JPH09154572A - 弱毒性ニューカッスル病ウイルスワクチン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 既存のＮＤＶ（ワクチン）株とは異なり気道
内でも、またその他の器官においても予防接種反応を惹
起せず、しかも強固な免疫応答を誘起し得るＮＤＶ株及
び該ＮＤＶ株を含有する、ニューカッスル病からの家禽
の防御に用いるワクチンの提供。 【解決手段】 本発明は、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｐａｓ
ｔｅｕｒ， Ｐａｒｉｓ， ＦｒａｎｃｅのＣＮＣＭに
受託番号第Ｉ−１６１４号の下に寄託されたＮＤＶ Ｃ
２株、及び該ＮＤＶ株を含有する、ニューカッスル病か
らの家禽の防御に用いるワクチンを提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、弱毒性（ｍｉｌ
ｄ）ニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）株、及び該Ｎ
ＤＶ株を含有する、家禽をニューカッスル病から防御す
るのに用いるワクチンに係わる。

【０００２】

【従来の技術、及び発明が解決しようとする課題】ニュ
ーカッスル病は広範な地理的分布を示す家禽のウイルス
感染症であり、家禽産業に多大の経済的損失を招く。こ
の疾患の病因物質はニューカッスル病ウイルス（ＮＤ
Ｖ）で、該ウイルスはパラミクソウイルス属のプロトタ
イプウイルスである。ニューカッスル病は、上記ウイル
スの分離株及び株が異なるとそれによって疾患の重篤度
が甚だしく変化するという複雑さを有する。通常、ニワ
トリが若いほど疾患は急性でかつ重篤である。感染は吸
入または摂食によって生起し得、感染形態のウイルスは
鳥から鳥へと伝播する。

【０００３】上記ＮＤＶは幾つかの病原型、即ち強毒Ｎ
ＤＶ、中間毒ＮＤＶ及び弱毒ＮＤＶが同定されている。
弱毒、中間毒及び強毒という術語はｉｎ ｖｉｖｏとｉ
ｎｖｉｔｒｏとの両方で行なわれた実験室試験から派生
したが、今ではニワトリに対する毒力が弱いウイルス、
中位のウイルス、及び強いウイルスを指すのに普通に用
いられている。神経向性強毒形態の疾患はＮＤＶの病原
性の高い株によって誘発され、突然重篤な呼吸性徴候が
現われた後神経性徴候が現われるという特徴を有する。
ほとんどの場合、感染動物は助からない。内臓向性強毒
ＮＤＶ株は病原性が高く、高い死亡率と胃腸管の重篤な
病変とをもたらす。ＮＤＶの中間毒株は普通、十分に感
受性である鳥では重篤な呼吸性疾患を誘発し、かつ成鳥
において甚だしい産卵低下を招く。ＮＤウイルスの弱毒
株は通常、特に十分に感受性である若齢鳥において呼吸
性徴候を特徴とする軽度疾患を誘発する。

【０００４】商業的家禽産業ではＮＤに起因する経済的
損失を低減するべく、ニワトリにＮＤに対する予防接種
を行なっている。弱毒株及び中間毒株に由来する生ワク
チンが定常的に適用されており、その際中間毒ワクチン
は二次接種にのみ適する。しかし、弱毒グループ内でも
毒力はきわめて様々である。生ワクチンとして用いられ
るＮＤＶ株には、Ｖ４、Ｈｉｔｃｈｎｅｒ Ｂ１、Ｆ、
Ｌａ Ｓｏｔａ（弱毒）、並びに株Ｈ、Ｍｕｋｔｅｓｗ
ａｒ、Ｋｏｍａｒｏｖ及びＲｏａｋｉｎ（中間毒）が含
まれる。生ＮＤワクチンの主な利点は、噴霧及び飲料水
適用などの安価な大量適用技術で投与できることであ
る。しかし、生ワクチンは、特に噴霧接種後に気道内で
重大な予防接種反応（ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ ｒｅａ
ｃｔｉｏｎ）を惹起しかねない。そのため、予防接種、
特に一次接種にはきわめて弱毒性のウイルスを用いるこ
とが重要であるが、その結果として普通ワクチンの反復
適用が必要となる。

【０００５】不活化ワクチンは、通常比較的老いた鳥に
注射によって投与する。大抵の場合、不活化ワクチンは
水酸化アルミニウムなどのアジュバントキャリヤまたは
油中水型エマルションと混合された死亡ウイルスを含有
する。油性エマルションワクチンの製造に用いられるウ
イルスには、Ｕｌｓｔｅｒ ２Ｃ、ＨｉｔｃｈｎｅｒＢ
１、Ｌａ Ｓｏｔａ、Ｒｏａｋｉｎ、及び様々な有毒ウ
イルスが含まれる（Ｄ． Ｊ． Ａｌｅｘａｎｄｅｒ，
Ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｆ Ｐｏｕｌｔｒｙ， Ｃａｌ
ｎｅｋ等編， ９ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ， ｐｐ．４９
６−５１９，Ｉｏｗａ Ｓｔａｔｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉ
ｔｙ Ｐｒｅｓｓ， Ａｍｅｓ，Ｉｏｗａ， １９９
１）。

【０００６】通常用いられる生きたＮＤＶ株のＨｉｔｃ
ｈｎｅｒ Ｂ１及びＬａ Ｓｏｔａは、穏やかなもので
はあるが呼吸性予防接種反応をなお惹起するので、接種
動物において（呼吸性）予防接種反応を惹起せず、しか
もニューカッスル病に対する強固な免疫を誘起する、更
に弱毒性であるＮＤＶワクチン株が必要とされる。この
ような株は幾つか従来技術に開示されている。米国特許
第５，２５０，２９８号（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ
Ｄｅｌａｗａｒｅ）にはＨｉｔｃｈｎｅｒＢ１親株
の、低温に適応する生きた温度感受性突然変異体が開示
されており、この突然変異体はＣａＴｓと呼称される。
米国特許第５，１４９，５３０号（Ｄｕｐｈａｒ Ｉｎ
ｔ． Ｒｅｓ． Ｂ．Ｖ．）には、Ｕｌｓｔｅｒ ２Ｃ
株に由来する株ＮＤＷが開示されている。更に米国特許
第５，１８８，５０２号（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ
Ｇｅｏｒｇｉａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔ
ｉｏｎ， Ｉｎｃ．）には、呼吸性疾患の徴候を示して
いないシチメンチョウの腸管から単離した、自然に弱毒
化したＮＤＶ株が開示されている。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明はその一構成にお
いて、Ｃ２と呼称される新規なＮＤＶ株を提供し、この
株は１９９５年７月２６日付でＩｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｐ
ａｓｔｅｕｒ， ２５Ｒｕｅ ｄｕ Ｄｏｃｔｅｕｒ
Ｒｏｕｘ， Ｐａｒｉｓ， ＦｒａｎｃｅのＣＮＣＭに
受託番号第Ｉ−１６１４号の下に寄託してある。本発明
によるウイルス株は、既存のＮＤＶ（ワクチン）株とは
異なり気道内でも、またその他の器官においても予防接
種反応を惹起せず、しかも強固な免疫応答を誘起し得
る。

【０００８】実施例１に述べた実験によって、特許請求
したＮＤＶ株と既存のＮＤＶワクチン株との相違点を、
特許請求したＮＤＶ株の好ましい予防接種特性と共に詳
述する。

【０００９】本発明は別の構成において、上記新規なＮ
ＤＶ Ｃ２株のウイルスを医薬に許容可能なキャリヤま
たは稀釈剤と共に含有する、家禽をＮＤから防御するの
に用いるワクチンも提供する。

【００１０】

【発明の実施の形態】ＮＤＶ Ｃ２株のウイルスは生き
たウイルスとして、または不活化したウイルスとしてワ
クチンに含有させ得る。

【００１１】ＮＤＶ Ｃ２株のウイルスは、寄託ウイル
スに由来するウイルス、及び例えば孵化卵や細胞培養に
おける連続継代（ｓｅｒｉａｌ ｐａｓｓａｇｉｎｇ）
により寄託ＮＤＶ Ｃ２株から派生させた子孫ウイルス
を含む。

【００１２】本発明によるワクチンに含有させるべきＣ
２株のＮＤＶウイルスは通常の方法で取得可能である。
手短に言えば、感受性基質（ｓｕｂｓｔｒａｔｅ）にＮ
ＤＶＣ２ウイルスを接種し、これを前記ウイルスが所望
の力価に複製されるまで増殖させ、その後ＮＤＶ含有物
質を回収する。

【００１３】ニワトリ胚線維芽細胞（ＣＥＦ）やニワト
リ腎細胞（ＣＫ）といった一次（鳥類）細胞培養、また
はＶＥＲＯ細胞系や幼体ハムスター腎（ＢＨＫ）細胞系
といった哺乳動物細胞系を含めた、ＮＤウイルスの複製
を支持し得るあらゆる基質が本発明に使用可能である。

【００１４】好ましくは、ＮＤＶ Ｃ２ウイルスは孵化
鶏卵において増殖させる。

【００１５】上記のようなＮＤウイルスをその上で増殖
させる基質は特にＳＰＦ孵化卵である。孵化卵には、例
えば少なくとも１０^2.0 ＥＩＤ₅₀を含むＮＤＶ含有尿
膜腔液（ａｌｌａｎｔｏｉｃ ｆｌｕｉｄ）を卵１個に
つき０．２ｍｌ接種し得る。好ましくは、９〜１２日齢
の孵化卵に約１０^5.0 ＥＩＤ₅₀を接種し、その後３７
℃で２〜４日間インキュベートする。２〜４日後、ＮＤ
ウイルス生成物を好ましくは尿膜腔液の収集によって回
収する。その後、収集した液を２５００×ｇで１０分間
遠心し、続いて上清をフィルター（１００μｍ）で濾過
し得る。

【００１６】生きたウイルスを含有する本発明によるワ
クチンは、懸濁液の形態でかまたは凍結乾燥状態で製造
及び販売可能であり、該ワクチンのような組成物に通常
用いられる、医薬に許容可能なキャリヤまたは稀釈剤を
も含有する。キャリヤには、安定剤、防腐剤及び緩衝剤
が含まれる。適当な安定剤は、例えばＳＰＧＡ、炭水化
物（ソルビトール、マンニトール、澱粉、スクロース、
デキストラン、グルタメートまたはグルコースなど）、
タンパク質（粉乳血清、アルブミンまたはカゼインな
ど）、またはこれらの分解生成物である。適当な緩衝剤
は、例えばアルカリ金属リン酸塩である。適当な防腐剤
はチメロサール、メルチオラート及びゲンタマイシンで
ある。稀釈剤には水、水性緩衝液（緩衝食塩水など）及
びポリオール（グリセロールなど）が含まれる。

【００１７】所望であれば、本発明による生ワクチンに
アジュバントを含有させることも可能である。

【００１８】本発明による生ワクチンは注射可能である
が、好ましくはＮＤ予防接種に通常用いられる安価な大
量適用技術によって投与する。前記技術には飲料水接種
及び噴霧接種が含まれる。本発明のワクチンウイルスは
きわめて弱毒性であるので、ワクチンを噴霧投与するこ
とが特に推奨される。

【００１９】飲料水経由の投与では通常動物に、ワクチ
ン含有水を与える約２〜４時間前から水を与えずにお
く。この投与法では、給水器に総ての鳥が平等に水を飲
める十分なスペースが有ることが重要である。ワクチン
は新鮮な飲料水中に、個々の鳥に十分な量を投与するべ
く算出した濃度で適用する。

【００２０】飲料水中に少量の塩素、鉄、亜鉛または銅
イオンが存在することによって生存ワクチンウイルスが
激減するのを防止するべく、好ましくはワクチン含有水
に脱脂乳（粉末）などの保護剤を添加する。

【００２１】粗噴霧投与及びエアゾル投与を含む噴霧法
では、生ＮＤウイルスワクチンを液体小粒子に封入して
投与する。粗噴霧法の粒子は普通１０〜１００μｍの初
期液滴寸法を有し、エアゾル投与法の液滴は普通１μｍ
未満から５０μｍである。

【００２２】（水道）水粒子の乾燥（ｄｅｓｉｃｃａｔ
ｉｏｎ）の結果として溶解塩の濃度が上昇することによ
る生きたワクチンウイルスの不活化を防止するべく、水
性相に少量の脱脂乳、脱脂粉乳またはゼラチンといった
タンパク質保護剤を添加し得る。

【００２３】小粒子の発生には、市販の背負い噴霧機、
孵化場噴霧機及びアトミスト（ａｔｏｍｉｓｔ）噴霧機
などの通常の噴霧装置及びエアゾル発生機を用い得る。
飲料水接種も通常の装置を用いて可能である。通常の噴
霧／エアゾル接種及び飲料水接種についての詳細は、Ｇ
ｅｚｏｎｄｈｅｉｄｓｄｉｅｎｓｔ ｖｏｏｒ Ｐｌｕ
ｉｍｖｅｅ， Ｄｏｏｒｎ， オランダによって発行さ
れたｖａｎ Ｅｃｋ等の“Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ， ａ
ｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｕｌｔｒｙ
ｖａｃｃｉｎｅｓ，” ＶＩ−ＶＩＩ， １９８８に見
出され得る。

【００２４】生ワクチンを投与する他の方法に、点眼投
与及びくちばし浸漬（ｂｅａｋ ｄｉｐｐｉｎｇ）投与
などが有る。

【００２５】本発明は更に別の構成において、Ｃ２株の
ＮＤウイルスを不活化形態で含有するワクチンも提供す
る。不活化ワクチンの主な利点は、長期間持続する感染
防御抗体をきわめて高レベルに生成させ得ることであ
る。

【００２６】増殖ステップ後に回収したＮＤウイルスを
不活化する目的は、ウイルスの再生産を排除することで
ある。この目的は通常、化学的または物理的手段で達成
可能である。化学的不活化は、ウイルスを例えば酵素、
ホルムアルデヒド、β−プロピオラクトン、エチレン−
イミン、またはこれらの誘導体で処理することによって
行ない得る。必要であれば、不活化化合物はあとで中和
する。例えば、ホルムアルデヒドで不活化した物質はチ
オスルフェートまたはメタ重亜硫酸ナトリウムで中和し
得る。物理的不活化は好ましくは、ウイルスを紫外線、
Ｘ線またはγ線といった高エネルギー放射線に曝露する
ことによって実施可能である。所望であれば、ｐＨは処
理後に約７の値に戻し得る。

【００２７】不活化ＮＤウイルスを含有するワクチン
は、例えば先に述べた医薬に許容可能なキャリヤまたは
稀釈剤のうちで不活化ワクチンの製造に適するものを１
種以上含有し得る。

【００２８】好ましくは、本発明による不活化ワクチン
はアジュバント活性を有する化合物を１種以上含有す
る。本発明による不活化ワクチンに含有させるのに適し
た化合物または組成物には、水酸化アルミニウム、リン
酸アルミニウムまたは酸化アルミニウム、例えばＢａｙ
ｏｌ Ｆ（登録商標）やＭａｒｃｏｌ ５２（登録商
標）といった鉱油またはビタミンＥ酢酸エステルなどの
植物油を主材とする水中油型または油中水型エマルショ
ン、及びサポニン類が含まれる。

【００２９】本発明によるワクチンは活性成分として有
効量のＮＤＶ Ｃ２ウイルス、即ち予防接種を受けた鳥
において有毒なＮＤウイルスの攻撃に対する免疫を誘起
する量の免疫ＮＤＶ物質を含有する。本明細書中で「免
疫」とは、予防接種を受けた鳥の集団において予防接種
を受けていない鳥のグループよりはるかに高レベルの防
御を誘起することと定義する。

【００３０】典型的には、本発明による生ワクチンは動
物１匹当たり１０^3.0〜１０^8.0 ５０％胚感染量、好ま
しくは１０^5.0〜１０^7.0 ＥＩＤ₅₀の量で投与し得る。

【００３１】不活化ワクチンは動物１匹当たり１０^4.0
〜１０^9.0 ＥＩＤ₅₀、好ましくは１０^6.0〜１０^8.0
ＥＩＤ₅₀の抗原同等物を含有し得る。

【００３２】不活化ワクチンは非経口的に、例えば筋肉
内または皮下投与する。

【００３３】本発明によるワクチンはニワトリに有効に
用い得るが、シチメンチョウ、ホロホロチョウ及びウズ
ラ（ｐａｒｔｒｉｄｇｅｓ）など、他の家禽を本発明の
ワクチンで有効に予防接種することも可能である。ニワ
トリにはブロイラー、繁殖鶏及び産卵鶏が含まれる。

【００３４】ＮＤＶ Ｃ２ウイルスが弱毒性であるため
に、本発明によるワクチンは孵化直後、即ち１日齢から
鳥に投与可能である。本発明のワクチンは一次予防接種
用ワクチンとして用い得、所望であればその後同じかま
たは異なるＮＤＶワクチンで１回以上の二次予防接種
（ブースター予防接種）を行なう。重大な予防接種反応
を惹起することなく所望レベルの防御を達成するために
は本発明によるワクチンを、Ｃｌｏｎｅ ３０（登録商
標）、Ｌａ Ｓｏｔａ、Ｈｉｔｃｈｎｅｒ Ｂ１という
ように逐次より有毒なウイルスを段階的に用いることを
含む予防接種プログラムにか、または弱毒性生ウイルス
ワクチンの投与に始まり、その後不活化ワクチンの投与
を行なうプログラムに組み込むことが特に適当である。

【００３５】一例として、ブロイラーは１日齢で予防接
種し、その後１４〜２１日齢で二次免疫し得る。産卵鶏
または繁殖鶏は１〜１０日齢で予防接種し、その後２６
〜３８日齢及び１０〜１２週齢でブースター予防接種し
得る。

【００３６】本発明は、ＮＤＶ Ｃ２株のウイルスに加
えて、家禽に感染する他の病原体に由来する１種以上の
免疫原を含有するワクチンも含有する複合ワクチン（ｃ
ｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｖａｃｃｉｎｅｓ）も包含す
る。

【００３７】好ましくは、上記複合ワクチンは伝染性気
管支炎ウイルス（ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｂｒｏｎｃｈ
ｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ； ＩＢＶ）、伝染性ファブリキ
ウス嚢病ウイルス（ＩＢＤＶ）、ニワトリ貧血物質（ｃ
ｈｉｃｋｅｎ ａｎｅｍｉａａｇｅｎｔ； ＣＡＡ）ま
たはレオウイルスのワクチン株１種以上を付加的に含有
する。

【００３８】ＮＤ予防接種及びワクチン製造については
あらゆる点に関する包括的な説明が、Ａｌｌａｎ等，
ＦＡＯ Ａｎｉｍａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ
Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｉｅｓ Ｎｏ．１０， ＦＡ
Ｏ， Ｒｏｍｅ， １９７８；Ｇ． Ｍ． Ｃｒｏｓ
ｓ， Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ Ｄｉｓｅａｓｅ， Ｄ．
Ｊ． Ａｌｅｘａｎｄｅｒ（ｅｄ．）， ｐｐ．３３３
−３４６， Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄ． Ｐｕｂｌｉ
ｃ．， Ｂｏｓｔｏｎ， １９８８； 及びＭｅｕｌｅ
ｍａｎｓ， 上掲書， Ｄ． Ｊ． Ａｌｅｘａｎｄｅ
ｒ（ｅｄ．）， ｐｐ．３１８−３３２， １９８８に
開示されている。

【００３９】

【実施例】実施例１ ＮＤＶ Ｃ２ワクチンの安全性 １．１． 弱毒ＮＤＶ株のＨｉｔｃｈｎｅｒ Ｂ１及び
Ｃ２に対する呼吸性反応に関する比較を標準化した条件
（Ｊ． Ｈ． Ｈ． ｖａｎ Ｅｃｋ等， Ａｖｉａｎ
Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ２０， ｐｐ．４９７−５０
７， １９９１）下に、ワクチンをエアゾル適用し、そ
の後有毒大腸菌Ｅ． ｃｏｌｉ ｂａｃｉｌｌｉ （５
０６株； Ｏ７８０Ｋ８０）を気管内接種した後の体重
増加、死亡率、及び大腸菌病（ｃｏｌｉｂａｃｉｌｌｏ
ｓｉｓ）に対する感受性に基づいて行なった。

【００４０】実験方法 ＳＰＦ−ＷＬ雌鳥のＮＤＶ Ｈｉｔｃｈｎｅｒ Ｂ１株
に対する呼吸性反応をＮＤＶ Ｃ２株に対する呼吸性反
応と比較した。： ０日目： 雛の孵化： ＳＰＦ−ＷＬ雛（Ｉｎｔｅｒｖ
ｅｔ， Ｂｏｘｍｅｅｒ）。実験では雌鳥のみを用い
た。； １日目： 鳥を個別に計量した。平均体重にさほど差の
無い三つのグループを形成した。各グループは３０〜３
４羽のニワトリから成った。非特異的死亡率に関して補
正したグループの大きさを表１に示す。二つのニワトリ
グループを各一方のＮＤＶ株の標準化エアゾルに曝露
し、一方第三のグループにはペプトンのエアゾルを与え
た（プラシーボグループ）。エアゾルへの曝露の直後、
３グループを類似の負圧アイソレーターに別々に収容し
た。； ８日目： 生存している鳥を個別に計量した。その後、
総てのニワトリに有毒大腸菌を気管内接種した。； １５日目： 再び全グループの生存雛を個別に計量し、
剖検し、大腸菌病病変を配点評価した。

【００４１】ニワトリを毎日検査し、死んだ雛は総て肉
眼的に調べた。気道及び大腸菌病病変には特に注意し
た。大腸菌病病変は胸気嚢、心膜及び肝臓において評価
した。鳥１羽当たりの最高点は１２とした。１グループ
当たりの平均病変点を計算した。

【００４２】ワクチン接種反応指数（ｖａｃｃｉｎａｌ
ｒｅａｃｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘ；ＶＲＩ）は、予防接
種に起因する体重損失に基づく。ＶＲＩは０〜１０であ
る。１日目から８日目までをカバーするＶＲＩ（ＶＲＩ
１）及び１日目から１５日目までをカバーするＶＲＩ
（ＶＲＩ２）を計算した。ＶＲＩ１はワクチンの成長抑
制及び死亡誘発潜在能（ｐｏｔｅｎｃｙ）を表わし、Ｖ
ＲＩ２はそのうえ大腸菌病に対する感受性を増大させる
潜在能をも表わす。

【００４３】結果 臨床検査 実験の最初の８日間、ペプトングループのニワトリは疾
患の臨床徴候を示さず、ＮＤＶ Ｃ２で予防接種したグ
ループの鳥もまたそうであった。ＮＤＶ Ｈｉｔｃｈｎ
ｅｒ Ｂ１ワクチンに曝露した鳥では、曝露から２〜３
日間きわめて重大な呼吸性反応が観察された。総ての鳥
が口を開いて呼吸し、その様子は首を伸ばしての喘ぎ
（ｓｎａｐｐｉｎｇ ａｔ ｂｒｅａｔｈ）に変わっ
た。

【００４４】大腸菌接種から２日後、ＮＤＶ Ｈｉｔｃ
ｈｎｅｒ Ｂ１で予防接種した生存鳥ではポンピング呼
吸（ｐｕｍｐｉｎｇ ｂｒｅａｔｈｉｎｇ）が観察され
た。ＮＤＶ Ｃ２株に曝露したグループでは大腸菌接種
後数羽の鳥のみが軽微な呼吸性徴候を示した。

【００４５】死亡率、体重及び病変評点 特異的死亡率、体重及び病変評点を表１に示す。Ｈｉｔ
ｃｈｎｅｒ Ｂ１株で予防接種したグループでは６３％
の鳥がエアゾルへの曝露後最初の８日の間に死亡し、か
つ残りの鳥の９１％が大腸菌の気管内接種後に死亡した
が、ＮＤＶ Ｃ２株接種グループ及びペプトングループ
に死亡した鳥はいなかった。

【００４６】ＮＤＶ Ｈｉｔｃｈｎｅｒ Ｂ１ワクチン
株で予防接種したグループでは、８日齢と１５日齢との
両方における体重、並びに平均病変評点、及び大腸菌病
病変を有するニワトリのパーセンテージに対する負の影
響が観察されたが、ただし１５日齢において測定できた
のは１羽の生存ニワトリの値のみであった。

【００４７】ＮＤＶ Ｃ２予防接種は、８日齢または１
５日齢での体重増加にも、大腸菌病病変の出現率及び重
篤度にも全く／ほとんど影響しなかった。

【００４８】ワクチン接種反応指数 ＶＲ指数を表２に示す。ＮＤＶ Ｃ２で予防接種したグ
ループでは、ＶＲＩ１もＶＲＩ２も非常に小さかった。

【００４９】他方、ＮＤＶ Ｈｉｔｃｈｎｅｒ Ｂ１株
で予防接種したグループのＶＲＩ１及びＶＲＩ２はきわ
めて大きかった。

【００５０】ＮＤＶ Ｃ２株は呼吸性反応に関して安全
である。ＮＤＶ ＨｉｔｃｈｎｅｒＢ１株によって重篤
な呼吸困難と、大腸菌病に対する高い感受性とを誘発さ
れたニワトリにおいてさえ、ＮＤＶ Ｃ２株は有害な反
応をほとんど惹起しなかった。

【００５１】

【表１】

【００５２】

【表２】

【００５３】実施例２ ウイルス同定 ２．１． ： 溶離時間 ＮＤＶの赤血球（ＲＢＣ）凝集能はＨＮタンパク質の、
ＲＢＣの表面に存在する受容体への結合に依拠する。酵
素ノイラミニダーゼはＨＮ分子の一部でもあり、パラミ
クソウイルス属を構成する全ウイルスに存在する。前記
酵素の保有がもたらす明らかな結果の一つに、凝集した
ＲＢＣが徐々に溶離されること（ｇｒａｄｕａｌ ｅｌ
ｕｔｉｏｎ）が有る。ＮＤＶによって凝集したニワトリ
ＲＢＣの溶離速度は、溶離を急速に生起させるか緩慢に
生起させるかでＮＤＶ分離株を大まかにグループ分けす
るのに用いられている（Ｊ． Ｓｐａｌａｔｉｎ等，
Ａｖｉａｎ Ｄｉｓｅａｓｅｓ １４， ｐｐ．５４２
−５４９， １９７０）。

【００５４】ＮＤＶ Ｈｉｔｃｈｎｅｒ Ｂ１株、ＮＤ
Ｖ Ｃ２株、ＮＤＷ株またはＣａＴｓ株によって凝集し
たニワトリＲＢＣの溶離速度を測定した。次の結果が得
られた。

【００５５】

【表３】

【００５６】２．２．： モノクローナル抗体ＡＶＳ−
１との反応 モノクローナル抗体は抗原の、（エピトープと呼ばれ
る）普通非常に小さい領域に対するものであり、即ちき
わめて特異的である。この特異性を用いて各ウイルス間
の類似性または相違性を、当該ウイルスが有する、上記
のような抗体と反応する能力に基づいて示すことができ
る。

【００５７】十分に特性解明されたＮＤＶモノクローナ
ル抗体の一つであるＡＶＳ−１と幾つかのＮＤＶ株との
反応性を、血球凝集抑制（ＨＩ）試験を用いて評価し
た。

【００５８】ＨＩ試験は標準的な操作に従い、マイクロ
タイトレーションプレートにおいて１ウェル当たり８Ｈ
ＡＵを用いて行なった。

【００５９】モノクローナル抗体ＡＶＳ−１は、ＨＩ試
験において市販のＨｉｔｃｈｎｅｒＢ１及びＬａ Ｓｏ
ｔａ株ワクチンと特異的に、かつ大規模に反応すること
が過去にＳｒｉｎｉｖａｓａｐｐａ等によってＡｖｉａ
ｎ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ３０， ｐｐ．５６２−５６
７， １９８６に示された。

【００６０】

【表４】

【００６１】表３及び表４の結果から、ＮＤＶ Ｃ２株
はＣａＴｓ、Ｈｉｔｃｈｎｅｒ Ｂ１及びＮＤＷとは異
なる特性を有するという結論を導くことができる。

【００６２】実施例３ ＮＤＶ Ｃ２ワクチンの効力 ＮＤＶ Ｃ２ウイルスを、稀釈液０．１ｍｌ中に約３〜
４ｌｏｇｓ ＥＩＤ₅₀のウイルスが存在するように稀釈
し、これを２００個の１０〜１２日齢ＳＰＦ胚に接種し
た。胚を３７℃で放置した。接種から４日後、胚を明か
りに透かして検査し（ｃａｎｄｌｅｄ）、生きている胚
を総て４℃で２時間放置した。その後、尿膜腔液を回収
した。総量１３４０ｍｌの尿膜腔液を６６０ｍｌの安定
剤と混合した。これを１５分間混合し、その後１０ｍｌ
容のガラス製バイアルに、バイアル１個に２ｍｌずつ入
れた。次に、バイアルを凍結乾燥した。

【００６３】ワクチンの免疫原性を確認するために、１
日齢ＳＰＦニワトリを用いて点眼免疫（Ａ）及び噴霧免
疫（Ｂ）を行なった。予防接種及び攻撃（ｃｈａｌｌｅ
ｎｇｅ）のプロトコルについては表５及び７を参照され
たい。予防接種の２８日後に行なった攻撃には有毒ＮＤ
Ｖ株Ｔｅｘａｓ−ＧＢを用いた。攻撃後の１４日間、総
てのニワトリにおいてＮＤＶ感染の徴候が観察された。
前記徴候には神経性振戦（ｎｅｒｖｏｕｓ ｔｒｅｍｏ
ｒｓ）、麻痺または死亡が含まれた。これらの徴候を一
つ以上示したニワトリは総て、防御されていないと看做
した。

【００６４】Ａ．点眼予防接種の効力

【００６５】

【表５】

【００６６】

【表６】

【００６７】Ｂ．噴霧予防接種の効力

【００６８】

【表７】

【００６９】

【表８】

【００７０】ＮＤＶ Ｃ２で予防接種したニワトリでＴ
ｅｘａｓ−ＧＢ感染の徴候を示したものは全く無い（点
眼予防接種）か、または３２羽中１羽のみ（噴霧予防接
種）であった。予防接種しなかった対照ニワトリは総て
Ｔｅｘａｓ−ＧＢ感染の徴候を示した。

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｐａｓｔｅｕｒ，
   Ｐａｒｉｓ， ＦｒａｎｃｅのＣＮＣＭに受託番号第
   Ｉ−１６１４号の下に寄託されたＮＤＶ Ｃ２株のウイ
   ルス。
2. 【請求項２】 Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｐａｓｔｅｕｒ，
   Ｐａｒｉｓ， ＦｒａｎｃｅのＣＮＣＭに受託番号第
   Ｉ−１６１４号の下に寄託されたＮＤＶ Ｃ２株のウイ
   ルスと、医薬に許容可能なキャリヤまたは稀釈剤とを含
   有する、家禽をニューカッスル病（ＮＤ）から防御する
   のに用いるワクチン。
3. 【請求項３】 ウイルスが生きた状態で用いられること
   を特徴とする請求項２に記載のワクチン。
4. 【請求項４】 動物１匹当たり１０^3.0〜１０^8.0 ＥＩ
   Ｄ₅₀を含むことを特徴とする請求項２または３に記載の
   ワクチン。
5. 【請求項５】 家禽に感染する１種以上の他の病原体に
   由来するワクチンをも含有することを特徴とする請求項
   ２から４のいずれか１項に記載のワクチン。
6. 【請求項６】 他の病原体がＩＢＶ、ＩＢＤＶ、ＣＡＡ
   ウイルス及びレオウイルスからなる群の中から選択され
   ることを特徴とする請求項５に記載のワクチン。
7. 【請求項７】 請求項１に記載のウイルスを調製する方
   法であって、 ａ．ウイルスを感受性基質に接種するステップ、 ｂ．ＮＤウイルスを増殖させるステップ、及び ｃ．ＮＤＶ含有物質を回収するステップ を含む方法。
8. 【請求項８】 ＮＤに対する家禽の防御に用いるワクチ
   ンを製造する方法であって、請求項７に記載の方法によ
   って得られる回収ＮＤＶ物質を医薬に許容可能なキャリ
   ヤまたは稀釈剤と組み合わせることを含む方法。
9. 【請求項９】 家禽のニューカッスル病を防除する方法
   であって、請求項２から６のいずれか１項に記載のワク
   チンを鳥に投与することを含む方法。