JPH09227565A

JPH09227565A - 創傷治療剤

Info

Publication number: JPH09227565A
Application number: JP8060367A
Authority: JP
Inventors: Hiroshi Terada; 弘寺田; Kazuto Okura; 一人大倉; Kenji Uragami; 憲司浦上
Original assignee: KAKEN SHIYOUYAKU KK; Kaken Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: KAKEN SHIYOUYAKU KK; Kaken Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1996-02-23
Filing date: 1996-02-23
Publication date: 1997-09-02

Abstract

(57)【要約】【課題】より安全で創傷治療効果の強い創傷治療剤、
すなわち皮膚等組織に発生した傷や潰瘍を、表皮細胞等
の再生能を利用して元の皮膚や粘膜の状態に戻す医薬の
開発。【解決手段】タマサキツヅラフジを抽出すること等に
より得られるセファランチンを有効成分として含有する
創傷治療剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、創傷治療剤に関
し、更に詳細には、皮膚等の組織に発生した傷や潰瘍
を、表皮細胞等の再生能を利用して元の皮膚等の状態に
戻すことのできる創傷治療剤に関する。

【０００２】

【従来の技術およびその課題】皮膚や粘膜は、多くの原
因により、しばしば損傷を受ける。これらの皮膚等組
織の損傷である傷や潰瘍は、創傷と呼ばれ、具体的には
切り傷、擦り傷、褥瘡（床ずれ）、痔疾、皮膚の潰瘍な
どが含まれる。これらの創傷は、痛みを伴ない、また
感染症の可能性もあり、更には不完全な形で治癒した場
合にはケロイドや傷あと等が残る場合もあるので、早期
に完全に治療することが求められている。

【０００３】従来、このような創傷を、表皮細胞等の再
生能を利用して元の状態に戻す薬剤としては、殺菌作用
のあるヨウ素と糖類を組み合わせた製剤、幼牛血液抽出
物を含む製剤、サイクリックＡＭＰ誘導体を含む製剤、
トコレチナートを含む製剤等が知られているが、更によ
り安全で創傷治療効果の強い創傷治療剤の開発が求めら
れていた。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者は、安全性が高
く、しかも創傷治療効果の優れた化合物について鋭意検
索を行っていたところ、既に抗結核薬として開発され、
造血作用、免疫調整作用、抗アレルギー作用を有する医
薬として知られているセファランチンが当該条件を満た
すものであることを見出し、本発明を完成した。すなわ
ち本発明は、セファランチンを有効成分として含有する
創傷治療剤を提供するものである。

【０００５】

【発明の実施の形態】本明細書中において、創傷治療剤
とは、皮膚や粘膜組織に発生した傷や潰瘍を、表皮細胞
等の再生能を利用して元の皮膚や粘膜の状態に戻す医薬
を意味し、一般に傷薬等として知られている殺菌剤や、
消炎鎮痛剤等を意味するものではない。

【０００６】本発明の創傷治療剤の有効成分として利用
されるセファランチンは、タマサキツヅラフジから抽出
されたものであり、細胞膜の脂質二重層の流動性を変化
させて膜を安定化させたり、いろいろなタイプの細胞の
内部で代謝を変動させる薬剤として知られている。例
えば、蛇毒による溶血に対しては強力な抑制作用を示し
たり、各種抗ガン剤の耐性に対する克服作用を有するこ
とが知られている。

【０００７】本発明の創傷治療剤は、このセファランチ
ンを有効成分とし、これを医薬的に許容しうる担体と組
合せ、製剤化することにより製造される。

【０００８】本発明の創傷治療剤の剤形としては、特に
制限はなく、非経口あるいは経口投与用の剤形とするこ
とができるが、創傷治療という目的から局所投与に適し
た剤形が望ましい。局所投与に好ましい剤形として外
用剤、注射剤等が挙げられ、このうち外用剤としては、
軟膏、ゲル、クリーム、乳液、液剤などの塗布剤、テー
プ剤、パッチ剤などの貼付剤、あるいはスプレー剤、粉
剤などの噴霧剤から選択される。また、患部周辺に投
与する形態として注射剤が挙げられる。更に、消化管
から吸収される形態として、粉剤、顆粒剤、錠剤等の剤
形を利用することも可能である。

【０００９】本発明の創傷治療剤の製造においては、水
や有機溶剤の他に、医薬的に許容しうる担体や一般的な
医薬添加物が使用される。そのような医薬添加物の例
としては、コラーゲン、ポリビニルアルコール、ポリビ
ニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、カルボキ
シメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸ナトリ
ウム、アルギン酸ナトリウム、水溶性デキストラン、カ
ルボキシメチルスターチナトリウム、ペクチン、メチル
セルロース、エチルセルロース、キサンタンガム、アラ
ビアゴム、カゼイン、ゼラチン、寒天、ポリエチレング
リコール、ジグリセリン、グリセリン、プロピレングリ
コール、ポリエチレングリコール、ワセリン、パラフィ
ン、ステアリルアルコール、ステアリン酸、ヒト血清ア
ルブミン（ＨＳＡ）、マンニトール、ソルビトール、ラ
クトース、医薬添加物として許容され得る界面活性剤な
どがあげられる。

【００１０】もちろん添加物が無くとも本発明の目的は
達成されるが、通常は本発明の創傷治療剤の剤形に応じ
て上記の中から適宜あるいは組み合わせて配合すること
が好ましい。

【００１１】また、本発明の創傷治療剤は、他の薬剤、
生物学的製剤や合成医薬製剤などとの、同時もしくは逐
次的併用投与することもできる。他の薬剤としては、
抗炎症作用、末梢循環改善作用、血栓生成抑制作用、組
織修復作用を有するもの、ヘパリン、あるいは本発明の
目的である創傷治癒活性を増強もしくは補助するような
創傷、痔疾、潰瘍治療剤の中から選ぶことができる。

【００１２】本発明の創傷治療剤は、例えばこれを外用
剤として調製する場合、製剤中に有効成分であるセファ
ランチンを０.０００００１〜１０重量％（以下、単に
「％」で示す）の範囲、特に０.００００１〜０.１％の
範囲とすることが好ましい。

【００１３】斯くして得られる本発明の創傷治療剤は、
例えば、各種創傷部位、すなわち皮膚等の組織の傷や潰
瘍等の損傷部位に塗布することにより利用される。具
体的な創傷の例としては、切り傷、擦り傷、褥瘡（床ず
れ）、痔疾、皮膚の潰瘍等が挙げられる。

【００１４】外用剤である創傷治療剤の投与回数として
は創傷時に１回、あるいは１日１ないし数回、もしくは
２ないし数日に１回の範囲で選ばれるがこれに限定され
るものではない。また、本発明の創傷治療剤の投与量
としては、１日につき創傷１部位当たりのセファランチ
ン量として、０.００１μｇから１００ｍｇの範囲で選
ばれる。好適には創傷１部位当たり０.０１μｇから１
ｍｇの範囲で選ばれる。前述の投与量は創傷部位の大
きさや症状によっても異なり、これらの値に限定される
ものでは勿論ない。

【００１５】

【実施例】次に試験例および製剤例を挙げ、更に詳しく
説明するが、本発明はこれら試験例や製剤例によりなん
ら制約されるものではない。

【００１６】試験例１新生ラット皮膚から分離した表皮基底および真皮細胞を
用い、その培養とプロテイン合成に対するセファランチ
ンの作用を次のようにして調べた。

【００１７】材料と方法：（試薬）Ｅａｇｌｅ培地（ＭＥＭ）（日水製薬, 東
京）；牛胎児血清（ＦＢＳ）（ウイタッカーＭ.Ａ.
バイオプロダクツ, 米国）；ＴＰＣＫ−トリプシン
（シグマ, 米国）；ディスパーゼ（合同酒精, 東
京）；タイプＩコラーゲン（コーケン, 東京）；ミリ
セル−ＣＭ（直径１２ｍｍ）（ミリポア・プロダクツ,
米国）；抗タイプＩＶコラーゲン血清（コラボレイテ
ィブ・バイオメディカル・プロダクツ, 米国）；抗ウ
サギＩｇＧ結合西洋ワサビペルオキシダーゼ（山羊）
（オルガノン・テクニカ, 米国）；セファランチン
（和光純薬,大阪）

【００１８】（表皮基底細胞の分離と培養）表皮基底細
胞は生後３日令のウイスター（Wistar）系から既知の方
法で分離した。この細胞を、Ｅａｇｌｅ培地に、１０％
牛胎児血清（ＦＢＳ）、２３.８ｍＭ重炭酸ソーダお
よび２０ｍＭＨｅｐｅｓ緩衝液を添加した培地（ＭＥ
Ｍ−ＦＢＳ）に浮遊させ、これに濃度を変えたセファラ
ンチンを添加した。

【００１９】この浮遊液（０.５ｍｌ）をタイプＩコラ
ーゲン被覆ミリポアフィルター上に初密度が５.０×１
０⁶ 細胞／ｍｌになるよう播種し、３７℃のＣＯ₂イン
キュベータ（５％ＣＯ₂）中で培養した。

【００２０】（真皮線維芽細胞の分離と培養）新生ラ
ットから全皮を剥離して５×５ｍｍの小片にカットし、
直径１００ｍｍの組織培養シャーレ上に、内側が下にな
るように播種した。小片がシャーレに接着したのち（約
５分後）、１０ｍｌのＭＥＭ−ＦＢＳを加えて３７℃の
ＣＯ₂ インキュベータ（５％ＣＯ₂）中で培養した。
７日間の培養期間中に小片から真皮線維芽細胞が伸張し
た。皮膚小片の残渣をシャーレから除去したのち、ト
リプシン（０.２５％）−ＥＤＴＡ（０.０２％）を加
え、３７℃で１分間消化して線維芽細胞を取り出した。
この細胞を新しい組織培養シャーレに移して数日間培
養したのち実験に使用した。

【００２１】（皮膚細胞の分離と培養）新生ラットの
皮膚から既知の方法で表皮膜を剥離分取した。残りの
皮膚膜を５ｍＭのＣａＣｌ₂ を含有する１０ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ７.４）中でコラゲナーゼと３７℃２時間
処理した。分散した皮膚細胞を回収するために、Ｃａ²⁺
とＭｇ²⁺を含まないリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中
１２００ｒｐｍで１分間遠心分離を行った。得られた
細胞をＭＥＭ−ＦＢＳ中に浮遊させ、２４−ウエル・マ
ルチプレート上、３７℃のＣＯ₂インキュベータ（５％
ＣＯ₂）中で培養した。

【００２２】（表皮基底細胞の接着性と生存率の測定
）表皮基底細胞の接着性を調べるため、所定の期間の
培養後培養液を捨てて接着しなかった細胞を除去した。
接着細胞には０.５ｍｌのＰＢＳを加え、ゴム製のポリ
スマンを用いて注意深くコラーゲン層から引きはがし
た。接着細胞の数は血球計算板で計数し、生存率はト
リパンブルー排除法で検査した。

【００２３】（イムノブロッティング）ＳＤＳ−ＰＡ
ＧＥは７.５％ゲル上でＬａｅｍｍｌｉの方法にしたが
って行った。表皮基底または真皮細胞を一定量のＰＢ
Ｓ中、８Ｍの尿素の存在または非存在下にブランソン・
ソニファー・セル・ディスルプター（Branson Sonifer
Cell Disrupter）（ｍｏｄｅｌ１８５）を用いて０℃で
１０秒間超音波処理した。粉砕した表皮基底細胞（５.
０×１０⁴ 細胞）または真皮細胞（４.０×１０³細胞）
（それぞれ１０μｌ）を等量の０.５ＭＴｒｉｓ−ＨＣ
ｌ（ｐＨ６.８）（１％ＳＤＳ、６５０ｍＭ２−メルカ
プトエタノールおよび２５％グリセロール含有）と混合
し、１分間煮沸したのちゲル上にアプライした。電気
泳動ののち、トウビン（Towbin）らの方法にしたがって
ウエスタンブロッティングを行った。

【００２４】マーカープロテインとしては、次のものを
用いた。ミオシン（myosin）２００ｋＤａ β−ガラクトシダーゼ１１６ｋＤａホスホリラーゼｂ９７ｋＤａ牛血清アルブミン６６ｋＤａオボアルブミン４３ｋＤａ

【００２５】（培養細胞の形態学的検鏡と免疫蛍光染
色）一定期間培養した細胞についてオリンパスＩＭＴ
−２顕微鏡下に形態を観察した。表皮細胞から産生さ
れたケラチンの検出にはオリンパス蛍光システム（ｍｏ
ｄｅｌＩＭＴ−２−ＲＦＣ）を用いた。新生ラットの
皮膚から生成されたケラチンに対する抗血清は既知の方
法でウサギから調製した。

【００２６】結果：（表皮基底細胞の接着とケラチン合成に対するセファ
ランチンの作用）人工基底膜、タイプＩコラーゲン被
覆ミリポアフィルター上に播種した表皮細胞の密度は
２.５×１０⁶ 細胞／ウエルで、これはコンフルエンス
の９５％以上に相当する。所定の期間培養したのち、
細胞のコラーゲン層への接着性と接着した細胞の生存率
に及ぼすセファランチンの作用を検討した。この結果
を図１および図２に示す。

【００２７】この結果から明らかなように、セファラン
チンを添加しないときには、培養細胞の半数は２日後コ
ラーゲン層から遊離したのに対し、セファランチンを添
加すると、細胞のコラーゲン層への接着と接着細胞の生
存率は何れも用量依存的に強化された。また、接着し
た細胞の数と生存率との間には殆どパラレルな関係が成
立していた。

【００２８】表皮細胞の接着に及ぼすセファランチンの
影響を顕微鏡下に観察した結果によれば、セファランチ
ンを添加しない場合、培養２日後には表皮基底細胞層の
一部に剥離が観察され、６日後にはそれが肉眼的にも判
別されるようになったのに対し、培地に５μＭのセファ
ランチンを添加した場合には、このように明瞭な細胞の
剥離は観察されなかった。

【００２９】セファランチンの表皮基底細胞のケラチン
合成に影響を与える影響を２日間培養した細胞について
検討した。皮膚の表皮基底細胞は生体内で分化の程度
に対応した種々のタイプのケラチンを合成するが、これ
らのプロテインを生成する能力はこの細胞の活性を判定
する指標の１つになっている。表皮基底細胞中に貯留
されたケラチンの量は、培地に添加されたセファランチ
ンの量の増加（セファランチンなし、０.１μＭ、１μ
Ｍ、５μＭ）に応じて著しく増大し、５５ｋＤａ、６０
ｋＤａ及び６８ｋＤａの３種の大きなバンドが検出され
た。

【００３０】（真皮線維芽細胞の増殖とタイプＩＶコ
ラーゲン合成に対するセファランチンの作用）真皮線維
芽細胞（１.７×１０⁴ 個）を２４−ウエルプラスチッ
クプレート上に播種し、ＭＥＭ−ＦＢＳ中セファランチ
ン無添加で培養すると６日後には細胞数は１.４×１０⁵
に達した（図３）。セファランチンはこのような増殖
を用量依存的に抑制し、５μＭの量で増殖を停止させ
た。その際細胞の生存率には何ら影響を与えなかった
（図４）。セファランチンの存在および非存在下、２
４−ウエルのプレート上で４日間培養した線維芽細胞の
顕微鏡による観察によれば、真皮線維芽細胞の増殖はセ
ファランチン存在下では抑制されているが、非存在下で
はよく増殖していることが確認された。

【００３１】真皮線維芽細胞の生体内における機能の１
つは基底膜の主要成分であるタイプＩＶコラーゲンを合
成することであるが、図３から分かるように、この細胞
はセファランチン無添加のＭＥＭ−ＦＢＳ培地中で増殖
はするがタイプＩＶコラーゲンの生成はようやく検出可
能な程度に過ぎない。実際、抗タイプＩＶコラーゲン
抗血清による検出で１７０ｋＤａと１８０ｋＤａに弱い
バンドが認められた程度である。

【００３２】一方、セファランチンを添加したときには
細胞の増殖は著しく抑制されたが、タイプＩＶコラーゲ
ンの生成はむしろ増強された。その上、産生されたコ
ラーゲンは細胞外へ分泌されていた。

【００３３】（表皮基底細胞の分化に及ぼすセファラ
ンチンの影響）表皮および真皮の両細胞を含む皮膚細
胞（２.５×１０⁶ 細胞）を２４−ウエルプラスチック
プレート上でＭＥＭ−ＦＢＳ中培養し、その生育状況お
よびケラチンの生成を顕微鏡および免疫蛍光顕微鏡で調
べた。この結果、セファランチン不含のＭＥＭ−ＦＢ
Ｓで２日間培養すると真皮線維芽細胞のみが増殖し、免
疫蛍光染色によるケラチンの検出はバックグラウンド程
度にしか過ぎなかった。これに対して、セファランチン
を添加したときには表皮基底細胞が培養プレートにしっ
かりと接着し、２日間の培養で細胞層が広がった。そ
の上、細胞層の表面全域に亘ってケラチンの生成したこ
とが認められた。しかしながら真皮線維芽細胞はこの
細胞層中には殆ど検出されなかった。

【００３４】結論：セファランチンは表皮基底細胞
の接着性と生存率を増強する一方で、真皮線維芽細胞に
対しては生存率には影響しないままプラスチックプレー
ト上での増殖を抑制したが、タイプＩＶコラーゲンの生
成能を失わせることはなかった。皮膚の線維芽細胞は
生体内では静止状態にあり、数種のコラーゲンを産生す
ることが知られているので、セファランチンを添加して
培養した真皮細胞は生体内のありのままの皮膚細胞と同
じような挙動を取るものと考えられる。

【００３５】上記のセファランチンの皮膚細胞に対する
作用は、培養した表皮基底細胞と真皮線維芽細胞のそれ
ぞれに対する作用の複合したものであった。一般に皮
膚表皮細胞を培養する際に、増殖と分化をするためには
線維芽細胞が必要であるといわれており、顕微鏡および
免疫蛍光顕微鏡による観察の結果から、皮膚細胞の培養
にセファランチンを添加することによる表皮基底細胞の
増殖は、真皮線維芽細胞の共存によって著しく増進する
ことが明かとなった。その上、セファランチンの添加
によって真皮線維芽細胞からのタイプＩＶコラーゲンの
産生が増強されることも明かとなった。これらのこと
は表皮基底細胞の接着と増殖が促進されることを意味す
る。

【００３６】したがって上記試験で示された結果は、生
体の損傷を受けた皮膚細胞に対するセファランチンの治
療上の有効性を示すものである。

【００３７】製剤例１軟膏剤（１）：白色ワセリン２５０ｇ、ステアリル
アルコール２００ｇ、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油
６０の４０ｇおよびモノステアリン酸グリセリン１０ｇ
を水浴上で加温して溶解し、よく混合して約７５℃に保
つ。これに、予めプロピレングリコール１２０ｇにセフ
ァランチン１ｇ、パラオキシ安息香酸メチル１ｇ及びパ
ラオキシ安息香酸プロピル１ｇを加温して溶解し、精製
水３５８ｍｌに加えて約７５℃に加温した液を加え、か
き混ぜて乳液としたのち冷却し、固まるまでよくかき混
ぜて軟膏剤とする。

【００３８】製剤例２軟膏剤（２）：プラスチベースおよび白色ワセリン
の２：１の混合物７５ｇ、流動パラフィン３ｇ、ＣＭＣ
−Ｎａ２０ｇよりなる混合物を水浴上６０℃に加温し、
良く攪拌しながらセファランチン２ｇを加え、全体を均
一として軟膏剤を得た。

【００３９】製剤例３乳液剤：下記組成および製法により乳液を調製し
た。（組成）Ａ成分；セファランチン０.０５ｇステアリン酸３.５ｇオリブ油５.０ｇスクワラン５.０ｇ還元ラノリン１.０ｇモノステアリン酸ソルビタン１.０ｇモノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０ＥＯ）２.０ｇブチルパラペン０.１ｇＢ成分；トリエタノールアミン０.３ｇプロピレングリコール２.０ｇメチルパラペン１.０ｇ精製水適量（合計１００ｇ）

【００４０】（製法）Ａの油相部及びＢの水相部を
７０〜７２℃に加熱した後、水相部と油相部を混合し、
乳化器で乳化する。次いでこの乳化物を３０℃に冷却
し、容器に充填して乳液剤を得る。

【００４１】製剤例４クリーム剤（１）：製剤例３の製法と同様にして、下記
組成でクリーム剤を製造する。（組成）Ａ成分；セファランチン０.０２ｇ自己乳化型モノステアリン酸グリセリン５.０ｇステアリン酸６.０ｇスクワラン３０.０ｇ防腐剤及び酸化防止剤適量Ｂ成分；水酸化カリウム０.３ｇグリセリン３.０ｇ精製水適量（合計１００ｇ）

【００４２】製剤例５クリーム剤（２）：製剤例３の製法と同様にして、下記
組成でクリーム剤を製造する。（組成）Ａ成分；セファランチン０.０５ｇさらし蜜ろう１０.０ｇマイクロクリスタリンワックス２.０ｇ鯨ろう２.０ｇスクワラン２０.０ｇ流動パラフィン２５.０ｇベヘニルアルコール１.０ｇモノステアリン酸ソルビタン１.５ｇモノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０ＥＯ）２.３ｇ酸化防止剤及び防腐剤適量Ｂ成分；硼砂０.６ｇプロピレングリコール３.０ｇ精製水適量（合計１００ｇ）

【００４３】製剤例６注射剤：セファランチン５００ｍｇおよびＤ−マン
ニトール１.０ｇを注射用蒸留水に溶解して全量１００
ｍｌとする。この溶液を０.２μのメンプレンフィルタ
ーで濾過し、２ｍｌのアンプルに分注し、熔封したのち
加熱滅菌して注射剤とする。

【００４４】製剤例７錠剤：セファランチン５００ｍｇ、乳糖３.０ｇ、
とうもろこし澱粉１.２８ｇ、ヒドロキシプロピルセル
ロース２００ｍｇ及びステアリン酸マグネシウム２０ｍ
ｇをよく混合し、造粒したのち打錠して１錠当たり１０
０ｍｇの錠剤とする。

【００４５】製剤例８カプセル剤：セファランチン５００ｍｇ、乳糖２.５
ｇ、ばれいしょ澱粉１.７５ｇ、結晶セルロース２４０
ｍｇ及びステアリン酸カルシウム１０ｍｇをよく混合
し、この混合物をカプセルに充填して１カプセル中有効
成分１０ｍｇを含有するカプセル剤とする。

【００４６】

【発明の効果】本発明の創傷治療剤によれば、迅速かつ
完全に、しかもその傷痕を残さずり創傷を治療すること
が可能となる。

【図面の簡単な説明】

【図１】表皮基底細胞ののコラーゲン層への接着性を
示す図面。

【図２】接着した表皮基底細胞の生存率を示す図面。

【図３】真皮線維芽細胞の増殖を示す図面。

【図４】増殖した線維芽細胞の生存率を示す図面。

【符号の説明】

各図において、白丸は、セファランチンなしを、黒丸
は、セファランチン０.１μＭを、白三角はセファラン
チン１μＭを、黒三角はセファランチン５μＭをそれぞ
れ示す。以上

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】セファランチンを有効成分として含有す
る創傷治療剤。
【請求項２】切り傷、擦り傷、褥瘡、痔疾および皮膚
潰瘍から選ばれた創傷を治療するものである請求項第１
項記載の創傷治療剤。
【請求項３】外用剤である請求項第１項記載の創傷治
療剤。
【請求項４】セファランチンを０.０００００１〜１
０重量％含有する請求項第１項または第３項記載の創傷
治療剤。
【請求項５】経口投与剤である請求項第１項記載の創
傷治療剤。