JPH09222428A - 検量体が、サンドイツチ免疫アツセイで用いられる抗体の一つに対する抗体及び被検体の配列からなる、該アツセイにおいて使用するための合成検量体の調製方法 - Google Patents
検量体が、サンドイツチ免疫アツセイで用いられる抗体の一つに対する抗体及び被検体の配列からなる、該アツセイにおいて使用するための合成検量体の調製方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 サンドイッチ免疫アッセイで使用するための
合成検量体の提供。 【解決手段】 被検体の配列及びその検査に用いられる
抗体の一つに対する抗体からなる結合物（ｃｏｎｊｕｇ
ａｔｅ）からなる被検体を検出するためのサンドイッチ
免疫アッセイにおける安定な検量体。
合成検量体の提供。 【解決手段】 被検体の配列及びその検査に用いられる
抗体の一つに対する抗体からなる結合物（ｃｏｎｊｕｇ
ａｔｅ）からなる被検体を検出するためのサンドイッチ
免疫アッセイにおける安定な検量体。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、サンドイッチ免疫
アッセイにおいて使用するための検量体に関する。
アッセイにおいて使用するための検量体に関する。
【０００２】
【従来の技術】それらの特にすぐれた特異性と感度のた
めに、免疫アッセイは、医療診断の目的で、血清サンプ
ルまたは尿サンプル中のタンパク質を検出するためにし
ばしば用いられる。このアッセイは、１つまたは２つの
特異的な抗体に加えて、患者サンプルを定量するための
比較標準として用いる検量体を必要とする。特に、大き
な分析研究所で行われる自動化されたアッセイの場合、
検量体を４℃で数週間から数カ月の期間保存できること
が望ましい。被検体に依っては、例えば、生理的食塩や
ｐＨ条件下での可溶性の保証がない場合には、検量体調
製物の安定性のために提起されるこれらの要求は困難と
なり得る。一例として、変性溶液（６Ｍ尿素、０．０１
Ｍジチオトレイトール）中でのみ十分に安定で可溶であ
る、トロポニンＩとトロポニンＴをこの関連において述
べることができる。しかしながら、抗体はこの処理によ
り損傷を受けるので、この変性調製物を用いたいかなる
免疫アッセイも確立することはできない。
めに、免疫アッセイは、医療診断の目的で、血清サンプ
ルまたは尿サンプル中のタンパク質を検出するためにし
ばしば用いられる。このアッセイは、１つまたは２つの
特異的な抗体に加えて、患者サンプルを定量するための
比較標準として用いる検量体を必要とする。特に、大き
な分析研究所で行われる自動化されたアッセイの場合、
検量体を４℃で数週間から数カ月の期間保存できること
が望ましい。被検体に依っては、例えば、生理的食塩や
ｐＨ条件下での可溶性の保証がない場合には、検量体調
製物の安定性のために提起されるこれらの要求は困難と
なり得る。一例として、変性溶液（６Ｍ尿素、０．０１
Ｍジチオトレイトール）中でのみ十分に安定で可溶であ
る、トロポニンＩとトロポニンＴをこの関連において述
べることができる。しかしながら、抗体はこの処理によ
り損傷を受けるので、この変性調製物を用いたいかなる
免疫アッセイも確立することはできない。
【０００３】タンパク質が溶液中では比較的不安定であ
ることや、タンパク質を含む試薬がしばしば凍結乾燥し
た形態で、実験者が使用前にそれらを溶解しなければな
らない適当な組成の溶媒と共に、販売されていること
は、知られている。もし、このようにして得られた溶液
が４℃で保存されるなら、たとえ毎日の測定がその試薬
の濃度がある程度変化していることを示しても、数日間
は使用できる。それ故、一般的に、トロポニンＩとトロ
ポニンＴの場合も同様に、凍結乾燥材料から得られた比
較溶液は、もし比較的長期間保存されるのなら、単一用
量の形態において凍結されることが推薦される。
ることや、タンパク質を含む試薬がしばしば凍結乾燥し
た形態で、実験者が使用前にそれらを溶解しなければな
らない適当な組成の溶媒と共に、販売されていること
は、知られている。もし、このようにして得られた溶液
が４℃で保存されるなら、たとえ毎日の測定がその試薬
の濃度がある程度変化していることを示しても、数日間
は使用できる。それ故、一般的に、トロポニンＩとトロ
ポニンＴの場合も同様に、凍結乾燥材料から得られた比
較溶液は、もし比較的長期間保存されるのなら、単一用
量の形態において凍結されることが推薦される。
【０００４】
【発明の構成】本発明は、非常にすぐれた安定性を有
し、そして血液、血しょう、血清、尿のサンプル中の医
学的に関係した被検体を測定するためのサンドイッチ免
疫アッセイにおいて用いることのできる、合成検量体に
関する。サンドイッチ免疫アッセイの明瞭な特徴は、被
検体が２つの抗体の間にあるようになるために、その被
検体に特異的であるが、異なった認識部位（エピトー
プ）に結合する２つの抗体を用いることにある（図１参
照）。従って、サンドイッチ免疫アッセイのための検量
体もまた、用いた抗体の各々に対して１つずつ、２つの
結合部位を有しなければならない。しばしば、少なくと
も１つの抗体のエピトープは、アミノ酸配列の形態にあ
ることが知られており、従って、１つの結合部位は、こ
のペプチド、すなわち被検体の構成配列からなることが
できる。もし、もう１つの抗体のエピトープが未知であ
るなら、あるいは、それが３次元構造を有するなら、こ
の認識部位は、ペプチドにより真似ることはできない。
これにもかかわらず、サンドイッチを形成するために
は、抗原認識部位以外の部位に結合する、抗体の能力を
利用することができる。１つの可能性は、該抗体に対し
て向けられた抗体または抗体フラグメントを用いること
にある。もし、この抗体が、上に述べたペプチドに結合
される（ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ）なら、サンドイッチ免
疫アッセイにおいて用いられる抗体の各々に対する結合
部位を有する、合成検量体が得られる（図２ａ及びｂ参
照）。
し、そして血液、血しょう、血清、尿のサンプル中の医
学的に関係した被検体を測定するためのサンドイッチ免
疫アッセイにおいて用いることのできる、合成検量体に
関する。サンドイッチ免疫アッセイの明瞭な特徴は、被
検体が２つの抗体の間にあるようになるために、その被
検体に特異的であるが、異なった認識部位（エピトー
プ）に結合する２つの抗体を用いることにある（図１参
照）。従って、サンドイッチ免疫アッセイのための検量
体もまた、用いた抗体の各々に対して１つずつ、２つの
結合部位を有しなければならない。しばしば、少なくと
も１つの抗体のエピトープは、アミノ酸配列の形態にあ
ることが知られており、従って、１つの結合部位は、こ
のペプチド、すなわち被検体の構成配列からなることが
できる。もし、もう１つの抗体のエピトープが未知であ
るなら、あるいは、それが３次元構造を有するなら、こ
の認識部位は、ペプチドにより真似ることはできない。
これにもかかわらず、サンドイッチを形成するために
は、抗原認識部位以外の部位に結合する、抗体の能力を
利用することができる。１つの可能性は、該抗体に対し
て向けられた抗体または抗体フラグメントを用いること
にある。もし、この抗体が、上に述べたペプチドに結合
される（ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ）なら、サンドイッチ免
疫アッセイにおいて用いられる抗体の各々に対する結合
部位を有する、合成検量体が得られる（図２ａ及びｂ参
照）。
【０００５】化学結合は、文献に記述されている既知の
方法を用いて行われる（Ｓ．Ｓ．Ｗｏｎｇ，Ｃｈｅｍｉ
ｓｔｒｙ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｊｕｇａｔｉ
ｏｎａｎｄ ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｉｎｇ、１９９１、
ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．ＩＳＢＮ ０−８４９３
−５８８６−８）。
方法を用いて行われる（Ｓ．Ｓ．Ｗｏｎｇ，Ｃｈｅｍｉ
ｓｔｒｙ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｊｕｇａｔｉ
ｏｎａｎｄ ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｉｎｇ、１９９１、
ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．ＩＳＢＮ ０−８４９３
−５８８６−８）。
【０００６】本発明は、特に、急性心筋梗塞を診断する
のに重要である心臓特異的タンパク質、心臓トロポニン
Ｉに対する合成検量体物質に関する。この検量体は、抗
体に結合された（ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ）この被検体の
ペプチドの各場合からなる。これらの抗体は、その被検
体を検出するための検査に用いられる抗体と反応する。
これらのペプチドは、被検体特異的抗体のエピトープ、
すなわち、通例、その分子の表面からのタンパク質配列
である。それらは、市販されている合成機を用いて調製
されることができる。ペプチドはまた、その中で１つま
たはそれ以上のアミノ酸が化学反応の手段により誘導さ
れた、ペプチド誘導体として理解されるものである。本
発明によるペプチド誘導体の例は、特に、その中で主鎖
及び／または反応性アミノ酸側鎖基、例えば、遊離型ア
ミノ基、遊離型カルボキシル基、及び／または遊離型水
酸基が誘導された分子である。アミノ基の誘導体の具体
例は、スルホンアミドまたはカルボキシアミド、チオウ
レタン誘導体、及び例えば塩酸のアンモニウム塩であ
る。カルボキシル基の誘導体の例は、塩、エステル、及
びアミドである。水酸基の誘導体の例は、Ｏ−アシルま
たはＯ−アルキル誘導体である。
のに重要である心臓特異的タンパク質、心臓トロポニン
Ｉに対する合成検量体物質に関する。この検量体は、抗
体に結合された（ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ）この被検体の
ペプチドの各場合からなる。これらの抗体は、その被検
体を検出するための検査に用いられる抗体と反応する。
これらのペプチドは、被検体特異的抗体のエピトープ、
すなわち、通例、その分子の表面からのタンパク質配列
である。それらは、市販されている合成機を用いて調製
されることができる。ペプチドはまた、その中で１つま
たはそれ以上のアミノ酸が化学反応の手段により誘導さ
れた、ペプチド誘導体として理解されるものである。本
発明によるペプチド誘導体の例は、特に、その中で主鎖
及び／または反応性アミノ酸側鎖基、例えば、遊離型ア
ミノ基、遊離型カルボキシル基、及び／または遊離型水
酸基が誘導された分子である。アミノ基の誘導体の具体
例は、スルホンアミドまたはカルボキシアミド、チオウ
レタン誘導体、及び例えば塩酸のアンモニウム塩であ
る。カルボキシル基の誘導体の例は、塩、エステル、及
びアミドである。水酸基の誘導体の例は、Ｏ−アシルま
たはＯ−アルキル誘導体である。
【０００７】加えて、ペプチド誘導体という用語はま
た、その中で、１つまたはそれ以上のアミノ酸が、２０
の「標準」アミノ酸の天然の、あるいは非天然のアミノ
酸同族体により、置換されるペプチドを包含する。その
ような同族体の例は、４−ヒドロキシプロリン、５−ヒ
ドロキシリジン、３−メチルヒスチジン、ホモセリン、
オルニチン、β−アラニン、及び４−アミノ酪酸であ
る。ペプチド誘導体は、それらが誘導されたペプチドと
本質的に同等である、抗体に対する結合の特異性及び／
または親和力を示さなければならない。ペプチドの長さ
は、慣例上、少なくとも４アミノ酸である。好ましく
は、その長さは、４から３０アミノ酸であり、特に好ま
しくは、４から１５アミノ酸である。
た、その中で、１つまたはそれ以上のアミノ酸が、２０
の「標準」アミノ酸の天然の、あるいは非天然のアミノ
酸同族体により、置換されるペプチドを包含する。その
ような同族体の例は、４−ヒドロキシプロリン、５−ヒ
ドロキシリジン、３−メチルヒスチジン、ホモセリン、
オルニチン、β−アラニン、及び４−アミノ酪酸であ
る。ペプチド誘導体は、それらが誘導されたペプチドと
本質的に同等である、抗体に対する結合の特異性及び／
または親和力を示さなければならない。ペプチドの長さ
は、慣例上、少なくとも４アミノ酸である。好ましく
は、その長さは、４から３０アミノ酸であり、特に好ま
しくは、４から１５アミノ酸である。
【０００８】結合（ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ）を促進す
るために、システインがペプチドのＣ末端に付けられ
た。カップリングについては、タンパク質結合（ｃｏｎ
ｊｕｇａｔｉｏｎ）のために知られている方法が選択さ
れた（Ｓ．Ｙｏｓｈｉｔａｋｅ等、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ．、１０１：３９５、１９７９）。２０ｍＭＳ
ＭＣＣをＤＭＦに溶解し、その溶液を２５倍過剰として
抗体に加えることにより、抗体は、ＳＭＣＣで活性化さ
れた。その混合液は、２５℃で２５分間インキュベート
された。その反応は、１μＭグリシン溶液を加えること
により、停止された（２５℃、１０分）。ペプチドは、
その配列中のスルホヒドリル基を経由するか、あるい
は、そのような基を２−ＩＴを用いてペプチドに挿入す
るかのいずれかにより、活性化された抗体に結合され
た。抗体当たりのペプチドの数は、慣例上、１から５０
であり、好ましくは１から１０であり、異なったペプチ
ド配列の数は、１から２０の間であり、好ましくは１か
ら５、特に好ましくは１である。
るために、システインがペプチドのＣ末端に付けられ
た。カップリングについては、タンパク質結合（ｃｏｎ
ｊｕｇａｔｉｏｎ）のために知られている方法が選択さ
れた（Ｓ．Ｙｏｓｈｉｔａｋｅ等、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ．、１０１：３９５、１９７９）。２０ｍＭＳ
ＭＣＣをＤＭＦに溶解し、その溶液を２５倍過剰として
抗体に加えることにより、抗体は、ＳＭＣＣで活性化さ
れた。その混合液は、２５℃で２５分間インキュベート
された。その反応は、１μＭグリシン溶液を加えること
により、停止された（２５℃、１０分）。ペプチドは、
その配列中のスルホヒドリル基を経由するか、あるい
は、そのような基を２−ＩＴを用いてペプチドに挿入す
るかのいずれかにより、活性化された抗体に結合され
た。抗体当たりのペプチドの数は、慣例上、１から５０
であり、好ましくは１から１０であり、異なったペプチ
ド配列の数は、１から２０の間であり、好ましくは１か
ら５、特に好ましくは１である。
【０００９】検量体物質を精製、すなわち、低分子量ペ
プチドを分離するために、ゲルクロマトグラフィー（ス
ーパーデックス （Ｓｕｐｅｒｄｅｘ） ２００）が行わ
れた。検量体物質の濃度は、次いで、ＵＶ分光計（ｓｐ
ｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）により測定され、その物質は、
０．５％ＢＳＡ／０．１％アジ化ナトリウムを用いて、
安定化された。これに加えて、非標識抗体を分離するた
めに、免疫アッセイにも用いられる配列特異的な抗体を
用いて、アフィニティークロマトグラフィー精製を行う
ことが可能である。
プチドを分離するために、ゲルクロマトグラフィー（ス
ーパーデックス （Ｓｕｐｅｒｄｅｘ） ２００）が行わ
れた。検量体物質の濃度は、次いで、ＵＶ分光計（ｓｐ
ｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）により測定され、その物質は、
０．５％ＢＳＡ／０．１％アジ化ナトリウムを用いて、
安定化された。これに加えて、非標識抗体を分離するた
めに、免疫アッセイにも用いられる配列特異的な抗体を
用いて、アフィニティークロマトグラフィー精製を行う
ことが可能である。
【００１０】
【実施例】実施例１ 配列ＲＡＹＡＴＥＰＨＡＫＫＫＳ（配列Ｉ）を有するペ
プチドが、抗マウス抗体に結合された（ｃｏｎｊｕｇａ
ｔｅｄ）。免疫アッセイは、図２ａに描写した方法に従
って行われた。モノクローナル抗体のイソタイプは、Ｉ
ｇＧ１であった。従って、抗マウス検量体抗体は、Ｉｇ
Ｇ１に対して向けられなければならない。それは、磁気
小球上（ｍａｇｎｅｔｉｃ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ）のＩ
ｇＧ２ａ（抗ＦＩＴＣ）と反応しない。ポリクローナル
抗体は、該配列を有するペプチドを認識する。このこと
は、その中で、被検体ＴｎＩが合成検量体により置き代
えられるサンドイッチの構成物をもたらす。
プチドが、抗マウス抗体に結合された（ｃｏｎｊｕｇａ
ｔｅｄ）。免疫アッセイは、図２ａに描写した方法に従
って行われた。モノクローナル抗体のイソタイプは、Ｉ
ｇＧ１であった。従って、抗マウス検量体抗体は、Ｉｇ
Ｇ１に対して向けられなければならない。それは、磁気
小球上（ｍａｇｎｅｔｉｃ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ）のＩ
ｇＧ２ａ（抗ＦＩＴＣ）と反応しない。ポリクローナル
抗体は、該配列を有するペプチドを認識する。このこと
は、その中で、被検体ＴｎＩが合成検量体により置き代
えられるサンドイッチの構成物をもたらす。
【００１１】自動化されたサンドイッチアッセイ 人工検量体が、自動化されたＩｍｍｕｎｏ １（商標）
ＴｅｃｈｎｉｃｏｎＡｎａｌｙｚｅｒ（Ｂａｙｅｒ
Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）に用いられた。アッセイ型
は、以下の抗体、１．ヒト心臓トロポニンＩに対するモ
ノクローナル抗体、２．配列１のペプチドに対して、ア
フィニティー精製された、ヤギポリクローナル抗体、を
用いたサンドイッチからなる。サンドイッチの第一抗体
は、人工検量体の抗マウスＩｇＧ１と結合する。この第
一抗体は、ＦＩＴＣで標識され、抗ＦＩＴＣを経由して
磁気小球上に固定される。サンドイッチの第二抗体は、
合成検量体上のペプチドと反応する。この後者の抗体
は、アルカリホスファターゼを有し、着色反応を触媒す
る。これらの抗体は、順に保温された。この検査法にお
いて、着色の強度は、検量体物質の濃度に比例して増加
した。
ＴｅｃｈｎｉｃｏｎＡｎａｌｙｚｅｒ（Ｂａｙｅｒ
Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）に用いられた。アッセイ型
は、以下の抗体、１．ヒト心臓トロポニンＩに対するモ
ノクローナル抗体、２．配列１のペプチドに対して、ア
フィニティー精製された、ヤギポリクローナル抗体、を
用いたサンドイッチからなる。サンドイッチの第一抗体
は、人工検量体の抗マウスＩｇＧ１と結合する。この第
一抗体は、ＦＩＴＣで標識され、抗ＦＩＴＣを経由して
磁気小球上に固定される。サンドイッチの第二抗体は、
合成検量体上のペプチドと反応する。この後者の抗体
は、アルカリホスファターゼを有し、着色反応を触媒す
る。これらの抗体は、順に保温された。この検査法にお
いて、着色の強度は、検量体物質の濃度に比例して増加
した。
【００１２】実施例２ 別の検量体が、配列ＴＧＬＧＦＡＥＬＱＤＬＣＲＱＩＨ
ＡＲＶＤ（配列２）と抗ヤギ抗体から作られた（図２
ｂ）。この場合、モノクローナル抗体は、ペプチドを認
識する。検量体のヤギ抗体は、着色反応のための酵素を
有するヤギポリクローナル抗体に結合する。
ＡＲＶＤ（配列２）と抗ヤギ抗体から作られた（図２
ｂ）。この場合、モノクローナル抗体は、ペプチドを認
識する。検量体のヤギ抗体は、着色反応のための酵素を
有するヤギポリクローナル抗体に結合する。
【００１３】自動化されたサンドイッチアッセイ 実施例２において述べられたような人工検量体もまた、
自動化されたＩｍｍｕｎｏ １（商標） Ｔｅｃｈｎｉ
ｃｏｎ Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｂａｙｅｒ Ｄｉａｇｎｏ
ｓｔｉｃｓ）に用いられた。アッセイ型は、以下の抗
体、１．ヒト心臓トロポニンＩの配列２に対するモノク
ローナル抗体、２．ヒト心臓トロポニンに対するヤギポ
リクローナル抗体、を用いたサンドイッチであった。サ
ンドイッチの第一抗体は、配列２を有するペプチドに結
合する。この抗体は、ＦＩＴＣで標識され、抗ＦＩＴＣ
を経由して磁気小球上に固定される。サンドイッチの第
二抗体は、合成検量体の抗ヤギ抗体と反応する。この第
二抗体は、アルカリフォスファターゼを有し、着色反応
を触媒する。これらの抗体は、順に保温される。この検
査法においても、着色の強度は、検量体物質の濃度に比
例して増加した。
自動化されたＩｍｍｕｎｏ １（商標） Ｔｅｃｈｎｉ
ｃｏｎ Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｂａｙｅｒ Ｄｉａｇｎｏ
ｓｔｉｃｓ）に用いられた。アッセイ型は、以下の抗
体、１．ヒト心臓トロポニンＩの配列２に対するモノク
ローナル抗体、２．ヒト心臓トロポニンに対するヤギポ
リクローナル抗体、を用いたサンドイッチであった。サ
ンドイッチの第一抗体は、配列２を有するペプチドに結
合する。この抗体は、ＦＩＴＣで標識され、抗ＦＩＴＣ
を経由して磁気小球上に固定される。サンドイッチの第
二抗体は、合成検量体の抗ヤギ抗体と反応する。この第
二抗体は、アルカリフォスファターゼを有し、着色反応
を触媒する。これらの抗体は、順に保温される。この検
査法においても、着色の強度は、検量体物質の濃度に比
例して増加した。
【００１４】本発明の主な特徴及び態様は次のとおりで
ある。
ある。
【００１５】１．被検体に特異的なペプチドまたはペプ
チド誘導体と結合した（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）抗体から
なる、サンドイッチ免疫アッセイにおいて使用するため
の検量体。
チド誘導体と結合した（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）抗体から
なる、サンドイッチ免疫アッセイにおいて使用するため
の検量体。
【００１６】２．抗体が、免疫アッセイにおいて用いら
れるもう一つの抗体に対して向けられることにおいて特
徴づけられる、上記１の検量体。
れるもう一つの抗体に対して向けられることにおいて特
徴づけられる、上記１の検量体。
【００１７】３．抗体が、モノクローナルまたはポリク
ローナル抗体、あるいはそれらのフラグメントであるこ
とにおいて特徴づけられる、上記１及び２の検量体。
ローナル抗体、あるいはそれらのフラグメントであるこ
とにおいて特徴づけられる、上記１及び２の検量体。
【００１８】４．ペプチドまたはペプチド誘導体が、４
から３０アミノ酸の長さを有することにおいて特徴づけ
られる、上記１から３の検量体。
から３０アミノ酸の長さを有することにおいて特徴づけ
られる、上記１から３の検量体。
【００１９】５．１から５０のペプチドまたはペプチド
誘導体が、結合物（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）中の結合部位
として存在することにおいて特徴づけられる、上記１か
ら４の検量体。
誘導体が、結合物（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）中の結合部位
として存在することにおいて特徴づけられる、上記１か
ら４の検量体。
【００２０】６．水溶液中の上記１から５の検量体を含
む、液体の安定な検量体溶液。
む、液体の安定な検量体溶液。
【００２１】７．その水溶液が、それに加えて、さらに
緩衝液、安定剤、防腐剤、界面活性剤、及び共溶媒のよ
うな補助物質を含むことにおいて特徴づけられる、上記
６の検量体。
緩衝液、安定剤、防腐剤、界面活性剤、及び共溶媒のよ
うな補助物質を含むことにおいて特徴づけられる、上記
６の検量体。
【００２２】８．ペプチドまたはペプチド誘導体が、ト
ロポニンＩのアミノ酸配列からの配列であることにおい
て特徴づけられる、上記１から７の検量体。
ロポニンＩのアミノ酸配列からの配列であることにおい
て特徴づけられる、上記１から７の検量体。
【００２３】９．ペプチドが、配列１及び／または配列
２を有することにおいて特徴づけられる、上記１から８
の検量体。
２を有することにおいて特徴づけられる、上記１から８
の検量体。
【００２４】１０．診断用検査剤を調製するための、上
記１から９の検量体の使用。
記１から９の検量体の使用。
【図１】サンドイッチ免疫アッセイの概念図である。
【図２】本発明に従う、合成検量体の使用概念図であ
る。
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ニコレ・ペテシユ ドイツ42115ブツペルタール・シユペルリ ングスガツセ37
Claims (1)
- 【請求項１】 被検体に特異的なペプチドまたはペプチ
ド誘導体と結合した抗体からなる、サンドイッチ免疫ア
ッセイにおいて使用するための検量体。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19548028A DE19548028A1 (de) | 1995-12-21 | 1995-12-21 | Verfahren zur Herstellung eines synthetischen Kalibrators für den Einsatz in Sandwich-Immunoassays, bestehend aus einem Antikörper gegen einen der im Assay benutzten Antikörper und einer Sequenz des Analyten |
| DE19548028.7 | 1995-12-21 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09222428A true JPH09222428A (ja) | 1997-08-26 |
Family
ID=7780943
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8352625A Pending JPH09222428A (ja) | 1995-12-21 | 1996-12-16 | 検量体が、サンドイツチ免疫アツセイで用いられる抗体の一つに対する抗体及び被検体の配列からなる、該アツセイにおいて使用するための合成検量体の調製方法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5925533A (ja) |
| EP (1) | EP0780687B1 (ja) |
| JP (1) | JPH09222428A (ja) |
| CA (1) | CA2193323C (ja) |
| DE (2) | DE19548028A1 (ja) |
| DK (1) | DK0780687T3 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2012513586A (ja) * | 2008-12-22 | 2012-06-14 | コーニンクレッカ フィリップス エレクトロニクス エヌ ヴィ | 磁気ラベルを使用するトロポニンｉに関するアッセイ |
| JP2016105094A (ja) * | 2011-04-20 | 2016-06-09 | コリア アドバンスト インスティテュート オブ サイエンスアンド テクノロジーＫｏｒｅａ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ | 細胞環境内での単一分子レベルにおけるタンパク質−タンパク質相互作用分析方法及び装置 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19637803A1 (de) * | 1996-09-17 | 1998-03-19 | Boehringer Mannheim Gmbh | Stabilisierung von Standardlösungen durch Konjugate |
| US6248869B1 (en) * | 1997-05-29 | 2001-06-19 | Medical Analysis Systems, Inc. | Troponin I forms and use of the same |
| AU6117099A (en) | 1998-10-21 | 2000-05-08 | Spectral Diagnostics Inc. | Cardiac troponin i polypeptide fragments and uses in diagnostics |
| US6190916B1 (en) * | 1999-06-29 | 2001-02-20 | Spectral Diagnostics, Inc. | Troponin I composition |
| US7473548B2 (en) * | 2003-04-25 | 2009-01-06 | Medtronic, Inc. | Optical detector for enzyme activation |
| US20050096516A1 (en) * | 2003-10-30 | 2005-05-05 | Orhan Soykan | Optical detector of organic analyte |
| US20070141710A1 (en) * | 2005-12-20 | 2007-06-21 | Beckman Coulter, Inc. | Stable calibrators for immunoassays |
| CA2648385C (en) | 2006-04-04 | 2020-09-01 | Singulex, Inc. | Highly sensitive system and methods for analysis of troponin |
| US7838250B1 (en) | 2006-04-04 | 2010-11-23 | Singulex, Inc. | Highly sensitive system and methods for analysis of troponin |
| EP2263085A4 (en) * | 2008-03-05 | 2011-07-06 | Singulex Inc | METHODS AND COMPOSITIONS FOR HIGHLY SENSITIVE DETECTION OF MOLECULES |
| GB2464183A (en) * | 2008-09-19 | 2010-04-14 | Singulex Inc | Sandwich assay |
| WO2010144358A1 (en) | 2009-06-08 | 2010-12-16 | Singulex, Inc. | Highly sensitive biomarker panels |
| US8892820B2 (en) * | 2010-03-19 | 2014-11-18 | Netapp, Inc. | Method and system for local caching of remote storage data |
| EP2566971B1 (en) | 2010-05-06 | 2019-03-27 | Singulex, Inc. | Methods for diagnosing, staging, predicting risk for developing and identifying treatment responders for rheumatoid arthritis |
| US20110306148A1 (en) | 2010-06-14 | 2011-12-15 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Composition for use as an assay reagent |
| EP2591107A2 (en) | 2010-07-06 | 2013-05-15 | Aptateck Bio Ltd. | Nucleic acid aptamer-based diagnostic methods with novel techniques for signal enhancement |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8504099D0 (en) * | 1985-02-18 | 1985-03-20 | Wellcome Found | Physiologically active substances |
| US4962188A (en) * | 1985-12-06 | 1990-10-09 | Cetus Corporation | Recombinant ricin toxin A chain conjugates |
| DK8189A (da) * | 1988-01-12 | 1989-07-13 | Bunge Australia | Antigen-antistof-konjugater, deres fremstilling og anvendelse |
| DE3834766A1 (de) * | 1988-10-12 | 1990-04-26 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur bestimmung einer spezifisch bindefaehigen substanz |
| US5620686A (en) * | 1990-09-28 | 1997-04-15 | British Technology Group Limited | Antigen-antibody conjugates |
| DE4214922C2 (de) * | 1992-05-06 | 1996-06-13 | Brahms Diagnostica Gmbh | Verfahren zur quantitativen Bestimmung des Anteils der freien Form eines Schilddrüsenhormon-Liganden in einer biologischen Flüssigkeit und Kit zur Durchführung eines solchen Verfahrens |
| DE4239429A1 (de) * | 1992-11-24 | 1994-05-26 | Merck Patent Gmbh | Verfahren zur Herstellung von Immunkonjugaten |
| FR2701954B1 (fr) * | 1993-02-23 | 1995-07-07 | Pasteur Sanofi Diagnostics | Composition stabilisée de troponine pour immunoessais et procédé de stabilisation de troponine pour immunoessais. |
| AU689777B2 (en) * | 1993-05-17 | 1998-04-09 | Fortron Bioscience, Inc. | Assay for cardiac troponin I |
| DE4420742A1 (de) * | 1993-10-20 | 1995-04-27 | Boehringer Mannheim Gmbh | Synthetischer Standard für Immunoassays |
-
1995
- 1995-12-21 DE DE19548028A patent/DE19548028A1/de not_active Withdrawn
-
1996
- 1996-12-10 EP EP96119774A patent/EP0780687B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-12-10 DK DK96119774T patent/DK0780687T3/da active
- 1996-12-10 DE DE1996511114 patent/DE59611114D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-12-13 US US08/763,374 patent/US5925533A/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-12-16 JP JP8352625A patent/JPH09222428A/ja active Pending
- 1996-12-18 CA CA002193323A patent/CA2193323C/en not_active Expired - Fee Related
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| JP2012513586A (ja) * | 2008-12-22 | 2012-06-14 | コーニンクレッカ フィリップス エレクトロニクス エヌ ヴィ | 磁気ラベルを使用するトロポニンｉに関するアッセイ |
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| US9733255B2 (en) | 2011-04-20 | 2017-08-15 | Korea Advanced Institute Of Science And Technology | Method and apparatus for analyzing protein-protein interaction on single-molecule level within the cellular environment |
| US9739785B2 (en) | 2011-04-20 | 2017-08-22 | Korea Advanced Institute Of Science And Technology | Method for analyzing protein-protein interaction on single-molecule level in cell environment, and method for measuring density of protein activated in cytosol |
| US9964544B2 (en) | 2011-04-20 | 2018-05-08 | Korea Advanced Institute Of Science And Technology | Method and apparatus for analyzing protein-protein interaction on single-molecule level within the cellular environment |
| US10401367B2 (en) | 2011-04-20 | 2019-09-03 | Korea Advanced Institute Of Science And Technology | Method and apparatus for analyzing protein-protein interaction on single molecule level within the cellular environment |
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| EP0780687A2 (de) | 1997-06-25 |
| DE19548028A1 (de) | 1997-06-26 |
| DK0780687T3 (da) | 2005-01-24 |
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| CA2193323A1 (en) | 1997-06-22 |
| US5925533A (en) | 1999-07-20 |
| CA2193323C (en) | 2005-08-16 |
| EP0780687A3 (de) | 1998-09-02 |
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