JPH09295966A

JPH09295966A - ピロリジンアルカロイド化合物

Info

Publication number: JPH09295966A
Application number: JP20851196A
Authority: JP
Inventors: Genjiro Kusano; 源次郎草野; Makio Shibano; 真喜雄芝野; Koichi Nakahara; 光一中原
Original assignee: Suntory Ltd
Current assignee: Suntory Ltd
Priority date: 1996-03-04
Filing date: 1996-08-07
Publication date: 1997-11-18

Abstract

(57)【要約】【課題】人体に害を及ぼすことなく糖質分解酵素を効
果的に阻害する物質。【解決手段】一般式（Ｉ）：【化１】（式中、ｘは８，７又は４、ｙは０，３又は２及びｚは
１，２又は３で、ｘが８の時ｙは０及びｚは１、ｘが７
の時ｙは０及びｚは２、ｘが４の時ｙは３及びｚは２又
はｙは２及びｚは３を示し、Ｒ₁，Ｒ₂，Ｒ₃，Ｒ₄及
びＲ₅は、ｘが８又は７の時Ｒ₄及びＲ₅は水素で、Ｒ
₁とＲ₂は一緒になって酸素、Ｒ₃は水酸基を示すか、
又はＲ₄及びＲ₅は水素で、Ｒ₁は水酸基、Ｒ₂とＲ₃
が一緒になって酸素を示し、ｘが４の時Ｒ₁は水素で、
Ｒ₂とＲ₅は一緒になって酸素、Ｒ ₄とＲ₃は一緒にな
って酸素を示す）で表されるピロリジンアルカロイド化
合物及びそれを含む糖質分解酵素阻害剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新規ピロリジンア
ルカロイド化合物に関し、更に詳しくは、強力な糖質分
解酵素阻害作用を有し、ヒトおよび動物の過血糖症状お
よび過血糖に起因する種々の疾病の予防または治療剤と
して有用な新規ピロリジンアルカロイド化合物に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】近年、主として、栄養過多等の原因によ
り、飲食物中に含まれる糖質が消化されて生じる過血糖
症状及び過血糖に起因する種々の疾病、例えば、肥満、
糖尿病、高インスリン血症等の糖尿病前駆症状、高脂血
症、動脈硬化症、心筋梗塞等の心臓疾患、胃炎、胃潰
瘍、十二指腸潰瘍等の胃腸病に罹患する人の数が増加し
ている。例えば、肥満は、飲食物中に含まれる糖質が消
化され、ブドウ糖となって体内に吸収されると血糖が上
昇し、その刺激によって膵臓から分泌されるインスリン
が脂肪細胞に働き、血液中のブドウ糖を脂肪細胞内に取
り込ませ、脂肪に変えるので脂肪細胞の肥大が起こり、
身体全体として脂肪の異常蓄積が起こって生じるものと
されている。また、糖尿病は、ブドウ糖が体内に吸収さ
れても、インスリンの分泌が不足したり（インスリン依
存型糖尿病）、また、インスリンの分泌が多くても、標
的組織でのインスリンの働きが充分でない（インスリン
非依存型糖尿病）ために、血液中のブドウ糖が筋肉や脂
肪組織細胞へ取り込まれ難くなり、さらに、肝臓におい
てグリコーゲンの分解や糖新生が促進され、過血糖症に
陥り、域値を越えたブドウ糖が腎臓から尿中に排泄され
ることにより起こるものといわれている。

【０００３】したがって、飲食物中の糖質がブドウ糖へ
と消化されるのを阻害する物質を投与して血糖の上昇を
抑制することは、肥満や糖尿病等の過血糖症状及び過血
糖に起因する種々の疾病の予防および治療において有用
である。また、糖質分解酵素阻害物質は、糖質の消化を
遅延させ急激な食後の血糖上昇を抑制し、糖尿病や肥満
を防ぐものとして注目されており、糖尿病薬として従来
使用されているスルホニル尿素系血糖降下剤が効果を奏
さないインスリン非依存型糖尿病などに対しても有用と
考えられる。さらに、糖尿病等において認められる脂質
代謝の異常を改善することは、高脂血症、動脈硬化症、
心筋梗塞等の心臓疾患の進展を防止する観点からも重要
である。

【０００４】現在、医薬品として使用されている糖質分
解酵素阻害物質としては、グルコバイ（アカルボース：
バイエル薬品）やベイスン（ボグリボース：武田薬品）
等が知られており、これら化合物は、動物試験や臨床試
験において食後の血糖の上昇抑制効果が確認され、抗肥
満、抗糖尿病に対する有効性も報告されている〔Res.Ex
p.Med.vol.175, 87(1979) 、日本農芸化学会誌vol.63,
217(1989), New Current vol.6, 2(1995) 、薬理と治
療、vol.19, 4105(1991)〕。

【０００５】また、２１世紀に向けて、疾病の治療より
も予防の必要性が叫ばれている。糖尿病や肥満等に対し
て、その苦難を思うとき、なんらかの予防措置が必要と
される。上記の予防措置は、医薬品により行うよりも食
品のように日常的に摂取されたり用いられているものに
より講じられることがより望ましいが、十分な血糖上昇
抑制活性や抗肥満活性を有し、かつ、安全な天然物質が
未だ知られていないため、有用な食品素材は提供されて
いないというのが実情であった。

【０００６】従って、医薬品として糖尿病や肥満等の過
血糖症状及び過血糖に起因する種々の疾病の治療、予防
剤として有効であることはもちろん、日常的に摂取、使
用される飲食物に配合することによっても、血糖上昇を
抑えることで、かかる症状及び疾病を改善あるいは予防
することのできる素材、原料の提供が課題として残され
ていた。更に、人間に限らず、動物、例えば家畜やペッ
トにとっても、最近は糖尿病や肥満が問題となってお
り、糖尿病や肥満を改善あるいは予防できる動物用飼
料、例えば家畜飼料やペットフードの素材、原料の提供
も望まれている。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】上記の状況に鑑み、本
発明は、糖質分解酵素を効果的に阻害し、かつ、人体に
対し有害な作用を示さない物質を提供することを目的と
する。

【０００８】

【課題を解決するための手段】すなわち、本発明に従え
ば、一般式（Ｉ）：

【０００９】

【化２】

【００１０】（式中、ｘは８，７または４、ｙは０，３
または２およびｚは１，２または３を示し、ｘが８のと
きｙは０およびｚは１を示し、ｘが７のときｙは０およ
びｚは２を示し、ｘが４のときｙは３およびｚは２を示
すかまたはｙは２およびｚは３を示し、Ｒ₁，Ｒ₂，Ｒ
₃，Ｒ₄およびＲ₅はｘが８または７のときＲ₄および
Ｒ₅は水素原子を示し、Ｒ₁とＲ₂は一緒になって酸素
原子を示し、Ｒ₃は水酸基を示すか、またはＲ₄および
Ｒ₅は水素原子を示し、Ｒ₁は水酸基を示し、Ｒ₂とＲ
₃が一緒になって酸素原子を示し、ｘが４のときＲ₁は
水素原子を示し、Ｒ₂とＲ₅は一緒になって酸素原子を
示し、Ｒ₄とＲ₃は一緒になって酸素原子を示す）で表
されるピロリジンアルカロイド化合物が提供される。

【００１１】本発明に従えば、また、前記ピロリジンア
ルカロイド化合物を活性成分として含有してなる糖質分
解酵素阻害剤が提供される。

【００１２】

【発明の実施の形態】本発明者らは、糖質分解酵素を効
果的に阻害し、かつ、人体に対して有害な作用を有さな
い物質を見出すべく、鋭意研究を重ねた結果、コウゾ
（ＢｒｏｕｓｓｏｎｉａｋａｚｉｎｏｋｉＳｉｅ
ｂ．）に含まれる成分がα−グルコシダーゼ、β−グル
コシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ等の糖質分解酵素を
効果的に阻害する作用を有することを見い出し、本発明
を完成した。

【００１３】本発明に係るピロリジンアルカロイド化合
物は、血糖上昇抑制作用または血糖降下作用を有し、前
記ピロリジンアルカロイド化合物を含有してなる糖質分
解酵素阻害剤は、過血糖症状及び過血糖に起因する種々
の疾病、例えば、肥満、糖尿病、高インスリン血症等の
糖尿病前駆症状、高脂血症、動脈硬化症、心筋梗塞等の
心臓疾患、胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍等の胃腸病の予
防または治療剤として、有用である。また本発明のピロ
リジンアルカロイド化合物は、飲食物または動物用飼料
において有用である。

【００１４】本発明のピロリジンアルカロイド化合物
は、新規の化合物であり、例えば、コウゾ（Ｂｒｏｕｓ
ｓｏｎｉａｋａｚｉｎｏｋｉＳｉｅｂ．）等の植物
から、抽出して得ることができる。コウゾは、クワ科
（Ｍｏｒａｃｅａｅ）に属する落葉低木で岩手県以南の
各地、朝鮮、台湾、中国中南部の人里に近い低木林、雑
木林に広く自生する。また、カミキとも呼ばれ製紙原料
として植栽されるが、栽培種はカジノキＢ．ｐａｐｙｒ
ｉｆｃｒａとの雑種と考えられ、大型で雌雄異株であ
る。なお、枝葉、果実、根は中国民間で利尿、滋養、活
血薬などとして薬用に供されているが、糖質分解酵素阻
害作用については報告されていない。

【００１５】なお、本発明において、ピロリジンアルカ
ロイド化合物は、その純品に限らず、それを含有する抽
出物として使用されてもよい。

【００１６】本発明のピロリジンアルカロイド化合物の
抽出に用いる溶剤としては、水、メタノールもしくはエ
タノールなどのアルコール類またはアセトンなどのケト
ン類等が利用される。これらの溶剤は、単独であって
も、または２種以上の溶剤の任意の混合溶剤のいずれで
あってもよいが、安全性の点で、水、エタノール、また
はこれらの混合溶剤を用いるのが好ましい。

【００１７】抽出の際の植物と溶剤との比率は特に限定
されるものではないが、植物１に対して溶剤２〜１００
０重量倍、特に抽出操作、効率の点で５〜１００重量倍
が好ましい。また、抽出温度は室温〜常圧下での溶剤の
沸点の範囲とするのが便利であり、抽出時間は抽出温度
等によって異なるが、数秒から２日間の範囲とするのが
好ましい。

【００１８】このようにして得られた植物抽出物は、更
にイオン交換剤処理法、吸着剤処理法、膜分離法、溶媒
分画法等の通常の精製法に付すことにより、高純度また
は単離された本発明のピロリジンアルカロイド化合物を
得ることができる。

【００１９】例えば、植物抽出物あるいはその溶媒分画
物を陽イオン交換カラムクロマトグラフィー、シリカゲ
ルカラムクロマトグラフィーおよび逆相カラムを用いた
ＨＰＬＣに付し、１種類以上の溶媒で溶出することによ
り、高純度の本発明のピロリジンアルカロイド化合物を
得ることができる。

【００２０】植物抽出物あるいはその溶媒分画物を陽イ
オン交換カラムクロマトグラフィーに付して分画を行う
には、例えば、これらを少量の水、メタノール、エタノ
ール等の溶媒あるいはこれらの混合溶媒に溶解し、Ａｍ
ｂｅｒｌｉｔｅＣＧ−５０（オルガノ) 、ＤＯＷＥＸ
５０Ｗ（室町化学工業）等の陽イオン交換カラムに吸
着させた後、水で十分に洗浄し、２．８％ＮＨ₄ＯＨ溶
液等の溶媒あるいはこれらとメタノール等の混合溶媒で
溶出させればよい。２つ以上の陽イオン交換カラムクロ
マトグラフィーを組み合わせることにより、より高純度
の本発明のピロリジンアルカロイド化合物を得ることが
できる。さらに高純度のものを得るためには、例えば、
クロマトレックスＮＨ−１０２０（富士シリシア化学）
等のシリカゲルカラムに吸着させた後、クロロホルム、
メタノール、エタノール等の溶媒あるいはこれらの混合
溶媒で溶出させればよい。

【００２１】さらには、例えば、ＡｓａｈｉＰａｋＯ
ＤＰ５０Ｅ（旭化成工業製）等の逆相カラムを用いた
ＨＰＬＣに吸着させた後、アセトニトリル、メタノー
ル、エタノール、水等の溶媒あるいはこれらの混合溶媒
で溶出させればよい。２種以上のクロマトグラフィーを
組み合わせることにより、より高純度の本発明のピロリ
ジンアルカロイド化合物を得ることができる。

【００２２】以上の方法により得られた本発明のピロリ
ジンアルカロイド化合物は、必要に応じて種々の酸を作
用させてその塩に変換することができる。さらに、その
塩は再結晶、カラムクロマトグラフィー等の手段で精製
することができる。本発明のピロリジンアルカロイド化
合物をその塩とするために利用される酸としては、塩
酸、硝酸、硫酸、リン酸、臭化水素酸等の無機酸または
マレイン酸、フマル酸、酒石酸、乳酸、クエン酸、酢
酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、アジ
ピン酸、バルミチン酸、タンニン酸等の有機酸を挙げる
ことができる。

【００２３】本発明のピロリジンアルカロイド化合物を
糖質分解酵素阻害剤として医薬品に使用する場合、形態
としては、経口剤、例えば散剤、顆粒剤、錠剤、カプセ
ル剤、丸剤、トローチ、内用液剤、懸濁剤、乳剤、シロ
ップ剤等を挙げることができ、これらを症状に応じてそ
れぞれ単独で、または組み合わせて使用することができ
る。これら各種製剤は、常法に従って目的に応じて主薬
に賦形剤、結合剤、防腐剤、酸化安定剤、崩壊剤、滑沢
剤、矯味剤などの医薬の製剤技術分野において通常使用
しうる既知の補助剤を用いて製剤化することができる。

【００２４】利用される担体としては、剤形に応じた通
常用いられるものを特に制限なく使用することができる
が、好ましいものの例としては、デンプン、乳糖、マン
ニット、カルボキシメチルセルロース、コーンスター
チ、無機塩等の固形担体や蒸留水、生理食塩水、ブドウ
糖水溶液、エタノール等のアルコール、プロピレングリ
コール、ポリエチレングリコール等の液体担体や各種の
動植物油、白色ワセリン、パラフィン、ロウ等の油性担
体等が挙げられる。

【００２５】また、本発明の糖質分解酵素阻害剤を過血
糖症状および過血糖に起因する種々の疾病の予防及び治
療薬として投与する場合、投与の目的、投与対象者の年
齢、体重、状態等により異なるが、経口的には、通常、
単回または数回に分割して、本発明のピロリジンアルカ
ロイド化合物が成人１日当たり、好ましくは０．０５mg
〜５００mg、特に好ましくは０．１mg〜５０mgで投与さ
れる。

【００２６】また、本発明のピロリジンアルカロイド化
合物は、そのまま、あるいは従来食品に用いられている
各種成分と共に配合することにより肥満、糖尿病等の過
血糖症状及び過血糖に起因する種々の疾病の改善又は予
防のための飲食物に調製される。これら飲食物の製造に
は、その種類に応じて種々の成分を利用することがで
き、例えば、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソ
ルビトール、ステビオサイド、コーンシロップ、乳糖、
クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−ア
スコルビン酸、ｄ−α−トコフェロール、エリソルビン
酸ナトリウム、グリセリン、プロピレングリコール、グ
リセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステ
ル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステ
ル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、アラビアガ
ム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒
天、ビタミンＢ類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カ
ルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、色素、香料、
保存剤等、通常の食品原料として使用されているものを
適宜配合することにより製造することができる。製造さ
れる飲食物の形態としては、固形食品、クリーム状ある
いはジャム状の半流動食品、ゲル状食品、飲料等あらゆ
る飲食物形態にすることが可能であり、例えば、カプセ
ル、顆粒、タブレット、ドリンク剤等の形態や、常用さ
れている任意の基材を用いて清涼飲料、ジュース、コー
ヒー、紅茶、リキュール、牛乳、乳清飲料、乳酸菌飲
料、飴（キャンデー）、チューインガム、チョコレー
ト、グミ、ヨーグルト、アイスクリーム、プディング、
水羊羹などとすることができる。

【００２７】更に、本発明のピロリジンアルカロイド化
合物は、そのままあるいは通常の製造に用いられる担体
と組み合わせて、粉末、顆粒、ペースト、カプセル、シ
ロップ、固形状、ゲル状、液状、懸濁液、乳液等の形態
として肥満や糖尿病等の過血糖症状及び過血糖に起因す
る種々の疾病の改善あるいは予防のための飲食物の製造
を目的として使用される飲食物用添加用剤として用いら
れ、これは飲食物の製造時、または製造された製品に添
加することができる。

【００２８】本発明のピロリジンアルカロイド化合物
を、飲食物に配合する場合は、本発明のピロリジンアル
カロイド化合物は０．０００１〜０．１重量％の濃度範
囲とすることが望ましい。

【００２９】また、本発明のピロリジンアルカロイド化
合物は、その目的に応じて通常用いられる各種成分と適
宜配合することにより動物用飼料に調製され、例えば家
畜飼料やペットフード等として用いられる。

【００３０】本発明のピロリジンアルカロイド化合物
は、動物用飼料への添加用剤として使用することもでき
る。この添加用剤は、本発明のピロリジンアルカロイド
化合物をそのまま、あるいは通常の製造に用いられる担
体と組み合わせて、粉末、顆粒、ペースト、カプセル、
シロップ、固形状、ゲル状、液状、懸濁液、乳液等の形
態として利用することができる。

【００３１】

【発明の効果】本発明のピロリジンアルカロイド化合物
は、消化酵素の一つである糖質分解酵素の活性を阻害す
ることにより、食後の血糖の上昇を抑制することで、糖
尿病や肥満等の過血糖症状及び過血糖に起因する種々の
疾病、例えば肥満、糖尿病、高インスリン血症などの糖
尿病前駆症状、高脂血症、動脈硬化症、心筋梗塞等の心
臓疾患、胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍等の胃腸病の治療
・予防効果を示すものである。また、本発明のピロリジ
ンアルカロイド化合物は、例えば、古くから飲用されて
いる漢方薬に含まれる成分であるので、安全性が高く、
体内に摂取されても心配がない。したがって、本発明の
ピロリジンアルカロイド化合物は、これを血糖上昇抑制
剤、抗肥満剤、抗糖尿病薬等の医薬品として、糖尿病や
肥満等の過血糖症状及び過血糖に起因する種々の疾病、
例えば、肥満、糖尿病、高インスリン血症等の糖尿病前
駆症状、高脂血症、動脈硬化症、心筋梗塞等の心臓疾
患、胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍等の胃腸病の治療、予
防等に利用できる他、継続的に摂取することにより、血
糖の上昇を抑制する飲食物、例えば、健康な人はもちろ
ん、太り気味の人のためのダイエット食品や、糖尿病患
者用食品の製造を、従来よりも容易にし、糖尿病や肥満
を改善あるいは予防するのに貢献することができる。

【００３２】更に、本発明のピロリジンアルカロイド化
合物を使用することにより、ペットなどの動物用のダイ
エット食品や、糖尿病の動物のための食品の製造も容易
になり、動物の糖尿病や肥満を改善あるいは予防するの
にも貢献することができる。

【００３３】

【実施例】次に製造例及び実施例を挙げ、本発明を更に
詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例等になんら
制約されるものではない。

【００３４】実施例１コウゾからピロリジンアルカロ
イド化合物の分離細切したコウゾの枝部９．５kgに熱水１２０リットルを
加え、加熱下３時間抽出した。抽出液は濾別した後、熱
水抽出エキスを陽イオン交換カラムクロマトグラフィー
（ＡｍｂｅｒｌｉｔｅＣＧ−５０（オルガノ：６．５
×３０cm）４本）に付し、水およびメタノールで洗浄
後、メタノールを５０％含んだ２．８％ＮＨ₄ＯＨ溶液
で溶出して粗塩基性画分４６．０ｇを得た。さらに粗塩
基性画分を陽イオン交換カラムクロマトグラフィー（Ｄ
ＯＷＥＸ５０Ｗ（室町化学工業：５．０×３０cm）４
本）に付し、pH５．７のＨＣＯＯＮＨ₄緩衝液で洗浄
後、吸着成分は２．８％ＮＨ₄ＯＨ溶液を用いてグラジ
エント溶出した。溶出画分はさらにシリカゲルカラムク
ロマトグラフィー（クロマトレックスＮＨ−ＤＭ１０２
０（富士シリシア化学））に供し、クロロホルム−メタ
ノール（５：１）混合液で分離した後、高速液体クロマ
トグラフィー（カラム：ＡｓａｈｉＰａｋＯＤＰ５０
Ｅ（旭化成工業）、溶出溶媒：１２％アセトニトリル−
０．１％ＮＨ₄ＯＨ）で精製して下記化合物１（１１３
mg）、化合物２（１０６mg）、化合物３（５２mg）、化
合物４（５８mg）、化合物５（７０mg）および化合物６
（７５mg）を得た。得られた化合物の構造式及び物性デ
ータを下記する。

【００３５】化合物１

【００３６】

【化３】

【００３７】無色微細結晶、mp１０３〜１０５℃ ［α］_D＋４．７°（ＭｅＯＨ，ｃ＝１．０６）ＨＲ−ＳＩＭＳ：ｍ／ｚ３６２．２５３７（Ｍ＋Ｈ）⁺
Ｃ₁₈Ｈ₃₅ＮＯ₆ ＩＲ（ＫＢｒ）：３３６９，１７０３cm^-1 ¹ Ｈ−ＮＭＲ（３００MHz ピリジン−ｄ₅）：δ ３．
８５（ｍ，２−Ｈ），４．７２（ｔ，Ｊ＝６．４，３−
Ｈ），４．９６（ｔ，Ｊ＝６．４，４−Ｈ），３．６８
（ｔ，Ｊ＝６．４，５−Ｈ），４．１５（ｓ，１′−
Ｈ），１．１５〜２．００（ｓ，２′〜７′−Ｈ），
１．５５（ｓ，８′−Ｈ），２．６１（ｔ，Ｊ＝７．
３，９′−Ｈ），２．７１（ｔ，Ｊ＝７．３，１１′−
Ｈ），１．９５（ｑｕｉｎ，Ｊ＝７．３，１２′−
Ｈ），３．９０（ｔ，Ｊ＝７．３，１３′−Ｈ），４．
２２（ｍ，ＣＨ₂ＯＨ）¹³ Ｃ−ＮＭＲ（７５MHz ピリジン−ｄ₅）：δ ６５．
９９（Ｃ−２），８０．７２（Ｃ−３），８０．３７
（Ｃ−４），６７．６８（Ｃ−５），７４．１４（Ｃ−
１′），３５．１５（Ｃ−２′），２９．９５（Ｃ−
３′），３０．３９（Ｃ−４′），２９．７１（Ｃ−
５′），３０．０６（Ｃ−６′），２８．１０（Ｃ−
７′），２４．４２（Ｃ−８′），４３．０６（Ｃ−
９′），２１０．９８（Ｃ−１０′），３９．７４（Ｃ
−１１′），２６．９４（Ｃ−１２′），６１．５９
（Ｃ−１３′），６３．６８（Ｃ−１″）

【００３８】化合物２

【００３９】

【化４】

【００４０】無色微細結晶、mp１０５〜１０７℃ ［α］_D＋１３．５°（ＭｅＯＨ，ｃ＝０．９３）ＨＲ−ＳＩＭＳ：ｍ／ｚ３６２．２５４１（Ｍ＋Ｈ）⁺
Ｃ₁₈Ｈ₃₅ＮＯ₆ ＩＲ（ＫＢｒ）：３３９７，１７０７cm^-1 ¹ Ｈ−ＮＭＲ（３００MHz ピリジン−ｄ₅）：δ ３．
８２（ｍ，２−Ｈ），４．７１（ｔ，Ｊ＝６．４，３−
Ｈ），４．９６（ｔ，Ｊ＝６．４，４−Ｈ），３．６５
（ｔ，Ｊ＝６．４，５−Ｈ），４．１５（ｍ，１′−
Ｈ），１．１５〜１．７０（ｓ，２′〜６′−Ｈ），
１．５５（ｓ，７′−Ｈ），２．３５（ｔ，Ｊ＝７．
３，８′−Ｈ），２．４９（ｔ，Ｊ＝７．３，１０′−
Ｈ），１．７５（ｓ，１１′−Ｈ），１．８７（ｓ，１
２′−Ｈ），３．８７（ｔ，Ｊ＝７．３，１３′−
Ｈ），４．２７（ｍ，ＣＨ₂ＯＨ）¹³ Ｃ−ＮＭＲ（７５MHz ピリジン−ｄ₅）：δ ６５．
６６（Ｃ−２），８０．３６（Ｃ−３），８０．１９
（Ｃ−４），６７．３２（Ｃ−５），７３．７８（Ｃ−
１′），３４．７９（Ｃ−２′），２９．９２（Ｃ−
３′），２９．７２（Ｃ−４′），２９．４０（Ｃ−
５′），２６．６１（Ｃ−６′），２４．０４（Ｃ−
７′），４２．６０（Ｃ−８′），２１０．５７（Ｃ−
９′），４２．４８（Ｃ−１０′），２０．８５（Ｃ−
１１′），３２．９９（Ｃ−１２′），６１．６８（Ｃ
−１３′），６３．３３（Ｃ−１″）

【００４１】化合物３

【００４２】

【化５】

【００４３】無色微細結晶、ニンヒドリン陽性（黄色）〔α〕_D＋１７．５°（ＭｅＯＨ，ｃ＝０．４３）ＨＲ−ＳＩＭＳ：ｍ／ｚ３６０．２３７４（Ｍ−Ｈ）⁺
Ｃ₁₈Ｈ₃₅ＮＯ₆ ＩＲ（液膜法）：３３１７cm^-1（ＯＨ，ＮＨ）

【００４４】化合物４

【００４５】

【化６】

【００４６】無色微細結晶、ニンヒドリン陽性（黄色）〔α〕_D＋１５．５°（ＭｅＯＨ，ｃ＝０．５）ＨＲ−ＳＩＭＳ：ｍ／ｚ３６０．２３７６（Ｍ−Ｈ）⁺
Ｃ₁₈Ｈ₃₅ＮＯ₆ ＩＲ（液膜法）：３３２０cm^-1（ＯＨ，ＮＨ）

【００４７】化合物５

【００４８】

【化７】

【００４９】ニンヒドリン陽性（黄色）〔α〕_D＋１７．５°（ＭｅＯＨ，ｃ＝０．４３）ＨＲ−ＳＩＭＳ：ｍ／ｚ３６０．２３７４（Ｍ＋Ｈ）⁺
Ｃ₁₈Ｈ₃₃ＮＯ₆ ＩＲ（液膜法）：３３１７cm^-1（ＯＨ，ＮＨ）

【００５０】化合物６

【００５１】

【化８】

【００５２】ニンヒドリン陽性（黄色）〔α〕_D＋１５．５°（ＭｅＯＨ，ｃ＝０．５）ＨＲ−ＳＩＭＳ：ｍ／ｚ３６０．２３７６（Ｍ＋Ｈ）⁺
Ｃ₁₈Ｈ₃₃ＮＯ₆ ＩＲ（液膜法）：３３２０cm^-1（ＯＨ，ＮＨ）

【００５３】試験例１：α−グルコシダーゼ阻害活性実施例１で得た化合物１〜６について、下記方法でα−
グルコシダーゼ阻害活性を測定した。その結果を表１に
示す。

【００５４】（α−グルコシダーゼ阻害活性の測定法）
α−グルコシダーゼとしては、酵母由来のα−グルコシ
ダーゼ（東洋紡社製）を用いた。α−グルコシダーゼの
酵素活性は、スクロースの加水分解により生成するグル
コースおよびフラクトースの還元力の増加をジニトロサ
リチル酸を用いた比色定量をすることにより測定した。
具体的には、まず、下記組成の酵素反応液を試験管に入
れ、３７℃で３０分間反応させた。

【００５５】酵素反応液組成量１００mMスクロースのリン酸カリウム緩衝液^*溶液０．１７５ml α−グルコシダーゼ溶液０．１００ml 化合物１，２，３，４，５又は６０．０２５ml リン酸カリウム緩衝液^* ０．２００ml ＊リン酸カリウム緩衝液としては、５０mMリン酸カリウム緩衝液（pH７．０）を用いた。

【００５６】反応終了後、これに０．５mlのジニトロサ
リチル酸溶液（１％水酸化ナトリウム、５％酒石酸カリ
ウムナトリウム、０．２％フェノール、１％ジニトロサ
リチル酸、０．０５％亜硫酸ナトリウム）を加え、１０
０℃で１０分間、グルコース等の還元糖と反応させ、発
色させた。発色終了後、吸光度５４０nmの吸収を測定
し、下記式からα−グルコシダーゼ阻害活性を求めた。
なお、対照には化合物１〜６の代わりに５０mMリン酸カ
リウム緩衝液（pH７．０）を用いたものを利用した。ま
た、それぞれのブランクとして、酵素溶液の代わりに上
記リン酸カリウム緩衝液を用いた。

【００５７】阻害率（％）＝［（（Ａ−Ｂ）−（Ｃ−
Ｄ））／（Ａ−Ｂ）］×１００但し、Ａ：対照溶液の吸光度Ｂ：対照溶液のブランクの吸光度Ｃ：試料溶液の吸光度Ｄ：試料溶液のブランクの吸光度

【００５８】上記のα−グルコシダーゼ阻害活性の結果
から、化合物１〜６のα−グルコシダーゼの５０％阻害
率濃度（ＩＣ₅₀値）を求め、表１に示した。

【００５９】表１ ──────────────────── 被験試料ＩＣ₅₀値（μｇ／ml） ─────── ────────── 化合物１３０化合物２３０化合物３２８化合物４２８化合物５６０化合物６６０ ─────────────────────

【００６０】試験例２ β−グルコシダーゼ阻害活性実施例１で得た化合物１，２，５および６について、下
記方法でβ−グルコシダーゼ阻害活性を測定した。その
結果を表２に示す。

【００６１】（β−グルコシダーゼ阻害活性の測定法）
β−グルコシダーゼとしては、Ｓｗｅｅｔａｌｍｏｎ
ｄ由来のβ−グルコシダーゼ(Sigma社製）を用いた。β
−グルコシダーゼの酵素活性は、ｐ−ニトロフェニル−
β−Ｄ−グルコピラノシド（ｐＮＰ−β−Ｇｌｃ）の加
水分解により生成するｐ−ニトロフェノールの増加を吸
光度４００nmで定量することにより測定した。具体的に
は、まず、下記組成の酵素反応液を試験管に入れ、３７
℃で１５分間反応させた。

【００６２】酵素反応液組成量２０ｍＭｐＮＰ−β−Ｇｌｃの酢酸緩衝液^*溶液０．２５０ml β−グルコシダーゼ溶液０．２５０ml 化合物１，２，５または６０．０２５ml 酢酸緩衝液^* ０．４７５ml ───────────────────────────────── ＊酢酸緩衝液としては、１００mM酢酸緩衝液（pH５．０）を用いた。

【００６３】反応後、これに１．０mlの０．２ＭＮａ
₂ＣＯ₃を加え、反応終了した。終了後、吸光度４００
nmの吸収を測定し、下記式からβ−グルコシダーゼ阻害
活性を求めた。なお、対照には化合物１，２，５および
６の代わりに１００mM酢酸緩衝液（pH５．０）を用いた
ものを利用した。また、それぞれのブランクとして、酵
素溶液の代わりに上記酢酸緩衝液を用いた。

【００６４】阻害率（％）＝［（（Ａ−Ｂ）−（Ｃ−
Ｄ））／（Ａ−Ｂ）］×１００但し、Ａ：対照溶液の吸光度Ｂ：対照溶液のブランクの吸光度Ｃ：試料溶液の吸光度Ｄ：試料溶液のブランクの吸光度

【００６５】上記のβ−グルコシダーゼ阻害活性の結果
から、化合物１，２，５および６のβ−グルコシダーゼ
の５０％阻害率濃度（ＩＣ₅₀値）を求め、表２に示し
た。

【００６６】表２被験試料ＩＣ₅₀値（μｇ／ml） ─────── ────────── 化合物１０．２化合物２３．６化合物５２８化合物６２８ ────────────────────

【００６７】試験例３ β−ガラクトシダーゼ阻害活性実施例１で得た化合物１〜６について、下記方法でβ−
ガラクトシダーゼ阻害活性を測定した。その結果を表３
に示す。

【００６８】（β−ガラクトシダーゼ阻害活性の測定
法）β−ガラクトシダーゼとしては、牛肝臓由来のβ−
ガラクトシダーゼ(Sigma社製）を用いた。β−ガラクト
シダーゼの酵素活性は、ｐ−ニトロフェニル−β−ガラ
クトピラノシド（ｐＮＰ−β−Ｇａｌ）の加水分解によ
り生成するｐ−ニトロフェノールの増加を吸光度４００
nmで定量することにより測定した。具体的には、まず、
下記組成の酵素反応液を試験管に入れ、３７℃で１５分
間反応させた。

【００６９】酵素反応液組成量２０mM ｐＮＰ−β−Ｇａｌの酢酸緩衝液^*溶液０．２５０ml β−ガラクトシダーゼ溶液０．２５０ml 化合物１，２，３，４，５または６０．０２５ml 酢酸緩衝液^* ０．４７５ml ───────────────────────────────── ＊酢酸緩衝液としては、１００mM酢酸緩衝液（pH５．０）を用いた。

【００７０】反応後、これに１．０mlの０．２ＭＮａ
₂ＣＯ₃を加え、反応終了した。終了後、吸光度４００
nmの吸収を測定し、下記式からβ−ガラクトシダーゼ阻
害活性を求めた。なお、対照には、化合物１〜６の代わ
りに１００mM酢酸緩衝液（pH５．０）を用いたものを利
用した。また、それぞれのブランクとして、酵素溶液の
代わりに上記酢酸緩衝液を用いた。

【００７１】阻害率（％）＝［（（Ａ−Ｂ）−（Ｃ−
Ｄ））／（Ａ−Ｂ）］×１００但し、Ａ：対照溶液の吸光度Ｂ：対照溶液のブランクの吸光度Ｃ：試料溶液の吸光度Ｄ：試料溶液のブランクの吸光度

【００７２】上記のβ−ガラクトシダーゼ阻害活性の結
果から、化合物１〜６のβ−ガラクトシダーゼの５０％
阻害率濃度（ＩＣ₅₀値）を求め、表３に示した。

【００７３】表３ ──────────────────── 被験試料ＩＣ₅₀値（μｇ／ml） ─────── ────────── 化合物１０．０５化合物２１．５化合物３１．４化合物４１．４化合物５１．４化合物６１．４ ────────────────────

【００７４】実施例２：錠剤化合物１を用い、錠剤を製造した。即ち、２２０mgの化
合物１を同量の乳糖及びステアリン酸マグネシウム５ｇ
及び微結晶セルロース４９．５６ｇと混合し、この混合
物を単発式打錠機にて打錠し、１錠中０．８８mgの化合
物１を含有する直径９mm、重量２２０mgの錠剤を製造し
た。

【００７５】実施例３：顆粒剤実施例２（錠剤）で得た錠剤を粉砕、整粒し、篩別して
２０〜５０メッシュの顆粒剤を得た。

【００７６】実施例４：トローチ下記の組成により、トローチを製造した。（組成）（配合％）アラビアガム８．０ブドウ糖１１．０ソルビトール３０．０デキストリン３０．０化合物１０．０２リン酸第二カリウム０．２リン酸第一カリウム０．１乳糖１７．０ステアリン酸マグネシウム３．６８

【００７７】実施例５：キャンデー下記の組成で、キャンデーを製造した。（組成）（配合％）ソルビトール９９．７４５香料０．２化合物２０．００５ソルビトールシード０．０５

【００７８】実施例６：ジュース下記の組成により、ジュースを製造した。（組成）（配合％）冷凍濃縮温州みかん果汁６．０ステビオサイド０．０５アラビアガム０．０１果糖ブドウ糖液糖１．０クエン酸０．２Ｌ−アスコルビン酸０．０２香料０．２色素０．１化合物１０．０００５水９２．４１９５

【００７９】実施例７：チューインガム下記の組成で、チューインガムを製造した。（組成）（配合％）チューインガムベース２０．０ソルビトール３３．０乳糖２２．０水飴２０．０軟化剤４．０香料０．８９色素０．１化合物２０．０１

【００８０】実施例８：チョコレート下記の組成で、チョコレートを製造した。（組成）（配合％）チョコレート４５．０パラチノース５．０デキストリン１０．０カカオバター２０．０全脂粉乳１９．９９９化合物２０．００１

【００８１】実施例９：ペットフード（ドッグフード）下記の組成で、ペットフード（ドッグフード、ドライタ
イプ、水分１０％）を製造した。（組成）（配合％）ミートミール３９．９９チキンエキス５．０植物油脂５．０炭水化物３７．０灰分カルシウム０．１リン０．０８ナトリウム０．０２カリウム０．０３鉄５．０×１０^-5 ビタミン類ビタミンＡ１０００ＩＵビタミンＢ１３．０×１０^-4 ビタミンＢ２３．０×１０^-4 ビタミンＤ１００ＩＵビタミンＥ１０ＩＵナイアシン５．０×１０^-3 パントテン酸５．０×１０^-3 水分１０．０化合物１０．０１

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ａ６１Ｋ 31/40 ＡＥＤＡ６１Ｋ 31/40 ＡＥＤ // Ｃ０７Ｍ 7:00

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】一般式（Ｉ）：【化１】（式中、ｘは８，７または４、ｙは０，３または２およ
びｚは１，２または３を示し、ｘが８のときｙは０およびｚは１を示し、ｘが７のときｙは０およびｚは２を示し、ｘが４のときｙは３およびｚは２を示すかまたはｙは２
およびｚは３を示し、Ｒ₁，Ｒ₂，Ｒ₃，Ｒ₄およびＲ₅はｘが８または７の
ときＲ₄およびＲ₅は水素原子を示し、Ｒ₁とＲ₂は一
緒になって酸素原子を示し、Ｒ₃は水酸基を示すか、ま
たはＲ₄およびＲ₅は水素原子を示し、Ｒ₁は水酸基を
示し、Ｒ₂とＲ ₃が一緒になって酸素原子を示し、ｘが４のときＲ₁は水素原子を示し、Ｒ₂とＲ₅は一緒
になって酸素原子を示し、Ｒ₄とＲ₃は一緒になって酸素原子を示す）で表される
ピロリジンアルカロイド化合物。
【請求項２】請求項１記載のピロリジンアルカロイド
化合物を活性成分として含有してなる糖質分解酵素阻害
剤。