JPH0919282A - 簡易培地及び微生物の検出方法 - Google Patents
簡易培地及び微生物の検出方法Info
- Publication number
- JPH0919282A JPH0919282A JP7171662A JP17166295A JPH0919282A JP H0919282 A JPH0919282 A JP H0919282A JP 7171662 A JP7171662 A JP 7171662A JP 17166295 A JP17166295 A JP 17166295A JP H0919282 A JPH0919282 A JP H0919282A
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- JP
- Japan
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- medium
- water
- alcohol
- microorganism
- soluble
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- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【解決手段】 （ａ）水及びアルコールに可溶な接着
剤、（ｂ）水に可溶でアルコールに不溶なゲル化剤、及
び（ｃ）菌体栄養成分を含有する培地組成物を、該ゲル
化剤より大きいメッシュを有する繊維状吸水性シートに
担持させた簡易培地、並びにこの簡易培地に被検液を接
種して培養し、そこに形成されるコロニーを検出して微
生物を検出する方法。 【効果】 本発明の簡易培地を用いれば、試料の接種及
び培養操作が容易であり、更にコロニーの観察及び釣菌
が正確かつ容易にできるため、種々の微生物の検査を容
易に行うことができる。
剤、（ｂ）水に可溶でアルコールに不溶なゲル化剤、及
び（ｃ）菌体栄養成分を含有する培地組成物を、該ゲル
化剤より大きいメッシュを有する繊維状吸水性シートに
担持させた簡易培地、並びにこの簡易培地に被検液を接
種して培養し、そこに形成されるコロニーを検出して微
生物を検出する方法。 【効果】 本発明の簡易培地を用いれば、試料の接種及
び培養操作が容易であり、更にコロニーの観察及び釣菌
が正確かつ容易にできるため、種々の微生物の検査を容
易に行うことができる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、種々の微生物の検
出、同定、輸送等に有用な簡易培地及びこれを用いた微
生物の検出方法に関する。
出、同定、輸送等に有用な簡易培地及びこれを用いた微
生物の検出方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】種々の微生物を検出、同定するにあたっ
て、従来から行われている微生物の培養方法としては、
平板塗抹法、混釈法、液体培地法などが一般的である。
しかし、これらの方法は、培養を行う前に培地や器具類
の滅菌が必要であり、また被検試料を培地に接種した後
には塗抹や混釈等の熟練を要する操作が必要であった。
更に、被検試料接種後の培地の輸送や発育したコロニー
を計測したあとの培地の滅菌ではかさばる器具や培地に
より多大な労力を必要とした。
て、従来から行われている微生物の培養方法としては、
平板塗抹法、混釈法、液体培地法などが一般的である。
しかし、これらの方法は、培養を行う前に培地や器具類
の滅菌が必要であり、また被検試料を培地に接種した後
には塗抹や混釈等の熟練を要する操作が必要であった。
更に、被検試料接種後の培地の輸送や発育したコロニー
を計測したあとの培地の滅菌ではかさばる器具や培地に
より多大な労力を必要とした。
【０００３】そのため、手軽に培養できる簡易培地につ
いての多くの研究がなされ、（１）防水性基体の上面部
に、接着剤層、栄養成分を含む冷水可溶性ゲル化剤粉末
層及びカバーシートを順次積層した培地（特開昭５７−
５０２２００号公報）、（２）防水性基体の上面部に、
空気透過性膜、栄養成分を含む冷水可溶性ゲル化剤粉末
層及びカバーシートを順次積層した培地（特開平３−１
５３７９号公報）、（３）濾紙等に菌体栄養成分を含浸
させ、その表面をカバーシートで覆ってなる検出紙（特
開平２−６５７９８号公報）、（４）防水性平板の表面
に冷水可溶性ゲル化剤と微生物培養基、繊維質吸水性シ
ートを順次積層した培地（特開平６−１８１７４１号公
報）が報告されている。
いての多くの研究がなされ、（１）防水性基体の上面部
に、接着剤層、栄養成分を含む冷水可溶性ゲル化剤粉末
層及びカバーシートを順次積層した培地（特開昭５７−
５０２２００号公報）、（２）防水性基体の上面部に、
空気透過性膜、栄養成分を含む冷水可溶性ゲル化剤粉末
層及びカバーシートを順次積層した培地（特開平３−１
５３７９号公報）、（３）濾紙等に菌体栄養成分を含浸
させ、その表面をカバーシートで覆ってなる検出紙（特
開平２−６５７９８号公報）、（４）防水性平板の表面
に冷水可溶性ゲル化剤と微生物培養基、繊維質吸水性シ
ートを順次積層した培地（特開平６−１８１７４１号公
報）が報告されている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記
（１）及び（２）の簡易培地においては、試料接種後、
試料を一定面積に拡散させるためにスプレッダーにより
圧力をかける操作を必要とするという問題があった。ま
た、上記（３）の簡易培地においては、可溶性ゲル化剤
を用いず保水を濾紙に依存するために、ある程度の濾紙
の厚さが必要である。その結果コロニーの形成が濾紙内
部で行われるため、コロニーの観察が困難であることか
ら、精度が低下すると共に、釣菌ができないという問題
があった。更に、上記（４）の培地においては作製時に
繊維質吸水性シートを培地コーティング後に挿入すると
いう手間、またシートの固定の困難さ、検出可能な面積
以上に培地をコーティングする必要性等の問題があっ
た。
（１）及び（２）の簡易培地においては、試料接種後、
試料を一定面積に拡散させるためにスプレッダーにより
圧力をかける操作を必要とするという問題があった。ま
た、上記（３）の簡易培地においては、可溶性ゲル化剤
を用いず保水を濾紙に依存するために、ある程度の濾紙
の厚さが必要である。その結果コロニーの形成が濾紙内
部で行われるため、コロニーの観察が困難であることか
ら、精度が低下すると共に、釣菌ができないという問題
があった。更に、上記（４）の培地においては作製時に
繊維質吸水性シートを培地コーティング後に挿入すると
いう手間、またシートの固定の困難さ、検出可能な面積
以上に培地をコーティングする必要性等の問題があっ
た。
【０００５】従って、本発明の目的は試料接種等の操作
性に優れ、かつコロニーの観察、釣菌が容易で正確な検
出が可能な簡易培地及びこれを用いた微生物の検出方法
を提供することにある。
性に優れ、かつコロニーの観察、釣菌が容易で正確な検
出が可能な簡易培地及びこれを用いた微生物の検出方法
を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】そこで、本発明者らは、
簡易培地について、上記操作性とコロニーの検出性との
両面から種々検討を行った結果、接着剤、ゲル化剤及び
菌体栄養成分の混合物をゲル化剤の粒径よりも大きいメ
ッシュを有する繊維状吸水性シートに担持させれば、被
検液を簡易培地上に滴下するのみで容易に拡散し、かつ
形成された薄膜上で明確なコロニーが形成され、検出性
の良好な簡易培地が得られることを見出し、本発明を完
成するに至った。
簡易培地について、上記操作性とコロニーの検出性との
両面から種々検討を行った結果、接着剤、ゲル化剤及び
菌体栄養成分の混合物をゲル化剤の粒径よりも大きいメ
ッシュを有する繊維状吸水性シートに担持させれば、被
検液を簡易培地上に滴下するのみで容易に拡散し、かつ
形成された薄膜上で明確なコロニーが形成され、検出性
の良好な簡易培地が得られることを見出し、本発明を完
成するに至った。
【０００７】すなわち、本発明は、（ａ）水及びアルコ
ールに可溶な接着剤、（ｂ）水に可溶でアルコールに不
溶なゲル化剤、及び（ｃ）菌体栄養成分を含有する培地
組成物を、該ゲル化剤より大きいメッシュを有する繊維
状吸水性シートに担持させた簡易培地を提供するもので
ある。
ールに可溶な接着剤、（ｂ）水に可溶でアルコールに不
溶なゲル化剤、及び（ｃ）菌体栄養成分を含有する培地
組成物を、該ゲル化剤より大きいメッシュを有する繊維
状吸水性シートに担持させた簡易培地を提供するもので
ある。
【０００８】更にまた、本発明は、上記簡易培地に被検
液を接種して培養し、そこに形成されるコロニーを検出
する微生物の検出方法を提供するものである。
液を接種して培養し、そこに形成されるコロニーを検出
する微生物の検出方法を提供するものである。
【０００９】
【発明の実施の形態】本発明の培地組成物を構成する
（ａ）成分の接着剤としては、水及びアルコールに可溶
なものであることが必要であり、例えば、ヒドロキシプ
ロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリエチレ
ンオキサイド等が挙げられるが、そのうちでもヒドロキ
シプロピルセルロースが特に好ましい。
（ａ）成分の接着剤としては、水及びアルコールに可溶
なものであることが必要であり、例えば、ヒドロキシプ
ロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリエチレ
ンオキサイド等が挙げられるが、そのうちでもヒドロキ
シプロピルセルロースが特に好ましい。
【００１０】（ｂ）成分のゲル化剤は水に可溶でアルコ
ールに不溶であることが必要で、斯かるゲル化剤として
は、例えばキサンタンガム、ローカストビーンガム、グ
アーガム、カラギーナン等の天然ゲル化剤、ヒドロキシ
エチルセルロース等の合成ゲル化物質が挙げられるが、
そのうちでもキサンタンガムが特に好ましい。斯かるゲ
ル化剤は、平均粒径５００μm 以下、好ましくは０．５
〜５０μm の粉体が使用される。
ールに不溶であることが必要で、斯かるゲル化剤として
は、例えばキサンタンガム、ローカストビーンガム、グ
アーガム、カラギーナン等の天然ゲル化剤、ヒドロキシ
エチルセルロース等の合成ゲル化物質が挙げられるが、
そのうちでもキサンタンガムが特に好ましい。斯かるゲ
ル化剤は、平均粒径５００μm 以下、好ましくは０．５
〜５０μm の粉体が使用される。
【００１１】また、（ｃ）成分の菌体栄養成分として
は、検出しようとする微生物の生育に適し、水可溶性の
ものが選択される。例えば、多種の微生物を増殖させる
場合には、一般的な栄養培地成分が用いられ、特定の微
生物を選択的に増殖させる場合には選択培地成分が用い
られる。
は、検出しようとする微生物の生育に適し、水可溶性の
ものが選択される。例えば、多種の微生物を増殖させる
場合には、一般的な栄養培地成分が用いられ、特定の微
生物を選択的に増殖させる場合には選択培地成分が用い
られる。
【００１２】更に、この培地組成物には、コロニーの観
察を容易にするために、種々の発色剤を配合するのが好
ましい。かかる発色剤には、コロニーを着色する色素、
例えばトリフェニルテトラゾリウムクロライド、３−
（ｐ−ヨードフェニル）−２−（ｐ−ニトロフェニル）
−５−フェニル−２Ｈ−テトラゾリウムクロライド、３
−（４，５−ジメチル−２−チアゾリル）−２，５−ジ
フェニル−２Ｈ−テトラゾリウムブロマイド等の色素；
５−ブロモ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシド等
の酵素基質；ブロムチモールブルーやニュートラルレッ
ドのようなpH指示薬等が含まれる。
察を容易にするために、種々の発色剤を配合するのが好
ましい。かかる発色剤には、コロニーを着色する色素、
例えばトリフェニルテトラゾリウムクロライド、３−
（ｐ−ヨードフェニル）−２−（ｐ−ニトロフェニル）
−５−フェニル−２Ｈ−テトラゾリウムクロライド、３
−（４，５−ジメチル−２−チアゾリル）−２，５−ジ
フェニル−２Ｈ−テトラゾリウムブロマイド等の色素；
５−ブロモ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシド等
の酵素基質；ブロムチモールブルーやニュートラルレッ
ドのようなpH指示薬等が含まれる。
【００１３】上記培地組成物を担持させる繊維状吸水性
シートは、接種された被検液が毛細管現象により容易に
拡散し、かつ培地組成物中のゲル化剤をその網目構造中
に担持できるものであることが必要である。そのために
は、繊維状吸水性シートはゲル化剤の粒径よりも大きい
メッシュを有し、かつ厚さも当該粒径より厚いことが必
要であり、例えば、網目の大きさが１５〜１００メッシ
ュ、特に２０〜５０メッシュで、厚さが１０〜１０００
μm 、特に５０〜６００μm のものが好ましい。
シートは、接種された被検液が毛細管現象により容易に
拡散し、かつ培地組成物中のゲル化剤をその網目構造中
に担持できるものであることが必要である。そのために
は、繊維状吸水性シートはゲル化剤の粒径よりも大きい
メッシュを有し、かつ厚さも当該粒径より厚いことが必
要であり、例えば、網目の大きさが１５〜１００メッシ
ュ、特に２０〜５０メッシュで、厚さが１０〜１０００
μm 、特に５０〜６００μm のものが好ましい。
【００１４】斯かる性質を有するシートとしては、レー
ヨン不織布に代表される合成繊維不織布、コットン不織
布に代表される天然繊維不織布等が挙げられる。これら
のシートの形状は、正方形、長方形、円形等の何れであ
ってもよく、特に制限されない。またその大きさも特に
制限されないが、微生物の簡易検出用の場合には長径１
〜１５cmのものが好ましい。
ヨン不織布に代表される合成繊維不織布、コットン不織
布に代表される天然繊維不織布等が挙げられる。これら
のシートの形状は、正方形、長方形、円形等の何れであ
ってもよく、特に制限されない。またその大きさも特に
制限されないが、微生物の簡易検出用の場合には長径１
〜１５cmのものが好ましい。
【００１５】培地組成物の繊維状吸水性シートへの担持
は次のようにして行われる。まず、（ａ）〜（ｃ）の培
地成分をアルコールに添加してアルコール懸濁液を調製
する。この際、各成分の濃度が、成分（ａ）は０．１〜
５重量％（以下、単に％で示す）、特に０．３〜２％、
成分（ｂ）は０．１〜２０％、特に２〜６％、成分
（ｃ）は０．５〜２０％、特に１〜５％になるようにす
るのが好ましい。次いで、このアルコール懸濁液を繊維
状吸水性シートに注下、噴霧又は塗布等によって含浸さ
せた後、乾燥してアルコールを蒸発除去する。アルコー
ル懸濁液はシート１cm3 当り上記濃度のものを０．５〜
２ml含浸させるのが好ましい。乾燥は自然乾燥、減圧乾
燥、加熱乾燥の何れであってもよい。更にこのものは、
ガス、γ線、電子線等によって滅菌するのが好ましい。
は次のようにして行われる。まず、（ａ）〜（ｃ）の培
地成分をアルコールに添加してアルコール懸濁液を調製
する。この際、各成分の濃度が、成分（ａ）は０．１〜
５重量％（以下、単に％で示す）、特に０．３〜２％、
成分（ｂ）は０．１〜２０％、特に２〜６％、成分
（ｃ）は０．５〜２０％、特に１〜５％になるようにす
るのが好ましい。次いで、このアルコール懸濁液を繊維
状吸水性シートに注下、噴霧又は塗布等によって含浸さ
せた後、乾燥してアルコールを蒸発除去する。アルコー
ル懸濁液はシート１cm3 当り上記濃度のものを０．５〜
２ml含浸させるのが好ましい。乾燥は自然乾燥、減圧乾
燥、加熱乾燥の何れであってもよい。更にこのものは、
ガス、γ線、電子線等によって滅菌するのが好ましい。
【００１６】このようにして調製した簡易培地は、防水
性平板に積層して使用するのが便利である。平板はプラ
スチック、ガラス等の防水性の材質のものであれば何れ
でもかまわないが、透明のものが好ましい。また、簡易
培地は、汚染及び乾燥を防止するために、その表面をフ
ィルムで覆うか、容器に収納するのが好ましい。
性平板に積層して使用するのが便利である。平板はプラ
スチック、ガラス等の防水性の材質のものであれば何れ
でもかまわないが、透明のものが好ましい。また、簡易
培地は、汚染及び乾燥を防止するために、その表面をフ
ィルムで覆うか、容器に収納するのが好ましい。
【００１７】本発明の簡易培地を用いて微生物を検出す
るには、当該培地表面に被検液を接種する。そうする
と、被検液がメッシュ間の立体的な空洞部の毛細管現象
によって容易に拡散し、それに続いて膨潤ゲル化が起こ
って、被検液中の微生物は捕捉され、自由移動が抑制さ
れ、培養によってコロニーが形成される。従って、培地
形成面を観察すれば、形成したコロニーが容易に観察で
きる。試料を定量的に簡易培地へ接種すれば、培養後出
現したコロニーを計測することにより、容易に菌数を算
定することができる。なお、菌体液の接種は通常ピペッ
ト等により一定量を接種する方法が採用されるが、水分
の多い個体へスタンプする方法や試料液へ浸す方法でも
よい。また、被検液接種後の培養は、静置して行って
も、また輸送期間中に行ってもよい。
るには、当該培地表面に被検液を接種する。そうする
と、被検液がメッシュ間の立体的な空洞部の毛細管現象
によって容易に拡散し、それに続いて膨潤ゲル化が起こ
って、被検液中の微生物は捕捉され、自由移動が抑制さ
れ、培養によってコロニーが形成される。従って、培地
形成面を観察すれば、形成したコロニーが容易に観察で
きる。試料を定量的に簡易培地へ接種すれば、培養後出
現したコロニーを計測することにより、容易に菌数を算
定することができる。なお、菌体液の接種は通常ピペッ
ト等により一定量を接種する方法が採用されるが、水分
の多い個体へスタンプする方法や試料液へ浸す方法でも
よい。また、被検液接種後の培養は、静置して行って
も、また輸送期間中に行ってもよい。
【００１８】
【実施例】次に実施例を挙げて説明する。
【００１９】実施例１ ペプトン１．７ｇ、ダイズペプトン０．３ｇ、塩化ナト
リウム０．５ｇ、ブドウ糖０．２５ｇ、リン酸一水素カ
リウム０．２５ｇ、キサンタンガム３ｇ、ヒドロキシプ
ロピルセルロース０．５ｇ及びトリフェニルテトラゾリ
ウムクロライド０．００２ｇをエタノール１００mlに懸
濁し、良く攪拌した。このエタノール懸濁液を１mlずつ
防水性平板の上部にある繊維状吸水性シート（４７φm
m）に分注し、均一になるように広げて乾燥した後、エ
チレンオキサイドガスで滅菌し、簡易培地を調製した。
リウム０．５ｇ、ブドウ糖０．２５ｇ、リン酸一水素カ
リウム０．２５ｇ、キサンタンガム３ｇ、ヒドロキシプ
ロピルセルロース０．５ｇ及びトリフェニルテトラゾリ
ウムクロライド０．００２ｇをエタノール１００mlに懸
濁し、良く攪拌した。このエタノール懸濁液を１mlずつ
防水性平板の上部にある繊維状吸水性シート（４７φm
m）に分注し、均一になるように広げて乾燥した後、エ
チレンオキサイドガスで滅菌し、簡易培地を調製した。
【００２０】大腸菌をトリプトソーヤブイヨン（日水製
薬社製）にて３５℃で２４時間培養後、１０倍段階希釈
を行い、それぞれ１mlずつを簡易培地、又はトリプトソ
ーヤ寒天培地（ＴＳＡ、日水製薬社製）に接種し、３５
℃で２４時間培養した後、菌数を測定した。その結果、
５回の平均で簡易培地が１．８×１０8CFU／ml及びＴＳ
Ａが１．７×１０8CFU／mlであり、ほぼ同様の菌数を示
した。また、簡易培地に形成したコロニーを白金線を用
いて刺すことにより釣菌し、更にＴＳＡ平板に接種して
３５℃、２４時間培養したところコロニーの形成が認め
られた。
薬社製）にて３５℃で２４時間培養後、１０倍段階希釈
を行い、それぞれ１mlずつを簡易培地、又はトリプトソ
ーヤ寒天培地（ＴＳＡ、日水製薬社製）に接種し、３５
℃で２４時間培養した後、菌数を測定した。その結果、
５回の平均で簡易培地が１．８×１０8CFU／ml及びＴＳ
Ａが１．７×１０8CFU／mlであり、ほぼ同様の菌数を示
した。また、簡易培地に形成したコロニーを白金線を用
いて刺すことにより釣菌し、更にＴＳＡ平板に接種して
３５℃、２４時間培養したところコロニーの形成が認め
られた。
【００２１】
【発明の効果】本発明の簡易培地を用いれば、試料の接
種及び培養操作が容易であり、更にコロニーの観察及び
釣菌が正確かつ容易にできるため、種々の微生物の検査
を容易に行うことができる。
種及び培養操作が容易であり、更にコロニーの観察及び
釣菌が正確かつ容易にできるため、種々の微生物の検査
を容易に行うことができる。
フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:19）
Claims (4)
- 【請求項１】 （ａ）水及びアルコールに可溶な接着
剤、（ｂ）水に可溶でアルコールに不溶なゲル化剤、及
び（ｃ）菌体栄養成分を含有する培地組成物を、該ゲル
化剤より大きいメッシュを有する繊維状吸水性シートに
担持させたことを特徴とする簡易培地。 - 【請求項２】 培地組成物が、更に発色剤を含有するも
のである請求項１記載の簡易培地。 - 【請求項３】 請求項１の繊維状吸水性シートが防水性
平板に積層されている簡易培地。 - 【請求項４】 請求項１〜３の何れか１項記載の簡易培
地に被検液を接種して培養し、そこに形成されるコロニ
ーを検出することを特徴とする微生物の検出方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17166295A JP3850465B2 (ja) | 1995-07-07 | 1995-07-07 | 簡易培地及び微生物の検出方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17166295A JP3850465B2 (ja) | 1995-07-07 | 1995-07-07 | 簡易培地及び微生物の検出方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0919282A true JPH0919282A (ja) | 1997-01-21 |
| JP3850465B2 JP3850465B2 (ja) | 2006-11-29 |
Family
ID=15927378
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP17166295A Expired - Lifetime JP3850465B2 (ja) | 1995-07-07 | 1995-07-07 | 簡易培地及び微生物の検出方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3850465B2 (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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