JPH09274042A - ヒトｃｙｐ２ｅ１に対する抗体 - Google Patents
ヒトｃｙｐ２ｅ１に対する抗体Info
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- JPH09274042A JPH09274042A JP13449396A JP13449396A JPH09274042A JP H09274042 A JPH09274042 A JP H09274042A JP 13449396 A JP13449396 A JP 13449396A JP 13449396 A JP13449396 A JP 13449396A JP H09274042 A JPH09274042 A JP H09274042A
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Abstract
(57)【要約】
【解決手段】 チトクロームｐ４５０の分子種ＣＹＰ２
Ｅ１を構成するペプタイド断片を抗原として得られるヒ
トＣＹＰ２Ｅ１を認識する抗体。 【効果】 ヒトＣＹＰ２Ｅ１を迅速且つ正確に測定する
ことができ、生体内での各種変化を知ることにより、癌
や糖尿病等の診断、治療に有用である。
Ｅ１を構成するペプタイド断片を抗原として得られるヒ
トＣＹＰ２Ｅ１を認識する抗体。 【効果】 ヒトＣＹＰ２Ｅ１を迅速且つ正確に測定する
ことができ、生体内での各種変化を知ることにより、癌
や糖尿病等の診断、治療に有用である。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ヒトチトクローム
ｐ−４５０の一分子種であるＣＹＰ２Ｅ１に対する抗体
及びそれを用いるヒトＣＹＰ２Ｅ１の測定システムに関
する。
ｐ−４５０の一分子種であるＣＹＰ２Ｅ１に対する抗体
及びそれを用いるヒトＣＹＰ２Ｅ１の測定システムに関
する。
【０００２】
【従来の技術】チトクロームｐ−４５０（以下、「ｐ４
５０」ということもある）とは還元型で一酸化炭素と結
合し、４５０ｎｍに吸収最大を示すヘム蛋白質酵素の総
称である。この酵素は生体外異物の解毒やステロイドホ
ルモンなど生体内物質の合成、代謝などに深く関与す
る。細菌から哺乳動物までｐ４５０の分布は極めて広
く、そして１５０種以上が知られている。
５０」ということもある）とは還元型で一酸化炭素と結
合し、４５０ｎｍに吸収最大を示すヘム蛋白質酵素の総
称である。この酵素は生体外異物の解毒やステロイドホ
ルモンなど生体内物質の合成、代謝などに深く関与す
る。細菌から哺乳動物までｐ４５０の分布は極めて広
く、そして１５０種以上が知られている。
【０００３】薬物代謝に関するｐ４５０は大きく１〜４
群に分類することが出来、そして多くのｐ４５０は薬剤
投与により特定のｐ４５０が誘導される。
群に分類することが出来、そして多くのｐ４５０は薬剤
投与により特定のｐ４５０が誘導される。
【０００４】２群に属するＣＹＰ２Ｅ１分子種はアルコ
ールやアセトンなどによって誘導され、エタノール、ア
ニリン、ニトロソアミンなどを酸化的に代謝し、基質特
異性の広いことが知られている。動物実験などではエタ
ノールの摂取によりｐ４５０ＣＹＰ２Ｅ１の誘導が確認
されており（Journal of Biological Chemistry ; 261
(35) 16689-16697, 1986）、また、ヒトにおいてもアル
コール中毒患者にてｐ４５０ＣＹＰ２Ｅ１が増えること
が示唆されている（Biochemistry : 25(22)6731-6735,
1986）。また、アルコール性肝障害などにｐ４５０ＣＹ
Ｐ２Ｅ１が関連していることが考えられている（Bioche
mistry : 25(22)6731-6735, 1986）。一方、ＣＹＰ２Ｅ
１はＮ−ニトロソジメチルアミン、ベンゼン、四塩化炭
素など発癌物質の代表的な活性化に関与しており、ＣＹ
Ｐ２Ｅ１の表現系は発癌物質の感受性の個体差に影響す
ることが示唆されている（抗酸菌病研究所雑誌：44(2)1
29-140, 1992）。癌においてｐ４５０の過剰発現の認め
られる例も報告されている。そのほかに、糖尿病、飢餓
状態によっても誘導されることが知られている（Bioche
mical Biophysical Research Communications : 142, 1
077-1083, 1987及びMolecular Endocrinology : 1,542-
547, 1987）。
ールやアセトンなどによって誘導され、エタノール、ア
ニリン、ニトロソアミンなどを酸化的に代謝し、基質特
異性の広いことが知られている。動物実験などではエタ
ノールの摂取によりｐ４５０ＣＹＰ２Ｅ１の誘導が確認
されており（Journal of Biological Chemistry ; 261
(35) 16689-16697, 1986）、また、ヒトにおいてもアル
コール中毒患者にてｐ４５０ＣＹＰ２Ｅ１が増えること
が示唆されている（Biochemistry : 25(22)6731-6735,
1986）。また、アルコール性肝障害などにｐ４５０ＣＹ
Ｐ２Ｅ１が関連していることが考えられている（Bioche
mistry : 25(22)6731-6735, 1986）。一方、ＣＹＰ２Ｅ
１はＮ−ニトロソジメチルアミン、ベンゼン、四塩化炭
素など発癌物質の代表的な活性化に関与しており、ＣＹ
Ｐ２Ｅ１の表現系は発癌物質の感受性の個体差に影響す
ることが示唆されている（抗酸菌病研究所雑誌：44(2)1
29-140, 1992）。癌においてｐ４５０の過剰発現の認め
られる例も報告されている。そのほかに、糖尿病、飢餓
状態によっても誘導されることが知られている（Bioche
mical Biophysical Research Communications : 142, 1
077-1083, 1987及びMolecular Endocrinology : 1,542-
547, 1987）。
【０００５】本酵素は、肝障害、癌、糖尿病などの好適
なマーカーとしての有用性が指摘されているが、ヒトＣ
ＹＰ２Ｅ１を正確に且つ簡便に測定、検出することので
きるシステムはまだ確立されていない。
なマーカーとしての有用性が指摘されているが、ヒトＣ
ＹＰ２Ｅ１を正確に且つ簡便に測定、検出することので
きるシステムはまだ確立されていない。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】ヒトＣＹＰ２Ｅ１の測
定により種々の生体内変化を把握することができ、ヒト
ＣＹＰ２Ｅ１の測定は診断及び治療面においてきわめて
有用であることにもかかわらず、上記のように、ヒトＣ
ＹＰ２Ｅ１を簡便且つ正確に測定する満足できるシステ
ムは、現時点では開発されていない。本発明は、このよ
うな技術の現状のもとにおいて、満足できるヒトＣＹＰ
２Ｅ１アッセイシステムを新たに開発する目的でなされ
たものである。
定により種々の生体内変化を把握することができ、ヒト
ＣＹＰ２Ｅ１の測定は診断及び治療面においてきわめて
有用であることにもかかわらず、上記のように、ヒトＣ
ＹＰ２Ｅ１を簡便且つ正確に測定する満足できるシステ
ムは、現時点では開発されていない。本発明は、このよ
うな技術の現状のもとにおいて、満足できるヒトＣＹＰ
２Ｅ１アッセイシステムを新たに開発する目的でなされ
たものである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】上記目的を達成するため
に鋭意研究を行った結果、このようなアッセイシステム
としてはイムノアッセイが好適であるとの観点にたち、
更に研究を続けた結果、ＣＹＰ２Ｅ１のペプタイド断片
（つまり、ＣＹＰ２Ｅ１蛋白質中の特定のアミノ酸配列
からなるペプタイド）を免疫原とすることにより得られ
る抗体がヒトＣＹＰ２Ｅ１蛋白質を高精度、高感度かつ
迅速に測定できることを見出し、本発明が完成されたの
である。
に鋭意研究を行った結果、このようなアッセイシステム
としてはイムノアッセイが好適であるとの観点にたち、
更に研究を続けた結果、ＣＹＰ２Ｅ１のペプタイド断片
（つまり、ＣＹＰ２Ｅ１蛋白質中の特定のアミノ酸配列
からなるペプタイド）を免疫原とすることにより得られ
る抗体がヒトＣＹＰ２Ｅ１蛋白質を高精度、高感度かつ
迅速に測定できることを見出し、本発明が完成されたの
である。
【０００８】すなわち、本発明は、ＣＹＰ２Ｅ１蛋白質
の全体を抗原としないでも、その一部を抗原として用い
るだけで、ヒトＣＹＰ２Ｅ１を特異的に認識する抗体を
きわめて効率的に且つ高い再現性で作成しうること、そ
して、この抗体を用いることによってヒトＣＹＰ２Ｅ１
を高精度、高感度かつ迅速に測定できるという有用な新
知見を得、この新知見に基づき、本発明は完成されたも
のである。
の全体を抗原としないでも、その一部を抗原として用い
るだけで、ヒトＣＹＰ２Ｅ１を特異的に認識する抗体を
きわめて効率的に且つ高い再現性で作成しうること、そ
して、この抗体を用いることによってヒトＣＹＰ２Ｅ１
を高精度、高感度かつ迅速に測定できるという有用な新
知見を得、この新知見に基づき、本発明は完成されたも
のである。
【０００９】本発明を実施するには、免疫原を用いて動
物を免疫する必要がある。免疫原としては、ＣＹＰ２Ｅ
１の一部を用いる。ＣＹＰ２Ｅ１としては、ヒト由来の
ものが好適であるが、他の動物由来のものも使用可能で
ある。
物を免疫する必要がある。免疫原としては、ＣＹＰ２Ｅ
１の一部を用いる。ＣＹＰ２Ｅ１としては、ヒト由来の
ものが好適であるが、他の動物由来のものも使用可能で
ある。
【００１０】ＣＹＰ２Ｅ１の一部（つまりペプタイド断
片）を得るには、ＣＹＰ２Ｅ１蛋白質を酵素を用いて及
び／又は化学的ないし物理的に切断してもよい、あるい
は、目的とするペプタイドを化学合成してもよい。例え
ばＣＹＰ２Ｅ１のアミノ酸配列において親水性の高い領
域を選定し、それに相当するアミノ酸配列よりなるペプ
タイドを常法に従って作製し、これを動物に免疫するこ
とによりヒトＣＹＰ２Ｅ１に反応する抗体を得ることが
できる。例えば、化学合成したペプタイドの端にシステ
インを付けそれを介しキャリア蛋白質を結合させること
により免疫原性を高め、動物に免疫することといった公
知の方法により抗体を得ることが出来る。免疫する動物
としてはマウス、ラット、ウサギ、ヒツジ等を利用する
ことが出来る。
片）を得るには、ＣＹＰ２Ｅ１蛋白質を酵素を用いて及
び／又は化学的ないし物理的に切断してもよい、あるい
は、目的とするペプタイドを化学合成してもよい。例え
ばＣＹＰ２Ｅ１のアミノ酸配列において親水性の高い領
域を選定し、それに相当するアミノ酸配列よりなるペプ
タイドを常法に従って作製し、これを動物に免疫するこ
とによりヒトＣＹＰ２Ｅ１に反応する抗体を得ることが
できる。例えば、化学合成したペプタイドの端にシステ
インを付けそれを介しキャリア蛋白質を結合させること
により免疫原性を高め、動物に免疫することといった公
知の方法により抗体を得ることが出来る。免疫する動物
としてはマウス、ラット、ウサギ、ヒツジ等を利用する
ことが出来る。
【００１１】本発明においてはこのようにして作成した
ポリクロナール抗体のほか、モノクローナル抗体を使用
することができる。モノクローナル抗体は、常法にした
がって作成することができ、例えば、上記した免疫原を
用いてマウス等を免疫し、その脾細胞、リンパ節細胞等
の抗体産生細胞を得、これとミエローマとを細胞融合法
を用いて融合細胞（ハイブリドーマ）を形成させ、上記
免疫原に特異的に結合する抗体を産生するクローンを選
択し、これを培養することにより、モノクローナル抗体
を得ることができる。
ポリクロナール抗体のほか、モノクローナル抗体を使用
することができる。モノクローナル抗体は、常法にした
がって作成することができ、例えば、上記した免疫原を
用いてマウス等を免疫し、その脾細胞、リンパ節細胞等
の抗体産生細胞を得、これとミエローマとを細胞融合法
を用いて融合細胞（ハイブリドーマ）を形成させ、上記
免疫原に特異的に結合する抗体を産生するクローンを選
択し、これを培養することにより、モノクローナル抗体
を得ることができる。
【００１２】そして、このようにして得られた抗体を用
いる免疫測定法によりＣＹＰ２Ｅ１の測定は行われる。
免疫測定法としては放射免疫測定法、酵素免疫測定法、
蛍光免疫測定法、ウエスタンブロット法、免疫沈降法、
免疫組織染色法など公知の方法が掲げられる。
いる免疫測定法によりＣＹＰ２Ｅ１の測定は行われる。
免疫測定法としては放射免疫測定法、酵素免疫測定法、
蛍光免疫測定法、ウエスタンブロット法、免疫沈降法、
免疫組織染色法など公知の方法が掲げられる。
【００１３】特に異なる認識部位をもつ抗体の組み合わ
せからなる測定方法が著しく高感度にＣＹＰ２Ｅ１の検
出を可能にさせる。その際、それぞれ別のエピトープを
認識する二種類のＣＹＰ２Ｅ１に対する抗体を用いる
が、このＣＹＰ２Ｅ１に対する抗体はペプタイドを動物
に免疫することにより作成される。例えば、下記実施例
においては、それぞれＣＹＰ２Ｅ１に対する抗体はウサ
ギ由来のポリクローナル抗体を用いた。固相に抗体を結
合させ、ＣＹＰ２Ｅ１と固相抗体と異なるエピトープを
認識する標識抗体を反応させる。抗体に標識されたもの
を常法に従い定量することによりＣＹＰ２Ｅ１の高感度
な検出定量が可能となる。以下、本発明について詳述す
る。
せからなる測定方法が著しく高感度にＣＹＰ２Ｅ１の検
出を可能にさせる。その際、それぞれ別のエピトープを
認識する二種類のＣＹＰ２Ｅ１に対する抗体を用いる
が、このＣＹＰ２Ｅ１に対する抗体はペプタイドを動物
に免疫することにより作成される。例えば、下記実施例
においては、それぞれＣＹＰ２Ｅ１に対する抗体はウサ
ギ由来のポリクローナル抗体を用いた。固相に抗体を結
合させ、ＣＹＰ２Ｅ１と固相抗体と異なるエピトープを
認識する標識抗体を反応させる。抗体に標識されたもの
を常法に従い定量することによりＣＹＰ２Ｅ１の高感度
な検出定量が可能となる。以下、本発明について詳述す
る。
【００１４】
【発明の実施の形態】本発明に係るヒトＣＹＰ２Ｅ１に
対する抗体を作成するために使用する免疫原としては、
ヒト及び／又は動物のチトクロームｐ４５０の分子種Ｃ
ＹＰ２Ｅ１を構成する各種のペプタイド断片が広く使用
することができ、また、下記するアミノ酸配列を有する
各種ペプタイドも抗原として使用することができる。
対する抗体を作成するために使用する免疫原としては、
ヒト及び／又は動物のチトクロームｐ４５０の分子種Ｃ
ＹＰ２Ｅ１を構成する各種のペプタイド断片が広く使用
することができ、また、下記するアミノ酸配列を有する
各種ペプタイドも抗原として使用することができる。
【００１５】（１）下記のアミノ酸配列を有するペプタ
イドＩ Arg-Gln-Val-His-Ser-Ser-Trp-Asn-Leu-Pro-Pro-Gly-Pr
o-Phe （２）下記のアミノ酸配列を有するペプタイドII Glu-Leu-Lys-Asn-Ile-Pro-Lys-Ser-Phe-Thr-Arg-Leu-Al
a-Gln （３）下記のアミノ酸配列を有するペプタイドIII Tyr-Gly-Met-Gly-Lys-Gln-Gly-Asn-Glu-Ser-Arg-Ile-Gl
n-Arg-Glu （４）下記のアミノ酸配列を有するペプタイドIV Lys-His-Phe-Asp-Tyr-Asn-Asp-Glu-Lys-Phe-Leu-Arg-Le
u-Met （５）下記のアミノ酸配列を有するペプタイドＶ Ser-Glu-Arg-Val-Lys-Glu-His-His-Gln-Ser-Leu-Asp-Pr
o-Asn-Cys （６）下記のアミノ酸配列を有するペプタイドVI Glu-Met-Glu-Lys-Glu-Lys-His-Ser-Ala-Glu-Arg-Leu-Ty
r-Thr （７）下記のアミノ酸配列を有するペプタイドVII Glu-Ile-Glu-Glu-Lys-Leu-His-Glu-Glu-Ile-Asp-Arg-Va
l-Ile （８）下記のアミノ酸配列を有するペプタイドVIII Gln-Glu-Phe-Pro-Asp-Pro-Glu-Lys-Phe-Lys-Pro-Glu-Hi
s-Phe-Leu-Asn
イドＩ Arg-Gln-Val-His-Ser-Ser-Trp-Asn-Leu-Pro-Pro-Gly-Pr
o-Phe （２）下記のアミノ酸配列を有するペプタイドII Glu-Leu-Lys-Asn-Ile-Pro-Lys-Ser-Phe-Thr-Arg-Leu-Al
a-Gln （３）下記のアミノ酸配列を有するペプタイドIII Tyr-Gly-Met-Gly-Lys-Gln-Gly-Asn-Glu-Ser-Arg-Ile-Gl
n-Arg-Glu （４）下記のアミノ酸配列を有するペプタイドIV Lys-His-Phe-Asp-Tyr-Asn-Asp-Glu-Lys-Phe-Leu-Arg-Le
u-Met （５）下記のアミノ酸配列を有するペプタイドＶ Ser-Glu-Arg-Val-Lys-Glu-His-His-Gln-Ser-Leu-Asp-Pr
o-Asn-Cys （６）下記のアミノ酸配列を有するペプタイドVI Glu-Met-Glu-Lys-Glu-Lys-His-Ser-Ala-Glu-Arg-Leu-Ty
r-Thr （７）下記のアミノ酸配列を有するペプタイドVII Glu-Ile-Glu-Glu-Lys-Leu-His-Glu-Glu-Ile-Asp-Arg-Va
l-Ile （８）下記のアミノ酸配列を有するペプタイドVIII Gln-Glu-Phe-Pro-Asp-Pro-Glu-Lys-Phe-Lys-Pro-Glu-Hi
s-Phe-Leu-Asn
【００１６】抗原としては、上記したＣＹＰ２Ｅ１蛋白
質の各種ペプタイド断片及び／又はペプタイドＩ〜VIII
がそのまま使用できるほか、これらのペプタイドのアミ
ノ酸配列の一部をアミノ酸の置換、削除、挿入及び／又
は転移を行って得た改変ペプタイドも使用することがで
きる。
質の各種ペプタイド断片及び／又はペプタイドＩ〜VIII
がそのまま使用できるほか、これらのペプタイドのアミ
ノ酸配列の一部をアミノ酸の置換、削除、挿入及び／又
は転移を行って得た改変ペプタイドも使用することがで
きる。
【００１７】免疫は常法にしたがい、例えば前述したペ
プタイドの全て又は一部又はその改変ペプタイドを用
い、また必要あれば常用されるキャリアー蛋白質と結合
した後、アジュバントと共に動物に必要回数注射するこ
とによって行う。注射する動物としては、マウス、ウサ
ギ、ラット、ヒツジ等を使用することができ、注射する
方法は公知の方法に従う事ができる。そして注射した動
物より採血し、抗血清を得る。得られた抗血清より本発
明の抗体を得るには従来知られているいずれの方法でも
構わない。例えば、アフィニティクロマトグラフィー等
蛋白質の精製方法が適宜採用される。
プタイドの全て又は一部又はその改変ペプタイドを用
い、また必要あれば常用されるキャリアー蛋白質と結合
した後、アジュバントと共に動物に必要回数注射するこ
とによって行う。注射する動物としては、マウス、ウサ
ギ、ラット、ヒツジ等を使用することができ、注射する
方法は公知の方法に従う事ができる。そして注射した動
物より採血し、抗血清を得る。得られた抗血清より本発
明の抗体を得るには従来知られているいずれの方法でも
構わない。例えば、アフィニティクロマトグラフィー等
蛋白質の精製方法が適宜採用される。
【００１８】本発明の抗体としては、上記したポリクロ
ーナル抗体のほかモノクローナル抗体も包含される。モ
ノクローナル抗体を作成するには、上記した（改変）ペ
プタイドを免疫原として、例えばマウスに免疫し、その
脾細胞、リンパ節細胞あるいはＢリンパ球を抗体産生細
胞として得ることが必要である。また、免疫原として
は、ペプタイド断片のほか、ｐ４５０産生細胞を必要あ
ればアルコールを用いて誘導処理した後、目的とする遺
伝子のｃＤＮＡを単離し、これをベクターに組み込んだ
後、これをマウス繊維芽細胞等のレシピエントに形質導
入し、得られた形質導入細胞株（トランスフェクタン
ト）を作成し、これを免疫原として用いてもよい。
ーナル抗体のほかモノクローナル抗体も包含される。モ
ノクローナル抗体を作成するには、上記した（改変）ペ
プタイドを免疫原として、例えばマウスに免疫し、その
脾細胞、リンパ節細胞あるいはＢリンパ球を抗体産生細
胞として得ることが必要である。また、免疫原として
は、ペプタイド断片のほか、ｐ４５０産生細胞を必要あ
ればアルコールを用いて誘導処理した後、目的とする遺
伝子のｃＤＮＡを単離し、これをベクターに組み込んだ
後、これをマウス繊維芽細胞等のレシピエントに形質導
入し、得られた形質導入細胞株（トランスフェクタン
ト）を作成し、これを免疫原として用いてもよい。
【００１９】このようにして得た抗体産生細胞とマウ
ス、ヒトあるいはラットの骨髄腫細胞とをいわゆる細胞
融合法を用いて融合細胞（ハイブリドーマ）を形成さ
せ、上記トランスフェクタントに特異的に結合する抗体
を産生するクローンを選択することによって、モノクロ
ーナル抗体を得ることができる。
ス、ヒトあるいはラットの骨髄腫細胞とをいわゆる細胞
融合法を用いて融合細胞（ハイブリドーマ）を形成さ
せ、上記トランスフェクタントに特異的に結合する抗体
を産生するクローンを選択することによって、モノクロ
ーナル抗体を得ることができる。
【００２０】このようにして作成した抗体は、ヒトＣＹ
Ｐ２Ｅ１に対する特異性がきわめて高く、本酵素を特異
的、選択的に認識して反応し、これと結合する性質を有
するため、本抗体を利用して既述した各種方法によって
ヒトＣＹＰ２Ｅ１のイムノアッセイを行うことができ
る。
Ｐ２Ｅ１に対する特異性がきわめて高く、本酵素を特異
的、選択的に認識して反応し、これと結合する性質を有
するため、本抗体を利用して既述した各種方法によって
ヒトＣＹＰ２Ｅ１のイムノアッセイを行うことができ
る。
【００２１】イムノアッセイとしては、例えば固相免疫
測定法が挙げられる。固相免疫測定法としては、検出手
段により放射免疫測定法、酵素免疫測定法、蛍光免疫測
定法、化学発光免疫測定法などが掲げられるが、その中
でも高感度測定が可能で、特殊な設備が不要な酵素免疫
測定法（ＥＩＡ）が望ましい方法である。
測定法が挙げられる。固相免疫測定法としては、検出手
段により放射免疫測定法、酵素免疫測定法、蛍光免疫測
定法、化学発光免疫測定法などが掲げられるが、その中
でも高感度測定が可能で、特殊な設備が不要な酵素免疫
測定法（ＥＩＡ）が望ましい方法である。
【００２２】固相法による酵素免疫測定は一般に３段階
で行われるが、第一段階と第二段階を同時に行う２段階
による測定も可能であり、いわゆるサンドイッチ法が有
利に利用される。 第一段階：検体としてＣＹＰ２Ｅ１を含む体液または組
織抽出液を希釈し、抗ＣＹＰ２Ｅ１抗体固相化担体とイ
ンキュベーションさせ、検体中のＣＹＰ２Ｅ１を担体に
結合させる。 第二段階：担体を洗浄後、酵素標識した抗ＣＹＰ２Ｅ１
質抗体とインキュベーションさせ、酵素標識抗体を担体
に結合したＣＹＰ２Ｅ１に結合させる。 第三段階：担体を洗浄後、酵素基質液にインキュベーシ
ョンさせ、担体に結合した酵素の量に応じた基質または
産物の濃度の変化を求める。
で行われるが、第一段階と第二段階を同時に行う２段階
による測定も可能であり、いわゆるサンドイッチ法が有
利に利用される。 第一段階：検体としてＣＹＰ２Ｅ１を含む体液または組
織抽出液を希釈し、抗ＣＹＰ２Ｅ１抗体固相化担体とイ
ンキュベーションさせ、検体中のＣＹＰ２Ｅ１を担体に
結合させる。 第二段階：担体を洗浄後、酵素標識した抗ＣＹＰ２Ｅ１
質抗体とインキュベーションさせ、酵素標識抗体を担体
に結合したＣＹＰ２Ｅ１に結合させる。 第三段階：担体を洗浄後、酵素基質液にインキュベーシ
ョンさせ、担体に結合した酵素の量に応じた基質または
産物の濃度の変化を求める。
【００２３】このように固相化酵素免疫測定法で用いら
れる二種の抗体は、お互いに異なるエピトープを認識す
るものであることが必要である。それゆえ固相化抗体と
酵素標識抗体における抗体は相違している必要がある。
例えば、固相化抗体としてペプタイドIIIを抗原として
得られる抗体、標識としてペプタイドVIIIを抗原として
得られる抗体を使用したり、あるいはその逆にしたりす
ることができる。
れる二種の抗体は、お互いに異なるエピトープを認識す
るものであることが必要である。それゆえ固相化抗体と
酵素標識抗体における抗体は相違している必要がある。
例えば、固相化抗体としてペプタイドIIIを抗原として
得られる抗体、標識としてペプタイドVIIIを抗原として
得られる抗体を使用したり、あるいはその逆にしたりす
ることができる。
【００２４】抗ＣＹＰ２Ｅ１抗体の固相化担体の調製
は、蛋白質を固相面に結合する既知の方法を用いて容易
に行うことが出来る。例えば、固相化担体としては通
常、ビーズ、マイクロプレート、チューブ等が用いられ
る。これらの固相面に抗ＣＹＰ２Ｅ１抗体を結合する方
法としては、物理吸着、化学結合等既知の固定化技術が
適宜利用できる。
は、蛋白質を固相面に結合する既知の方法を用いて容易
に行うことが出来る。例えば、固相化担体としては通
常、ビーズ、マイクロプレート、チューブ等が用いられ
る。これらの固相面に抗ＣＹＰ２Ｅ１抗体を結合する方
法としては、物理吸着、化学結合等既知の固定化技術が
適宜利用できる。
【００２５】測定の高感度化は、抗体とＣＹＰ２Ｅ１蛋
白質との反応（第一、第二段階）と担体に結合した酵素
量の測定（第三段階）の反応向上により達成されるが、
それぞれの反応時間の延長により達成することが出来
る。
白質との反応（第一、第二段階）と担体に結合した酵素
量の測定（第三段階）の反応向上により達成されるが、
それぞれの反応時間の延長により達成することが出来
る。
【００２６】また、本発明に係るイムノアッセイにおい
て、酵素標識抗体を使用するほか、アビジン−ビオチン
系を利用して、酵素標識抗体にかえてビオチン標識した
抗体を用い、そして酵素としてアビジン標識酵素を用い
てアッセイ系を組み立ててもよい。アビジンとしては、
卵白由来のアビジン、微生物由来のアビジン（例えばス
トレプトアビジン）等がいずれも使用可能である。
て、酵素標識抗体を使用するほか、アビジン−ビオチン
系を利用して、酵素標識抗体にかえてビオチン標識した
抗体を用い、そして酵素としてアビジン標識酵素を用い
てアッセイ系を組み立ててもよい。アビジンとしては、
卵白由来のアビジン、微生物由来のアビジン（例えばス
トレプトアビジン）等がいずれも使用可能である。
【００２７】標識酵素としては、西洋ワサビペルオキシ
ダーゼ（ＨＲＰ）、ウシ小腸アルカリフォスファター
ゼ、β−ガラクトシダーゼ、ウレアーゼ、グルコースオ
キシダーゼ等の酵素免疫分析法（ＥＩＡ）に常用される
酵素が適宜使用され、これらの酵素に適合しＥＩＡで常
用される発色基質が適宜使用される。発色基質として
は、例えばＨＲＰの場合は、３，３′，５，５′−テト
ラメチルベンジジン（ＴＭＢＺ）、ＴＭＢＺ・ＨＣｌ、
ＴＭＢＺ・ＰＳ、ＡＢＴＳ、ｏ−フェニレンジアミン、
ｐ−ヒドロキシフェニル酢酸等が使用され、アルカリフ
ォスファターゼの場合は、ｐ−ニトロフェニルフォスフ
ェート、４−メチルウンベリフェリルフォスフェート等
が使用され、β−ガラクトシダーゼの場合は、ｏ−ニト
ロフェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、４−メチル
ウンベリフェリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド等が使
用される。
ダーゼ（ＨＲＰ）、ウシ小腸アルカリフォスファター
ゼ、β−ガラクトシダーゼ、ウレアーゼ、グルコースオ
キシダーゼ等の酵素免疫分析法（ＥＩＡ）に常用される
酵素が適宜使用され、これらの酵素に適合しＥＩＡで常
用される発色基質が適宜使用される。発色基質として
は、例えばＨＲＰの場合は、３，３′，５，５′−テト
ラメチルベンジジン（ＴＭＢＺ）、ＴＭＢＺ・ＨＣｌ、
ＴＭＢＺ・ＰＳ、ＡＢＴＳ、ｏ−フェニレンジアミン、
ｐ−ヒドロキシフェニル酢酸等が使用され、アルカリフ
ォスファターゼの場合は、ｐ−ニトロフェニルフォスフ
ェート、４−メチルウンベリフェリルフォスフェート等
が使用され、β−ガラクトシダーゼの場合は、ｏ−ニト
ロフェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、４−メチル
ウンベリフェリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド等が使
用される。
【００２８】酵素と基質とを反応させ、各基質にそれぞ
れ特有の吸光度又は蛍光光度等を測定し、もってＣＹＰ
２Ｅ１の測定を行う。なお、標識としては、酵素のほ
か、ラジオアイソトープ、ＦＩＴＣ（Fluorescein isot
hiacyanate isomer）、やローダミンといった蛍光物質
等常用される標識が適宜使用される。以下、本発明の実
施例について述べる。
れ特有の吸光度又は蛍光光度等を測定し、もってＣＹＰ
２Ｅ１の測定を行う。なお、標識としては、酵素のほ
か、ラジオアイソトープ、ＦＩＴＣ（Fluorescein isot
hiacyanate isomer）、やローダミンといった蛍光物質
等常用される標識が適宜使用される。以下、本発明の実
施例について述べる。
【００２９】
【実施例１：抗原及び抗体の作成】アミノ酸配列のＮ末
端にシステインを加えたペプタイドの合成をベックマン
社の９０１３自動ペプタイド合成装置を用いて固相化法
により行った後、高速クロマトグラフィーにより精製し
た。得られたペプタイドのアミノ酸組成は１規定の塩酸
で１２０℃で一晩加水分解してアミノ酸分析装置を用い
て測定し、理論値と一致することを確認した。このペプ
タイドにキャリアー蛋白質を以下のように結合した。即
ち、抗原ペプタイド１０ｍｇとウシサイログロブリン３
ｍｇを１ｍｌの蒸留水に溶解し、３０ｍｇの１−エチル
−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボンイミド
塩酸を加え遮光し室温で一晩反応させた後、蒸留水で十
分に透析した。抗原ペプタイドとキャリアー蛋白質とが
結合したか否かはＳＤＳ−ＰＡＧＥにより確認した。
端にシステインを加えたペプタイドの合成をベックマン
社の９０１３自動ペプタイド合成装置を用いて固相化法
により行った後、高速クロマトグラフィーにより精製し
た。得られたペプタイドのアミノ酸組成は１規定の塩酸
で１２０℃で一晩加水分解してアミノ酸分析装置を用い
て測定し、理論値と一致することを確認した。このペプ
タイドにキャリアー蛋白質を以下のように結合した。即
ち、抗原ペプタイド１０ｍｇとウシサイログロブリン３
ｍｇを１ｍｌの蒸留水に溶解し、３０ｍｇの１−エチル
−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボンイミド
塩酸を加え遮光し室温で一晩反応させた後、蒸留水で十
分に透析した。抗原ペプタイドとキャリアー蛋白質とが
結合したか否かはＳＤＳ−ＰＡＧＥにより確認した。
【００３０】得られたキャリアー蛋白質とペプタイド結
合物（１００μｇのペプタイドに相当する）をフロイン
ドの完全アジュバントと共にウサギの背部に注射した。
以降、毎週１００μｇのペプタイド相当の抗原蛋白質を
フロインドの不完全アジュバントと混合して同様に合計
８回免疫した。最後免疫後、１０日目に全採血を行ない
抗血清を分離した。この抗血清をプロテインＡを用いた
アフィニティークロマトグラフィー法によりＩｇＧ分画
を単離した。即ち、プロテインＡセファロースＣＬ４Ｂ
（ファルマシア社製）２ｍｌをカラムに充填し、１０ｍ
ｌの１．５Ｍグリシン溶液（ｐＨ８．７）で平衡化し
た。血清を同量の１．５Ｍグリシン溶液（ｐＨ８．７）
で希釈してカラムに流してプロテインＡにＩｇＧを結合
させた後、３．０ｍｌの１．５Ｍグリシン溶液（ｐＨ
８．７）でカラムを洗った。次に、０．１Ｍグリシン溶
液（ｐＨ３．０）で溶出させＩｇＧ分画を得た。この精
製抗体の純度はＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動にて検定し
た。
合物（１００μｇのペプタイドに相当する）をフロイン
ドの完全アジュバントと共にウサギの背部に注射した。
以降、毎週１００μｇのペプタイド相当の抗原蛋白質を
フロインドの不完全アジュバントと混合して同様に合計
８回免疫した。最後免疫後、１０日目に全採血を行ない
抗血清を分離した。この抗血清をプロテインＡを用いた
アフィニティークロマトグラフィー法によりＩｇＧ分画
を単離した。即ち、プロテインＡセファロースＣＬ４Ｂ
（ファルマシア社製）２ｍｌをカラムに充填し、１０ｍ
ｌの１．５Ｍグリシン溶液（ｐＨ８．７）で平衡化し
た。血清を同量の１．５Ｍグリシン溶液（ｐＨ８．７）
で希釈してカラムに流してプロテインＡにＩｇＧを結合
させた後、３．０ｍｌの１．５Ｍグリシン溶液（ｐＨ
８．７）でカラムを洗った。次に、０．１Ｍグリシン溶
液（ｐＨ３．０）で溶出させＩｇＧ分画を得た。この精
製抗体の純度はＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動にて検定し
た。
【００３１】
【実施例２：ＣＹＰ２Ｅ１測定系の作成】精製した抗Ｃ
ＹＰ２Ｅ１抗体（抗原ペプタイド；Gly-Met-Gly-Lys-Gl
n-Gly-Asn-Glu-Ser-Arg-Ile-Gln-Arg-Glu）を２．０μ
ｇ／ｍｌの濃度に希釈し１ウエル当たり１００μｌずつ
イムノプレート（ヌンク社製）に加えた後、一夜、室温
でインキュベーションし固相化を行なった。０．０５％
Ｔｗｅｅｎ２０、０．９％ＮａＣｌ溶液にて洗浄後、１
％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むリン酸緩衝液を
１ウエル当たり３００μｌ加え、室温で一晩放置するこ
とによりブロッキングを行なった。ブロッキングしたウ
エルの溶液を捨て標準物質または検体を含む０．５％Ｂ
ＳＡ，ＰＢＳを１００μｌ加え、２時間反応させた。
０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、０．９％ＮａＣｌ溶液にて
洗浄後、ビオチン標識した抗ＣＹＰ２Ｅ１抗体２μｇ／
ｍｌ（抗原ペプタイド；Glu-Phe-Pro-Asp-Pro-Glu-Lys-
Phe-Lye-Pro-Glu-His-Phe-Leu）を含む０．５％ＢＳ
Ａ，ＰＢＳを１ウエル当たり１００μｌ加え、室温で一
時間インキュベーションを行なった。０．０５％Ｔｗｅ
ｅｎ２０、０．９％ＮａＣｌ溶液にて洗浄後、ストレプ
トアビジン標識のペルオキシダーゼ４０倍希釈（ヒスト
ファイン、ニチレイ）を含む０．５％ＢＳＡ，ＰＢＳを
１ウエル当たり１００μｌ加え、室温で３０分間インキ
ュベーションを行なった。０．１ｍｇ／ｍｌのテトラメ
チルベンチジンを含む０．１Ｍクエン酸緩衝液ｐＨ４．
０／０．０２％過酸化水素を１ウエル当たり１００μｌ
ずつ加え、室温で２０分間酵素反応させた。２Ｎの硫酸
水溶液を５０μｌずつ加え反応を停止させ４５０ｎｍの
吸光度をバイオラッド社のマイクロプレートリーダーモ
デル３５６０で測定した。
ＹＰ２Ｅ１抗体（抗原ペプタイド；Gly-Met-Gly-Lys-Gl
n-Gly-Asn-Glu-Ser-Arg-Ile-Gln-Arg-Glu）を２．０μ
ｇ／ｍｌの濃度に希釈し１ウエル当たり１００μｌずつ
イムノプレート（ヌンク社製）に加えた後、一夜、室温
でインキュベーションし固相化を行なった。０．０５％
Ｔｗｅｅｎ２０、０．９％ＮａＣｌ溶液にて洗浄後、１
％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むリン酸緩衝液を
１ウエル当たり３００μｌ加え、室温で一晩放置するこ
とによりブロッキングを行なった。ブロッキングしたウ
エルの溶液を捨て標準物質または検体を含む０．５％Ｂ
ＳＡ，ＰＢＳを１００μｌ加え、２時間反応させた。
０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、０．９％ＮａＣｌ溶液にて
洗浄後、ビオチン標識した抗ＣＹＰ２Ｅ１抗体２μｇ／
ｍｌ（抗原ペプタイド；Glu-Phe-Pro-Asp-Pro-Glu-Lys-
Phe-Lye-Pro-Glu-His-Phe-Leu）を含む０．５％ＢＳ
Ａ，ＰＢＳを１ウエル当たり１００μｌ加え、室温で一
時間インキュベーションを行なった。０．０５％Ｔｗｅ
ｅｎ２０、０．９％ＮａＣｌ溶液にて洗浄後、ストレプ
トアビジン標識のペルオキシダーゼ４０倍希釈（ヒスト
ファイン、ニチレイ）を含む０．５％ＢＳＡ，ＰＢＳを
１ウエル当たり１００μｌ加え、室温で３０分間インキ
ュベーションを行なった。０．１ｍｇ／ｍｌのテトラメ
チルベンチジンを含む０．１Ｍクエン酸緩衝液ｐＨ４．
０／０．０２％過酸化水素を１ウエル当たり１００μｌ
ずつ加え、室温で２０分間酵素反応させた。２Ｎの硫酸
水溶液を５０μｌずつ加え反応を停止させ４５０ｎｍの
吸光度をバイオラッド社のマイクロプレートリーダーモ
デル３５６０で測定した。
【００３２】標準物質にラット肝臓より得たＳ９分画の
可溶化物を用いた。５週令のＳＤラットに１０％のエタ
ノールを含む水道水を１０日間与えた一日後に肝臓を摘
出した。摘出された肝臓は０．１５Ｍ ＫＣｌ溶液にて
洗浄し肝臓の重さの３倍量の０．１５Ｍ ＫＣｌ溶液中
にて鋏みにて細かく裁断した後、ホモジナイザーにて可
溶化した。４℃に冷却した遠心機にて９０００ｇにて２
０分間遠心した後、その上清を滅菌布（ガーゼ）にてろ
過したものをＳ９分画とした。このＳ９分画を０．１％
Ｔｗｅｅｎ２０、ＰＢＳにて倍に希釈し４℃で３０分間
ときどき攪拌しながら可溶化した後、この溶解液を１２
０００ｒｐｍで３０分間遠心し得られた上清を得た。こ
の上清を０．５％ＢＳＡ，ＰＢＳにて８０倍希釈したと
き１００００ユニット／ｍｌとして標準曲線を作成した
（図１）。ヒト腎臓由来の細胞株ＯＳ−ＲＣ−２または
ヒト肝臓由来の細胞株ＨｕＬ−１を０．１％Ｔｗｅｅｎ
２０、ＰＢＳにて１×１０6個／ｍｌとし４℃で３０分
間ときどき攪拌しながら可溶化した後、この溶解液を１
２０００ｒｐｍで３０分間遠心し得られた上清を検体と
し測定をした。その結果、２つの細胞株ともＣＹＰ２Ｅ
１を検出することが出来た。また、その反応が特異的で
あることの確認試験として検体との反応中に固相化抗体
の抗原であるペプタイド（Cys-Gly-Met-Gly-Lys-Gln-Gl
y-Asn-Glu-Ser-Arg-Ile-Gln-Arg-Glu）５μｇを添加し
反応が特異的に阻害されることを確認した。その測定結
果を下記表１に示した。
可溶化物を用いた。５週令のＳＤラットに１０％のエタ
ノールを含む水道水を１０日間与えた一日後に肝臓を摘
出した。摘出された肝臓は０．１５Ｍ ＫＣｌ溶液にて
洗浄し肝臓の重さの３倍量の０．１５Ｍ ＫＣｌ溶液中
にて鋏みにて細かく裁断した後、ホモジナイザーにて可
溶化した。４℃に冷却した遠心機にて９０００ｇにて２
０分間遠心した後、その上清を滅菌布（ガーゼ）にてろ
過したものをＳ９分画とした。このＳ９分画を０．１％
Ｔｗｅｅｎ２０、ＰＢＳにて倍に希釈し４℃で３０分間
ときどき攪拌しながら可溶化した後、この溶解液を１２
０００ｒｐｍで３０分間遠心し得られた上清を得た。こ
の上清を０．５％ＢＳＡ，ＰＢＳにて８０倍希釈したと
き１００００ユニット／ｍｌとして標準曲線を作成した
（図１）。ヒト腎臓由来の細胞株ＯＳ−ＲＣ−２または
ヒト肝臓由来の細胞株ＨｕＬ−１を０．１％Ｔｗｅｅｎ
２０、ＰＢＳにて１×１０6個／ｍｌとし４℃で３０分
間ときどき攪拌しながら可溶化した後、この溶解液を１
２０００ｒｐｍで３０分間遠心し得られた上清を検体と
し測定をした。その結果、２つの細胞株ともＣＹＰ２Ｅ
１を検出することが出来た。また、その反応が特異的で
あることの確認試験として検体との反応中に固相化抗体
の抗原であるペプタイド（Cys-Gly-Met-Gly-Lys-Gln-Gl
y-Asn-Glu-Ser-Arg-Ile-Gln-Arg-Glu）５μｇを添加し
反応が特異的に阻害されることを確認した。その測定結
果を下記表１に示した。
【００３３】
【表１】
【００３４】
【実施例３：ヒト血清検体の測定】上記測定法にしたが
って、大腸癌患者血清術前１８例及び健常人血清１７例
について測定を行い、その結果を図２に示した。その結
果、大腸癌患者血清におけるＣＹＰ２Ｅ１値の分布は健
常人血清のそれよりも高い分布を示した。
って、大腸癌患者血清術前１８例及び健常人血清１７例
について測定を行い、その結果を図２に示した。その結
果、大腸癌患者血清におけるＣＹＰ２Ｅ１値の分布は健
常人血清のそれよりも高い分布を示した。
【００３５】
【発明の効果】本発明により、ＣＹＰ２Ｅ１蛋白質のペ
プチド断片がＣＹＰ２Ｅ１蛋白質に対して特異的に結合
する抗体の抗原になり得るという新知見に基づく、該蛋
白質の測定システムがはじめて開発された。ＣＹＰ２Ｅ
１ペプチドを抗原として得られる抗体は特異性が高いた
め、本測定法は再現性のある結果が得られ、癌その他の
疾患の診断に非常に有効である。また、本抗ＣＹＰ２Ｅ
１抗体を用いる本測定法ないし検出法としては、ＥＩ
Ａ、ＲＩＡ、免疫組織染色法、免疫沈降法、ウエスタン
ブロット法等が挙げられ、これらの方法を総合的に利用
することにより、更に正確な癌その他の疾患の診断が可
能となる。
プチド断片がＣＹＰ２Ｅ１蛋白質に対して特異的に結合
する抗体の抗原になり得るという新知見に基づく、該蛋
白質の測定システムがはじめて開発された。ＣＹＰ２Ｅ
１ペプチドを抗原として得られる抗体は特異性が高いた
め、本測定法は再現性のある結果が得られ、癌その他の
疾患の診断に非常に有効である。また、本抗ＣＹＰ２Ｅ
１抗体を用いる本測定法ないし検出法としては、ＥＩ
Ａ、ＲＩＡ、免疫組織染色法、免疫沈降法、ウエスタン
ブロット法等が挙げられ、これらの方法を総合的に利用
することにより、更に正確な癌その他の疾患の診断が可
能となる。
【００３６】本発明によれば、ヒトＣＹＰ２Ｅ１の測定
方法が提供されるだけでなく、ＣＹＰ２Ｅ１の（改変）
ペプタイド断片を抗原として得られる新規抗ヒトＣＹＰ
２Ｅ１抗体、及び、必要あればマイクロプレート、緩衝
液、酵素標識抗体、発色基質等をセットにした測定用キ
ットも提供され、ヒトＣＹＰ２Ｅ１の全測定システムが
有利に提供される。
方法が提供されるだけでなく、ＣＹＰ２Ｅ１の（改変）
ペプタイド断片を抗原として得られる新規抗ヒトＣＹＰ
２Ｅ１抗体、及び、必要あればマイクロプレート、緩衝
液、酵素標識抗体、発色基質等をセットにした測定用キ
ットも提供され、ヒトＣＹＰ２Ｅ１の全測定システムが
有利に提供される。
【図１】ＣＹＰ２Ｅ１の標準曲線を示す。
【図２】ヒト血清抗体中のＣＹＰ２Ｅ１の測定結果を示
す。
す。
Claims (12)
- 【請求項１】 ヒトチトクロームｐ４５０の分子種ＣＹ
Ｐ２Ｅ１を構成するペプタイド断片を抗原として得られ
るＣＹＰ２Ｅ１を認識する抗体。 - 【請求項２】 下記のアミノ酸配列を有するペプタイド
Ｉを抗原として得られる抗体。 Arg-Gln-Val-His-Ser-Ser-Trp-Asn-Leu-Pro-Pro-Gly-Pr
o-Phe - 【請求項３】 下記のアミノ酸配列を有するペプタイド
IIを抗原として得られる抗体。 Glu-Leu-Lys-Asn-Ile-Pro-Lys-Ser-Phe-Thr-Arg-Leu-Al
a-Gln - 【請求項４】 下記のアミノ酸配列を有するペプタイド
IIIを抗原として得られる抗体。 Tyr-Gly-Met-Gly-Lys-Gln-Gly-Asn-Glu-Ser-Arg-Ile-Gl
n-Arg-Glu - 【請求項５】 下記のアミノ酸配列を有するペプタイド
IVを抗原として得られる抗体。 Lys-His-Phe-Asp-Tyr-Asn-Asp-Glu-Lys-Phe-Leu-Arg-Le
u-Met - 【請求項６】 下記のアミノ酸配列を有するペプタイド
Ｖを抗原として得られる抗体。 Ser-Glu-Arg-Val-Lys-Glu-His-His-Gln-Ser-Leu-Asp-Pr
o-Asn-Cys - 【請求項７】 下記のアミノ酸配列を有するペプタイド
VIを抗原として得られる抗体。 Glu-Met-Glu-Lys-Glu-Lys-His-Ser-Ala-Glu-Arg-Leu-Ty
r-Thr - 【請求項８】 下記のアミノ酸配列を有するペプタイド
VIIを抗原として得られる抗体。 Glu-Ile-Glu-Glu-Lys-Leu-His-Glu-Glu-Ile-Asp-Arg-Va
l-Ile - 【請求項９】 下記のアミノ酸配列を有するペプタイド
VIIIを抗原として得られる抗体。 Gln-Glu-Phe-Pro-Asp-Pro-Glu-Lys-Phe-Lys-Pro-Glu-Hi
s-Phe-Leu-Asn - 【請求項１０】 ヒトＣＹＰ２Ｅ１を構成するペプタイ
ド断片、及び／又は、ペプタイドＩ〜VIIIの少なくとも
ひとつのペプタイドのアミノ酸配列の一部をアミノ酸の
置換、削除、挿入、及び／又は転移を行って改変ペプタ
イドを得、得られた改変ペプタイドを抗原として得られ
る請求項１〜請求項９のいずれか１項に記載の抗体。 - 【請求項１１】 請求項１〜請求項１０のいずれか１項
に記載の抗体を用いることを特徴とするヒトＣＹＰ２Ｅ
１の測定方法。 - 【請求項１２】 請求項１〜請求項１０のいずれか１項
に記載の抗体を含有することを特徴とするヒトＣＹＰ２
Ｅ１の測定用キット。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13449396A JPH09274042A (ja) | 1996-04-05 | 1996-04-05 | ヒトｃｙｐ２ｅ１に対する抗体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13449396A JPH09274042A (ja) | 1996-04-05 | 1996-04-05 | ヒトｃｙｐ２ｅ１に対する抗体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09274042A true JPH09274042A (ja) | 1997-10-21 |
Family
ID=15129617
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13449396A Pending JPH09274042A (ja) | 1996-04-05 | 1996-04-05 | ヒトｃｙｐ２ｅ１に対する抗体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09274042A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11105501B2 (en) | 2013-06-25 | 2021-08-31 | Tenaris Connections B.V. | High-chromium heat-resistant steel |
-
1996
- 1996-04-05 JP JP13449396A patent/JPH09274042A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11105501B2 (en) | 2013-06-25 | 2021-08-31 | Tenaris Connections B.V. | High-chromium heat-resistant steel |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A02 | Decision of refusal |
Effective date: 20040601 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 |