JPH09506501A - 不均質な細胞集団からの生物学的成分の分離のための連続遠心法 - Google Patents
不均質な細胞集団からの生物学的成分の分離のための連続遠心法Info
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Abstract
Description
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1. 不均質な細胞混合物から特定の細胞集団を分離するための方法であって、 粒子/細胞接合体を形成するために、不均質な細胞混合物を、該細胞混合物 のうちの特定の細胞集団に選択的に結合することのできる結合部位を含んだ粒子 手段と親密に接触させ、 該特定の細胞集団を該粒子手段に選択的に結合させて粒子/細胞接合体をつ くり出し、 遠心区域内における連続流遠心によって該粒子/細胞接合体を該細胞混合物 から分離し、そして該特定の細胞集団を別に収集すること を含む方法。 2. 該不均質な細胞混合物及び該粒子手段が、遠心区域内へ導入される前に、 バッチとして選択的結合をさせるに十分なインキュベーション時間の間混合区域 内において親密に接触させられるものである、請求項1の方法。 3. インキュベーション時間が約5分乃至2時間である、請求項2の方法。 4. 該不均質の細胞混合物及び該粒子手段が、親密な接触のために、遠心区域 内に位置した混合区域内へ連続的に導入されるものである、請求項1の方法。 5. 該特定の細胞集団が有核の不均質な細胞集団を含んでおり、該粒子手段の 有核細胞集団に対する比率が1:1000乃至約1000:1である、請求項4の方法。 6. 該特定の細胞集団が有核の不均質な細胞集団を含んでおり、該粒子手段の 有核細胞集団に対する比率が1:100乃至約100:1である、請求項4の方法。 7. 該特定の細胞集団を含有する該不均質な細胞混合物の部分が遠心区域内に 位置する収集区域において収集されるものである、請求項2の方法。 8. 該特定の細胞集団を含有する該不均質な細胞混合物の部分が遠心区域の外 側に位置する収集区域において収集されるものである、請求項2の方法。 9. 該粒子手段の直径が約0.1乃至500μmの範囲である、請求項1の方法。 10. 該特定の細胞集団が有核の不均質な細胞集団を含み、該粒子手段の有核細 胞集団に対する比率が1:1000乃至約1000:1である、請求項1の方法。 11. 該特定の細胞集団が有核の不均質な細胞集団を含み、該粒子手段の有核細 胞集団に対する比率が1:100乃至約100:1である、請求項1の方法。 12. 該不均質な細胞混合物が水性であり該粒子手段の密度が約0.25乃至約5.0 g/cm3の範囲である、請求項1の方法。 13. 該粒子手段の直径が約0.3乃至80μmの範囲にあり、該粒子手段の密度が 約0.5乃至2.5g/cm3の範囲にあるものである、請求項4の方法。 14. 患者から収集された不均質な細胞混合物からの有核の不均質な細胞集団の 連続流選択的分離のための方法であって、 細胞濃縮物を該濃縮物の物理的性質に基づいて分離することに よって、不均質の細胞混合物から有核の不均質の細胞集団を含有する細胞濃縮物 を得、 該細胞濃縮物を、該細胞濃縮物のうちの特定の細胞集団に選択的に結合する ことのできる結合部位を含んだ粒子手段と親密に接触させて、該細胞集団がそこ から分離されるべきものである該細胞濃縮物の部分とは異なった沈降速度を有す る粒子/細胞接合体を形成し、 該粒子/細胞接合体を、遠心区域内において連続流遠心によって該細胞濃縮 物から分離し、そして 分離された有核の不均質な細胞集団を収集すること を含む方法。 15. 該物理的性質が該粒子/細胞接合体の沈降速度であり、且つ該粒子が回収 され、該分離された細胞集団が該患者へ戻されるものである、請求項14の方法。 16. 該物理的性質が該粒子/細胞接合体の沈降速度であり、且つ該分離された 有核の不均質な細胞集団が保持される一方該不均質な細胞混合物の残りが該患者 へ戻されるものである、請求項14の方法。 17. 該細胞濃縮物が第1の遠心区域内において連続流遠心によって形成される ものである、請求項14の方法。 18. 該細胞混合物が全血、骨髄及び組織消化物よりなる群より選ばれるもので ある、請求項17の方法。 19. 該全血が患者から、連続流遠心血液分離器によってオンラインで第1の遠 心区域内に収集されるものであり、且つ該粒子/細胞接合体が第2の遠心区域内 において該細胞濃縮物から分離されるも のである、請求項18の方法。 20. 該細胞濃縮物及び該粒子手段が、該遠心区域へ導入される前に、選択的な 結合を許容するに十分なインキュベーション時間の間混合区域においてバッチと して親密に接触させられるものである、請求項14の方法。 21. 該インキュベーション時間が約5分乃至2時間である、請求項20の方法。 22. 該細胞濃縮物及び該粒子手段が、親密な接触のために該第2の遠心区域内 に位置する混合区域内へと連続的に導入されるものであり、且つ該粒子/細胞接 合体の形成に必要な時間が該連続流第2の遠心区域内における細胞濃縮物の滞在 時間以下である、請求項14の方法。 23. 該粒子手段が、該患者から該遠心の第2の区域内へ流入する該細胞濃縮物 の流れ中へと、親密な接触のために連続的且つ直接的に導入されるものであり、 且つ該粒子/細胞接合体の形成に必要な時間がそこにおける該細胞濃縮物の滞在 時間以下である、請求項19の方法。 24. 該特定の細胞集団が有核の不均質な細胞集団内に含まれており、且つ粒子 手段の有核細胞集団に対する比率が1:1000乃至約1000:1である、請求項14の 方法。 25. 該特定の細胞集団が有核の不均質な細胞集団内に含まれており、且つ粒子 手段の有核細胞集団に対する比率が1:100乃至約100:1である、請求項14の方 法。 26. 該有核の不均質な細胞集団を含有する該細胞濃縮物の部分が該第2の遠心 区域内に含まれた収集区域内に収集されるものである 、請求項15の方法。 27. 該特定の細胞集団を含有する該細胞濃縮物の部分が第2の遠心区域の外側 にある収集区域内に収集されるものであ、請求項23の方法。 28. 該粒子手段の直径が約0.1乃至500μmの範囲である、請求項18の方法。 29. 該細胞混合物が水性であり該粒子手段の密度が約0.5乃至約2.5g/cm3 である、請求項14の方法。 30. 該粒子手段が常磁性材料を含んでおり、そして該濃縮物の該収集された分 離された部分が、該分離された細胞濃縮物の残りの結合していない部分が当該位 置から除去される際に、該粒子/細胞接合体及びあらゆる未結合の粒子手段が一 定の位置に保持されるよう、磁石手段に極めて近接して通される段階を更に含む ものである、請求項14の方法。 31. 該患者に戻される該残りが、結合した及び未結合の粒子をそこから除去す るためにフィルターを通されるものである段階を更に含む、請求項16の方法。 32. 該粒子手段を保持するための第1の容器を該混合区域が含み、該第1の容 器が血球分離遠心のために第1の可撓性のマルチチャンバーの装填器具手段に無 菌的に接続されており、それによって、新たに収集された血球の濃縮された画分 が、該粒子手段との親密な接触のために該第1の装填器具手段から該第1の容器 へと、それらの間に無菌的な接続を形成する必要なしに無菌的に移しかえられる ものであり、且つ該第1の容器への出口が、連続流血球分離遠心器のための第2 の可撓性のマルチチャンバーの装填器具手段に無菌的 に接続されており、それによって、該粒子/細胞接合体、該細胞濃縮物の残り、 及びあらゆる未結合の粒子が、遠心区域内における細胞濃縮物の残りからの該粒 子/細胞接合体の連続流分離のために無菌的に該容器から該第2の装填器具手段 へ移しかえられるものである、請求項22の方法。 33. 該混合区域が、血球分離遠心器のために第1の可撓性の装填器具に無菌的 に接続された可撓性の圧潰可能な容器であり、それによって患者からの全血が無 菌的に受け取られ該粒子手段と親密に接触されそして第1の遠心区域内において 細胞濃縮物を形成するために分離されそして該濃縮物が該第1の装填器具から該 容器へ無菌的に移しかえられるものであって、更に、該容器が、血球分離遠心器 のための第2の可撓性の装填器具へ無菌的に接続されており、それによって該混 合区域内において形成された粒子/細胞接合体、該細胞濃縮物の残り、及びあら ゆる未結合の粒子が、第2の遠心区域内における分離のために、無菌的に該容器 から連続流で該第2の装填器具手段へ、それらの間に無菌的な接続を形成する必 要なしに移しかえられるものである、請求項32の方法。 34. 該粒子/細胞接合体が該収集手段内に保持される一方、該細胞濃縮物の残 りが無菌的に該第2の装填器具から受け取られ、如何なる未結合の粒子手段をも 除去するために該磁石に極めて近接して通され、そして連続流で該患者へ戻され るものである、請求項30の方法。 35. 該収集区域から除去された該細胞混合物の残りが可撓性の囲いを通過し、 該可撓性の囲いが該磁石手段に近接して配置されており、それによって該細胞濃 縮物に含有されている如何なる未結合の 粒子手段も該磁石手段によって該囲い内に保持される一方、該細胞濃縮物の残り は該囲いを通過して該患者へ戻されるものである、請求項34の方法。 36. 該粒子/細胞接合体が該収集手段に保持される一方、該細胞濃縮物の残り が該第2の装填器具から受け取られ、如何なる未結合の粒子手段をも除去するた めにフィルターを通され、そして連続流で該患者へ戻されるものである、請求項 30の方法。 37. 該結合部位が該粒子手段に取り付けられた、抗体、抗原、タンパク質、糖 タンパク質、多糖類、リポ多糖類、核酸及び脂質よりなる群より選ばれる生物学 的物質によって与えられるものである、請求項1又は14の方法。 38. 該粒子手段がそれらの表面上に、造血細胞、腫瘍細胞、組織培養細胞系、 抗原特異的リンパ球、細菌、原虫類、ウイルス粒子、病原体性感染細胞、組換え DNAでトランスフェクトされた細胞、よりなる群より選ばれる細胞、血漿タン パク質、薬剤、薬物、並びに植物性、動物性及び微生物性の毒素、に特異的な抗 体を担持しているものである、請求項1又は14の方法。 39. 該細胞濃縮物が、骨髄又は新生児臍帯血より分離される単核球の調製物を 含むものである、請求項14の方法。 40. 患者の血液から収集された血球のうちの標的集団の、単一の遠心区域内に おける選択的分離のための方法であって、 患者から該遠心区域内に位置する第1の容器内へ標的細胞集団を含有する血 球を収集するために血球遠心器を連続的に作動させ、有核の細胞を含んだ該血球 の流れを、該遠心区域の影響下に粒子/細胞複合体を形成するために該標的細胞 集団にのみ特異的に結合す ることのできる物質を取り付けた粒子手段をそれに対して計量し供給しつつ、第 2の容器へと渡す(ここに該粒子/細胞複合体は該血球の残りとは、遠心下にそ れらから分離するに十分に異なった沈降速度を有する)段階と、 該第2の容器内における遠心によって該粒子細胞複合体を該血球の残りから 分離する段階と、そして 該残りの血球を該患者へ戻しつつ、該標的細胞集団を別に収集する段階と、 を含む方法。 41. 該粒子手段がそれらの表面上に、造血細胞、腫瘍細胞、組織培養細胞系、 抗原特異的リンパ球、細菌、原虫類、ウイルス粒子、病原体感染細胞、組換えD NAでトランスフェクトされた細胞、よりなる群より選ばれる細胞、血漿タンパ ク質、薬剤、薬物、並びに植物性、動物性及び微生物性の毒素、に特異的な抗体 を担持しているものである、請求項40の方法。 42. 該造血細胞が、全ての白血球亜集団及び多能性幹細胞よりなる群より選ば れるものである、請求項41の方法。 43. 該粒子手段の直径が約0.1乃至500μmの範囲である、請求項40の方法。 44. 該粒子手段の密度が約0.25乃至約5.0g/cm3である、請求項40の方法。 45. 該血球中の有核細胞集団に対する該粒子手段の比率が約1:1000乃至1000 :1である、請求項40の方法。 46. 該有核細胞集団に対する該粒子手段の比率が約1:100乃至100:1である 、請求項45の方法。 47. 該粒子手段の直径が約0.1乃至500μmの範囲である、請求項40の方法。 48. 該粒子手段の密度が約0.25乃至5.0g/cm3の範囲である、請求項40の方 法。 49. 該粒子の直径が約0.3乃至80μmの範囲にあり、そして該粒子の密度が約0 .5乃至2.5g/cm3の範囲にある、請求項40の方法。
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