JPH09505579A

JPH09505579A - イノシトール三燐酸エステルの薬剤調製への使用

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Publication number: JPH09505579A
Application number: JP7514990A
Authority: JP
Inventors: マツツイシーレン，
Original assignee: Perstorp AB
Current assignee: Perstorp AB
Priority date: 1993-11-22
Filing date: 1994-11-18
Publication date: 1997-06-03
Anticipated expiration: 2021-04-19
Also published as: DE69432124D1; AU1081695A; WO1995014475A1; EP0730459B1; ATE232387T1; SE9303853D0; US5846957A; JP3769011B2; SE502989C2; SE9303853L; EP0730459A1

Abstract

(57)【要約】この発明は、レトロウイルス性の病気に対して効果的な薬剤の調製にイノシトール三燐酸のエステルを使用することに関する。

Description

【発明の詳細な説明】イノシトール三燐酸エステルの薬剤調製への使用この発明は、レトロウイルス性の病気に効果的な薬剤の調製にイノシトールトリスホスフェート（ｉｎｏｓｉｔｏｌｔｒｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅ、以下イノシトール三燐酸という）のエステルを使用することに関する。後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の１型及び２型（ＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２）によって引き起こされる重大な免疫不全病である。ＨＩＶは、ＡＩＤＳの病因学的因子であり、レンチウイルス亜科（ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓｓｕｂｆａｍｉｌｙ）に属する非発癌性の細胞変性レトロウイルスである。レトロウイルスは、その遺伝物質をデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）ではなく、リボ核酸（ＲＮＡ）の形で有しており、そのＲＮＡをＤＮＡにするために、逆転写酵素と呼ばれる特殊な酵素を有している。ＨＩＶウイルスは、直径１００ｎｍで、エンベロープで覆われており、表面に糖タンパクを、そして、内部に円柱形コアを含んでいる。このエンベロープはリン脂質と糖タンパクにより形成されており、コアはゲノムと何種類かの酵素を含んでいる。ＨＩＶは先ず感受性細胞表面のＣＤ４受容体に結合し、これにより人間の細胞がＨＩＶに感染する。この結合は、ＨＩＶのオリゴマーエンベロープ糖タンパク（ｇｐ）と標的細胞表面の受容体を媒介にして生じ、次いで、ウイルスエンベロープと原形質膜との間の融合が起こる。結合後の膜融合に至るまでの機構はあまりわかっていないが、この融合反応では、ｇｐ４１エンベロープタンパク質の疎水性アミノ末端が露出したエンベロープタンパク質が形態変化することが推測されている。ＨＩＶ感染の第１段階は、ＨＩＶ−１のエンベロープ糖タンパクのｇｐ１２０が細胞受容体に結合することである。しかし、ＣＤ４が関係しない感染機構の証拠も存在しており、多くの生体外（ｉｎｖｉｔｒｏ）のＣＤ４陰性細胞（ＣＤ４−ｎｅｇａｔｉｖｅｃｅｌｌ）のＨＩＶ感染が報告されている（ハロウズ（Ｈａｒｏｕｓｅ）、Ｊ．Ｍ．氏他、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ、６３、２５２７、１９８９年、ザッチャー（Ｚａｃｈａｒ）、Ｖ．Ｂ．氏他、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ、６５、２１０２、１９９１年）。上記のデータは、ＨＩＶ感染にはＣＤ４の発現だけが絶対的な条件ではなく、それだけでは感染をサポートするに不十分であることを示しており、他にも感染に必要とされる分子が存在することを示唆している。また、感染後の重大かつ取り返しのつかない免疫低下についての病理生理学的根拠は不明である。ＡＩＤＳは、１９８１年に、日和見感染、カポジ肉腫及び一次ＣＮＳリンパ腫の症状を持つ米国の若い男性同性愛者に対して初めて認定された。その当時、例外的な症例として全身的な悪性リンパ腫も認められていたが、１９８５年までは統計的に目立つ程の増加数は認められなかった。また、罹病者は、遍在しても通常は病気の原因となり得ない微生物による他の日和見感染も患っていた。実際のところ、ＡＩＤＳ患者にみられる感染症及び癌は、以前には、生まれつき免疫機構に所定の欠陥を持つ人々に対してしか知られていないものであった。この病気が最初に認定されて以来、症例数は急速に増加してきた。世界保健機関によれば、ＡＩＤＳの増加によって、西暦２０００年までにはＨＩＶ感染者が４千万人にもなるとされている。最近、ＨＩＶ感染は３つの別個の段階に分類されるようになった。即ち、数週間継続する急性期、数年間継続する慢性期、及び、数カ月〜数年継続する最終的な発病期（一般的にＡＩＤＳと呼ばれる段階）である。ＡＩＤＳは特異な病気である。他の感染症で、人間の免疫機構を直接攻撃して類似した害を及ぼす病気は知られていない。まず、このウイルスは、人体内で、普通は感染症から人体を防御する細胞を攻撃する。これらの細胞には、単球、マクロファージ、及び、樹状細胞、いわゆる抗原提示細胞（ＡＰＣ）がある。更に、ＨＩＶは、数カ月或いは数年間細胞中に潜伏しうる。第３の難題は、ＨＩＶの遺伝子構成が非常に多様であるということである。１９８５年に、ジドブジン（ｚｉｄｏｖｕｄｉｎｅ：ＡＺＴ）がヒト免疫不全ウイルス即ちＨＩＶに対して生体外活性を有することが分かった。このジドブジンの生体外臨床活性については議論されていないが、治療開始の時期についてはかなり議論されている（Ｊ．Ｇ．バートレット（Ｂａｒｔｌｅｔｔ）氏、ＮｅｗＥｎｇｌ．Ｊ．ｏｆＭｅｄ．、３２９、３５１、１９９３年；クーパー（Ｃｏｏｐｅｒ）Ｄ．Ａ．氏他、ＮｅｗＥｎｇｌ．Ｊ．ｏｆＭｅｄ．、３２９、２９７、１９９３年）。ＡＺＴには貧血等の重い副作用があり、また、この薬の使用者については、ＨＩＶが突然変異して薬が効かない菌株を生ずることがよくある。他のヌクレオシド類似体も試験中であるが、副作用を含む作用形態がジドブジンに類似するため、その使用は結局は限定されることになろう。ＡＺＴの作用は、ＨＩＶの酵素、即ち、逆転写酵素の作用を抑制することであり、ウイルスの細胞内での複製を阻止することである。レトロウイルスは、よく知られているように非常に速く変化して、患者に投与される薬剤や抗体に対して耐性を有するＨＩＶ−１菌株を急速に生じさせる。また、ＨＩＶの複製サイクルの幾つかの他の段階を治療的干渉（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ）の対象とする構想もなされてきた。このような対象の１つとして、十分な感染力を持ったＨＩＶ粒子の集合に不可欠なＨＩＶプロテアーゼがある。過去数年において、有効な抗ウイルス治療法を求めて徹底的な調査が行われてきた。これまでに見つかった有効な薬剤には、カルボヴィール（ｃａｒｂｏｖｉｒ）（ヴィンス（Ｖｉｎｃｅ）、Ｒ．氏他：Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１５６、１０４６、１９８８年）及び、オキサシン（ｏｘａｔｈｉｎ）安息香酸エステル及び誘導体類（シュルツ（Ｓｃｈｕｌｔｚ）、ＲＪ氏他：Ｐｒｏｃ．Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．３３、４０９、１９９０年）がある。ＨＩＶウイルスの広まりを阻止する新薬の調査が行われているが、以下の条件を満たさなければならない。 −全くあるいは殆ど副作用がないこと。もしくは、少なくともその副作用が最小限で許容できるものであること。 −治療係数が高いこと。 −内部でＨＩＶウイルスが増殖する細胞にウイルスが侵入できないようにするか、又は、そのような細胞内でウイルスが増殖できないようにして、ＨＩＶウイルスの増殖を阻止すること。 −１日１回又は２回の薬剤投与が可能な程度に薬剤の半減期が長いこと。 −個々の投与量を確認できるように、化合物が血中で容易に同定できること。 −薬剤が、代謝活性の結果としてだけでなく、投与された時と同じ形態で標的細胞に対して効果を有すること。 −薬剤が、奇形学的に安全であること。この発明によれば、驚くべきことに、レトロウイルス性の病気に対して有効な薬剤の調製にイノシトール三燐酸のエステルを使用することが可能となった。この発明の推奨実施例においては、この薬剤は、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）及びＡＩＤＳ関連の病気の予防及び緩和に、また、これらの病気との闘いのために使用することを目的としたものである。また、この薬剤は、レトロウイルスが原因となって起こる他の症状に対しても使用できる。この薬剤は、レトロウイルス性の感染に対してかなり高い抑制効果を発揮するが、副作用がない。従って、患者にとって非常に有益である。また、この薬剤は、他の包膜ウイルス（ｅｎｖｅｌｏｐｅｄｖｉｒｕｓ）によって引き起こされるウイルス性の病気に対しても使用するようにされている。例えば、この薬剤は、サイトメガロウイルス及びさまざまな種類のヘルペスウイルスが原因となって起こるウイルス性の病気に対して使用するようにされている。ヨーロッパ特許第１７９４３９号によれば、少なくとも１種のイノシトール三燐酸の異性体を、薬効成分として含んでいる薬剤組成物が周知である。この特許では、薬剤組成物の効果が血小板凝集等の異なる分野に対して示されている。イノシトール三燐酸エステル類の生成及びその異なる異性体の単離については、ヨーロッパ特許出願第０２６９１０５号に開示されている。イノシトール三燐酸エステル類の治療的プロフィール（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｐｒｏｆｉｌｅ）は、多くの重要な点でイノシトール三燐酸のプロフィールと異なっている。脂肪親和性（ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃｉｔｙ）、溶解度及びｐＫ_A 値等の化学的性質が異なっており、それが化合物の効力及び選択性に影響している。更に、イノシトール三燐酸エステル類については、酵素分解に対する感受性が非常に低減されており、それによって持続時間が長くなっている。この発明により使用される薬剤は、単位剤形（ｕｎｉｔｄｏｓａｇｅｆｏｒｍ）で存在することが適切である。このような単位剤形に適した投与形態は、錠剤、顆粒剤あるいはカプセルである。また、錠剤及び顆粒剤に対しては、胃中で制御できない加水分解が起こらないようにし、腸内で所望の吸収がなされるように、エンテリックコーティング等の表面処理を容易に行うことができる。他の適切な投与形態としては、緩速放出投与（ｓｌｏｗｒｅｌｅａｓｅ）及び経皮吸収投与（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）がある。この薬剤には、薬学的に許容できる通常の添加剤、賦形剤、及び／または、担体が含まれていてもよい。また、錠剤または顆粒剤の腸内での分解を容易にする崩壊剤が、錠剤または顆粒剤に含まれていてもよい。所定の場合、特に、急性の場合には、静脈投与用として溶液の単位剤形を使用することが好ましい。他に、投与形態としてこの化合物を含む懸濁液を用いることが好ましい場合もあり得る。また、この薬剤は、添加剤、賦形剤、または担体を使用せずに、イノシトール三燐酸エステル類等だけで構成されるようにすることもできる。この薬剤は、各々が実質的に純粋な形態で存在する１以上の特定のイノシトール三燐酸エステル類の異性体から構成されるか、又はこれを含むものとすることができる。すなわち、異なる異性体を実質的に純粋な形態で互いに分離することができる。この実質的に純粋な形態とは、異性体が、例えば、８２〜１００％や８５〜１００％、好ましくは９０〜１００％というような８０〜１００％の純度を有していることを意味するものである。異性体を純粋な形態で生成することができるため、当然、これらの異性体をどの様な比率ででも混合することができる。大抵の場合において、この発明による薬剤の調製に使用されるイノシトール三燐酸エステルは、鉱質のバランス（ｍｉｎｅｒａｌｂａｌａｎｃｅ）に悪影響を及ぼさないように塩の形態で存在することが適切である。この塩は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、亜鉛、又はマグネシウムの塩か、これらの塩の２種類以上を混合したものからなるものであることが好ましい。また、上記した理由により、この薬剤に、カルシウム、亜鉛又はマグネシウムと鉱酸又は有機酸との塩のうち少なくとも１種類の薬学的に許容できる塩を余分に添加するとよい。このことは、特に、上記の鉱物が不足しがちな高齢者に有益である。人間の患者に薬剤投与する場合には、薬剤を様々な量で動物に投与した結果に基づいて、当業者により適切な服用量が常套的に決められる。人間に対する推奨服用量は、０．１〜１０００ｍｇ化合物／日／ｋｇ体重の範囲内であり、特に、０．１〜２００ｍｇ化合物／日／ｋｇ体重である。動物実験では、マウスに静脈注射で３００ｍｇ／ｋｇ体重の高投薬量のイノシトール三燐酸エステル類を投与した後でも、何ら毒性作用は見られなかった。通常、この薬剤は、１回の投薬量当たり、例えば、０．０５〜１．３ｇ、好ましくは、０．１〜１ｇというように、０．０１〜１．５ｇの上記化合物を含んでいる。この発明により使用される組成物は、次の構造式を持つイノシトール三燐酸エステル類に対応する以下の化合物の少なくとも１つ、場合によっては、２以上の化合物を含んでいる。即ち、ここでＲ₁、Ｒ₂及びＲ₃は隣位であり、全て、このときＡは、（１）１〜２４個の炭素原子を含む直鎖または枝分かれ（分枝）鎖アルキル（２）３〜１６個の炭素原子を含むシクロアルキル（３）２〜２４個の炭素原子を含むアルケニル（４）５〜１６個の炭素原子を含むシクロアルケニル（５）６〜２４個の炭素原子を含むアリール（６）７〜４８個の炭素原子を含むアラルキル（７）７〜４８個の炭素原子を含むアルカリール（８）８〜４８個の炭素原子を含むアラルケニル（９）８〜４８個の炭素原子を含むアルケニルアリール（１０）酸素、窒素または硫黄のうち少なくとも１つの原子を含むヘテロ環なお、上記物質（１）〜（１０）は、ヒドロキシ、オキソ、アルコキシ、アリールオキシ、ハロ、シアノ、イソシアノ、カルボキシ、エステル化カルボキシ、アミノ、置換アミノ、ホルミル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、スルフィニル、スルホニル、ホスフィノ、ホスフィニル、ホスホニル、メルカプト、アルキルチオ、アリールチオ、シリル、シリルオキシ、シリルチオ、ニトロ、または、アジドで置換されることもあれば、置換されないこともある。（１１）カルボキシ（１２）エステル化カルボキシ（１３）アミノ、または、（１４）置換アミノである。また、Ｒ₄、Ｒ₅及びＲ₆は隣位であり、全て、このときＲ₇及びＲ₈は同じであるか、または、異なるものであり、（１）水素（２）１価、２価または３価のカチオンである。更に、Ｘはミオ−イノシトール又はその立体配置異性体（ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎｉｓｏｍｅｒ）のラジカルである。置換基Ａは、Ｒ₁、Ｒ₂及びＲ₃の全てについて同じであってもよいし、上記定義に従ったそれぞれ異なる構造を有するものであってもよい。この発明の別の推奨実施例においては、Ｒ₁、Ｒ₂及びＲ₃は隣位であって、全てが、ここでｎは１〜１０の整数であり、好ましくは、２〜４である。ここでｎは１〜１０の整数であって、Ｒ₉は置換または未置換の、直鎖又は分枝鎖アルキル、シクロアルキル、アリールまたはアルカリールである。好ましくは、ｎは２〜４であり、Ｒ₉はメチル、エチルまたはプロピル等の低級アルキルである。ここでｎ及びｍは１〜１０の整数であって、Ｙは酸素または硫黄である。好ましくは、ｎは１であり、ｍは２〜４である。ここでｎ及びｍは１〜１０の整数であって、Ｙは酸素または硫黄であり、また、Ｒ₉は置換または未置換の、直鎖又は分枝鎖アルキル、シクロアルキル、アリールまたはアルカリールである。好ましくは、ｎは１でｍは２〜４であり、Ｒ₉はメチル、エチルまたはプロピル等の低級アルキルである。ここでｎは１〜１０の整数であって、Ｒ₉，は置換または未置換の、直鎖又は分枝鎖アルキル、シクロアルキル、アリールまたはアラルキルである。好ましくは、ｎは１又は２であり、Ｒ₉はメチル、エチルまたはプロピル等の低級アルキルである。ここでｎは１〜１０の整数であって、Ｒ₁₀は水素、または、置換または未置換の、直鎖又は分枝鎖アルキル、シクロアルキル、アリールまたはアラルキルである。好ましくは、ｎは２又は３であり、Ｒ₁₀は水素、または、メチル、エチルまたはプロピル等の低級アルキルである。ここでｎは１〜１０の整数であって、Ｒ₉は置換または未置換の、直鎖又は分枝鎖アルキル、シクロアルキル、アリールまたはアラルキルである。好ましくは、ｎは１であり、Ｒ₉はメチル、エチルまたはプロピル等の低級アルキルである。ここでｎは１〜１０の整数であって、Ｒ₉は置換または未置換の、直鎖又は分枝鎖アルキル、シクロアルキル、アリールまたはアラルキルであり、Ｒ₁₀は水素、または、置換または未置換の、直鎖又は分枝鎖アルキル、シクロアルキル、アリールまたはアラルキルである。好ましくは、ｎは１であり、Ｒ₉はメチル、エチルまたはプロピル等の低級アルキルであり、Ｒ₁₀は水素である。ここでｎは１〜１０の整数であって、Ｒ₉は置換または未置換の、直鎖又は分枝鎖アルキル、シクロアルキル、アリールまたはアラルキルであり、Ｒ₁₀は水素、または、置換または未置換の、直鎖又は分枝鎖アルキル、シクロアルキル、アリールまたはアラルキルである。好ましくは、ｎは１であり、Ｒ₉はメチル、エチルまたはプロピル等の低級アルキルであり、Ｒ₁₀は水素である。ここでｎは１〜１０の整数であって、Ｒ₉は置換または未置換の、直鎖又は分枝鎖アルキル、シクロアルキル、アリールまたはアラルキルである。好ましくは、ｎは１であり、Ｒ₉はメチル、エチルまたはプロピル等の低級アルキルである。ここでＺ¹は、置換または未置換の、ＣＨ（ＣＨ₂）₂、ＣＨ（ＣＨ₂）₃、ＣＨ（ＣＨ₂）₄、ＣＨ（ＣＨ₂）₅、ＣＨ（ＣＨ₂）₆、又は、ＣＨ（ＣＨ₂）₂（ＣＨ）₂ 等のシクロアルキルである。ここでＺ¹は、置換または未置換の、ＣＨ（ＣＨ₂）₂、ＣＨ（ＣＨ₂）₃、ＣＨ（ＣＨ₂）₄、ＣＨ（ＣＨ₂）₅、ＣＨ（ＣＨ₂）₆、又は、ＣＨ（ＣＨ₂）₂（ＣＨ）₂ 等のシクロアルキルであり、ｎは１〜１０の整数である。好ましくは、ｎは１である。ここでＺ²は、置換または未置換の、フェニル、ビフェニル、ナフチル、アントラセニル又はフェナントレニルである。ここでＺ²は、置換または未置換の、フェニル、ビフェニル、ナフチル、アントラセニル又はフェナントレニルであり、ｎは１〜１０の整数である。好ましくは、ｎは１である。ここでＺ³は、置換または未置換の、以下のようなヘテロ環式化合物である。ここでＺ³は、置換または未置換の、以下のようなヘテロ環式化合物である。ここでｎ及びｍは１〜１０の整数であって、Ｒ₉は置換または未置換の、直鎖又は分枝鎖アルキル、シクロアルキル、アリール、アルカリールであり、Ｒ₁₀及びＲ₁₁は水素、または、置換または未置換の、直鎖又は分枝鎖アルキル、シクロアルキル、アリール、アルカリールである。好ましくは、ｎは１または２であり、ｍは２または３であり、Ｒ₉は低級アルキルであり、Ｒ₁₀及びＲ₁₁は水素である。（１８） −Ｏ−アセチル、−Ｏ−プロピオニル、−Ｏ−ブチリル、−Ｏ−イソブチリル、−Ｏ−（４−アセトキシ）ブチリル、−Ｏ−バレリル、−Ｏ−イソバレリル、−Ｏ−（４−プロピオニルオキシ）バレリル、−Ｏ−ピバロイル、−Ｏ −ヘキサノイル、−Ｏ−オクタノイル、−Ｏ−デカノイル、−Ｏ−ドデカノイル、−Ｏ−テトラデカノイル、−Ｏ−ヘキサデカノイル、または、−Ｏ−オクタデカノイル（１９） −Ｏ−メチルカルバモイル、−Ｏ−エチルカルバモイル、−Ｏ−プロピルカルバモイル、−Ｏ−ブチルカルバモイル、−Ｏ−フェニルカルバモイル、 −Ｏ−ベンゾイルカルバモイル、−Ｏ−（２−アセトキシ）ベンゾイルカルバモイル、−Ｏ−（２−プロピオニルオキシ）ベンゾイルカルバモイル、または、クロロスルホニルカルバモイルである。上記式は、イノシトール部分が、ミオ−イノシトール、シス−イノシトール、エピ−イノシトール、アロ−イノシトール、ネオ−イノシトール、ムコ−イノシトール、カイロ−イノシトール及びシロ−イノシトールからなる群から選択されているイノシトール三燐酸の特定のエステル類を示している。この発明の１つの推奨実施例では、レトロウイルス性の病気に対して有効な薬剤の調製に使用される化合物は以下の構造式を有している。ここでＲ₁、Ｒ₂及びＲ₃は隣位であり、全て、このときＡは、（１）１〜２４個の炭素原子を含む直鎖または分枝鎖アルキル（２）３〜１６個の炭素原子を含むシクロアルキル（３）２〜２４個の炭素原子を含むアルケニル（４）５〜１６個の炭素原子を含むシクロアルケニル（５）６〜２４個の炭素原子を含むアリール（６）７〜４８個の炭素原子を含むアラルキル（７）７〜４８個の炭素原子を含むアルカリール（８）８〜４８個の炭素原子を含むアラルケニル（９）８〜４８個の炭素原子を含むアルケニルアリール（１０）酸素、窒素または硫黄のうち少なくとも１つの原子を含むヘテロ環なお、上記物質（１）〜（１０）は、ヒドロキシ、オキソ、アルコキシ、アリールオキシ、ハロ、シアノ、イソシアノ、カルボキシ、エステル化カルボキシ、アミノ、置換アミノ、ホルミル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、スルフィニル、スルホニル、ホスフィノ、ホスフィニル、ホスホニル、メルカプト、アルキルチオ、アリールチオ、シリル、シリルオキシ、シリルチオ、ニトロ、または、アジドで置換されることもあれば、置換されないこともある。（１１）カルボキシ（１２）エステル化カルボキシ（１３）アミノ、または、（１４）置換アミノである。また、Ｒ₄、Ｒ₅及びＲ₆は全て、このときＲ₇及びＲ₈は同じであるか、または、異なるものであり、（１）水素（２）１価、２価または３価のカチオンである。本発明のこの実施例で予期される化合物は、ミオ−イノシトール三燐酸のエステル類であり、推奨される化合物は、Ｄ−ミオ−イノシトール−１，２，６−三燐酸のエステル類である。また、この発明は、以下の例によっても説明される。例１は、静脈投与用のミオ−イノシトール三燐酸エステルの溶液の生成について示したものであり、例２〜６は、ミオ−イノシトール三燐酸の種々のエステルの生成について示したものであり、例７は、ＨＩＶによって生じる感染を抑制するミオ−イノシトール三燐酸エステルの効果を示したものである。また、例８は、ＨＩＶ患者から臨床的に採取されたウイルスにより生じる感染を抑制するミオ−イノシトール三燐酸エステルの能力を示すものであり、例９は、慢性的に感染した培養における感染の拡大を抑制するミオ−イノシトール三燐酸エステルの性質を示すものである。例１Ｄ−３，４，５−トリ−Ｏ−ヘキサノイル−ミオ−イノシトール−１，２，６ −三燐酸（ＰＰ１０−２０２）のナトリウム塩の注射溶液ＰＰ１０−２０２のナトリウム塩０．５ｇと塩化ナトリウム０．７７ｇを９８．７３ｍｌの注射用の水に溶解させて、人間又は動物への注射に適した溶液を生成した。例２１．９２ｍｍｏｌの酸の形態のＤ−ミオ−イノシトール−１，２，６−三燐酸（ＩＰ₃）を、残留する水を除去するために蒸発させた後、２５ｍｌのジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解させた。１．２４ｇのトリエチルアミンを添加した後、蒸発させて１．１５ｇの４−（ジメチルアミノ）−ピリジンを加えた。この溶液に、１００ｍｌの塩化ジメチレン（ｄｉｍｅｔｈｙｌｅｎｅｃｈｌｏｒｉｄｅ）に溶解させた５．３０ｇの４−アセトキシ酪酸無水物を３０分間にわたって加えた。反応混合物を室温で３時間攪拌した後、蒸発させて乾燥した。この残留物を１００ｍｌのメタノールに溶解させ、３×２０ｍｌのヘプタンで（２０ｍｌのヘプタンを３回使用して）抽出した。メタノール部分（ｍｅｔｈａｎｏｌ−ｆｒａｃｔｉｏｎ）を蒸発させて、残った生成物をＮＭＲで分析した。構造決定及びＮＭＲにより、この化合物はＤ−３，４，５−トリ−Ｏ−（４−アセトキシブチリル）−ミオ−イノシトール−１，２，６−三燐酸であることがわかった。例３例２で述べた手順と同様の実験において、以下のＤ−ミオ−イノシトール−１，２，６−三燐酸のエステルを良好な収率で合成した。Ｄ−３，４，５−トリ−Ｏ−プロピオニル−ミオ−イノシトール−１，２，６ −三燐酸Ｄ−３，４，５−トリ−Ｏ−ブチリル−ミオ−イノシトール−１，２，６−三燐酸Ｄ−３，４，５−トリ−Ｏ−イソブチリル−ミオ−イノシトール−１，２，６ −三燐酸Ｄ−３，４，５−トリ−Ｏ−（４−ヒドロキシ）ペンタノイル−ミオ−イノシトール−１，２，６−三燐酸Ｄ−３，４，５−トリ−Ｏ−ドデカノイル−ミオ−イノシトール−１，２，６ −三燐酸例４１．４ｇのＤ−ミオ−イノシトール−１，２，６−トリス（Ｎ−エチルジイソプロピルアンモニウムハイドロゲンホスフェート）（Ｄ−ｍｉｏ−ｉｎｏｓｉｔｏｌ−１，２，６−ｔｒｉｓ（Ｎ−ｅｔｈｙｌｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌａｍｍｏｎｉｕｍｈｙｄｒｏｇｅｎｐｈｏｓｐｈａｔｅ））を１５ｍｌの塩化メチレンに溶解させた。１．５９ｇの無水ヘキサン酸、１．４ｍｌのＮ−エチルジイソプロピルアミン及び４０３ｍｇの４−（ジメチルアミノ）ピリジンを加えて反応混合物を４０℃で１６時間攪拌した。蒸発により溶媒を除去し、残留物に１５ｍｌのテトラヒドロフランと２０ｍｌの水を加えた。生成した懸濁液を、溶離剤として水を用いてイオン交換クロマトグラフィ（Ｄｏｗｅｘ５０Ｗ−Ｘ８）で精製した。この溶出液を炭酸水素ナトリウムで中和し、水を除去した。残留物をＮＭＲで同定したところ、Ｄ−３，４，５−トリ− Ｏ−ヘキサノイル，ミオ−イノシトールー三燐酸であることがわかった。例５５ｇのＤ−ミオ−イノシトール−１，２，６−三燐酸のＮ−エチルジイソプロピルアミン塩を、１００ｍｌの塩化ジメチレンに溶解させた。１．４４ｇの４− （ジメチルアミノ）ピリジンと５ｍｌのエチルジイソプロピルアミンを加えた後、５．７５ｍｌのフェニルイソシアネートを６０分かけて滴下して加えた。この反応混合物を室温で６時間攪拌した後、蒸発させて乾燥した。残留物を３０ｍｌのテトラヒドロフランと６ｍｌの水に溶解させた後、Ｈ⁺の形態のカチオン交換樹脂で処理した。生成物を２００ｍｌの水で溶離して、ｐＨが５．８になるまで炭酸水素ナトリウムで処理した。濾過後、上澄みを蒸発させて乾燥し、ＮＭＲで分析した。この化合物はＤ−３，４，５−トリ−Ｏ−フェニルカルバモイル−ミオ−イノシトール−１，２，６−三燐酸であると同定された。例６例５で述べた手順と同様の実験において、以下のＤ−ミオ−イノシトール−１，２，６−三燐酸のカルバメート類を良好な収率で合成した。Ｄ−３，４，５−トリ−Ｏ−（２−アセトキシ）ベンゾイルカルバモイル−１，２，６−三燐酸Ｄ−３，４，５−トリ−Ｏ−ブチルカルバモイル−１，２，６−三燐酸Ｄ−３，４，５−トリ−Ｏ−メチルカルバモイル−１，２，６−三燐酸例７Ｄ−３，４，５−トリ−Ｏ−ヘキサノイル−ミオ−イノシトール−１，２，６ −三燐酸（ＰＰ１０−２０２）のナトリウム塩の、ＨＩＶ誘発感染に対する抑制効果Ｈ９細胞の３つの試料を、ＨＩＶ−３Ｂ（ＨＩＶウイルスの型コード）に慢性的に感染させ、未感染のＣ８１６６細胞と混合した。この混合物は、５個よりも多い核と膨れ上がった細胞形質とを有する多数のシンシチウム細胞（ｓｙｎｃｙｔｉａ−ｃｅｌｌ）を形成した。上記試料のうち１つを対照として使用し、第２の試料は、シンシチウム形成を抑制するものとして知られる可溶性組換えＣＤ４（１０μｇ／ｍｌ）とともに培養（ｉｎｃｕｂａｔｅ）した。第３の試料は、ＰＰ１０−２０２（１０００μｇ／ｍｌ）とともに培養した。２４時間後に、全ての試料を顕微鏡で調べて感染の進行度を求めた。対照試料では、シンシチウム細胞が非常に増加していることが認められ、感染の進行度が大きくかつ深刻であることがわかった。可溶性ＣＤ４を含む試料は、シンシチウム形成に対する顕著な抑制効果を示した。ＰＰ１０−２０２を含む試料では、２４時間後にはシンシチウム細胞の形成が、形態的に明らかな細胞障害性（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）なしに完全に阻止されていた。ＰＰ１０−２０２の使用は、ＨＩＶ誘発感染に対して強力な抑制効果を示した。例８種々の濃度のＤ−３，４，５−トリ−Ｏ−ヘキサノイル−ミオ−イノシトール −１，２，６−三燐酸（ＰＰ１０−２０２）のナトリウム塩を含有する培養液に末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）を加えて感染を誘発させるためにＨＩＶ感染者から採取したウイルスを使用した。ＨＩＶ感染者から採取した２５ＣＣＩＤ₅₀（５０％の細胞培養感染量）のＰＢＭＣを、４つの異なる濃度（０．０６２５ｍｇ／ｍｌ、０．１２５ｍｇ／ｍｌ、０．２５０ｍｇ／ｍｌ、０．５００ｍｇ／ｍｌ）のＰＰ１０−２０２とともに培養した。対照として、ＰＰ１０−２０２を含まない別の試料を使用した。増殖培養液は、１０％の牛の胎児の血清、２μＭのグルタミン、１００ＩＵ／ｍｌのペニシリン、１００ＩＵ／ｍｌのストレプトマイシン及び２０μｇ／ｍｌのゲンタマイシンからなるものであった。細胞濃度は、１ｍｌあたり２×１０⁵個であった。全試料を３７℃で１時間培養した。その後、健康なドナーから採取したＰＢＭＣを試料に添加した。なお、この細胞は、添加前に３日間フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）により刺激を与えられていたものである。０．５×１０⁶個の、ＰＨＡの刺激を受けたＰＢＭＣを各試料に加えた後、３７℃で３時間培養した。この細胞を、よく洗浄した後、１０ＩＵ／ｍｌのインターロイキン−２で補足した増殖培養液に再懸濁させ、９６ウェルマイクロタイタープレート（９６−ｗｅｌｌｍｉｃｒｏｔｉｔｅｐｌａｔｅ）中に１００．０００個の細胞を有する４つのサンプルに植えつけた。その後、更に７日間培養し、７日目にＥＬＩＳＡ法によりＨＩＶ抗原生成を検定した。得られた値を標準化して、以下の表にまとめた。ＰＰ１０−２０２濃度（ｍｇ／ｍｌ）ＨＩＶ感染率（％）０１０００．０６２５７５０．１２５４１０．２５０３３０．５００２０臨床的にＨＩＶ感染者から採取されたウイルスによってＨＩＶ感染を生じさせたこの例では、ＰＰ１０−２０２は強力な感染抑制効果を示している。例９新たに分離した末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）に３日間フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ−Ｐ）で刺激を与えた後、この細胞を、多量の、低継代（ｌｏｗｐａｓｓａｇｅ）で臨床的に分離したＨＩＶのイノキュラムで感染させた。感染した細胞を４日間培養した後、未感染のＰＨＡ−Ｐで刺激されたＰＢＭＣと１：１１の割合で混合した。ペレット化（ｐｅｌｌｅｔａｔｉｏｎ）した後、補足していない培養液に細胞の半分を再懸濁させ、もう半分の細胞を０．５ｍｇ／ｍｌの濃度のＤ−３，４，５−トリ−Ｏ−ヘキサノイル−ミオ−イノシトール−１，２，６−三燐酸（ＰＰ１０−２０２）のナトリウム塩で補足した培養液に再懸濁させた。再懸濁した細胞は、各ウェルに０．５×１０⁶個の細胞を有する４つの２４ウェルマイクロタイタープレートに植えつけて（ｐｌａｔｅ）培養した。培養液の半分を１週間に２度収集し、ＰＰ１０−２０２を含む新しい培養液、または、これを含まない新しい培養液を加えた。培養してから４日後、７日後及び１０日後に、ＥＬＩＳＡ法により上澄み中に存在するＨＩＶ抗原の量を測定した。抗原の量の大きさは感染の増大に対応している。得られたデータを以下の表に示す。この結果から、ＰＰ１０−２０２を培養液に添加することによって既に感染していた培養が非常に顕著に減少することがわかる。この例は、通常、発病後に有効な化合物を投与しはじめる臨床的な状況によく合致する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．イノシトール三燐酸エステルの、レトロウイルス性の病気に対して有効な薬剤の調製への使用。２．上記病気が後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）またはＡＩＤＳ関連の病気である、請求項１に記載の使用。３．上記イノシトール三燐酸エステルが塩の形態をとっている、請求項１及び２のいずれか１つに記載の使用。４．上記イノシトール三燐酸エステルが、ナトリウム、カリウム、カルシウム、又は亜鉛の塩である、請求項３に記載の使用。５．上記イノシトール三燐酸エステルが、ミオ−イノシトール三燐酸のエステルである、請求項１及び２のいずれか１つに記載の使用。６．上記イノシトール三燐酸エステルが、Ｄ−ミオ−イノシトール−１，２，６−三燐酸のエステルである、請求項１及び２のいずれか１つに記載の使用。７．上記薬剤が、錠剤、顆粒剤、カプセル、溶液又は懸濁液を含む単位剤形をとっている、請求項１乃至６のいずれか１つに記載の使用。