアミ ン、ジメチルアミン、チオニル、メチルチオニル、シアノ、又は、これらのリン 酸塩、硫酸塩、酢酸塩、炭酸塩及び硝酸塩を含み、しかしこれらに限定されるも のではないそれらの塩であり、 Ｒ₉は、アルキル（Ｃ_1-10）であり、かつ Ｒ₁₀は、アミノ、ヒドロキシ、アルキル（Ｃ_1-10）、アルキ ル（Ｃ_1-10）エステル、アリール（例えば、ベンゾイル、ニトロベンゾイル、ジ ニトロベンゾイル、ハロベンゾイル）エステル、ハロゲン、Ｃ_1-5アルコキシ、 又は、アラニル、バリニル、ロイシニル、イソロイシニル、フェニルアラニル、 グリシニル、及びフェニルグリシニルを含み、しかしこれらに限定されるもので はないアミノ酸である。 ピラジン窒素は、アルキル（Ｃ_1-10）、アルキル（Ｃ_1-10）エステル、アリー ル（例えば、ベンゾイル、ニトロベンゾイル、ジニトロベンゾイル、ハロベンゾ イル）エステル、又は酸素で任意に置換することが可能である。 本発明が、ラセミ化合物に加えて、構造Ｉの化合物の立体異性体形態の各々ま で広がることは理解されるようになる。 最も具体的な態様において、この物質は構造Ｉａ（以下、“Ｉａ”と呼ぶ）又 は構造Ｉｂ（以下、“Ｉｂ”と呼ぶ）を有する。 Ｉａ：Ｒ、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃＝Ｈ Ｉｂ：Ｒ、Ｒ₁、Ｒ₂＝Ｈ、Ｒ₃＝ＯＨ バチルスチューリンギエンシスは、当該技術分野において周知の培地及び発酵 技術（例えば、Ｒｏｇｏｆｆ ｅｔ ａｌ．， １９６９， Ｊ． Ｉｎｖｅｒ ｔｅｂｒａｔｅ Ｐａｔｈ． １４： １２２−１２９；Ｄｕｌｍａｇｅ ｅｔ ａｌ．， １９７１， Ｊ． Ｉｎｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ Ｐａｔｈ． １８ ： ３５３−３５８；Ｄｕｌｍａｇｅ ｅｔ ａｌ．， ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉ ａｌ Ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｐｅｓｔｓ ａｎｄ Ｐｌａｎｔ Ｄｉｓｅａｓ ｅｓ， Ｈ． Ｄ． Ｂｕｒｇｅｓ， ｅｄ． Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ ， Ｎ．Ｙ．， １９８０を参照）を用いて培養することができる。発酵サイク ルが終了すると、当該技術分野において周知の 手段、例えば、遠心及び／又は限外濾過によってＢ．ｔ．胞子及び結晶を発酵ブ ロスから分離することにより上清を回収することができる。前記物質はこの上清 中に含まれており、当該技術分野において周知の手段、例えば、限外濾過、蒸発 、及び噴霧乾燥によって回収することが可能である。 代わりに、当該技術分野において周知の手順を用いる化学合成により、本発明 の物質を得ることもできる。 構造Ｉを得るため、多くの反応、例えば、α−アミノカルボニル化合物の自発 縮合により、適当な置換及び保護基を有する簡素なピラジン環を形成することが できる。ジヒドロピラジン中間体が形成されるが、酸素で容易にピラジンまで酸 化される。この方法による単一のα−アミノカルボニル化合物の二量体化は単一 のピラジンを誘導するのに対して、２つの異なるα−アミノカルボニル化合物を 用いる反応が３種類の生成物を誘導する；前記物質は、クロマトグラフィー分離 により単離される（図１を参照）。後者の反応は、環の各側部に異なる置換基を 有するピラジン類の合成を可能にする。 この物質の精製は、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、アフィニティ 、及びサイズ排除カラムクロマトグラフィ ー）、電気泳動法、示差溶解度、抽出、又は当該技術分野において周知の標準技 術（例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ， ｅｄｓ． Ｊ−Ｃ ． Ｊａｎｓｏｎ ａｎｄ Ｌａｒｓ Ｒｙｄｅｎ， ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈ ｅｒｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９８９を参照）を含み、しかしこれらに限定 されるものではない様々な手順により行うことができる。 前記物質の活性は、人工的栄養素取り込み（ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ ｄｉｅｔ ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、人為的栄養素被覆（ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ ｄｉｅｔ ｏｖｅｒｌａｙ）、リーフ・ペインティング（ｌｅａｆ ｐａｉｎｔ ｉｎｇ）、リーフ・ディップ（ｌｅａｆ ｄｉｐ）及びフォリアー・スプレー（ ｆｏｌｉａｒ ｓｐｒａｙ）のような、当該技術分野において周知の手順を用い て生物検定することができる。このような生物検定の具体的な例が以下の例の項 にある。前記物質を含有する組成物 前記物質は、単独で；前に定義されるようにバチルス株、胞子、害虫に対する 活性を有し、もしくは害虫を殺す蛋白質又はそれらの断片であるバチルス関連殺 虫剤、及び、任意に、殺虫 剤組成物に許容し得る担体と共に処方し、例えば、懸濁液、溶液、エマルジョン 、パウダー、分散性顆粒、湿潤性粉末、乳濁性濃縮物、エアロゾルもしくは含浸 顆粒とすることができる。このようなバチルス株の例には、バチルスチューリン ギエンシス・クルスタキ亜種（アボット・ラボラトリーズ社（Ａｂｂｏｔｔ Ｌ ａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｉｎｃ．）からＤＩＰＥＬ^TM、サンド（Ｓａｎｄｏ ｚ）からＪＡＶＥＬＩＮ^TM、ノボ・ノルディクスＡ／Ｓ（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉ ｓｋ Ａ／Ｓ）からＢＩＯＢＩＴ^TM、ノボ・ノルディクスＡ／ＳからＦＯＲＡＹ^TM 、マイコジェン（Ｍｙｃｏｇｅｎ）からＭＶＰ^TM、ノボ・ノルディクスＡ／Ｓ からＢＡＣＴＯＳＰＥＩＮＥ^TM、及びサンドからＴＨＵＲＩＣＩＤＥ^TMとして市 販されている）；バチルスチューリンギエンシス・アイザワイ亜種（ノボ・ノル ディクスＡ／ＳからＦＬＯＲＢＡＣ^TM、及びアボット・ラボラトリーズ社からＸ ＥＮＴＡＲＩ^TMとして市販されている）；バチルスチューリンギエンシス・テネ ブリオニス亜種（ノボ・ノルディクスＡ／ＳからＮＯＶＯＤＯＲ^TM、サンドから ＴＲＩＤＥＮＴ^TM、マイコジェンからＭ−ＴＲＡＫ^TM及びＭ−ＯＮＥ^TMとして市 販されている）；バチルスチューリンギエンシス・イスラ エレンシス亜種（ノボ・ノルディクスＡ／ＳからＢＡＣＴＩＭＯＳ^TMもしくはＳ ＫＥＥＴＡＬ^TMのいずれか、サンドからＴＥＫＮＡＲ^TM、及びアボット・ラボラ トリーズ社からＶＥＣＴＯＢＡＣ^TMとして市販されている）；バチルス；スファ エリクス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ）（ノボ・ノルディクスＡ ／ＳからＳＰＨＥＲＩＭＯＳ^TMとして市販されている）；バチルスチューリンギ エンシス・クルスタキ／テネブリオニス（エコジェン（Ｅｃｏｇｅｎ）からＦＯ ＩＬ^TMとして市販されている）；バチルスチューリンギエンシス・クルスタキ／ アイザワイ（エコジェンからＣＯＮＤＯＲＴＭ及びチバ−ガイギー（Ｃｉｂａ− Ｇｅｉｇｙ）からＡＧＲＥＥ^TMとして市販されている）；及びバチルスチューリ ンギエンシス・クルスタキ／クルスタキ（エコジェンからＣＵＴＬＡＳＳＴＭと して市販されている）が含まれるが、これらに限定されるものではない。バチル ス関連蛋白質は、ＣｒｙＩ、ＣｒｙＩＩ、ＣｒｙＩＩＩ、ＣｒｙＩＶ、ｃｒｙＶ 、及びＣｒｙＶＩを含み、しかしこれらに限定されるものではない群から選択す ることができる。 また、前記物質は他の因子、又は、エキソトキシン及び／又は１９９３年７月 ２０日に出願された連続番号０８／０９５， ２４０の出願に開示される増強因子を含み、しかしこれらに限定されるものでは ないバチルス上清の上清から得られる物質と共に処方することもできる。この出 願は、参照することによりここに組み込まれる。任意に、この製剤は、バチルス 関連殺虫剤、化学殺虫剤及び／又は殺虫特性を有するウイルス並びに許容し得る 担体を含んでいてもよい。 特定の態様において、前記組成物の成分は相乗作用的に作用し得る。結果とし て、前記組成物は、個々の成分の各々を用いて達成することができるものよりも 高い効力を有し得る。相乗作用はまた、個々の成分の各々に必要とされるものよ りも低用量及び／又は低頻度用量で、同等もしくはより高い効力で現れ得る。あ るいは、前記物質はバチルス関連殺虫剤を増強するように作用する。 前記物質及びバチルス関連殺虫剤を含有する組成物において、前記物質はＬＴ Ｕあたり約０．００１ないし３００ｇの量で存在する。ここで定義されるにあた り、“ＬＴＵ”は生物検定によって決定されるレプチノタルサ・テキサナ単位で ある。この生物検定は、レプチノタルサ・テキサナ又は他の害虫を標準試験生物 として用いて、サンプルを標準バチルス基準物質と比較 する。効力は、基準標準ＬＣ₅₀を割り、次いで基準標準効力を乗じることにより 決定される。 別の態様において、組成物は、実質的に純粋な形態の前記物質又は乾燥、濃縮 、もしくは液体形態にあるバチルス由来の上清、及びその例が以下に開示されて いる適切な殺虫剤担体を含んでいてもよい。この組成物は、植物、例えば、トラ ンスジェニック植物に別々に適用することができる。具体的には、この組成物は 、予めバチルスチューリンギエンシス遺伝子を有する植物に適用することができ る。別の態様においては、組成物は予めバチルスチューリンギエンシス組成物に 晒した植物に適用することができる。前記物質は、この組成物中に、約０．００ １％ないし約６０％（Ｗ／Ｗ）の濃度で存在する。 上に開示される組成物は、表面活性剤、不活性担体、保存剤、湿潤剤、摂食刺 激剤、誘引剤、カプセル化剤、結合剤、乳化剤、染料、Ｕ．Ｖ．保護剤、緩衝剤 、流動剤、又は生成物の取り扱い及び特定の標的害虫への適用を容易にする他の 成分を添加することによっても得ることができる。 適切な表面活性剤には、アニオン性化合物、例えば、長鎖脂肪酸の金属カルボ ン酸塩のようなカルボン酸塩；Ｎ−アシルサ ルコシネート；脂肪アルコールエトキシレートとリン酸のモノもしくはジエステ ル又はそのようなエステルの塩；ドデシル硫酸ナトリウム、オクタデシル硫酸ナ トリウムもしくはセチル硫酸ナトリウムのような脂肪アルコール硫酸塩；エトキ シル化アルキルフェノール硫酸塩；スルホン酸リグニン；石油スルホネート；ア ルキルベンゼンスルホネートもしくは低級アルキルナフタレンスルホネート、例 えばブチルナフタレンスルホネート、のようなアルキルアリールスルホネート； スルホン化ナフタレン−ホルムアルデヒド縮合物の塩；スルホン化フェノール− ホルムアルデヒド縮合物の塩；又は、スルホン酸アミド、例えばオレイン酸とＮ −メチルタウリンとのスルホン化縮合生成物、又はジアルキルスルホスクシネー ト、例えばスルホン酸ナトリウムもしくはジオクチルスクシネート、のようなよ り複雑なスルホン酸塩が含まれるが、これらに限定されるものではない。非イオ ン性剤には、脂肪酸エステル、脂肪アルコール、脂肪酸アミド又は脂肪アルキル −もしくはアルケニル−置換フェノールとエチレンオキシド、多価アルコールエ ステルの脂肪エステル、例えばソルビタン脂肪酸エステル、との縮合生成物、そ のようなエステルとエチレンオキシドとの縮合生成物、例えばポ リオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステル、エチレンオキシドとプロピレン オキシドとのブロック共重合体、２，４，７，９−テトラエチル−５−デシン− ４，７−ジオールのようなアセチレン性グリコール、又はエトキシル化アセチレ ン性グリコールが含まれるが、これらに限定されるものではない。カチオン性界 面活性剤の例には、例えば、酢酸塩、ナフテン酸塩もしくはオレイン酸塩として の脂肪族モノ−、ジ−もしくはポリアミン；ポリオキシエチレンアルキルアミン のアミンオキシドのような酸素含有アミン；カルボン酸とジ−もしくはポリアミ ンとの縮合によって調製されるアミド結合アミン；又は第四アンモニウム塩が含 まれる。 不活性物質の例には、カオリン、マイカ、石膏、肥料、フィロケイ酸塩、炭酸 塩、硫酸塩もしくはリン酸塩のような無機物；糖、デンプン、もしくはシクロデ キストリンのような有機物；又は樹木産生物、石炭、トウモロコシ穂軸粉末、コ メ外皮、落花生外皮及びウォールナッツ殻のような植物材料が含まれるが、これ らに限定されるものではない。 本発明の組成物は、直接的な適用に適した形態をとることができ、又は適用の 前に適切な量の水もしくは他の希釈液で希釈 することが必要な濃縮物もしくは一次組成物とすることが可能である。殺虫濃度 は、特定の処方の性質、特に、それが濃縮されているのか、あるいは直接用いる ものかのいずれであるかに応じて変化する。組成物は、１ないし９８重量％の固 体もしくは液体不活性担体、及び０ないし５０％、好ましくは０．１％ないし５ ０％の表面活性剤を含む。これらの組成物は、市販品について表示される割合で 、好ましくは、乾燥形態の場合にはエーカー当たり約０．０１ポンドないし５． ０ポンド、液体形態の場合にはエーカー当たり約０．０１パイントないし２５パ イントで施される。 さらなる態様において、バチルス関連殺虫剤及び／又は物質を、予備処理がバ チルス関連殺虫剤又は物質に対して有害ではない限りにおいて、処方に先立って 処理し、標的害虫の環境に適用された場合の殺虫活性を長期化することが可能で ある。このような処理は、その処理が組成物の特性に有害な作用を及ぼさない限 りにおいて、化学的及び／又は物理的手段によるものであってよい。化学試薬の 例には、ハロゲン化剤；ホルムアルデヒド及びグルタルアルデヒドのようなアル デヒド類；塩化ゼフィラン（ｚｅｐｈｉｒａｎ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）のような抗 感染剤；イソプロパノール及びエタノールようなアルコール類；ブアン固定液及 びヘリー固定液のような組織固定剤が含まれるが、これらに限定されるものでは ない（例えば、Ｈｕｍａｓｏｎ， Ａｎｉｍａｌ Ｔｉｓｓｕｅ Ｔｅｃｈｎｉ ｑｕｅｓ， Ｗ． Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．， １９６７を参照 ）。 本発明の組成物は、害虫が植物上に出現し始めた時期に、あるいは害虫が出現 する以前に予防手段として、例えば、噴霧又は振りかけることにより植物に直接 適用することが可能である。本発明の範囲内にある保護される植物には、鑑賞用 植物の他に、穀類（小麦、大麦、ライ麦、カラス麦、コメ、モロコシ属植物及び 関連作物）、ビート類（サトウダイコン及び飼料ビート）、核果、梨果及び軟果 （リンゴ、ナシ、プラム、モモ、アーモンド、サクランボ、イチゴ、キイチゴ、 及びセイヨウヤブイチゴ）、マメ科植物（アルファルファ、インゲン属マメ、レ ンズマメ、エンドウマメ、大豆）、油植物（セイヨウアブラナ、カラシ、ケシ、 オリーブ、ヒマワリ、ココナッツ、ヒマシ油植物、カカオマメ、アメリカホドイ モ）、キュウリ植物（キュウリ、ナタウリ、メロン）、繊維植物（綿、アマ、大 麻、インド麻）、柑 橘類果物（ミカン、レモン、グレープフルーツ、マンダリン）、野菜（ホウレン ソウ、レタス、アスパラガス、キャベツ及び他のブラシカ種（ｂｒａｓｓｉｃａ ｅ）植物、ニンジン、タマネギ、トマト、ジャガイモ）、クスノキ科植物（アボ ガド、肉桂、クスノキ）、落葉樹及び針葉樹（例えば、リンデン、セイヨウイチ イ、オーク、オールダー、ポプラ、カバ、モミ、カラマツ、マツ）、又はトウモ ロコシ、芝生、タバコ、ナッツ、コーヒー、サトウキビ、茶、ブドウ、ホップ、 バナナ及び天然ゴム植物のような植物が含まれるが、これらに限定されるもので はない。この物質は、葉への適用、畝間への適用、散布顆粒での適用、“レイ− バイ（ｌａｙ−ｂｙ）”での適用、又は土壌ドレンチでの適用により適用するこ とができる。一般に、植物成長の早期段階において害虫をうまく駆除することが 重要である。これは、この時期が植物が最も深刻な損害を受け得る段階であるた めである。スプレー及び粉末は、それが必要であると思われるならば、他の殺虫 剤を都合よく含むことが可能である。好ましい態様において、本発明の組成物は 植物に直接適用される。 本発明の組成物は、甲虫目の害虫、例えば、レプチノタルサ種（例えば、レプ チノタルサ・テキサナ、レプチノタルサ・デ セムリネアタ）、ディアブロチカ・ウンデシムプンクタタ、デンドロクトヌス・ フロンタリス、アントモムス・グランディス（Ａｎｔｈｏｎｏｍｕｓ ｇｒａｎ ｄｉｓ）、アカントセリデス・オブテクツス（Ａｃａｎｔｈｏｓｃｅｌｉｄｅｓ ｏｂｔｅｃｔｕｓ）、カロソブルクス・チネンシス（Ｃａｌｌｏｓｏｂｒｕｃ ｈｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）、エピラクナ・バリベスチス（Ｅｐｉｌａｃｈｎ ａ ｖａｒｉｖｅｓｔｉｓ）、ピルハルタ・ルテオラ（Ｐｙｒｒｈａｌｔａ ｌ ｕｔｅｏｌａ）、シラス・ホルミカリウス・エレガンツルス（Ｃｙｌａｓ ｆｏ ｒｍｉｃａｒｉｕｓ ｅｌｅｇａｎｔｕｌｕｓ）、リストロノツス・オレゴネン シス（Ｌｉｓｔｒｏｎｏｔｕｓ ｏｒｅｇｏｎｅｎｓｉｓ）、シトフィルス種、 シクロセファラ・ボレアリス（Ｃｙｃｌｏｃｅｐｈａｌａ ｂｏｒｅａｌｉｓ） 、シクロセファラ・イマクラタ（Ｃｙｃｌｏｃｅｐｈａｌａ ｉｍｍａｃｕｌａ ｔａ）、パロルス・ラトゼブルギ（Ｐａｌｏｒｕｓ ｒａｔｚｅｂｕｒｇｉ）、 テネブリオ・モリトル（Ｔｅｎｅｂｒｉｏ ｍｏｌｉｔｏｒ）、テネブリオ・オ ブスクルス（Ｔｅｎｅｂｒｉｏ ｏｂｓｃｕｒｕｓ）、トリボリウム・カスタネ ウム（Ｔｒｉｂｏｌｉｕｍ ｃａｓｔａｎｅｕｍ）、トリボリ ウム・コンフスム（Ｔｒｉｂｏｌｉｕｍ ｃｏｎｆｕｓｕｍ）、トリボリウス・ デストラクトル（Ｔｒｉｂｏｌｉｕｓ ｄｅｓｔｒｕｃｔｏｒ）に対して有効で あり得る。また、本発明の組成物は、鱗翅目の害虫、例えば、アクロイア・グリ セラ（Ａｃｈｒｏｉａ ｇｒｉｓｅｌｌａ）、アクレリス・グロベラナ（Ａｃｌ ｅｒｉｓ ｇｌｏｖｅｒａｎａ）、アクレリス・バリアナ（Ａｃｌｅｒｉｓ ｖ ａｒｉａｎａ）、アドキソフィエス・オラナ（Ａｄｏｘｏｐｈｙｅｓ ｏｒａｎ ａ）、アグロチス・イプシロン（Ａｇｒｏｔｉｓ ｉｐｓｉｌｏｎ）、アラバマ ・アルギラセア（Ａｌａｂａｍａ ａｒｇｉｌｌａｃｅａ）、アルソフィラ・ポ メタリア（Ａｌｓｏｐｈｉｌａ ｐｏｍｅｔａｒｉａ）、アミエロイス・トラン シテラ（Ａｍｙｅｌｏｉｓ ｔｒａｎｓｉｔｅｌｌａ）、アナガスタ・クエニエ ラ（Ａｎａｇａｓｔａ ｋｕｅｈｎｉｅｌｌａ）、アナルシア・リネアテラ（Ａ ｎａｒｓｉａ ｌｉｎｅａｔｅｌｌａ）、アニソタ・セナトリア（Ａｎｉｓｏｔ ａ ｓｅｎａｔｏｒｉａ）、アンテラエア・ペルニイ（Ａｎｔｈｅｒａｅａ ｐ ｅｒｎｙｉ）、アンチカルシア・ゲマタリス（Ａｎｔｉｃａｒｓｉａ ｇｅｍｍ ａｔａｌｉｓ）、アルキプス種（Ａｒｃｈｉｐｓ ｓｐ．）、 アルギロタエニア種（Ａｒｇｙｒｏｔａｅｎｉａ ｓｐ．）、アテチス・ミンダ ラ（Ａｔｈｅｔｉｓ ｍｉｎｄａｒａ）、ボンビクス・モリ（Ｂｏｍｂｙｘ ｍ ｏｒｉ）、ブックラトリックス・ツルベリエラ（Ｂｕｃｃｕｌａｔｒｉｘ ｔｈ ｕｒｂｅｒｉｅｌｌａ）、カドラ・カウテラ（Ｃａｄｒａ ｃａｕｔｅｌｌａ） 、コリストネウラ種（Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ ｓｐ．）、コキルス・ホス ペス（Ｃｏｃｈｙｌｌｓ ｈｏｓｐｅｓ），コリアス・ユーリテメ（Ｃｏｌｉａ ｓ ｅｕｒｙｔｈｅｍｅ）、コルシラ・セファロニカ（Ｃｏｒｃｙｒａ ｃｅｐ ｈａｌｏｎｉｃａ）、シディア・ラチフェレアヌス（Ｃｙｄｉａ ｌａｔｉｆｅ ｒｒｅａｎｕｓ）、シディア・ポモネラ（Ｃｙｄｉａ ｐｏｍｏｎｅｌｌａ）、 ダタナ・インテゲリマ（Ｄａｔａｎａ ｉｎｔｅｇｅｒｒｉｍａ）、デンドロリ ムス・シベリクス（Ｄｎｄｒｏｌｉｍｕｓ ｓｉｂｅｒｉｃｕｓ）、デスミア・ フネラリス（Ｄｅｓｍｉａ ｆｕｎｅｒａｌｉｓ）、ディアファニア・ヒアリナ タ（Ｄｉａｐｈａｎｉａ ｈｙａｌｉｎａｔａ）、ディアファニア・ニチダリス （Ｄｉａｐｈａｎｉａ ｎｉｔｉｄａｌｉｓ）、ディアトラエア・グランディオ セラ（Ｄｉａｔｒａｅａ ｇｒａｎｄｉｏｓｅｌｌａ）、ディ アトラエア・サッカラリス（Ｄｉａｔｒａｅａ ｓａｃｃｈａｒａｌｉｓ）、エ ノモス・サブシグナリア（Ｅｎｎｏｍｏｓ ｓｕｂｓｉｇｎａｒｉａ）、エオリ ューマ・ロフチニ（Ｅｏｒｅｕｍａ ｌｏｆｔｉｎｉ）、エフェスチア・エルテ ラ（Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｅｌｕｔｅｌｌａ）、エラニス・チラリア（Ｅｒａｎｎ ｉｓ ｔｉｌａｒｉａ）、エスチグメネ・アクレア（Ｅｓｔｉｇｍｅｎｅ ａｃ ｒｅａ）、ユーリア・サルブリコラ（Ｅｕｌｉａ ｓａｌｕｂｒｉｃｏｌａ）、 ユーポコエリア・アムビグエラ（Ｅｕｐｏｃｏｅｌｌｉａ ａｍｂｉｇｕｅｌｌ ａ）、ユーポエシリア・アムビグエラ（Ｅｕｐｏｅｃｉｌｉａ ａｍｂｉｇｕｅ ｌｌａ）、ユープロクチス・クリソルホエア（Ｅｕｐｒｏｃｔｉｓ ｃｈｒｙｓ ｏｒｒｈｏｅａ）、ユーキソア・メソリア（Ｅｕｘｏａ ｍｅｓｓｏｒｉａ）、 ガレリア・メロネラ（Ｇａｌｌｅｒｉａ ｍｅｌｌｏｎｅｌｌａ）、グラホリタ ・モレスタ（Ｇｒａｐｈｏｌｉｔａ ｍｏｌｅｓｔａ）、ハリシナ・アメリカナ （Ｈａｒｒｉｓｉｎａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）、ヘリコベルパ・サブフレキサ（ Ｈｒｌｉｃｏｖｅｒｐａ ｓｕｂｆｌｅｘａ）、ヘリコベルパ・ゼア（Ｈｅｌｉ ｃｏｖｅｒｐａ ｚｅａ）、ヘリオチス・ビレセンス（Ｈｅ ｌｉｏｔｈｉｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ）、ヘミリューカ・オリビアエ（Ｈｅｍｉ ｌｅｕｃａ ｏｌｉｖｉａｅ）、ホモエオソマ・エレクテルム（Ｈｏｍｏｅｏｓ ｏｍａ ｅｌｅｃｔｅｌｌｕｍ）、ヒファントリア・クネア（Ｈｙｐｈａｎｔｒ ｉａ ｃｕｎｅａ）、ケイフェリア・リコペルシセラ（Ｋｅｉｆｅｒｉａ ｌｙ ｃｏｐｅｒｓｉｃｅｌｌａ）、ラムブジナ・フィセラリア・フィセラリア（Ｌａ ｍｂｄｉｎａ ｆｉｓｃｅｌｌａｒｉａ ｆｉｓｃｅｌｌａｒｉａ）、ラムブジ ナ・フィセアリア・ルグブロサ（Ｌａｍｂｄｉｎａ ｆｉｓｃｅｌｌａｒｉａ ｌｕｇｕｂｒｏｓａ）、リューコマ・サリシス（Ｌｅｕｃｏｍａ ｓａｌｉｃｉ ｓ）、ロベシア・ボトラナ（Ｌｏｂｅｓｉａ ｂｏｔｒａｎａ）、ロキソステゲ ・スチクチカリス（Ｌｏｘｏｓｔｅｇｅ ｓｔｉｃｔｉｃａｌｉｓ）、リマント リア・ディスパル（Ｌｙｍａｎｔｒｉａ ｄｉｓｐａｒ）、マカラ・チルシサリ ス（Ｍａｃａｌｌａ ｔｈｙｒｓｉｓａｌｉｓ）、マラコソマ種（Ｍａｌａｃｏ ｓｏｍａ ｓｐ．）、マメストラ・ブラシカエ（Ｍａｍｅｓｔｒａ ｂｒａｓｓ ｉｃａｅ）、マメストラ・コンフィギュラタ（Ｍａｍｅｓｔｒａ ｃｏｎｆｉｇ ｕｒａｔａ）、マンデュカ・クインクエマクラタ（Ｍａｎｄｕ ｃａ ｑｕｉｎｑｕｅｍａｃｕｌａｔａ）、マンデュカ・セクスタ（Ｍａｎｄｕ ｃａ ｓｅｘｔａ）、マルカ・テスツラリス（Ｍａｒｕｃａ ｔｅｓｔｕｌａｌ ｉｓ）、メランクラ・ピクタ（Ｍｅｌａｎｃｈｒａ ｐｉｃｔａ）、オペロフテ ラ・ブルマタ（Ｏｐｅｒｏｐｈｔｅｒａ ｂｒｕｍａｔａ）、オルギア種（Ｏｒ ｇｙｉａ ｓｐ．）、オストリニア・ヌビラリス（Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｎｕｂｉ ｌａｒｉｓ）、パレアクリタ・ベルナタ（Ｐａｌｅａｃｒｉｔａ ｖｅｒｎａｔ ａ）、パピリオ・クレスフォンテス（Ｐａｐｉｌｉｏ ｃｒｅｓｐｈｏｎｔｅｓ ）、ペクチノフォラ・ゴシピエラ（Ｐｅｃｔｉｎｏｐｈｏｒａ ｇｏｓｓｙｐｉ ｅｌｌａ）、フリガニジア・カリフォルニカ（Ｐｈｒｙｇａｎｉｄｉａ ｃａｌ ｉｆｏｒｎｉｃａ）、フィロノリクテル・ブランカルデラ（Ｐｈｙｌｌｏｎｏｒ ｙｃｔｅｒ ｂｌａｎｃａｒｄｅｌｌａ）、ピエリス・ナピ（Ｐｉｅｒｉｓ ｎ ａｐｉ）、ピリス・ラパエ（Ｐｉｅｒｉｓ ｒａｐａｅ）、プラチペナ・スカブ ラ（Ｐｌａｔｈｙｐｅｎａ ｓｃａｂｒａ）、プラチノタ・フロウエンダナ（Ｐ ｌａｔｙｎｏｔａ ｆｌｏｕｅｎｄａｎａ）、プラチノタ・スツルタナ（Ｐｌａ ｔｙｎｏｔａ ｓｔｕｌｔａｎａ）、プラチプチリア・カルデ ュイダクチラ（Ｐｌａｔｙｐｔｉｌｉａ ｃａｒｄｕｉｄａｃｔｙｌａ）、プロ ディア・インテルプンクテラ（Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａ） 、プルテラ・キシロステラ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）、ポン チア・プロトディセ（Ｐｏｎｔｉａ ｐｒｏｔｏｄｉｃｅ）、シュードダレチア ・ウニプンクタ（Ｐｓｅｕｄａｌｅｔｉａ ｕｎｉｐｕｎｃｔａ）、シュードプ ラシア・インクルデンス（Ｐｓｅｕｄｏｐｌａｓｉａ ｉｎｃｌｕｄｅｎｓ）、 サブロデス・アエグロタタ（Ｓａｂｕｌｏｄｅｓ ａｅｇｒｏｔａｔａ）、シズ ラ・コンシンナ（Ｓｃｈｉｚｕｒａ ｃｏｎｃｉｎｎａ）、シトトロガ・セレア レラ（Ｓｉｔｏｔｒｏｇａ ｃｅｒｅａｌｅｌｌａ）、スピロノタ・オセラナ（ Ｓｐｉｌｏｎｏｔａ ｏｃｅｌｌａｎａ）、スポドプテラ種（Ｓｐｏｄｏｐｔｅ ｒａ ｓｐ．）、タウルンストポエア・ピチオカムパ（Ｔｈａｕｒｎｓｔｏｐｏ ｅａ ｐｉｔｙｏｃａｍｐａ）、チネオラ・ビセリラ（Ｔｉｎｅｏｌａ ｂｉｓ ｓｅｌｌｉｅｌｌａ）、トリコプルシア・ニ（Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ ）、ウデア・ルビガリス（Ｕｄｅａ ｒｕｂｉｇａｌｉｓ）、キシロミゲス・ク リアリス（Ｘｙｌｏｍｙｇｅｓ ｃｕｒｉａｌｉｓ）、イポノ ミュータ・パデラ（Ｙｐｏｎｏｍｅｕｔａ ｐａｄｅｌｌａ）；双翅目の害虫、 例えば、アエデス種（Ａｅｄｅｓ ｓｐ．）、アンデス・ビッタツス（Ａｎｄｅ ｓ ｖｉｔｔａｔｕｓ）、アナストレファ・ルデンス（Ａｎａｓｔｒｅｐｈａ ｌｕｄｅｎｓ）、アナストレファ・サスペンサ（Ａｎａｓｔｒｅｐｈａ ｓｕｓ ｐｅｎｓａ）、アノフェレス・バルベリ（Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ ｂａｒｂｅｒｉ ）、アノフェレス・クアロシマクラツス（Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ ｑｕａｄｒｉｍ ａｃｕｌａｔｕｓ）、アルミゲレス・スバルバツス（Ａｒｍｉｇｅｒｅｓ ｓｕ ｂａｌｂａｔｕｓ）、カリフォラ・スチギア（Ｃａｌｌｉｐｈｏｒａ ｓｔｙｇ ｉａ）、カリフォラ・ビシナ（Ｃａｌｌｉｐｈｏｒａ ｖｉｃｉｎａ）、セラチ チス・カピタタ（Ｃｅｒａｔｉｔｉｓ ｃａｐｉｔａｔａ）、チロノムス・テン タンス（Ｃｈｉｒｏｎｏｍｕｓ ｔｅｎｔａｎｓ）、クリソミア・ルフィファシ エス（Ｃｈｒｙｓｏｍｙａ ｒｕｆｉｆａｃｉｅｓ）、コクリオミイア・マセラ リア（Ｃｏｃｈｌｉｏｍｙｉａ ｍａｃｅｌｌａｒｉａ）、クレックス種（Ｃｕ ｌｅｘ ｓｐ．）、クリセタ・イノルナタ（Ｃｕｌｉｓｅｔａ ｉｎｏｒｎａｔ ａ）、ダクス・オレアエ（Ｄａｃｕｓ ｏｌｅａｅ）、デリア・アン チグア（Ｄｅｌｉａ ａｎｔｉｇｕａ）、デリア・プラツラ（Ｄｅｌｉａ ｐｌ ａｔｕｒａ）、デリア・ラディクム（Ｄｅｌｉａ ｒａｄｉｃｕｍ）、ドロソフ ィラ・メラノガスタ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）、ユ ーペオデス・コロラエ（Ｅｕｐｅｏｄｅｓ ｃｏｒｏｌｌａｅ）、グロシナ・ア ウステニ（Ｇｌｏｓｓｉｎａ ａｕｓｔｅｎｉ）、グロシナ・ブレビパルピス（ Ｇｌｏｓｓｉｎａ ｂｒｅｖｉｐａｌｐｉｓ）、グロシナ・フシペス（Ｇｌｏｓ ｓｉｎａ ｆｕｓｃｉｐｅｓ）、グロシナ・モルシタンス・セントラリス（Ｇｌ ｏｓｓｉｎａ ｍｏｒｓｉｔａｎｓ ｃｅｎｔｒａｌｉｓ）、グロシナ・モリス タンス・モルシタンス（Ｇｌｏｓｓｉｎａ ｍｏｒｉｓｔａｎｓ ｍｏｒｓｉｔ ａｎｓ）、グロシナ・モリスタンス・サブモルシタンス（Ｇｌｏｓｓｉｎａ ｍ ｏｒｉｓｔａｎｓ ｓｕｂｍｏｒｓｉｔａｎｓ）、グロシナ・パリディペス（Ｇ ｌｏｓｓｉｎａ ｐａｌｌｉｄｉｐｅｓ）、グロシナ・パルパリス・ガムビエン シス（Ｇｌｏｓｓｉｎａ ｐａｌｐａｌｉｓ ｇａｍｂｉｅｎｓｉｓ）、グロシ ナ・パルパリス・パルパリス（Ｇｌｏｓｓｉｎａ ｐａｌｐａｌｉｓ ｐａｌｐ ａｌｉｓ）、グロシナ・タチノイデス（Ｇｌｏｓｓｉｎａ ｔ ａｃｈｉｎｏｉｄｅｓ）、ハエマゴガス・エクイヌス（Ｈａｅｍａｇｏｇｕｓ ｅｑｕｉｎｕｓ）、ハエマトビウス・イリタンス（Ｈａｅｍａｔｏｂｉｕｓ ｉ ｒｒｉｔａｎｓ）、ハイポデルマ・ボビス（Ｈｙｐｏｄｅｒｍａ ｂｏｖｉｓ） 、ハイドデルマ・リネアツム（Ｈｙｄｏｄｅｒｍａ ｌｉｎｅａｔｕｍ）、リュ ーコピス・ニナエ（Ｌｅｕｃｏｐｉｓ ｎｉｎａｅ）、ルシリア・クプリナ（Ｌ ｕｃｉｌｉａ ｃｕｐｒｉｎａ）、ルシリア・セリカタ（Ｌｕｃｉｌｉａ ｓｅ ｒｉｃａｔａ）、ルツォミイア・ロングルパイピス（Ｌｕｔｚｏｍｙｉａ ｌｏ ｎｇｌｐａｉｐｉｓ）、ルツォミイア・シャアンノニ（Ｌｕｔｚｏｍｙｉａ ｓ ｈａｎｎｏｎｉ）、リコリエラ・マリ（Ｌｙｃｏｒｉｅｌｌａ ｍａｌｉ）、マ イエチオラ・デストラクトル（Ｍａｙｅｔｉｏｌａ ｄｅｓｔｒｕｃｔｏｒ）、 ムスカ・アウツムナリス（Ｍｕｓｃａ ａｕｔｕｍｎａｌｉｓ）、ムスカ・ドメ スチカ（Ｍｕｓｃａ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ）、ネオベリエリア種（Ｎｅｏｂｅｌ ｌｉｅｒｉａ ｓｐ．）、ネフロトマ・スツラリス（Ｎｅｐｈｒｏｔｏｍａ ｓ ｕｔｕｒａｌｉｓ）、オフィラ・アエネセンス（Ｏｐｈｙｒａ ａｅｎｅｓｃｅ ｎｓ）、ファエニシア・セリカタ（Ｐｈａｅｎｉｃｉａ ｓｅｒｉｃ ａｔａ）、フレボトムス種（Ｐｈｌｅｂｏｔｏｍｕｓ ｓｐ．）、フォルミア・ レギナ（Ｐｈｏｒｍｉａ ｒｅｇｉｎａ）、サベセス・シアネウス（Ｓａｂｅｔ ｈｅｓ ｃｙａｎｅｕｓ）、サルコファガ．ブラタ（Ｓａｒｃｏｐｈａｇａ ｂ ｕｌｌａｔａ）、スカトファガ・ステルコラリア（Ｓｃａｔｏｐｈａｇａ ｓｔ ｅｒｃｏｒａｒｉａ）、ストマキシス・カルシトランス（Ｓｔｏｍａｘｙｓ ｃ ａｌｃｉｔｒａｎｓ）、トキソリンキテス・アムボイネンシス（Ｔｏｘｏｒｈｙ ｎｃｈｉｔｅｓ ａｍｂｏｉｎｅｎｓｉｓ）、トリプテロイデス・バムブサ（Ｔ ｒｉｐｔｅｒｏｉｄｅｓ ｂａｍｂｕｓａ）；ダニ、例えば、オリゴニクス・プ ラテンシス（Ｏｌｉｇｏｎｙｃｈｕｓ ｐｒａｔｅｎｓｉｓ）、パノニクス・ウ ルミ（Ｐａｎｏｎｙｃｈｕｓ ｕｌｍｉ）、テトラニクス・ウルチカエ（Ｔｅｔ ｒａｎｙｃｈｕｓ ｕｒｔｉｃａｅ）；膜翅目の害虫、例えば、イリドミルメッ クス・ヒューミリス（Ｉｒｉｄｏｍｙｒｍｅｘ ｈｕｍｉｌｉｓ）、ソレノプシ ス・インビクタ（Ｓｏｌｅｎｏｐｓｉｓ ｉｎｖｉｃｔａ）；シロアリ目の害虫 、例えば、レチクリテルメス・ヘスペルス（Ｒｅｔｉｃｕｌｉｔｅｒｍｅｓ ｈ ｅｓｐｅｒｕｓ）、レチクリテルメス・フラビペス（Ｒ ｅｔｉｃｕｌｉｔｅｒｍｅｓ ｆｌａｖｉｐｅｓ）、コプトテルメス・フォルモ サヌス（Ｃｏｐｔｏｔｅｒｍｅｓ ｆｏｒｍｏｓａｎｕｓ）、ズーテルモプシス ・アングスチコリス（Ｚｏｏｔｅｒｍｏｐｓｉｓ ａｎｇｕｓｔｉｃｏｌｌｉｓ ）、ネオテルメス・コンネクスス（Ｎｅｏｔｅｒｍｅｓ ｃｏｎｎｅｘｕｓ）、 インシシテルメス・ミノア（Ｉｎｃｉｓｉｔｅｒｍｅｓ ｍｉｎｏｒ）、インシ シテルメス・イムミグランス（Ｉｎｃｉｓｉｔｅｒｍｅｓ ｉｍｍｉｇｒａｎｓ ）；隠翅目の害虫、例えば、セラトフィルス・ガリナエ（Ｃｅｒａｔｏｐｈｙｌ ｌｕｓ ｇａｌｌｉｎａｅ）、セラトフィルス・ニガ（Ｃｅｒａｔｏｐｈｙｌｌ ｕｓ ｎｉｇｅｒ）、ノソサイルス・ファシアツス（Ｎｏｓｏｐｓｙｌｌｕｓ ｆａｓｃｉａｔｕｓ）、レプトサイラ・セグニス（Ｌｅｐｔｏｐｓｙｌｌａ ｓ ｅｇｎｉｓ）、クテノセファリデス・カニス（Ｃｔｅｎｏｃｅｐｈａｌｉｄｅｓ ｃａｎｉｓ）、クテノセファルデス・フェリス（Ｃｔｅｎｏｃｅｐｈａｌｌｄ ｅｓ ｆｅｌｉｓ）、エキクノファガ・ガリナセア（Ｅｃｈｉｃｎｏｐｈａｇａ ｇａｌｌｉｎａｃｅａ）、プレックス・イリタンス（Ｐｕｌｅｘ ｉｒｒｉｔ ａｎｓ）、ゼノサイラ・ケオピス（Ｘｅｎｏｐｓｙｌｌａ ｃ ｈｅｏｐｉｓ）、ゼノサイラ・ベキサビリス（Ｘｅｎｏｐｓｙｌｌａ ｖｅｘａ ｂｉｌｉｓ）、ツンガ・ペネトランス（Ｔｕｎｇａ ｐｅｎｅｔｒａｎｓ）；及 びタイレンチダ目（Ｔｙｌｅｎｃｈｉｄａ）の害虫、例えば、メロディドギネ・ インコグニタ（Ｍｅｌｏｄｉｄｏｇｙｎｅ ｉｎｃｏｇｎｉｔａ）、プラチレン クス・ペネトランス（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ ｐｅｎｅｔｒａｎｓ）を含み 、しかしこれらに限定されるものではない害虫に対しても有効であり得る。 以下の実施例は、限定としてではなく、説明として提示される。実施例 例１：様々なＢ．ｔ．単離体の培養 栄養ブロス寒天スラントに維持されているＥＭＣＣ−００７７、ＥＭＣＣ−０ ０７８、ＥＭＣＣ−００７９、ＥＭＣＣ−００８０及びＥＭＣＣ−００８１の継 代培養物を、以下の組成の培地５０ｍｌを収容する２５０ｍｌバッフル装備振と うフラスコへの接種に用いる。 トウモロコシスティープリカー １５ｇ／Ｌ マルトリン−１００（Ｍａｌｔｒｉｎ−１００）４０ｇ／Ｌ ジャガイモ・デンプン ３０ｇ／Ｌ ＫＨ₂ＰＯ₄ １．７７ｇ／Ｌ Ｋ₂ＨＰＯ₄ ４．５３ｇ／Ｌ １０Ｎ ＮａＯＨを用いて、培地のｐＨを７．０に調整する。 接種後、振とうフラスコを３０℃で、ロータリー・シェーカー上において２５ ０ｒｐｍで７２時間インキュベートする。全培養ブロスをディアブロチカ・ウン デシムプンクタタに対する試験に用いる。例２：様々なＢ．ｔ．単離体に由来する全培養ブロスにおけるディアブロチカ・ ウンデシムプンクタタ活性 上記発酵より得られる全培養ブロスの２．５ｍｌを振とうフラスコから取り、 ５０ｍｌポリプロピレン生物検定管に移す。ディアブロチカ・ウンデシムプンク タタの餌を各管に添加して最終容積２５ｍｌとする。次いで、この餌と被験物質 とを激しく混合し、生物検定のため生物検定トレイに分配する。ディアブロチカ ・ウンデシムプンクタタの卵３ないし６個を、この“餌”の表面に塗り付ける。 この生物検定トレイ上にマイラーを伸ばし、このトレイを光周期なしで２８℃で インキュベート する。７日目に評価を行う。インキュベーション後７日目に致死率を評価する。 ＳＳ７＝ＳＳ７と同じ日の生きている対照幼虫を４とし、これと比較した場合の ７日目の致死幼虫のサイズ。ＳＳ７＝３、ＳＳ７＝２、及びＳＳ７＝１は、それ ぞれ、４である生きている対照幼虫の７５％、５０％及び２５％としての幼虫の サイズを表す。 結果を下記表１に示す。これらの結果は、試験した５種類の株の全てにおいて 、致死率が１００％であったことを示している。さらに、致死幼虫は、生きてい る対照幼虫のサイズの１２．５％であった。 例３：ディアブロチカ・ウンデシムプンクタタ活性の位置決定 ディアブロチカ・ウンデシムプンクタタ活性がδ−エンドトキシン／胞子もし くは上清に関連するのかどうかを試験するため、ＥＭＣＣ−００７７、ＥＭＣＣ −００８０、ＥＭＣＣ−００８１及びＮＢ１２５（バチルス同一条件下で成長し たチューリンギエンシス・テネブリオニス亜種）に由来する全培養ブロスの２． ５ｍｌをソルバール（Ｓｏｒｖａｌｌ）ＲＣ−５Ｂ遠心機において１５，０００ ｒｐｍで（ソルバールＳＳ３４ローター）１５分間遠心し、上清及びペレットを 分離する。結晶δ−エンドトキシン類及び胞子はペレット中に回収される。ディ アブロチカ・ウンデシムプンクタタ−活性Ｂ．ｔ．単離体ＥＭＣＣ−００７７に よって産生されるδ−エンドトキシン類は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる測定で、６ ６ｋＤ、２９ｋＤ及び１２ｋＤの分子量を有する。ディアブロチカ・ウンデシム プンクタター活性Ｂ．ｔ．単離体ＥＭＣＣ−００７８によって産生されるδ−エ ンドトキシン類は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる測定で、１５３ｋＤ、７７ｋＤ、６ ７ｋＤ、６１ｋＤ、５０ｋＤ、４２ｋＤ、３４ｋＤ、３０ｋＤ、２４ｋＤの分子 量を有する。ディアブロチカ・ウンデシムプンクタタ−活性Ｂ．ｔ．単離体ＥＭ ＣＣ−００７９によって産生されるδ−エンドトキシン類は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ による測定で、１３５−１４５ｋＤの分子量を有する。ディアブロチカ・ウンデ シムプンクタタ−活性Ｂ．ｔ．単離体ＥＭＣＣ−００８０によって産生されるδ −エンドトキシン類は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる測定で、９４ｋＤ及び４０ｋＤ の分子量を有する。ディアブロチカ・ウンデシムプンクタタ−活性Ｂ．ｔ．単離 体ＥＭＣＣ−００８１によって産生されるδ−エンドトキシン類は、ＳＤＳ−Ｐ ＡＧＥによる測定で、１２９ｋＤ及び３２ｋＤの分子量を有する。 上記遠心により得られる上清（２．５ｍｌ）の各々を５０ｍｌポリプロピレン 生物検定管に移す。次いで、ペレットを無菌の蒸留水２．５ｍｌに再懸濁させ、 別の５０ｍｌポリプロピレン生物検定管に移す。次に、ディアブロチカ・ウンデ シムプンクタタの餌を、上清もしくは再懸濁ペレットを有する生物検定管に添加 して、最終容量を２５ｍｌとする。生物検定の残りの工程は上に記述されるもの と同じである。評価もまた、上の記述と同じである。 表２に見られる結果は、ＥＭＣＣ−００７７、ＥＭＣＣ−００８０、及びＥＭ ＣＣ−００８１に由来するディアブロチカ・ ウンデシムプンクタタ活性は、公知のバチルスチューリンギエンシス・テネブリ オニス亜種に由来する低いディアブロチカ・ウンデシムプンクタタ活性がペレッ ト（胞子及び結晶）中に濃縮されているのに対して、上清の全てに存在すること を示している。 例４：レプチノタルサ・テキサナに対する活性 ０．２μ膜を通して濾過した後、例１から得られたＥＭＣＣ−００８０の上清 を甲虫活性についての検定に用いた。 濾過した上清を、２０ＧＰＡ（エーカー当たりのガロン）でナスの葉に塗布し た。希釈率は０、１：１、１：４、１：８（上清：脱イオン水、Ｖ／Ｖ）である 。 レプチノタルサ・テキサナの幼虫を、標準プロトコルに従い、処理した葉に晒 した。植物の各々に２０匹のレプチノタルサ・テキサナの幼虫を乗せた。 下記表３にまとめられる結果は、ＥＭＣＣ−００８０の濾過上清がレプチノタ ルサ・テキサナに対して活性であることを示している。 例５：ＥＭＣＣ−００８０及びＮＯＶＯＤＯＲ^TMの相乗効果 前出の表３に示される結果は、ＥＭＣＣ−００８０の上清は１：８希釈（Ｖ／ Ｖ）単独では活性でないことを示している。しかしながら、ナスの葉を１．２５ ％もしくは２．５％の１０×濃縮ＥＭＣＣ−００８０上清及びｍｌ当たり２００ μｇのＮＯＶＯＤＯＲ^TM（ノボ・ノルディスクＡ／Ｓ）バグスバエルド、デンマ ーク）で処理した場合には、ＮＯＶＯＤＯＲ^TMのＬＣ₅₀およびＬＣ₉₀の鋭い下降 によって立証されるように、相乗効果が得られる。データは下記表４にある。 例６：Ｂ．ｔ．株ＥＭＣＣ−００８０によって産生される甲虫−活性物質の精製 Ｂ．ｔ，株ＥＭＣＣ−００８０を、リットル当たりのグラムで表示される以下 の組成を有する培地において、３０℃で２４時間、ｐＨ７．０で成長させる。 マルトデキストリン ４０ｇ 大豆蛋白質 ４０ｇ ＫＨ₂ＰＯ₄ １．８ｇ Ｋ₂ＨＰＯ₄ ４．５ｇ ＭｇＳＯ₄−７Ｈ₂Ｏ ０．３ｇ トレース金属 ０．２ｍｌ 細胞及び他の不溶物を遠心によりＢ．ｔ．株ＥＭＣＣ−００８０の全培養ブロ スから除去した後、得られた上清をセライト及び０．２μ膜を通して濾過する。 その後、得られた透過物を蒸発により１０倍に濃縮する。 ４工程の精製手順を用いて、１０×濃縮透過物からの甲虫−活性物質の精製を 達成する。精製の間、以下に記述されるディ アブロチカ・ウンデシムプンクタタ表面生物検定により活性を監視し、例８に記 述されるキャピラリー電気泳動により純度を決定する。全てのクロマトグラフィ ー工程では２２６ｎｍでの検出が用いられる。 具体的には、表面生物検定は以下の通り行われる。１０×濃縮透過物のサンプ ルを、ウェル当たり２００μｌの固化人工昆虫餌を収容するマイクロタイタープ レートの個々のウェルに塗布した後、風乾する。２ないし４匹のディアブロチカ ・ウンデシムプンクタタの幼虫（コーン・ルートワーム、ＣＲＷ）を各ウェルに 絵筆で静かに置く。次いで、このマイクロタイタープレートを空気交換のための 穴を打ち抜いたマイラーで密封し、３０℃、湿度８０％でインキュベートする。 致死率の評価を５日目に行う。 第１工程において、まず、１０×濃縮透過物をファルマシア トグラフィー（５×３０ｃｍ）で精製する。１０×濃縮透過物の４５０ｍｌサン プルを脱イオン水で１８リットルに希釈し、ｐＨ５．０の２０ｍＭ酢酸アンモニ ウムで予備平衡化したカラ ムにかける。このカラムを、ｐＨ５．０の酢酸アンモニウムバッファ５．０リッ トルの２０ｍＭから０．５Ｍの連続勾配を用いて、毎分１８ｍｌで溶出する。１ ０ｍｌの画分を集め、生物検定を行い、純度について試験する。活性画分をプー ルし（約１５０ｍｌ）、凍結乾燥し、脱イオン水に再溶解して元の容積の約１／ ５にする。。 第２工程において、第１工程からの２５ｍｌサンプルを、脱イオン水で予備平 衡化したバイオラッド（ＢｉｏＲａｄ）Ｐ２（超微細）サイズ排除カラム（５× １００ｃｍ）にかける。このカラムを、脱イオン水を用いて、毎分１ｍｌの流速 で溶出する。１０ｍｌの画分を集め、生物検定を行い、キャピラリー電気泳動に より純度について試験する。活性画分をプールする（約４００ｍｌ）。 第３工程において、第２工程からの４００ｍｌプールを脱イオン水で１６リッ トルに希釈する。この溶液を、ｐＨ５．０の２０ｍＭ酢酸アンモニウムバッファ で予備平衡化したファルマ カラム（５×３０ｃｍ）にかける。このカラムを、ｐＨ５．０の酢酸アンモニウ ムバッファの２０ｍＭから０．５Ｍの連続勾 配を用いて、毎分１７ｍｌの流速で溶出する。２０ｍｌの画分を集め、生物検定 を行い、純度について試験する。活性画分をプールし（約２５０ｍｌ）、次いで 、揮発性酢酸アンモニウムバッファを除去するため凍結乾燥して乾燥させる。 第４工程において、第３工程からの凍結乾燥プールを脱イオン水４００ｍｌに 溶解する。この溶液を、ｐＨ４．０の２０ｍＭギ酸アンモニウムバッファで予備 平衡化したバイオラッド・ ×３０ｃｍ）にかける。このカラムを、ｐＨ４．０のギ酸アンモニウムバッファ ２．４リットルの０．０２→０．１→０．２→０．３５→０．５→１．０Ｍの段 階勾配を用いて、毎分５ｍｌの流速で溶出する。２０ｍｌの画分を集め、生物検 定を行い、純度について試験する。活性画分をプールし（約３００ｍｌ）、次い で、揮発性ギ酸アンモニウムバッファを除去するため凍結乾燥して乾燥させる。 キャピラリー電気泳動は、２種類の化合物、Ｉａ及びＩｂ、を含む精製甲虫− 活性物質を示す。例７：甲虫−活性物質の構造解明 化合物Ｉａ及びＩｂの構造を、それらのアセチル化誘導体に ついて収集した分光データから解明する。 Ｉａ及びＩｂの混合物１１４ｍｇを、ピリジン５．０ｍｌ中において、無水酢 酸５．０ｍｌ及び触媒としての４−ジメチルアミノピリジンの結晶を用いて、室 温で２４時間アセチル化した後、半調製用ＲＰ−Ｃ₁₈ ＨＰＬＣで精製する。２ ５μｌ中５ｍｇのサンプルをカラムにかけ、８０％水−２０％アセトニトリルを 用いて、毎分４ｍｌで溶出する。２５４ｎｍで検出を行う。 精製から、誘導体Ａ及び誘導体Ｂと呼ばれる２種類のアセチル化誘導体が得ら れる。誘導体Ａ及びＢの構造を図４に示す。 誘導体Ａについて収集されたＮＭＲ分光データは、１４個の炭素と１７個のプ ロトンの存在を示す。しかしながら、質量分光データは、６５２の分子量とＣ₂₈ Ｈ₄₀Ｎ₆Ｏ₁₂の式を示唆する（精密質量、６５３．２８０１、ＭＨ＋、算出６５ ３．２７８２）。したがって、この化合物は、シグナルの半分のみがＮＭＲによ って観察される対称性であると決定される。 幾つかのスピン系がＮＭＲで観察される。環中の全ての炭素及び側鎖の第１炭 素（Ｃ−７）への長レンジ・カップリングを示す、８．６ｐｐｍでの高域プロト ン・シングレット（Ｈ−３ 及びＨ−６）により、２及び５位で置換されている中心ピラジン環が示される。 炭素原子３個の側鎖は７及び８位の両者でアセチル化されており、９位にメチレ ンを有する。炭素９はエステルのカルボニルへの長レンジ相関を有することが見 出され、このエステルはアミノ基でアセチル化されているアラニンの一部である と決定される。 誘導体Ｂの構造は、位置の１つが誘導体Ａとは異なる。誘導体Ｂの側鎖の１つ において、Ｃ−７炭素はもはやアセチル化されておらず、もしくは酸素に結合し ておらず、メチレンであることが見出される。他の側鎖は誘導体Ａと同じである 。このわずか１個の酸素の相違は、また、質量分光データにおいても観察される 。誘導体Ｂについて、精密質量５９５．２７２２（ＭＨ＋、算出５９５．２７２ ７）の質量分光データが得られ、これは式Ｃ₂₆Ｈ₃₈Ｎ₆Ｏ₁₀を示す。誘導体Ａ及 びＢの光学密度は以下の通りである：誘導体Ａ［α］_D ²⁷＝−６．９℃及び誘導 体Ｂ［α」_D ²⁷＝＋３２℃。脱カップリング実験、ＣＯＳＹ、ＨＭＱＣ及びＨＭ ＢＣに基づいて、¹Ｈ及び¹³Ｃ ＮＭＲデータの完全な割り当てを作成する。こ の割り当ては表５にある。 化合物Ｉａ及びＩｂに対する質量分光データから、４００及び３８４の２種類 の分子イオンが得られる。このデータから、化合物Ｉａの式がＣ₁₆Ｈ₂₈Ｎ₆Ｏ₆で あり、化合物Ｉｂの式がＣ₁₆Ｈ₂₈Ｎ₆Ｏ₅であることが決定される。誘導体Ａ及び 誘導体ＢのＮＭＲデータをＩａ及びＩｂの混合物のＮＭＲデータと比較すること により、Ｉａ及びＩｂの構造が決定される。Ｉａ及びＩｂの構造を以下に示す。 Ｉａ：Ｒ、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃＝Ｈ Ｉｂ：Ｒ、Ｒ₁、Ｒ₂＝Ｈ、Ｒ₃＝ＯＨ 化合物Ｉａ及びＩｂ並びにそれらのアセチル化誘導体の特性を以下にまとめる 。 誘導体Ａ： 分子量： ６５２ 実験式： Ｃ₂₈Ｈ₄₀Ｎ₆Ｏ₁₂ ＵＶ（ＭｅＯＨ）：２７５，３１０ｎｍ ＭＳ（ＦＡＢ）：（Ｍ＋Ｈ）ｍ／ｚ ６５３．２８０１、 算出６５３．２７８２ 誘導体Ｂ： 分子量： ５９４ 実験式： Ｃ₂₆Ｈ₃₈Ｎ₆Ｏ₁₀ ＵＶ（ＭｅＯＨ）：２７５，３１０ｎｍ ＭＳ（ＦＡＢ）：（Ｍ＋Ｈ）ｍ／ｚ ５９５．２７２２、 算出５９５．２７２７ Ｉａ： 分子量： ４００ 実験式： Ｃ₁₆Ｈ₂₈Ｎ₆Ｏ₆ ＵＶ（Ｈ₂Ｏ）： ２７５，３１０ｎｍ ＭＳ（ＦＡＢ）： （Ｍ＋Ｈ）４０１ Ｉｂ： 分子量： ３８４ 実験式： Ｃ₁₆H₂₈Ｎ₆Ｏ₅ ＵＶ（Ｈ Ｏ）： ２７５、３１０ｎｍ ＭＳ（ＦＡＢ）： （Ｍ＋Ｈ）３８５例８：発酵ブロス中の化合物Ｉａ及びＩｂの定量 Ｂ．ｔ．株ＥＭＣＣ−００８０を例１に記述される通りに成長させる。発酵ブ ロス中の化合物Ｉａ及びＩｂの濃度をキャピラリー電気泳動によって決定する。 具体的には、非コートキャピラリー（５０μｍ×５０ｃｍ）、ｐＨ２．５の０ ．１Ｍリン酸塩、２０ｋＶの電圧、陽性から陰性の極性、及び２００ｎｍでの検 出を備えるバイオラッド・バイオフォーカス３０００キャピラリー・エレクトロ ホレシス・システム（Ｂｉｏｆｏｃｕｓ ３０００ Ｃａｐｉｌｌａｒｙ Ｅｌ ｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ）を定量に用いる。サンプル容量は 、５ｐｓｉ秒の注入で、３０μｌである。分析時間は１０分間であり、甲虫−活 性化合物Ｉａ及びＩｂがそれぞれ６．０及び５．９分に溶出する。 代わりに、非コートキャピラリー（５０μｍ×４７ｃｍ）、ｐＨ２．５の０． １Ｍリン酸バッファ、２０ＫＶの電圧、陽性から陰性の極性、及び２００ｎｍで の検出を備えるベックマン Ｐ／ＡＣＥ２１００キャピラリー・エレクトロホレシス・システム（Ｂｅｃｋｍ ａｎ Ｐ／ＡＣＥ ２１００ Ｃａｐｉｌｌａｒｙ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅ ｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ）を定量に用いる。サンプル容量は、１０秒圧注で、３０ μｌである。分析時間は１０分間であり、甲虫−活性化合物Ｉａ及びＩｂがそれ ぞれ７．０及び６．７分に溶出する。 細胞及び他の不溶物を、遠心並びにセライト及び０．２膜を通す濾過によりＢ ．ｔ，株ＥＭＣＣ−００８０の全培養ブロスから除去する。得られた上清を上述 のキャピラリー電気泳動によって分析する。結果は、甲虫−活性化合物Ｉａ及び Ｉｂが、各々、培養ブロスのリットル当たり約９０ｍｇのレベルで存在すること を示した。例９：化合物Ｉａ及びＩｂの効力決定 化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物（約１：１Ｗ／Ｗ）の相対効力を、レプチノ タルサ・テキサナを試験昆虫として用い、バチルスチューリンギエンシス・テネ ブリオニス亜種の内部標準調製品に関する致死率と比較して決定した。 レプチノタルサ・テキサナに対する化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物の効力を 決定するため、葉での生物検定を行う。葉で の生物検定を行うため、被験物質及び標準を５０ｍｌ遠心管に 脱イオン水に懸濁させる。バチルスチューリンギエンシス・テネブリオニス亜種 標準１，２００ｍｇを秤量し、１２，０００μｇ／ｇの最終濃度を得るように懸 濁させる。被験サンプル（すなわち、ＮＯＶＯＤＯＲ^TM並びに化合物Ｉａ及びＩ ｂを含むＮＯＶＯＤＯＲ^TM）を同様の方法で処理する。これは、率を見出す生物 検定が、与えられた投薬量が適切な数の妥当なデータ点を生じるには多すぎるか 、もしくは少なすぎることを示す場合は除く。このような場合には、貯蔵溶液に 添加される希釈液の量を変更することにより、最初の貯蔵溶液の濃度を増大もし くは減少させる。次いで、バーチス・ホモジナイザー（Ｖｉｒｔｉｓ Ｈｏｍｏ ｇｅｎｉｚｅｒ）を用いて各サンプルを３０秒間ホモジナイズし、ブラウンソニ ック（Ｂｒａｕｎｓｏｎｉｃ）１５１０超音波ホモジナイザーを用いて１００ワ ットで２０秒間超音波処理する。その後、これらの貯蔵溶液の各々を、ハミルト ン・マイクロラボ１０００（Ｈａｍｉｌｔｏｎ Ｍｙｃｒｏｌａｂ １０００） を用いて希釈し、全量１６ｍｌ中３，０００、２，０００、１３３３、８５７、 ５４５、 ３６４、及び２４５μｇ／ｍｌからなる７つの連続希釈液を得る。これらの１６ ｍｌ溶液の各々を、エーカー当たり２０ガロンの散布に目盛りを合わせたデブリ エス・リニア・トラック噴霧器（Ｄｅｖｒｉｅｓ Ｌｉｎｅａｒ Ｔｒａｃｋ ｓｐｒａｙｅｒ）を用いて、約２８８平方インチのナスの葉に塗布する。対照葉 には１６ｍｌの脱イオン水を噴霧する。葉を風乾した後、５匹の第２齢レプチノ タルサ・テキサナ幼虫を収容する１オンス透明プラスチックカップの縁に置く。 次に、葉の上に厚紙の蓋を置いて押し付け、４ｃｍの葉の円盤を切断してそれを カップの内部に密封する。その後、このカップを逆さにし、幼虫を葉の処理表面 上に落とす。７つの連続希釈の各々について８個のカップを調製する。これらの カップを紐で結び、ラベルを貼り、棚に置いて、３０℃、相対湿度６５％で３日 間インキュベートする。これらの５６個の実験カップ及び８個の対照カップが１ つの生物検定を構成する。 ３日後、昆虫の致死率を評価する。各々のカップに強い衝撃を加え、動かない 幼虫を死んだものとして数える。致死パーセントを算出し、このデータを平行プ ロビット解析により分析する。ＬＣ₅₀、ＬＣ₉₀、回帰線の傾き、変動係数、及び 効力を見 積もる。 効力を決定するため、化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物を希釈し、生物検定を 行い、２０，０００ＬＴＵ／グラム（レプチノタルサ・テキサナ単位／グラム） の効力が割り当てられているバチルスチューリンギエンシス・テネブリオニス亜 種標準と比較する。 効力の結果を下記表６に示す。これは、化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物（１ ：１ｗ／ｗ）が、活性成分のｇ当たり７５，５５５ＬＴＵの効力及びｍｌ当たり ７０μｇのＬＣ₅₀を有することを示している（ｍｌ当たり全活性成分１．８ｍｇ ）。 例１０：化合物Ｉａ及びＩｂを用いるバチルスチューリンギエンシス・テネブリ オニス亜種結晶δ−エンドトキシンの強化 バチルスチューリンギエンシス・テネブリオニス亜種に由来する結晶δ−エン ドトキシンのレプチノタルサ・テキサナに対 する殺虫活性を強化する化合物Ｉａ及びＩｂの能力を、化合物Ｉａ及びＩｂの粗 製混合物をＮＯＶＯＤＯＲ^TMに添加し、平行プロビット解析によりＬＣ₅₀を測定 することにより決定した。 ＮＯＶＯＤＯＲ^TMに化合物Ｉａ及びＩｂを添加することにより得られる強化の レベルを決定するため、例９に記述される通りに、葉での生物検定をレプチノタ ルサ・テキサナに対して行う。化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物をＮＯＶＯＤＯ Ｒ^TMに添加する。ハミルトン・マイクロラボ１０００を用いて溶液を連続的に希 釈し、ＮＯＶＯＤＯＲ^TMを１０００．０、６６６．７、４４４．４、２８５．７ 、１８１．８、１２１．２、及び８０．０μｇ／ｇ含有する貯蔵溶液を得る。Ｉ ａ及びＩｂの混合物の２つの異なる希釈液を調製する。これにより、それぞれ、 ７２．０、４８．０、３２．０、２０．６、１３．１、８．７、及び５．８μｇ ／ｇ（１０００μｇ／ｇのＮＯＶＯＤＯＲ^TMに対して２．５％ｖ／ｖ）並びに３ ６．０、２４．０、１６．０、１０．３、６．５、４．４、及び２．９μｇ／ｇ （１０００μｇ／ｇのＮＯＶＯＤＯＲ^TMに対して１．２５％）を含む７つの連続 希釈が得られる。（化合物Ｉａ及びＩｂを含まない）純粋サンプル及び基準物質 を同様に調製する。一対の純粋サンプ ルのＬＣ₅₀を強化されたＬＣ₅₀値で割り、化合物Ｉａ及びＩｂの混合物に関連す るＬＣ₅₀の減少倍率を得る。 結果を下記表７に示す。これらは、化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物が、レプ チノタルサ・テキサナに対するＮＯＶＯＤＯＲ^TMの殺虫活性を強化することを示 している。 例１１：甲虫Ｉｐｓカリグラフス及びデンドロクトヌス・フロンタリスに対する 化合物Ｉａ及びＩｂの混合物の活性 化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物の毒性を、甲虫Ｉｐｓカリグラフス及びデン ドロクトヌス・フロンタリスに対して決定す る。化合物Ｉａ及びＩｂの粗製溶液（ｍｌ当たり活性成分１．８ｍｇ）３ｍｌを 凍結乾燥したテーダマツの師管部５ｇ及び蒸留水７ｍｌに添加する。対照餌を水 １０ｍｌで調製する。餌を３つのペトリ皿に分け、５ないし１０匹の成体になり たてのＩｐｓ又は羽化したばかりの成体デンドロクトヌス甲虫を各皿に置く。処 理餌の３つの異なるバッチ及び対照餌に１０ないし２０匹の昆虫を充てる。これ らのペトリ皿を暗所において２５℃でインキュベートし、餌の上に置いて４、７ 及び１０−１２日後に死んだ昆虫の数を数える。提示されるデータは、各昆虫種 について２もしくは３回繰り返された別個の研究の平均である。 Ｉｐｓカリグラフスについての結果を下記表８に示す。これらの結果は、化合 物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物が殺虫性であることを示している。 デンドロクトヌス・フロンタリス生物検定の結果を下記表９に示す。これらの 結果は、化合物Ｉａ及びＩｂの混合物が殺虫性であることを示している。 例１２：ポピリア・ジャポニカ（マメコガネ）に対する活性 化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物を、第３齢ポピリア・ジャポニカに対する殺 虫活性について試験する。ホソムギの根（１１日齢）を化合物Ｉａ及びＩｂの粗 製混合物（ｍｌ当たり１．８ｇのＩａ及びＩｂ）に浸漬し、部分的に乾燥させる 。１匹の第３齢ポピリア・ジャポニカの幼虫を、幾らかの処理根を収容する缶に 入れる。２４時間後、この根及び幼虫をウースター・シルト・ローム（Ｗｏｏｓ ｔｅｒ ｓｉｌｔ ｌｏａｍ） で覆う。対照根を水に浸漬し、非処理対照を第１日にローム中に直接入れた幼虫 で構成する。缶を暗所において２５℃でインキュベートし、７、１０、２１、２ ８及び３６日後に死んだ幼虫の数を調べて、対照相関致死率を報告する｛（対照 生存−処理生存）／対照生存）×１００％｝。各処理に対して、総数で２５匹の 幼虫を用いる。表１０に示されるように、その結果は、化合物Ｉａ及びＩｂの粗 製混合物が第３齢ポピリア・ジャポニカに対して有効であることを示している。 例１３：エピラクナ・バリベスチス（メキシカン・ビーン・ビートル）に対する 活性 化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物（ｍｌ当たり１．８ｍｇ）を、第３齢エピラ クナ・バリベシス幼虫に対する殺虫活性について試験する。籠に入れたエピラク ナ・バリベシス成虫のコロニーを、バーピーのブッシュ・ライマメ（Ｂｕｒｐｅ ｅ′ｓ ｂｕｓｈ ｌｉｍａ ｂｅａｎｓ）で、グロース・チャンバー内におい て、１６：８の光周期、８０℃、相対湿度５０％で維持する。卵塊を採取し、湿 らせた綿芯及びライマメの葉を収容するペトリ皿で孵化させる。２日後、第２齢 幼虫を集め、葉浸漬生物検定に用いる。生物検定を行うため、マメの葉を収穫し 、４ｍｌの水を収容する園芸用管のゴム隔壁を通して単一の葉の葉柄を突き刺す 。次いで、これらの葉を、化合物Ｉａ及びＩｂを含有する粗製物質の０−１２％ ｖ／ｖの範囲の連続希釈液に浸漬する。一度葉を乾燥させ、８−１０匹の第２齢 幼虫を各葉の上にのせる。昆虫、葉、及び園芸用管を２２オンス紙コップ内に入 れ、微細な網で覆う。これらのコップを、甲虫コロニーの飼育に用いた同じグロ ース・チャンバー内に保持する。２日毎にグロース・チャンバーからコップを取 り出し、幼虫の個体 数を調べ、葉を新しい処理葉と取り替える。８日後に試験を終了する。 表１１に示される結果は、化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物がエピラクナ・バ リベシス幼虫に対して活性であることを示している。 例１４：レプチノタルサ・デセムリネアタ（コロラドハムシ）に対する圃場試験 レプチノタルサ・デセムリネアタに対して、ジャガイモ（カタディン（Ｋａｔ ａｈｄｉｎ）種）における駆除についての試験を、エーカー当たり５０、１００ 、１５０、及び３００ｇ適用される化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物をエーカー 当たり ０．５及び１．０クォート適用されるＮＯＶＯＤＯＲ^TMと組み合わせて用いて、 並びにエーカー当たり０．５、１．０、及び２．０クォート単独で適用されるＮ ＯＶＯＤＯＲ^TMを用いて行う。列当たり３個のスプレー・システムズＴＸＶＸ− １２（Ｓｐｒａｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ ＴＸＶＸ−１２）中空コーン・ノズルを備 え、３ｍｐｈ及び５６ｐｓｉで３２ＧＰＡの散布に目盛りを合わされた背負いＣ Ｏ₂噴霧器を用いて、７日間隔で２回処理を行う。各処理を、無作為に設計され た、２列（３４インチ間隔）×２５フィートの区画に対して４回繰り返す。区画 当たり５０フィートの列を越えて葉を分布させることなく、レプチノタルサ・デ セムリネアタ成虫及び幼虫を計数する。 図３に示される結果は、化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物がＮＯＶＯＤＯＲ^TM との有意の相乗活性をジャガイモに対して及ぼすことを示している。エーカー当 たり５０ｇの化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物では１３％の駆除が観察されるの に対して、エーカー当たり０．５クォートのＮＯＶＯＤＯＲ^TMでは２１％の駆除 が観察される。しかしながら、ＮＯＶＯＤＯＲ^TMと化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混 合物との両者をこれらの割合で一緒に 適用すると、駆除パーセントは８１％に増加する。同様に、０．５クォートのＮ ＯＶＯＤＯＲ^TMで２１％の駆除が見られるのに対して、エーカー当たり１００ｇ の化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物では２８％の駆除が得られるが、ＮＯＶＯＤ ＯＲ^TMと化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物との両者をこれらの割合で一緒に適用 すると、駆除パーセントは８１％に増加する。さらに、エーカー当たり５０ｇの 化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物とエーカー当たり１．０クォートのＮＯＶＯＤ ＯＲ^TMとを一緒に適用すると、駆除パーセントは８８％に増加する。微生物の寄託 バチルスチューリンギエンシスの以下の株が、ブダペスト条約に従い、アグリ カルチャラル・リサーチ・サービス・パテント・カルチャー・コレクション・ノ ーザン・リージョン・リサーチ・センター（Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｒｅｓ ｅａｒｃｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｐａｔｅｎｔ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔ ｉｏｎ Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｒｅｇｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅ ｒ）（ＮＲＲＬ）、１８１５ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｔｒｅｅｔ、Ｐｅｏｒ ｉａ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ、６１６０４、ＵＳＡに寄託されている。 これらの株は、この特許出願の継続中に、３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．１４及び３ ５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１２２の下で権利を与えることが特許商標局長官によって決定 された者が、この株を利用することが可能であることを保証する状態で寄託され ている。この寄託は、各寄託株の実質的に純粋な培養物を代表する。この寄託は 、この出願の対抗出願またはその継続出願が出願されている国における外国特許 法に必要とされる場合には利用可能 である。しかしながら、この寄託の利用可能性が、政府活動によって認可される 特許権を逸脱して本発明の実施の権利を与えるものではないことは理解されるべ きである。 ここに記述され、請求される発明は、ここに記述される具体的な態様によって 範囲が限定されるものではない。これは、これらの態様が、この発明の幾つかの 側面を説明することを意図するためである。実際、ここに示され、記述されるも のに加えて、この発明の様々な変形が、上述の記載から当該分野における熟練者 に明らかになるであろう。そのような変形もまた、添付の請求の範囲内にあるこ とが意図されている。 様々な参考文献がここに引用されており、それらの開示は、それら全体として 、参照することにより組み込まれる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:07） (Ｃ１２Ｐ 17/12 Ｃ１２Ｒ 1:07） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)， ＡＭ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，Ｃ Ｚ，ＥＥ，ＦＩ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ， ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＧ，Ｓ Ｉ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者 マクマラン，アニタ・エム アメリカ合衆国、ノース・カロライナ・ 28036、デイビツドソン、キヤロウエイ・ ヒル・レイン・19001 (72)発明者 ラフバロウ，パトリシア・エイ アメリカ合衆国、カリフオルニア・95616、 デイビス、メイデユー・プレイス・3603 (72)発明者 スターンズ，ロバート・エル アメリカ合衆国、カリフオルニア・95825、 サクラメント、リオ・デル・オロウ・レイ ン・418

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． バチルスチューリンギエンシス株であって、該株の本質的に全ての殺虫活 性が該株の発酵上清中にあるバチルスチューリンギエンシス株。 ２． ＮＲＲＬ Ｂ−２１０９０の識別特徴を有するＥＭＣＣ−００７７株、も しくはＥＭＣＣ−００７７と同じ特性を実質的に有するそれらの変異体、ＮＲＲ Ｌ Ｂ−２１０９１の識別特徴を有するＥＭＣＣ−００７８株、もしくはＥＭＣ Ｃ−００７８と同じ特性を実質的に有するそれらの変異体、ＮＲＲＬ Ｂ−２１ ０９２の識別特徴を有するＥＭＣＣ−００７９株、もしくはＥＭＣＣ−００７９ と同じ特性を実質的に有するそれらの変異体、ＮＲＲＬ Ｂ−２１０９３の識別 特徴を有するＥＭＣＣ−００８０株、もしくはＥＭＣＣ−００８０と同じ特性を 実質的に有するそれらの変異体、及びＮＲＲＬ Ｂ−２１０９４の識別特徴を有 するＥＭＣＣ−００８１株、もしくはＥＭＣＣ−００８１と同じ特性を実質的に 有するそれらの変異体からなる群より選択される請求項１に記載のバチルスチュ ーリンギエンシス株。 ３． 鞘翅目の害虫に対する殺虫活性を有し、かつ害虫に対する異なるバチルス 関連殺虫剤と共に作用する物質が前記株の発酵上清から得られる請求項１記載の 株。 ４． 前記物質が下記構造（Ｉ）を有する請求項３記載の株。 （ここで、Ｒ₁は、アミノ、ヒドロキシ、アルキル（Ｃ_1-10）、アルキル（Ｃ_{1-1 0} ）エステル、アリールがベンゾイル、ニトロベンゾイル、ジニトロベンゾイル 、ハロベンゾイルからなる群より選択されるアリールエステル、ハロゲン、Ｃ_{1- 5} アルコキシ、又は、アラニル、バリニル、ロイシニル、イソロイシニル、フェ ニルアラニル、グリシニル及びフェニルグリシニルを含み、しかしこれらに限定 されるものではないアミノ酸であり、 Ｒ₂は、アルキル（Ｃ_1-10）であり、 Ｒ₃は、水素、アミノ、ヒドロキシ、アルキル（Ｃ_1-10）、アルキル（Ｃ_1-10 ）エステル、アリールがベンゾイル、ニトロ ベンゾイル、ジニトロベンゾイル、ハロベンゾイルからなる群より選択されるア リールエステル、ハロゲン、Ｃ_1-5アルコキシ、メチルアミン、ジメチルアミン 、チオニル、メチルチオニル、シアノ、又は、これらのリン酸塩、硫酸塩、酢酸 塩、炭酸塩及び硝酸塩を含み、しかしこれらに限定されるものではないそれらの 塩であり、 Ｒ₄は、水素、アミノ、ヒドロキシ、アルキル（Ｃ_1-10）、アルキル（Ｃ_1-10 ）エステル、アリールがベンゾイル、ニトロベンゾイル、ジニトロベンゾイル、 ハロベンゾイルからなる群より選択されるアリールエステル、ハロゲン、Ｃ_1-5 アルコキシ、又は、それらのリン酸塩、硫酸塩、酢酸塩、炭酸塩及び硝酸塩を含 み、しかしこれらに限定されるものではないそれらの塩であり、 Ｒ₅は、水素、メトキシ、アミノ、ヒドロキシ、アルキル（Ｃ_1-10）、アルキ ル（Ｃ_1-10）エステル、アリールがベンゾイル、ニトロベンゾイル、ジニトロベ ンゾイル、ハロベンゾイルからなる群より選択されるアリールエステル、ハロゲ ン又はＣ_1-5アルコキシであり、 Ｒ₆は、アミノ、ヒドロキシ、アルキル（Ｃ_1-10）、アルキ ル（Ｃ_1-10）エステル、アリールがベンゾイル、ニトロベンゾイル、ジニトロベ ンゾイル、ハロベンゾイルからなる群より選択されるアリールエステル、ハロゲ ン又はＣ_1-5アルコキシであり、 Ｒ₇は、水素、アミノ、ヒドロキシ、アルキル（Ｃ_1-10）、アルキル（Ｃ_1-10 ）エステル、アリールがベンゾイル、ニトロベンゾイル、ジニトロベンゾイル、 ハロベンゾイルからなる群より選択されるアリールエステル、ハロゲン、Ｃ_1-5 アルコキシ、又は、それらのリン酸塩、硫酸塩、酢酸塩、炭酸塩及び硝酸塩を含 み、しかしこれらに限定されるものではないそれらの塩であり、 Ｒ₈は、水素、アミノ、ヒドロキシ、アルキル（Ｃ_1-10）、アルキル（Ｃ_1-10 ）エステル、アリールがベンゾイル、ニトロベンゾイル、ジニトロベンゾイル、 ハロベンゾイルからなる群より選択されるアリールエステル、ハロゲン、Ｃ_1-5 アルコキシ、メチルアミン、ジメチルアミン、チオニル、メチルチオニル、シア ノ、又は、これらのリン酸塩、硫酸塩、酢酸塩、炭酸塩及び硝酸塩を含み、しか しこれらに限定されるものではないそれらの塩であり、 Ｒ₉は、アルキル（Ｃ_1-10）であり、 Ｒ₁₀は、アミノ、ヒドロキシ、アルキル（Ｃ_1-10）、アルキル（Ｃ_1-10）エス テル、アリールがベンゾイル、ニトロベンゾイル、ジニトロベンゾイル、ハロベ ンゾイルからなる群より選択されるアリールエステル、ハロゲン、Ｃ_1-5アルコ キシ、又は、アラニル、バリニル、ロイシニル、イソロイシニル、フェニルアラ ニル、グリシニル、及びフェニルグリシニルを含み、しかしこれらに限定される ものではないアミノ酸である。） ５． Ｒ₁が、アラニル、バリニル、ロイシニル、イソロイシニル、フェニルア ラニル、グリシニル及びフェニルグリシニルからなる群より選択されるアミノ酸 である請求項４記載の株。 ６． Ｒ₁₀が、アラニル、バリニル、ロイシニル、イソロイシニル、フェニルア ラニル、グリシニル及びフェニルグリシニルからなる群より選択されるアミノ酸 である請求項４記載の株。 ７． 前記物質が下記構造を有する請求項４記載の株。 Ｉａ：Ｒ、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃＝Ｈ Ｉｂ：Ｒ、Ｒ₁、Ｒ₂＝Ｈ、Ｒ₃＝ＯＨ ８． （ａ）鞘翅目の害虫に対する殺虫活性を有し、かつ害虫に対する異なるバ チルス関連殺虫剤と共に作用する物質であって、該物質がバチルスの株の発酵上 清から得られ、ここで、該株の本質的に全ての殺虫活性が該発酵上清中に存在す る物質、及び（ｂ）バチルス関連殺虫剤を含有する殺虫剤組成物であって、該物 質が少なくとも約１ｇ／ＬＴＵの量で存在する殺虫剤組成物。 ９． 下記構造（Ｉ）を有する物質及び（ｂ）バチルス関連殺虫剤からなる請求 項８記載の組成物。 （ここで、Ｒ₁は、アミノ、ヒドロキシ、アルキル（Ｃ_1-10）、アルキル（Ｃ_{1-1 0} ）エステル、アリールがベンゾイル、ニトロベンゾイル、ジニトロベンゾイル 、ハロベンゾイルからなる群 より選択されるアリールエステル、ハロゲン、Ｃ_1-5アルコキシ、又は、アラニ ル、バリニル、ロイシニル、イソロイシニル、フェニルアラニル、グリシニル及 びフェニルグリシニルを含み、しかしこれらに限定されるものではないアミノ酸 であり、 Ｒ₂は、アルキル（Ｃ_1-10）であり、 Ｒ₃は、水素、アミノ、ヒドロキシ、アルキル（Ｃ_1-10）、アルキル（Ｃ_1-10 ）エステル、アリールがベンゾイル、ニトロベンゾイル、ジニトロベンゾイル、 ハロベンゾイルからなる群より選択されるアリールエステル、ハロゲン、Ｃ_1-5 アルコキシ、メチルアミン、ジメチルアミン、チオニル、メチルチオニル、シア ノ、又は、これらのリン酸塩、硫酸塩、酢酸塩、炭酸塩及び硝酸塩を含み、しか しこれらに限定されるものではないそれらの塩であり、 Ｒ₄は、水素、アミノ、ヒドロキシ、アルキル（Ｃ_1-10）、アルキル（Ｃ_1-10 ）エステル、アリールがベンゾイル、ニトロベンゾイル、ジニトロベンゾイル、 ハロベンゾイルからなる群より選択されるアリールエステル、ハロゲン、Ｃ_1-5 アルコキシ、又は、これらのリン酸塩、硫酸塩、酢酸塩、炭酸塩及び硝酸塩を含 み、しかしこれらに限定されるものではないそれらの 塩であり、 Ｒ₅は、水素、メトキシ、アミノ、ヒドロキシ、アルキル（Ｃ_1-10）、アルキ ル（Ｃ_1-10）エステル、アリールがベンゾイル、ニトロベンゾイル、ジニトロベ ンゾイル、ハロベンゾイルからなる群より選択されるアリールエステル、ハロゲ ン又はＣ_1-5アルコキシであり、 Ｒ₆は、アミノ、ヒドロキシ、アルキル（Ｃ_1-10）、アルキル（Ｃ_1-10）エス テル、アリールがベンゾイル、ニトロベンゾイル、ジニトロベンゾイル、ハロベ ンゾイルからなる群より選択されるアリールエステル、ハロゲン又はＣ_1-5アル コキシであり、 Ｒ₇は、水素、アミノ、ヒドロキシ、アルキル（Ｃ_1-10）、アルキル（Ｃ_1-10 ）エステル、アリールがベンゾイル、ニトロベンゾイル、ジニトロベンゾイル、 ハロベンゾイルからなる群より選択されるアリールエステル、ハロゲン、Ｃ_1-5 アルコキシ、又は、それらのリン酸塩、硫酸塩、酢酸塩、炭酸塩及び硝酸塩を含 み、しかしこれらに限定されるものではないそれらの塩であり、 Ｒ₈は、水素、アミノ、ヒドロキシ、アルキル（Ｃ_1-10）、アルキル（Ｃ_1-10 ）エステル、アリールがベンゾイル、ニトロ ベンゾイル、ジニトロベンゾイル、ハロベンゾイルからなる群より選択されるア リールエステル、ハロゲン、Ｃ_1-5アルコキシ、メチルアミン、ジメチルアミン 、チオニル、メチルチオニル、シアノ、又は、それらのリン酸塩、硫酸塩、酢酸 塩、炭酸塩及び硝酸塩を含み、しかしこれらに限定されるものではないそれらの 塩であり、 Ｒ₉は、アルキル（Ｃ_1-10）であり、 Ｒ₁₀は、アミノ、ヒドロキシ、アルキル（Ｃ_1-10）、アルキル（Ｃ_1-10）エス テル、アリールがベンゾイル、ニトロベンゾイル、ジニトロベンゾイル、ハロベ ンゾイルからなる群より選択されるアリールエステル、ハロゲン、Ｃ_1-5アルコ キシ、又は、アラニル、バリニル、ロイシニル、イソロイシニル、フェニルアラ ニル、グリシニル、及びフェニルグリシニルを含み、しかしこれらに限定される ものではないアミノ酸である。） １０． 前記物質が下記構造を有する請求項８記載の組成物。 Ｉａ：Ｒ、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃＝Ｈ Ｉｂ：Ｒ、Ｒ₁、Ｒ₂＝Ｈ、Ｒ₃＝ＯＨ １１． 害虫駆除有効量の請求項８記載の殺虫剤組成物に害虫を晒すことを包含 する害虫の駆除方法。 １２． レプチノタルサ・デセムリネアタ、Ｉｐｓカリグラフス、デンドロクト ヌス・フロンタリス、エピラクナ・バリベスチス、及びポピリア・ジャポニカか らなる群より選択される鞘翅目の種の害虫の駆除方法であって、（ａ）鞘翅目の 害虫に対する殺虫活性を有し、かつ害虫に対する異なるバチルス関連殺虫剤と共 に作用する物質であって、該物質がバチルスの株の発酵上清から得られ、ここで 、該株の本質的に全ての殺虫活性が該発酵上清中に存在する物質及び（ｂ）殺虫 の上で有効な担体を含有する、害虫駆除有効量の殺虫剤組成物に該害虫を晒すこ とを包含する方法。 １３． バチルス関連殺虫剤の殺虫活性を強化する方法であって、（ａ）鞘翅目 の害虫に対する殺虫活性を有し、かつ害虫に対する異なるバチルス関連殺虫剤と 共に作用する物質であって、該物質がバチルスの株の発酵上清から得られ、ここ で、該株の本質的に全ての殺虫活性が該発酵上清中に存在する物質及び （ｂ）殺虫の上で有効な担体を、該バチルス関連殺虫剤の殺虫活性を強化するに 十分な量で含有する殺虫剤組成物に害虫を晒すことを包含する方法。 １４． 鞘翅目の害虫に対する殺虫活性を有し、かつ害虫に対する異なるバチル ス関連殺虫剤と共に作用する物質であって、該物質がバチルスの株の発酵上清か ら得られ、ここで、該株の本質的に全ての殺虫活性が該発酵上清中に存在する物 質を実質的に純粋な形態で得る方法であって、 （ａ）バチルスチューリンギエンシスの株であって、該株の本質的に全ての殺 虫活性が該株の発酵上清中に存在する株を適切な成長培地で培養し、 （ｂ）（ａ）の上清を回収し、かつ （ｃ）工程（ｂ）の上清から該物質を単離して、実質的に純粋な物質を得る、 ことを包含する方法。