JPH09286741A - 創傷治癒 - Google Patents
創傷治癒Info
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- JPH09286741A JPH09286741A JP8204796A JP20479696A JPH09286741A JP H09286741 A JPH09286741 A JP H09286741A JP 8204796 A JP8204796 A JP 8204796A JP 20479696 A JP20479696 A JP 20479696A JP H09286741 A JPH09286741 A JP H09286741A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 瘢痕形成を阻害して創傷治癒を遅らせる方法
を提供する。 【解決手段】 患者の創傷部位に有効量のＡｇａｒｉｃ
ｕｓ ｂｉｓｐｏｒｕｓレクチンを適用する。
を提供する。 【解決手段】 患者の創傷部位に有効量のＡｇａｒｉｃ
ｕｓ ｂｉｓｐｏｒｕｓレクチンを適用する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は線維症の阻害、特に
創傷治癒に関する。
創傷治癒に関する。
【０００２】
【従来の技術】細胞間に位置する細胞外基質は、線維芽
細胞によって合成される原線維コラーゲンを含んでい
る。コラーゲンは、創傷治癒の不可欠な部分である組織
の収縮に関与する。収縮は組織の欠損を塞ぐのに役立つ
が、過剰に収縮すると組織が変形や湾曲を起こす。薬剤
の瘢痕阻害及び最適損傷治癒促進能力についての重要な
ｉｎ ｖｉｔｒｏ試験によれば、薬剤と一緒に培養した
線維芽細胞をコラーゲンゲル内に播種すると、コラーゲ
ンの収縮が阻害される。
細胞によって合成される原線維コラーゲンを含んでい
る。コラーゲンは、創傷治癒の不可欠な部分である組織
の収縮に関与する。収縮は組織の欠損を塞ぐのに役立つ
が、過剰に収縮すると組織が変形や湾曲を起こす。薬剤
の瘢痕阻害及び最適損傷治癒促進能力についての重要な
ｉｎ ｖｉｔｒｏ試験によれば、薬剤と一緒に培養した
線維芽細胞をコラーゲンゲル内に播種すると、コラーゲ
ンの収縮が阻害される。
【０００３】レクチン存在下での線維芽細胞のコラーゲ
ンゲル培養はＨ． Ａｓａｇａ，Ｊ． Ｃｅｌｌ Ｓｃ
ｉ． １０１， ６２５−６３３（１９９２）に記載さ
れている。レクチンは、細胞表面上に存在する炭水化物
基に特異結合し得る非免疫源のタンパク質群である。レ
クチンは他の特性については同一種ではない。従って、
多数のレクチンがマイトジェンであり、即ち細胞増殖を
刺激する。その例はピーナツアグルチニン（ＰＮＡ）や
コンコナバリンＡ（Ｃｏｎ−Ａ）である。他方では、Ａ
ｇａｒｉｃｕｓ ｂｉｓｐｏｒｕｓアグルチニン又はレ
クチン（ＡＢＡ又はＡＢＬ）がケラチノサイト（表皮細
胞）の増殖を阻害することが判明している。ＰＣＴ出願
ＷＯ９４／０６４６２号（Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｔｅｃｈｎ
ｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ Ｌｔｄ．）やＬ． Ｙｕ等，
Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５３， ４６２７−４６３
２， １９９３を参照されたい。フィトヘムアグルチニ
ン（ＰＨＡ）とも称するＰｈａｓｅｏｌｕｓ ｖｕｌｇ
ａｒｉｓ（インゲンマメ）レクチンはマイトジェン活性
の低いエリトロアグルチニン（ＰＨＡ−Ｅ）及びマイト
ジェン活性の高いロイコアグルチニン（ＰＨＡ−Ｌ）か
らなる。Ｃｏｎ−Ａはヘルペス疱疹ウイルス１型の感染
性を阻害するが、フィトヘムアグルチニンＰ（ＰＨＡ−
Ｐ）、コムギ胚芽アグルチニン（ＷＧＡ）及びアメリカ
ヤマゴボウマイトジェン（ＰＷＭ）はこのような作用を
示さなかった。ヨーロッパ特許出願公開第１７３ ０９
２号の３ページに記載されているＩｔｏ及びＢａｒｒｏ
ｎ，Ｊ． Ｖｉｒｏｌ． １３， １３１２−１３１８
（１９７４）を参照されたい。
ンゲル培養はＨ． Ａｓａｇａ，Ｊ． Ｃｅｌｌ Ｓｃ
ｉ． １０１， ６２５−６３３（１９９２）に記載さ
れている。レクチンは、細胞表面上に存在する炭水化物
基に特異結合し得る非免疫源のタンパク質群である。レ
クチンは他の特性については同一種ではない。従って、
多数のレクチンがマイトジェンであり、即ち細胞増殖を
刺激する。その例はピーナツアグルチニン（ＰＮＡ）や
コンコナバリンＡ（Ｃｏｎ−Ａ）である。他方では、Ａ
ｇａｒｉｃｕｓ ｂｉｓｐｏｒｕｓアグルチニン又はレ
クチン（ＡＢＡ又はＡＢＬ）がケラチノサイト（表皮細
胞）の増殖を阻害することが判明している。ＰＣＴ出願
ＷＯ９４／０６４６２号（Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｔｅｃｈｎ
ｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ Ｌｔｄ．）やＬ． Ｙｕ等，
Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５３， ４６２７−４６３
２， １９９３を参照されたい。フィトヘムアグルチニ
ン（ＰＨＡ）とも称するＰｈａｓｅｏｌｕｓ ｖｕｌｇ
ａｒｉｓ（インゲンマメ）レクチンはマイトジェン活性
の低いエリトロアグルチニン（ＰＨＡ−Ｅ）及びマイト
ジェン活性の高いロイコアグルチニン（ＰＨＡ−Ｌ）か
らなる。Ｃｏｎ−Ａはヘルペス疱疹ウイルス１型の感染
性を阻害するが、フィトヘムアグルチニンＰ（ＰＨＡ−
Ｐ）、コムギ胚芽アグルチニン（ＷＧＡ）及びアメリカ
ヤマゴボウマイトジェン（ＰＷＭ）はこのような作用を
示さなかった。ヨーロッパ特許出願公開第１７３ ０９
２号の３ページに記載されているＩｔｏ及びＢａｒｒｏ
ｎ，Ｊ． Ｖｉｒｏｌ． １３， １３１２−１３１８
（１９７４）を参照されたい。
【０００４】Ｈ． Ａｓａｇａ等（上掲）は、種々のレ
クチンが細胞表面レセプターとコラーゲンとの相互作用
に影響し得るかどうかを調べた。この目的のために、彼
らはコラーゲンゲル培養試験を使用した。正常真皮の移
植片に由来するヒト皮膚線維芽細胞をレクチン含有溶液
中に懸濁させ、コラーゲンゲル調製物と混合して、線維
芽細胞をゲル中に包埋させた。培養中のコラーゲンゲル
の収縮度を測定した。レクチン：Ｃｏｎ−Ａ、ＷＧＡ、
Ｒｉｃｉｎｕｓ ｃｏｍｍｕｎｉｓアグルチニン−６０
（ＲＣＡ）、Ｐｈａｓｅｏｌｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓア
グルチニン（ＰＨＡ）、Ｐｉｓｕｍ ｓａｔｉｖｕｍア
グルチニン（ＰＳＡ）及びヒラマメ種子アグルチニン
（ＬＣＡ）は、線維芽細胞が媒介するコラーゲンゲルの
収縮を阻害した。しかしながら、他のレクチン、即ちダ
イズアグルチニン（ＳＢＡ）、Ａｇａｒｉｃｕｓ ｂｉ
ｓｐｏｒｕｓアグルチニン（ＡＢＡ）、ピーナツアグル
チニン（ＰＮＡ）及びアメリカヤマゴボウマイトジェン
（ＰＷＭ）はゲルの収縮に作用しなかった。
クチンが細胞表面レセプターとコラーゲンとの相互作用
に影響し得るかどうかを調べた。この目的のために、彼
らはコラーゲンゲル培養試験を使用した。正常真皮の移
植片に由来するヒト皮膚線維芽細胞をレクチン含有溶液
中に懸濁させ、コラーゲンゲル調製物と混合して、線維
芽細胞をゲル中に包埋させた。培養中のコラーゲンゲル
の収縮度を測定した。レクチン：Ｃｏｎ−Ａ、ＷＧＡ、
Ｒｉｃｉｎｕｓ ｃｏｍｍｕｎｉｓアグルチニン−６０
（ＲＣＡ）、Ｐｈａｓｅｏｌｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓア
グルチニン（ＰＨＡ）、Ｐｉｓｕｍ ｓａｔｉｖｕｍア
グルチニン（ＰＳＡ）及びヒラマメ種子アグルチニン
（ＬＣＡ）は、線維芽細胞が媒介するコラーゲンゲルの
収縮を阻害した。しかしながら、他のレクチン、即ちダ
イズアグルチニン（ＳＢＡ）、Ａｇａｒｉｃｕｓ ｂｉ
ｓｐｏｒｕｓアグルチニン（ＡＢＡ）、ピーナツアグル
チニン（ＰＮＡ）及びアメリカヤマゴボウマイトジェン
（ＰＷＭ）はゲルの収縮に作用しなかった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】今回驚くべきことに、
Ｈ． Ａｓａｇａ等による論文とは反対に、Ａｇａｒｉ
ｃｕｓ ｂｉｓｐｏｒｕｓアグルチニン（ＡＢＡ＝ＡＢ
Ｌ）が線維芽細胞によるコラーゲンゲルの収縮を阻害
し、従って創傷治癒の線維芽細胞依存性を抑制するのに
有用であることが知見された。特に、ＡＢＡは創傷治癒
や収縮プロセスを阻害する。細胞依存性コラーゲン収縮
は創傷治癒速度で重要な役割を果たすので、瘢痕形成を
阻害して創傷治癒を遅らせるにはこのような収縮速度を
低下させることが重要である。
Ｈ． Ａｓａｇａ等による論文とは反対に、Ａｇａｒｉ
ｃｕｓ ｂｉｓｐｏｒｕｓアグルチニン（ＡＢＡ＝ＡＢ
Ｌ）が線維芽細胞によるコラーゲンゲルの収縮を阻害
し、従って創傷治癒の線維芽細胞依存性を抑制するのに
有用であることが知見された。特に、ＡＢＡは創傷治癒
や収縮プロセスを阻害する。細胞依存性コラーゲン収縮
は創傷治癒速度で重要な役割を果たすので、瘢痕形成を
阻害して創傷治癒を遅らせるにはこのような収縮速度を
低下させることが重要である。
【０００６】
【課題を解決するための手段】従って、本発明の一態様
では、患者の創傷部位に有効量のＡＢＬを適用すること
からなる患者の創傷治癒速度を抑制する方法を提供す
る。
では、患者の創傷部位に有効量のＡＢＬを適用すること
からなる患者の創傷治癒速度を抑制する方法を提供す
る。
【０００７】本発明は更に、創傷治癒を助けるために使
用する処方物の製造でのＡＢＬの使用を提供する。
用する処方物の製造でのＡＢＬの使用を提供する。
【０００８】本発明が特に有用であるタイプの創傷は、
緑内障症例での眼圧低下のための眼手術で起きる創傷で
ある。
緑内障症例での眼圧低下のための眼手術で起きる創傷で
ある。
【０００９】
【発明の実施の形態】本発明は眼科学に由来するもので
はあるが、一般的な意味での線維芽細胞（眼線維芽細胞
だけでなく、真皮線維芽細胞を含む）に適用される。皮
膚への損傷又は皮膚の除去（例えば熱傷）による創傷
（ケロイド形成（皮膚上の隆起した瘢痕）を含む）に特
に適用され得る。
はあるが、一般的な意味での線維芽細胞（眼線維芽細胞
だけでなく、真皮線維芽細胞を含む）に適用される。皮
膚への損傷又は皮膚の除去（例えば熱傷）による創傷
（ケロイド形成（皮膚上の隆起した瘢痕）を含む）に特
に適用され得る。
【００１０】以下では、緑内障症例における眼手術での
特定的な使用を記載する。手術の目的は、開口部を作っ
て眼内液（いわゆる「眼房水」）を排出することによっ
て眼圧を下げることである。眼房水は角膜下、眼球正面
及び水晶体の空洞に含まれている。目的は眼にバルブ状
開口部を作って眼房水をゆっくりと排出することであ
る。眼孔は眼組織層（強膜及び結膜）によって被覆さ
れ、これがフラップ弁のフラップとなる。不運にも、患
者によっては進行性瘢痕組織形成が起こり、このためバ
ルブが閉鎖され、結果的に眼圧が再上昇して緑内障が進
行する。
特定的な使用を記載する。手術の目的は、開口部を作っ
て眼内液（いわゆる「眼房水」）を排出することによっ
て眼圧を下げることである。眼房水は角膜下、眼球正面
及び水晶体の空洞に含まれている。目的は眼にバルブ状
開口部を作って眼房水をゆっくりと排出することであ
る。眼孔は眼組織層（強膜及び結膜）によって被覆さ
れ、これがフラップ弁のフラップとなる。不運にも、患
者によっては進行性瘢痕組織形成が起こり、このためバ
ルブが閉鎖され、結果的に眼圧が再上昇して緑内障が進
行する。
【００１１】現在の研究努力は、瘢痕組織形成を阻害す
るために入手可能な薬剤（例えば代謝拮抗薬の５−フル
オロウラシルやマイトマイシン−Ｃ）を適用することに
向けられている。これらの薬剤は、治癒で中心的役割を
果たす線維芽細胞に適用される。しかしながら、このよ
うな薬剤は効果にばらつきがあるだけでなく、有毒で更
には視力低下を引き起こすこともある。
るために入手可能な薬剤（例えば代謝拮抗薬の５−フル
オロウラシルやマイトマイシン−Ｃ）を適用することに
向けられている。これらの薬剤は、治癒で中心的役割を
果たす線維芽細胞に適用される。しかしながら、このよ
うな薬剤は効果にばらつきがあるだけでなく、有毒で更
には視力低下を引き起こすこともある。
【００１２】排出部位は、完全治癒と不適切な治癒との
妥協である異常な創傷を示す。長期的な外科的成功を収
めるには、この妥協を達成する、即ち治癒プロセスを阻
止することが必要である。従って、この目的の達成に役
立つモジュレーターを開発することが肝要である。この
ようなモジュレーターは無毒で、滴定可能（用量依存性
効果を与える）で、可逆的でなければならない。ＡＢＬ
はこのような要件を満たしている。異常な創傷であって
も、線維芽細胞が関与し、遅い治癒が有益であると考え
られる状況では貴重なモデルとなる。
妥協である異常な創傷を示す。長期的な外科的成功を収
めるには、この妥協を達成する、即ち治癒プロセスを阻
止することが必要である。従って、この目的の達成に役
立つモジュレーターを開発することが肝要である。この
ようなモジュレーターは無毒で、滴定可能（用量依存性
効果を与える）で、可逆的でなければならない。ＡＢＬ
はこのような要件を満たしている。異常な創傷であって
も、線維芽細胞が関与し、遅い治癒が有益であると考え
られる状況では貴重なモデルとなる。
【００１３】ＡＢＬは、例えばパッド又はスポンジをア
プリケーターとして使用して、（限定はされないが）表
皮又は局所適用を含む種々の方法で創傷部位に投与され
得る。ＡＢＬはこの目的のために懸濁液又は溶液として
処方され得る。あるいは、クリーム、軟膏又はゲル処方
物として適用され得る。クリーム又は軟膏処方物は通常
油性ベヒクルを必要とするが、ゲルはより一般的には主
として水性である。医薬処方物で上記目的のために知ら
れている塩基であれば、創傷部位に依存して使用するこ
とができる。あるいは、ＡＢＬを滅菌処方物、好ましく
は水溶液（例えば生理食塩水溶液）又は懸濁液として注
入してもよい。ＡＢＬは徐放性ミニカプセルとして又は
創傷部もしくはその周辺への挿入に適した寸法及び形状
の成形ポリマー形態（ポリマーはＡＢＬの徐放用基質と
なる）等で適用され得る。ＡＢＬを包帯、プラスター等
のような創傷包帯材料に含浸させるか又はその上に塗布
してもよい。
プリケーターとして使用して、（限定はされないが）表
皮又は局所適用を含む種々の方法で創傷部位に投与され
得る。ＡＢＬはこの目的のために懸濁液又は溶液として
処方され得る。あるいは、クリーム、軟膏又はゲル処方
物として適用され得る。クリーム又は軟膏処方物は通常
油性ベヒクルを必要とするが、ゲルはより一般的には主
として水性である。医薬処方物で上記目的のために知ら
れている塩基であれば、創傷部位に依存して使用するこ
とができる。あるいは、ＡＢＬを滅菌処方物、好ましく
は水溶液（例えば生理食塩水溶液）又は懸濁液として注
入してもよい。ＡＢＬは徐放性ミニカプセルとして又は
創傷部もしくはその周辺への挿入に適した寸法及び形状
の成形ポリマー形態（ポリマーはＡＢＬの徐放用基質と
なる）等で適用され得る。ＡＢＬを包帯、プラスター等
のような創傷包帯材料に含浸させるか又はその上に塗布
してもよい。
【００１４】外科的手順では、ＡＢＬが手術前、手術中
及び／又は手術後の場合はできるだけ早期に投与され得
る。即ち通常の外科的創傷の場合３ヶ月以内であれば創
傷は最良に処理されるが、尚活性を有する。本発明の特
別な利点はＡＢＬが既に開始した収縮を停止させるか又
は遅らせることであり、これは術後の創傷治癒で有効で
ある。緑内障手術での外科的創傷は臨床検査顕微鏡（ス
リットランプ）下で検査することができ、過剰治癒を避
けるのに適していると慎重に判定された量のＡＢＬを好
ましくは注入によって更に投与すれば、外科手術で設け
られて眼から眼房水を排出する「フラップ弁」を閉鎖さ
せずに、外傷を完全に塞ぐことができる。このような状
況では、ＡＢＬによってコラーゲンをＡＢＬ用量依存的
に調整しながら収縮させることができることが特に有益
かつ重要である。
及び／又は手術後の場合はできるだけ早期に投与され得
る。即ち通常の外科的創傷の場合３ヶ月以内であれば創
傷は最良に処理されるが、尚活性を有する。本発明の特
別な利点はＡＢＬが既に開始した収縮を停止させるか又
は遅らせることであり、これは術後の創傷治癒で有効で
ある。緑内障手術での外科的創傷は臨床検査顕微鏡（ス
リットランプ）下で検査することができ、過剰治癒を避
けるのに適していると慎重に判定された量のＡＢＬを好
ましくは注入によって更に投与すれば、外科手術で設け
られて眼から眼房水を排出する「フラップ弁」を閉鎖さ
せずに、外傷を完全に塞ぐことができる。このような状
況では、ＡＢＬによってコラーゲンをＡＢＬ用量依存的
に調整しながら収縮させることができることが特に有益
かつ重要である。
【００１５】ＡＢＬの用量は通常１回当たり約２０〜６
０μｇであり、必要とあれば繰り返し投与して創傷治癒
を遅らせる。しかしながら、用量は創傷の大きさや投与
方法、また徐放形態が適用されるかどうか等によって上
記範囲以外で大きく変動し得る。
０μｇであり、必要とあれば繰り返し投与して創傷治癒
を遅らせる。しかしながら、用量は創傷の大きさや投与
方法、また徐放形態が適用されるかどうか等によって上
記範囲以外で大きく変動し得る。
【００１６】
【実施例】以下の実施例で本発明を説明する。
【００１７】実施例１ Ａ． Ｍａｚｕｒｅ及びＩ． Ｇｒｉｅｒｓｏｎ， Ｉ
ｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇ
ｙ ＆ Ｖｉｓｕａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３， ３４
０７−３４１５（１９９２）の方法を用いてコラーゲン
ゲル収縮試験を実施した。従って、ヒトテノン嚢眼線維
芽細胞を、１％グルタミン、１％ペニシリン／ストレプ
トマイシン、０．１％Ｆｕｎｇｉｚｏｎｅ（登録商
標）、３％重炭酸ナトリウム、１０％ウシ新生児血清
（ＮＣＳ）の０．４〜０．６％１Ｍ ＮａＯＨを追加し
たＨａｍ Ｆ１０培地中で集密状態になる直前の段階ま
で増殖させた。細胞を加湿した５％ＣＯ2インキュベー
ター中、３７℃で維持し、週２度栄養補給し、第３継代
から第１０継代の実験で使用した。
ｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇ
ｙ ＆ Ｖｉｓｕａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３， ３４
０７−３４１５（１９９２）の方法を用いてコラーゲン
ゲル収縮試験を実施した。従って、ヒトテノン嚢眼線維
芽細胞を、１％グルタミン、１％ペニシリン／ストレプ
トマイシン、０．１％Ｆｕｎｇｉｚｏｎｅ（登録商
標）、３％重炭酸ナトリウム、１０％ウシ新生児血清
（ＮＣＳ）の０．４〜０．６％１Ｍ ＮａＯＨを追加し
たＨａｍ Ｆ１０培地中で集密状態になる直前の段階ま
で増殖させた。細胞を加湿した５％ＣＯ2インキュベー
ター中、３７℃で維持し、週２度栄養補給し、第３継代
から第１０継代の実験で使用した。
【００１８】０．１％トリプシン及び０．０４％ＥＤＴ
Ａを用いて集密前の状態になると、細胞をフラスコから
取出した。次いで、細胞を、１０％ＮＣＳを含むＨａｍ
Ｆ１０培地と混合し、１，０００ｒｐｍで１０分間遠
心分離した。上清を廃棄した後、細胞ペレットを無血清
培地中に再度懸濁させた。Ｃｏｕｌｔｅｒカウンター
（Ｃｏｕｌｔｅｒ， Ｌｕｔｏｎ， ＵＫ）で細胞数を
調べた。眼線維芽細胞をコラーゲン基質当たり２４０，
０００細胞の濃度で使用した。
Ａを用いて集密前の状態になると、細胞をフラスコから
取出した。次いで、細胞を、１０％ＮＣＳを含むＨａｍ
Ｆ１０培地と混合し、１，０００ｒｐｍで１０分間遠
心分離した。上清を廃棄した後、細胞ペレットを無血清
培地中に再度懸濁させた。Ｃｏｕｌｔｅｒカウンター
（Ｃｏｕｌｔｅｒ， Ｌｕｔｏｎ， ＵＫ）で細胞数を
調べた。眼線維芽細胞をコラーゲン基質当たり２４０，
０００細胞の濃度で使用した。
【００１９】ｐＨ及び温度を共に上昇させてコラーゲン
溶液を重合する。４００μｌのコラーゲン基質を製造す
るために、０．１４ｍｌの濃培地（３５ｍｌの滅菌蒸留
水、１５ｍｌ×１０ＭＥＭ、１．５ｍｌのグルタミン、
１．５ｍｌのペニシリン／ストレプトマイシン、１．５
ｍｌのＦｕｎｇｉｚｏｎｅ及び４ｍｌの７．５％重炭酸
ナトリウム）を、滅菌蒸留水中０．１％氷酢酸溶液２０
ｍｌ中に１００ｍｇのコラーゲンを溶解して調製した
０．２４ｍｌのコラーゲン溶液（ラットテール型Ｉ，Ｓ
ｉｇｍａ）と速やかに混合し、４℃で保存した。濃培地
にＮａＯＨを添加して、コラーゲンゲルを生成する混合
物のｐＨを７．４に調整した。次いで、適量の細胞を含
む０．１ｍｌの無血清Ｈａｍ Ｆ１０を添加した。混合
物を４００μｌ／ウェルの容量で２４−ウェルプレート
に注入し、プレートを加湿した３７℃の５％ＣＯ2イン
キュベーターに移すと、基質は１分以内に硬化した。５
〜１０分後、基質上に増殖培地（陽性対照及び試験培
地）を置き、コラーゲン周辺にピペットチップで切り目
を入れて浮遊させた。培地は３日目まで変えなかった。
血清含有ＮＣＳ１０％及び無血清Ｈａｍ Ｆ１０（「Ｓ
Ｆ」）を陽性対照として使用した。試験培地は、５種の
異なる濃度、即ち０．１、１．０、１０、２０及び１０
０μｇ／ｍｌのＡＢＬ（ＡＢＬ ０．１．．．．．．Ａ
ＢＬ１００）を含む無血清Ｈａｍ Ｆ１０からなってい
た。
溶液を重合する。４００μｌのコラーゲン基質を製造す
るために、０．１４ｍｌの濃培地（３５ｍｌの滅菌蒸留
水、１５ｍｌ×１０ＭＥＭ、１．５ｍｌのグルタミン、
１．５ｍｌのペニシリン／ストレプトマイシン、１．５
ｍｌのＦｕｎｇｉｚｏｎｅ及び４ｍｌの７．５％重炭酸
ナトリウム）を、滅菌蒸留水中０．１％氷酢酸溶液２０
ｍｌ中に１００ｍｇのコラーゲンを溶解して調製した
０．２４ｍｌのコラーゲン溶液（ラットテール型Ｉ，Ｓ
ｉｇｍａ）と速やかに混合し、４℃で保存した。濃培地
にＮａＯＨを添加して、コラーゲンゲルを生成する混合
物のｐＨを７．４に調整した。次いで、適量の細胞を含
む０．１ｍｌの無血清Ｈａｍ Ｆ１０を添加した。混合
物を４００μｌ／ウェルの容量で２４−ウェルプレート
に注入し、プレートを加湿した３７℃の５％ＣＯ2イン
キュベーターに移すと、基質は１分以内に硬化した。５
〜１０分後、基質上に増殖培地（陽性対照及び試験培
地）を置き、コラーゲン周辺にピペットチップで切り目
を入れて浮遊させた。培地は３日目まで変えなかった。
血清含有ＮＣＳ１０％及び無血清Ｈａｍ Ｆ１０（「Ｓ
Ｆ」）を陽性対照として使用した。試験培地は、５種の
異なる濃度、即ち０．１、１．０、１０、２０及び１０
０μｇ／ｍｌのＡＢＬ（ＡＢＬ ０．１．．．．．．Ａ
ＢＬ１００）を含む無血清Ｈａｍ Ｆ１０からなってい
た。
【００２０】目盛りの付いたグリッド（ｇｒｉｄ）に対
する各格子の直径を側方照射により測定して収縮を毎日
評価した。
する各格子の直径を側方照射により測定して収縮を毎日
評価した。
【００２１】図１に示すように、ＡＢＬ濃度が高くなる
と（１０μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ｍ
ｌ）ゲル収縮が阻害され、直径は元の９０〜１００％で
あったが、陽性対照は元の７３〜８３％まで収縮した。
ＡＢＬは用量依存性の重要な要件を備えた創傷治癒の有
益なモジュレーターであると結論づけられる。
と（１０μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ｍ
ｌ）ゲル収縮が阻害され、直径は元の９０〜１００％で
あったが、陽性対照は元の７３〜８３％まで収縮した。
ＡＢＬは用量依存性の重要な要件を備えた創傷治癒の有
益なモジュレーターであると結論づけられる。
【００２２】実施例２ この実施例では、ＡＢＬ作用を可逆的にしてその適用を
滴定できること、また創傷治癒抑制での重要な特性を例
証する。
滴定できること、また創傷治癒抑制での重要な特性を例
証する。
【００２３】この実施例では４つの実験を実施例１と同
様に実施したが、以下の点が異なる： （ａ）「ＮＣＳ１％」 １％ＮＣＳを含むＨａｍ Ｆ１０培地を基質上に置いた 。
様に実施したが、以下の点が異なる： （ａ）「ＮＣＳ１％」 １％ＮＣＳを含むＨａｍ Ｆ１０培地を基質上に置いた 。
【００２４】 陽性対照 ＡＢＬは添加しなかった。３日目に培地を変えた。
【００２５】 （ｂ）「ＮＣＳ−ＡＢＬ２０」 （ａ）と同様であるが、３日目に培地を、２０ 本発明 μｇ／ｍｌのＡＢＬを含む無血清Ｈａｍ Ｆ１０培地に代えた。
【００２６】 （ｃ）「ＡＢＬ２０」 ２０μｇ／ｍｌのＡＢＬを含む無血清Ｈａｍ Ｆ１０培 本発明 地を基質上に置いた。３日目に培地を変えた。
【００２７】 （ｄ）「ＡＢＬ２０−ＮＣＳ」 （ｃ）と同様に、２０μｇ／ｍｌのＡＢＬを含 本発明 む無血清Ｈａｍ Ｆ１０培地を基質上に置いた 。
【００２８】 ３日目に培地を、１％ＮＣＳを含むＨａｍ Ｆ １０培地に代えた。更なる収縮が起きた。
【００２９】図２では、結果を４対の棒の棒グラフ形態
で示す。各対の左側の棒は３日後の収縮％を示し、各対
の右側の棒は６日後の収縮％を示す。３日後に、（ａ）
及び（ｂ）は通常に収縮したが、（ｃ）及び（ｄ）はＡ
ＢＬに起因する阻害を示した。（ａ）及び（ｂ）では、
直径は６３％まで収縮した。上層の増殖培地にＡＢＬを
加えた（ｃ）及び（ｄ）では、収縮は元の僅か７５％と
大幅に阻害された。
で示す。各対の左側の棒は３日後の収縮％を示し、各対
の右側の棒は６日後の収縮％を示す。３日後に、（ａ）
及び（ｂ）は通常に収縮したが、（ｃ）及び（ｄ）はＡ
ＢＬに起因する阻害を示した。（ａ）及び（ｂ）では、
直径は６３％まで収縮した。上層の増殖培地にＡＢＬを
加えた（ｃ）及び（ｄ）では、収縮は元の僅か７５％と
大幅に阻害された。
【図１】２種の対照培地（左側２つ）及びＡＢＬ濃度を
増した（右側５つ）ゲル中に眼線維芽細胞を播種して培
養したコラーゲンゲルの収縮％を示す棒グラフである。
増した（右側５つ）ゲル中に眼線維芽細胞を播種して培
養したコラーゲンゲルの収縮％を示す棒グラフである。
【図２】眼線維芽細胞を播種し、種々の条件下で３日
間、更には３日後に培地を変えて６日間培養したコラー
ゲンゲルの収縮％を示す棒グラフである。
間、更には３日後に培地を変えて６日間培養したコラー
ゲンゲルの収縮％を示す棒グラフである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 イアン・グリアソン イギリス国、ウイラル・エル・46・６・エ フ・ジー、モートン、セント・オーステル ズ・クローズ・７
Claims (6)
- 【請求項１】 キノコレクチンの眼創傷治癒モジュレー
ターとしての使用。 - 【請求項２】 患者の創傷部位に有効量のＡｇａｒｉｃ
ｕｓ ｂｉｓｐｏｒｕｓレクチンを適用することからな
る患者の創傷治癒速度を抑制する方法。 - 【請求項３】 創傷が、眼圧を下げかつ眼から眼房水を
排出するために行われた眼の外科手術による創傷である
請求項２に記載の方法。 - 【請求項４】 レクチンを阻害すべき疾病の部位に注入
する請求項２に記載の方法。 - 【請求項５】 レクチンを手術中及び／又は手術後に創
傷部位に適用する請求項３に記載の方法。 - 【請求項６】 創傷治癒を助けるために使用する処方物
の製造でのＡｇａｒｉｃｕｓ ｂｉｓｐｏｒｕｓレクチ
ンの使用。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB9608145.0 | 1996-04-19 | ||
| GBGB9608145.0A GB9608145D0 (en) | 1996-04-19 | 1996-04-19 | Wound healing |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09286741A true JPH09286741A (ja) | 1997-11-04 |
Family
ID=10792357
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8204796A Pending JPH09286741A (ja) | 1996-04-19 | 1996-08-02 | 創傷治癒 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5739102A (ja) |
| JP (1) | JPH09286741A (ja) |
| GB (1) | GB9608145D0 (ja) |
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| US7794704B2 (en) | 2004-01-23 | 2010-09-14 | Advanced Cell Technology, Inc. | Methods for producing enriched populations of human retinal pigment epithelium cells for treatment of retinal degeneration |
| FR2921260B1 (fr) * | 2007-09-25 | 2012-08-24 | Lesaffre & Cie | Utilisation d'un nouvel agent naturel dans des compositions cosmetiques |
| EP2780022B2 (en) * | 2011-11-14 | 2022-09-07 | Astellas Institute for Regenerative Medicine | Pharmaceutical preparations of human rpe cells and uses thereof |
| FR3033697B1 (fr) * | 2015-03-17 | 2020-03-27 | Universite Pierre Et Marie Curie (Paris 6) | Suspensions de collagene injectables, leur procede de preparation et leurs utilisations, notamment pour la formation de matrices denses de collagene |
| CN105028489B (zh) * | 2015-07-09 | 2017-11-21 | 福建省农业科学院食用菌研究所 | 一种香菇扭结促进剂 |
| CN107090020B (zh) * | 2017-06-09 | 2020-10-16 | 福建省平潭县水产良种实验有限公司 | 食用菌凝集素及其在抑制棕囊藻生长中的应用 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4217341A (en) * | 1977-12-07 | 1980-08-12 | The University of Louisville | Composition and method for inhibiting the adherence of dental plaque-producing bacteria to smooth surfaces |
| EP0030812B1 (en) * | 1979-12-03 | 1984-03-14 | Kitasato Kenkyusho | A process for preparing substances having interferon inducing activity and interferon inducers |
| JPS6013004B2 (ja) * | 1980-08-06 | 1985-04-04 | 北里研究所（社団法人） | インタ−フエロン誘起剤の製法 |
| US4742046A (en) * | 1984-08-03 | 1988-05-03 | Medisearch S.A. | Methods and compositions for inhibiting the infectious activity of viruses |
| JPS61165334A (ja) * | 1984-08-03 | 1986-07-26 | メデイサ−チ、エス、ア− | ウイルスの感染活性の抑制方法および組成物 |
| JPS61205218A (ja) * | 1985-03-08 | 1986-09-11 | Ajinomoto Co Inc | 抗腫瘍剤 |
| JPH0825890B2 (ja) * | 1987-06-18 | 1996-03-13 | 呉羽化学工業株式会社 | 抗ウイルス剤 |
| GB9219905D0 (en) * | 1992-09-19 | 1992-11-04 | Univ Liverpool | Lectins |
-
1996
- 1996-04-19 GB GBGB9608145.0A patent/GB9608145D0/en active Pending
- 1996-08-02 JP JP8204796A patent/JPH09286741A/ja active Pending
-
1997
- 1997-02-04 US US08/795,958 patent/US5739102A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| GB9608145D0 (en) | 1996-06-26 |
| US5739102A (en) | 1998-04-14 |
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