JPH09506857A

JPH09506857A - 多成分組合せアレイ合成による有機化合物の組合せアレイの合成

Info

Publication number: JPH09506857A
Application number: JP7504767A
Authority: JP
Inventors: ダブリュ．アームストロング，ロバート
Original assignee: オントーゲンコーポレーション
Priority date: 1993-07-16
Filing date: 1994-07-15
Publication date: 1997-07-08
Also published as: EP0708751A1; AU7367394A; CA2167391A1; WO1995002566A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、共通のコア構造を有する化合物のアレイに関し、該アレイの化合物は少なくとも３つの成分を有する多成分組合せアレイ合成の生成物からなるものである。本発明はまた、該アレイの合成方法に関する。本発明の更なる態様は、化合物の組合せアレイを合成するための固相合成の使用に関する。さらに、本発明は、所望のコア構造を確認し、該コア構造を形成しうるMCCA反応を確認し、続いて上記の方法にしたがって確認されたMCCA反応を用いて化合物のアレイを製造することによる、共通のコア構造を有する化合物の組合せアレイの作製方法に関する。本発明はまた、本発明の組合せアレイを用いて生物学的材料のin vitroアッセイを実施する方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】多成分組合せアレイ合成による有機化合物の組合せアレイの合成発明の分野本発明は、多成分組合せアレイ(multiple component combinatorial array:MC CA)合成を用いた組合せアレイ合成による、共通のコア(core)構造を有する化合物のアレイを作製する方法に関する。本発明はまた、各アレイが共通のコア構造〔この構造は多成分ワンポット(one pot)合成により作られる〕を有する一群の構造類似体からなる有機化合物の複数アレイに関する。発明の背景分子の構造とその生物的機能の関係を理解することは、新しい、改良された治療剤を開発する上で必須である。例えば、受容体の結合部位または酵素の活性部位の形状(contours)は、数個の構造類似体のこれらの部位への結合親和性を試験することによって効果的に分析できる。天然において、多くの生物的に活性は分子は、比較的小さい１群の共通コア構造のうち１個を有する。これらの共通コア構造は、β-ラクタム、ペプチド、糖、ヌクレオシド、芳香族化合物、ピリジン、ステロイド、テトラゾール、ピラジン、テルピンおよびアルカロイドを含む。生物活性はしばしばこれら共通コア構造のうち１つの存在に関連している。共通コア構造を有するが各メンバーが異なる置換基を有する１群の化合物を用いた構造-機能研究が、移しい生物的作用機構を解明するために使用されてきた。これらの研究のいくつか、および確認された作用機構が Goodman & Gilman のThe Pharmacological Basis of T herapeutics，Macmillian（6版、1980）に引用されている。生物的作用機構を理解するための価値ある研究手段であるのに加え、公知の生物的に活性な分子の置換基および構造的変種を用いた構造-機能分析は新しい治療剤を開発するための極めて貴重な手段である。例えば、ペニシリンに基づく改良された抗生物質は、β-ラクタマーゼによる分解を受けないコア構造を用いてペニシリンのβ-ラクタムコア構造を模倣することによって開発された。多数の抗ウイルス薬剤〔例えばAIDSに対する3-アジドチミジン(AZT)等〕が、ヌクレオシドの構造類似体はウイルスの遺伝機構に組み込まれ、これを妨害するであろうという見解に基づいて、ヌクレオシドのコア構造を模倣して設計されている。構造-機能関係の分析における律速段階は必要な構造類似体の合成である。構造-機能関係を評価するための伝統的な戦略は、連続的な化合物群（これら化合物のすべては１個の共通コア構造を有する）を合成し、評価するという繰り返しの多い工程を包含する。各繰り返しの後、合成およびアッセイすべき次の化合物群を設計するためにアッセイの結果を評価する。生物活性に影響を及ぼす置換基または構造要因が確認されるまで、および／または最適な治療剤が同定されるまで、この過程が繰り返される。構造-機能関係の評価への伝統的アプローチは、極めて時間がかかり労力集中的であり、しばしば数年間にわたって千個以上の化合物の合成を必要とする。これら化合物の化学合成はしばしば複雑で、一般に各化合物について多段階合成を必要とする。その結果、これらの構造-機能研究を達成するために必要な化合物を合成するのに、合成化学技術における高度の技能が一般的に要請される。このことは、この種の構造-機能分析研究を達成できる科学者の数を大幅に制限する。さらに、この種の研究に要する労力は非常に集約的で、しばしば１つのプロジェクトにつき数人の有機化学者がフルタイムで働かなければならない。これらの労力および技能上の要求により、この種の研究の達成、そしてそれゆえ新規治療剤の開発は、しばしば大きな化学会社に限定されている。研究対象の生物系を深く理解している研究者が、研究を達成するために必要な化合物を入手できないという理由で、しばしば新規治療剤の開発に参加することを妨げられている。構造類似体の合成に関連する労力の必要もまた、これまでに構造-機能分析がなされた化合物の範囲を大幅に限定してきた。構造類似体を作製するために必要とされる合成労力は、生物活性について公知の生物的に活性な分子に現在関連付けられていないコア構造を探ることを実行不可能にしてしまった。しかし、生物的に活性な化合物に関連するコア構造の数は、これまでに同定された構造の数を大幅に上回る可能性がある。構造類似体を合成するより効率的な方法は、生物活性に関して遙に広い範囲の構造を評価することを可能とするであろう。化合物を合成するために必要とされる労力と対照的に、合成された化合物を生物活性についてスクリーニングするために必要とされる労力は比較的少ない。生物活性について精密検査するのに有用な、簡単で効率的な化合物合成方法は、新規薬剤の開発速度を有意に加速し、また多数の研究者が研究に参加することを可能とするであろう。構造-機能分析研究に使用される化合物の合成をこれほど時間がかかり、かつ研究集約的としている要因の１つは、これらの化合物の化学合成が段階的線状トランスフォーメーション(transformation)によって別個に行なわれるという事実である。化合物をスクリーニングするのに要する時間は、化合物を合成するのに要する時間に較べ少ないので、より多くの化合物をより速い方法で合成することは、スクリーニングすべき化合物の総数が増えるとしても時間管理の観点から有利であろう。特異的抗原に対するモノクローナル抗体をスクリーニングするための一般的アプローチが、構造-機能研究を如何に実施すべきかについての有用なモデルを提示する。宿主の抗原刺激の後、宿主のモノクローナル抗体産生Ｂ細胞は不死化され、マイクロタイターウエルの大アレイに行き渡るよう希釈される。各タイターウエルにおいて個々の不死化細胞によって産生されるモノクローナル抗体の大多数は、殆ど役に立たない。しかし、アレイ中の有用な抗原結合抗体を同定するアッセイが存在する。同様に、有機化合物の大アレイを生物活性について迅速にアッセイすることが可能である。しかし、残念ながら、刺激を受けて所望の化合物を単離しうる有機化合物のアレイを生成することができる公知の生物的系は存在しない。したがって、そこから生物的に活性な作用物質を同定しうる、有機化合物のアレイを作製するための簡単で効率的な方法が必要である。バイオポリマー（ＲＮＡ、ＤＮＡ、ポリペプチドおよび最も最近のオリゴ糖、等）の自動化された合成のために開発された方法もまた構造-機能研究が如何に達成されうるかについての有用なモデルを提示する。これらバイオポリマーの自動化合成は、主としてＲＮＡおよびＤＮＡプローブ、ならびに小さいポリペプチドがすべての研究者に容易に入手可能となったことにより、バイオテクノロジー技術の開発を大いに加速させた。自動化バイオポリマー合成技術によりもたらされた利点は、新規治療剤の開発を目指して構造-機能関係を探るための多数の有機化合物を作製する簡単で、効率的で、かつ迅速な方法の必要をくっきり浮かび上がらせる。これらバイオポリマーの自動化合成は、固相支持体に結合させたバイオポリマー上で反復性の一連の反応を行なうことにより達成される。困ったことに、バイオポリマー合成技術を有機化合物の構造類似体の作製にそのまま向けることはできない。バイオポリマーの合成と違って、有機化合物の構造類似体の合成は多数の異なる化学反応を包含する。また、合成に関与する化学反応および試薬のより広い多様性のゆえに、より多様な固相支持体および化学リンカーが必要とされる。発明の概略本発明は、少なくとも３つの反応性成分を有する多成分組合せアレイ合成の生成物から成る、共通コア構造を有する化合物のアレイに関する。多成分組合せアレイ合成の各成分は、共通の官能基を有する１群の反応物からなる。アレイ合成は、反応における各成分の共通官能基が他成分の官能基と反応して共通コア構造を有する化合物のアレイを形成するような、適切な条件下で実施される。組合せアレイ合成の各成分は、それ自体が、共通コア構造を有する化合物のアレイを包含することができ、この成分反応物のアレイは多成分組合わせアレイ合成によって合成されるものである。各成分はまた、各反応物が共通官能基を有する化合物の混合物から成る１群の反応物を包含することができる。本発明のさらなる態様において、化合物のアレイは固相支持体に結合された形で形成される。本発明はまた、少なくとも３つの成分を用いる多成分組合せアレイ合成を使用した、共通コア構造を有する化合物のアレイの作製方法に関する。各成分は、共通の官能基を有する１群の反応物からなる。この方法は、ｎ次元のアレイの形をなす一連の反応容器（各反応容器はｎ次元のアレイにおけるその座標によって識別可能）を系統立てて用意することを含む。ｎ次元アレイの各軸はアレイ合成における異なる成分に対応する。各軸上の各位置は、対応する成分の異なる反応物に対応する。ｎ個の成分の反応物が、同一の反応物がアレイ上でこの反応物に対応する位置を有するアレイ内のすべての反応容器に添加されるように、反応容器のｎ次元アレイに添加される。次に、各反応容器内の成分を化合物のアレイを形成するのに適切な条件下で反応させる。組合せアレイ合成の各成分は、それ自体が共通コア構造を有する化合物のアレイを包含することができ、この成分反応物のアレイは多成分組合わせアレイ合成によって合成されるものである。各成分はまた、各反応物が共通官能基を有する化合物の混合物から成る１群の反応物を包含することができる。本発明のさらなる態様は、成分の１つを固相支持体に結合させる付加的工程を含む、固相多成分アレイ合成に関する。本発明はまた、所望のコア構造を同定し、そのコア構造を作製可能なMCCA反応を同定し、次いで同定されたMCCA反応を用いて前記の方法に従って化合物のアレイを調製することによる、共通コア構造を有する化合物の組合せアレイの作製方法に関する。本発明はまた、各メンバー化合物が共通コア構造を有し、かつ固相支持体に結合されている化合物のアレイに生物的材料を添加し、次に上記アレイの各メンバー化合物がその材料の生物活性に及ぼした効果を測定することによる、生物的材料のin vitroアッセイの実施方法に関する。図面の簡単な説明図１ａ〜ｐはMCCA反応によって合成的に入手可能な共通コア構造のいくつかの概略を示すものである。図２は図１に記載のコア構造の合成を表し、生成物と反応成分における置換基（Ｒ、Ｒ₁、Ｒ₁、Ｒ₃、Ｒ₄等）の対応を示す。図2aは、Jouciaら，J．Tetrahedr on Lett.,（1985）26:1221に記載の合成を示す。図2bは、Kellyら，J．Am．Chem ．Soc.（1985）107:3879に記載の合成を示す。図2cは、Banvilleら，Can．J．Ch em.（1974）50:80; Cameronら，J．Chem．Soc．Chem．Commun.（1976）275; および Cameronら，J．Chem．Soc．Chem．Commun.（1977）297に記載の合成を示す。図2dは、Kellyら，J．Amer.Chem．Soc.（1985）107:4998に記載の合成を示す。図2eは、Posnerら， Tetrahedron（1981）37:3921に記載の合成を示す。図2fは、Davisら，J．Org．C hem.,（1979）44:3755に記載の合成を示す。図2gは、Bestmannら，Angew Chem． Int．Ed．Engl.,（1985）24:790に記載の合成を示す。図2hは、Weisら，Tetrahe dron Lett.,（1981）22:1453に記載の合成を示す。図2iは、Ugiら，Justus Lieg is．Ann．Chem.,（1967）709:1に記載の合成を示す。図2jは、Ugiら，Chem．Ber .（1961）64:734に記載の合成を示す。図2kは、Sebtiら，Synthesis（1983）546 に記載の合成を示す。図21は、Isenringら，Synthesis（1981）385およびIsenri ngら，Tetrahedron（1983）39:2591に記載の合成を示す。図2mは、Kunzら，J．A mer．Chem．Soc.,（1988）110:651に記載の合成を示す。図2nは、Boehmら，J．O rg．Chem.,（1986）51:2307に記載の合成を示す。図2Oは、Murakamiら，J．Org ．Achem.,（1993）58:1458に記載の合成を示す。図2pは、第１環の立体化学が合成に用いられる糖によって決定され、また第２環の立体化学が酸化触媒によって決定される、c-結合二糖の合成を示す。図３は、MCCAアレイ合成が幾何学的尺度で類似体を作製し、合成される類似体の総数は、MCCAアレイ合成に使用された各成分の構造的変種(variant)の数の積に等しい、という事実を示す。図４は、アルデヒドおよび酸の反応成分を変化させる、パッセリニ反応を用いた２次元MCCAアレイ合成の結果を示す。図５は、カルジノフィリン(carzinophilin)／アジノマイシン(azinomycin)の作用機構を示す。図６は、抗腫瘍抗生物質カルジノフィリン／アジノマイシンのα-アシルオキシアミンコア構造を示す。α-アシルオキシアミンコア構造からの置換基をＲ₁、Ｒ₂およびＲ₃とラベルすることにより、カルジノフィリン／アジノマイシンおよびその誘導体の合成のためのパッセリニ反応図が同定される。図７は、保護基の除去の結果、天然のペプチド構造を模倣した非加水分解性のペプチド類似体が提供されるUgi反応を示す。図８は、ホスホチロシンペプチドのペプチド主鎖コア構造、および使用される第１および第２のアミノ酸(aa1およびaa2)ならびにUgi反応の他の成分を変えることによるホスホチロシンの構造的変種の合成を示す。図９は、一連の、チロシンに基づくペプチド類似体の合成を示す。図9aは、偽基質(pseudosubstrate)ペプチド阻害物質の合成を示す。図9bは、チロシン構造単位が無傷である、低分子量の、チロシンに基づくペプチド類似体の合成を示す。図9cは、チロシン構造単位が修飾された、低分子量の、チロシンに基づくペプチド類似体の合成を示す。図９ｄは別の低分子量のチロシンに基づくペプチド類似体の合成を示す。図10は、支持体およびリンカー系の合成を示す。図11は、Ugi反応を手段とする、ペプチド模倣物の固相合成を示す。発明の詳細な説明本発明は、共通のコア構造を有する有機化合物のアレイの、簡単で効率的な合成方法に関する。より具体的には、本発明は共通のコア構造を有する構造的に関連した類似体のアレイを合成するための、多成分組合せアレイ(MCCA)合成の使用に関する。多成分組合せアレイ(MCCA)合成は、１つの反応容器中で複数の反応物が同時に、または非同時に結合して生成物を形成する反応に相当する。多年にわたって多数のMCCA反応が開発されてきた。ある場合には、公知の天然産物の効率的な合成を示すために、そのような反応が開発された。Cameronら，J．Chem．Soc．Chem ．Comm.（1976）275(アントラキノン昆虫色素の全合成の適用におけるm-脱酸素化ベンゾキノンの合成); Schopf，Angew．Chem.,（1937）50:779-797（トロパンアルカロイドの全合成における二重マンニッヒ反応）；Posnerら，Tetrahedron （1981）39:3921参照。他の場合には、カスケード過程における多重結合の形成に関与する方法への一般的な参加として反応が開発された。いずれにせよ、これらの反応は、あるMCCA反応によって作出された共通のコア構造を有する多数の構造的変種を作製するための、簡単で効率的な手段を表す。MCCA反応によって合成的に入手可能となるコア構造のいくつかの概略は図１に示されている。これらコア構造を作出するための反応順序は図２に示されている。伝統的には、構造類似体は多段階線状合成によって合成されてきた。線状合成は、最終生成物を得るためには、数個の別々の反応物の連続的反応を包含する。線状合成は一般にワンポット反応ではなく、中間生成物の単離と生成を必要とする。線状合成と違い、MCCA反応はワンポット反応であるため、中間反応生成物の単離と精製を必要としない。その結果、MCCA反応は多段階線状合成に較べ、実施が簡単で、より効率的である。MCCA反応の生成物はそれゆえ合成有機化学技術において高度の技能を欠く人々にとってより近づきやすい。さらに、中間体の単離および精製が全く不要なので、MCCA反応は容易に自動化に適合させやすい。アレイ合成の形で使用した場合、MCCA反応は直線的尺度よりもむしろ幾何学的尺度での構造類似体の合成を可能とする。あるMCCAアレイ合成においては、少なくとも３つの反応成分が用いられる。各成分は、MCCA反応に参加する共通の官能基を有する１群の反応物から成る。組合せアレイ合成は、種々のMCCA成分の異なる組合せを反応させることにより実施される。組合せアレイ合成は図３、７および９に示される。 MCCAアレイ合成は、関与する反応成分の数および使用される各反応成分の変種の数によって特徴づけることができる。MCCA反応がｎ個の成分を有するMCCAアレイ合成においては、構造類似体のｎ次元アレイが作製されうる。類似体の各アレイは類似体のライブラリーと等価である。１反応物が一定に保たれる時（または、ある成分が１反応物の群からなる時）、ｎ次元アレイはｎ−１アレイに単純化し、そして上記成分に対して使用された反応物が一定に保たれる、より大きいアレイのサブライブラリーとして可視化されうる。図３に示すように、MCCAアレイ合成は一連の１次元アレイの掛け算に類似している。アレイ合成の各成分は、異なる１次元アレイによって表され、１次元アレイの諸要素は組合せアレイ合成における所与の成分に対して使用された１群の反応物に対応する。数学的には、ｎ個の１次元アレイが掛け算されてｎ次元アレイが作り出される。MCCAアレイ合成においては、反応容器はｎ次元アレイの形に系統だって用意され、各反応容器はｎ次元アレイにおけるその座標によって同定されうる。反応容器のアレイの各軸は、 MCCA反応における異なる成分に対応する。各軸上の各位置は、対応する成分の異なる反応物に対応する。組合せアレイ合成の間、ｎ個の成分の反応物が、同一の反応物がアレイ上でこの反応物に対応する位置を有するアレイ内のすべての反応容器に添加されるように、反応容器のｎ次元アレイに添加される。反応容器のアレイ内の諸成分の反応は、ｎ個の１次元アレイの掛け算に類似している。なぜなら、ｎ次元アレイを形作る各反応容器における種々の反応物の反応は、その反応容器に添加された反応物の「プロダクト（生成物／積）」をもたらすからである。 MCCAアレイ合成は、直線的尺度ではなく幾何学的尺度で類似体を作製するという点で、線状合成よりも有利である。幾何学的尺度で構造類似体を合成する能力は、これらの化合物を合成するのに要する時間と労力を有意に減少させる。表１に示すように、合成される類似体の総数は使用された各反応物の数の積に等しい。例えば、３成分MCCAの各成分に10個の異なる変種が使用されるとすると、1000個の構造類似体アレイに相当する、類似体の10x10x10 ３次元アレイが作製される。上記の組合せアレイ合成は、基礎となるMCCA反応の反応限界だけが制限されている、多様な構造類似体を提供する。例えば、本発明のさらなる態様において、組合せアレイ合成の１成分の反応物は、それら自体が組合せアレイ合成の生成物でありるる。さらに別の態様においては、MCCAアレイ合成の１成分の個々の反応物は、共通の官能基を有する異なる化合物の混合物から成ることができる。使用される個々の反応物が複数化合物の混合物からなる場合、合成によって作製される類似体は複数化合物の混合物である。したがって、本願に用いる「類似体」という用語は、２個以上の化合物を含みうる。さらに、特定の反応によっては、シス、トランス、エキソ、エンドおよびジアステレオマー異性体もまたアレイ合成によって作製されうる。本発明のMCCAアレイ合成は、溶液、固相、光化学、電気化学、遊離基および酵素反応を含むがこれ等だけに限定されないあらゆる種類の化学反応を包含することが理解されねばならない。また、４つ以上の成分の縮合を含むMCCAアレイ合成もまた本発明により実施しうることが理解されねばならない。４成分アレイ合成の場合、反応を、３次元アレイの間の唯一の可変物が各アレイに使用されている第４成分の構造である、一連の３次元（ｎ−１）アレイ合成として見ることが最も簡単である。より高次の MCCAアレイ合成もまた可能である。本発明はまた、MCCAアレイ合成によって合成しうる構造類似体のアレイ（ライブラリー）に関する。化合物をアッセイすることは、現在線状合成によって化合物を合成するのに要する時間に較べ、非常にわずかの時間しか要しない。本発明は、全てが共通のコア構造を有する構造的に関連した類似体の大きなライブラリーの迅速な作製を可能とする。化合物を分析しうる速度を考慮すると、共通のコア構造を共有する化合物のライブラリーの利用は分子の生物活性を支配する構造-機能関係を分析するための極めて貴重な手段である。現在、比較的小さい１群のコア構造が天然において優勢であるように思われる。これらの共通コア構造の構造類似体の参照アレイは、どのコア構造が、そしてそのようなコア構造アレイを有するどの類似体が、生物活性を有するのかに関する、少なくとも予備的スクリーニングを行なうために貴重であろう。これらの参照アレイは常に試験対象である生物系のために特に設計されているとは限らないが、アレイ内のある類似体に関する生物活性における何らかの変化の観察は支配的な構造-機能関係について貴重な手掛かりを提供するであろう。次に、これらの手掛かりを用いて、より特異的に整えた組合せアレイおよび／または特異的標的化合物を設計することができるであろう。天然に見いだされるコア構造を有する構造類似体の組合せアレイの利用もまた、生物的機能について十分特徴付けられていない、新しく単離された生体分子に関する予備的な構造-機能分析を迅速に達成するのに極めて貴重であろう。さらに、これらの組合せアレイは、小さい研究グループに、特に非合成的研究グループに、以前には利用できなかった構造-機能分析を行なうための化合物の利用を提供する。大量の構造類似体を作出する本発明の能力は、初めて、生物的に活性な分子と現在関連付けられていないコア構造を有する化合物のアレイの生物活性を研究することを可能とする。以前には、構造類似体を作製するために必要とされる合成上の労力が、生物活性について公知の生物的に活性な分子と関連付けられていないコア構造を探ることを実行不可能としていた。本発明によって作出可能な構造類似体の大きなアレイが、より広範なコア構造およびこれらコア構造を有する構造類似体の生物活性に関するアッセイを今可能とする。生物活性の存在についてある化合物をアッセイするには、非常に少量の材料が必要とされるだけである。それゆえ、構造類似体の組合せアレイは、どの化合物についても大量のものを含有する必要はないであろう。さらに、１アッセイについて少量の化合物が要るだけなので、各化合物を少量ずつ含有する組合せアレイでも繰り返し使用が可能である。本発明の組合せアレイの系統化された観念は、構造-機能分析の心理的な側面を大幅に単純化する。この効用を評価するためには、本発明の組合せアレイの系統的性質を説明してもらう必要がある。MCCA合成によって作出される化合物のアレイは、MCCAアレイ合成に使用される反応成分の数と等しい次元を有する幾何学的アレイに関して、最も良く考案されている。例えば、４成分MCCA反応は４次元の組合せアレイを作出するであろう。アレイの各要素は、類似体を合成するために使用された正確な成分と対応している、アレイにおけるその座標によって同定しうる。したがって、３次元アレイの各成分の第２変種の生成物は、(2、2、2) というアレイ座標を有するであろう。組合せアレイの座標系は、特定の組合せアレイの要素を生物活性についてアッセイして得られる結果の評価を助ける。各ｎ次元アレイは、一連の（ｎ−１）次元アレイ、または各サブライブラリーの全メンバーが少なくとも１つの共通成分によって形成される共通のコア構造を有する複数のサブライブラリーとして考えることができる。したがって、図３に示すように、３成分縮合反応は、１つの反応物が一定に保たれる一連の２次元アレイに分解することができる。あるサブライブラリー全体にわたる活性の形成または破壊は、サブライブラリーの全メンバーに共通した成分によって与えられた構造の生物的重要性を明らかにする。したがって、MCCAアレイをサブライブラリーに分割可能な多次元アレイと解釈することによって、本発明は構造-機能関係を評価するための系統的枠組みを提供する。各サブライブラリーはその大きさに係わりなく１個の構造サブユニットが一定に保たれているある化合物のクラスに対応するので、特定のサブライブラリーの全体にわたる生物活性が見いだされたならば、それは不変の機能性サブユニットがその化合物群に実現されている生物活性にとって重要であることを示すであろう。本発明の組合せアレイによって創出される系統化された観念は、移しい数の化合物の構造-機能相関を評価するための極めて貴重な手段を提供する。新しい治療剤の同定のために現在採用されている線状合成的アプローチは、主にアッセイされる分子の結合定数を評価することにより実施されている。ある類似体はなぜより強い結合を示すのかについての推論は、これらの研究からは必ずしもすぐに明らかにならない。対照的に、本発明のアプローチは、構造-機能効果がすぐに明らかとなる、系統だった枠組みを提供する。したがって、構造-機能関係を試験するための類似体へのより迅速で効率的なルートを提供するだけでなく、本発明はより優れた治療剤の同定を目指す、構造-機能関係の評価のためのより効果的な手段を提供する。本発明はまた、これらMCCAアレイの固相合成、保存および使用に関する。固相合成は精製を単純化するために有益である。反応成分の１つを固相支持体（例えば、マイクロタイターウエル）に結合させることによって、合成された化合物を高い純度で単離することが可能である。任意の多段階反応の不利な点の１つは、低収率である。各段階につき７０％の収率を有する３段階合成は、３５％の収率でしか生成物を生産できない。したがって、複雑な分子を合成する場合、精製過程の単純化は最終的収率を最適にする手段として極めて望ましい。反応物の１つが脱着可能なリンカーに結合している固相支持体上で化合物の組合せアレイを合成することにより、生成物の精製および単離が大いに単純化される。これは複雑で、低収率のMCCA反応が関与している場合は特に重要である。なぜなら、本発明において必要とされることのすべては、生物活性について試験するのに十分な量の各類似体だからである。本発明の組合せアレイの固相合成は、これらの化合物を高純度で、かつ固体状態で単離することを可能とすることにより、これらのアレイの保存安定性を改良する。さらに、固相支持体に結合したまま化合物を保存することは、組合せアレイ中の化合物の漏れ、または混合を防止する。固相合成はまた、in vitro結合試験を実施するための、これら組合せアレイの使用を容易にする。マイクロタイタートレーに結合させた化合物の２次元アレイの全部を、タンパク質または細胞に結合する能力について一度にアッセイすることができる。これは、類似体の全アレイが、異なる生体分子および細胞との結合について非常に迅速にアッセイされることを可能とする。 MCCA反応による組合せアレイの固相合成は、合成しうる異なる種類の化合物について殆ど制限がない。一般的に、固相合成の使用によって提示される唯一の制限は、反応成分の１つを固相に結合させる手段がいるという要求である。これは、一般にアルコール、メルカプタン、アミン、カルボニル、カルボキシレートまたはセレン化物等の官能基の使用を包含する。合成されるべき化合物の構造についての他の制限は与えられていない。さらに、新しいリンカーが設計されるにつれ、現在ある構造的制限はさらに減少するであろう。本発明においては、リンカーに共有結合することができる任意の固相媒体を使用することができる。ポリスチレン-ジビニルベンゼン、ポリエチレングラフト化ポリスチレン、ポリアクリルアミド-キーゼルグール複合体および調製細孔ガラス、等のポリマーはすべて、種々のリンカーを用いた誘導体化に適する官能基を付けて市販されている。ＤＮＡおよびペプチド等の生体分子の固相ポリマー合成のための固相支持体に種々のモノマーを結合させるためリンカーが使用される。本発明のリンカーは、 MCCA合成の成分の１つに結合可能でなければならず、また合成された分子を何らかの特異的で調節可能な作用機構により後に放出できなければならない。このような調節可能な方法は、熱、光化学、電気化学、酸、塩基、酸化および還元反応を含むが、これらだけに限定されない。種々の官能基結合および開裂戦略を提供する、数個の市販されているリンカーがある。酸不安定リンカーの例は、エーテル、アセタールおよびエステルのリンカーへの結合を可能とする4-ヒドロキシメチルフェノキシ脂肪族酸を含む。p-[2 ,4-ジアルコキシルアミノベンジル]フェノキシ酢酸等のアミンを担持する酸不安定リンカーは、アミド、イミン、カーボネートまたは尿素等の官能基を介して結合を可能とする。これらリンカーの芳香環上のアルコキシル置換基の程度が、有機化合物が固相支持体から開裂されるpHに影響を及ぼす。トリチル基に基ずくリンカーは、弱酸性条件下で開裂されうる。塩基不安定リンカーは、［4-(2-ブロモプロピオニル)フェノキシ〕酢酸リンカーを含む。これらリンカーのエステル結合は、水酸化物、アルコキシドおよびアミン等の求核試薬によって開裂され、有機化合物の対応する酸、エステルおよびアミン誘導体をもたらすことができる。さらに、［4-(2-ブロモプロピオニル)フェノキシ〕酢酸リンカーおよびオルト-ニトロベンジルリンカーは、中性条件下で有機化合物の固相支持体からの光化学的開裂を可能とする。リンカーは光化学的または熱的に生成物を放出できることが好ましい。なぜなら、そのようなリンカーはデカップリング反応物を必要としないからである。熱放出作用機構を有するリンカーは、最も好ましい態様である。なぜなら、熱反応は化合物が放出される速度に対してより大きい制御を提供するからである。さらに、熱不安定リンカーは、光化学的不安定リンカーに較べ、より安定である。本発明において有用なリンカーの種類は、ここに記述されたリンカーに限定されない。なぜなら、当分野にはさらに適切なリンカーが存在するかもしれず、または後に開発されるかもしれないからである。MCCAアレイの固相合成におけるリンカーの使用は、実施例６および７に記述されている。本発明はまた、in vitro結合試験における、固相支持体に結合した類似体の使用に関する。本発明のこの適用においては、化合物の全アレイが生物分子への結合能について同時に、迅速に、かつ効率的に試験されうる。これは、生物活性について化合物の大きなアレイをアッセイする過程を大幅に加速する。固相支持体に結合した化合物のアレイは、化合物の生物活性に及ぼす構造配向を試験するためにも使用できる。これは、各アレイが以下の点で異なる同一群の化合物からなる組合せアレイをアッセイすることにより達成される。すなわち、各アレイの構造類似体の異なる部分が化合物を固相支持体に結合するのに用いられている組合せアレイである。それゆえ、本発明は化合物の同一アレイの異なる面の結合親和性を試験する方法を提供する。現在採用されている線状合成アプローチは上記のデータを得る手段を提供せず、結合した複合体の結晶構造を得ることがない。固相合成を用いることの限定の１つは、成分の１つが固相支持体に結合可能で、かつまたMCCA反応に参加しうる、という必要条件である。ある成分がこれらの機能を両方とも果たすためには、その成分は反応に参加する１つの官能基とリンカーに結合するもう１つの官能基という２個の官能基を持たなければならない。ある成分が２個の官能基を持つ、という必要条件は、固相支持体に結合させるべき成分の構造を変えようとしない場合、重大な問題ではない。しかし、リンカーに結合されることが可能で、同時に反応に参加することも可能である成分の構造的変種の範囲はしばしば限定される。アレイ合成の生成物を必ずしもいつも単離し、生成する必要はないことに留意すべきである。多くのMCCA反応は高収率で、また全成分を溶解状態で反応させることができる。さらに、多数のバイオアッセイが、精製していない生成物の混合物を用いて実施可能である。したがって、これらの場合、固相合成の主な利点つまり単純化された精製は不要となる。さらに、溶液化学反応混合物から反応生成物を単離する方法は、反応の未反応成分を封鎖することを含む。Ugi反応の生成物を単離するために封鎖剤(sequeste ring agent)を使用する例は、実施例９に提供される。反応の未反応成分を封鎖するために封鎖剤を使用することによって、アレイ合成の生成物はバイオアッセイに使用するのに十分な純度で単離しうる。本発明はまた、構造類似体の自動化された作製方法に関する。MCCAアレイの自動化合成は、構造類似体のアレイを調製するために必要とされる技能レベルを引き下げ、その結果、合成有機化学者の助け無しで構造-機能研究の実施を可能とする。したがって、自動ＤＮＡ、ＲＮＡおよびペプチド合成機のように、本発明は研究者が合成化学技術における高レベルの技能を持つこと無く構造類似体の組合せアレイを作出するのを可能とする。本発明の構造類似体の組合せアレイの自動化合成は、合成されるアレイの論理的系統化によって可能となる。本発明の自動化は、同一の反応成分が同一の横列、縦列または層の反応コンパートメント(compartment)のすべてに添加されうるように本発明を系統化することができるという事実により促進される。自動化合成は、同一のMC CA反応条件がMCCAアレイ内のすべての化合物の合成に対して使用できるという事実によっても促進される。 MCCAアレイの自動化組合せ合成は、液相でも固相でも実施できる。多くの場合、MCCA反応は高収率なので、反応混合物の主要成分が生成物である。そのような場合、生成物はしばしば溶剤および他の揮発性物質の蒸発によって単離できる。低収率MCCA反応の場合、MCCAアレイの自動化組合せ合成は固相で実施することが好ましい。なぜなら、合成された化合物の精製および単離が大幅に単純化されるからである。多成分縮合反応を用いた構造類似体の組合せアレイの作出方法および作出された組合せアレイは、以下の実施例に例示されている。これらの実施例に示すように、本発明はMCCA反応の使用により、生物的に活性な分子の公知の共通コア構造の殆どのものについて多数の構造類似体を合成するための単純で効率的な方法を提供する。上記以外の目的および利点は、実施例および添付の図面より明らかになるであろう。ある反応は本発明の開示された範囲内で機能しない場合があることに注意すべきである。このようなことが起こる化合物は、当業者には容易に認識されるであろう。このような場合のすべてにおいて、当業者に公知の通常の修正、例えば妨害基の適切な保護、通常の反応物への変更、または反応条件の通常の修正、等により反応を上首尾に実施することができる。または、ここに開示する他の反応または通常の反応が、本発明の対応する化合物の調製に適用可能であろう。すべての準備的方法において、すべての出発材料は公知であるか、または公知の出発材料から容易に調製しうる。すべての温度は補正無しで摂氏で示す。そして、別途指示しないかぎり、全ての部および百分率は重量に基づくものである。実施例実施例１：作製するためのMCCAアレイの決定本発明は、レトロ合成法として知られる有機化学合成設計理論を利用するものである。レトロ合成法は、既知の合成法によって形成しうる分子中の結合を探すことにより、標的分子をより小さい、より単純な成分に切断する方法を教示する。本発明は、MCCA反応によって使用し得ることが知られている１以上のコア構造について標的分子を評価することを教示する類似の方法を利用するものである。標的分子の一連の構造類似体を生成するのにどのMCCA反応を使用するかを決定するために、まず、標的化合物をMCCA反応によって生成されたコア構造と比較することが必要である。図１には、既知のMCCA反応によって生成することのできる 14のコア構造を要約してある。いったん標的分子のMCCAコア構造が同定されたら、標的分子を合成するための反応図が、コア構造に結合される置換基を、図示されるようにＲ、R₁、R₂、R₃などとラベルすることにより決定される。その後、図２に示すごとく、同一の置換基が対応する反応成分に結合される。標的分子の構造類似体の組合せアレイは、MCCA反応の種々の成分の置換基の構造を変えることによって作製できる。この方法は実施例３において詳述され、そこにはパッセリニMCCA反応を用いるカルジノフィリン／アジノマイシン構造類似体の合成が記述される。実施例２：パッセリニ反応を用いるα−アシルオキシアミンMCCA アレイの合成共通のα−アシルオキシアミンのコア構造を有する構造類似体のアレイ合成は、パッセリニ反応を用いる組合せアレイ合成により行うことができる。図３に示すように、パッセリニ反応は一般構造 RCHO をもつアルデヒドと一般構造 R₁NC をもつイソシアニドと一般構造 R₂COOH をもつ酸との反応を包含する。パッセリニ反応を用いる二次元MCCAアレイ合成は、８種類のアルデヒドと、８種類のカルボン酸と、１種類のイソシアニドを用いて行った。この合成により生成された類似体の二次元組合せアレイを、観察された収率とともに、図４に示してある。この組合せアレイ合成の実験プロトコールならびに合成された10の類似体の物理的データを以下に記述する。二次元アレイ合成に用いた反応物はすべて商業的に入手可能である。実験プロトコール：Ａ．反応物の調製：シアノメチルホスホン酸ジエチル（700 mg，70当量）の無水CH₂Cl₂(17 mL)溶液を25 mL丸底フラスコ中に調製し、N₂雰囲気下に室温で１時間攪拌した。アルデヒド、すなわちベンズアルデヒド、ヘプタアルデヒド、プロパンアルデヒド、トランス-2- ブテナール、p-メトキシベンズアルデヒド、ブチルアルデヒド、4- N,N-ジメチルアミノベンズアルデヒドおよびシンナムアルデヒドの無水CH₂Cl₂（ 2.2 mL）溶液は、各アルデヒドがイソシアニドに対して20モル当量となるように５mL丸底フラスコ中に調製した。カルボン酸、すなわち酢酸、2-フェニル酢酸、 2,2-ジフェニル酢酸、アクリル酸、安息香酸、1-ナフトエ酸、ケイ皮酸、3,3-ジクロロプロピオン酸の無水CH₂Cl₂（2.2 mL）溶液は、各酸がイソシアニドに対して 10モル当量となるように５mL丸底フラスコ中に調製した。Ｂ．反応プロトコール：組合せアレイ合成用の反応チャンバーとして、64のガラスバイアル(８×８)を含むシェルバイアルボックス（shell vial box,Fisher，１dr，15×45 mm，72バイアル）を使用した。組合せアレイ合成に用いる特定のアルデヒドは横列ごとに変えた。組合せアレイ合成に用いる特定の酸は縦列ごとに変えた。横列１：気密シリンジを使って、シンナムアルデヒドの2.2 mL CH₂Cl₂溶液を 0.25 mL （１当量）アリコートとして横列１の８つのバイアルのそれぞれに単一のプロセスで加えた。横列２：気密シリンジを使って、4-N,N-ジメチルアミノベンズアルデヒドの2.2 mL CH₂ Cl₂溶液を 0.25 mL（１当量）アリコートとして横列２の８つのバイアルのそれぞれに単一のプロセスで加えた。横列３：気密シリンジを使って、ブチルアルデヒドの2.2 mL CH₂Cl₂溶液を 0.25 mL（１当量）アリコートとして横列３の８つのバイアルのそれぞれに単一のプロセスで加えた。横列４：気密シリンジを使って、p-メトキシベンズアルデヒドの2.2 mLCH₂Cl₂溶液を 0 .25 mL（１当量）アリコートとして横列４の８つのバイアルのそれぞれに単一のプロセスで加えた。横列５：気密シリンジを使って、トランス-2- ブテナールの2.2 mL CH₂Cl₂溶液を 0.25 mL（１当量）アリコートとして横列５の８つのバイアルのそれぞれに単一のプロセスで加えた。横列６：気密シリンジを使って、プロパンアルデヒドの2.2 mL CH₂Cl₂溶液を 0.25 mL （１当量）アリコートとして横列６の８つのバイアルのそれぞれに単一のプロセスで加えた。横列７：気密シリンジを使って、ヘプタアルデヒドの2.2 mL CH₂Cl₂溶液を 0.25 mL（１当量）アリコートとして横列７の８つのバイアルのそれぞれに単一のプロセスで加えた。横列８：気密シリンジを使って、ベンズアルデヒドの2.2 mL CH₂Cl₂溶液を 0.25 mL（１当量）アリコートとして横列８の８つのバイアルのそれぞれに単一のプロセスで加えた。縦列Ａ：気密シリンジを使って、酢酸の2.2 mL CH₂Cl₂溶液を 0.25 mL（１当量）アリコートとして縦列Ａの８つのバイアルのそれぞれに単一のプロセスで加えた。縦列Ｂ：気密シリンジを使って、2-フェニル酢酸の2.2 mL CH₂Cl₂溶液を 0.25 mL（１当量）アリコートとして縦列Ｂの８つのバイアルのそれぞれに単一のプロセスで加えた。縦列Ｃ：気密シリンジを使って、2,2-ジフェニル酢酸の2.2 mL CH₂Cl₂溶液を 0.25 mL （１当量）アリコートとして縦列Ｃの８つのバイアルのそれぞれに単一のプロセスで加えた。縦列Ｄ：気密シリンジを使って、アクリル酸の2.2 mL CH₂Cl₂溶液を 0.25 mL（１当量）アリコートとして縦列Ｄの８つのバイアルのそれぞれに単一のプロセスで加えた。縦列Ｅ：気密シリンジを使って、安息香酸の2.2 mL CH₂Cl₂溶液を0.25 mL（１当量）アリコートとして縦列Ｅの８つのバイアルのそれぞれに単一のプロセスで加えた。縦列Ｆ：気密シリンジを使って、1-ナフトエ酸の2.2 mL CH₂Cl₂溶液を0.25 mL（１当量）アリコートとして縦列Ｆの８つのバイアルのそれぞれに単一のプロセスで加えた。縦列Ｇ：気密シリンジを使って、ケイ皮酸の2.2 mL CH₂Cl₂溶液を0.25 mL（１当量）アリコートとして縦列Ｇの８つのバイアルのそれぞれに単一のプロセスで加えた。縦列Ｈ：気密シリンジを使って、3,3-ジクロロプロピオン酸の 2.2 mLCH₂Cl₂溶液を 0. 25 mL（１当量）アリコートとして縦列Ｈの８つのバイアルのそれぞれに単一のプロセスで加えた。シアノメチルホスホン酸エステルの17 mL CH₂Cl₂溶液は、気密シリンジを使って、0.25 mL アリコートとしてアレイの64のバイアルに単一のプロセスで分配した。反応剤の添加が完了したとき、各反応容器は全容量0.75 mL のCH₂Cl₂中に２モル当量のアルデヒド、１モル当量の酸、１モル当量のイソシアニドを含んでいた。全ての反応容器（バイアル）にキャップを施し、無水雰囲気を維持するためのそれ以上の対策を講ずることはしなかった。アレイ全体を手動で30秒間振とうし、その後室温に17時間放置した。所定のサンプルをそれぞれ丸底フラスコに移し、更なる精製を行うことなく減圧下で蒸発乾固させた。各粗製混合物を¹H NMRで分析して、生成物の組成および未反応の原料イソシアニドに対する収率を決定した。選択した10の類似体のデータを以下に示す。各類似体はその横列と縦列の数字により識別される。類似体３Ｃ： N-[(1-ジエチルホスホノ)メチル]-2-ジフェニルアセトイルペンタミド：この反応混合物は n- ブタンアルデヒド（80μL，２当量）、ジフェニル酢酸（100 mg，１当量）およびシアノメチルホスホン酸ジエチル（10 mg，１当量）を含んでいた。収率８０％；類似体３Ｆ： N-[(1-ジエチルホスホノ)メチル]-2-(1-ナフトイル)ペンタミド：この反応混合物は n- ブタンアルデヒド(80μL，２当量)、1-ナフトエ酸（8 0 mg，1当量）およびシアノメチルホスホン酸ジエチル（10 mg，１当量）を含んでいた。収率８０％；類似体６Ｃ： N-[(1-ジエチルホスホノ)メチル]-2-ジフェニルアセトイルブタミド：この反応混合物は n- プロパンアルデヒド（70μL，２当量）、ジフェニル酢酸（100 mg，１当量）およびシアノメチルホスホン酸ジエチル（10 mg，１当量）を含んでいた。収率６０％；類似体６Ｆ： N-[(1-ジエチルホスホノ)メチル]-2-(1- ナフトイル)ブタミド：この反応混合物は n- プロパンアルデヒド(70μL，２当量)、1-ナフトエ酸（8 0 mg，１当量）およびシアノメチルホスホン酸ジエチル（10 mg，１当量）を含んでいた。収率７５％；類似体７Ａ： N-[(1-ジエチルホスホノ)メチル]-2-アセトキシオクタミド：この反応混合物は n- ヘプタアルデヒド（125 μL，２当量）、酢酸（30 mg，１当量）およびシアノメチルホスホン酸ジエチル（10 mg，１当量）を含んでいた。収率９５％；類似体７Ｂ： N-[(1-ジエチルホスホノ)メチル]-2-フェニルアセトイルオクタミド：この反応混合物は n- ヘプタアルデヒド(125 μL，２当量)、フェニル酢酸（65 mg，１当量）およびシアノメチルホスホン酸ジエチル（10 mg，１当量）を含んでいた。収率５０％；類似体７Ｄ： N-[(1-ジエチルホスホノ)メチル]-2-アシロイルオクタミド：この反応混合物は n- ヘプタアルデヒド（125 μL，２当量）、アクリル酸（35 mg，１当量）およびシアノメチルホスホン酸ジエチル（10 mg，１当量）を含んでいた。収率１００％；類似体７Ｅ： N-[(1-ジエチルホスホノ)メチル]-2-ベンゾイルオクタミド：この反応混合物は n- ヘプタアルデヒド（125 μL，２当量）、安息香酸（60 mg ，１当量）およびシアノメチルホスホン酸ジエチル（10 mg，１当量）を含んでいた。収率１００％；類似体７Ｇ： N-[(1-ジエチルホスホノ)メチル]-2-シンナモイルオクタミド：この反応混合物は n- ヘプタアルデヒド（125 μL，２当量）、ケイ皮酸（70 mg，１当量）およびシアノメチルホスホン酸ジエチル（10 mg，１当量）を含んでいた。収率７０％；類似体７Ｈ： N-[(1-ジエチルホスホノ)メチル]-2-ジクロロアセトイルオクタミド：この反応混合物は n- ヘプタアルデヒド(125 μL，２当量)、ジクロロ酢酸（70 mg，１当量）およびシアノメチルホスホン酸ジエチル（10 mg，１当量）を含んでいた。収率９５％；実施例３：カルジノフィリン／アジノマイシンの構造類似体への MCCA合成法の適用カルジノフィリン（ＣＺ）およびアジノマイシンＢはＤＮＡビス−アルキル化剤として機能する抗腫瘍／抗生物化合物である。ＣＺおよびアジノマイシンＢの作用機序を図５に示す。図５からも明らかなように、カルジノフィリンとアジノマイシンＢは構造的に非常に類似している。これらの分子の構造上の複雑さを考慮すると、化学合成は長くなり、しかも収率が低い。アジノマイシンＢは発酵によっても製造されているが、それでもかなりの低収量（2 mg/250 L）である。こうした分子を合成することに伴う困難性を考慮して、かかる分子の誘導体はほとんど製造されたことがない。従って、これらの分子の作用機序を調べるために、かかる分子の一連の構造類似体を製造する効率のよい方法を開発することが非常に望まれている。図６に示すごとく、ＣＺとアジノマイシンＢはどちらもα−アシルオキシアミンのコア構造をもっている。α−アシルオキシアミンコア構造の置換基をR₁、R₂ およびR₃とラベルすることにより、カルジノフィリン、アジノマイシンＢおよびそれらの構造類似体を合成するためのパッセリニ反応図が同定される。ひとたびカルジノフィリンとアジノマイシンＢのパッセリニ反応図が同定されたら、カルジノフィリンとアジノマイシンＢの類似体のパッセリニ多成分組合せアレイ合成が、反応成分のR₁、R₂およびR₃置換基を変えることにより設計される。カルジノフィリンおよびアジノマイシンＢ構造類似体の１つの可能な三次元パッセリニ型MCCAアレイ合成を図６に示す。３組のジアステレオマーイソシアネートと２種類の異なるアルデヒドを用いるカルジノフィリンおよびアジノマイシンＢ構造類似体の二次元MCCAアレイ合成を行った。組合せアレイ合成および得られた収率を表２に示す。表２に示した組合せアレイ合成において使用されたイソシアネートは下記の一般反応図にしたがって製造した。メチル−イソシアノアセテートとベンズアルデヒドをHoppe，D.ら，U．Liebig s Ann．Chem.（1972）766:116-129に記載される方法により反応させてデヒドロアミノ酸前駆体 105を生成した。次に、幾何異性体の混合物をCH₃CN 中でN-ブロモスクシンアミド(NBS)で臭素化してα−ブロモイミン誘導体 70 を得、これをE t₃N中で互変異性化させて対応するβ−ブロモ−デヒドロアミノ酸71Z および71E を収率81%（Z/E=1.4:1）で得た。改良した臭素化条件（Combs，Aら，Tetrahedr on Lett.（1992）33:6419を参照）はMatsumoto によって報告された条件と比べてE-異性体の収率を実質的に増加させた。Nunami，K.ら，Tetrahedron（1988）4 4:5467（収率 60%，Z/E=13:1）。得られたビニルブロミドジアステレオマー71E/Zはシリカゲルクロマトグラフィーで分離し、分析純度へと再結晶化させた。それらの立体化学はE-およびZ-エステルのメチルプロトン共鳴の¹HNMR化学シフトを比較して文献にしたがって特定した。イソシアニド 106E および 106Z は、β−ブロモ−デヒドロアミノ酸71E および71Z から、オレフィンの立体配置を保持したままで、CH₂Cl₂中０℃にてN-ホルミル基をPOCl₃およびEt₃Nで30分間脱水することにより製造した。対応するビニルアジリジン化合物 107E および 107Z は、イソシアネート 106 E および 106Z から、テトラヒドロフランおよびトリエチルアミン中のイソシアネートにエチレンイミンを３〜５時間加えることにより製造した。表２に示した組合せ合成において製造されたイソシアネートおよび構造類似体の反応条件および物理的データを以下に示す。カルジノフィリンおよびアジノマイシンの構造類似体の上記組合せ合成は、構造類似体の広範なアレイの合成を可能にする本発明の力を見せるものである。例えば、カルジノフィリンおよびアジノマイシンの構造類似体のこの合成において、イソシアネートのアジリジン環、フェニル環およびオレフィン部分、アルデヒドのエポキシド基、さらに酸の芳香環上の置換基をさらに変えることが可能である。かくして、本実施例から明らかなように、カルジノフィリンおよびアジノマイシンの構造類似体の極めて広範なアレイを本発明にしたがって製造することができる。さらに気づく点は、上記したカルジノフィリンおよびアジノマイシンの構造類似体の組合せアレイ合成を固相合成として容易に行えることである。例えば、ヒドロキシ、チオまたはアミノ官能基を含むカルボン酸を用いることにより、カルボン酸を固相に簡単に結合させることができよう。その後、本実施例において記載した条件下でアルデヒドとイソシアネートを加えることにより、上記の合成を固相合成として実施することができる。実験データデヒドロアミノ酸 105(5.9 g，28.78 mmol)のCH₃CN（20 mL）溶液に室温でNBS （5.4 g，30.22 mmol）を加えた。この反応混合物を25℃で１時間攪拌し、次いで45℃で30分間加熱してα−ブロモイミン中間体70を得た。70の溶液を室温に冷却し、５分かけてEt₃N(4.0 mL，31.7 mmol)を滴下した。この混合物を１時間攪拌し、その後溶媒を減圧下で除去した。粗製の油をEtOAc に取り上げ、不溶性のスクシンイミドを濾過により除いた。溶媒を回転蒸発させて透明な油を得、これをフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーでさらに精製して２つの画分、純粋な 71Z(2.0 g)およびブロミド類 71Zと71E(4.6 g，Z/E=1:1.2)を全収率 81%で得た。Z-およびE-異性体はフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーでさらに分離し、EtOAc/Hex から再結晶して分析純度とした。E-およびZ-異性体のデータは文献のデータと一致した。71E m.p.110-112 ℃，文献 m.p．109-110 ℃; 71Z m.p．138-140℃,文献m.p．136-13 8℃ デヒドロアミノ酸 105(35 mg，0.171 mmol)のCD₃CN(0.5 mL)溶液に室温でNBS （34 mg，0.188 mmol）を加えた。３時間後、¹Hおよび¹³C NMR により定量的に α−ブロモイミン 70 を得た。ブロミド 71E(600 mg，2.12 mmol)およびEt₃N(1.4 mL，10.6 mmol)のCH₂Cl₂(4 0 ml)溶液に０℃で15分かけてPOCl₃（217μL,2.3 mmol）を滴下した。この溶液を０℃で30分攪拌し、その後20mLのNa₂CO₃水溶液(450 mg，4.24 mmol)を用いて反応を停止させた。この混合物を15分攪拌し、水層をEt₂Oで３回抽出した。有機層を合わせ、MgSO₄で乾燥し、回転蒸発させて褐色の油を得た。粗製の油をEt₂O で３回こすり、エーテル画分をMgSO₄プラグを通して濾過した。エーテルを減圧下で除き、106E（590 mg，105%）を褐色の油として得た。抽出した物質はクロマトグラフィーにかけることなく次の合成工程で使用するのに十分な純度（>90%）であった。（粗製物はフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーでさらに精製することができたが、物質の著しい損失を伴った。）イソシアニドブロミド 106Z（215 mg，0.81 mmol）およびEt₃N(110 μL，0.90 mmol)のTHF（10 mL）溶液に室温でエチレンイミン（125 μL，2.43 mmol）を加えた。この混合物を３時間攪拌した後、溶媒と過剰のアミンを減圧下に除いて褐色の油を得た。水性溶液に対して抽出する試みはビニルアジリジンを加水分解した。それゆえ、粗製の油をEt₂Oでこすり、MgSO₄プラグを通して濾過することにより完全に不溶性のEtNH⁺ Br^-を除いた。エーテルを回転蒸発させて褐色の油 10 7Z(185 mg，100%)を得、これは分析データにとって十分な純度（>90%）であった。イソシアニドブロミド 106E(225 mg，0.962 mmol)およびEt₃N(150 μL，1.16 mmol)のTHF(5 mL)溶液に室温でエチレンイミン（145 μL，2.89 mmol）を加えた。この混合物を２時間攪拌した後、溶媒と過剰のアミンを減圧下に除いて褐色の油を得た（水性溶液に対して抽出する試みはビニルアジリジンを加水分解した）。それゆえ、粗製の油をEt₂Oでこすり、MgSO₄プラグを通して濾過することにより完全に不溶性のEt₃NH⁺ Br^-を除いた。エーテルを回転蒸発させて褐色の油 107 E(255 mg，103%)を得、これは分析データにとって十分な純度（>90%）であった。イソシアニドブロミド 106Z（0.88 mmol）およびEt₃N（125 μL，0.97 mmol）のTHF（10 mL）溶液に室温でラセミ体2-メチルアジリジン（210 μL，2.91 mmol ）を加えた。この混合物を２時間攪拌した後、溶媒と過剰のアミンを減圧下に除いて褐色の油を得た。粗製の油を水に対してEt₂Oで３回抽出した。エーテル画分をMgSO₄で乾燥し、回転蒸発させて褐色の油 108Z（198 mg，93%）を得たが、これは分析データをとるのに十分な純度（>90%）であった。イソシアニドブロミド 106E(263 mg，0.992 mmol)およびEt₃N(150 μL，1.19 mmol)のTHF(5 mL)溶液に室温でラセミ体 2-(メチル)-アジリジン(250 μL，3.0 mmol)を加えた。この混合物を２時間攪拌した後、溶媒と過剰のアミンを減圧下に除いて褐色の油を得た。粗製の油を水に対してEt₂Oで３回抽出してEt₃NH⁺ Br^- を効果的に除去した。エーテル画分を合わせ、MgSO₄で乾燥し、回転蒸発させて褐色の油 108E(269 mg，112%)を得たが、これは分析データをとるのに十分な純度（>90%）であった。イソシアニド 107Z（0.81 mmol）のCH₂Cl₂（5 mL）溶液に室温で順次ピリジン（72μL，0.89 mmol）、(S)-2-(メチル)-グリシダール（210 μL，2.43 mmol）および1-ナフトエ酸(140 mg，0.81 mmol)を加えた。この混合物をN₂下で20時間攪拌した後、溶媒を減圧下で除去した。粗製の油をすぐにフラッシュシリカゲル（5% Et₃N で不活性化）クロマトグラフィー（100% hexからhex/EtOAc 1:1 までの勾配で溶出）で精製して４つの画分、すなわち109Z（138 mg，de=2.9:1）、10 9Z(28.5 mg，de=2:1)、109Z/109E(13.0 mg，Z/E=2:1，de=1.4:1，de=1:2)および 109E(30 mg，de=2.3:1)を全収率 53%(109Z/109E=5.1:1)で得た。イソシアニド 107E（135 mg，0.59 mmol）のCH₂Cl₂（3.0 mL）溶液に室温で順次ピリジン（55μL，0.68 mmol）、(S)-2-(メチル)-グリシダール（155 μL，1. 78 mmol）および1-ナフトエ酸(101 mg，0.59 mmol)を加えた。この混合物をN₂下で27時間攪拌した後、溶媒を減圧下で除去した。粗製の油をすぐにフラッシュシリカゲル（5% Et₃N で不活性化）クロマトグラフィー（100%hexからhex/EtOAc 1 :1 までの勾配で溶出）で精製して２つの画分、すなわち109E(84 mg，de=3.4:1) および109Z(30.5 mg，de=1.5:1)を全収率42%(109E/109Z=2.8:1)で得た。イソシアニド 108Z（100 mg，0.41 mmol）のCH₂Cl₂（5 mL）溶液に室温で順次ピリジン（36μL，0.45 mmol）、(S)-2-(メチル)-グリシダール（107 μL，1.24 mmol）および1-ナフトエ酸(72 mg，0.42 mmol)を加えた。この混合物をN₂下で2 4時間攪拌した後、溶媒を減圧下で除去した。粗製の油をすぐにフラッシュシリカゲル（5% Et₃N で不活性化）クロマトグラフィー（100%hexからhex/EtOAc 1:1 までの勾配で溶出）で精製して４つの画分、すなわち110Z(69 mg，de=3.4:3.4: 1:1)、110Z(11 mg，de=1.5:1.5:1:1)、110Zと110E(14 mg，110Z，de=1.5:1.5:1: 1および 110E，de=1:1)および110E(22 mg，de=1.5:1.5:1:1)を全収率 56%(110Z/110E=3.2:1)で得た。イソシアニド108E(110 mg，0.45 mmol)のCH₂Cl₂（3 mL）溶液に室温で順次ピリジン（40μL，0.50 mmol）、(S)-2-(メチル)-グリシダール（120 μL，1.37 m mol）および1-ナフトエ酸(80 mg，0.45 mmol)を加えた。この混合物をN₂下で24 時間攪拌した後、溶媒を減圧下で除去した。粗製の油をすぐにフラッシュシリカゲル（5% Et₃N で不活性化）クロマトグラフィー（100%hexからhex/EtOAc 1:1 までの勾配で溶出）で精製して４つの画分、すなわち110Z(20.5 mg，de=3:3:1:1 )、110Zと110E(23.8 mg，110Z，de=2:2:1:1 および 110E，de=1.5:1.5:1:1)、11 0E(9.5 mg，de=1:1)および 110E（29 mg，de=2:2:1:1）を全収率37%(110E/110Z= 1.5:1)で得た。イソシアニド 106（80.0 mg，0.302 mmol，Z/E=1.4:1）のCH₂Cl₂（2 mL）溶液に室温で順次(S)-2-（メチル）-グリシダール(39μL，0.45 mmol)および1-ナフトエ酸（57.0 mg，0.33mmol）を加え、N₂下で24時間攪拌した。追加の(S)-2-(メチル)-グリシダール（20μL，0.23 mmol）を加え、この混合物を24時間攪拌した後、溶媒を減圧下で除去した。粗製の油をフラッシュシリカゲル（5% Et₃N で不活性化）クロマトグラフィー（100% hexからhex/EtOAc 1:1 までの勾配で溶出）で精製した。４つの立体異性体 111（61.0mg，Z/E 1.4:1，de=3:3:1:1）の分離不能な混合物を含む１つの画分を全収率39％で得た。イソシアニド 108（1:1.4 Z/E，99.0mg，0.371 mmol）のCH₂Cl₂（3.0 mL）溶液に室温で順次ピリジン(35μL，0.445 mmol)、ブチルアルデヒド（330 μL，3. 71 mmol）および1-ナフトエ酸(64 mg，0.371 mmol)を加えた。この混合物をN₂下で22時間攪拌した後、溶媒を減圧下で除去した。粗製の油をすぐにフラッシュシリカゲル（5% Et₃N で不活性化）クロマトグラフィー（100% hexからhex/EtOAc 1:1 までの勾配で溶出）で精製して２つの画分、すなわち112Z（61 mg，de=1:1，34%）および112E（61 mg，de=1:1，34%）を全収率 68%で得た。イソシアニド 106（98.0 mg，0.405 mmol，Z/E=1.4:1）のCH₂Cl₂（3 mL）溶液に室温で順次ブチルアルデヒド（3.65μL，4.04 mmol）および1-ナフトエ酸（80 .0 mg，0.45 mmol）を加え、N₂下で23時間攪拌した後、溶媒を減圧下で除去した。粗製の油をフラッシュシリカゲル（5% Et₃N で不活性化）クロマトグラフィー（100% hexからhex/EtOAc 1:1 までの勾配で溶出）で精製した。付加物 113（14 0 mg，69%，Z/E=1.4:1）の分離不能な混合物を含む１つの画分を白色粉末として単離した。イソシアニド 107（90.0 mg，0.367 mmol，Z/E=1:1.4）のCH₂Cl₂（3.0 mL）溶液に室温で順次ピリジン(35μL，0.441 mmol)、ブチルアルデヒド（330 μL，3. 67 mmol）および1-ナフトエ酸(63 mg，0.367 mmol)を加えた。この混合物をN₂下で12時間攪拌した後、溶媒を減圧下で除去した。粗製の油をすぐにフラッシュシリカゲル（5% Et₃N で不活性化）クロマトグラフィー（100% hexからhex/EtOAc 1:1 までの勾配で溶出）で精製して２つの画分、すなわち114Z（54.5 mg，31%）および114E（44.5 mg，26%）を全収率 57%(Z/E=1.2:1 )で得た。ビニルアジリジンイソシアニドへの1-ナフトエ酸の求核付加は、これらのパッセリニ反応に1-ナフトエ酸を過剰に加えたり、ピリジンを加えなかった際に観察される一般的な副反応である。実施例４：実施例３のカルジノフィリン及びアジノマイシン類似体のin vitro 細胞障害作用の構造的活性プロフィール実施例３のカルジノフィリン及びアジノマイシン類似体の in vitro 細胞障害作用の構造的活性相関（ＳＡＲ）を以下の表３に示す。各類似体をヒト癌腫細胞系ＨＣＴ１１６及び２種の薬剤耐性下位細胞系ＨＣＴ１１６／ＶＭ４６及びＨＣＴ１１６／ＶＰ３５と共に７２時間インキュベートした。ＨＣＴ１１６／ＶＭ４６はＶＭ−２６に対する耐性について選択されたもので多剤耐性(multidrug resistant:ＭＤＲ)表現型を表現する。ＨＣＴ１１６／ＶＰ３５はＶＰ−１６に対する耐性について選択されたものでトポイソメラーゼII 型活性薬剤に耐性である。それら全てがビニル−アジリジン、エポキシド及びナフトエート部分を含有する類似体１０９Ｅ、１０９Ｚ、１１０Ｅ及び１１０Ｚの結果は、その天然物、つまりアジノマイシンＢのＩＣ₅₀と同じ桁の範囲内に十分納まるＩＣ₅₀を示した。興味深いことには、ラセミ体２−（メチル）−アジリジン類似体１１０Ｅ及び１１０Ｚは、これらin vitro アッセイにおいて、相応して未置換のアジリジン類似体１０９Ｅ及び１０９Ｚと殆ど同じく挙動した。ビニル−アジリジン部分を欠く類似体は、検討した全ての場合において測定可能な細胞障害作用を示さなかった（ＩＣ₅₀＜３０μＭ）。類似体１１４Ｅ、１１４Ｚ、１１５Ｅ及び１１５Ｚにおいてエポキシド断片をｎ−ブチル基に置換すると、そのエポキシド部分を含有する最も活性のある化合物に比較して大きく低下した活性を示した。加えて、これら化合物を多剤耐性（ＭＤＲ）及びトポイソメラーゼII型耐性細胞系で試験しても、強度の低下を示さなかった。これは、これら化合物がＰ−糖タンパク質エフラックスポンプ(efflux pump)のための基質でもなく、それらがトポイソメラーゼII型と相互作用するものでもないことを示唆している。実施例５：Ugi 反応を用いるペプチド擬似ポリマーＭＣＣＡ配列の合成非加水分解性エチレンジアミンコア構造を有するペプチド擬似ポリマーの組み合わせ配列は、Ugi 反応を用いて調製することができる。図７に示すように、Ug i 反応は、第１アミノ酸、Ｂｏｃで保護されたα−アミノ基を有する第２アミノ酸、イソシアン化メチル及び酢酸を含む４成分縮合反応である。このUgi 反応は水性溶媒中で室温で行われる。図７に示すように、保護基を除去すると、Ugi 反応で天然ペプチド様の構造を有する非加水分解性ペプチド類似体が得られる。実施例６：Ugi 反応を用いるホスホチロシンペプチド構造類似体ＭＣＣＡ配列の合成 Ugi ＭＣＣＡ配列合成の１つの用途は、構造に基づく拮抗阻害物質として用いるためのホスホチロシンペプチド構造類似体の調製である。図８に示すように、ホスホチロシンペプチドはペプチド主鎖コア構造を有する。ホスホチロシンの構造的変種は、用いる第１及び第２アミノ酸（ａａ₁及びａａ₂）並びにUgi 反応のその他の成分を変えることにより合成することができる。ホスホチロシンペプチド類似体の幾つかの異なる組み合わせ配列は、Ugi 反応を用いて作ることができる。例えば、図９ａに示すように、偽基質ペプチド阻害物質を調製することができる。このチロシンペプチド類似体のアミノ酸側鎖は、そのイソシアン化物及びその酸のために用いられるＲ₁及びＲ₂基によって決まる。チロシンを基礎とする分枝鎖のペプチド類似体は、標準的な固相合成法を用いては得ることができないが、アミン上のＲ₃がアミノ酸又はその誘導体であるときは調製することができる。図９ｂに示すように、用いられるイソシアン化物、酸及びアミンのＲ基がアルキル、アリール又はアシル基である完全なチロシン構造単位を有するチロシンの低分子量類似体を調製することができる。図９ｃに示すように、チロシン構造単位も修飾されているチロシンの低分子量誘導体は、異なるアルデヒドを用いることにより調製することができる。図９ｄに示すように、酸及びアミンが一つの分子である低分子量チロシン誘導体を調製することができる。これらチロシンを基礎とするペプチド類似体の更なる変種も、異なる反応成分を用いることによって、本発明に従って作ることができる。実施例７：ＭＣＣＡ配列の固相合成に用いるための固相支持体及びリンカー系の合成新規な支持体及びリンカー系の合成の提案を図１０に示す。このリンカーはエチレンオキシドを無水コハク酸のリチウム・エノレートと縮合させることにより合成することができる。次いで、得られたアルコール体をそのメシレートに転化し、そしてアジ化ナトリウムで置換してアジド官能基を与える。次いで、この無水物をポリマーの存在下、ジメチルホルムアミド中で加熱してフリーのカルボン酸リンカーを得る。実施例８：固相合成法を用いるパッセリニ型ＭＣＣＡ配列の合成パッセリニ反応を用いる固相ＭＣＣＡ配列合成は、実施例７に記載したリンカーを用いて行うことができる。実施例７で生成したカルボン酸リンカー−樹脂系をアラニンのメチルエステルの存在下でジシクロヘキシルカルボジイミド及びヒドロキシベンゾトリアゾールとで処理することができる。反応の進行は、核磁気共鳴により、フリーのアラニンの消失に基づいて追跡することができる。反応体を濾過した後に新たなＤＭＦで洗浄すれば、精製された樹脂−リンカー−アミノ酸系が得られる筈である。次いで、塩基性条件下でアラニンのエステルを加水分解すると、フリーのカルボン酸が得られる筈である。再度、この樹脂を水で洗浄すると、不純物または反応体の混入のない樹脂−リンカー−アラニンカルボン酸が得られる。酢酸エチル溶液中で攪拌されているこの樹脂反応チャンバーにシンナムアルデヒド及び２，２−ジエチルホスホノメチルイソシアニドを添加すると、３成分 Passerini縮合反応が起こる筈である。これら反応体は、反応後に洗浄により除去することができる。樹脂のＤＭＦ溶液にトリフェニルホスフィンを添加した後に溶媒で洗浄すると、リンカー上にアミン側鎖ができる筈である。次いで、この物質を加熱すると分子内反応が起こってリンカーがラクタムを形成し、溶液中にアミンを遊離する筈である。実施例９：固相合成法を用いるペプチド擬似物質の合成ペプチド擬似物質を合成する手段としてUgi 反応を用いることは、実施例５及び６に記載しているが、更に図１１に示す。実施例８に記載した固相支持体に第１アミノ酸（ａａ₁）をカップリングすることにより、これらペプチド擬似物質の固体状態合成を行うことができる。連結したアミノ酸と、イソシアン化物、アルデヒド及びアミンとの反応では、固相連結ペプチド擬似類似体が生成する筈である。図８に示した Ugi 反応条件下でｔＢｏｃ保護基を除去すると、２つのアミノ酸成分を含有する生成物が得られる筈である。この工程を数サイクル繰り返して９ⁿの生成物が得られる。ここで、ｎはサイクル数である。かくして、このUgi 反応の適用で、非常に少数の異なる成分しか用いないにも拘らず、極めて多数の類似体が得られる。実施例１０：未反応成分を封鎖することによる Ugi 型ＭＣＣＡ配列合成物からの生成物の単離 Ugi 型反応の反応生成物は、未反応成分を封鎖することにより反応媒質から効率的に回収することができ、それによって実質的に純粋な生成物を得ることができる。 Ugi 型反応では、未反応成分はアルデヒド、アミン、酸及びイソシアン化物からなる。強酸性及び強塩基性樹脂を含有する混合床樹脂を用いて、それぞれアミン及び酸を除去することができる。Ugi 反応の生成物を単離するには、まず溶媒を減圧留去により除去する。次いで、その反応混合物に蒸留水を添加する。得られた水溶液に強塩基性アニオン交換樹脂及び強酸性カチオン交換樹脂である Bio rad AG 501-XB／Bio-Rex MSZ 501 を含有する混合床樹脂を添加する。この混合床樹脂を添加したら、その溶液を１０分間攪拌する。次いで、この混合液を濾過して濃縮すると、実質的に純粋な Ugi 型反応生成物が得られる。未反応の酸又はアミンを封鎖するために交換樹脂を用いることは、反応後に酸又はアミンのいずれかに選択的に転化され、それによってこの樹脂によるその除去が可能になる、エステルの如き異なる官能基を有する他の未反応成分に拡張することができる。有機金属溶液の化学種がこのＭＣＣＡ反応に用いられる場合は金属封鎖剤も用いることができる。例えば、ポリマーに繋がれたＥＤＴＡ分子を添加して、反応混合液からパラジウム塩を封鎖することができる。強酸性カチオン交換樹脂を用いてホウ酸を除去することができる。実施例１１：光開裂性カルバメートリンカーからのパッセリニ反応生成物の合成及び開裂光開裂性カルバメートリンカーの合成を以下に示す。光開裂性カルバメートリンカー１２０及び１２１を、イソシアネート１２３及び１２４を Williams，P．ら，Tetrahedron（1991）47:9867-9880に記載されたリンカーアルコールからのヒドロキシル基と反応させることにより構築した。次いで、カルバメートリンカー１２０及び１２１をＤＭＦ中でＨＯＢｔを用いてメチルベンズヒドリルアミン（ＭＢＨＡ）Ｇｌｙ−樹脂１２５にカップリングさせて、ポリマーに支持された光開裂性カルバメート１２６及び１２７をそれぞれ得た。カルバメート１２６のエステルのＬｉＯＨ，ＴＨＦ／Ｈ₂Ｏでの加水分解で、対応するポリマーに支持された酸１２８が１時間未満で生成した。驚いたことに、カルバメート１２７の安息香酸エステルは、種々の反応条件（ＬｉＯＨ，ＴＨＦ／Ｈ₂Ｏ；Ｋ₂ＣＯ₃，ＭｅＯＨ；ＮａＯＨ，ＴＨＦ／Ｈ₂Ｏ；及びＮａＯＨ，ＭｅＯＨ）下での加水分解に対して抵抗性であった。このポリマーに支持された酸１２８を用いて、固相パッセリニ反応を行った。イソシアノ酢酸メチル及びブチルアルデヒドを含有するＣH₂Ｃｌ₂溶液をポリマーに支持された酸１２８に添加して、樹脂結合パッセリニ付加物１２９を得た。最初、カルバメート開裂をメタノール中で試みたが、α−アシルオキシ加水分解パッセリニ生成物１３１が生成しただけであった。加水分解を避けてかつフリーのアミン生成物を捕捉するために、ＣH₃ＣＮ中、無水酢酸（１０当量）の存在下、Rayonet 中で３５０ｎｍで２４時間光分解を行った。次いで、過剰の溶媒アシル化剤を減圧下で除去して１３４を唯一の生成物として得た。¹ＨＮＭＲ及びＴＬＣによっては、この粗生成物から他の生成物は検出できなかった。実験データイソシアナト酢酸エチル（１５５μＬ，１．３７ミリモル）をリンカー１２２（４５０ｍｇ，１．１４ミリモル）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液に添加した。次いで、トリエチルアミンを添加してその混合液を２５ ℃で一晩攪拌した。ＴＬＣでこの反応が遅いことが分かったので、反応液を５０ ℃に加熱した。ＴＬＣでこの反応が２日間で完結したことが分かった。そのフラスコを−２０℃に冷却すると、析出物が生成したので続いて濾取した。ＣD₃ＣＮ中での¹ＨＮＭＲで、この化合物がイソシアネート分解物、つまりグリシンエチルエステルであることが分かった。次いで、濾液の溶媒を減圧留去し、その粗製オイルをＣH₂Ｃｌ₂でＫH₂ＰＯ₄緩衝液に対して３回抽出した。合わせた有機層をＮa₂ＳＯ₄で乾燥して減圧下で溶媒を留去し、黄色固体を得た。フラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して（１００％ヘキサンから１：１ヘキサン／ＥｔＯＡｃまでの勾配で溶出した）、カルバメート１２３（３７３ｍｇ，６４％）を白色固体（ｍｐ１３１〜１３３℃）として得た。Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−樹脂をＣH₂Ｃｌ₂中３３％ＴＦＡで３０分間脱保護してから、ＣH₂Ｃｌ₂で徹底的に洗浄した。次いで、この樹脂をＣH₂Ｃｌ₂中で５％ Hunig 塩基でフリー塩基にして２分後にその溶液を濾過した。次いで、樹脂が無色になるまでＣH₂Ｃｌ₂／ＭｅＯＨ／ＣH₂Ｃｌ₂を続けて適用して樹脂を徹底的に洗浄した。その樹脂を一晩減圧乾燥した。この全操作を塩化メチレン（２０ｍＬ）中５０％ＴＦＡで再度繰り返して、Ｇｌｙ−ＭＢＨＡ−樹脂１２５（１．３９ｇ）を無色ビーズとして得た。定性的ニンヒドリン試験（カイザー試験）は陽性（暗青色）であった。２ｍＬＤＭＦ中のＧｌｙ−カルバメート１２３（１．２ｇ，２．３７ミリモル）をＭＢＨＡ−樹脂１２５（１．３４ｇ，１．１２当量／ｇ，Novabiochem から得たもの）の５ｍＬＤＭＦ懸濁液に添加した。次いで、ＨＯＢｔ（４７０ｍｇ，３．４ミリモル）を添加してその混合液を２５℃で３６時間攪拌した。ＣH₂ Ｃｌ₂／ＭｅＯＨ／ＣH₂Ｃｌ₂を続けて適用して樹脂を徹底的に洗浄した。この工程を２回繰り返した後、樹脂１２６（１．８３ｇ）を淡黄色ビーズとして得た。定性的ニンヒドリン試験（カイザー試験）は陰性であった。この乾燥樹脂１２６（１．７ｇ，＝１．７ミリモル）上の残留フリーアミンのキャッピングを、Ａc₂Ｏ（１．７ｍＬ，１６．９ミリモル）及び触媒量のＤＭＡＰ（２５ｍｇ，０．２ミリモル）のピリジン（１０ｍＬ）溶液中に樹脂を懸濁させることによって行った。この溶液を２５℃で１時間攪拌してから、濾過してＣ H₂Ｃｌ₂／ＭｅＯＨ／ＣH₂Ｃｌ₂を続けて適用して樹脂を徹底的に洗浄した。この樹脂を一晩減圧乾燥して、樹脂１２６（１．７ｇ）を淡黄色ビーズとして得た。定性的ニンヒドリン試験（カイザー試験）は陰性であった。（エチル）−グリシネート−ＭＢＨＡ−Ｇｌｙ−樹脂１２６（１．６ｇ，＝１．５ミリモル）を４５ｍＬＴＨＦ中で１ＮＬｉＯＨ（１５ｍＬ，１５．０ミリモル）と共に１時間攪拌した。次いで、この混合液を１ＮＫH₂ＰＯ₄(＝１７ｍＬ)でｐＨ＝２〜３まで酸性にしてその樹脂を濾過した。Ｈ₂Ｏ／ＴＨＦ／ＣH₂ Ｃｌ₂で続けて徹底的に洗浄した後に一晩減圧乾燥して、（グリシニン酸(glycin ic acid)）−Ｇｌｙ−ＭＢＨＡ樹脂１２８（１．４６ｇ）を淡黄色ビーズとして得た。この樹脂のＣH₃Ｎ及びＡc₂Ｏ（＝１０当量）中での光分解で、非加水分解Ｎ−アセチル−（エチル）−グリシネート生成物はＴＬＣによっては見られていなかった（Ｒ_f＝０．３，１００％ＥｔＯＡｃ，黄色アニスアルデヒド染色）。イソシアノ酢酸メチル（２３μＬ，０．２３ミリモル）及びブチルアルデヒド（２３μＬ，０．２３ミリモル）を（グリシニン酸）−Ｇｌｙ−ＭＢＨＡ樹脂１２８（２５ｍｇ，＝０．０２５ミリモル）のＣH₂Ｃｌ₂（２００μＬ）懸濁液に添加した。この混合液を２５℃で４８時間放置した。次いで、その樹脂を濾別して、ＣH₂Ｃｌ₂／ＭｅＯＨ／ＣH₂Ｃｌ₂を続けて適用して徹底的に洗浄し、一晩減圧乾燥して、（Ｍｉｃａ−Ｂｕｔ−Ｇｌｙ）−Ｇｌｙ−ＭＢＨＡ樹脂１２９（＝２７ｍｇ）を黄色ビーズとして得た。ｏ−ニトロベンジルカルバメートの光分解性開裂及びパッセリニ付加物の in situ アシル化の一般的操作：無水酢酸（１０当量）を（Ｍｉｃａ−Ｂｕｔ−Ｇｌｙ）−Ｇｌｙ−ＭＢＨＡ樹脂１２８（２５ｍｇ，＝０．０２５ミリモル）のＣH₃ＣＮ懸濁液に添加して、Ra yonet 中で３５０ｎｍで３０℃で１２〜４８時間照射した。この溶液を丸底フラスコにピペットにより、樹脂を多数回洗浄（ＣH₃ＣＮ）しながら移した。次いで、溶媒、過剰の無水酢酸、及び酢酸を効率的に減圧留去して、Ｍｉｃａ−Ｂｕｔ−（Ｎ−アセチル −Ｇｌｙ）付加物１２９（＝２〜４ｍｇ，粗製物の¹ＨＮＭＲによる）を無色オイルとして得た。¹ＨＮＭＲ及びＴＬＣで、これが存在する唯一の化合物であることが明らかになった。実施例１２：実施例１１の光開裂性カルバメートリンカーを用いる固相パッセリニＭＣＣＡ配列合成実施例１１の光開裂性カルバメートリンカーを用いる固相ＭＣＣＡ配列合成を行った。それを表４に示す。この合成では、８種のイソシアン化物、６種のアルデヒド、１種のカルボン酸及び１種のアシル化剤を用いた。種々の異なるカルボン酸及びアシル化剤を用い得ることが理解されるべきである。ポリマーに支持されたパッセリニＭＣＣＡのＴＬＣ及びＬＲＭＳデータ＋Ｔ＝ＴＬＣが所期スポットを示した；−Ｔ＝ＴＬＣが所期スポットを示さなかった；＋ＭＮ＝ＬＲマススペクトル（ＮＢＡマトリックス）が所期生成物を示した：−ＭＮ＝ＬＲマススペクトル（ＮＢＡマトリックス）が所期生成物を示さなかった；＋ＭＧ＝ＬＲマススペクトル（グリセロールマトリックス）が所期生成物を示した；−ＭＧ＝ＬＲマススペクトル（グリセロールマトリックス）が所期生成物を示さなかった；丸付きプラス＝¹ＨＮＭＲが所期生成物を示した；丸付きマイナス＝¹ＨＮＭＲが所期生成物を示さなかった全ての反応は、２つの４×６のマイクロタイタートレイを並べて必要な８×６の並びを形成するようにアレンジしたフィッシャー・シェル・バイアル内で行った。２５ｍｇの樹脂を各バイアルに加えてＣH₂Ｃｌ₂で膨潤させた。次いで、アルデヒド及びカルボン酸を気密性シリンジによりそれぞれ横列及び縦列に分注して室温で２〜４日間反応させた。個々の反応液を濾過して徹底的に洗浄した後、ＣH₃ＣＮ（１０当量のＡc₂Ｏ）中で３５０ｎｍで２４時間光分解して、４８の反応ウェルを得てこれらを生成物の組成について分析した。この整列合成の結果を表４に示す。各反応ウェルの低分解能マススペクトルをその薄層クロマトグラフィーと組み合わせて、５０％の所期生成物が生成して単離されたことが分かった。陽性のＴＬＣ及びマススペクトルデータを示す反応ウェルの¹ＨＮＭＲで、その所期生成物がこれらウェル内で生成した唯一の固相生成物であることが明らかになった。かくして、この実施例は、本発明による固相合成法を用いれば、多くの化合物を並べて速やかにかつ効率的に高純度で調製できることを証明するものである。この特許出願の発明は、特定のＭＣＣＡ反応に関して開示されているが、本発明は、単一の反応容器内で中間生成物を単離することなく行うことができる他の全ての多成分合成に適用できると了解される。更に、本発明が、将来開発される全てのＭＣＣＡ反応に適用可能であると考えられる。固相合成法を包含する本発明の態様は、ここに開示したリンカー及び固相支持体のみならず現時点で既知であるか又は将来開発される他のリンカー及び固相支持体でも実施されることを意図していることも了解される。従って、本発明は、その精神又は必須の特徴から逸脱することなく、他の特定の形態で具体化することができる。本発明の精神及び添付の請求の範囲内で、当業者は本発明の修飾を容易に思い付くであろうと考えられるから、この開示は、限定的意味というよりもむしろ説明的意味において意図されたものであることを理解すべきである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ // Ａ６１Ｋ 31/215 ＡＤＵ 9451−4ＨＣ０７Ｃ 279/02 Ｃ０７Ｃ 279/02 7107−4ＪＣ０８Ｆ 8/30 ＭＨＡＣ０８Ｆ 8/30 ＭＨＡ 9159−4ＣＣ０７Ｄ 205/08 Ｚ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．共通のコア構造を有する化合物の組合せアレイであって、該アレイの化合物は少なくとも３つの成分を有する多成分組合せアレイ合成の生成物からなるものであり、多成分組合せアレイ合成の該成分が同一の第１の官能基を有する反応物の第１のグループからなる第１の成分；同一の第２の官能基を有する反応物の第２のグループからなる第２の成分；同一の第３の官能基を有する反応物の第３のグループからなる第３の成分；を含んでなり、上記のアレイ合成は第１、第２および第３の成分の官能基が互いと反応して共通のコア構造を有する化合物のアレイを形成するような適当な条件下で実施されるものである、化合物の組合せアレイ。２．反応物の第１のグループが２種以上の反応物を含み、そして反応物の第２のグループが２種以上の反応物を含む、請求項１に記載の化合物の組合せアレイ。３．第１の成分の反応物が化合物の別の組合せアレイの化合物からなるものである、請求項１に記載の化合物の組合せアレイ。４．少なくとも１つの成分の反応物が同一の官能基を有する化合物２種以上の混合物からなる、請求項１に記載の化合物の組合せアレイ。５．各化合物が固相支持体に結合されている間に形成される、請求項１に記載の化合物の組合せアレイ。６．反応物の第１のグループが２種以上の反応物を含み、そして反応物の第２のグループが２種以上の反応物を含む、請求項５に記載の化合物の組合せアレイ。７．ｎ成分組合せアレイ合成（ここで、ｎは反応成分の数に相当し、ｎは少なくとも３であり、各成分は同一の官能基を有する反応物のグループからなる）を用いて共通のコア構造を有する化合物の組合せアレイを作製する方法であって、次の工程：ａ）ｎ次元アレイ中の一連の反応容器を系統立てて用意すること、その際、各反応容器はｎ次元アレイにおけるその座標により識別可能であり、ｎ次元アレイの各軸は異なる成分に対応し、該軸上の各位置は異なる反応物に対応するものであること；ｂ）ｎ次元アレイの反応容器にｎ個の成分の反応物を添加して、同一の反応物がこの反応物に対応するアレイ上の位置を有する反応容器のすべてに添加されるようにすること；ｃ）各反応容器の内容物を適当な条件下で反応させて該アレイの化合物を形成させること；を含んでなる方法。８．成分の１つを固相支持体に結合させる工程をさらに含む、請求項７に記載の方法。９．少なくとも１つの成分の反応物が同一の官能基を有する化合物２種以上の混合物からなる、請求項７に記載の方法。 10．第１の成分の反応物が化合物の別の組合せアレイの化合物からなるものである、請求項７に記載の方法。 11．少なくとも２つの成分が２種以上の反応物のグループからなる、請求項７に記載の方法。 12．成分の１つを前記アレイの各反応容器内の固相支持体に結合させる工程をさらに含む、請求項11に記載の方法。 13．共通のコア構造を有する化合物の組合せアレイを作製する方法であって、次の工程：ａ）所望のコア構造を同定すること；ｂ）該コア構造を形成しうるMCCA反応を同定すること；ｃ）同定されたMCCA反応を用いて請求項７の方法にしたがって化合物のアレイを作製すること；を含んでなる方法。 14．共通のコア構造を有する化合物の組合せアレイを作製する方法であって、次の工程：ａ）所望のコア構造を同定すること；ｂ）該コア構造を形成しうるMCCA反応を同定すること；ｃ）同定されたMCCA反応を用いて請求項８の方法にしたがって化合物の組合せアレイを作製すること；を含んでなる方法。 15．共通のコア構造を有する化合物の組合せアレイを作製する方法であって、次の工程：ａ）所望のコア構造を同定すること；ｂ）該コア構造を形成しうるMCCA反応を同定すること；ｃ）同定されたMCCA反応を用いて請求項９の方法にしたがって化合物の組合せアレイを作製すること；を含んでなる方法。 16．生物学的材料に関するin vitro結合実験を実施する方法であって、次の工程：ａ）化合物のアレイに生物学的材料を添加すること、ここで、該アレイ中の各化合物は共通のコア構造を有しかつ固相支持体に結合されていること；およびｂ）生物学的材料への該アレイ中の各化合物の結合を測定すること；を含んでなる方法。 17．固相合成の間化合物を結合させておくための、化学構造： [ポリマー]- HNCOCH₂CH₂CH(CH₂CH₂N₃)CO₂H を有するポリマーに結合されたリンカー。