JPH09176042A - 免疫調節組成物 - Google Patents
免疫調節組成物Info
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- JPH09176042A JPH09176042A JP8273737A JP27373796A JPH09176042A JP H09176042 A JPH09176042 A JP H09176042A JP 8273737 A JP8273737 A JP 8273737A JP 27373796 A JP27373796 A JP 27373796A JP H09176042 A JPH09176042 A JP H09176042A
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- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 新規な免疫応答調節剤の提供。
【解決手段】 下記成分を含んで成る組成物であって、
哺乳類宿主が応答し、そして移植抗原に結合できるアグ
レトープ及びエピトープを含んで成る第１抗原の１００
個よりも多くないアミノ酸の免疫優性配列の第１ドメイ
ンを含んで成る第１分子を含んで成り、ここで前記配列
が突然変異されており、又は前記ドメインが前記第１抗
原以外の分子の第２エピトープ部位又は前記第１抗原の
天然配列以外により結合された前記第１抗原のエピトー
プ部位に結合されており、又は少なくとも１種の分子が
移植抗原の多型性領域の配列を有する１００個よりも多
くないアミノ酸を含んで成り、これによって、前記組成
物は前記第１抗原の前記エピトープに対する哺乳類宿主
の免疫応答を調節するのに有用であることを特徴とする
組成物。
哺乳類宿主が応答し、そして移植抗原に結合できるアグ
レトープ及びエピトープを含んで成る第１抗原の１００
個よりも多くないアミノ酸の免疫優性配列の第１ドメイ
ンを含んで成る第１分子を含んで成り、ここで前記配列
が突然変異されており、又は前記ドメインが前記第１抗
原以外の分子の第２エピトープ部位又は前記第１抗原の
天然配列以外により結合された前記第１抗原のエピトー
プ部位に結合されており、又は少なくとも１種の分子が
移植抗原の多型性領域の配列を有する１００個よりも多
くないアミノ酸を含んで成り、これによって、前記組成
物は前記第１抗原の前記エピトープに対する哺乳類宿主
の免疫応答を調節するのに有用であることを特徴とする
組成物。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】免疫学における方法及び組成
物に関し、ここで免疫系は、特定の移植抗原及びＴ−細
胞に対して活性化又は不活性化され得る。その方法及び
組成物は、予防接種、器官移植、自己免疫疾患、病原感
染、及び免疫系を含む他の健康状態の情況を含む。
物に関し、ここで免疫系は、特定の移植抗原及びＴ−細
胞に対して活性化又は不活性化され得る。その方法及び
組成物は、予防接種、器官移植、自己免疫疾患、病原感
染、及び免疫系を含む他の健康状態の情況を含む。
【０００２】
【従来の技術】脊椎動物は、広範囲の種類の障害、ウィ
ルス及びウィルス性微生物、たとえば細菌及び菌類によ
る悪性、遺伝的疾患、悪性及び種々の毒素の効果に対し
て自身を保護するために複雑なシステムを発育して来
た。そのシステムは、非自己とは異なるような自己を認
識する能力に基づいて進化して来た。広範囲の種類の防
御機構は、食作用、溶菌（たとえば補体介在又はペルホ
リン介在の）、キラーＴ−細胞、たとえば細胞障害−Ｔ
−リンパ球、天然のキラー細胞、抗体依存性細胞障害細
胞及び同様のものを含む。種々のタイプの細胞が異なっ
た機構を有し、それによって侵入物又は内因性疾患細胞
が除去され得る。
ルス及びウィルス性微生物、たとえば細菌及び菌類によ
る悪性、遺伝的疾患、悪性及び種々の毒素の効果に対し
て自身を保護するために複雑なシステムを発育して来
た。そのシステムは、非自己とは異なるような自己を認
識する能力に基づいて進化して来た。広範囲の種類の防
御機構は、食作用、溶菌（たとえば補体介在又はペルホ
リン介在の）、キラーＴ−細胞、たとえば細胞障害−Ｔ
−リンパ球、天然のキラー細胞、抗体依存性細胞障害細
胞及び同様のものを含む。種々のタイプの細胞が異なっ
た機構を有し、それによって侵入物又は内因性疾患細胞
が除去され得る。
【０００３】免疫防御機構のキイーは、Ｔ−細胞であ
る。Ｔ−細胞は、それらがそれらの天然の宿主に関連す
る１又は少数の特異的移植抗原に対する抗原に応答する
ことに制限されることが見出された。イン・ビトロで、
１つのハプロタイプの宿主からのＴ−細胞は、異なった
ハプロタイプの宿主の移植抗原に対する抗原に応答す
る。そのＴ−細胞レセプターのレパートリーはＢ−細胞
免疫グロブリンのレパートリーよりも狭いように思われ
る。さらに、抗原に直接的に結合するよりもむしろ、そ
のＴ−細胞レセプターは、抗原エピトープ及び移植抗原
に対する同時結合を必要とするように思われる。
る。Ｔ−細胞は、それらがそれらの天然の宿主に関連す
る１又は少数の特異的移植抗原に対する抗原に応答する
ことに制限されることが見出された。イン・ビトロで、
１つのハプロタイプの宿主からのＴ−細胞は、異なった
ハプロタイプの宿主の移植抗原に対する抗原に応答す
る。そのＴ−細胞レセプターのレパートリーはＢ−細胞
免疫グロブリンのレパートリーよりも狭いように思われ
る。さらに、抗原に直接的に結合するよりもむしろ、そ
のＴ−細胞レセプターは、抗原エピトープ及び移植抗原
に対する同時結合を必要とするように思われる。
【０００４】移植抗原は２種のクラス、すなわちクラス
ＩおよびクラスIIに分割され、ここでクラスＩの抗原は
宿主細胞上に比較的遍在し、ところがクラスIIの抗原は
リンパ球、マクロファージ及び樹枝状細胞に比較的限定
される。異なったＴ−細胞が、１つの又は他のクラスの
移植抗原に対して活性化されるように思われる。主に、
Ｔ−細胞の活性の性質は、移植抗原（Ｔ−細胞はその抗
原に対して相補的である）のクラスと共に変化するであ
ろう。実際に、Ｔ−細胞クローンは特異的抗原及び特異
的移植抗原の対立遺伝子を認識すると思われる。さら
に、抗原の配列における変化は、Ｔ−細胞、抗原及び抗
原を付与する細胞が一緒に培養される場合、その応答の
性質に影響を及ぼす。変化の性質に依存して、すべての
３種の可能性、すなわち不変化、増強された刺激又は減
じられた刺激が見出される。
ＩおよびクラスIIに分割され、ここでクラスＩの抗原は
宿主細胞上に比較的遍在し、ところがクラスIIの抗原は
リンパ球、マクロファージ及び樹枝状細胞に比較的限定
される。異なったＴ−細胞が、１つの又は他のクラスの
移植抗原に対して活性化されるように思われる。主に、
Ｔ−細胞の活性の性質は、移植抗原（Ｔ−細胞はその抗
原に対して相補的である）のクラスと共に変化するであ
ろう。実際に、Ｔ−細胞クローンは特異的抗原及び特異
的移植抗原の対立遺伝子を認識すると思われる。さら
に、抗原の配列における変化は、Ｔ−細胞、抗原及び抗
原を付与する細胞が一緒に培養される場合、その応答の
性質に影響を及ぼす。変化の性質に依存して、すべての
３種の可能性、すなわち不変化、増強された刺激又は減
じられた刺激が見出される。
【０００５】前記の観点から、イン・ビボ及びイン・ビ
トロで免疫応答を調整することができることが実質的に
興味の対象であり、ここでその１つが特定の免疫応答の
刺激又は不活性化を提供する。この態様において、特定
の出来事に対する自然の応答は、防御応答を高めるため
に特定のリンパ球を刺激することによって、又は免疫応
答を減じ又は防ぐために特定のリンパ球を不活性化する
ことによって調節され得る。防御の源として免疫システ
ムを用いることによって、医学及び疫病へのより全体的
なアプローチが達成され得る。
トロで免疫応答を調整することができることが実質的に
興味の対象であり、ここでその１つが特定の免疫応答の
刺激又は不活性化を提供する。この態様において、特定
の出来事に対する自然の応答は、防御応答を高めるため
に特定のリンパ球を刺激することによって、又は免疫応
答を減じ又は防ぐために特定のリンパ球を不活性化する
ことによって調節され得る。防御の源として免疫システ
ムを用いることによって、医学及び疫病へのより全体的
なアプローチが達成され得る。
【０００６】関連文献 Ｔ−細胞の制限及び免疫システムが理解されて来た異常
な前進及び速度を示すレビュウ文献は、Berzofsky,Ｔｈ
ｅ Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（１９８
６）２：２８〜３８；Schwartz，Ａｎｎ． Ｒｅｖ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８５）３：２３７〜２６１；Sh
astri など．，Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．（１９８６）
１６４：８８２〜８９６によって示される。また、Shas
tri など. 前記（１９８５）１６２：３３２〜３４５；
Unanue及びAllen, Ｓｃｉｅｎｃｅ （１９８７）２３
６：５５１〜５５７；Guillet など．，Ｓｃｉｅｎｃｅ
（１９８７）２３５：８６５〜８７６（これは、本出願
に記載の研究の一部を開示する）も参照のこと。
な前進及び速度を示すレビュウ文献は、Berzofsky,Ｔｈ
ｅ Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（１９８
６）２：２８〜３８；Schwartz，Ａｎｎ． Ｒｅｖ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８５）３：２３７〜２６１；Sh
astri など．，Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．（１９８６）
１６４：８８２〜８９６によって示される。また、Shas
tri など. 前記（１９８５）１６２：３３２〜３４５；
Unanue及びAllen, Ｓｃｉｅｎｃｅ （１９８７）２３
６：５５１〜５５７；Guillet など．，Ｓｃｉｅｎｃｅ
（１９８７）２３５：８６５〜８７６（これは、本出願
に記載の研究の一部を開示する）も参照のこと。
【０００７】ペプチド相同体に関する興味およびＩａ遺
伝子生成物間の相互作用、抗原フラグメント及びＴ−細
胞レセプターの理解に関する対象の文献は、Delisi及び
Berzofsky,Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃ
ｉ． ＵＳＡ（１９８５）８２：７０４８〜７０５２；
Watts など．，Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ． ＵＳＡ（１９８５）８２：５４８０〜５４８
４；Schwartsなど．，Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８
５）１３５：２５９７〜２６０７；Babbitt など．，Ｎ
ａｔｕｒｅ（１９８５）３１７：３５９〜３６１；Gamm
ond など．，Ｎａｔｕｒｅ（１９８６）３１９：４１３
〜４１５；Babbitt など．，Ｐｒｏｃ，Ｎａｔｌ． Ａ
ｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ（１９８６）８３：４５０
９〜４５１３；Watts など．，Ｎａｔｕｒｅ（１９８
６）３２０：１７９〜１８１；Finneganなど．，Ｊ．
Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．（１９８６）１６４：８９７〜９１
０；Lechler など．，Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．（１９
８６）１６３：６７８〜６９６；Ashwell 及びSchwart
z, Ｎａｔｕｒｅ（１９８６）３２０：１７６〜１７
９；Townsendなど．，Ｃｅｌｌ（１９８６）４４：９５
９〜９６８；Shimonkevitzなど．，Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．（１９８４）１３３：２０６７〜２０７４；Berkav
erなど．，Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８６）１３
６：２４９８〜２５０３；Bastinなど．，Ｊ． Ｅｘ
ｐ． Ｍｅｄ．（１９８７）１６５：１５０８〜１５２
３；及びHirayamaなど．，Ｎａｔｕｒｅ（１９８７）３
２７：４２６〜４３０に見出される。
伝子生成物間の相互作用、抗原フラグメント及びＴ−細
胞レセプターの理解に関する対象の文献は、Delisi及び
Berzofsky,Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃ
ｉ． ＵＳＡ（１９８５）８２：７０４８〜７０５２；
Watts など．，Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ． ＵＳＡ（１９８５）８２：５４８０〜５４８
４；Schwartsなど．，Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８
５）１３５：２５９７〜２６０７；Babbitt など．，Ｎ
ａｔｕｒｅ（１９８５）３１７：３５９〜３６１；Gamm
ond など．，Ｎａｔｕｒｅ（１９８６）３１９：４１３
〜４１５；Babbitt など．，Ｐｒｏｃ，Ｎａｔｌ． Ａ
ｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ（１９８６）８３：４５０
９〜４５１３；Watts など．，Ｎａｔｕｒｅ（１９８
６）３２０：１７９〜１８１；Finneganなど．，Ｊ．
Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．（１９８６）１６４：８９７〜９１
０；Lechler など．，Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．（１９
８６）１６３：６７８〜６９６；Ashwell 及びSchwart
z, Ｎａｔｕｒｅ（１９８６）３２０：１７６〜１７
９；Townsendなど．，Ｃｅｌｌ（１９８６）４４：９５
９〜９６８；Shimonkevitzなど．，Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．（１９８４）１３３：２０６７〜２０７４；Berkav
erなど．，Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８６）１３
６：２４９８〜２５０３；Bastinなど．，Ｊ． Ｅｘ
ｐ． Ｍｅｄ．（１９８７）１６５：１５０８〜１５２
３；及びHirayamaなど．，Ｎａｔｕｒｅ（１９８７）３
２７：４２６〜４３０に見出される。
【０００８】他の興味ある文献として、Rock及びBenace
rraf, Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．（１９８４）１６０：
１８２４〜１８２９；Rock及びBenacerraf, 前記（１９
８３）１５７：１６１８〜１６３４；Rad など．，Ｃｅ
ｌｌ（１９８４）３６：８８９〜８９５；Berkowerな
ど．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８４）１３２：１３
２０〜１３７８；Ashwell など．，前記（１９８６）１
３６：３８９〜３９５；Mengle-Gaw及びMcDevitt, Ｐｒ
ｏ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ ＵＳＡ（１９
８３）８０：７６２〜７６５；Werdelin，Ｊ． Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．（１９８２）１２９：１８８３〜１８９１；
Choiなど．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８３）２２２：２８
３〜２８６：Lakey など．，Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ．（１９８６）１６：７２１〜７２７；Marx，Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ（１９８７）２３５：８４３〜８４４；Ke
iser及びKezdy ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，（１９８４）２２
３：２４９〜２５４を挙げることができる。また、アメ
リカ特許第４，５９９，２３０号及び第４，４６９，６
７７号も参照のこと。他の興味ある特許として、アメリ
カ特許第４，４７３，５５５号；第４，４７８，８２３
号及び第４，５６５，６９６号を挙げることができる。
rraf, Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．（１９８４）１６０：
１８２４〜１８２９；Rock及びBenacerraf, 前記（１９
８３）１５７：１６１８〜１６３４；Rad など．，Ｃｅ
ｌｌ（１９８４）３６：８８９〜８９５；Berkowerな
ど．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８４）１３２：１３
２０〜１３７８；Ashwell など．，前記（１９８６）１
３６：３８９〜３９５；Mengle-Gaw及びMcDevitt, Ｐｒ
ｏ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ ＵＳＡ（１９
８３）８０：７６２〜７６５；Werdelin，Ｊ． Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．（１９８２）１２９：１８８３〜１８９１；
Choiなど．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８３）２２２：２８
３〜２８６：Lakey など．，Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ．（１９８６）１６：７２１〜７２７；Marx，Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ（１９８７）２３５：８４３〜８４４；Ke
iser及びKezdy ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，（１９８４）２２
３：２４９〜２５４を挙げることができる。また、アメ
リカ特許第４，５９９，２３０号及び第４，４６９，６
７７号も参照のこと。他の興味ある特許として、アメリ
カ特許第４，４７３，５５５号；第４，４７８，８２３
号及び第４，５６５，６９６号を挙げることができる。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題及び課題を解決するため
の手段】１又はそれよりも多くの移植抗原によって制限
された、強められた親和性の免疫系のための隣接性の及
び／又は非隣接性のアミノ酸配列を定義されたオリゴペ
プチドを含んで成る方法及び組成物が提供される。リン
パ系が１又はそれよりも多くの抗原と接触される場合、
免疫応答を調節するために使用され得るオリゴペプチド
が調製される。使用される組成物は、単一のオリゴペプ
チド又はオリゴペプチドの混合物を有し、その結果、単
一の組成物は、多くのハプロタイプを有する１又はそれ
よりも多くの細胞系と共に使用され得る。高められた親
和性のアミノ酸配列を定義するための方法がまた提供さ
れる。
の手段】１又はそれよりも多くの移植抗原によって制限
された、強められた親和性の免疫系のための隣接性の及
び／又は非隣接性のアミノ酸配列を定義されたオリゴペ
プチドを含んで成る方法及び組成物が提供される。リン
パ系が１又はそれよりも多くの抗原と接触される場合、
免疫応答を調節するために使用され得るオリゴペプチド
が調製される。使用される組成物は、単一のオリゴペプ
チド又はオリゴペプチドの混合物を有し、その結果、単
一の組成物は、多くのハプロタイプを有する１又はそれ
よりも多くの細胞系と共に使用され得る。高められた親
和性のアミノ酸配列を定義するための方法がまた提供さ
れる。
【００１０】
【発明の実施の形態】新規オリゴペプチド及びハプテン
又は抗原に通常関連するエピトープに対するリンパ系の
免疫応答を調節することにおけるそれらの使用が提供さ
れる。そのオリゴペプチドは、エピトープと免疫学的に
交差反応する対象の免疫原と比較して、１又はそれより
も多くの移植抗原のためにより高い親和性を有するよう
に構築されている。そのオリゴペプチド配列は、フラグ
メント又は完全なポリペプチドの一部として天然に存在
するポリペプチド、又は組換技法又は化学合成によって
調製された合成ポリペプチドのフラグメントである。
又は抗原に通常関連するエピトープに対するリンパ系の
免疫応答を調節することにおけるそれらの使用が提供さ
れる。そのオリゴペプチドは、エピトープと免疫学的に
交差反応する対象の免疫原と比較して、１又はそれより
も多くの移植抗原のためにより高い親和性を有するよう
に構築されている。そのオリゴペプチド配列は、フラグ
メント又は完全なポリペプチドの一部として天然に存在
するポリペプチド、又は組換技法又は化学合成によって
調製された合成ポリペプチドのフラグメントである。
【００１１】エピトープに関しては、そのエピトープ
は、レセプター、特に免疫グロブリン及びＴ−細胞レセ
プターによる認識に基本要素又は最小の単位であり、こ
こでその配列は隣接することができ、又は隣接しなくて
もよく、そして前記レセプターの認識に対して不可欠な
アミノ酸がその配列において隣接していても良くそして
／又は隣接してなくても良い。
は、レセプター、特に免疫グロブリン及びＴ−細胞レセ
プターによる認識に基本要素又は最小の単位であり、こ
こでその配列は隣接することができ、又は隣接しなくて
もよく、そして前記レセプターの認識に対して不可欠な
アミノ酸がその配列において隣接していても良くそして
／又は隣接してなくても良い。
【００１２】本発明に使用されるポリペプチド試薬は１
〜２個の領域を有するであろう。最初の領域は、目的の
移植抗原に対して高められた結合性を提供するアミノ酸
配列を有するオリゴペプチドを含有するであろう。その
移植抗原に結合するアミノ酸配列は“アグレトープ（ａ
ｇｒｅｔｏｐｅ）”として言及されるであろう。そのア
グレトープは、１又は限定された数の移植抗原に特異的
に結合する認識の単一の単位である。そのアグレトープ
は、しばしば分離された個々のアミノ酸残基を有する、
一組のアグレトープアミノ酸残基によって定義される。
そのアグレトープ性残基間に散在されているアミノ酸
は、それら自体によって又は１又はそれよりも多くのア
グレトープ残基と共にエピトープ認識を提供することが
できる。
〜２個の領域を有するであろう。最初の領域は、目的の
移植抗原に対して高められた結合性を提供するアミノ酸
配列を有するオリゴペプチドを含有するであろう。その
移植抗原に結合するアミノ酸配列は“アグレトープ（ａ
ｇｒｅｔｏｐｅ）”として言及されるであろう。そのア
グレトープは、１又は限定された数の移植抗原に特異的
に結合する認識の単一の単位である。そのアグレトープ
は、しばしば分離された個々のアミノ酸残基を有する、
一組のアグレトープアミノ酸残基によって定義される。
そのアグレトープ性残基間に散在されているアミノ酸
は、それら自体によって又は１又はそれよりも多くのア
グレトープ残基と共にエピトープ認識を提供することが
できる。
【００１３】アミノ酸配列は、１又はそれよりも多くの
異なった認識の単位を有し、その結果、オリゴペプチド
上に存在するアグレトープに関しては、多くの組のアグ
レトープアミノ酸単位が存在し、ここで少ない出来事で
はあるが、同じ組でさえ、隣接するアミノ酸に依存し
て、その結合親和性において異なることが理解されるべ
きである。アグレトープアミノ酸を分離する散在アミノ
酸は、どのＴ−細胞レセプターがアグレトープ含有性オ
リゴペプチド及び移植抗原の複合体に結合するかに関し
て選択される。
異なった認識の単位を有し、その結果、オリゴペプチド
上に存在するアグレトープに関しては、多くの組のアグ
レトープアミノ酸単位が存在し、ここで少ない出来事で
はあるが、同じ組でさえ、隣接するアミノ酸に依存し
て、その結合親和性において異なることが理解されるべ
きである。アグレトープアミノ酸を分離する散在アミノ
酸は、どのＴ−細胞レセプターがアグレトープ含有性オ
リゴペプチド及び移植抗原の複合体に結合するかに関し
て選択される。
【００１４】その散在されたアミノ酸は“エピトー
プ，”（エピトープ、すなわちそのアミノ酸が多くの認
識部位を定義することができる）として言及されるが、
しかし本発明の性質の観点から、“第１エピトープ”と
して言及されるであろう。エピトープを定義するこの散
在された配列は、特定の免疫原に対する免疫応答の増強
するか又は減じるかいずれかに依存して、特定のサブセ
ットのＴ−細胞を活性化し、又は特定のサブセットのＴ
−細胞の活性化を妨げるために選択され得る。アグレト
ープ及び第１エピトープを含むオリゴペプチドは、前記
第１エピトープによって結合された同じＴ−細胞レセプ
ターを結合することができるか又は結合することができ
得ない第２エピトープとして考えられ得る目的の抗体配
列に結合され得る。
プ，”（エピトープ、すなわちそのアミノ酸が多くの認
識部位を定義することができる）として言及されるが、
しかし本発明の性質の観点から、“第１エピトープ”と
して言及されるであろう。エピトープを定義するこの散
在された配列は、特定の免疫原に対する免疫応答の増強
するか又は減じるかいずれかに依存して、特定のサブセ
ットのＴ−細胞を活性化し、又は特定のサブセットのＴ
−細胞の活性化を妨げるために選択され得る。アグレト
ープ及び第１エピトープを含むオリゴペプチドは、前記
第１エピトープによって結合された同じＴ−細胞レセプ
ターを結合することができるか又は結合することができ
得ない第２エピトープとして考えられ得る目的の抗体配
列に結合され得る。
【００１５】しかしながら、目的の移植抗原のためのア
グレトープの高められた親和性のおかげで、高められた
免疫応答が目的の抗体配列に対して得られるであろう。
種々の組成物を用いることにより上記のようにして変性
された、リンパ球システムの免疫応答は、１又はそれよ
りも多くの特定の免疫源に不活性化又は活性化されるこ
とによって、調節され得る。
グレトープの高められた親和性のおかげで、高められた
免疫応答が目的の抗体配列に対して得られるであろう。
種々の組成物を用いることにより上記のようにして変性
された、リンパ球システムの免疫応答は、１又はそれよ
りも多くの特定の免疫源に不活性化又は活性化されるこ
とによって、調節され得る。
【００１６】調節される免疫応答は、３組の複合体、た
とえば移植抗原を有する細胞、前記移植抗原により制限
されるＴ−細胞レセプター及び移植抗原及びＴ−細胞レ
セプターの組合せに特異的に結合するポリペプチドに基
づいて予測される。移植抗原は２種のクラス、すなわち
クラスＩ及びクラスIIに分けられ得る。クラスＩは、哺
乳宿主のほとんどの細胞上に遍在し、そして見出され、
そして多型性α−鎖及び保護されたβ−鎖を有する。対
照的に、クラスIIの移植抗原は、比較的少ない組の細
胞、主としてリンパ球マクロファージに制限され、そし
て多型性α−及びβ−鎖を有する。クラスＩの移植抗原
の場合、それは、細胞異常又は疾患状態、たとえばウィ
ルス感染、マイコプラズマ感染、新形成又は同様のも
の、もしくは器官移植に主に関係する。関与されるＴ−
細胞は通常、異常細胞の破壊を引き起こすであろう。
とえば移植抗原を有する細胞、前記移植抗原により制限
されるＴ−細胞レセプター及び移植抗原及びＴ−細胞レ
セプターの組合せに特異的に結合するポリペプチドに基
づいて予測される。移植抗原は２種のクラス、すなわち
クラスＩ及びクラスIIに分けられ得る。クラスＩは、哺
乳宿主のほとんどの細胞上に遍在し、そして見出され、
そして多型性α−鎖及び保護されたβ−鎖を有する。対
照的に、クラスIIの移植抗原は、比較的少ない組の細
胞、主としてリンパ球マクロファージに制限され、そし
て多型性α−及びβ−鎖を有する。クラスＩの移植抗原
の場合、それは、細胞異常又は疾患状態、たとえばウィ
ルス感染、マイコプラズマ感染、新形成又は同様のも
の、もしくは器官移植に主に関係する。関与されるＴ−
細胞は通常、異常細胞の破壊を引き起こすであろう。
【００１７】対照的に、クラスIIの移植抗原は細胞免疫
系の活性化に関与し、異常な生理学的状態に対する宿主
の保護に関与される細胞の拡張をもたらす。その異常な
生理学的状態は、病原菌、たとえばウィルス、細菌、菌
類、原生生物、毒素又は同様のものの侵入に関与され
る。さらに、そのクラスII細胞は、種々の自己免疫疾
患、たとえばリウマチ様関節炎、局部的な円板状紅斑性
狼瘡、糖尿病、等、並びにクラスＩの移植抗原に関係す
る細胞異常又は疾患状態に関与される。クラスＩの移植
抗原はまた、器官移植の拒絶にも関与される。その免疫
系は、移植された器官上に存在する移植抗原の外来性性
質を認識することができ、そしてその器官を攻撃するこ
とができる。この場合、外来性細胞からの宿主の保護は
所望されないが、しかしむしろ、器官移植を攻撃するた
めに特異的である免疫系のサブセットを減じることが所
望される。
系の活性化に関与し、異常な生理学的状態に対する宿主
の保護に関与される細胞の拡張をもたらす。その異常な
生理学的状態は、病原菌、たとえばウィルス、細菌、菌
類、原生生物、毒素又は同様のものの侵入に関与され
る。さらに、そのクラスII細胞は、種々の自己免疫疾
患、たとえばリウマチ様関節炎、局部的な円板状紅斑性
狼瘡、糖尿病、等、並びにクラスＩの移植抗原に関係す
る細胞異常又は疾患状態に関与される。クラスＩの移植
抗原はまた、器官移植の拒絶にも関与される。その免疫
系は、移植された器官上に存在する移植抗原の外来性性
質を認識することができ、そしてその器官を攻撃するこ
とができる。この場合、外来性細胞からの宿主の保護は
所望されないが、しかしむしろ、器官移植を攻撃するた
めに特異的である免疫系のサブセットを減じることが所
望される。
【００１８】多くの場合、イン・ビトロでリンパ球応答
を調節することにもまた興味が存在するであろう。これ
らの情況は、マイコプラズマ又はウィルスにより感染さ
れた細胞を特異的に破壊し、腫瘍性及び正常な細胞の混
合物から特定のサブセットの細胞を除去し、その混合物
中に特定のサブセットの細胞を拡張し、種々のリンホカ
イン、たとえばＩＬ−２の産生のためにならし培地を提
供し、又は同様のことを含むことができる。イン・ビト
ロシステムは、完全な血液、血漿、血清、細胞画分、正
常な又は不滅化された細胞、等を含むことができる。
を調節することにもまた興味が存在するであろう。これ
らの情況は、マイコプラズマ又はウィルスにより感染さ
れた細胞を特異的に破壊し、腫瘍性及び正常な細胞の混
合物から特定のサブセットの細胞を除去し、その混合物
中に特定のサブセットの細胞を拡張し、種々のリンホカ
イン、たとえばＩＬ−２の産生のためにならし培地を提
供し、又は同様のことを含むことができる。イン・ビト
ロシステムは、完全な血液、血漿、血清、細胞画分、正
常な又は不滅化された細胞、等を含むことができる。
【００１９】オリゴペプチドが定義される態様は、移植
抗原の配列、多型性領域及び移植抗原によって制限され
た免疫原に関係される。移植抗原の配列は、移植抗原に
よって制限される抗原の免疫優性配列の間に相同関係を
有することによって定義され得、ここで移植抗原の多型
性領域が含まれても良く又は含まれなくても良い。（免
疫優性配列の討論のためには、たとえばBerzofsky,（１
９８６）前記及び本明細書に引用された参考文献を参照
のこと）。移植抗原は、多型性領域を有し、ここで個々
の対立遺伝子が特定の宿主に関連している。大部分、宿
主は二倍体及びヘテロ接合性であり、その結果それぞれ
の宿主は２種のハプロタイプを有し、ここでそれらは、
宿主が特定の遺伝子座でホモ接合性でない場合、その同
じ遺伝子座から特定の移植抗原型の２種の異なったコピ
ーが存在するであろうことを意味する。
抗原の配列、多型性領域及び移植抗原によって制限され
た免疫原に関係される。移植抗原の配列は、移植抗原に
よって制限される抗原の免疫優性配列の間に相同関係を
有することによって定義され得、ここで移植抗原の多型
性領域が含まれても良く又は含まれなくても良い。（免
疫優性配列の討論のためには、たとえばBerzofsky,（１
９８６）前記及び本明細書に引用された参考文献を参照
のこと）。移植抗原は、多型性領域を有し、ここで個々
の対立遺伝子が特定の宿主に関連している。大部分、宿
主は二倍体及びヘテロ接合性であり、その結果それぞれ
の宿主は２種のハプロタイプを有し、ここでそれらは、
宿主が特定の遺伝子座でホモ接合性でない場合、その同
じ遺伝子座から特定の移植抗原型の２種の異なったコピ
ーが存在するであろうことを意味する。
【００２０】免疫優性配列の相同関係は、その相同関係
の比較を可能にする他のアルゴリズムも使用され得るけ
れども、ＦＡＳＴＰアルゴリズムを用いて比較すること
ができる。ＦＡＳＴＰの説明に関しては、Lipman及びPe
arson, Ｓｃｉｅｎｃｅ１９８５）２２７：１４３５〜
１４４１を参照のこと。その免疫優性配列は、所望の相
同関係を提供するために、欠失又は挿入の配列における
アミノ酸の数に基づいて、約３０％又はそれ以上、及び
全体の２０％まで、通常約１５％よりも多くない相同関
係を有すべきである。すなわち、最良の相同関係を提供
するために、まず非保存性置換、次に欠失及び挿入を計
算する。所望により、相同関係は、保存性置換よりもむ
しろ同一性を含むであろう。通常、挿入又は欠失に関与
されるアミノ酸は合計２個よりも多くなく、そして挿入
又は欠失、通常欠失において約１個よりも多くないであ
ろう。次の表は、保存性置換を示し、ここで同じ線上の
アミノ酸は、同じ線上の他のアミノ酸により置換され得
る。
の比較を可能にする他のアルゴリズムも使用され得るけ
れども、ＦＡＳＴＰアルゴリズムを用いて比較すること
ができる。ＦＡＳＴＰの説明に関しては、Lipman及びPe
arson, Ｓｃｉｅｎｃｅ１９８５）２２７：１４３５〜
１４４１を参照のこと。その免疫優性配列は、所望の相
同関係を提供するために、欠失又は挿入の配列における
アミノ酸の数に基づいて、約３０％又はそれ以上、及び
全体の２０％まで、通常約１５％よりも多くない相同関
係を有すべきである。すなわち、最良の相同関係を提供
するために、まず非保存性置換、次に欠失及び挿入を計
算する。所望により、相同関係は、保存性置換よりもむ
しろ同一性を含むであろう。通常、挿入又は欠失に関与
されるアミノ酸は合計２個よりも多くなく、そして挿入
又は欠失、通常欠失において約１個よりも多くないであ
ろう。次の表は、保存性置換を示し、ここで同じ線上の
アミノ酸は、同じ線上の他のアミノ酸により置換され得
る。
【００２１】
【表１】
【００２２】プロリン（Ｐ）は、等価物と思われるが、
しかし同じ線上の他のアミノ酸と通常、置換されないで
あろう。同様に、ヒスチジン（Ｈ）は同じ線上の他のア
ミノ酸により置換され得るが、しかし通常、等価物とは
思われないであろう。さらに、いくらかの場合、酸性、
塩基性及び極性のアミノ酸（Ｎ，Ｑ）は、相同関係を決
定することにおいて、１つを他のものと置換することが
できる。
しかし同じ線上の他のアミノ酸と通常、置換されないで
あろう。同様に、ヒスチジン（Ｈ）は同じ線上の他のア
ミノ酸により置換され得るが、しかし通常、等価物とは
思われないであろう。さらに、いくらかの場合、酸性、
塩基性及び極性のアミノ酸（Ｎ，Ｑ）は、相同関係を決
定することにおいて、１つを他のものと置換することが
できる。
【００２３】通常、少なくとも２個の免疫優性配列がア
グレトープのためのコンセンサス配列の決定に関与し、
より普通には３個〜約８個の配列で十分であるべきであ
り、通常３〜６個の配列で十分であろう。その免疫優性
配列は多くの方法により同定され得る。特に、移植抗原
によって制限されたタンパク質は、多くの配列に分離さ
れ得、そしてこれらの配列は合成され、そして次にアッ
セイに使用され得、ここで特定の移植抗原を含む細胞及
び該移植抗原によって制限されそして特定の抗原に対し
て特異的なＴ−細胞が混合される（アッセイのための実
験部分を参照のこと）。
グレトープのためのコンセンサス配列の決定に関与し、
より普通には３個〜約８個の配列で十分であるべきであ
り、通常３〜６個の配列で十分であろう。その免疫優性
配列は多くの方法により同定され得る。特に、移植抗原
によって制限されたタンパク質は、多くの配列に分離さ
れ得、そしてこれらの配列は合成され、そして次にアッ
セイに使用され得、ここで特定の移植抗原を含む細胞及
び該移植抗原によって制限されそして特定の抗原に対し
て特異的なＴ−細胞が混合される（アッセイのための実
験部分を参照のこと）。
【００２４】ＩＬ−２（インターロイキン−２）の分泌
のレベルを決定することによって、免疫優性である配列
を決定することができる。いくらかの抗原においては、
１以上の免疫優性配列が存在し得るけれども、普通、単
一の免疫優性配列が存在するであろう。しかしながら、
１以上の配列が存在する場合、それらの両配列は、特定
の移植抗原への結合親和性を能率的にするためのコンセ
ンサス配列を定義することに使用され得る。
のレベルを決定することによって、免疫優性である配列
を決定することができる。いくらかの抗原においては、
１以上の免疫優性配列が存在し得るけれども、普通、単
一の免疫優性配列が存在するであろう。しかしながら、
１以上の配列が存在する場合、それらの両配列は、特定
の移植抗原への結合親和性を能率的にするためのコンセ
ンサス配列を定義することに使用され得る。
【００２５】普通、７個よりも多くないアグレトープに
関与するアミノ酸、より普通には５個よりも多くないア
グレトープを定義するアミノ酸、通常少なくとも２個、
より普通には少なくとも３個のアミノ酸が存在するであ
ろう。それらのアミノ酸は、ダンデムに存在し、又は１
〜４個のアミノ酸、普通２〜４個のアミノ酸によって分
離され得る。相同関係、特に同一性、すなわち所望によ
り少なくとも２個のアミノ酸の同一性、より所望には少
なくとも３個のアミノ酸の同一性及びコンセンサス配列
の間隔を比較することによって、そのコンセンサス配列
の決定のために使用される、１又はそれよりも多くの、
普通すべての抗原よりも移植抗原に関してより高い親和
性を有するであろう配列を定義することができる。
関与するアミノ酸、より普通には５個よりも多くないア
グレトープを定義するアミノ酸、通常少なくとも２個、
より普通には少なくとも３個のアミノ酸が存在するであ
ろう。それらのアミノ酸は、ダンデムに存在し、又は１
〜４個のアミノ酸、普通２〜４個のアミノ酸によって分
離され得る。相同関係、特に同一性、すなわち所望によ
り少なくとも２個のアミノ酸の同一性、より所望には少
なくとも３個のアミノ酸の同一性及びコンセンサス配列
の間隔を比較することによって、そのコンセンサス配列
の決定のために使用される、１又はそれよりも多くの、
普通すべての抗原よりも移植抗原に関してより高い親和
性を有するであろう配列を定義することができる。
【００２６】従って、相同関係を有するアミノ酸は、ダ
ンデムな相同関係が生じるけれども、任意の２種のアミ
ノ酸の間で、１〜４，４〜８又は６〜１２個のアミノ
酸、普通２〜３又は４〜９個のアミノ酸だけ離れて存在
する。コンセンサス配列が定義された後、アグレトープ
及び第１エピトープを含む免疫優性領域を定義するため
に、特定の移植抗原によって制限されたいづれかの抗原
を走査することができる。次に、その配列に関する情報
がリンパ球システムの免疫調節のために使用され得る。
ンデムな相同関係が生じるけれども、任意の２種のアミ
ノ酸の間で、１〜４，４〜８又は６〜１２個のアミノ
酸、普通２〜３又は４〜９個のアミノ酸だけ離れて存在
する。コンセンサス配列が定義された後、アグレトープ
及び第１エピトープを含む免疫優性領域を定義するため
に、特定の移植抗原によって制限されたいづれかの抗原
を走査することができる。次に、その配列に関する情報
がリンパ球システムの免疫調節のために使用され得る。
【００２７】アグレトープ及びエピトープ（オリゴ−ａ
−ｅ）を含むオリゴペプチドは通常、それが結合する移
植抗原の多型性領域に存在する配列と異なるであろう。
移植抗原のレセプターに対して内部リガンドとして作用
する多型性領域に配列が存在することが見出される。従
って、この領域は、多くの場合、移植抗原によって制限
された免疫優性領域に対してある相同関係を有するであ
ろう。しかしながら、前記内部リガンドは、コンセンサ
ス配列といくらかの程度の相同関係を共有するけれど
も、通常、コンセンサス配列と相当に異なるであろう。
移植抗原の内部リガンド配列に対して同一の配列を有す
るオリゴ−ａ−ｅを使用することによって、Ｔ−細胞応
答を実質的に阻害することができる。その効果は、オリ
ゴ−ａ−ｅが自己として認識されているかのようであ
り、そして三成分複合体は形成されず、又は形成される
場合、Ｔ−細胞は活性化されない。
−ｅ）を含むオリゴペプチドは通常、それが結合する移
植抗原の多型性領域に存在する配列と異なるであろう。
移植抗原のレセプターに対して内部リガンドとして作用
する多型性領域に配列が存在することが見出される。従
って、この領域は、多くの場合、移植抗原によって制限
された免疫優性領域に対してある相同関係を有するであ
ろう。しかしながら、前記内部リガンドは、コンセンサ
ス配列といくらかの程度の相同関係を共有するけれど
も、通常、コンセンサス配列と相当に異なるであろう。
移植抗原の内部リガンド配列に対して同一の配列を有す
るオリゴ−ａ−ｅを使用することによって、Ｔ−細胞応
答を実質的に阻害することができる。その効果は、オリ
ゴ−ａ−ｅが自己として認識されているかのようであ
り、そして三成分複合体は形成されず、又は形成される
場合、Ｔ−細胞は活性化されない。
【００２８】多くの抗原が文献に記載されて来た。ここ
で特定の配列が、特定の病原菌又は毒素に対する宿主の
保護のために抗体の産生に有用なものであるとして記載
されて来た。これらの組成物は、大部分、約５ＫＤより
も短かく、通常約３ＫＤよりも短かく、その結果、それ
らは通常ハプテンと思われる。これらの配列は、抗体目
標配列として使用され得、そしてオリゴ−ａ−ｅに連結
され得る。その得られた分子は、新規ポリペプチドを形
成するために２種のドメインを有し、ここでそれぞれの
ドメインは全体の分子の約７０％よりも短く、通常オリ
ゴ−ａ−ｅアグレトープ含有性ドメインは約３０〜７０
％であり、そして抗体目標配列のドメインは約１０〜６
０％である。多くの場合、オリゴ−ａ−ｅアグレトープ
含有性ドメインは、約８〜３０個のアミノ酸、より普通
には約８〜２０個のアミノ酸を有し、そして抗体目標配
列は約５〜２５個のアミノ酸、より普通には約５〜２０
個のアミノ酸を有するであろう。
で特定の配列が、特定の病原菌又は毒素に対する宿主の
保護のために抗体の産生に有用なものであるとして記載
されて来た。これらの組成物は、大部分、約５ＫＤより
も短かく、通常約３ＫＤよりも短かく、その結果、それ
らは通常ハプテンと思われる。これらの配列は、抗体目
標配列として使用され得、そしてオリゴ−ａ−ｅに連結
され得る。その得られた分子は、新規ポリペプチドを形
成するために２種のドメインを有し、ここでそれぞれの
ドメインは全体の分子の約７０％よりも短く、通常オリ
ゴ−ａ−ｅアグレトープ含有性ドメインは約３０〜７０
％であり、そして抗体目標配列のドメインは約１０〜６
０％である。多くの場合、オリゴ−ａ−ｅアグレトープ
含有性ドメインは、約８〜３０個のアミノ酸、より普通
には約８〜２０個のアミノ酸を有し、そして抗体目標配
列は約５〜２５個のアミノ酸、より普通には約５〜２０
個のアミノ酸を有するであろう。
【００２９】アグレトープ含有性ドメインは、種々の方
法で選択され得る。１つは一般的なオリゴ−ａ−ｅを使
用することができ、ここで第１エピトープがまた種々の
方法で選択され得る。第１エピトープが、それと共に使
用されるであろう大部分の宿主における移植多型性領域
と同一でないことを確めながら、第１エピトープを任意
に選択することができる。他方、それは、無害性エピト
ープ、たとえばすでに示された、破傷風トキソイド、キ
ーホールリンペット（貝類）のヘモシアニン、ウシγ−
グロブリン、ＢＣＧ、ヒトγ−グロブリン又は細胞内在
性タンパク質、等に関連するエピトープ部位を有するよ
うに選択される。
法で選択され得る。１つは一般的なオリゴ−ａ−ｅを使
用することができ、ここで第１エピトープがまた種々の
方法で選択され得る。第１エピトープが、それと共に使
用されるであろう大部分の宿主における移植多型性領域
と同一でないことを確めながら、第１エピトープを任意
に選択することができる。他方、それは、無害性エピト
ープ、たとえばすでに示された、破傷風トキソイド、キ
ーホールリンペット（貝類）のヘモシアニン、ウシγ−
グロブリン、ＢＣＧ、ヒトγ−グロブリン又は細胞内在
性タンパク質、等に関連するエピトープ部位を有するよ
うに選択される。
【００３０】最後に、それが、抗体目標配列を使用する
ための目的といくらかの関係を共有する対象のエピトー
プを有することができ、たとえばその第１エピトープ
は、抗体目標配列とは異なるが、但し、抗体目標配列の
抗原と同じ抗原、又はその抗原に関連する異なった抗原
上に存在するエピトープであることができる。たとえ
ば、ウィルスの場合、第１エピトープ及び抗体目標配列
は同じか又は異なったカプシドタンパク質、エンベロー
プタンパク質、等上に存在することができる。特定の抗
体目標配列は、病原性微生物、たとえば細菌及びウィル
スの中和性抗体目標配列（エピトープ）を含む。
ための目的といくらかの関係を共有する対象のエピトー
プを有することができ、たとえばその第１エピトープ
は、抗体目標配列とは異なるが、但し、抗体目標配列の
抗原と同じ抗原、又はその抗原に関連する異なった抗原
上に存在するエピトープであることができる。たとえ
ば、ウィルスの場合、第１エピトープ及び抗体目標配列
は同じか又は異なったカプシドタンパク質、エンベロー
プタンパク質、等上に存在することができる。特定の抗
体目標配列は、病原性微生物、たとえば細菌及びウィル
スの中和性抗体目標配列（エピトープ）を含む。
【００３１】免疫優性領域を定義し、そして異種配列
（すなわち、それらが正常に連結される天然の配列以外
の配列）に結合されない、本発明に使用されるオリゴペ
プチドは、シトクロムｃ、オボアルブミン、ミオグロビ
ン、スタフィロコッカス・アウレウスからのヌクレアー
ゼ、リゾチーム、１，２および３個のアミノ酸の反復配
列、インフルエンザ赤血球凝集素、天然に存在する、約
２０個よりも少ないアミノ酸のホルモン、たとえばオキ
シトシン、ブラジキニン及びアンギオテンシン、ヘルペ
ス糖タンパク質ｄ、インシュリン、特定のウシインシュ
リンＢ−鎖、ネズミのミエリン塩基性タンパク質、ブタ
クサのアレルゲンＲａ３、ヒトＡＣｈレセプター−γＶ
Ｐ１口蹄ウィルス、アンジオテンシン２、フィブリノペ
プチドＢ−１４、最小刺激性ポリマー、ＨＬＡ、ＣＷ
３、ミエリン塩基性タンパク質、特定のウサギ及びテン
ジクネズミ、狂犬病糖タンパク質、インフルエンザマト
リックスタンパク質、結核菌６５Ｋｄタンパク質又は本
出願の有効な提出日の前、調製された他のジゴペプチド
を含まないであろう。
（すなわち、それらが正常に連結される天然の配列以外
の配列）に結合されない、本発明に使用されるオリゴペ
プチドは、シトクロムｃ、オボアルブミン、ミオグロビ
ン、スタフィロコッカス・アウレウスからのヌクレアー
ゼ、リゾチーム、１，２および３個のアミノ酸の反復配
列、インフルエンザ赤血球凝集素、天然に存在する、約
２０個よりも少ないアミノ酸のホルモン、たとえばオキ
シトシン、ブラジキニン及びアンギオテンシン、ヘルペ
ス糖タンパク質ｄ、インシュリン、特定のウシインシュ
リンＢ−鎖、ネズミのミエリン塩基性タンパク質、ブタ
クサのアレルゲンＲａ３、ヒトＡＣｈレセプター−γＶ
Ｐ１口蹄ウィルス、アンジオテンシン２、フィブリノペ
プチドＢ−１４、最小刺激性ポリマー、ＨＬＡ、ＣＷ
３、ミエリン塩基性タンパク質、特定のウサギ及びテン
ジクネズミ、狂犬病糖タンパク質、インフルエンザマト
リックスタンパク質、結核菌６５Ｋｄタンパク質又は本
出願の有効な提出日の前、調製された他のジゴペプチド
を含まないであろう。
【００３２】すでに指摘されたように、アグレトープは
通常、対象の抗原よりも移植抗原に対してより強い結合
親和性を有し、その結果そのオリゴ−ａ−ｅは、三成分
複合体を形成することにおいて対象の抗原とうまく競争
することができる。そのオリゴ−ａ−ｅ配列は、完全な
配列の分子又はより大きなペプチドの一部に過ぎないか
も知れない。そのオリゴ−ａ−ｅは、第２エピトープに
種々の方法で連結され得る。
通常、対象の抗原よりも移植抗原に対してより強い結合
親和性を有し、その結果そのオリゴ−ａ−ｅは、三成分
複合体を形成することにおいて対象の抗原とうまく競争
することができる。そのオリゴ−ａ−ｅ配列は、完全な
配列の分子又はより大きなペプチドの一部に過ぎないか
も知れない。そのオリゴ−ａ−ｅは、第２エピトープに
種々の方法で連結され得る。
【００３３】イン・ビボ目的に関しては、宿主が曝露さ
れる対象の目標抗原が存在するであろう。たとえば、ク
ローズマッチが器官移植の供与者と受領者との間に作ら
れる場合、強い免疫応答をもたらすことができる、器官
上に存在するわずかな抗原性配列又はエピトープが存在
する。本発明によれば、１つは、宿主による拒絶応答を
減じるために、そのような抗原の免疫優性領域に応答す
るＴ−細胞を阻害することができる。もう１つの場合、
個人が、寄生病が流行している地域に入る場合、その個
人は、細胞及び体液の保護を得るために、その寄生抗原
と交差反応する、１又はそれよりも多くの抗原目標配列
を有するオリゴペプチドにより予防接種を受けるであろ
う。これらの及び多くの他の情況が本発明によって取り
扱われるであろう。異なった情況のためにオリゴペプチ
ドを調製することにおいては、種々の方法が使用される
であろう。
れる対象の目標抗原が存在するであろう。たとえば、ク
ローズマッチが器官移植の供与者と受領者との間に作ら
れる場合、強い免疫応答をもたらすことができる、器官
上に存在するわずかな抗原性配列又はエピトープが存在
する。本発明によれば、１つは、宿主による拒絶応答を
減じるために、そのような抗原の免疫優性領域に応答す
るＴ−細胞を阻害することができる。もう１つの場合、
個人が、寄生病が流行している地域に入る場合、その個
人は、細胞及び体液の保護を得るために、その寄生抗原
と交差反応する、１又はそれよりも多くの抗原目標配列
を有するオリゴペプチドにより予防接種を受けるであろ
う。これらの及び多くの他の情況が本発明によって取り
扱われるであろう。異なった情況のためにオリゴペプチ
ドを調製することにおいては、種々の方法が使用される
であろう。
【００３４】１つの組成物は、宿主中に存在する１又は
それよりも多くの移植抗原に対して対象の抗原の親和性
を高めるために、免疫優性部位で突然変異化された対象
の抗原を有するであろう。特に、Ｂ−細胞及びクラスII
移植抗原に関しては、対象の免疫原の種々のエピトープ
がリンパ球システムに存在するＢ−細胞の表面免疫グロ
ブリンに結合し、それによってその免疫優性配列は移植
抗原に結合し、そして特定の免疫優性配列を認識するＴ
−細胞に付与されるであろう。高い結合親和性のため
に、高められた免疫応答が達成されるであろう。突然変
異化された免疫原を使用することによって、多くのＢ−
細胞が、特定の免疫優性領域を認識するＴ−細胞レセプ
ターを有するＴ−細胞と一緒に活性化され得る。
それよりも多くの移植抗原に対して対象の抗原の親和性
を高めるために、免疫優性部位で突然変異化された対象
の抗原を有するであろう。特に、Ｂ−細胞及びクラスII
移植抗原に関しては、対象の免疫原の種々のエピトープ
がリンパ球システムに存在するＢ−細胞の表面免疫グロ
ブリンに結合し、それによってその免疫優性配列は移植
抗原に結合し、そして特定の免疫優性配列を認識するＴ
−細胞に付与されるであろう。高い結合親和性のため
に、高められた免疫応答が達成されるであろう。突然変
異化された免疫原を使用することによって、多くのＢ−
細胞が、特定の免疫優性領域を認識するＴ−細胞レセプ
ターを有するＴ−細胞と一緒に活性化され得る。
【００３５】他方、突然変異化された領域を単独で使用
することができ、それによって特定のＴ−細胞と共に免
疫優性領域に結合する少々のＢ−細胞のみが活性化され
るであろう。もう１つの方法は、免疫優性領域が直接的
には又は普通約５０個以下のアミノ酸、より普通には約
３０個以下のアミノ酸を有する架橋を通して連結され得
る抗原上に存在する１又はそれよりも多くのエピトープ
部位を選択することである。この態様においては、単一
の融合タンパク質が得られ、ここで免疫優性領域が１又
はそれよりも多くの対象のエピトープ部位に融合され
る。
することができ、それによって特定のＴ−細胞と共に免
疫優性領域に結合する少々のＢ−細胞のみが活性化され
るであろう。もう１つの方法は、免疫優性領域が直接的
には又は普通約５０個以下のアミノ酸、より普通には約
３０個以下のアミノ酸を有する架橋を通して連結され得
る抗原上に存在する１又はそれよりも多くのエピトープ
部位を選択することである。この態様においては、単一
の融合タンパク質が得られ、ここで免疫優性領域が１又
はそれよりも多くの対象のエピトープ部位に融合され
る。
【００３６】融合タンパク質を有するよりもむしろ、対
象のペプチドに免疫優性領域を結合することによってそ
の免疫優性領域を連結することができる。その結合は、
種々の形を取ることができ、その特定の態様の結合は臨
界ではない。従って、オリゴペプチドの末端又は他の部
位で存在すべきシステインを提供することができ、ここ
で対象の抗原がマレイミド基により官能化され得る。シ
ステインにより変性された免疫優性配列とその官能化さ
れた抗原とを組合わせることによって、チオエチル結合
が得られる。
象のペプチドに免疫優性領域を結合することによってそ
の免疫優性領域を連結することができる。その結合は、
種々の形を取ることができ、その特定の態様の結合は臨
界ではない。従って、オリゴペプチドの末端又は他の部
位で存在すべきシステインを提供することができ、ここ
で対象の抗原がマレイミド基により官能化され得る。シ
ステインにより変性された免疫優性配列とその官能化さ
れた抗原とを組合わせることによって、チオエチル結合
が得られる。
【００３７】適切ならば、免疫優性配列上に存在するカ
ルボキシル基が、カルボジイミドを用いて、又は活性エ
ステル、たとえばｐ−ニトロフェニルエステルを形成し
て活性化され、ここでオリゴペプチド上に存在するいづ
れか利用できるアミノ基がブロックされる。オリゴペプ
チドと対象の抗原とが反応し、ペプチド結合を形成した
後、そのブロッキング基が除去され得る。Fieser及びFi
eser, Reagents for Organic Synthesis, 第３巻，Wile
y-Interscience, NY, １９７２により記載されているよ
うな他の技法もまた、使用され得る。
ルボキシル基が、カルボジイミドを用いて、又は活性エ
ステル、たとえばｐ−ニトロフェニルエステルを形成し
て活性化され、ここでオリゴペプチド上に存在するいづ
れか利用できるアミノ基がブロックされる。オリゴペプ
チドと対象の抗原とが反応し、ペプチド結合を形成した
後、そのブロッキング基が除去され得る。Fieser及びFi
eser, Reagents for Organic Synthesis, 第３巻，Wile
y-Interscience, NY, １９７２により記載されているよ
うな他の技法もまた、使用され得る。
【００３８】免疫優性領域は、オリゴ−ａ−ｅを提供す
るために、アグレトープに関してのみならず、また第１
エピトープに関しても変性され得る。従って、免疫優性
領域を認識するであろうＴ−細胞レセプターを変性する
ことができ、その結果その免疫優性領域は、１以上のＴ
−細胞によって、又は野生型の免疫優性領域を認識する
Ｔ−細胞と異なるＴ−細胞によって認識され得る。特
に、免疫優性領域が抗体目標配列に連結される場合、い
づれかのＴ−細胞応答を最少にし、又は実質的に免疫学
的非反応性エピトープに対してＴ−細胞応答を提供する
ために、アグレトープの変性が所望される。
るために、アグレトープに関してのみならず、また第１
エピトープに関しても変性され得る。従って、免疫優性
領域を認識するであろうＴ−細胞レセプターを変性する
ことができ、その結果その免疫優性領域は、１以上のＴ
−細胞によって、又は野生型の免疫優性領域を認識する
Ｔ−細胞と異なるＴ−細胞によって認識され得る。特
に、免疫優性領域が抗体目標配列に連結される場合、い
づれかのＴ−細胞応答を最少にし、又は実質的に免疫学
的非反応性エピトープに対してＴ−細胞応答を提供する
ために、アグレトープの変性が所望される。
【００３９】この情況においては、第１エピトープは、
ワクチン、たとえば破傷風トキシド又は前に記載された
ような他の比較的無毒の抗原のエピトープをまねるため
に変性され得る。他方、活性化されるＴ−細胞レセプタ
ーが存在しない配列にその第１エピトープを変性するこ
とができる。これは、特定のエピトープが結合するため
に非相同性のＴ−細胞レセプターを見出す、“レパート
リーにおけるホール（ｈｏｌｅ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｐ
ｅｒｔｏｉｒｅ）”であると思われる。
ワクチン、たとえば破傷風トキシド又は前に記載された
ような他の比較的無毒の抗原のエピトープをまねるため
に変性され得る。他方、活性化されるＴ−細胞レセプタ
ーが存在しない配列にその第１エピトープを変性するこ
とができる。これは、特定のエピトープが結合するため
に非相同性のＴ−細胞レセプターを見出す、“レパート
リーにおけるホール（ｈｏｌｅ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｐ
ｅｒｔｏｉｒｅ）”であると思われる。
【００４０】自己エピトープをまねるそれらのエピトー
プは、この特性及び特定のハプロタイプに発見されるで
あろう他のエピトープを提供するであろうことが予期さ
れる。所望の結果に依存して、アグレトープの種々の組
合せ、すなわち第１エピトープ及び抗体目標配列が、Ｂ
−細胞及び／又はＴ−細胞の特定のサブセットを活性化
又は不活性化するために使用され得る。従って、特定の
目的への調節のために、Ｔ−又はＢ−細胞の単一のサブ
セット又はＴ−又はＢ−細胞のいづれか又は両者のサブ
セットの群を選択的に選択することができる。
プは、この特性及び特定のハプロタイプに発見されるで
あろう他のエピトープを提供するであろうことが予期さ
れる。所望の結果に依存して、アグレトープの種々の組
合せ、すなわち第１エピトープ及び抗体目標配列が、Ｂ
−細胞及び／又はＴ−細胞の特定のサブセットを活性化
又は不活性化するために使用され得る。従って、特定の
目的への調節のために、Ｔ−又はＢ−細胞の単一のサブ
セット又はＴ−又はＢ−細胞のいづれか又は両者のサブ
セットの群を選択的に選択することができる。
【００４１】たとえば、特定のエピトープに対して特異
的なＢ−細胞の特定のサブセットの不活性化が所望され
る場合、２種の領域を有するポリペプチドが調製される
であろう。１つの領域（すなわち抗体目標配列）は、対
象のエピトープをまねるアミノ酸配列を含むであろう。
他の領域は、たとえば、対象の宿主の移植抗原の多型領
域の配列に対して同一の配列を結合するＴ−細胞レセプ
ターを付与しないであろうオリゴ−ａ−ｅであろう。こ
の場合、その得られたポリペプチドは、活性化をブロッ
クする条件下で第２エピトープを認識し、そしてＴ−細
胞レセプターに付与されるこれらのＢ−細胞によって結
合されるであろう。
的なＢ−細胞の特定のサブセットの不活性化が所望され
る場合、２種の領域を有するポリペプチドが調製される
であろう。１つの領域（すなわち抗体目標配列）は、対
象のエピトープをまねるアミノ酸配列を含むであろう。
他の領域は、たとえば、対象の宿主の移植抗原の多型領
域の配列に対して同一の配列を結合するＴ−細胞レセプ
ターを付与しないであろうオリゴ−ａ−ｅであろう。こ
の場合、その得られたポリペプチドは、活性化をブロッ
クする条件下で第２エピトープを認識し、そしてＴ−細
胞レセプターに付与されるこれらのＢ−細胞によって結
合されるであろう。
【００４２】さらに、その抗体目標配列は、移植抗原へ
のエピトープの親和性を最少にするために選択されるで
あろう。この場合、Ｔ−細胞は、移植抗原へのポリペプ
チドの結合により活性化されず、その結果、そのポリペ
プチドを認識するこれらのＢ−細胞はＴ−細胞によって
刺激されないまま残るであろう。Ｂ−細胞のＴ−細胞刺
激をブロックしたい場合、オリゴ−ａ−ｅを非活性化す
るＴ−細胞が使用され得る。Ｔ−細胞の特定のサブセッ
トを刺激したい場合、クラスII移植抗原に対して特異的
なアグレトープを使用することができる。この場合、第
１エピトープは、対象のＴ−細胞の特定のサブセットに
向けられるように選択される。この態様においては、た
とえは悪性条件の場合、自己免疫疾患の場合、又は同様
の場合におけるように、特定の抗原に向けられるＴ−細
胞集団を構築することができる。
のエピトープの親和性を最少にするために選択されるで
あろう。この場合、Ｔ−細胞は、移植抗原へのポリペプ
チドの結合により活性化されず、その結果、そのポリペ
プチドを認識するこれらのＢ−細胞はＴ−細胞によって
刺激されないまま残るであろう。Ｂ−細胞のＴ−細胞刺
激をブロックしたい場合、オリゴ−ａ−ｅを非活性化す
るＴ−細胞が使用され得る。Ｔ−細胞の特定のサブセッ
トを刺激したい場合、クラスII移植抗原に対して特異的
なアグレトープを使用することができる。この場合、第
１エピトープは、対象のＴ−細胞の特定のサブセットに
向けられるように選択される。この態様においては、た
とえは悪性条件の場合、自己免疫疾患の場合、又は同様
の場合におけるように、特定の抗原に向けられるＴ−細
胞集団を構築することができる。
【００４３】Ｂ−及びＴ−細胞の両者を刺激するために
は、対象の抗原に対して特異的なエピトープを有するオ
リゴ−ａ−ｅを使用することができる。さらに、その同
じ又は関連抗原の他のエピトープに連結されるオリゴ−
ａ−ｅを使用することもでき、その結果多くのＢ−細胞
が刺激され、ここでは異なったサブセットのＢ−細胞が
異なったエピトープ部位に対して特異的である。この刺
激は多くの異なった情況に適用されるであろう。さら
に、多くのオリゴ−ａ−ｅを有するオリゴペプチド又は
タンパク質を調製することができ、その結果、その同じ
分子は多くの移植抗原に対して効果的であろう。
は、対象の抗原に対して特異的なエピトープを有するオ
リゴ−ａ−ｅを使用することができる。さらに、その同
じ又は関連抗原の他のエピトープに連結されるオリゴ−
ａ−ｅを使用することもでき、その結果多くのＢ−細胞
が刺激され、ここでは異なったサブセットのＢ−細胞が
異なったエピトープ部位に対して特異的である。この刺
激は多くの異なった情況に適用されるであろう。さら
に、多くのオリゴ−ａ−ｅを有するオリゴペプチド又は
タンパク質を調製することができ、その結果、その同じ
分子は多くの移植抗原に対して効果的であろう。
【００４４】たとえば、ワクチンの調製においては、特
定の病原菌、たとえばウィルス又は細菌のために異なっ
た菌株のエピトープが提供され、その結果それらの異な
った菌株のすべてを認識するＢ−細胞が、単一の分子に
よって同時に刺激されるであろう。多くの生物体、たと
えば妊娠女性に対するＴＯＲＣＨシリーズ（トキソプラ
ズマ症、風疹、サイトメガロウィルス及び単純ヘルペス
ウィルス）に対して宿主を予防接種したい場合、別の分
子のエピトープがまた提供され得る。従って、特に、一
連の抗原が関与されるこれらの情況において、その主方
法論は、単一の分子が異なった生物体に関連する多くの
エピトープに対する免疫化及び結合されるべき多くの移
植抗原を提供することを可能にする。
定の病原菌、たとえばウィルス又は細菌のために異なっ
た菌株のエピトープが提供され、その結果それらの異な
った菌株のすべてを認識するＢ−細胞が、単一の分子に
よって同時に刺激されるであろう。多くの生物体、たと
えば妊娠女性に対するＴＯＲＣＨシリーズ（トキソプラ
ズマ症、風疹、サイトメガロウィルス及び単純ヘルペス
ウィルス）に対して宿主を予防接種したい場合、別の分
子のエピトープがまた提供され得る。従って、特に、一
連の抗原が関与されるこれらの情況において、その主方
法論は、単一の分子が異なった生物体に関連する多くの
エピトープに対する免疫化及び結合されるべき多くの移
植抗原を提供することを可能にする。
【００４５】普通、異なった抗体目標配列の数は、０〜
２０、より普通には約０〜１０、便利には約１〜６の範
囲であろう。その抗体目標配列のそれぞれは、少なくと
も約５個、普通８個のアミノ酸、及び約３０個よりも多
くなく、より普通には約２０個よりも多くないアミノ酸
を有するであろう。個々のエピトープの性質に依存し
て、エピトープは頭と尾とを連結され得又は約１〜３０
個のアミノ酸、普通約１〜２０個のアミノ酸の架橋基に
よって分離され得る。その架橋基は、便利な配列ではあ
るが、しかし普通、エピトープ配列の正しい結合により
干渉を避けるために、そして宿主に対して有害であるエ
ピトープに所望としない免疫応答の創造を避けるために
選択されるであろう。
２０、より普通には約０〜１０、便利には約１〜６の範
囲であろう。その抗体目標配列のそれぞれは、少なくと
も約５個、普通８個のアミノ酸、及び約３０個よりも多
くなく、より普通には約２０個よりも多くないアミノ酸
を有するであろう。個々のエピトープの性質に依存し
て、エピトープは頭と尾とを連結され得又は約１〜３０
個のアミノ酸、普通約１〜２０個のアミノ酸の架橋基に
よって分離され得る。その架橋基は、便利な配列ではあ
るが、しかし普通、エピトープ配列の正しい結合により
干渉を避けるために、そして宿主に対して有害であるエ
ピトープに所望としない免疫応答の創造を避けるために
選択されるであろう。
【００４６】本発明の組成物は、単一のポリペプチド又
はポリペプチドの混合物、普通ポリペプチドの混合物で
ある。一般的に、ポリペプチドの数は約２０を越えず、
より普通には約１２を越えず、そして好ましくは約８を
越えず、より好ましくは約６を越えない。その混合物は
普通、対象の集団中に最っとも頻繁に見出される移植抗
原に向けられるであろう。すなわち、特定の移植抗原
は、ある集団群、たとえば種々の種類、たとえばヒト、
他の霊長類、家畜、実験動物、等、たとえば羊、豚、
馬、鳥、等により頻繁に存在する。
はポリペプチドの混合物、普通ポリペプチドの混合物で
ある。一般的に、ポリペプチドの数は約２０を越えず、
より普通には約１２を越えず、そして好ましくは約８を
越えず、より好ましくは約６を越えない。その混合物は
普通、対象の集団中に最っとも頻繁に見出される移植抗
原に向けられるであろう。すなわち、特定の移植抗原
は、ある集団群、たとえば種々の種類、たとえばヒト、
他の霊長類、家畜、実験動物、等、たとえば羊、豚、
馬、鳥、等により頻繁に存在する。
【００４７】最っとも一般的な移植抗原、すなわちクラ
スＩ又はクラスIIのいづれか又は両者に結合するアグレ
トープを適切に選択することによって、関与される異な
ったポリペプチドの合計数を最少にする機会が存在す
る。さらに、多くの場合、異なった移植抗原が、コンセ
ンサス配列において特定のアミノ酸を共有することがで
き、その結果対象の抗原に関するより高く又は等価の親
和性が単一のオリゴ−ａ−ｅ又はコンセンサス配列を有
する多くの移植抗原により達成され得る。多くの場合、
ほとんどの宿主はヘテロ接合体であるので、１以上の移
植抗原の対立遺伝子の関与を所望する場合、２種の移植
抗原が実質的に類似するコンセンサス配列を持たないな
ら、少なくとも２種の異なったコンセンサス配列の分子
及びヒトにおいては６種までのコンセンサス配列の分子
を有することが所望されるであろう。
スＩ又はクラスIIのいづれか又は両者に結合するアグレ
トープを適切に選択することによって、関与される異な
ったポリペプチドの合計数を最少にする機会が存在す
る。さらに、多くの場合、異なった移植抗原が、コンセ
ンサス配列において特定のアミノ酸を共有することがで
き、その結果対象の抗原に関するより高く又は等価の親
和性が単一のオリゴ−ａ−ｅ又はコンセンサス配列を有
する多くの移植抗原により達成され得る。多くの場合、
ほとんどの宿主はヘテロ接合体であるので、１以上の移
植抗原の対立遺伝子の関与を所望する場合、２種の移植
抗原が実質的に類似するコンセンサス配列を持たないな
ら、少なくとも２種の異なったコンセンサス配列の分子
及びヒトにおいては６種までのコンセンサス配列の分子
を有することが所望されるであろう。
【００４８】本発明の組成物は、宿主への投与のために
又はイン・ビトロでの使用のために種々の方法で配合さ
れ得る。それらは、宿主への投与のためには、いづれか
の便利な生理学的に許容される媒体中に配合され得る。
これらの媒体は、水、食塩水、リン酸緩衝液、オイルエ
マルジョン、等を含む。ある場合、錠剤、マイクロカプ
セル、たとえば持効性のリポゾーム、ゲル、粉末、沈澱
物、たとえばミヨウバン、又は同様のものとして本発明
のペプチドを配合することが所望される。ある場合は、
便利な投与システム、たとえばカテーテル、一定の拡散
膜、ポンプ又は同様のものを用いることによって、宿主
中に連続した注入を提供することが所望される。これら
の配合法及び技法は当業界において良く知られている。
投与はたとえば血管内、腹膜内、皮下内に注射によって
又は局所的に皮内パッチ、等によって行なわれ得る。
又はイン・ビトロでの使用のために種々の方法で配合さ
れ得る。それらは、宿主への投与のためには、いづれか
の便利な生理学的に許容される媒体中に配合され得る。
これらの媒体は、水、食塩水、リン酸緩衝液、オイルエ
マルジョン、等を含む。ある場合、錠剤、マイクロカプ
セル、たとえば持効性のリポゾーム、ゲル、粉末、沈澱
物、たとえばミヨウバン、又は同様のものとして本発明
のペプチドを配合することが所望される。ある場合は、
便利な投与システム、たとえばカテーテル、一定の拡散
膜、ポンプ又は同様のものを用いることによって、宿主
中に連続した注入を提供することが所望される。これら
の配合法及び技法は当業界において良く知られている。
投与はたとえば血管内、腹膜内、皮下内に注射によって
又は局所的に皮内パッチ、等によって行なわれ得る。
【００４９】本発明の組成物の量は、特定の目的、投与
の方法、宿主の性質、処理の持続期間、反復処理の頻
度、及び同様のものに依存して広く異なるであろう。従
って、ほとんどの場合、それぞれの組成物に関しては、
使用される量は実験的に決定されるであろう。しかしな
がら、宿主へのオリゴペプチドの投与に関しては、ある
一般的な考慮が行なわれる。オリゴペプチドは一般的に
宿主のkg当り約０．０１〜１０μｇの範囲であり、ここ
で濃度は一般的に約１０μｇ／ml〜１mg／mlの範囲であ
ろう。他の添加物、たとえば安定剤、抗生物質、賦形
剤、アジュバント、吸着のための沈澱物、持効性添加
物、等が配合物に含まれ得る。
の方法、宿主の性質、処理の持続期間、反復処理の頻
度、及び同様のものに依存して広く異なるであろう。従
って、ほとんどの場合、それぞれの組成物に関しては、
使用される量は実験的に決定されるであろう。しかしな
がら、宿主へのオリゴペプチドの投与に関しては、ある
一般的な考慮が行なわれる。オリゴペプチドは一般的に
宿主のkg当り約０．０１〜１０μｇの範囲であり、ここ
で濃度は一般的に約１０μｇ／ml〜１mg／mlの範囲であ
ろう。他の添加物、たとえば安定剤、抗生物質、賦形
剤、アジュバント、吸着のための沈澱物、持効性添加
物、等が配合物に含まれ得る。
【００５０】本発明のポリペプチドは便利な手段によっ
て調製され得る。普通、化学合成又は組換え技法が使用
されるであろう。大部分、本発明に使用されるポリペプ
チドは、２００個よりも少ないアミノ酸、より普通には
１５０個よりも少ないアミノ酸、好ましくは約１００個
よりも少ないアミノ酸及びより好ましくは約７５個より
も少ないアミノ酸、一般的には約８〜６０個の範囲のア
ミノ酸を有するであろう。しかしながら、前に示したよ
うに、野生型又は天然に存在するタンパク質が使用さ
れ、ここでその免疫優性領域は移植抗原の親和性を変え
るために突然変異化されている。
て調製され得る。普通、化学合成又は組換え技法が使用
されるであろう。大部分、本発明に使用されるポリペプ
チドは、２００個よりも少ないアミノ酸、より普通には
１５０個よりも少ないアミノ酸、好ましくは約１００個
よりも少ないアミノ酸及びより好ましくは約７５個より
も少ないアミノ酸、一般的には約８〜６０個の範囲のア
ミノ酸を有するであろう。しかしながら、前に示したよ
うに、野生型又は天然に存在するタンパク質が使用さ
れ、ここでその免疫優性領域は移植抗原の親和性を変え
るために突然変異化されている。
【００５１】既知の技法に基づいて、本発明の組成物を
コードする遺伝子を合成することができる。オリゴデオ
キシヌクレオチド一本鎖を合成するための技法は十分に
確立され、そしてその鎖は２００個又はそれ以上の塩基
から得られる。鎖を適切にオーバーラップすることによ
って、大きな合成配列が調製され得る。他方、利用でき
る抗原の免疫優性配列を突然変異化する場合、種々の技
法、たとえばイン・ビトロ突然変異生成、合成配列の制
限及び挿入又は同様のものが突然変異を正確に導びくた
めに利用できる。突然変異が行なわれる特定の方法は、
本発明に臨界ではない。
コードする遺伝子を合成することができる。オリゴデオ
キシヌクレオチド一本鎖を合成するための技法は十分に
確立され、そしてその鎖は２００個又はそれ以上の塩基
から得られる。鎖を適切にオーバーラップすることによ
って、大きな合成配列が調製され得る。他方、利用でき
る抗原の免疫優性配列を突然変異化する場合、種々の技
法、たとえばイン・ビトロ突然変異生成、合成配列の制
限及び挿入又は同様のものが突然変異を正確に導びくた
めに利用できる。突然変異が行なわれる特定の方法は、
本発明に臨界ではない。
【００５２】遺伝子が得られた後、それは発現のために
従来の技法に従って使用され得る。相当な数の発現ベク
ターが商業的に又は当業界で利用可能であり、そしてこ
れは本発明に利点を与えることができる。それらのベク
ターにより形質転換された宿主は、宿主ゲノム中に安定
した染色体外維持又は組込みを提供することができる。
便利な発現宿主としてＥ．コリ（Ｅ． ｃｏｌｉ）、
Ｂ．サブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、Ｂ．リケニ
ホルミス（Ｂ． ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、サッ
カロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏ−ｍｙｃｅｓ）、たとえ
ばセレビシアエ（ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、クルイベロ
ミセス（ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）、たとえばラク
チス（ｌａｃｔｉｓ）を挙げることができる。微生物、
特に細菌及び菌類、たとえば酵母が好ましいであろう。
従来の技法に従って使用され得る。相当な数の発現ベク
ターが商業的に又は当業界で利用可能であり、そしてこ
れは本発明に利点を与えることができる。それらのベク
ターにより形質転換された宿主は、宿主ゲノム中に安定
した染色体外維持又は組込みを提供することができる。
便利な発現宿主としてＥ．コリ（Ｅ． ｃｏｌｉ）、
Ｂ．サブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、Ｂ．リケニ
ホルミス（Ｂ． ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、サッ
カロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏ−ｍｙｃｅｓ）、たとえ
ばセレビシアエ（ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、クルイベロ
ミセス（ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）、たとえばラク
チス（ｌａｃｔｉｓ）を挙げることができる。微生物、
特に細菌及び菌類、たとえば酵母が好ましいであろう。
【００５３】所望により、それらの構成体は、分泌のた
めに既知のシグナルリーダーと一緒に調製され得る。シ
グナルリーダーは、酵母のα−因子、α−アミラーゼ、
ペニシリナーゼ、表面膜タンパク質、等を含む。そのプ
ロセシングシグナルを有するシグナルリーダーは、成熟
に基づいてシグナルリーダー及びプロセシングシグナル
を失う、融合前駆体を提供するために、遺伝子の５′末
端で連結され得る。
めに既知のシグナルリーダーと一緒に調製され得る。シ
グナルリーダーは、酵母のα−因子、α−アミラーゼ、
ペニシリナーゼ、表面膜タンパク質、等を含む。そのプ
ロセシングシグナルを有するシグナルリーダーは、成熟
に基づいてシグナルリーダー及びプロセシングシグナル
を失う、融合前駆体を提供するために、遺伝子の５′末
端で連結され得る。
【００５４】一般的に遭遇される移植抗原である場合、
本発明のヒト移植抗原はクラスIIを含む：Figneroa及び
Klein,Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ （１９８
６）７：７８〜８１及びここに引用された文献を参照の
こと；クラスＩに関しては、Klein 及びFigneroa前
記．，（１９８６）７：４１〜４４及びここに引用され
た文献を参照のこと。そのヒトクラスII抗原は、ＤＰ，
ＤＱ及びＤＲに分けられ、ここでマウスＨ−ＬＡ（Ｉ−
Ａ）がＨＬＡ−ＤＱに対応し、そしてマウスＨ−ＬＨ
（Ｉ−Ｅ）がＤＲに対応する。種々の移植抗原が種々の
役割を示すことができる。Hirayamaなど．，前記及びこ
こに引用された文献によって報告されたように、サプレ
ッサーＴ−細胞（ＣＤ８+ ）がＤＱにより制限され、そ
してヘルパーＴ−細胞（ＣＤ４+ ）がＤＲにより制限さ
れることが示唆される。この関係を用いて、ヘルパー細
胞又はサプレッサー細胞のいずれかが、抗原のエピトー
プへの宿主の免疫応答の免疫調節を提供するために刺激
され得る。
本発明のヒト移植抗原はクラスIIを含む：Figneroa及び
Klein,Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ （１９８
６）７：７８〜８１及びここに引用された文献を参照の
こと；クラスＩに関しては、Klein 及びFigneroa前
記．，（１９８６）７：４１〜４４及びここに引用され
た文献を参照のこと。そのヒトクラスII抗原は、ＤＰ，
ＤＱ及びＤＲに分けられ、ここでマウスＨ−ＬＡ（Ｉ−
Ａ）がＨＬＡ−ＤＱに対応し、そしてマウスＨ−ＬＨ
（Ｉ−Ｅ）がＤＲに対応する。種々の移植抗原が種々の
役割を示すことができる。Hirayamaなど．，前記及びこ
こに引用された文献によって報告されたように、サプレ
ッサーＴ−細胞（ＣＤ８+ ）がＤＱにより制限され、そ
してヘルパーＴ−細胞（ＣＤ４+ ）がＤＲにより制限さ
れることが示唆される。この関係を用いて、ヘルパー細
胞又はサプレッサー細胞のいずれかが、抗原のエピトー
プへの宿主の免疫応答の免疫調節を提供するために刺激
され得る。
【００５５】第１エピトープ及び対象の抗体目標配列
は、表面膜タンパク質、エンベロープタンパク質、カプ
シドタンパク質、腫瘍遺伝子、移植抗原、毒素、アレル
ゲン、炭化水素、多糖類、等を含むであろう。ウィルス
関連抗原は、ヘルペス、肝炎、ＨＩＶ、インフルエン
ザ、ＦｅＬＶ、ライノウィルス及び他の病原性ウィルス
のようなウィルスを含むであろう。単細胞病原菌に関連
する抗原は、プラスモジウム（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕ
ｍ）、ヘモフィラス（Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）、Ｅ．コ
リ、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、トリパノゾ
ーム（Ｔｒｉｐａｎｏｓｏｍｅｓ）、プスードモナス
（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎｅｓ）及びトキソプラズマ症及び
他の病原性細菌並びに寄生体のような生物体を含むであ
ろう。腫瘍遺伝子に関連する抗原は、ヒト、ｆａｓ、ｍ
ｙｅ、ａｂｌ、ｒａｓ、等のような腫瘍遺伝子を含むで
あろう。毒素に関連する抗原は、アフラトキシン、ジフ
テリア、ボツリヌス毒素、等のような毒素を含むであろ
う。対象の病原菌のリストは、アメリカ特許第３，９９
６，３４５号に見出すことができる。
は、表面膜タンパク質、エンベロープタンパク質、カプ
シドタンパク質、腫瘍遺伝子、移植抗原、毒素、アレル
ゲン、炭化水素、多糖類、等を含むであろう。ウィルス
関連抗原は、ヘルペス、肝炎、ＨＩＶ、インフルエン
ザ、ＦｅＬＶ、ライノウィルス及び他の病原性ウィルス
のようなウィルスを含むであろう。単細胞病原菌に関連
する抗原は、プラスモジウム（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕ
ｍ）、ヘモフィラス（Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）、Ｅ．コ
リ、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、トリパノゾ
ーム（Ｔｒｉｐａｎｏｓｏｍｅｓ）、プスードモナス
（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎｅｓ）及びトキソプラズマ症及び
他の病原性細菌並びに寄生体のような生物体を含むであ
ろう。腫瘍遺伝子に関連する抗原は、ヒト、ｆａｓ、ｍ
ｙｅ、ａｂｌ、ｒａｓ、等のような腫瘍遺伝子を含むで
あろう。毒素に関連する抗原は、アフラトキシン、ジフ
テリア、ボツリヌス毒素、等のような毒素を含むであろ
う。対象の病原菌のリストは、アメリカ特許第３，９９
６，３４５号に見出すことができる。
【００５６】多数のエピトープが、広範囲の種類の対象
の生物体のために定義されて来た。中和性抗体が向けら
れるエピトープに特別の興味が存在する。そのようなエ
ピトープの開示は、関連文献部分に引用された多くの文
献に存在する。種々のエピトープが、移植抗原の多型性
領域に結合するためにコンセンサス配列を有する配列に
連結され得る。クラスII多型性ドメインβ−２及びβ−
３可変領域に関与する領域が特に興味の対象である。こ
れらのドメインにおいては、アミノ酸２０〜４０、及び
６５〜８５、より特定には２〜３０及び６８〜７８が興
味の対象である。従って、本発明に従って調製される組
成物は、コンセンサス配列によって定義されたようなア
グレトープに関連するアミノ酸を含むことによって移植
抗原のための配列の親和性を増強する、少なくとも１つ
の突然変異を有することによってこれらの領域から異な
るであろう。
の生物体のために定義されて来た。中和性抗体が向けら
れるエピトープに特別の興味が存在する。そのようなエ
ピトープの開示は、関連文献部分に引用された多くの文
献に存在する。種々のエピトープが、移植抗原の多型性
領域に結合するためにコンセンサス配列を有する配列に
連結され得る。クラスII多型性ドメインβ−２及びβ−
３可変領域に関与する領域が特に興味の対象である。こ
れらのドメインにおいては、アミノ酸２０〜４０、及び
６５〜８５、より特定には２〜３０及び６８〜７８が興
味の対象である。従って、本発明に従って調製される組
成物は、コンセンサス配列によって定義されたようなア
グレトープに関連するアミノ酸を含むことによって移植
抗原のための配列の親和性を増強する、少なくとも１つ
の突然変異を有することによってこれらの領域から異な
るであろう。
【００５７】例示のワクチンは、プラスモジウム（Ｐｌ
ａｓｍｏｄｉｕｍ）寄生体、特にファルシパラム（ｆａ
ｌｃｉｐａｒｕｍ）に対する抗体目標配列を含むワクチ
ンである。テトラマー（Ｎ−Ａ−Ｎ−Ｐ）n 〔ここでｎ
は少なくとも３、及び普通１２よりも多くない〕の少な
くとも３個の反復単位を有する抗体目標配列が調製され
る。このオリゴマーは、特に宿主ハプロタイプのために
特異的親和性を有する１又はそれよりも多くのオリゴ−
ａ−ｅに共有結合又は融合され得る〔プラスモジウムの
説明に関しては、Lavale, など．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（１
９８５）２２８：１４３６〜１４４０；Millerなど．，
Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８６）２３４：１３４９〜１３５
６を参照のこと〕。
ａｓｍｏｄｉｕｍ）寄生体、特にファルシパラム（ｆａ
ｌｃｉｐａｒｕｍ）に対する抗体目標配列を含むワクチ
ンである。テトラマー（Ｎ−Ａ−Ｎ−Ｐ）n 〔ここでｎ
は少なくとも３、及び普通１２よりも多くない〕の少な
くとも３個の反復単位を有する抗体目標配列が調製され
る。このオリゴマーは、特に宿主ハプロタイプのために
特異的親和性を有する１又はそれよりも多くのオリゴ−
ａ−ｅに共有結合又は融合され得る〔プラスモジウムの
説明に関しては、Lavale, など．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（１
９８５）２２８：１４３６〜１４４０；Millerなど．，
Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８６）２３４：１３４９〜１３５
６を参照のこと〕。
【００５８】そのオリゴ−ａ−ｅは、それぞれのハプロ
タイプに関して無害の第１エピトープ及び少なくとも３
種、好ましくは少なくとも４種のメンバーのコンセンサ
ス配列を有するように選択され得る。マロビアワクチン
を調製するために使用される同じ方法が他の寄生体及び
病原菌に拡張され得る。配列決定されているクラスＩ及
びクラスII抗原の多型性領域の配列は次のものである。
タイプに関して無害の第１エピトープ及び少なくとも３
種、好ましくは少なくとも４種のメンバーのコンセンサ
ス配列を有するように選択され得る。マロビアワクチン
を調製するために使用される同じ方法が他の寄生体及び
病原菌に拡張され得る。配列決定されているクラスＩ及
びクラスII抗原の多型性領域の配列は次のものである。
【００５９】
【表２】
【００６０】
【表３】
【００６１】
【表４】
【００６２】
【表５】
【００６３】
【表６】
【００６４】
【表７】
【００６５】
【表８】
【００６６】
【表９】
【００６７】
【表１０】
【００６８】
【表１１】
【００６９】
【表１２】
【００７０】
【表１３】
【００７１】
【表１４】
【００７２】特定の対象のドメインは、クラスIIの第３
可変領域、より詳しくはアミノ酸６８〜８０である。こ
の領域においては、多型性アミノ酸は、Ｌ−Ｅ−Ｄ* −
Ａ*−Ｒ−Ａ−Ｓ* −Ｖ−Ｄ−Ｔ−Ｙ* −Ｃ−Ｒ〔ここ
でその多型性部位が＊を有する〕であり、その結果、そ
の部位でのアミノ酸は保存的に又は非保存的に変化する
ことができる。次の例は例示的であって、限定するもの
ではない。まず、観察が行なわれ、続いてその観察を得
るために実験手段が行なわれるであろう。
可変領域、より詳しくはアミノ酸６８〜８０である。こ
の領域においては、多型性アミノ酸は、Ｌ−Ｅ−Ｄ* −
Ａ*−Ｒ−Ａ−Ｓ* −Ｖ−Ｄ−Ｔ−Ｙ* −Ｃ−Ｒ〔ここ
でその多型性部位が＊を有する〕であり、その結果、そ
の部位でのアミノ酸は保存的に又は非保存的に変化する
ことができる。次の例は例示的であって、限定するもの
ではない。まず、観察が行なわれ、続いてその観察を得
るために実験手段が行なわれるであろう。
【００７３】実 験 Ｔ−細胞ハイブリドーマを、Guillet など．，Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ（１９８５）２３５：８６５〜８７０；及びLech
ler など．，Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．（１９８６）１
６３：６７８〜６９６（引用により本明細書に組み入れ
る）に記載されているようにして得た。阻害又は活性化
を決定するための方法は、Guillet など．，前記に記載
されている。
ｎｃｅ（１９８５）２３５：８６５〜８７０；及びLech
ler など．，Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．（１９８６）１
６３：６７８〜６９６（引用により本明細書に組み入れ
る）に記載されているようにして得た。阻害又は活性化
を決定するための方法は、Guillet など．，前記に記載
されている。
【００７４】非刺激性ペプチド相同体による抗原−特異
的Ｔ−細胞活性化の阻害 非刺激性ペプチド相同体による抗原−特異的Ｔ−細胞活
性化の阻害を、Ｔ−細胞ハイブリドーマ７Ｂ７．３及び
Ｔ−細胞ハイブリドーマ８Ｉを用いて調べた。７Ｂ７．
３は、バクテリオファージλリプレッサー、ｃＩに由来
する免疫優性ペプチドにより免疫化されたＢａｌｂ／ｃ
マウスに由来した。それは、Ｉ−Ａdの関係においてペ
プチドＰ１５−２６（ｃＩのアミノ酸残基１５〜２６を
含む）により刺激される。Ｔ−細胞ハイブリドーマ８Ｉ
はＡ／Ｊ株に由来し、そしてＩ−ＥK の関係下で同じペ
プチド（Ｐ１５−２６）を認識する。
的Ｔ−細胞活性化の阻害 非刺激性ペプチド相同体による抗原−特異的Ｔ−細胞活
性化の阻害を、Ｔ−細胞ハイブリドーマ７Ｂ７．３及び
Ｔ−細胞ハイブリドーマ８Ｉを用いて調べた。７Ｂ７．
３は、バクテリオファージλリプレッサー、ｃＩに由来
する免疫優性ペプチドにより免疫化されたＢａｌｂ／ｃ
マウスに由来した。それは、Ｉ−Ａdの関係においてペ
プチドＰ１５−２６（ｃＩのアミノ酸残基１５〜２６を
含む）により刺激される。Ｔ−細胞ハイブリドーマ８Ｉ
はＡ／Ｊ株に由来し、そしてＩ−ＥK の関係下で同じペ
プチド（Ｐ１５−２６）を認識する。
【００７５】７Ｂ７．３も８Ｉも、相同ペプチドＰ１２
−１４（ｃＩの残基１２−２４を含む）によって刺激さ
れ得ない。しかしながら、Ｂａｌｂ／ｃマウスに由来す
る他のＴ−細胞は、Ｉ−Ａd の関係下でＰ１２−２４を
認識することができる。これは、Ｐ１２−２４がＩ−Ａ
d 分子に結合することができるが、しかしそれが特異的
なＴ−細胞相互作用残基（エピトープ）を欠くために、
たぶん７Ｂ７．３を刺激することはできないことを示唆
する。Ｐ１５−２６依存性７Ｂ７．３活性は、ペプチド
Ｐ１２−２４がまた培養中に含まれる場合、阻害される
であろうことが見出された。図２を参照のこと。
−１４（ｃＩの残基１２−２４を含む）によって刺激さ
れ得ない。しかしながら、Ｂａｌｂ／ｃマウスに由来す
る他のＴ−細胞は、Ｉ−Ａd の関係下でＰ１２−２４を
認識することができる。これは、Ｐ１２−２４がＩ−Ａ
d 分子に結合することができるが、しかしそれが特異的
なＴ−細胞相互作用残基（エピトープ）を欠くために、
たぶん７Ｂ７．３を刺激することはできないことを示唆
する。Ｐ１５−２６依存性７Ｂ７．３活性は、ペプチド
Ｐ１２−２４がまた培養中に含まれる場合、阻害される
であろうことが見出された。図２を参照のこと。
【００７６】７Ｂ７．３の場合、Ｐ１２−２４は、投与
量依存性態様においてＰ１５−２６による活性化を阻害
し；その阻害の効力はインヒビターの濃度に依存した。
Ｐ１２−２４は、Ｐ１５−２６のために７Ｂ７．３の明
確な親和性を変えた（例IIを参照のこと）。阻害効果
は、培養中におけるＰ１５−２６の濃度を高めることに
よって逆にされた。対照的に、その同じペプチド（Ｐ１
２−２４）は、ハイブリドーマのＩＬ−２応答により示
されるように、８Ｉ活性化に対して統計学的に有意な効
果を持たなかった。
量依存性態様においてＰ１５−２６による活性化を阻害
し；その阻害の効力はインヒビターの濃度に依存した。
Ｐ１２−２４は、Ｐ１５−２６のために７Ｂ７．３の明
確な親和性を変えた（例IIを参照のこと）。阻害効果
は、培養中におけるＰ１５−２６の濃度を高めることに
よって逆にされた。対照的に、その同じペプチド（Ｐ１
２−２４）は、ハイブリドーマのＩＬ−２応答により示
されるように、８Ｉ活性化に対して統計学的に有意な効
果を持たなかった。
【００７７】他のＩ−Ａd −制限ペプチドによるレプレ
ッサー−特異的Ｔ−細胞活性化の阻害 ７Ｂ７．３のＰ１５−２６依存性活性化を阻害するため
に、他の２種の抗原系に由来するペプチドの競争能力を
決定した。この目的のために、スタフィロコッカスヌク
レアーゼ（Ｎａｓｅ）、すなわち残基６１−８０（Ｐ６
１−８０）及びオボアルブミン（Ｏｖａ）、すなわち残
基３２４−３３６（Ｐ３２４−３３６）に由来するペプ
チドを用いて、７Ｂ７．３のｃＩ Ｐ１５−２６依存性
活性化を阻害した。それぞれは、Ｉ−Ａd −制限され、
そしてそのそれぞれの抗原のために免疫優性である。こ
の研究は例III に詳しく説明されている。結果は、７Ｂ
７．３活性化が、これらのペプチドによって、投与量依
存性態様下で阻害されることを示した。その同じペプチ
ドがＩ−ＥK 制限のＰ１２−２６特異性Ｔ−細胞、８Ｉ
に対して有意な効果を持たないことで特異性が見られ
る。
ッサー−特異的Ｔ−細胞活性化の阻害 ７Ｂ７．３のＰ１５−２６依存性活性化を阻害するため
に、他の２種の抗原系に由来するペプチドの競争能力を
決定した。この目的のために、スタフィロコッカスヌク
レアーゼ（Ｎａｓｅ）、すなわち残基６１−８０（Ｐ６
１−８０）及びオボアルブミン（Ｏｖａ）、すなわち残
基３２４−３３６（Ｐ３２４−３３６）に由来するペプ
チドを用いて、７Ｂ７．３のｃＩ Ｐ１５−２６依存性
活性化を阻害した。それぞれは、Ｉ−Ａd −制限され、
そしてそのそれぞれの抗原のために免疫優性である。こ
の研究は例III に詳しく説明されている。結果は、７Ｂ
７．３活性化が、これらのペプチドによって、投与量依
存性態様下で阻害されることを示した。その同じペプチ
ドがＩ−ＥK 制限のＰ１２−２６特異性Ｔ−細胞、８Ｉ
に対して有意な効果を持たないことで特異性が見られ
る。
【００７８】他のＩ−Ａd −制限ペプチドによるオボア
ルブミン−特異的Ｔ−細胞活性化の阻害 Ｔ−細胞ハイブリドーマＤＯ−１１．１０は、オボアル
ブミン特異性であり、そしてＩ−Ａd 制限される。それ
は、オボアルブミンに由来するペプチドＰ３２３−３３
９に対して応答する。それは、切断された相同体Ｐ３２
４−３３６に対してほとんど応答しない。Ｐ３２４−３
３６ペプチドを刺激体として使用した。λリプレッサー
ｃＩペプチドＰ１２−２６及びインフルエンザ赤血球凝
集素部位２ペプチド（Ｉ−Ａd 制限された）を、可能な
インヒビターとして使用した。これらのいずれも、ＤＯ
−１１．１０を刺激することはできない。
ルブミン−特異的Ｔ−細胞活性化の阻害 Ｔ−細胞ハイブリドーマＤＯ−１１．１０は、オボアル
ブミン特異性であり、そしてＩ−Ａd 制限される。それ
は、オボアルブミンに由来するペプチドＰ３２３−３３
９に対して応答する。それは、切断された相同体Ｐ３２
４−３３６に対してほとんど応答しない。Ｐ３２４−３
３６ペプチドを刺激体として使用した。λリプレッサー
ｃＩペプチドＰ１２−２６及びインフルエンザ赤血球凝
集素部位２ペプチド（Ｉ−Ａd 制限された）を、可能な
インヒビターとして使用した。これらのいずれも、ＤＯ
−１１．１０を刺激することはできない。
【００７９】図４に示されるように、これらの非刺激性
ペプチドは、オボアルブミン−特異的Ｔ−細胞活性化に
対してインヒビターとして作用する。Ｉ−Ｅd により制
限された、インフルエンザ赤血球凝集素由来のペプチド
Ｐ１１１−１２０を、対照として使用し、そしてオボア
ルブミン−特異性Ｔ−細胞活性化に対して効果を持たな
かった。この研究の結果は、同じクラスII分子（Ｉ−Ａ
d ）により制限された非関連性ペプチドによるＴ−細胞
活性化の競争阻害を示した。
ペプチドは、オボアルブミン−特異的Ｔ−細胞活性化に
対してインヒビターとして作用する。Ｉ−Ｅd により制
限された、インフルエンザ赤血球凝集素由来のペプチド
Ｐ１１１−１２０を、対照として使用し、そしてオボア
ルブミン−特異性Ｔ−細胞活性化に対して効果を持たな
かった。この研究の結果は、同じクラスII分子（Ｉ−Ａ
d ）により制限された非関連性ペプチドによるＴ−細胞
活性化の競争阻害を示した。
【００８０】インビトロでのクラスII分子へのリプレッ
サーペプチドＰ１２−２６の結合 λリプレッサー（ｃＩ）Ｐ１２−２６ペプチドを 125Ｉ
によりラベルし、そして種々のクラスII分子に結合する
その能力について試験した。そのペプチドは、第１表
（例Ｖ）に示されるように、ｄ及びｋハプロタイプから
単離されたクラスII分子に結合することができることが
観察された。Ｉ−Ａd 及びＩ−ＥK 分子は、ペプチドの
ための制限成分であり、しかしＩ−ＡK 及びＩ−Ｅd 分
子はそうではない。Ｉ−Ｅd 分子はＢａｌｂ／ｃマウス
に由来するＰ１２−２６特異的Ｔ−細胞のための制限成
分として作用することが決して観察されなかった事実に
もかかわらず、Ｐ１２−２６ペプチドはそのＩ−Ｅd 分
子に最っとも堅く結合する。
サーペプチドＰ１２−２６の結合 λリプレッサー（ｃＩ）Ｐ１２−２６ペプチドを 125Ｉ
によりラベルし、そして種々のクラスII分子に結合する
その能力について試験した。そのペプチドは、第１表
（例Ｖ）に示されるように、ｄ及びｋハプロタイプから
単離されたクラスII分子に結合することができることが
観察された。Ｉ−Ａd 及びＩ−ＥK 分子は、ペプチドの
ための制限成分であり、しかしＩ−ＡK 及びＩ−Ｅd 分
子はそうではない。Ｉ−Ｅd 分子はＢａｌｂ／ｃマウス
に由来するＰ１２−２６特異的Ｔ−細胞のための制限成
分として作用することが決して観察されなかった事実に
もかかわらず、Ｐ１２−２６ペプチドはそのＩ−Ｅd 分
子に最っとも堅く結合する。
【００８１】Ｐ１２−２６の結合がＩ−Ｅd 分子に対し
て特異的であるかを決定するために、Ｉ−Ｅd によって
制限される（そして結合される）ことが知られているミ
オグロビン誘導のペプチドと結合のために競争するその
能力が試験された。その結合は第２表（例Ｖ）に示され
ているように特異的である。Ｐ１２−２６はまた、それ
らのそれぞれのクラスII分子に結合するために他の免疫
優性ペプチドとも競争する。しかしながら、競争は、Ｉ
−ＡK 、すなわちＰ１２−２６によって結合されないク
ラスII分子によって制限されたリゾチーム由来のペプチ
ドに関しては観察されない（例Ｖの第１表を参照のこ
と）。事実、Ｐ１２−２６は、その相対的な結合能力及
びその祖対的な競争能力によって示されるように、Ｉ−
Ｅd 分子に最っとも結合する。
て特異的であるかを決定するために、Ｉ−Ｅd によって
制限される（そして結合される）ことが知られているミ
オグロビン誘導のペプチドと結合のために競争するその
能力が試験された。その結合は第２表（例Ｖ）に示され
ているように特異的である。Ｐ１２−２６はまた、それ
らのそれぞれのクラスII分子に結合するために他の免疫
優性ペプチドとも競争する。しかしながら、競争は、Ｉ
−ＡK 、すなわちＰ１２−２６によって結合されないク
ラスII分子によって制限されたリゾチーム由来のペプチ
ドに関しては観察されない（例Ｖの第１表を参照のこ
と）。事実、Ｐ１２−２６は、その相対的な結合能力及
びその祖対的な競争能力によって示されるように、Ｉ−
Ｅd 分子に最っとも結合する。
【００８２】この予期しない結果を考慮して、ｃＩのＮ
Ｈ2 末端のドメインにより免疫化されたＢａｌｂ／ｃマ
ウス中におけるＩ−Ｅd により制限されたＴ−細胞の存
在が再試験された。Ｉ−Ｅd 分子の関係においてＰ１２
−２６を認識することができるｃＩ免疫マウス中にＴ−
細胞が不在であると思われる。Ｐ１２−２６及びＩ−Ｅ
d 分子に関して明らかにレパートリーにおけるホールが
存在する。
Ｈ2 末端のドメインにより免疫化されたＢａｌｂ／ｃマ
ウス中におけるＩ−Ｅd により制限されたＴ−細胞の存
在が再試験された。Ｉ−Ｅd 分子の関係においてＰ１２
−２６を認識することができるｃＩ免疫マウス中にＴ−
細胞が不在であると思われる。Ｐ１２−２６及びＩ−Ｅ
d 分子に関して明らかにレパートリーにおけるホールが
存在する。
【００８３】Ｉ−ａ分子のレベルでの競争 スタフィロコッカスのヌクレアーゼ及びオボアルブミン
の両者に由来の免疫優性ペプチドは、ｃＩ−特異的Ｔ−
細胞ハイブリドーマのＴ−細胞活性化を阻害することが
できる。観察される阻害の程度は、競争体に対する刺激
体の割合に依存し、そして従って、活性体に対する阻害
は天然で競争すると思われる。同様に、Ｉ−Ａd −制限
のペプチドは、オボアルブミン−特異的Ｔ−細胞ハイブ
リドーマの活性化を阻害することが示される。Ｐ１２−
２６−特異的Ｔ−細胞７Ｂ７．３の阻害を観察するため
には、弱刺激性切断相同体、Ｐ１５−２６を活性体とし
て使用することが必要であった。同様に、オボアルブミ
ン−特異的Ｔ−細胞ＤＯ−１１．１０に関しては、不完
全な刺激性ペプチド相同体が活性体として使用された。
の両者に由来の免疫優性ペプチドは、ｃＩ−特異的Ｔ−
細胞ハイブリドーマのＴ−細胞活性化を阻害することが
できる。観察される阻害の程度は、競争体に対する刺激
体の割合に依存し、そして従って、活性体に対する阻害
は天然で競争すると思われる。同様に、Ｉ−Ａd −制限
のペプチドは、オボアルブミン−特異的Ｔ−細胞ハイブ
リドーマの活性化を阻害することが示される。Ｐ１２−
２６−特異的Ｔ−細胞７Ｂ７．３の阻害を観察するため
には、弱刺激性切断相同体、Ｐ１５−２６を活性体とし
て使用することが必要であった。同様に、オボアルブミ
ン−特異的Ｔ−細胞ＤＯ−１１．１０に関しては、不完
全な刺激性ペプチド相同体が活性体として使用された。
【００８４】自己の相同体としての抗原ペプチド ｃＩペプチドはＩ−Ａd 及びＩ−Ｅd の両者に結合し、
そしてＮａｓｅペプチドは、明らかに両クラスII分子に
よって制限され得、そして多分両者に結合することがで
きる事実の観点から、２種のペプチドのアミノ酸配列
が、Ｉ−Ａd 又はＩ−Ｅd のいづれかによって制限され
た他のペプチドのアミノ酸配列と比較された。図５に示
されるように、マッコウクジラのミオグロビンに由来す
る、Ｉ−Ｅd−制限の免疫優性ペプチドは、残基１，
２，５，６，９及び１３でｃＩペプチド及びＮａｓｅペ
プチドの両者に対して相同関係を有する（第５図を参照
のこと）。
そしてＮａｓｅペプチドは、明らかに両クラスII分子に
よって制限され得、そして多分両者に結合することがで
きる事実の観点から、２種のペプチドのアミノ酸配列
が、Ｉ−Ａd 又はＩ−Ｅd のいづれかによって制限され
た他のペプチドのアミノ酸配列と比較された。図５に示
されるように、マッコウクジラのミオグロビンに由来す
る、Ｉ−Ｅd−制限の免疫優性ペプチドは、残基１，
２，５，６，９及び１３でｃＩペプチド及びＮａｓｅペ
プチドの両者に対して相同関係を有する（第５図を参照
のこと）。
【００８５】ｃＩペプチドが他のＩ−Ｅd 制限のペプチ
ドに相同であるとすれば、Ｉ−Ｅd分子の関連下でそれ
を認識することができるＴ−細胞が明らかに存在しない
ということは不明確であった。これを説明するために、
Ｉ−Ｅd −制限ペプチド及びＩ−Ｅd 分子自体の配列の
比較が行なわれた。ＥB 鎖の第３超可変領域（残基６９
−８１）において、一列に並べられる場合、残基１，
２，５及び１３は、Ｉ−Ｅd 分子によって制限されたペ
プチドに相同である結果が示された（図５を参照のこ
と）。ｃＩペプチドは、残基１，２，３，４，５及び１
１でＩ−ＥB d 分子に等しく、そして１３で相同であ
る。さらに、この領域におけるＩ−ＥB K 分子の配列と
Ｉ−ＥB d 分子の配列との比較は、残基３，４，７及び
１１が単に多型性残基であることを示す。ｃＩペプチド
は、これらの多型性残基の３個でＩ−Ｅ d 分子に一致
し；他のＩ−Ｅd −制限のペプチドはそうではない。こ
の同一性が、推定される。
ドに相同であるとすれば、Ｉ−Ｅd分子の関連下でそれ
を認識することができるＴ−細胞が明らかに存在しない
ということは不明確であった。これを説明するために、
Ｉ−Ｅd −制限ペプチド及びＩ−Ｅd 分子自体の配列の
比較が行なわれた。ＥB 鎖の第３超可変領域（残基６９
−８１）において、一列に並べられる場合、残基１，
２，５及び１３は、Ｉ−Ｅd 分子によって制限されたペ
プチドに相同である結果が示された（図５を参照のこ
と）。ｃＩペプチドは、残基１，２，３，４，５及び１
１でＩ−ＥB d 分子に等しく、そして１３で相同であ
る。さらに、この領域におけるＩ−ＥB K 分子の配列と
Ｉ−ＥB d 分子の配列との比較は、残基３，４，７及び
１１が単に多型性残基であることを示す。ｃＩペプチド
は、これらの多型性残基の３個でＩ−Ｅ d 分子に一致
し；他のＩ−Ｅd −制限のペプチドはそうではない。こ
の同一性が、推定される。
【００８６】“レパートリーにおけるホール”を説明す
ると思われる。図５に示されるように、インフルエンザ
赤血球凝集素に由来する、Ｉ−Ｅd −制限の免疫優性ペ
プチドは、上記の他のペプチドに対してほとんど相同関
係を持たない（残基１及び２でを除く）。しかしなが
ら、このペプチドは、Ｉ−ＥB d分子自体に対して著し
い相同関係を有する。この場合、比較のために使用され
るＩ−ＥB d 分子の残基がＥB 鎖の第２超可変領域から
取られる。Mengle-Gaw, L.及びH. McDevitt, Proceedin
gs of the National Academy of Sciences, USA （１９
８３）８０：７６２１〜７６２５。
ると思われる。図５に示されるように、インフルエンザ
赤血球凝集素に由来する、Ｉ−Ｅd −制限の免疫優性ペ
プチドは、上記の他のペプチドに対してほとんど相同関
係を持たない（残基１及び２でを除く）。しかしなが
ら、このペプチドは、Ｉ−ＥB d分子自体に対して著し
い相同関係を有する。この場合、比較のために使用され
るＩ−ＥB d 分子の残基がＥB 鎖の第２超可変領域から
取られる。Mengle-Gaw, L.及びH. McDevitt, Proceedin
gs of the National Academy of Sciences, USA （１９
８３）８０：７６２１〜７６２５。
【００８７】一列に並べられる場合、残基１，２，３，
４，６及び１０は同一であり、そして残基７及び９は相
同である。インフルエンザペプチドは、残基５でＩ−Ｅ
B d分子に対する挿入を受け、そしてこの残基はＴ−細
胞の認識のためのエピトープであることが示された。Ha
ckett, C. など．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎ
ｏｌｏｇｙ，（１９８５）１３５：１３９１〜１３９
４。
４，６及び１０は同一であり、そして残基７及び９は相
同である。インフルエンザペプチドは、残基５でＩ−Ｅ
B d分子に対する挿入を受け、そしてこの残基はＴ−細
胞の認識のためのエピトープであることが示された。Ha
ckett, C. など．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎ
ｏｌｏｇｙ，（１９８５）１３５：１３９１〜１３９
４。
【００８８】要 約 従って、上記の及び続く例における研究は次のことを示
す。抗原特異的Ｔ−細胞の活性化（すなわち、特定のク
ラスII分子によって結合された特異的ペプチドによる活
性化）は、刺激性ペプチドが与えられるクラスII関連物
と同じものに相同ペプチドが、与えられる場合、その相
同ペプチドによって阻害され得る。これは、その相同ペ
プチドがＴ−細胞を活性化することができない場合でさ
え真実である。しかしながら、その同じ相同ペプチド
は、異なったクラスII分子によって結合される特異的ペ
プチドを認識するＴ−細胞の活性化を阻害しない。
す。抗原特異的Ｔ−細胞の活性化（すなわち、特定のク
ラスII分子によって結合された特異的ペプチドによる活
性化）は、刺激性ペプチドが与えられるクラスII関連物
と同じものに相同ペプチドが、与えられる場合、その相
同ペプチドによって阻害され得る。これは、その相同ペ
プチドがＴ−細胞を活性化することができない場合でさ
え真実である。しかしながら、その同じ相同ペプチド
は、異なったクラスII分子によって結合される特異的ペ
プチドを認識するＴ−細胞の活性化を阻害しない。
【００８９】第１の場合、これは、クラスII抗原への結
合のため競争を支持し、そしてＴ−細胞活性化における
その相同ペプチドによる干渉は、クラスII分子へのその
結合の結果である（従って、特異的ペプチドがそれを行
なうことを妨げる）。第２の場合、それは、第２のクラ
スII分子への結合のために相同ペプチドと特異的ペプチ
ドとの間の競争が存在しないので、その相同ペプチドは
Ｔ−細胞の活性化を干渉しないことを支持する。たった
１つのペプチド結合部位がそれぞれのクラスII分子上に
存在し、そして与えられたクラスII分子によって制限さ
れた無関連のペプチドが、クラスII分子への結合におい
て競争を通して特異的Ｔ−細胞を刺激するために、それ
ぞれ他の能力の競争インヒビターとして作用することも
示された。
合のため競争を支持し、そしてＴ−細胞活性化における
その相同ペプチドによる干渉は、クラスII分子へのその
結合の結果である（従って、特異的ペプチドがそれを行
なうことを妨げる）。第２の場合、それは、第２のクラ
スII分子への結合のために相同ペプチドと特異的ペプチ
ドとの間の競争が存在しないので、その相同ペプチドは
Ｔ−細胞の活性化を干渉しないことを支持する。たった
１つのペプチド結合部位がそれぞれのクラスII分子上に
存在し、そして与えられたクラスII分子によって制限さ
れた無関連のペプチドが、クラスII分子への結合におい
て競争を通して特異的Ｔ−細胞を刺激するために、それ
ぞれ他の能力の競争インヒビターとして作用することも
示された。
【００９０】次のペプチド及びＩ−Ｅd クラスII分子自
体のアミノ酸配列の比較は、Ｔ−細胞の認識のための抗
原内の免疫優性ペプチドの選択が、移植抗原に結合する
ためのその能力に向けられる結論を支持する： １．ｃＩペプチド、すなわちＩ−Ａd 及びＩ−ＤK によ
り制限されるが、しかしＩ−Ｅd 分子に最っとも堅く結
合する、λリプレッサーに由来する免疫優性ペプチド； ２．Ｎａｓｅペプチド、すなわちＩ−Ａd 及びＩ−Ｅd
により制限され、そしてたぶん両者に結合する、スタフ
ィロコッカスのヌクレアーゼに由来する免疫優性ペプチ
ド； ３．Ｉ−Ｅd により制限される、マッコウクジラのミオ
グロビン由来の免疫優性ペプチド；及び ４．Ｉ−Ｅd により制限される、マッコウクジラの赤血
球凝集素に由来する免疫優性ペプチド。
体のアミノ酸配列の比較は、Ｔ−細胞の認識のための抗
原内の免疫優性ペプチドの選択が、移植抗原に結合する
ためのその能力に向けられる結論を支持する： １．ｃＩペプチド、すなわちＩ−Ａd 及びＩ−ＤK によ
り制限されるが、しかしＩ−Ｅd 分子に最っとも堅く結
合する、λリプレッサーに由来する免疫優性ペプチド； ２．Ｎａｓｅペプチド、すなわちＩ−Ａd 及びＩ−Ｅd
により制限され、そしてたぶん両者に結合する、スタフ
ィロコッカスのヌクレアーゼに由来する免疫優性ペプチ
ド； ３．Ｉ−Ｅd により制限される、マッコウクジラのミオ
グロビン由来の免疫優性ペプチド；及び ４．Ｉ−Ｅd により制限される、マッコウクジラの赤血
球凝集素に由来する免疫優性ペプチド。
【００９１】図５の上部に要約されているペプチド１−
３の比較は、１３残基のうち６個で（すなわち、１，
２，５，６，９及び１３で）、３個の間の相同関係を示
した。そのような相同関係は、それらの通常の制限及び
／又は同じクラスII分子（Ｉ−Ｅd ）に結合するための
能力を説明する。これらの３個のＩ−Ｅd −制限のペプ
チドの配列とＩ−Ｅd 分子自体の配列との比較は、ペプ
チド中の及びＩB 鎖の第３超可変領域中の４個の残基の
間に相同関係を示した。
３の比較は、１３残基のうち６個で（すなわち、１，
２，５，６，９及び１３で）、３個の間の相同関係を示
した。そのような相同関係は、それらの通常の制限及び
／又は同じクラスII分子（Ｉ−Ｅd ）に結合するための
能力を説明する。これらの３個のＩ−Ｅd −制限のペプ
チドの配列とＩ−Ｅd 分子自体の配列との比較は、ペプ
チド中の及びＩB 鎖の第３超可変領域中の４個の残基の
間に相同関係を示した。
【００９２】たとえば、マッコウクジラのミオグロビン
ペプチド、ｃＩペプチド及びＥB 鎖において、ロイシン
（非極性アミノ酸）は残基１で存在し、グルタミン酸は
残基２で、アルギニン（塩基性アミノ酸）は残基５で存
在し；Ｎａｓｅにおいては、これらの位置のそれぞれで
の残基は同じか又は相同であり：すなわちバリン（非極
性）は残基１で、グルタミン酸（同じアミノ酸）は残基
２で、そしてリシン（塩基性）は残基５で存在する。す
べての３個の免疫優性ペプチドは、残基１３でリシン
（塩基性アミノ酸）を有し、そしてクラスII分子はその
位置でアルギニン（また塩基性アミノ酸）を有すること
が示された。
ペプチド、ｃＩペプチド及びＥB 鎖において、ロイシン
（非極性アミノ酸）は残基１で存在し、グルタミン酸は
残基２で、アルギニン（塩基性アミノ酸）は残基５で存
在し；Ｎａｓｅにおいては、これらの位置のそれぞれで
の残基は同じか又は相同であり：すなわちバリン（非極
性）は残基１で、グルタミン酸（同じアミノ酸）は残基
２で、そしてリシン（塩基性）は残基５で存在する。す
べての３個の免疫優性ペプチドは、残基１３でリシン
（塩基性アミノ酸）を有し、そしてクラスII分子はその
位置でアルギニン（また塩基性アミノ酸）を有すること
が示された。
【００９３】これらの３個のペプチドのアミノ酸配列と
またＩ−Ｅd −制限されている、インフルエンザのペプ
チドのアミノ酸配列との比較は、ほとんど相同関係を示
さなかった。インフルエンザのペプチド配列とＩ−Ｅd
分子の第２超可変領域の配列との比較は、２個の間で著
しく相同関係を示したが、しかしながら６個の残基は同
一であり、そして２個は相同であった。その結果は、Ｔ
−細胞の認識のための抗原内の免疫優性ペプチドの選択
の基本が移植抗原（たとえばクラスＩ又はクラスII分
子）に結合するためのその能力に向けられ、そしてその
ような結合のための化学的必要条件が移植抗原自体のセ
グメントとの相同関係に向けられている結論を支持す
る。
またＩ−Ｅd −制限されている、インフルエンザのペプ
チドのアミノ酸配列との比較は、ほとんど相同関係を示
さなかった。インフルエンザのペプチド配列とＩ−Ｅd
分子の第２超可変領域の配列との比較は、２個の間で著
しく相同関係を示したが、しかしながら６個の残基は同
一であり、そして２個は相同であった。その結果は、Ｔ
−細胞の認識のための抗原内の免疫優性ペプチドの選択
の基本が移植抗原（たとえばクラスＩ又はクラスII分
子）に結合するためのその能力に向けられ、そしてその
ような結合のための化学的必要条件が移植抗原自体のセ
グメントとの相同関係に向けられている結論を支持す
る。
【００９４】これらの観察は、クラスII分子の特定のド
メイン（それぞれの鎖上で分離されている）に関連する
内部相補体（リガンド−レセプター）の存在を支持し、
そして結合のための内部“リガンド”が多型性領域によ
って一部コードされていることを支持する。同様のこと
が、内部“レセプター”のために真実であると思われる
であろう。次に、免疫優性ペプチドは、内部“リガン
ド”を置換し、そして同等の幾何学を持って、クラスII
分子に結合されるであろう。次に外来性“リガンド”
（免疫優性ペプチド）は、内部の自己“リガンド”の相
同体としてＴ−細胞によって見出されるであろう。
メイン（それぞれの鎖上で分離されている）に関連する
内部相補体（リガンド−レセプター）の存在を支持し、
そして結合のための内部“リガンド”が多型性領域によ
って一部コードされていることを支持する。同様のこと
が、内部“レセプター”のために真実であると思われる
であろう。次に、免疫優性ペプチドは、内部“リガン
ド”を置換し、そして同等の幾何学を持って、クラスII
分子に結合されるであろう。次に外来性“リガンド”
（免疫優性ペプチド）は、内部の自己“リガンド”の相
同体としてＴ−細胞によって見出されるであろう。
【００９５】上記のλリプレッサーペプチド（ｃＩ）の
場合、外来性リガンドは、自己のクラスII分子と見分け
がつかず（多型性部位で）、そして“レパートリーにお
けるホール”が、自己耐性によって引き起こされると思
われる。“レパートリーにおけるホール”であると思わ
れるものをもたらす、自己としての認識の考えは、新規
ではない。Burnet, F. M., Cambridge University Pres
s (1959) ; Herne, N., European Journal of Immunol
ogy ,(1971）１：１〜５。しかしながら、本発明に示さ
れたデータは、その概念が物理的基礎を有することを示
す最初の分子証拠を提供する。
場合、外来性リガンドは、自己のクラスII分子と見分け
がつかず（多型性部位で）、そして“レパートリーにお
けるホール”が、自己耐性によって引き起こされると思
われる。“レパートリーにおけるホール”であると思わ
れるものをもたらす、自己としての認識の考えは、新規
ではない。Burnet, F. M., Cambridge University Pres
s (1959) ; Herne, N., European Journal of Immunol
ogy ,(1971）１：１〜５。しかしながら、本発明に示さ
れたデータは、その概念が物理的基礎を有することを示
す最初の分子証拠を提供する。
【００９６】アロ反応性が外来性のクラスII分子の内部
“リガンド”のＴ−細胞認識の結果であることを予期す
ることは正当である。その内部“リガンド”が多くの多
型性残基から構成され、そしてヒストトピック残基（ク
ラスII分子に結合するＴ−細胞の部位）がそうでない場
合、与えられたＴ−細胞は、自己のクラスII分子に結合
される外来性“リガンド”かそれ自体の内部“リガン
ド”により結合される外来性のクラスII分化かを区別す
ることはできない。２種のリガンドの間に同一性が存在
する場合、アロ反応性が得られるであろう。
“リガンド”のＴ−細胞認識の結果であることを予期す
ることは正当である。その内部“リガンド”が多くの多
型性残基から構成され、そしてヒストトピック残基（ク
ラスII分子に結合するＴ−細胞の部位）がそうでない場
合、与えられたＴ−細胞は、自己のクラスII分子に結合
される外来性“リガンド”かそれ自体の内部“リガン
ド”により結合される外来性のクラスII分化かを区別す
ることはできない。２種のリガンドの間に同一性が存在
する場合、アロ反応性が得られるであろう。
【００９７】上記結果（すなわち、すべての“リガン
ド”の間に相同関係が存在する）を仮定すれば、外来性
内部“リガンド”は、自己の相同として容易に考えら
れ、そして従って自己＋Ｘに対して化学的に等しいであ
ろう。外来性“リガンド”のそれぞれの多型性残基は、
自己の関与において異なった外来性抗原を理論上表わす
ことができるであろう。従って、多くの％のＴ−細胞が
単一のアロクラスII分子に応答することができるであろ
う。Ashwell, J. など．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＩｍｍ
ｕｎｏｌｏｇｙ，（１９８６）１３６：３８９〜３９
５。
ド”の間に相同関係が存在する）を仮定すれば、外来性
内部“リガンド”は、自己の相同として容易に考えら
れ、そして従って自己＋Ｘに対して化学的に等しいであ
ろう。外来性“リガンド”のそれぞれの多型性残基は、
自己の関与において異なった外来性抗原を理論上表わす
ことができるであろう。従って、多くの％のＴ−細胞が
単一のアロクラスII分子に応答することができるであろ
う。Ashwell, J. など．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＩｍｍ
ｕｎｏｌｏｇｙ，（１９８６）１３６：３８９〜３９
５。
【００９８】オボアルブミンのＩ−Ａd −制限の免疫優
性ペプチドのための配列（本明細書に記載されている）
が第６図に示されている。それは、ＡB 鎖の多型性領域
（残基４２〜５５）と共に一列に並べられている。Cho
i, E.など．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，（１９８３）２２１：
２８３。それは、残基１２，１７，１９及び２０で同一
性を有する。この領域において多型性である単一の残基
は残基１２であり、これはＩ−ＡB b 分子（及びオボア
ルブミン）においてヒスチジンであり、そしてＩ−ＡB
d 分子（制限成分）及びＩ−ＡB K 分子においてチロシ
ンである。
性ペプチドのための配列（本明細書に記載されている）
が第６図に示されている。それは、ＡB 鎖の多型性領域
（残基４２〜５５）と共に一列に並べられている。Cho
i, E.など．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，（１９８３）２２１：
２８３。それは、残基１２，１７，１９及び２０で同一
性を有する。この領域において多型性である単一の残基
は残基１２であり、これはＩ−ＡB b 分子（及びオボア
ルブミン）においてヒスチジンであり、そしてＩ−ＡB
d 分子（制限成分）及びＩ−ＡB K 分子においてチロシ
ンである。
【００９９】Ｉ−Ａd の関連下でオボアルブミンを認識
するオボアルブミン特異的Ｔ−細胞ハイブリドーマ、Ｄ
Ｏ−１１．１０は、Ｉ−ＡB b とのアロ反応を示す（但
し、Ｉ−ＡB K とは示さない）。さらに、この領域は、
ＤＯ−１１．１０のアロ反応を調整するものとしてGerm
ain 及び彼の同僚によって示された。このヒスチジン残
基は、もう１つのオボアルブミン特異的Ｔ−細胞の認識
のために不可欠であるものとしてMcConnell 及び彼の同
僚によって示された。Lechler, R. など．，Journal of
Experimental Medicine, （１９８６）１６３：６７８
〜６９６；Watts, T. など．，Proceedings of the Nat
ional Academy of Science, USA,（１９８５）８２：５
４８０。
するオボアルブミン特異的Ｔ−細胞ハイブリドーマ、Ｄ
Ｏ−１１．１０は、Ｉ−ＡB b とのアロ反応を示す（但
し、Ｉ−ＡB K とは示さない）。さらに、この領域は、
ＤＯ−１１．１０のアロ反応を調整するものとしてGerm
ain 及び彼の同僚によって示された。このヒスチジン残
基は、もう１つのオボアルブミン特異的Ｔ−細胞の認識
のために不可欠であるものとしてMcConnell 及び彼の同
僚によって示された。Lechler, R. など．，Journal of
Experimental Medicine, （１９８６）１６３：６７８
〜６９６；Watts, T. など．，Proceedings of the Nat
ional Academy of Science, USA,（１９８５）８２：５
４８０。
【０１００】これは、ＤＯ−１１．１０細胞が自己＋Ｘ
（ここでＸはオボアルブミンペプチドである）及びアロ
（ここでアロはＩ−ＡB d である）を区別することがで
きないことを示唆する。本発明に記載されたオボアルブ
ミンペプチドは、“許容”残基の２つの領域（クラスII
分子へのそれの結合を可能にする）を含むように思われ
る。１つの領域は、位置１７〜２０（Ｔ−細胞様ＤＯ−
１１．１０はこの領域を必要とする）を含む。これらの
残基のために欠失されたペプチドは、それがＴ−細胞様
ＤＯ−５４．８を刺激することができる事実によって示
されるように、Ｉ−Ａに結合する。
（ここでＸはオボアルブミンペプチドである）及びアロ
（ここでアロはＩ−ＡB d である）を区別することがで
きないことを示唆する。本発明に記載されたオボアルブ
ミンペプチドは、“許容”残基の２つの領域（クラスII
分子へのそれの結合を可能にする）を含むように思われ
る。１つの領域は、位置１７〜２０（Ｔ−細胞様ＤＯ−
１１．１０はこの領域を必要とする）を含む。これらの
残基のために欠失されたペプチドは、それがＴ−細胞様
ＤＯ−５４．８を刺激することができる事実によって示
されるように、Ｉ−Ａに結合する。
【０１０１】Shimonkevitz, R.など．，Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（１９８４）１３３：２
１６７；Watts, T.,など．，Proceedings of the Natio
nalAcademy of Sciences, USA, （１９８５）８２：５
４８０。最近の証拠は、位置１２の先の領域における残
基がまた、Ｉ−Ａd 結合のために“許容”フレームワー
クも形成することを指摘する。Cease, K. B.など．，Ｊ
ｏｕｒｎａｌ ｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄ
ｉｃｉｎｅ，（１９８６）１６４：１７７９。Ｉ−Ａd
の関連下でマッコウクジラのミオグロビンに由来するペ
プチドを認識するＴ−細胞はまた、Ｉ−Ａb とのアロ反
応も示す。Berkower, I.など．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，（１９８６）１６４：１７７
９。ミオグロビンは、位置２，５，７，８及び１２でＩ
−Ａb 分子との相同関係を示す（図６）。また、位置１
２でのヒスチジン残基は、自己の関連下でのミオグロビ
ン、Ｉ−Ａd 及びアロ、Ｉ−Ａb の間で類似性を担当す
ると思われる。
ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（１９８４）１３３：２
１６７；Watts, T.,など．，Proceedings of the Natio
nalAcademy of Sciences, USA, （１９８５）８２：５
４８０。最近の証拠は、位置１２の先の領域における残
基がまた、Ｉ−Ａd 結合のために“許容”フレームワー
クも形成することを指摘する。Cease, K. B.など．，Ｊ
ｏｕｒｎａｌ ｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄ
ｉｃｉｎｅ，（１９８６）１６４：１７７９。Ｉ−Ａd
の関連下でマッコウクジラのミオグロビンに由来するペ
プチドを認識するＴ−細胞はまた、Ｉ−Ａb とのアロ反
応も示す。Berkower, I.など．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，（１９８６）１６４：１７７
９。ミオグロビンは、位置２，５，７，８及び１２でＩ
−Ａb 分子との相同関係を示す（図６）。また、位置１
２でのヒスチジン残基は、自己の関連下でのミオグロビ
ン、Ｉ−Ａd 及びアロ、Ｉ−Ａb の間で類似性を担当す
ると思われる。
【０１０２】明らかな相同関係特色は、同じクラスII分
子によって制限されるペプチドの間で必ずしも見出され
ない。それぞれのリガンド様ドメインに関連するモチー
フが見出されるであろう（図５及び図６）。図７は、Ｉ
−Ａd 分子のためのリガンドに関連する３種のモチーフ
が存在することを示すデータの編集を表わす。図８にお
ける配列は、Ｉ−ＥK 分子のために２種のモチーフの可
能性を示す。
子によって制限されるペプチドの間で必ずしも見出され
ない。それぞれのリガンド様ドメインに関連するモチー
フが見出されるであろう（図５及び図６）。図７は、Ｉ
−Ａd 分子のためのリガンドに関連する３種のモチーフ
が存在することを示すデータの編集を表わす。図８にお
ける配列は、Ｉ−ＥK 分子のために２種のモチーフの可
能性を示す。
【０１０３】例Ｉ．Ｔ−細胞ハイブリドーマ及び抗原付
与細胞の調製 ＭＨＣ制限の態様下でＴ−細胞に対する抗原を付与する
Ｉ−Ａd −Ｉ−ＥK 陽性Ａ２０．２ＪＢａｌｂ／ｃＢリ
ンパ腫系は、Dr. J. Kappler及びP. Marrackからの贈与
であった。ＤＯ−１１．１０は、オボアルブミンＩ−Ａ
d 制限のＴ−細胞ハイブリドーマである。Shimonkevit
z, R.など．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌ
ｏｇｙ，（１９８４）１３３：２０６７〜２０７４。Ｔ
Ａ．３は、（Ｂａｌｂ／ｃ×Ａ／Ｊ）Ｆ１供与体からの
リポ多糖刺激のＢ−細胞とＭ１２．４．１．Ｂａｌｂ／
ｃＢリンパ腫細胞系（Dr. L. Glimcher からの贈与物）
との融合により得られた。ＴＡ３Ｂ−細胞−Ｂリンパ腫
ハイブリドーマ、Ｉ−ＡK/d −Ｉ−ＥK/d の表現型は、
この細胞系がＨ２d 又はＨ２K 制限のＴｈ（Ｔ−ヘルパ
−リンパ球）細胞ハイブリドーマのいづれかに対して抗
原を付与することができるようにする。
与細胞の調製 ＭＨＣ制限の態様下でＴ−細胞に対する抗原を付与する
Ｉ−Ａd −Ｉ−ＥK 陽性Ａ２０．２ＪＢａｌｂ／ｃＢリ
ンパ腫系は、Dr. J. Kappler及びP. Marrackからの贈与
であった。ＤＯ−１１．１０は、オボアルブミンＩ−Ａ
d 制限のＴ−細胞ハイブリドーマである。Shimonkevit
z, R.など．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌ
ｏｇｙ，（１９８４）１３３：２０６７〜２０７４。Ｔ
Ａ．３は、（Ｂａｌｂ／ｃ×Ａ／Ｊ）Ｆ１供与体からの
リポ多糖刺激のＢ−細胞とＭ１２．４．１．Ｂａｌｂ／
ｃＢリンパ腫細胞系（Dr. L. Glimcher からの贈与物）
との融合により得られた。ＴＡ３Ｂ−細胞−Ｂリンパ腫
ハイブリドーマ、Ｉ−ＡK/d −Ｉ−ＥK/d の表現型は、
この細胞系がＨ２d 又はＨ２K 制限のＴｈ（Ｔ−ヘルパ
−リンパ球）細胞ハイブリドーマのいづれかに対して抗
原を付与することができるようにする。
【０１０４】培養条件。Ｔ−細胞ハイブリドーマ及び抗
原付与細胞は、２×１０-3Ｍのグルタミン、５×１０-5
Ｍの２−メルカプトエタノール、１００μ／mlのペニシ
リン、１００μｇ／mlのストレプトマイシン及び１０％
のウシ胎児血清により補充されたＲＰＭＩ １６４０
（Grand Island Biological Campany, ＃２００．６１
４０）を含む大きなウェル（２４ウェルプレート、Ｃｏ
ｓｔａｒ ＃３４２４）中で維持された。それらの細胞
系は、連続的な希釈によって２日ごとに倍増され、そし
てそれらが下記の研究に使用する前、それぞれ５ml及び
５０mlの培地を含むＴ２５及びＴ７５フラスコ（Ｆａｌ
ｃｏｎ）中で拡張された。 ペプチド。すべてのペプチドは、前に記載されたような
Mernifieldの固相法によって合成された。Mernifield,
R., Journal of the American Chemical Society,（１
９６３）８５：２１４９〜２１５４。合成されたペプチ
ドのアミノ酸組成及び配列分析は、予測した組成に対応
する。配列決定及び／又はＨＰＬＣによって決定される
場合、そのペプチドの純度は９３〜９４％である。
原付与細胞は、２×１０-3Ｍのグルタミン、５×１０-5
Ｍの２−メルカプトエタノール、１００μ／mlのペニシ
リン、１００μｇ／mlのストレプトマイシン及び１０％
のウシ胎児血清により補充されたＲＰＭＩ １６４０
（Grand Island Biological Campany, ＃２００．６１
４０）を含む大きなウェル（２４ウェルプレート、Ｃｏ
ｓｔａｒ ＃３４２４）中で維持された。それらの細胞
系は、連続的な希釈によって２日ごとに倍増され、そし
てそれらが下記の研究に使用する前、それぞれ５ml及び
５０mlの培地を含むＴ２５及びＴ７５フラスコ（Ｆａｌ
ｃｏｎ）中で拡張された。 ペプチド。すべてのペプチドは、前に記載されたような
Mernifieldの固相法によって合成された。Mernifield,
R., Journal of the American Chemical Society,（１
９６３）８５：２１４９〜２１５４。合成されたペプチ
ドのアミノ酸組成及び配列分析は、予測した組成に対応
する。配列決定及び／又はＨＰＬＣによって決定される
場合、そのペプチドの純度は９３〜９４％である。
【０１０５】例II．非刺激性ペプチド相同体による 抗原特異性Ｔ−細胞の活性化の阻害 Ｔ−細胞ハイブリドーマ７Ｂ７．３は、λリプレッサー
により免疫化されたＢａｌｂ／ｃマウスに由来した。そ
れは、Ｉ−Ａd の関連下でペプチドＰ１５−２６（免疫
原の残基１５−２６）により刺激され得る。Ａ／Ｊ株に
由来するＴ−細胞ハイブリドーマ８Ｉは、その同じペプ
チドを認識するが、しかしＩ−ＥK の関連を伴わない。
また、Ｔ−細胞は、相同のペプチド相同体Ｐ１２−２４
（免疫原の残基１２−２４）により刺激され得ない。し
かしながら、Ｂａｌｂ／ｃに由来する他のＴ−細胞は、
Ｉ−Ａd の関連下でＰ１２−２４を認識することができ
る。
により免疫化されたＢａｌｂ／ｃマウスに由来した。そ
れは、Ｉ−Ａd の関連下でペプチドＰ１５−２６（免疫
原の残基１５−２６）により刺激され得る。Ａ／Ｊ株に
由来するＴ−細胞ハイブリドーマ８Ｉは、その同じペプ
チドを認識するが、しかしＩ−ＥK の関連を伴わない。
また、Ｔ−細胞は、相同のペプチド相同体Ｐ１２−２４
（免疫原の残基１２−２４）により刺激され得ない。し
かしながら、Ｂａｌｂ／ｃに由来する他のＴ−細胞は、
Ｉ−Ａd の関連下でＰ１２−２４を認識することができ
る。
【０１０６】これは、Ｐ１２−２４がＩ−Ａd 分子に結
合することができるが、しかしたぶん７Ｂ７．３を刺激
することはできないことを示唆する。なぜならば、それ
は特異的なＴ−細胞の相互反応残基（エピトープ）を欠
失するからである。Ｔ−細胞ハイブリドーマ〔適切な抗
原濃度を含むＲＰＭＩ完全培地２００μｌを含む９６−
ウェルの組織Ｃｏｓｔａｒプレート（＃３５９６）のウ
ェル中に５×１０4 個の抗原付与細胞と共にインキュベ
ートされたＴ−細胞ハイブリドーマ（５×１０ 4 ）〕の
活性化はＩＬ−２を分泌するそれらの能力によって測定
された。２４時間の培養の後、上清液（５０μｌ）を取
り、そして次に、ＩＬ−２依存性ＣＴＬ−Ｌ細胞の増殖
を維持するその能力によってＩＬ−２含有量についてア
ッセイする。１μＣｉの 3Ｈ−チミジンをウェル当りに
添加した。６時間後、細胞を、自動細胞収穫機（Skartr
on Inc., Ｓｔｅｒｌｉｎｇ，ＶＡ）によって収穫し、
そしてチミジン導入をシンチレーション計数管によって
測定した。
合することができるが、しかしたぶん７Ｂ７．３を刺激
することはできないことを示唆する。なぜならば、それ
は特異的なＴ−細胞の相互反応残基（エピトープ）を欠
失するからである。Ｔ−細胞ハイブリドーマ〔適切な抗
原濃度を含むＲＰＭＩ完全培地２００μｌを含む９６−
ウェルの組織Ｃｏｓｔａｒプレート（＃３５９６）のウ
ェル中に５×１０4 個の抗原付与細胞と共にインキュベ
ートされたＴ−細胞ハイブリドーマ（５×１０ 4 ）〕の
活性化はＩＬ−２を分泌するそれらの能力によって測定
された。２４時間の培養の後、上清液（５０μｌ）を取
り、そして次に、ＩＬ−２依存性ＣＴＬ−Ｌ細胞の増殖
を維持するその能力によってＩＬ−２含有量についてア
ッセイする。１μＣｉの 3Ｈ−チミジンをウェル当りに
添加した。６時間後、細胞を、自動細胞収穫機（Skartr
on Inc., Ｓｔｅｒｌｉｎｇ，ＶＡ）によって収穫し、
そしてチミジン導入をシンチレーション計数管によって
測定した。
【０１０７】両ペプチドは１３個の残基のうち１１個を
共有するので、Ｐ１５−２６−依存性７Ｂ７．３活性化
の阻害は、そのペプチドＰ１２−２４がまた、培養中に
含まれる場合に観察された。図２を参照のこと。Ｔ−細
胞ハイブリドーマ７Ｂ７．３の活性は、１０％ウシ胎児
血清のみを有するＲＰＭＩ １６４０又は２０μＭのＰ
１２−２４もしくは６０μＭのＰ１２−２４の存在下に
おいて、種々の濃度のＰ１５−２６の存在下で測定され
た。Ａ２０ Ｂ−細胞リンパ腫（５×１０4 個の細胞／
ウェル）を、抗原付与性細胞として使用した。２４時間
の培養の後、上清液（５０μｌ）を収穫し、そして次
に、ＩＬ−２依存性ＣＴＬ−Ｌ細胞系（１０4 個の細胞
／ウェル）中への 3Ｈチミジンの導入の後、ＩＬ−２濃
度についてアッセイした。図２における値は、３種のサ
ンプルの相加平均を表わす。
共有するので、Ｐ１５−２６−依存性７Ｂ７．３活性化
の阻害は、そのペプチドＰ１２−２４がまた、培養中に
含まれる場合に観察された。図２を参照のこと。Ｔ−細
胞ハイブリドーマ７Ｂ７．３の活性は、１０％ウシ胎児
血清のみを有するＲＰＭＩ １６４０又は２０μＭのＰ
１２−２４もしくは６０μＭのＰ１２−２４の存在下に
おいて、種々の濃度のＰ１５−２６の存在下で測定され
た。Ａ２０ Ｂ−細胞リンパ腫（５×１０4 個の細胞／
ウェル）を、抗原付与性細胞として使用した。２４時間
の培養の後、上清液（５０μｌ）を収穫し、そして次
に、ＩＬ−２依存性ＣＴＬ−Ｌ細胞系（１０4 個の細胞
／ウェル）中への 3Ｈチミジンの導入の後、ＩＬ−２濃
度についてアッセイした。図２における値は、３種のサ
ンプルの相加平均を表わす。
【０１０８】７Ｂ７．３の場合、Ｐ１２−２４は、投与
量依存性態様でＰ１５−２６による活性化を阻害するこ
とが見出された。その阻害の有効性はそのインヒビター
濃度に依存する。図３に示されるように、Ｐ１２−２４
は７Ｂ７．３へのＰ１５−２６の見掛の親和性を変え：
Ｐ１５−２６抗原投与量応答曲線の５０％刺激点は、Ｐ
１５−２６が７Ｂ７．３のみと共に培養される場合、２
０．７±１．２μＭの濃度である。７Ｂ７．３がＰ１５
−２６及びＰ１２−２４と共に同時培養される場合、５
％刺激点は２９．８±２．８μＭであり、そしてＰ１２
−２４がそれぞれ２０μＭ及び６０μＭで存在する場
合、７０．３μＭである。その阻害効果は、培養中にお
けるＰ１５−２６の濃度を高めることによって、逆にさ
れ得る。サンプルペプチド、Ｐ１２−２４は、ハイブリ
ドーマ８Ｉ、すなわちＰ１２−２６感受性、Ｉ−ＥK −
制限のＴ−細胞ハイブリドーマのＩＬ−２応答に対して
効果を持たなかった。Ｉ−Ａd 及びＩ−ＥK との相互反
応を必要とされるＰ１２−２６の残基は異なっているこ
とがまた、示された。従って、Ｉ−ＥK 制限のＴ−細胞
のＰ１２−２４による阻害の不在は、Ｉ−ＥK 分子に結
合するそのペプチドの無能性によるものである。
量依存性態様でＰ１５−２６による活性化を阻害するこ
とが見出された。その阻害の有効性はそのインヒビター
濃度に依存する。図３に示されるように、Ｐ１２−２４
は７Ｂ７．３へのＰ１５−２６の見掛の親和性を変え：
Ｐ１５−２６抗原投与量応答曲線の５０％刺激点は、Ｐ
１５−２６が７Ｂ７．３のみと共に培養される場合、２
０．７±１．２μＭの濃度である。７Ｂ７．３がＰ１５
−２６及びＰ１２−２４と共に同時培養される場合、５
％刺激点は２９．８±２．８μＭであり、そしてＰ１２
−２４がそれぞれ２０μＭ及び６０μＭで存在する場
合、７０．３μＭである。その阻害効果は、培養中にお
けるＰ１５−２６の濃度を高めることによって、逆にさ
れ得る。サンプルペプチド、Ｐ１２−２４は、ハイブリ
ドーマ８Ｉ、すなわちＰ１２−２６感受性、Ｉ−ＥK −
制限のＴ−細胞ハイブリドーマのＩＬ−２応答に対して
効果を持たなかった。Ｉ−Ａd 及びＩ−ＥK との相互反
応を必要とされるＰ１２−２６の残基は異なっているこ
とがまた、示された。従って、Ｉ−ＥK 制限のＴ−細胞
のＰ１２−２４による阻害の不在は、Ｉ−ＥK 分子に結
合するそのペプチドの無能性によるものである。
【０１０９】例III.他のＩ−Ａd −制限のペプチドによ
るリプレッサー特異的Ｔ−細胞活性化の阻害 次の研究が、ハイブリドーマ７Ｂ７．３のＰ１５−２６
−依存性活性化を阻害する、スタフィロコッカスのヌク
レアーゼ（Ｎａｓｅ）、残基６１−８０（Ｐ６１−８
０）及びオボアルブミン（Ｏｖａ）、残基３２４−３３
６（Ｐ３２４−３３６）に由来するペプチドの競争能力
を試験するために行なわれた。これらのペプチドのそれ
ぞれは、それぞれの場合において、Ｉ−Ａd −制限さ
れ、そしてそれらのそれぞれの抗原に対して免疫優性で
あるべきであることが示された。
るリプレッサー特異的Ｔ−細胞活性化の阻害 次の研究が、ハイブリドーマ７Ｂ７．３のＰ１５−２６
−依存性活性化を阻害する、スタフィロコッカスのヌク
レアーゼ（Ｎａｓｅ）、残基６１−８０（Ｐ６１−８
０）及びオボアルブミン（Ｏｖａ）、残基３２４−３３
６（Ｐ３２４−３３６）に由来するペプチドの競争能力
を試験するために行なわれた。これらのペプチドのそれ
ぞれは、それぞれの場合において、Ｉ−Ａd −制限さ
れ、そしてそれらのそれぞれの抗原に対して免疫優性で
あるべきであることが示された。
【０１１０】Finnegan, A.など．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏ
ｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（１
９８６）１６４：８９７〜９１０；Shimonkevitz, R.な
ど．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ
（１９８４）。５×１０4 個のＴＡ３細胞がそれぞれの
ウェルに添加された。種々の濃度のＰ１５−２６が、培
地（１０％ウシ胎児血清を有するＲＰＭＩ １６４０）
のみ又は３０μＭのＯｖａ（Ｐ３２４−３３６）もしく
は６０μＭのＮａｓｅ（Ｐ６２−８０）のいづれかと共
に添加された。
ｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（１
９８６）１６４：８９７〜９１０；Shimonkevitz, R.な
ど．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ
（１９８４）。５×１０4 個のＴＡ３細胞がそれぞれの
ウェルに添加された。種々の濃度のＰ１５−２６が、培
地（１０％ウシ胎児血清を有するＲＰＭＩ １６４０）
のみ又は３０μＭのＯｖａ（Ｐ３２４−３３６）もしく
は６０μＭのＮａｓｅ（Ｐ６２−８０）のいづれかと共
に添加された。
【０１１１】Ａ２０ Ｂ−細胞リンパ腫（５×１０4 個
の細胞／ウェル）を、抗原付与細胞として使用した。次
に、７Ｂ７．３Ｔ−細胞ハイブリドーマ（５×１０
4 個）を添加し、そして２４時間培養した。Ｔ−細胞刺
激のレベルを、例IIに示したようにしてＩＬ−２濃度に
決定することによってアッセイした。第３図に示される
ように、これらのペプチドは、投与量依存性態様で７Ｂ
７．３の活性化を阻害した。その阻害の程度は、それぞ
れの場合においてインヒビターに対する活性化体の割合
に依存しない。
の細胞／ウェル）を、抗原付与細胞として使用した。次
に、７Ｂ７．３Ｔ−細胞ハイブリドーマ（５×１０
4 個）を添加し、そして２４時間培養した。Ｔ−細胞刺
激のレベルを、例IIに示したようにしてＩＬ−２濃度に
決定することによってアッセイした。第３図に示される
ように、これらのペプチドは、投与量依存性態様で７Ｂ
７．３の活性化を阻害した。その阻害の程度は、それぞ
れの場合においてインヒビターに対する活性化体の割合
に依存しない。
【０１１２】８Ｉ（Ｉ−ＥK −制限の）Ｔ−細胞ハイブ
リドーマ及びＴＡ３Ｂ付与性細胞（５×１０4 個）を、
上記のようにして種々の濃度のＰ１５−２６及び培地の
み又は６０μＭのＯｖａ（Ｐ３２４−３３６）もしくは
６０μＭのＮａｓｅ（Ｐ６１−８０）のいづれかと共に
培養した。特異性は、このペプチドがＩ−ＥK −制限の
Ｐ１５−２６−特異性Ｔ−細胞、８Ｉに対して効果を付
与しないことで見られる。さらに、Ｎａｓｅ配列の残り
の代表的な他のペプチドは、７Ｂ７．３の活性化を阻害
することができなかった。
リドーマ及びＴＡ３Ｂ付与性細胞（５×１０4 個）を、
上記のようにして種々の濃度のＰ１５−２６及び培地の
み又は６０μＭのＯｖａ（Ｐ３２４−３３６）もしくは
６０μＭのＮａｓｅ（Ｐ６１−８０）のいづれかと共に
培養した。特異性は、このペプチドがＩ−ＥK −制限の
Ｐ１５−２６−特異性Ｔ−細胞、８Ｉに対して効果を付
与しないことで見られる。さらに、Ｎａｓｅ配列の残り
の代表的な他のペプチドは、７Ｂ７．３の活性化を阻害
することができなかった。
【０１１３】例IV．他のＴ−Ａd 制限のペプチドによる
オボアルブミン特異的Ｔ−細胞の活性化の阻害 Ｔ−細胞ハイブリドーマＤＯ−１１．１０は、オボアル
ブミン特異性であり、そしてＩ−Ａd により制限され
る。それは、オボアルブミンに由来するペプチドＰ３２
３−３３９に応答する。それは、刺激体として使用され
る、切断された相同体Ｐ３２４−３３６にほとんど応答
しない。インヒビターとして、λリプレッサーペプチド
Ｐ１２−２６及びインフルエンザ赤血球凝集素（Ｉ−Ａ
d 制限の）に由来するペプチドインフルエンザ赤血球凝
集素部位２（Ｐ１２６−１３８）を使用した。
オボアルブミン特異的Ｔ−細胞の活性化の阻害 Ｔ−細胞ハイブリドーマＤＯ−１１．１０は、オボアル
ブミン特異性であり、そしてＩ−Ａd により制限され
る。それは、オボアルブミンに由来するペプチドＰ３２
３−３３９に応答する。それは、刺激体として使用され
る、切断された相同体Ｐ３２４−３３６にほとんど応答
しない。インヒビターとして、λリプレッサーペプチド
Ｐ１２−２６及びインフルエンザ赤血球凝集素（Ｉ−Ａ
d 制限の）に由来するペプチドインフルエンザ赤血球凝
集素部位２（Ｐ１２６−１３８）を使用した。
【０１１４】これらのペプチドのいずれも、独力でＤＯ
−１１．１０を刺激することはできない。培地のみ又は
インフルエンザ赤血球凝集素Ｐ１１１−１２０もしくは
Ｐ１２−２６又はインフルエンザ赤血球凝集素部位２
（Ｐ１２６−１３８）（それぞれ５０μＭで）の存在下
で、ＤＯ−１１．１０を、種々の濃度のＯｖａ（Ｐ３２
４−３３６）及びＡ２０付与性細胞と共に培養した。２
４時間の培養の後、解放されたＩＬ−２の量を定量化す
ることによって、刺激を決定した。図４において、それ
らの値は、３種のサンプルの相加平均を表わす。条件
は、例III に記載された。図４に示されるように、これ
らの非刺激性ペプチドは、オボアルブミン特異的Ｔ−細
胞活性に対してインヒビターとして作用する。Ｉ−Ｅd
制限の、インフルエンザ赤血球凝集素由来のペプチドＰ
１１１−１２０は、対照として作用し；それは、オボア
ルブミン−特異的Ｔ−細胞の活性化に対して効力を持た
なかった。
−１１．１０を刺激することはできない。培地のみ又は
インフルエンザ赤血球凝集素Ｐ１１１−１２０もしくは
Ｐ１２−２６又はインフルエンザ赤血球凝集素部位２
（Ｐ１２６−１３８）（それぞれ５０μＭで）の存在下
で、ＤＯ−１１．１０を、種々の濃度のＯｖａ（Ｐ３２
４−３３６）及びＡ２０付与性細胞と共に培養した。２
４時間の培養の後、解放されたＩＬ−２の量を定量化す
ることによって、刺激を決定した。図４において、それ
らの値は、３種のサンプルの相加平均を表わす。条件
は、例III に記載された。図４に示されるように、これ
らの非刺激性ペプチドは、オボアルブミン特異的Ｔ−細
胞活性に対してインヒビターとして作用する。Ｉ−Ｅd
制限の、インフルエンザ赤血球凝集素由来のペプチドＰ
１１１−１２０は、対照として作用し；それは、オボア
ルブミン−特異的Ｔ−細胞の活性化に対して効力を持た
なかった。
【０１１５】例Ｖ．インビトロにおけるクラスII分子へ
のリプレッサーペプチドＰ１２−２６の結合 クラスII分子によって制限されたペプチドの間に観察さ
れる競争阻害の機構をさらに研究するために、イン・ビ
トロにおけるクラスII分子へのペプチド結合の研究を行
なった。結果は第１表に示される。ペプチドＰ１２−２
６を、 125Ｉのための受容体として作用するために、Ｎ
−末端へのチロシン残基の添加により変性した。
のリプレッサーペプチドＰ１２−２６の結合 クラスII分子によって制限されたペプチドの間に観察さ
れる競争阻害の機構をさらに研究するために、イン・ビ
トロにおけるクラスII分子へのペプチド結合の研究を行
なった。結果は第１表に示される。ペプチドＰ１２−２
６を、 125Ｉのための受容体として作用するために、Ｎ
−末端へのチロシン残基の添加により変性した。
【０１１６】セファロース４Ｂビーズ（Pharmacia Fine
Chemicals, Ｓｗｅｄｅｎ）に結合された次のモノクロ
ーナル抗体：ＭＫ−Ｄ６（Ｉ−Ａd −特異性）、１０−
３−６（Ｉ−ＡK −特異性）又は１４−４−４（Ｉ−Ｅ
d/K −特異性）を用いて、アフィニティークロマトグラ
フィーによって、Ｉａ−分子を、Ａ２０（Ｈ２d ）のＮ
ｏｎｉｄｅｔ Ｐ−４０（ＮＰ−４０）破壊物又はＡＫ
ＴＢ−１ｂ（Ｈ２K ）細胞から精製した。
Chemicals, Ｓｗｅｄｅｎ）に結合された次のモノクロ
ーナル抗体：ＭＫ−Ｄ６（Ｉ−Ａd −特異性）、１０−
３−６（Ｉ−ＡK −特異性）又は１４−４−４（Ｉ−Ｅ
d/K −特異性）を用いて、アフィニティークロマトグラ
フィーによって、Ｉａ−分子を、Ａ２０（Ｈ２d ）のＮ
ｏｎｉｄｅｔ Ｐ−４０（ＮＰ−４０）破壊物又はＡＫ
ＴＢ−１ｂ（Ｈ２K ）細胞から精製した。
【０１１７】免疫原性ペプチドとＩａとの間の関係の程
度を決定するために、ゲル濾過アッセイを使用した。こ
のアッセイは、Buns, S.など．，Proceeding of the Na
tional Academy of Sciences, USA （１９８６）８３：
３９６８に記載され、そしてこれを引用によって本明細
書に組み込む。手短に言えば、１％ＮＰ−４０／ＰＳＢ
中、精製されたＩａ ４０μモルを、 125Ｉによりラベ
ルされたペプチド（それぞれの実験のために約２００，
０００cpm ）０．２μモルと共に混合し、そして室温で
４８時間インキュベートし、Ｉａ−ペプチド複合体の形
成を可能にした。Ｉａ−ペプチド複合体を、ゲル濾過に
より遊離ペプチドから分離し、そしてＩａに結合された
ペプチドの％を、回収された合計の 125Ｉ−ラベルされ
たペプチドに対する空隙率での 125Ｉ−ラベルされたペ
プチドの割合として計算した。
度を決定するために、ゲル濾過アッセイを使用した。こ
のアッセイは、Buns, S.など．，Proceeding of the Na
tional Academy of Sciences, USA （１９８６）８３：
３９６８に記載され、そしてこれを引用によって本明細
書に組み込む。手短に言えば、１％ＮＰ−４０／ＰＳＢ
中、精製されたＩａ ４０μモルを、 125Ｉによりラベ
ルされたペプチド（それぞれの実験のために約２００，
０００cpm ）０．２μモルと共に混合し、そして室温で
４８時間インキュベートし、Ｉａ−ペプチド複合体の形
成を可能にした。Ｉａ−ペプチド複合体を、ゲル濾過に
より遊離ペプチドから分離し、そしてＩａに結合された
ペプチドの％を、回収された合計の 125Ｉ−ラベルされ
たペプチドに対する空隙率での 125Ｉ−ラベルされたペ
プチドの割合として計算した。
【０１１８】
【表１５】
【０１１９】第１表に示されるように、ペプチドＰ１２
−２６は、予想どおりに両分子に結合することができ
る。（結合のために使用される変性された形のＰ１２−
２６は、Ｔ−細胞の活性化に関して、Ｐ１２−２６と同
じように活性的である。）特異性は、Ｉ−ＡK 分子に結
合するためのＰ１２−２６の無能性によって明白に示さ
れ：後者は、このペプチドの制限のためにイン・ビボで
活性を示さない。しかしなから、ペプチドＰ１２−２６
は、Ｉ−Ｅd 分子にひじょうに良く結合する。Ｂａｌｂ
／ｃ免疫マウスからのＴ−細胞は、この分子によって制
限されないことが見出された。Ｐ１２−２６の結合がＩ
−Ｅd 分子に対して特異的であるかどうかを決定するた
めに、Ｉ−Ｅd によって制限されることが示された（そ
して結合することが）、ミオグロビン由来のペプチドと
の結合のために競争するその能力の試験が行なわれた。
結果は第２表に示される。
−２６は、予想どおりに両分子に結合することができ
る。（結合のために使用される変性された形のＰ１２−
２６は、Ｔ−細胞の活性化に関して、Ｐ１２−２６と同
じように活性的である。）特異性は、Ｉ−ＡK 分子に結
合するためのＰ１２−２６の無能性によって明白に示さ
れ：後者は、このペプチドの制限のためにイン・ビボで
活性を示さない。しかしなから、ペプチドＰ１２−２６
は、Ｉ−Ｅd 分子にひじょうに良く結合する。Ｂａｌｂ
／ｃ免疫マウスからのＴ−細胞は、この分子によって制
限されないことが見出された。Ｐ１２−２６の結合がＩ
−Ｅd 分子に対して特異的であるかどうかを決定するた
めに、Ｉ−Ｅd によって制限されることが示された（そ
して結合することが）、ミオグロビン由来のペプチドと
の結合のために競争するその能力の試験が行なわれた。
結果は第２表に示される。
【０１２０】阻害アッセイのために、ラベルされていな
い投与量範囲のｃＩ Ｐ１２−２６ペプチドが、Ｉａ及
び 125Ｉによりラベルされたペプチドのインキュベーシ
ョン混合物（６００，１２０，２４，約４８μＭ）に添
加された。Ｉａとラベルされたペプチドとの間の関連の
程度を、第１表に記載されたようにゲル濾過により決定
した。インヒビターの不在下で結合されたペプチドの百
分率は、オボアルブミン（３２３〜３３２９）／Ｉ−Ａ
d のためには１０．６％；ミオグロビン（１３２〜１５
３）／Ｉ−Ｅd のためには６．５％；リゾチーム（４６
〜６１）／Ｉ−ＡK のために２１．５％；シトクローム
ｃ（８８〜１０４）／Ｉ−ＥK のためには２．５％であ
った。結合の５０％阻害を得るために必要とされる阻害
性ペプチドの濃度を計算した。それぞれの実験は３度く
り返えされた。
い投与量範囲のｃＩ Ｐ１２−２６ペプチドが、Ｉａ及
び 125Ｉによりラベルされたペプチドのインキュベーシ
ョン混合物（６００，１２０，２４，約４８μＭ）に添
加された。Ｉａとラベルされたペプチドとの間の関連の
程度を、第１表に記載されたようにゲル濾過により決定
した。インヒビターの不在下で結合されたペプチドの百
分率は、オボアルブミン（３２３〜３３２９）／Ｉ−Ａ
d のためには１０．６％；ミオグロビン（１３２〜１５
３）／Ｉ−Ｅd のためには６．５％；リゾチーム（４６
〜６１）／Ｉ−ＡK のために２１．５％；シトクローム
ｃ（８８〜１０４）／Ｉ−ＥK のためには２．５％であ
った。結合の５０％阻害を得るために必要とされる阻害
性ペプチドの濃度を計算した。それぞれの実験は３度く
り返えされた。
【０１２１】
【表１６】
【０１２２】Ｐ１２−２６はまた、それらのそれぞれの
クラスII分子に結合するために他の免疫優勢ペプチドと
も競争する。しかしながら、競争は、Ｉ−ＡK によって
制限されたリゾチーム由来のペプチド、すなわちＰ１２
−２６によって結合されなかったクラスII分子のために
は、観察されない（第１表を参照のこと）。事実、Ｐ１
２−２６は、その相対的な結合能力及びその相対的な競
争能力によって示されるように、Ｉ−Ｅd 分子に最っと
も結合することは、注目すべきである。
クラスII分子に結合するために他の免疫優勢ペプチドと
も競争する。しかしながら、競争は、Ｉ−ＡK によって
制限されたリゾチーム由来のペプチド、すなわちＰ１２
−２６によって結合されなかったクラスII分子のために
は、観察されない（第１表を参照のこと）。事実、Ｐ１
２−２６は、その相対的な結合能力及びその相対的な競
争能力によって示されるように、Ｉ−Ｅd 分子に最っと
も結合することは、注目すべきである。
【０１２３】Ｐ１２−２６がＩ−Ｅd 分子に特異的に結
合することを示す結果の点から、ｃＩのＮＨ2 末端のド
メインにより免疫化されたＢａｌｂ／ｃマウス中にＩ−
Ｅdにより制限されたＴ−細胞が存在するか否かの問題
が再試験された。１５匹のｃＩ免疫化マウスから回収さ
れたＰ１２−２６に対して特異的な３００個以上のハイ
ブリッドのうち、Ｉ−Ｅd 分子によって制限されたもの
は示されなかった。すなわち、それらはＩ−Ａd を発現
するＬ細胞の存在下で抗原によって刺激され得るが、し
かしＩ−Ｅd を発現するＬ−細胞の存在下で抗原によっ
て刺激されることは示され得なかった。
合することを示す結果の点から、ｃＩのＮＨ2 末端のド
メインにより免疫化されたＢａｌｂ／ｃマウス中にＩ−
Ｅdにより制限されたＴ−細胞が存在するか否かの問題
が再試験された。１５匹のｃＩ免疫化マウスから回収さ
れたＰ１２−２６に対して特異的な３００個以上のハイ
ブリッドのうち、Ｉ−Ｅd 分子によって制限されたもの
は示されなかった。すなわち、それらはＩ−Ａd を発現
するＬ細胞の存在下で抗原によって刺激され得るが、し
かしＩ−Ｅd を発現するＬ−細胞の存在下で抗原によっ
て刺激されることは示され得なかった。
【０１２４】対照的に、ミオグロビン（Ｐ１３５−１４
７）に対して特異的な８０個のハイブリッドのうち、７
８個は、Ｉ−Ｅd を発現するＬ−細胞上でアッセイされ
る場合、Ｉ−Ｅd に制限されることが示された。さら
に、Ｐ１２−２６免疫マウスからの分別されていないリ
ンパ節由来のＴ−細胞は、Shastri などによって記載さ
れているような標準のリンパ節増殖アッセイ〔Shastri
など．，Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａ
ｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，（１９８６）１６４：８８２〕
において１０μＭのＰ１２−２６と共に培養する場合、
有意な増殖（６８，０００cpm のチミジンの取込み）を
示した。
７）に対して特異的な８０個のハイブリッドのうち、７
８個は、Ｉ−Ｅd を発現するＬ−細胞上でアッセイされ
る場合、Ｉ−Ｅd に制限されることが示された。さら
に、Ｐ１２−２６免疫マウスからの分別されていないリ
ンパ節由来のＴ−細胞は、Shastri などによって記載さ
れているような標準のリンパ節増殖アッセイ〔Shastri
など．，Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａ
ｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，（１９８６）１６４：８８２〕
において１０μＭのＰ１２−２６と共に培養する場合、
有意な増殖（６８，０００cpm のチミジンの取込み）を
示した。
【０１２５】しかしながら、そのリンパ節細胞は、Ｉ−
Ａd 分子に対して特異的なモノクローナル抗体、ＭＫＤ
６が１０μＭのＰ１２−２６を有する同一の培養物に添
加される場合、添加された抗原を有さない培養物以上に
有意な増殖（１２５０cpm ）を示すことができない。こ
れらの同じ培養物の増殖は、Ｉ−Ｅd に対して特異的で
あり、そしてヘモシアニン特異性の、Ｉ−Ｅd 制限のＴ
−細胞ハイブリドーマの刺激と阻害するモノクローナル
抗体、３４−１−４Ｓによって阻害されなかった（７
５，０００cpm ）。従って、Ｉ−Ｅd 分子の関連下でＰ
１２−２６を認識することができる。ｃＩ免疫マウス中
におけるＴ−細胞が不在しているように思われ；明らか
に、Ｐ１２−２６及びＩ−Ｅd 分子に関してレパートリ
ーにおけるホールが存在する。次の研究は、マラリアワ
クチンとして使用するための合成ポリペプチドに関す
る。
Ａd 分子に対して特異的なモノクローナル抗体、ＭＫＤ
６が１０μＭのＰ１２−２６を有する同一の培養物に添
加される場合、添加された抗原を有さない培養物以上に
有意な増殖（１２５０cpm ）を示すことができない。こ
れらの同じ培養物の増殖は、Ｉ−Ｅd に対して特異的で
あり、そしてヘモシアニン特異性の、Ｉ−Ｅd 制限のＴ
−細胞ハイブリドーマの刺激と阻害するモノクローナル
抗体、３４−１−４Ｓによって阻害されなかった（７
５，０００cpm ）。従って、Ｉ−Ｅd 分子の関連下でＰ
１２−２６を認識することができる。ｃＩ免疫マウス中
におけるＴ−細胞が不在しているように思われ；明らか
に、Ｐ１２−２６及びＩ−Ｅd 分子に関してレパートリ
ーにおけるホールが存在する。次の研究は、マラリアワ
クチンとして使用するための合成ポリペプチドに関す
る。
【０１２６】材 料 合成ペプチドの合成及び分析は、前に記載された（Guil
let など．，前記）。この研究に使用されるペプチドは
次のものである： Ｐ１２−２６；λバクテリオファージのｃＩタンパク質
由来である。 Ｐ１２−２６ＬＦ；残基１４及び１５がＬＦによって置
換されているＰ１２−２６の変種である。 （ＮＡＮＰ）１−１２−２６，（ＮＡＮＰ）２−１２−
２６及び（ＮＡＮＰ）３−２３−２６；それぞれ１９，
２３及び２７個の残基の長さである。それらは、１〜３
回反復されたＮＡＮＰで始まり、次にＰ１２−２６を有
する。ＮＡＮＰ−５０は、５０回反復されたＮＡＮＰの
ポリマーである。
let など．，前記）。この研究に使用されるペプチドは
次のものである： Ｐ１２−２６；λバクテリオファージのｃＩタンパク質
由来である。 Ｐ１２−２６ＬＦ；残基１４及び１５がＬＦによって置
換されているＰ１２−２６の変種である。 （ＮＡＮＰ）１−１２−２６，（ＮＡＮＰ）２−１２−
２６及び（ＮＡＮＰ）３−２３−２６；それぞれ１９，
２３及び２７個の残基の長さである。それらは、１〜３
回反復されたＮＡＮＰで始まり、次にＰ１２−２６を有
する。ＮＡＮＰ−５０は、５０回反復されたＮＡＮＰの
ポリマーである。
【０１２７】方 法 抗体の製造 抗体の製造のために、完全フロイントアジュバント（Ｃ
ＦＡ）中に乳化された抗原〔（ＮＡＮＰ）３−１２−２
６〕１００μｇを、マウスの腹腔内及び足の肉趾に日０
で１次注射し、次いで、不完全フロイントアジュバント
（ＩＦＡ）中に乳化された抗原５０μｇを、２１日後、
２次皮下注射した。日７，２１（追加免疫の前）、２
８、及び４２日目に血液からの血清を使用した。
ＦＡ）中に乳化された抗原〔（ＮＡＮＰ）３−１２−２
６〕１００μｇを、マウスの腹腔内及び足の肉趾に日０
で１次注射し、次いで、不完全フロイントアジュバント
（ＩＦＡ）中に乳化された抗原５０μｇを、２１日後、
２次皮下注射した。日７，２１（追加免疫の前）、２
８、及び４２日目に血液からの血清を使用した。
【０１２８】Ｔ−細胞の増殖 Ｔ−細胞増殖の研究のために、ＣＦＡ中に乳化された１
００μｇの（ＮＡＮＰ）３−１２−２６を、マウスの尾
及びまた足の肉趾に日０で注射した。１０日目に、ドレ
ンノードを除去した。１０％ＦＣＳ，５×１０-5のＭ２
ＭＥ、ペニシリン、ストレプトマイシン及び抗原を含む
ＲＰＭＩ０．１mlを含む、平底マイクロ力価プレートの
ウェル当り８×１０5 個の細胞を接種した。２日目、 3
Ｈチミジン（ＩＣＮ）／μＣｉを、３成分又は２成分培
養物に添加した。１６時間後、細胞を収穫し、そして取
込まれた 3Ｈを、シンチレーション計数器によってアッ
セイした。
００μｇの（ＮＡＮＰ）３−１２−２６を、マウスの尾
及びまた足の肉趾に日０で注射した。１０日目に、ドレ
ンノードを除去した。１０％ＦＣＳ，５×１０-5のＭ２
ＭＥ、ペニシリン、ストレプトマイシン及び抗原を含む
ＲＰＭＩ０．１mlを含む、平底マイクロ力価プレートの
ウェル当り８×１０5 個の細胞を接種した。２日目、 3
Ｈチミジン（ＩＣＮ）／μＣｉを、３成分又は２成分培
養物に添加した。１６時間後、細胞を収穫し、そして取
込まれた 3Ｈを、シンチレーション計数器によってアッ
セイした。
【０１２９】ＮＡＮＰ3 （ＮＡＮＰ）n （ここでｎ反復
の数を示す）に対する抗体力価の評価 ＥＬＩＳＡ試験を用いた。接合されたＮＡＮＰ５０又は
１２−２６−ＢＳＡ〔１０μｇ／ml，２μｇ／ml、それ
ぞれ（２５μｌ）〕を、室温で１時間又は４℃で一晩に
わたってポリビニルウェル中に添加した。次に、ウェル
をブロックし、血清を添加し、そしてペルオキシダーゼ
に接合されたヤギ抗−マウスＩｇＧを添加した（１×１
０００の希釈度）。最後に、基質（ＡＢＴＳ）を添加
し、そして吸光度を４０５nmで読んだ。血清は、種々の
希釈度で試験された。
の数を示す）に対する抗体力価の評価 ＥＬＩＳＡ試験を用いた。接合されたＮＡＮＰ５０又は
１２−２６−ＢＳＡ〔１０μｇ／ml，２μｇ／ml、それ
ぞれ（２５μｌ）〕を、室温で１時間又は４℃で一晩に
わたってポリビニルウェル中に添加した。次に、ウェル
をブロックし、血清を添加し、そしてペルオキシダーゼ
に接合されたヤギ抗−マウスＩｇＧを添加した（１×１
０００の希釈度）。最後に、基質（ＡＢＴＳ）を添加
し、そして吸光度を４０５nmで読んだ。血清は、種々の
希釈度で試験された。
【０１３０】結 果 （ＮＡＮＰ）３−１２−２６は、Ｐ１２−２６に対して
特異的なＴ−細胞を刺激する Ｔ−細胞ハイブリドーマ９Ｈ３５及び９Ｃ１２７の活性
化を研究した。抗原付与性細胞は、Ｂ−細胞リンパ腫Ａ
２０であり、そしてＰ１２−２６又は（ＮＡＮＰ）３−
１２−２６のいずれかの抗原を種々の投与率（０〜５０
μｇ／ml）で添加した。ＩＬ−２の解放が、Ｔ−細胞の
活性化の測定として取られ、そして増殖のためにＩＬ−
２を必要とする指示が細胞系に対してアッセイした。
特異的なＴ−細胞を刺激する Ｔ−細胞ハイブリドーマ９Ｈ３５及び９Ｃ１２７の活性
化を研究した。抗原付与性細胞は、Ｂ−細胞リンパ腫Ａ
２０であり、そしてＰ１２−２６又は（ＮＡＮＰ）３−
１２−２６のいずれかの抗原を種々の投与率（０〜５０
μｇ／ml）で添加した。ＩＬ−２の解放が、Ｔ−細胞の
活性化の測定として取られ、そして増殖のためにＩＬ−
２を必要とする指示が細胞系に対してアッセイした。
【０１３１】得られた結果は、Ｐ１２−２６（ｃＩタン
パク質により免疫化された動物から単離された）に対し
て特異的な、２種のＨ２d −制限のＴ−ヘルパー細胞ハ
イブリドーマ、９Ｈ３５及び９Ｃ１２７のために、ペプ
チド（ＮＡＮＰ）３−１２−２６が、適切な（Ａ２０）
抗原付与性細胞の存在下で刺激体として作用することが
できることを示した。ＮＡＮＰ含有ペプチドは、より活
性的である。この結果は、拡張されたクラスII結合性ペ
プチドのＴ−細胞刺激性能力が、イン・ビトロで研究さ
れる場合、ほとんど変えられないことを示す。
パク質により免疫化された動物から単離された）に対し
て特異的な、２種のＨ２d −制限のＴ−ヘルパー細胞ハ
イブリドーマ、９Ｈ３５及び９Ｃ１２７のために、ペプ
チド（ＮＡＮＰ）３−１２−２６が、適切な（Ａ２０）
抗原付与性細胞の存在下で刺激体として作用することが
できることを示した。ＮＡＮＰ含有ペプチドは、より活
性的である。この結果は、拡張されたクラスII結合性ペ
プチドのＴ−細胞刺激性能力が、イン・ビトロで研究さ
れる場合、ほとんど変えられないことを示す。
【０１３２】（ＮＡＮＰ）−３−１２−２６ペプチド
は、（ＮＡＮＰ）５０に対して特異的なモノクローナル
抗体及びＰ１２−２６に対して特異的なモノクローナル
抗体の両者に結合され得る モノクローナル抗体による（ＮＡＮＰ）３−１２−２６
の抗体認識が研究された。抗原、すなわちＰ１２−２６
に接合されたウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）をマイクロ
ウェルに吸収し、そしてＰ１２−２６に対して特異的
な、ホースラディシュ ペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）に
よりラベルされた抗体を添加した。（ＮＡＮＰ）３−１
２−２６の不在下で又はＰ１２−２６ＬＦの存在下で、
モノクローナル抗体Ｂ３．１１の結合の阻害は存在しな
い。阻害が、Ｐ１２−２６，（ＮＡＮＰ）３−１２−２
６及びＰ１２−２６Ｓ（位置１８）（減少する阻害の順
序）により観察される。
は、（ＮＡＮＰ）５０に対して特異的なモノクローナル
抗体及びＰ１２−２６に対して特異的なモノクローナル
抗体の両者に結合され得る モノクローナル抗体による（ＮＡＮＰ）３−１２−２６
の抗体認識が研究された。抗原、すなわちＰ１２−２６
に接合されたウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）をマイクロ
ウェルに吸収し、そしてＰ１２−２６に対して特異的
な、ホースラディシュ ペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）に
よりラベルされた抗体を添加した。（ＮＡＮＰ）３−１
２−２６の不在下で又はＰ１２−２６ＬＦの存在下で、
モノクローナル抗体Ｂ３．１１の結合の阻害は存在しな
い。阻害が、Ｐ１２−２６，（ＮＡＮＰ）３−１２−２
６及びＰ１２−２６Ｓ（位置１８）（減少する阻害の順
序）により観察される。
【０１３３】上記研究をくり返した。但し、抗原は、マ
イクロウェルに結合された、放射性ラベルされた（ＮＡ
ＮＰ）５０であった。Ｐ１２−２６又は（ＮＡＮＰ）２
−１２−２６は、結合を阻害しないが、ところが（ＮＡ
ＮＰ）３及び（ＮＡＮＰ）３−１２−２６は結合を阻害
したことが見出された。その結果は、モノクローナル抗
体、Ｂ３．１１が、Ｐ１２−２６により結合されたウシ
血清アルブミンへのその結合を、（ＮＡＮＰ）３−１２
−２６の添加によって阻害され得ることを示す。同様
に、マラリア寄生体−免疫マウスから単離された、（Ｎ
ＡＮＰ）５０に対して特異的なモノクローナル抗体は、
（ＮＡＮＰ）３−１２−２６ペプチドによってその結合
を阻害され得る。これらの結果は、合成分子のＮＡＮＰ
部分に対して特異的な抗体が、追加のクラスII結合ペプ
チドの存在下で“ハプテン”を認識することができるこ
とを再び示す。
イクロウェルに結合された、放射性ラベルされた（ＮＡ
ＮＰ）５０であった。Ｐ１２−２６又は（ＮＡＮＰ）２
−１２−２６は、結合を阻害しないが、ところが（ＮＡ
ＮＰ）３及び（ＮＡＮＰ）３−１２−２６は結合を阻害
したことが見出された。その結果は、モノクローナル抗
体、Ｂ３．１１が、Ｐ１２−２６により結合されたウシ
血清アルブミンへのその結合を、（ＮＡＮＰ）３−１２
−２６の添加によって阻害され得ることを示す。同様
に、マラリア寄生体−免疫マウスから単離された、（Ｎ
ＡＮＰ）５０に対して特異的なモノクローナル抗体は、
（ＮＡＮＰ）３−１２−２６ペプチドによってその結合
を阻害され得る。これらの結果は、合成分子のＮＡＮＰ
部分に対して特異的な抗体が、追加のクラスII結合ペプ
チドの存在下で“ハプテン”を認識することができるこ
とを再び示す。
【０１３４】（ＮＡＮＰ）５０又は（ＮＡＮＰ）３が免
疫化のために使用される場合、（ＮＡＮＰ）５０に対す
る抗体を合成することができないマウスは、（ＮＡＮ
Ｐ）３−１２−２６が免疫原として使用される場合、
（ＮＡＮＰ）５０，（ＮＡＮＰ）３及びスポロゾイト
（Ｓｐｏｒｏｚｏｉｔｅｓ）に対する抗体を合成するこ
とができる マウスの対を、（ＮＡＮＰ）３−１２−２６，（ＮＡＮ
Ｐ）５０，（ＮＡＮＰ）１−１２−２６及び（ＮＡＮ
Ｐ）２−１２−２６により免疫化した。その血清力価
を、方法のセクションに示されたような直接的な結合ア
ッセイによって、１次免疫化の後、７日目、２次追加免
疫化（対照の血清は検出可能な結合を与えなかった）の
後２０日目、又は１０日目のいづれかの日に試験した。
（ＮＡＮＰ）３−１２−２６により免疫化されたマウス
からの血清（２次追加免疫化の後、１０日目）は、従来
の放射性ラベルされた抗−マウスグロブリンＲＩＡによ
って、サーカムスポロゾイトファルシパラム（Ｃｉｒｃ
ｕｍｓｐｏｒｏｚｏｉｔｅ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）に
直接的に結合することが見出された。
疫化のために使用される場合、（ＮＡＮＰ）５０に対す
る抗体を合成することができないマウスは、（ＮＡＮ
Ｐ）３−１２−２６が免疫原として使用される場合、
（ＮＡＮＰ）５０，（ＮＡＮＰ）３及びスポロゾイト
（Ｓｐｏｒｏｚｏｉｔｅｓ）に対する抗体を合成するこ
とができる マウスの対を、（ＮＡＮＰ）３−１２−２６，（ＮＡＮ
Ｐ）５０，（ＮＡＮＰ）１−１２−２６及び（ＮＡＮ
Ｐ）２−１２−２６により免疫化した。その血清力価
を、方法のセクションに示されたような直接的な結合ア
ッセイによって、１次免疫化の後、７日目、２次追加免
疫化（対照の血清は検出可能な結合を与えなかった）の
後２０日目、又は１０日目のいづれかの日に試験した。
（ＮＡＮＰ）３−１２−２６により免疫化されたマウス
からの血清（２次追加免疫化の後、１０日目）は、従来
の放射性ラベルされた抗−マウスグロブリンＲＩＡによ
って、サーカムスポロゾイトファルシパラム（Ｃｉｒｃ
ｕｍｓｐｏｒｏｚｏｉｔｅ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）に
直接的に結合することが見出された。
【０１３５】リンパ節由来のＴ−細胞の増殖は、（ＮＡ
ＮＰ）３−１２−２６により免疫化された後、８日目に
マウス中に観察された。チミジンの取り込みによりアッ
セイされる場合、免疫原、Ｐ１２−２６，（ＮＡＮＰ）
１−１２−２６及び（ＮＡＮＰ）２−１２−２６による
Ｔ−細胞増殖が、見られた。これらの同じマウス中にお
いて（ＮＡＮＰ）３又は（ＮＡＮＰ）５０による増殖は
見られない。これらの結果は、免疫原上でのクラスII分
子結合性配列の存在が、これらのマウス中において単独
では不活性である（ＮＡＮＰ）３に、Ｔ−細胞刺激性活
性を付与するのに十分であることを示す。すべてのＴ−
細胞活性は、クラスII結合配列に向けられる。これらの
結果は、抗体活性が、免疫原の１２−２６部分上に存在
する（ＮＡＮＰ）配列に対して、（ＮＡＮＰ）３−１２
−２６により免疫化されたマウス中に誘発され、及びそ
のような“活性化”配列が不活性配列に付加され、そし
てその不活性配列に対する抗体を産生することを示唆す
る。
ＮＰ）３−１２−２６により免疫化された後、８日目に
マウス中に観察された。チミジンの取り込みによりアッ
セイされる場合、免疫原、Ｐ１２−２６，（ＮＡＮＰ）
１−１２−２６及び（ＮＡＮＰ）２−１２−２６による
Ｔ−細胞増殖が、見られた。これらの同じマウス中にお
いて（ＮＡＮＰ）３又は（ＮＡＮＰ）５０による増殖は
見られない。これらの結果は、免疫原上でのクラスII分
子結合性配列の存在が、これらのマウス中において単独
では不活性である（ＮＡＮＰ）３に、Ｔ−細胞刺激性活
性を付与するのに十分であることを示す。すべてのＴ−
細胞活性は、クラスII結合配列に向けられる。これらの
結果は、抗体活性が、免疫原の１２−２６部分上に存在
する（ＮＡＮＰ）配列に対して、（ＮＡＮＰ）３−１２
−２６により免疫化されたマウス中に誘発され、及びそ
のような“活性化”配列が不活性配列に付加され、そし
てその不活性配列に対する抗体を産生することを示唆す
る。
【０１３６】類似する実験において、（ＮＡＮＰ）３−
１２−２６ＬＦにより免疫化されたＢａｌｂ／ｃマウス
は、免疫原に対するＴ−細胞増殖応答（免疫化の後１６
日目に脾臓から取られた）を示したが、しかし（ＮＡＮ
Ｐ）３−１２−２６（Ｐ１２−２６のみに対しても）に
対してはそうでなかった。この結果は、免疫原の（ＮＡ
ＮＰ）部分に対するＴ−細胞反応性の誘発が存在しない
ことを再び示す。この場合、上記項に記載されたよう
に、（ＮＡＮＰ）３−１２−２６は、クラスII分子に結
合し、そして活性化のためにＴ−細胞に付与することが
できることは明らかである。（ＮＡＮＰ）３−１２−２
６ＬＦにより免疫化されたマウスはまた、（ＮＡＮＰ）
５０ポリマーに対して特異的な抗体も誘発する。これら
の抗体は、μ及びγ−１クラスのものである。
１２−２６ＬＦにより免疫化されたＢａｌｂ／ｃマウス
は、免疫原に対するＴ−細胞増殖応答（免疫化の後１６
日目に脾臓から取られた）を示したが、しかし（ＮＡＮ
Ｐ）３−１２−２６（Ｐ１２−２６のみに対しても）に
対してはそうでなかった。この結果は、免疫原の（ＮＡ
ＮＰ）部分に対するＴ−細胞反応性の誘発が存在しない
ことを再び示す。この場合、上記項に記載されたよう
に、（ＮＡＮＰ）３−１２−２６は、クラスII分子に結
合し、そして活性化のためにＴ−細胞に付与することが
できることは明らかである。（ＮＡＮＰ）３−１２−２
６ＬＦにより免疫化されたマウスはまた、（ＮＡＮＰ）
５０ポリマーに対して特異的な抗体も誘発する。これら
の抗体は、μ及びγ−１クラスのものである。
【０１３７】免疫原の（ＮＡＮＰ）部分へのＴ−細胞の
反応性を検出するための無能性は、Ｂａｌｂ／ｃマウス
の性質であり、そして免疫原の性質ではない。（ＮＡＮ
Ｐ）３−１２−２６により免疫化された５７Ｂ６／Ｈ−
２６は、（ＮＡＮＰ）３又は（ＮＡＮＰ）５０に対して
直接的に応答することができ、そして免疫原の（ＮＡＮ
Ｐ）部分に対するＴ−細胞反応性を伴って、（ＮＡＮ
Ｐ）３−１２−２６による免疫化に応答することができ
る。従って、この方法の有用性は、ヒト病原菌に対する
免疫性の産生のための有用性を有するシステムに示され
る。
反応性を検出するための無能性は、Ｂａｌｂ／ｃマウス
の性質であり、そして免疫原の性質ではない。（ＮＡＮ
Ｐ）３−１２−２６により免疫化された５７Ｂ６／Ｈ−
２６は、（ＮＡＮＰ）３又は（ＮＡＮＰ）５０に対して
直接的に応答することができ、そして免疫原の（ＮＡＮ
Ｐ）部分に対するＴ−細胞反応性を伴って、（ＮＡＮ
Ｐ）３−１２−２６による免疫化に応答することができ
る。従って、この方法の有用性は、ヒト病原菌に対する
免疫性の産生のための有用性を有するシステムに示され
る。
【０１３８】上記結果は、Ｂ−及び／又はＴ−細胞を刺
激すること又はＢ−及び／又はＴ−細胞を不活性化する
ことに関して、広範囲の種類の情況、すなわちイン・ビ
トロ及びイン・ビボで免疫系を調節することにおける本
発明の能力及び広さを示す。本発明は、特定の出来事に
応答して及びさらに宿主の情況、すなわち宿主の移植抗
原に対して、１又はそれよりも多くのサブセットのリン
パ球を選択することにおいて卓越した特異性を提供す
る。特定の宿主の移植抗原の多型性領域をまねる能力に
よって、Ｔ−細胞免疫系が実質的に不活性化され得る。
激すること又はＢ−及び／又はＴ−細胞を不活性化する
ことに関して、広範囲の種類の情況、すなわちイン・ビ
トロ及びイン・ビボで免疫系を調節することにおける本
発明の能力及び広さを示す。本発明は、特定の出来事に
応答して及びさらに宿主の情況、すなわち宿主の移植抗
原に対して、１又はそれよりも多くのサブセットのリン
パ球を選択することにおいて卓越した特異性を提供す
る。特定の宿主の移植抗原の多型性領域をまねる能力に
よって、Ｔ−細胞免疫系が実質的に不活性化され得る。
【０１３９】対照的に、目的の宿主の移植抗原に結合す
るためのコンセンサス配列を変えることによって、１又
は少々のサブセットのリンパ球を特異的に活性化するこ
とができ、予防接種の目的、病原性侵入体への増強され
た応答、又は免疫系による保護に関連する他の出来事の
ために刺激された免疫系を提供する。さらに、天然の組
織への攻撃に関するリンパ球を不活性化することによっ
て、自己免疫系を調節することができる。従って、細胞
の機能に関して、特定の細胞を増強し又は減じるために
本発明の広範囲な使用が存在する。
るためのコンセンサス配列を変えることによって、１又
は少々のサブセットのリンパ球を特異的に活性化するこ
とができ、予防接種の目的、病原性侵入体への増強され
た応答、又は免疫系による保護に関連する他の出来事の
ために刺激された免疫系を提供する。さらに、天然の組
織への攻撃に関するリンパ球を不活性化することによっ
て、自己免疫系を調節することができる。従って、細胞
の機能に関して、特定の細胞を増強し又は減じるために
本発明の広範囲な使用が存在する。
【０１４０】本明細書に言及されたすべての出版物及び
特許出願は、本発明が関係する当業者の熟練のレベルを
示す。本発明におけるすべての出版物及び特許出願は、
あたかもそれぞれ個々の出版物又は特許出願が、引用に
よって組込まれることを特別且つ個々に指摘されている
かのように、それと同じ程度に引用によって組込まれ
る。前述の発明は、明確に理解するために例示的且つ例
的にいくらか詳細に記載されているけれども、請求の範
囲内で修飾及び変更を行なうことができる。
特許出願は、本発明が関係する当業者の熟練のレベルを
示す。本発明におけるすべての出版物及び特許出願は、
あたかもそれぞれ個々の出版物又は特許出願が、引用に
よって組込まれることを特別且つ個々に指摘されている
かのように、それと同じ程度に引用によって組込まれ
る。前述の発明は、明確に理解するために例示的且つ例
的にいくらか詳細に記載されているけれども、請求の範
囲内で修飾及び変更を行なうことができる。
【図１】図１は、移植抗原のドメインに関連する、外部
レセプター及び内部リガンドから成る内部相補性の図に
よる説明である。
レセプター及び内部リガンドから成る内部相補性の図に
よる説明である。
【図２】図２は、関連するペプチドによるＴ−細胞ハイ
ブリドーマ７Ｂ７．３の活性の阻害の図による説明であ
る。活性は、培地（ＲＰＭＩ １６４０）のみ（●−
●）における又は２０μＭ（□−□）もしくは６０μＭ
（○−○）でのＰ１２−２４の存在下における、種々の
濃度のＰ１５−２６の存在下で測定された。Ａ２０Ｂ−
細胞リンパ腫（５×１０4 個の細胞／ウェル）が抗原存
在性細胞として使用された。２４時間の培養の後、５０
μｌの上清液を収穫し、そしてＩＬ−２依存性ＣＴＬ−
１細胞系（１０4 個の細胞／ウェル）中への〔 3Ｈ〕チ
ミジンの導入の後、ＩＬ−２濃度について検定した。そ
れらの値は、非経験的に行なわれた実験から取られた三
回のサンプルの相加平均を表わす。
ブリドーマ７Ｂ７．３の活性の阻害の図による説明であ
る。活性は、培地（ＲＰＭＩ １６４０）のみ（●−
●）における又は２０μＭ（□−□）もしくは６０μＭ
（○−○）でのＰ１２−２４の存在下における、種々の
濃度のＰ１５−２６の存在下で測定された。Ａ２０Ｂ−
細胞リンパ腫（５×１０4 個の細胞／ウェル）が抗原存
在性細胞として使用された。２４時間の培養の後、５０
μｌの上清液を収穫し、そしてＩＬ−２依存性ＣＴＬ−
１細胞系（１０4 個の細胞／ウェル）中への〔 3Ｈ〕チ
ミジンの導入の後、ＩＬ−２濃度について検定した。そ
れらの値は、非経験的に行なわれた実験から取られた三
回のサンプルの相加平均を表わす。
【図３】図３は、鶏のオボアルブミン（Ｏｖａ）又はス
タフィロコッカス ヌクレアーゼ（Ｎａｓｅ）によるＴ
−細胞ハイブリドーマ７Ｂ７．３の活性の阻害の図によ
る説明である。活性は、培地（ＲＰＭＩ １６４０）の
み（●−●）における又は３０μＭのＯｖａ（Ｐ３２４
−３３６）（□−□）もしくは６０μＭのＮａｓｅ（Ｐ
６１−８１）（○−○）における、種々の濃度のＰ１５
−２６の存在下で測定された。それらの値は、第１図に
説明されたように三回のサンプルの相加平均を表わす。
タフィロコッカス ヌクレアーゼ（Ｎａｓｅ）によるＴ
−細胞ハイブリドーマ７Ｂ７．３の活性の阻害の図によ
る説明である。活性は、培地（ＲＰＭＩ １６４０）の
み（●−●）における又は３０μＭのＯｖａ（Ｐ３２４
−３３６）（□−□）もしくは６０μＭのＮａｓｅ（Ｐ
６１−８１）（○−○）における、種々の濃度のＰ１５
−２６の存在下で測定された。それらの値は、第１図に
説明されたように三回のサンプルの相加平均を表わす。
【図４】図４は、培地のみ（□−□）において、インフ
ルエンザ赤血球凝集素Ｐ１１１−１２０（▲−▲）又は
Ｐ１２−２６（○−○）もしくはインフルエンザが赤血
球凝集素部位２（Ｐ１２６−１３８）（●−●）（それ
ぞれ５０μＭでの）の存在において、種々の濃度のオボ
アルブミン（Ｐ３２４−３３６）及びＡ２０を示す細胞
と共に培養される場合、ＤＯ−１１．１０ Ｔ−細胞ハ
イブリドーマの阻害の図による説明である。与えられた
それらの値は、第１図に説明されたように三回のサンプ
ルの相加平均を表わす。
ルエンザ赤血球凝集素Ｐ１１１−１２０（▲−▲）又は
Ｐ１２−２６（○−○）もしくはインフルエンザが赤血
球凝集素部位２（Ｐ１２６−１３８）（●−●）（それ
ぞれ５０μＭでの）の存在において、種々の濃度のオボ
アルブミン（Ｐ３２４−３３６）及びＡ２０を示す細胞
と共に培養される場合、ＤＯ−１１．１０ Ｔ−細胞ハ
イブリドーマの阻害の図による説明である。与えられた
それらの値は、第１図に説明されたように三回のサンプ
ルの相加平均を表わす。
【図５】図５は、Ｉ−Ｅd クラスII分子によって制限さ
れたペプチドのアミノ酸配列を示す。ミオグロビン（Ｐ
１３５−１４７）がＩ−Ｅd-により制限されたＴ−細胞
クローンによって認識される。スタフィロコッカスアウ
レウス（Ｓｔｅｐｈｙｌｏｃｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕ
ｓ）からのヌクレアーゼ（Ｐ６６−７８）は、Ｈ−Ｚd
により制限されたＴ−細胞クローンによって認識され
る。λリプレッサーからのｃＩタンパク質（Ｐ１２−２
４），Ｉ−ＥB d 配列（６９−８１），Ｉ−ＥB K 配列
（６９−８１）が存在する。インフルエンザウィルスか
らの赤血球凝集素は、Ｉ−Ｅd により制限されたＴ−細
胞ハイブリドーマによって認識される。次にＩ−ＥB d
配列（２８−３６）及びＩ−ＥB K 配列（２８−３６）
が存在する。括弧内の数字は、免疫原又はＩａ分子のい
づれかにおけるアミノ酸残基の位置を表わす。括弧内の
Ｌｅｕは、赤血球凝集素からのペプチド１１１〜１２０
の最初の位置でのロイシン及びフェニルアラニンが赤血
球凝集素−特異性Ｉ−Ｅd −制限のＴ−細胞クローンの
刺激のために対応することを意味する。下線をほどこさ
れた残基は、抗原とＩ−ＥB d タンパク質領域との同一
性を示す。
れたペプチドのアミノ酸配列を示す。ミオグロビン（Ｐ
１３５−１４７）がＩ−Ｅd-により制限されたＴ−細胞
クローンによって認識される。スタフィロコッカスアウ
レウス（Ｓｔｅｐｈｙｌｏｃｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕ
ｓ）からのヌクレアーゼ（Ｐ６６−７８）は、Ｈ−Ｚd
により制限されたＴ−細胞クローンによって認識され
る。λリプレッサーからのｃＩタンパク質（Ｐ１２−２
４），Ｉ−ＥB d 配列（６９−８１），Ｉ−ＥB K 配列
（６９−８１）が存在する。インフルエンザウィルスか
らの赤血球凝集素は、Ｉ−Ｅd により制限されたＴ−細
胞ハイブリドーマによって認識される。次にＩ−ＥB d
配列（２８−３６）及びＩ−ＥB K 配列（２８−３６）
が存在する。括弧内の数字は、免疫原又はＩａ分子のい
づれかにおけるアミノ酸残基の位置を表わす。括弧内の
Ｌｅｕは、赤血球凝集素からのペプチド１１１〜１２０
の最初の位置でのロイシン及びフェニルアラニンが赤血
球凝集素−特異性Ｉ−Ｅd −制限のＴ−細胞クローンの
刺激のために対応することを意味する。下線をほどこさ
れた残基は、抗原とＩ−ＥB d タンパク質領域との同一
性を示す。
【図６】図６は、オボアルブミン及びミオグロビンの一
部のアミノ酸配列とクラスII抗原のアミノ酸配列との比
較を示す。オボアルブミン（Ｐ３２６−３３９）は、Ｄ
Ｏ−１１．１０によって認識される。Ｉ−ＡB d 配列
（４２−５５）。ミオグロビン（Ｐ１０２−１１８）。
括弧内の数字は、天然の分子におけるアミノ酸残基の位
置を表わす。
部のアミノ酸配列とクラスII抗原のアミノ酸配列との比
較を示す。オボアルブミン（Ｐ３２６−３３９）は、Ｄ
Ｏ−１１．１０によって認識される。Ｉ−ＡB d 配列
（４２−５５）。ミオグロビン（Ｐ１０２−１１８）。
括弧内の数字は、天然の分子におけるアミノ酸残基の位
置を表わす。
【図７】図７は、Ｉ−Ａd クラスII分子によって制限さ
れた５種のペプチドのアミノ酸配列、すなわちミオグロ
ビン（Ｐ１０６〜１１８）；オボアルブミン（Ｐ３２３
〜３３６）；λリプレッサーｃＩ（Ｐ１２−２６）；ス
タフィロコッカス アウレウスからのヌクレアーゼ（Ｐ
６６−８０）及びブタクサ類のアレルゲン（Ｐ５４−６
５）を示す。括弧内の数字は免疫系分子内のアミノ酸残
基の位置を表わす。ダッシュは、上記ペプチドに相当す
る位置での欠失を表わす。
れた５種のペプチドのアミノ酸配列、すなわちミオグロ
ビン（Ｐ１０６〜１１８）；オボアルブミン（Ｐ３２３
〜３３６）；λリプレッサーｃＩ（Ｐ１２−２６）；ス
タフィロコッカス アウレウスからのヌクレアーゼ（Ｐ
６６−８０）及びブタクサ類のアレルゲン（Ｐ５４−６
５）を示す。括弧内の数字は免疫系分子内のアミノ酸残
基の位置を表わす。ダッシュは、上記ペプチドに相当す
る位置での欠失を表わす。
【図８】図８は、Ｉ−ＥK クラスII分子によって制限さ
れた４種のペプチドのアミノ配列、すなわち蛾シトクロ
ームｃ（Ｐ９５−１０３）；スタフィロコッカス アウ
レウスからのヌクレアーゼ（Ｐ８９−９７）；λリプレ
ッサーからのｃＩタンパク質（Ｐ１８−２６）及びニワ
トリ卵白リゾチーム（Ｐ８８−９６）を示す。括弧内の
数は、免疫原分子内のアミノ酸残基の位置を表わす。
れた４種のペプチドのアミノ配列、すなわち蛾シトクロ
ームｃ（Ｐ９５−１０３）；スタフィロコッカス アウ
レウスからのヌクレアーゼ（Ｐ８９−９７）；λリプレ
ッサーからのｃＩタンパク質（Ｐ１８−２６）及びニワ
トリ卵白リゾチーム（Ｐ８８−９６）を示す。括弧内の
数は、免疫原分子内のアミノ酸残基の位置を表わす。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ギレット，ジーン−ジェラード アメリカ合衆国，マサチューセッツ 02172，ウォータータウン，マウント オ ーバーン ストリート 536
Claims (33)
- 【請求項１】 下記成分を含んで成る組成物であって：
哺乳類宿主が応答し、そして移植抗原に結合できるアグ
レトープ及びエピトープを含んで成る第１抗原の１００
個よりも多くないアミノ酸の免疫優性配列の第１ドメイ
ンを含んで成る第１分子を含んで成り、 ここで前記配列が突然変異されており、 又は前記ドメインが前記第１抗原以外の分子の第２エピ
トープ部位又は前記第１抗原の天然配列以外により結合
された前記第１抗原のエピトープ部位に結合されてお
り、 又は少なくとも１種の分子が移植抗原の多型性領域の配
列を有する１００個よりも多くないアミノ酸を含んで成
り、 これによって、前記組成物は前記第１抗原の前記エピト
ープに対する哺乳類宿主の免疫応答を調節するのに有用
であることを特徴とする組成物。 - 【請求項２】 前記突然変異化された配列を有し、その
突然変異化が前記第１抗原のアグレトープに存在する請
求項１に記載の組成物。 - 【請求項３】 前記突然変異化された配列を有し、その
突然変異化が前記第１抗原のエピトープに存在する請求
項１に記載の組成物。 - 【請求項４】 前記突然変異化された配列を有し、その
突然変異化が前記第１抗原のエピトープ及びアグレトー
プの両者に存在する請求項１に記載の組成物。 - 【請求項５】 前記第１抗原のエピトープがハプテン上
に位置する請求項１に記載の組成物。 - 【請求項６】 前記免疫優性配列がハプテン上に位置す
る請求項１に記載の組成物。 - 【請求項７】 少なくとも１種の分子が移植抗原をブロ
ックする請求項１に記載の組成物。 - 【請求項８】 少なくとも１種の分子がＴ−細胞のサブ
セットを不活性する請求項１に記載の組成物。 - 【請求項９】 前記組成物が前記免疫応答を刺激するこ
とによってその応答を調節する請求項１に記載の組成
物。 - 【請求項１０】 少なくとも１種の分子がＴ−細胞のサ
ブセットを刺激することにおいて効果的である請求項９
に記載の組成物。 - 【請求項１１】 前記突然変異化された配列が前記第１
抗原のアグレトープ、エピトープ又はそれらの両者に存
在する請求項９に記載の組成物。 - 【請求項１２】 前記突然変異化された配列を有し、そ
の突然変異化が前記アグレトープに存在し、そして移植
抗原により制限されるアグレトープのコンセンサス配列
との高められた適合性をもたらす請求項９に記載の組成
物。 - 【請求項１３】 前記突然変異化された配列を有し、そ
の突然変異化が前記アグレトープに存在し、そして前記
移植抗原のためのアグレトープの増強された結合親和性
をもたらす請求項９に記載の組成物。 - 【請求項１４】 前記突然変異化された配列を有し、そ
の突然変異がエピトープに存在し、そしてＴ−細胞のサ
ブセットを活性化できる配列をもたらす請求項９に記載
の組成物。 - 【請求項１５】 前記突然変異化を有し、その突然変異
が前記アグレトープ及びエピトープの両者に存在し、そ
して特定のサブセットのＴ−細胞を活性化できる配列を
もたらす請求項９に記載の組成物。 - 【請求項１６】 前記組成物が、免疫応答をブロックす
ることによってその応答を調節する請求項１に記載の組
成物。 - 【請求項１７】 前記組成物がＴ−細胞のサブセットの
活性化を妨げる請求項１６に記載の組成物。 - 【請求項１８】 前記突然変異化された配列を有し、そ
の突然変異化が前記第１抗原のアグレトープ、エピトー
プ又はそれらの両者に存在する請求項１６に記載の組成
物。 - 【請求項１９】 前記突然変異化された配列を有し、そ
の突然変異化が前記第１抗原のエピトープに存在し、そ
して無害性エピトープ又は組成物が投与される前記哺乳
類のＴ−細胞と反応しないエピトープを形成する請求項
１６に記載の組成物。 - 【請求項２０】 前記突然変異化された配列を有し、そ
の突然変異化が前記第１抗原のエピトープに存在し、そ
して第２エピトープを模倣する請求項１６に記載の組成
物。 - 【請求項２１】 前記突然変異化された配列を有し、そ
の突然変異化が前記第１抗原のエピトープに存在し、そ
して組成物が投与される前記哺乳類に、エピトープに対
するＴ−細胞受容体が存在しないエピトープを形成する
請求項１６に記載の組成物。 - 【請求項２２】 前記突然変異化された配列を有し、そ
の突然変異化が天然に存在する抗原のエピトープに存在
し、そして組成物が投与される哺乳類において自己−エ
ピトープを模倣する請求項１６に記載の組成物。 - 【請求項２３】 前記突然変異化された配列を有し、そ
の突然変異化が前記エピトープに存在し、そしてＴ−細
胞のサブセットの活性化を妨げることができる配列をも
たらす請求項１６に記載の組成物。 - 【請求項２４】 前記突然変異化を有し、その突然変異
化が前記アグレトープ及びエピトープの両者に存在し、
そして特定のサブセットのＴ−細胞の活性化を妨げるこ
とができる配列をもたらす請求項１６に記載の組成物。 - 【請求項２５】 抗原に対する哺乳類の免疫応答を調節
するために、前記２種の分子を含んで成る請求項１に記
載の組成物。 - 【請求項２６】 前記第１分子が移植抗原の多型性領域
の配列を有する請求項１に記載の組成物。 - 【請求項２７】 前記第１ドメインが第２エピトープ部
位に結合される請求項１に記載の組成物。 - 【請求項２８】 前記第１ドメインの配列を突然変異化
されている請求項１に記載の組成物。 - 【請求項２９】 哺乳類宿主の免疫システムが応答する
抗原の突然変異化されたペプチド配列を含んで成る少な
くとも１種の分子を含む組成物であって、前記分子が第
１抗原のエピトープに対する宿主の免疫システムの応答
を調節することを特徴とする組成物。 - 【請求項３０】 前記ペプチドが免疫優性配列を含んで
成る請求項２９に記載の組成物。 - 【請求項３１】 前記ペプチドがＴ−細胞のサブセット
を妨げ、活性化し、又は不活性化する請求項２９に記載
の組成物。 - 【請求項３２】 前記第１エピトープに対する免疫応答
を調節する請求項３０に記載の組成物。 - 【請求項３３】 前記第２エピトープに対する免疫応答
を調節する請求項３０に記載の組成物。
Applications Claiming Priority (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US88013486A | 1986-06-30 | 1986-06-30 | |
| US880134 | 1986-06-30 | ||
| US92428686A | 1986-10-29 | 1986-10-29 | |
| US924286 | 1986-10-29 | ||
| US1734387A | 1987-02-20 | 1987-02-20 | |
| US017343 | 1987-02-20 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09176042A true JPH09176042A (ja) | 1997-07-08 |
| JP2828960B2 JP2828960B2 (ja) | 1998-11-25 |
Family
ID=27360777
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62504476A Expired - Lifetime JP2633881B2 (ja) | 1986-06-30 | 1987-06-26 | 免疫調節組成物及びそれらの使用 |
| JP8273737A Expired - Lifetime JP2828960B2 (ja) | 1986-06-30 | 1996-10-16 | 免疫調節組成物 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62504476A Expired - Lifetime JP2633881B2 (ja) | 1986-06-30 | 1987-06-26 | 免疫調節組成物及びそれらの使用 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
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| JP (2) | JP2633881B2 (ja) |
| KR (1) | KR880701108A (ja) |
| AT (1) | ATE128627T1 (ja) |
| AU (1) | AU603131B2 (ja) |
| DE (1) | DE3751553T2 (ja) |
| DK (1) | DK101888A (ja) |
| WO (1) | WO1988000057A1 (ja) |
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| US5645820A (en) * | 1987-06-24 | 1997-07-08 | Autoimmune, Inc. | Treatment of autoimmune diseases by aerosol administration of autoantigens |
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| US5641474A (en) * | 1987-06-24 | 1997-06-24 | Autoimmune, Inc. | Prevention of autoimmune diseases by aerosol administration of autoantigens |
| US5849298A (en) * | 1987-06-24 | 1998-12-15 | Autoimmune Inc. | Treatment of multiple sclerosis by oral administration of bovine myelin |
| CA1335792C (en) * | 1987-08-18 | 1995-06-06 | Chaim O. Jacob | Method and dosage form using an antagonist to gamma interferon to control mhc-associated autoimmune disease |
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| JPH03504975A (ja) * | 1988-06-14 | 1991-10-31 | セル―エスシーアイ コーポレイション | 異種官能性細胞免疫剤、それを含有するワクチン及びその使用方法 |
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| US5260422A (en) * | 1988-06-23 | 1993-11-09 | Anergen, Inc. | MHC conjugates useful in ameliorating autoimmunity |
| US5194425A (en) * | 1988-06-23 | 1993-03-16 | Anergen, Inc. | Mhc-mediated toxic conjugates useful in ameliorating autoimmunity |
| US5468481A (en) * | 1988-06-23 | 1995-11-21 | Amergen, Inc. | MHC class II-peptide conjugates useful in ameliorating autoimmunity |
| US6036957A (en) * | 1990-03-30 | 2000-03-14 | Autoimmune, Inc. | Suppression of T-cell proliferation using peptide fragments of myelin basic protein |
| ATE319474T1 (de) * | 1990-10-15 | 2006-03-15 | Autoimmune Inc | Behandlung von autoimmunkrankheiten durch orale verabreichung von autoantigenen |
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|---|---|---|---|---|
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| US4565696A (en) | 1983-08-03 | 1986-01-21 | The Regents Of The University Of California | Production of immunogens by antigen conjugation to liposomes |
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