JPH0851974A - マレック病ウイルスワクチン - Google Patents
マレック病ウイルスワクチンInfo
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- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16311—Mardivirus, e.g. Gallid herpesvirus 2, Marek-like viruses, turkey HV
- C12N2710/16334—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 マレック病ウイルス（ＭＤＶ）の新規株、該
新規株を含むマレック病（ＭＤ）に対する家禽の防御用
ワクチン、及び該ワクチンの製造方法を提供する。 【解決手段】 超音波処理により感染細胞から放出した
際に、細胞含有ウイルス力価に比較した無細胞ウイルス
力価の低下が１００分の１以内であるマレック病ウイル
ス血清型Ｉの弱毒株。
新規株を含むマレック病（ＭＤ）に対する家禽の防御用
ワクチン、及び該ワクチンの製造方法を提供する。 【解決手段】 超音波処理により感染細胞から放出した
際に、細胞含有ウイルス力価に比較した無細胞ウイルス
力価の低下が１００分の１以内であるマレック病ウイル
ス血清型Ｉの弱毒株。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明はマレック病ウイルス
（ＭＤＶ）の新規株、及び該新規株を含むマレック病
（ＭＤ）に対する家禽の防御用ワクチンに関する。本発
明は更に前記ワクチンの製造方法にも関する。
（ＭＤＶ）の新規株、及び該新規株を含むマレック病
（ＭＤ）に対する家禽の防御用ワクチンに関する。本発
明は更に前記ワクチンの製造方法にも関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】マレッ
ク病は、ヘルペスウイルスの１種であるマレック病ウイ
ルスの感染に起因する悪性リンパ増殖性家禽疾患であ
る。ＭＤは遍在性であり、世界中の家禽生産国に発生し
ている。原因ウイルスは高伝染性であり、感受性ニワト
リに容易に蔓延する。集約生産系で飼育されているニワ
トリは不可避的にＭＤによる損害を蒙る。
ク病は、ヘルペスウイルスの１種であるマレック病ウイ
ルスの感染に起因する悪性リンパ増殖性家禽疾患であ
る。ＭＤは遍在性であり、世界中の家禽生産国に発生し
ている。原因ウイルスは高伝染性であり、感受性ニワト
リに容易に蔓延する。集約生産系で飼育されているニワ
トリは不可避的にＭＤによる損害を蒙る。
【０００３】ＭＤは約６週齢以降、最も多くの場合には
１２〜２４週齢のニワトリに罹病する。
１２〜２４週齢のニワトリに罹病する。
【０００４】古典的ＭＤ、急性ＭＤ及び一過性麻痺の３
種類のＭＤが臨床的に認められている。
種類のＭＤが臨床的に認められている。
【０００５】古典的ＭＤはリンパ球浸潤及び脱髄に起因
する末梢神経肥大を特徴とし、麻痺が主要な臨床徴候で
ある。死亡率は不定であるが、一般に１０〜１５％以下
である。
する末梢神経肥大を特徴とし、麻痺が主要な臨床徴候で
ある。死亡率は不定であるが、一般に１０〜１５％以下
である。
【０００６】急性形態では内臓臓器に多発散在リンパ腫
が発生する。この形態のＭＤの死亡率は一般に古典型よ
りも高い。ワクチン接種しない集団における発生率は通
常は１０〜３０％であり、発病が集団の７０％に達する
場合もある。古典的及び急性ＭＤの両者における病変は
ほぼ同一であり、悪性変換したＴリンパ芽球が増殖し、
古典的形態の場合には末梢神経で、急性形態の場合には
内臓臓器で正常組織に浸潤する。
が発生する。この形態のＭＤの死亡率は一般に古典型よ
りも高い。ワクチン接種しない集団における発生率は通
常は１０〜３０％であり、発病が集団の７０％に達する
場合もある。古典的及び急性ＭＤの両者における病変は
ほぼ同一であり、悪性変換したＴリンパ芽球が増殖し、
古典的形態の場合には末梢神経で、急性形態の場合には
内臓臓器で正常組織に浸潤する。
【０００７】更に、ＭＤＶは突発性麻痺を特徴とする幼
ニワトリの脳炎を誘発することが示されている。
ニワトリの脳炎を誘発することが示されている。
【０００８】ニワトリに検出されるＭＤ関連ウイルスに
は３種の異なる血清型が存在し、タイプＩはニワトリの
疾患の原因となる病原性且つ腫瘍原性の形態であり、高
毒性および低毒性形態と該形態から誘導される弱毒非病
原性株があり、タイプＩＩはＭＤＶの非病原性且つ非腫
瘍原性の株であり、タイプＩＩＩはニワトリに対して非
病原性のシチメンチョウヘルペスウイルス（ＨＶＴ）で
ある。
は３種の異なる血清型が存在し、タイプＩはニワトリの
疾患の原因となる病原性且つ腫瘍原性の形態であり、高
毒性および低毒性形態と該形態から誘導される弱毒非病
原性株があり、タイプＩＩはＭＤＶの非病原性且つ非腫
瘍原性の株であり、タイプＩＩＩはニワトリに対して非
病原性のシチメンチョウヘルペスウイルス（ＨＶＴ）で
ある。
【０００９】数種の実用マレック病ワクチンが開発され
ており、今日広く使用されている。最も初期のＭＤワク
チンの１種は、元々シチメンチョウから単離された血清
型ＩＩＩウイルスから構成されるものであった（Ｗｉｔ
ｔｅｒら，Ａｍ．Ｊ．Ｖｅｔ．Ｒｅｓ．，３１，５２５
−５３８，（１９７０））。ＨＶＴはＭＤに対するワク
チンとして広く使用されている。ＨＶＴは一般に細胞含
有調製物（ｃｅｌｌ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｅｐ
ａｒａｔｉｏｎ）として使用されているが、感染細胞か
ら実質的な量の無細胞ウイルスを抽出することができ、
無細胞ワクチンは米国特許第３，６４７，８６１号に記
載されている。
ており、今日広く使用されている。最も初期のＭＤワク
チンの１種は、元々シチメンチョウから単離された血清
型ＩＩＩウイルスから構成されるものであった（Ｗｉｔ
ｔｅｒら，Ａｍ．Ｊ．Ｖｅｔ．Ｒｅｓ．，３１，５２５
−５３８，（１９７０））。ＨＶＴはＭＤに対するワク
チンとして広く使用されている。ＨＶＴは一般に細胞含
有調製物（ｃｅｌｌ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｅｐ
ａｒａｔｉｏｎ）として使用されているが、感染細胞か
ら実質的な量の無細胞ウイルスを抽出することができ、
無細胞ワクチンは米国特許第３，６４７，８６１号に記
載されている。
【００１０】血清型ＩＩ ＭＤウイルスは天然に存在す
る非腫瘍原性ウイルスであり、従って、ワクチン接種し
たニワトリに腫瘍を誘発する虞れがない。従って、これ
らのウイルスは連続継代により人為的に弱毒化する必要
がなく、天然状態にあるため、毒性形態に復帰しない。
ＳＢ−１株（米国特許第４，１６０，０２４号）は最初
は細胞含有調製物として投与された。このようなワクチ
ンは実際に約−１９６℃の液体窒素中で貯蔵及び輸送す
る必要がある。この血清型ＩＩ株は単独では防御性が低
いことが判明しており、２種のウイルスを併用すると単
独よりも防御性が高いので、通常は２価ワクチンとして
ＨＶＴと混合投与される。この現象は「防御相乗作用」
と呼称される。
る非腫瘍原性ウイルスであり、従って、ワクチン接種し
たニワトリに腫瘍を誘発する虞れがない。従って、これ
らのウイルスは連続継代により人為的に弱毒化する必要
がなく、天然状態にあるため、毒性形態に復帰しない。
ＳＢ−１株（米国特許第４，１６０，０２４号）は最初
は細胞含有調製物として投与された。このようなワクチ
ンは実際に約−１９６℃の液体窒素中で貯蔵及び輸送す
る必要がある。この血清型ＩＩ株は単独では防御性が低
いことが判明しており、２種のウイルスを併用すると単
独よりも防御性が高いので、通常は２価ワクチンとして
ＨＶＴと混合投与される。この現象は「防御相乗作用」
と呼称される。
【００１１】ヨーロッパ特許出願第９０ ３１４２９７
号はＳＢ−１の無細胞形態を含むワクチンを記載してい
る。無細胞形態でもＳＢ−１株は単独ではさほど防御性
が高くないので、ＨＶＴと混合投与されている。
号はＳＢ−１の無細胞形態を含むワクチンを記載してい
る。無細胞形態でもＳＢ−１株は単独ではさほど防御性
が高くないので、ＨＶＴと混合投与されている。
【００１２】弱毒血清型Ｉ ＭＤＶを含むワクチンは数
種のものが開発されており、今日使用されている。
種のものが開発されており、今日使用されている。
【００１３】例えば国際公開第８５／０４５８８号は、
親ウイルスＭＤＶ ＣＶ１−９８８に由来する弱毒株を
記載している。この文献に記載されているワクチン調製
物はいずれもウイルスを細胞含有形態で含むものであっ
た。
親ウイルスＭＤＶ ＣＶ１−９８８に由来する弱毒株を
記載している。この文献に記載されているワクチン調製
物はいずれもウイルスを細胞含有形態で含むものであっ
た。
【００１４】米国特許出願第７／７２３，０３７号は弱
毒復帰血清型Ｉ ＭＤワクチンを記載している。このワ
クチンで使用されている株は無細胞ウイルスを生じな
い。
毒復帰血清型Ｉ ＭＤワクチンを記載している。このワ
クチンで使用されている株は無細胞ウイルスを生じな
い。
【００１５】このように、従来の全ての血清型Ｉワクチ
ンは細胞含有調製物として投与しなければならなかった
ため、液体窒素中で貯蔵及び輸送しなければならないと
いう欠点があった。ワクチンを適正に貯蔵又は取り扱わ
ないと、ウイルスの生育力が低下し、その結果、ワクチ
ン接種することができなくなる。液体窒素貯蔵を実施又
は使用できない国では、細胞含有ＭＤワクチンを使用す
ることは不可能である。
ンは細胞含有調製物として投与しなければならなかった
ため、液体窒素中で貯蔵及び輸送しなければならないと
いう欠点があった。ワクチンを適正に貯蔵又は取り扱わ
ないと、ウイルスの生育力が低下し、その結果、ワクチ
ン接種することができなくなる。液体窒素貯蔵を実施又
は使用できない国では、細胞含有ＭＤワクチンを使用す
ることは不可能である。
【００１６】更に、細胞含有調製物に懸濁されたＭＤＶ
を含む粒子はワクチンが沈殿し易いため、投与前に懸濁
液を均質化する必要がある。均質化が不十分であると、
ワクチン用量が不正確になり、ワクチン接種することが
できなくなる。更に、前記ワクチンは厳密に細胞含有種
であるため、物理的損耗の影響を受け易い。回収及び凍
結手順が最適でなかったり、孵卵場でのアンプルの融解
やワクチンの取り扱いが適正でないために感染細胞が損
傷すると、細胞の損傷や死滅を生じ、その結果、ワクチ
ン力価が低下する。
を含む粒子はワクチンが沈殿し易いため、投与前に懸濁
液を均質化する必要がある。均質化が不十分であると、
ワクチン用量が不正確になり、ワクチン接種することが
できなくなる。更に、前記ワクチンは厳密に細胞含有種
であるため、物理的損耗の影響を受け易い。回収及び凍
結手順が最適でなかったり、孵卵場でのアンプルの融解
やワクチンの取り扱いが適正でないために感染細胞が損
傷すると、細胞の損傷や死滅を生じ、その結果、ワクチ
ン力価が低下する。
【００１７】畜種がＭＤウイルスに自然暴露される結果
として及び／又は畜種に血清型Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩウイ
ルスをワクチン接種する結果として、商業用ヒナドリに
は全ＭＤウイルス血清型に対する母性由来抗体（ＭＤ
Ａ）が遍在する。このようなＭＤＡは子孫に伝達され、
ワクチン接種の効力を低下させる。
として及び／又は畜種に血清型Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩウイ
ルスをワクチン接種する結果として、商業用ヒナドリに
は全ＭＤウイルス血清型に対する母性由来抗体（ＭＤ
Ａ）が遍在する。このようなＭＤＡは子孫に伝達され、
ワクチン接種の効力を低下させる。
【００１８】血清型Ｉ及びＩＩ ＭＤＶに対するＭＤＡ
を抑制することは不可能であるが、ＨＶＴを含まないＭ
ＤＶワクチンを畜種集団に接種することにより血清型Ｉ
ＩＩＭＤＶ（即ちＨＶＴ）に対するＭＤＡを抑制するこ
とができ、その結果、ＨＶＴを含む１価、２価又は多価
ワクチンを接種したときに、その子孫をより良好に防御
することができる。このようなワクチン接種戦略は“交
替世代（ａｌｔｅｒｎａｔｅ ｇｅｎｅｒａｔｉｏ
ｎ）”ワクチン接種と言われる。しかしながら、液体窒
素貯蔵及び輸送設備を使用できない国では、使用可能な
唯一の凍結乾燥ＭＤＶワクチンはＨＶＴを含有している
ので、この交替世代ワクチン接種を実施するのは不可能
である。従って、凍結乾燥血清型Ｉ ＭＤＶワクチンが
必要とされている。
を抑制することは不可能であるが、ＨＶＴを含まないＭ
ＤＶワクチンを畜種集団に接種することにより血清型Ｉ
ＩＩＭＤＶ（即ちＨＶＴ）に対するＭＤＡを抑制するこ
とができ、その結果、ＨＶＴを含む１価、２価又は多価
ワクチンを接種したときに、その子孫をより良好に防御
することができる。このようなワクチン接種戦略は“交
替世代（ａｌｔｅｒｎａｔｅ ｇｅｎｅｒａｔｉｏ
ｎ）”ワクチン接種と言われる。しかしながら、液体窒
素貯蔵及び輸送設備を使用できない国では、使用可能な
唯一の凍結乾燥ＭＤＶワクチンはＨＶＴを含有している
ので、この交替世代ワクチン接種を実施するのは不可能
である。従って、凍結乾燥血清型Ｉ ＭＤＶワクチンが
必要とされている。
【００１９】血清型Ｉ ＭＤウイルスに関する初期研究
によると、ｐｆｕ（プラーク形成単位）として測定した
無細胞ウイルスの量はワクチン接種の目的に有用である
ためには不十分な力価であった（米国特許第４，８９
５，７１８号； Ｗｉｔｔｅｒ，Ｒ．Ｌ．ら，Ａｖｉａ
ｎ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ３１，８２９， １９８７；Ｐ
ｏｗｅｌｌ，Ｐ．Ｃ．， Ｗｏｒｌｄ’ｓ Ｐｏｕｌｔ
ｒｙ ＳｃｉｅｎｃｅＪｏｕｒｎａｌ ４２，２０５，
１９８６； Ｓｃｈａｔ，Ｋ．Ａ．， Ｉｎｔｅｒｎ
ｅｗｓ ３，１３， １９８９）。
によると、ｐｆｕ（プラーク形成単位）として測定した
無細胞ウイルスの量はワクチン接種の目的に有用である
ためには不十分な力価であった（米国特許第４，８９
５，７１８号； Ｗｉｔｔｅｒ，Ｒ．Ｌ．ら，Ａｖｉａ
ｎ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ３１，８２９， １９８７；Ｐ
ｏｗｅｌｌ，Ｐ．Ｃ．， Ｗｏｒｌｄ’ｓ Ｐｏｕｌｔ
ｒｙ ＳｃｉｅｎｃｅＪｏｕｒｎａｌ ４２，２０５，
１９８６； Ｓｃｈａｔ，Ｋ．Ａ．， Ｉｎｔｅｒｎ
ｅｗｓ ３，１３， １９８９）。
【００２０】
【課題を解決するための手段】ヒナドリ細胞培養で連続
継代により弱毒化後に大量の無細胞ウイルスを産生し、
従来使用されているどの血清型Ｉ ＭＤＶよりも高防御
性である血清型Ｉ ＭＤＶの新規株が発見された。その
結果、凍結乾燥血清型Ｉ ＭＤＶワクチンを製造するこ
とが可能になった。この株は、細胞含有時であっても、
現在入手可能な最良のＭＤＶ血清型Ｉワクチンよりも高
防御性であることが判明した。
継代により弱毒化後に大量の無細胞ウイルスを産生し、
従来使用されているどの血清型Ｉ ＭＤＶよりも高防御
性である血清型Ｉ ＭＤＶの新規株が発見された。その
結果、凍結乾燥血清型Ｉ ＭＤＶワクチンを製造するこ
とが可能になった。この株は、細胞含有時であっても、
現在入手可能な最良のＭＤＶ血清型Ｉワクチンよりも高
防御性であることが判明した。
【００２１】本発明の１態様によって提供されるマレッ
ク病ウイルス血清型Ｉの新規弱毒株は、超音波処理によ
り感染細胞から放出された際に無細胞ウイルス力価（ｃ
ｅｌｌ−ｆｒｅｅ ｖｉｒｕｓ ｔｉｔｒｅ）が細胞含
有ウイルス力価（ｃｅｌｌ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖ
ｉｒｕｓ ｔｉｔｒｅ）に比較して低下するが、その低
下した力価は最低でも細胞含有ウイルス力価の１００分
の１である。
ク病ウイルス血清型Ｉの新規弱毒株は、超音波処理によ
り感染細胞から放出された際に無細胞ウイルス力価（ｃ
ｅｌｌ−ｆｒｅｅ ｖｉｒｕｓ ｔｉｔｒｅ）が細胞含
有ウイルス力価（ｃｅｌｌ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖ
ｉｒｕｓ ｔｉｔｒｅ）に比較して低下するが、その低
下した力価は最低でも細胞含有ウイルス力価の１００分
の１である。
【００２２】好ましくは、弱毒株は無細胞ウイルス力価
の低下が５０分の１まで、最も好ましくは１０分の１ま
でである。当然のことながら、超音波処理後に無細胞ウ
イルス力価は細胞含有ウイルス力価に比較して低下しな
いことが望ましい。
の低下が５０分の１まで、最も好ましくは１０分の１ま
でである。当然のことながら、超音波処理後に無細胞ウ
イルス力価は細胞含有ウイルス力価に比較して低下しな
いことが望ましい。
【００２３】本発明のＭＤＶ血清型Ｉの弱毒無細胞株
は、ブダペスト条約に基づき、１９９４年６月２４日付
けで英国、Ｐｏｒｔｏｎ Ｄｏｗｎに所在のＥｕｒｏｐ
ｅａｎＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃ
ｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓに寄託し、受託番号Ｖ９４０
６２２１１を付された。
は、ブダペスト条約に基づき、１９９４年６月２４日付
けで英国、Ｐｏｒｔｏｎ Ｄｏｗｎに所在のＥｕｒｏｐ
ｅａｎＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃ
ｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓに寄託し、受託番号Ｖ９４０
６２２１１を付された。
【００２４】本発明のＭＤＶ血清型Ｉの株の１種である
ＭＲ２２は、１９７１年に現場での集団から採取したバ
フィーコート細胞からのヒナドリ胚腎細胞培養で単離し
た。その後、ＳＰＦ（特定病原体を含まない）卵から調
製したヒナドリ胚繊維芽細胞（ＣＥＦ）細胞培養で１８
代継代した。この単離株を二次ＣＥＦ細胞で更に２代継
代した後、Ｓ．Ｐ．Ｇ．Ａ．安定剤の存在下で感染細胞
を超音波処理することにより無細胞調製物を作成した
（Ｂｏｖａｒｎｉｋら，Ｊ．Ｂａｃｔ．， ５９，５０
９， １９５０）。
ＭＲ２２は、１９７１年に現場での集団から採取したバ
フィーコート細胞からのヒナドリ胚腎細胞培養で単離し
た。その後、ＳＰＦ（特定病原体を含まない）卵から調
製したヒナドリ胚繊維芽細胞（ＣＥＦ）細胞培養で１８
代継代した。この単離株を二次ＣＥＦ細胞で更に２代継
代した後、Ｓ．Ｐ．Ｇ．Ａ．安定剤の存在下で感染細胞
を超音波処理することにより無細胞調製物を作成した
（Ｂｏｖａｒｎｉｋら，Ｊ．Ｂａｃｔ．， ５９，５０
９， １９５０）。
【００２５】上記のように得たＭＲ２２株は、モノクロ
ーナル抗体２０９２及び４８５９とは反応したが、血清
型ＩＩ及びＩＩＩウイルスと反応するモノクローナル抗
体とは反応しなかったことから、ＭＤＶ血清型Ｉウイル
スであることが判明した。これらの抗体は、Ｌｅｅ，
Ｌ．Ｆ．， Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１３０，１０
０３−１００６，（１９８３）及びＳｉｌｖａとＬｅ
ｅ， Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，１３６，３０７−３２０，
（１９８４）に記載されているように調製及び使用し
た。表１は、特異的モノクローナル抗体に対する種々の
ＭＤＶ株／血清型を使用した蛍光抗体試験の結果を示
す。
ーナル抗体２０９２及び４８５９とは反応したが、血清
型ＩＩ及びＩＩＩウイルスと反応するモノクローナル抗
体とは反応しなかったことから、ＭＤＶ血清型Ｉウイル
スであることが判明した。これらの抗体は、Ｌｅｅ，
Ｌ．Ｆ．， Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１３０，１０
０３−１００６，（１９８３）及びＳｉｌｖａとＬｅ
ｅ， Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，１３６，３０７−３２０，
（１９８４）に記載されているように調製及び使用し
た。表１は、特異的モノクローナル抗体に対する種々の
ＭＤＶ株／血清型を使用した蛍光抗体試験の結果を示
す。
【００２６】
【表１】
【００２７】表２は、感染ヒナドリ胚繊維芽細胞を安定
剤ＳＰＧＡの存在下で超音波処理した際に得られる無細
胞ＭＲ２２ウイルスの量が他の利用可能な血清型Ｉ株よ
りも著しく多いことを示す。
剤ＳＰＧＡの存在下で超音波処理した際に得られる無細
胞ＭＲ２２ウイルスの量が他の利用可能な血清型Ｉ株よ
りも著しく多いことを示す。
【００２８】
【表２】
【００２９】ＭＲ２２株を更にニワトリで継代した後、
ウイルスを単離し、ＣＥＦで２代継代した後、ウイルス
を無細胞ウイルスとしてニワトリで継代した。再単離
後、ウイルスをＣＥＦ（＝ＭＳＶ、マスターシードウイ
ルス）で更に６代継代した。ウイルスが大量の無細胞ウ
イルスを放出する能力を別々の実験で数回試験した。
ウイルスを単離し、ＣＥＦで２代継代した後、ウイルス
を無細胞ウイルスとしてニワトリで継代した。再単離
後、ウイルスをＣＥＦ（＝ＭＳＶ、マスターシードウイ
ルス）で更に６代継代した。ウイルスが大量の無細胞ウ
イルスを放出する能力を別々の実験で数回試験した。
【００３０】
【表３】
【００３１】大量の無細胞ウイルスを生じる別のＭＤＶ
血清型Ｉ株は、８０年代の中頃に英国で健常集団から単
離された株であるＶｉｃｔｏｒｉａ １０である。この
ウイルスをニワトリ腎細胞（ＣＫ）で１０代、ＣＥＦで
１８代継代した。無細胞ウイルス収率の変化を以下に示
す。
血清型Ｉ株は、８０年代の中頃に英国で健常集団から単
離された株であるＶｉｃｔｏｒｉａ １０である。この
ウイルスをニワトリ腎細胞（ＣＫ）で１０代、ＣＥＦで
１８代継代した。無細胞ウイルス収率の変化を以下に示
す。
【００３２】
【表４】
【００３３】ＭＲ２２、Ｖｉｃｔｏｒｉａ １０又はそ
の他のＭＤＶ血清型Ｉ株はこのように大量の無細胞ウイ
ルスを生じるので、凍結乾燥ワクチン製剤を製造するこ
とができ、ワクチンを液体窒素中で貯蔵及び輸送する必
要がないという利点がある。これまでに凍結乾燥血清型
Ｉ ＭＤＶワクチンの製造は成功していなかった。
の他のＭＤＶ血清型Ｉ株はこのように大量の無細胞ウイ
ルスを生じるので、凍結乾燥ワクチン製剤を製造するこ
とができ、ワクチンを液体窒素中で貯蔵及び輸送する必
要がないという利点がある。これまでに凍結乾燥血清型
Ｉ ＭＤＶワクチンの製造は成功していなかった。
【００３４】ワクチン製造の目的でＭＲ２２株を増殖さ
せるには、ＣＥＦ細胞を播種した回転培養物に上記のよ
うにして得た細胞含有又は無細胞ウイルスを接種する。
数日間のインキュベーション期間後、上清培地を廃棄
し、トリプシン−ベルセン混合物で細胞を剥がした後、
細胞を遠心分離により沈殿させ、上清を廃棄する。
せるには、ＣＥＦ細胞を播種した回転培養物に上記のよ
うにして得た細胞含有又は無細胞ウイルスを接種する。
数日間のインキュベーション期間後、上清培地を廃棄
し、トリプシン−ベルセン混合物で細胞を剥がした後、
細胞を遠心分離により沈殿させ、上清を廃棄する。
【００３５】無細胞ウイルスを調製するには、沈殿した
細胞を緩衝液、例えばリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）
又は好ましくは、安定剤、最適にはＳＰＧＡを含有する
媒質に懸濁する。
細胞を緩衝液、例えばリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）
又は好ましくは、安定剤、最適にはＳＰＧＡを含有する
媒質に懸濁する。
【００３６】細胞破壊は数種の方法で実施することがで
き、例えば超音波処理又は凍結融解を用いる。無傷の細
胞の存在は、血球計で検査することにより決定すること
ができる。超音波処理又は迅速凍結した調製物をバイア
ルに充填した後、ＥＤＴＡの任意存在下で凍結乾燥す
る。場合により、凍結乾燥前に細胞破片を濾過又は遠心
分離により除去する。
き、例えば超音波処理又は凍結融解を用いる。無傷の細
胞の存在は、血球計で検査することにより決定すること
ができる。超音波処理又は迅速凍結した調製物をバイア
ルに充填した後、ＥＤＴＡの任意存在下で凍結乾燥す
る。場合により、凍結乾燥前に細胞破片を濾過又は遠心
分離により除去する。
【００３７】上記方法により得られた無細胞血清型Ｉ
ＭＤＶを生又は不活化ウイルスとしてワクチンに組み込
む。
ＭＤＶを生又は不活化ウイルスとしてワクチンに組み込
む。
【００３８】生ウイルスを含有するワクチンを懸濁液形
態で製造及び市販してもよいし、凍結乾燥してもよい。
態で製造及び市販してもよいし、凍結乾燥してもよい。
【００３９】凍結乾燥ワクチンは好ましくは１種以上の
安定剤を含有する。適切な安定剤としては例えばＳＰＧ
Ａ、炭水化物（例えばソルビトール、マンニトール、澱
粉、デキストラン又はグルコース）、タンパク質（例え
ばアルブミン又はカゼイン）又はその分解産物、及び緩
衝剤（例えばアルカリ金属リン酸塩）が挙げられる。所
望に応じて、アジュバント活性をもつ１種以上の化合物
をも、添加できる。この目的に適切な化合物としては、
ビタミンＥ酢酸ｏ／ｗエマルジョン、水酸化アルミニウ
ム、リン酸アルミニウム、酸化アルミニウム、鉱油（例
えばＢａｙｏｌＦ及びＭａｒｃｏｌ ５２［登録商
標］）及びサポニンが挙げられる。
安定剤を含有する。適切な安定剤としては例えばＳＰＧ
Ａ、炭水化物（例えばソルビトール、マンニトール、澱
粉、デキストラン又はグルコース）、タンパク質（例え
ばアルブミン又はカゼイン）又はその分解産物、及び緩
衝剤（例えばアルカリ金属リン酸塩）が挙げられる。所
望に応じて、アジュバント活性をもつ１種以上の化合物
をも、添加できる。この目的に適切な化合物としては、
ビタミンＥ酢酸ｏ／ｗエマルジョン、水酸化アルミニウ
ム、リン酸アルミニウム、酸化アルミニウム、鉱油（例
えばＢａｙｏｌＦ及びＭａｒｃｏｌ ５２［登録商
標］）及びサポニンが挙げられる。
【００４０】当然のことながら、本明細書中に特定する
ＭＤＶ血清型Ｉ株、特にＭＲ２２株はＭＤＶワクチン中
で細胞含有形態で活性成分として使用することができ
る。生又は不活化ワクチンであるこのようなワクチン
は、常法に従って製造することができる。
ＭＤＶ血清型Ｉ株、特にＭＲ２２株はＭＤＶワクチン中
で細胞含有形態で活性成分として使用することができ
る。生又は不活化ワクチンであるこのようなワクチン
は、常法に従って製造することができる。
【００４１】ＭＤウイルスの不活化の目的は、ウイルス
の増殖を阻止することである。一般に、これは化学的又
は物理的手段により達せられる。化学的不活化は、ウイ
ルスを例えば酵素、ホルムアルデヒド、β−プロピオラ
クトン、エチレン−イミン又はその誘導体、有機溶媒
（例えばＴｗｅｅｎ、Ｔｒｉｔｏｎ［登録商標］、デオ
キシコール酸ナトリウム、スルホベタイン又はセチルト
リメチルアンモニウム塩）で処理することにより実施す
ることができる。必要に応じてその後、不活化物質を中
和する。ホルムアルデヒドで不活化した材料は例えばチ
オ硫酸塩で中和することができる。物理的不活化は、高
エネルギー輻射、例えば紫外線、Ｘ線又はγ線をウイル
スに照射することにより実施すると好ましい。所望によ
り、処理後にｐＨを約７に戻す。
の増殖を阻止することである。一般に、これは化学的又
は物理的手段により達せられる。化学的不活化は、ウイ
ルスを例えば酵素、ホルムアルデヒド、β−プロピオラ
クトン、エチレン−イミン又はその誘導体、有機溶媒
（例えばＴｗｅｅｎ、Ｔｒｉｔｏｎ［登録商標］、デオ
キシコール酸ナトリウム、スルホベタイン又はセチルト
リメチルアンモニウム塩）で処理することにより実施す
ることができる。必要に応じてその後、不活化物質を中
和する。ホルムアルデヒドで不活化した材料は例えばチ
オ硫酸塩で中和することができる。物理的不活化は、高
エネルギー輻射、例えば紫外線、Ｘ線又はγ線をウイル
スに照射することにより実施すると好ましい。所望によ
り、処理後にｐＨを約７に戻す。
【００４２】通常は、上記から選択されるアジュバント
と、所望によりＴｗｅｅｎ及びＳｐａｎ（登録商標）等
の１種以上の乳化剤も不活化ウイルス材料に添加する。
と、所望によりＴｗｅｅｎ及びＳｐａｎ（登録商標）等
の１種以上の乳化剤も不活化ウイルス材料に添加する。
【００４３】ワクチンの投与量は、有効用量のウイルス
剤、即ち、毒性ＭＤウイルス攻撃に対する免疫をニワト
リで誘発するような量の免疫感作無細胞ウイルス材料を
投与するように選択する。免疫とは、ワクチン接種後の
ニワトリ集団に非ワクチン接種群と比較して著しく高い
レベルの防御を誘発することとして定義される。
剤、即ち、毒性ＭＤウイルス攻撃に対する免疫をニワト
リで誘発するような量の免疫感作無細胞ウイルス材料を
投与するように選択する。免疫とは、ワクチン接種後の
ニワトリ集団に非ワクチン接種群と比較して著しく高い
レベルの防御を誘発することとして定義される。
【００４４】生ワクチンでは、ヒナドリ１羽当たりの用
量は１〜６ｌｏｇ10ｐｆｕである。
量は１〜６ｌｏｇ10ｐｆｕである。
【００４５】典型的には、本発明の生ワクチンの投与用
量は少なくとも２．２ｌｏｇ10ｐｆｕ無細胞ウイルス、
好ましくは少なくとも２．７ｌｏｇ10ｐｆｕ無細胞ウイ
ルス、より好ましくは少なくとも３．２ｌｏｇ10ｐｆｕ
である。
量は少なくとも２．２ｌｏｇ10ｐｆｕ無細胞ウイルス、
好ましくは少なくとも２．７ｌｏｇ10ｐｆｕ無細胞ウイ
ルス、より好ましくは少なくとも３．２ｌｏｇ10ｐｆｕ
である。
【００４６】自然投与経路、例えばスプレー、点眼剤及
び点鼻剤の場合には、投与用量はヒナドリ１羽当たり１
０6〜１０7ｐｆｕである。
び点鼻剤の場合には、投与用量はヒナドリ１羽当たり１
０6〜１０7ｐｆｕである。
【００４７】不活化ワクチンはニワトリ用量当たり３〜
７ｌｏｇ10ｐｆｕ、好ましくは４〜６ｌｏｇ10ｐｆｕの
抗原当量を含有し得る。
７ｌｏｇ10ｐｆｕ、好ましくは４〜６ｌｏｇ10ｐｆｕの
抗原当量を含有し得る。
【００４８】本発明のワクチンは高力価スプレー、点眼
剤、点鼻剤、経口経路（例えば飲料水に混入）、筋肉内
注射、皮下注射又は、ニワトリが免疫能力を獲得した後
の任意時期に卵内注射するなどの方法で投与することが
できる。一般に、ワクチンは孵化後２４〜４８時間のヒ
ナドリに投与する。
剤、点鼻剤、経口経路（例えば飲料水に混入）、筋肉内
注射、皮下注射又は、ニワトリが免疫能力を獲得した後
の任意時期に卵内注射するなどの方法で投与することが
できる。一般に、ワクチンは孵化後２４〜４８時間のヒ
ナドリに投与する。
【００４９】本発明の別の態様は、無細胞ＭＤＶ血清型
Ｉと無細胞ＨＶＴとの２価ワクチンとしての組み合わせ
である。驚くべきことに、継代数の増加にも拘わらず、
無細胞ＭＤＶ血清型ＩはＨＶＴの効力を増加し得ること
が判明した。
Ｉと無細胞ＨＶＴとの２価ワクチンとしての組み合わせ
である。驚くべきことに、継代数の増加にも拘わらず、
無細胞ＭＤＶ血清型ＩはＨＶＴの効力を増加し得ること
が判明した。
【００５０】特に、ＭＲ２２株の無細胞血清型Ｉ ＭＤ
Ｖを無細胞ＨＶＴと併用する。本発明のワクチンに組み
込むＨＶＴウイルスは任意の入手可能な株であり、例え
ばＦＣ１２６又はＴＨＶ ＰＢ１（Ｉｎｔｅｒｖｅｔ
Ｉｎｃ．の市販品）である。任意に、別の家禽病原体の
抗原をコードする外来遺伝子をＨＶＴウイルスのウイル
スゲノムに挿入し、多価ワクチンを形成してもよい。
Ｖを無細胞ＨＶＴと併用する。本発明のワクチンに組み
込むＨＶＴウイルスは任意の入手可能な株であり、例え
ばＦＣ１２６又はＴＨＶ ＰＢ１（Ｉｎｔｅｒｖｅｔ
Ｉｎｃ．の市販品）である。任意に、別の家禽病原体の
抗原をコードする外来遺伝子をＨＶＴウイルスのウイル
スゲノムに挿入し、多価ワクチンを形成してもよい。
【００５１】本発明の更に別の態様は、無細胞ＭＤＶ血
清型Ｉと無細胞ＭＤＶ血清型ＩＩの２価ワクチンとして
の組み合わせ、又は無細胞ＭＤＶ血清型Ｉと無細胞ＭＤ
Ｖ血清型ＩＩ及び無細胞ＨＶＴとの３価ワクチンとして
の組み合わせである。好ましくは、ＳＢ−１株又はＨＰ
ＲＳ Ｂ−２４株をＭＤＶ血清型ＩＩ株として使用す
る。ＭＤＶ血清型ＩＩ株を遺伝子操作して別の家禽病原
体の抗原を組み込んでもよい。
清型Ｉと無細胞ＭＤＶ血清型ＩＩの２価ワクチンとして
の組み合わせ、又は無細胞ＭＤＶ血清型Ｉと無細胞ＭＤ
Ｖ血清型ＩＩ及び無細胞ＨＶＴとの３価ワクチンとして
の組み合わせである。好ましくは、ＳＢ−１株又はＨＰ
ＲＳ Ｂ−２４株をＭＤＶ血清型ＩＩ株として使用す
る。ＭＤＶ血清型ＩＩ株を遺伝子操作して別の家禽病原
体の抗原を組み込んでもよい。
【００５２】本発明は更に、無細胞血清型Ｉ ＭＤウイ
ルス材料に加えて他の家禽感染性病原体に由来するワク
チンを含む混合ワクチンも包含する。無細胞血清型Ｉ
ＭＤＶは、ニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）、感染
性気管支炎ウイルス（ＩＢＶ）及び感染性滑液嚢病ウイ
ルス（ＩＢＤＶ）からなる群から選択されるワクチンウ
イルスと混合投与することができる。
ルス材料に加えて他の家禽感染性病原体に由来するワク
チンを含む混合ワクチンも包含する。無細胞血清型Ｉ
ＭＤＶは、ニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）、感染
性気管支炎ウイルス（ＩＢＶ）及び感染性滑液嚢病ウイ
ルス（ＩＢＤＶ）からなる群から選択されるワクチンウ
イルスと混合投与することができる。
【００５３】
【実施例】実施例１ Ａ．血清型Ｉ ＭＤウイルスＭＲ２２の継代 ヒナドリ胚腎細胞培養でＭＲ２２を最初に単離後、ヒナ
ドリ胚繊維芽細胞（ＣＥＦ）細胞培養で継代した。
ドリ胚繊維芽細胞（ＣＥＦ）細胞培養で継代した。
【００５４】直径６ｃｍのＦａｌｃｏｎペトリ皿で成長
させた２４時間齢ＳＰＦ由来ＣＥＦ細胞培養物に細胞含
有ＭＲ２２ウイルスを接種した（１．５×１０ＣＥＦ／
皿）。
させた２４時間齢ＳＰＦ由来ＣＥＦ細胞培養物に細胞含
有ＭＲ２２ウイルスを接種した（１．５×１０ＣＥＦ／
皿）。
【００５５】少なくとも１００ｐｆｕを含む接種材料
０．１ｍｌをプレート上の組織培養培地５ｍｌに接種
し、細胞含有ウイルスを単層上で静置培養し、それらに
感染させる。
０．１ｍｌをプレート上の組織培養培地５ｍｌに接種
し、細胞含有ウイルスを単層上で静置培養し、それらに
感染させる。
【００５６】５％ＣＯ雰囲気下で３８．５℃で５日間イ
ンキュベーション後、１．培地を排出し、２．トリプシ
ンベルセンＰＢＳ溶液を加えてペトリ皿への細胞の結合
を弱め、３．細胞がペトリ皿から離れる前にトリプシン
／ベルセンＰＢＳ混合物を廃棄し、４．細胞を成長培地
で皿から洗い流すことにより、細胞を皿から取り出し
た。
ンキュベーション後、１．培地を排出し、２．トリプシ
ンベルセンＰＢＳ溶液を加えてペトリ皿への細胞の結合
を弱め、３．細胞がペトリ皿から離れる前にトリプシン
／ベルセンＰＢＳ混合物を廃棄し、４．細胞を成長培地
で皿から洗い流すことにより、細胞を皿から取り出し
た。
【００５７】段階４から得た細胞含有ウイルスの懸濁液
をＣＥＦ細胞での次代継代の接種材料として使用した。
ウイルスを上述のように１８代継代した。
をＣＥＦ細胞での次代継代の接種材料として使用した。
ウイルスを上述のように１８代継代した。
【００５８】Ｂ．ＭＲ２２無細胞血清型Ｉ ＭＤワクチ
ンの製造 ２００×１０個のＣＥＦ細胞を播種した２つの回転培養
管（１７５０ｃｍ）内の培地に、上記方法により得た細
胞含有ＭＲ２２シードウイルス１ｍｌを接種し、２４時
間インキュベーション後、力価は約１０ｐｆｕ／ｍｌで
あった。
ンの製造 ２００×１０個のＣＥＦ細胞を播種した２つの回転培養
管（１７５０ｃｍ）内の培地に、上記方法により得た細
胞含有ＭＲ２２シードウイルス１ｍｌを接種し、２４時
間インキュベーション後、力価は約１０ｐｆｕ／ｍｌで
あった。
【００５９】更に５日間インキュベーション後、上清培
地を廃棄し、細胞をトリプシンベルセン混合物で剥がし
た。細胞を遠心分離により沈殿させ、上清を廃棄し、細
胞をＳＰＧＡ安定剤２０ｍｌと混合した後、２０秒間超
音波処理した。
地を廃棄し、細胞をトリプシンベルセン混合物で剥がし
た。細胞を遠心分離により沈殿させ、上清を廃棄し、細
胞をＳＰＧＡ安定剤２０ｍｌと混合した後、２０秒間超
音波処理した。
【００６０】超音波処理した調製物の１ｍｌ分注液をバ
イアルに充填し、凍結乾燥した。凍結乾燥前の力価は１
０4・7ｐｆｕ／ｍｌ、凍結乾燥後の力価は１０4・5ｐｆｕ
／ｍｌであった。
イアルに充填し、凍結乾燥した。凍結乾燥前の力価は１
０4・7ｐｆｕ／ｍｌ、凍結乾燥後の力価は１０4・5ｐｆｕ
／ｍｌであった。
【００６１】実施例２ 無細胞マレック病ワクチンの効力比較 １日齢ＳＰＦヒナドリを各群３０羽ずつに分けて負圧ア
イソレーターに入れ、ヒナドリ１羽当たり０．１ｍｌを
筋肉内注射することにより、各群に下記ワクチン又は混
合ワクチン： Ａ）用量２００ｐｆｕ／羽のＳＢ１（オランダ国、Ｂｏ
ｘｍｅｅｒに所在のＩｎｔｅｒｖｅｔの市販品である無
細胞タイプＩＩワクチンＭＲ３０株）、 Ｂ）用量２００ｐｆｕ／羽のＭＲ２２（無細胞タイプＩ
ワクチン）、 Ｃ）用量１０００ｐｆｕ／羽のＨＶＴ（Ｉｎｔｅｒｖｅ
ｔの市販品である無細胞タイプＩＩＩワクチン株ＰＢ−
１）と用量２００ｐｆｕ／羽のＳＢ１（Ｉｎｔｅｒｖｅ
ｔの市販品である無細胞タイプＩＩワクチンＭＲ３０
株）、 Ｄ）用量１０００ｐｆｕ／羽のＨＶＴ（Ｉｎｔｅｒｖｅ
ｔの市販品である無細胞タイプＩＩＩワクチン株ＰＢ−
１）と用量２００ｐｆｕ／羽のＭＲ２２のうちの１種を
接種した。
イソレーターに入れ、ヒナドリ１羽当たり０．１ｍｌを
筋肉内注射することにより、各群に下記ワクチン又は混
合ワクチン： Ａ）用量２００ｐｆｕ／羽のＳＢ１（オランダ国、Ｂｏ
ｘｍｅｅｒに所在のＩｎｔｅｒｖｅｔの市販品である無
細胞タイプＩＩワクチンＭＲ３０株）、 Ｂ）用量２００ｐｆｕ／羽のＭＲ２２（無細胞タイプＩ
ワクチン）、 Ｃ）用量１０００ｐｆｕ／羽のＨＶＴ（Ｉｎｔｅｒｖｅ
ｔの市販品である無細胞タイプＩＩＩワクチン株ＰＢ−
１）と用量２００ｐｆｕ／羽のＳＢ１（Ｉｎｔｅｒｖｅ
ｔの市販品である無細胞タイプＩＩワクチンＭＲ３０
株）、 Ｄ）用量１０００ｐｆｕ／羽のＨＶＴ（Ｉｎｔｅｒｖｅ
ｔの市販品である無細胞タイプＩＩＩワクチン株ＰＢ−
１）と用量２００ｐｆｕ／羽のＭＲ２２のうちの１種を
接種した。
【００６２】ワクチン接種後７日目に１羽当たり０．１
ｍｌを筋肉内注射することにより、全群及びＳＰＦヒナ
ドリ３０羽からなる別の群を用量２５０ｐｆｕ／羽の毒
性ＲＢ１Ｂマレック病ウイルスで攻撃した。
ｍｌを筋肉内注射することにより、全群及びＳＰＦヒナ
ドリ３０羽からなる別の群を用量２５０ｐｆｕ／羽の毒
性ＲＢ１Ｂマレック病ウイルスで攻撃した。
【００６３】９１日目の実験終了までヒナドリを観察し
た。死亡したヒナドリを解剖し、死亡原因を確定した。
実験終了後に生存している全ニワトリを殺して解剖し
た。
た。死亡したヒナドリを解剖し、死亡原因を確定した。
実験終了後に生存している全ニワトリを殺して解剖し
た。
【００６４】実験終了までにＭＤで死亡したヒナドリの
数から明らかなように、攻撃は重度であった（図１参
照）。全対照ヒナドリは５６日までに死亡し、その９０
％はマレック病が原因であり、１０％は非特異的原因で
あった。ＳＢ１ワクチンを単独投与した群で生存し続け
ているニワトリは６３日目に許容不能なＭＤレベルを示
し始めたのでその全てを殺し、１３．３％はその時点ま
でにＭＤで死亡していた。
数から明らかなように、攻撃は重度であった（図１参
照）。全対照ヒナドリは５６日までに死亡し、その９０
％はマレック病が原因であり、１０％は非特異的原因で
あった。ＳＢ１ワクチンを単独投与した群で生存し続け
ているニワトリは６３日目に許容不能なＭＤレベルを示
し始めたのでその全てを殺し、１３．３％はその時点ま
でにＭＤで死亡していた。
【００６５】この実験から明らかなように、ＭＲ２２を
無細胞状態で単独投与又はＨＶＴと混合投与すると、重
度マレック病攻撃に対して十分に防御することができ
る。
無細胞状態で単独投与又はＨＶＴと混合投与すると、重
度マレック病攻撃に対して十分に防御することができ
る。
【００６６】実施例３ ＭＲ２２＋ＨＶＴワクチンとＲｉｓｐｅｎｓ＋ＨＶＴに
より誘発される免疫の比較 １．ＨＶＴ細胞含有ワクチン（株ＦＣ１２６−Ｉｎｔｅ
ｒｖｅｔ）、２．Ｒｉｓｐｅｎｓ細胞含有ワクチン（株
ＣＶＩ９８８−Ｉｎｔｅｒｖｅｔ）、３．ＭＲ２２細胞
含有ワクチンのウイルス株を使用した。
より誘発される免疫の比較 １．ＨＶＴ細胞含有ワクチン（株ＦＣ１２６−Ｉｎｔｅ
ｒｖｅｔ）、２．Ｒｉｓｐｅｎｓ細胞含有ワクチン（株
ＣＶＩ９８８−Ｉｎｔｅｒｖｅｔ）、３．ＭＲ２２細胞
含有ワクチンのウイルス株を使用した。
【００６７】１日齢ヒナドリ約４０羽の数群を負圧アイ
ソレーターに入れ、下記細胞含有混合ワクチンの１種を
接種した。ヒナドリは血清型Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩに対す
る母性由来抗体を有することが判明した（ＭＤＡ陽
性）。
ソレーターに入れ、下記細胞含有混合ワクチンの１種を
接種した。ヒナドリは血清型Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩに対す
る母性由来抗体を有することが判明した（ＭＤＡ陽
性）。
【００６８】Ａ群 この群のヒナドリには０．１ｍｌを筋肉内注射すること
によりＨＶＴ１０００ｐｆｕ及びＲｉｓｐｅｎｓ１００
０ｐｆｕを接種した。
によりＨＶＴ１０００ｐｆｕ及びＲｉｓｐｅｎｓ１００
０ｐｆｕを接種した。
【００６９】Ｂ群 この群のヒナドリには０．１ｍｌを筋肉内注射すること
によりＨＶＴ１０００ｐｆｕ及びＭＲ２２ １０００ｐ
ｆｕを接種した。
によりＨＶＴ１０００ｐｆｕ及びＭＲ２２ １０００ｐ
ｆｕを接種した。
【００７０】５日目にＡ及びＢ群と５日齢非ワクチン接
種ヒナドリ４０羽からなる対照群とを攻撃した。全ヒナ
ドリに細胞含有形態の毒性マレック病ウイルスＲＢ１Ｂ
５００ｐｆｕを筋肉内投与した。全ニワトリを１２週
間観察した。ＭＤの徴候を示す全ニワトリを殺し、他の
死亡したニワトリと共に解剖して死亡原因を確定した。
必要に応じて組織の組織学的試験を実施した。実験終了
後に全ニワトリを殺して解剖し、ＭＤ病変の存在を確認
した。
種ヒナドリ４０羽からなる対照群とを攻撃した。全ヒナ
ドリに細胞含有形態の毒性マレック病ウイルスＲＢ１Ｂ
５００ｐｆｕを筋肉内投与した。全ニワトリを１２週
間観察した。ＭＤの徴候を示す全ニワトリを殺し、他の
死亡したニワトリと共に解剖して死亡原因を確定した。
必要に応じて組織の組織学的試験を実施した。実験終了
後に全ニワトリを殺して解剖し、ＭＤ病変の存在を確認
した。
【００７１】対照非ワクチン接種ヒナドリにおけるＭＤ
の発生率は非常に高かった（表５及び図２参照）。２種
のワクチン接種群で高レベルの免疫が明白であり、Ｂ群
のほうがこの毒性攻撃に対して良好な防御を示した。
の発生率は非常に高かった（表５及び図２参照）。２種
のワクチン接種群で高レベルの免疫が明白であり、Ｂ群
のほうがこの毒性攻撃に対して良好な防御を示した。
【００７２】
【表５】
【００７３】以上の結果から明らかなように、細胞含有
形態のＭＲ２２＋ＨＶＴは、ＲＢ１Ｂ ＭＤＶの重度攻
撃に対して現在最良の市販ワクチンであるＲｉｓｐｅｎ
ｓ＋ＨＶＴよりも良好に防御することができる。
形態のＭＲ２２＋ＨＶＴは、ＲＢ１Ｂ ＭＤＶの重度攻
撃に対して現在最良の市販ワクチンであるＲｉｓｐｅｎ
ｓ＋ＨＶＴよりも良好に防御することができる。
【図１】ＲＢ１Ｂ攻撃に対する無細胞マレック病ワクチ
ンの効力の比較を示す。
ンの効力の比較を示す。
【図２】Ｍａｂを有するニワトリにおけるＴＨＶ＋Ｒｉ
ｓｐｅｎｓ又はＴＨＶ＋ＭＲ２２の効力比較を示す。
ｓｐｅｎｓ又はＴＨＶ＋ＭＲ２２の効力比較を示す。
Claims (14)
- 【請求項１】 超音波処理により感染細胞から放出され
た際に無細胞ウイルス力価が最大で細胞含有ウイルス力
価の１００分の１まで低下することになるマレック病ウ
イルス血清型Ｉの弱毒株。 - 【請求項２】 無細胞ウイルス力価が最大で５０分の１
まで低下する請求項１に記載の弱毒株。 - 【請求項３】 無細胞ウイルス力価が最大で１０分の１
まで低下する請求項１に記載の弱毒株。 - 【請求項４】 細胞含有形態である請求項１に記載の弱
毒株。 - 【請求項５】 英国、Ｐｏｒｔｏｎ Ｄｏｗｎに所在の
Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎ
ｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓに受託番号Ｖ９
４０６２２１１で寄託されたマレック病ウイルス血清型
Ｉの株であることを特徴とする請求項４に記載の弱毒
株。 - 【請求項６】 無細胞形態である請求項１に記載の弱毒
株。 - 【請求項７】 英国、Ｐｏｒｔｏｎ Ｄｏｗｎに所在の
Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎ
ｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓに受託番号Ｖ９
４０６２２１１で寄託されたマレック病ウイルス血清型
Ｉの弱毒無細胞株。 - 【請求項８】 請求項１から７のいずれか一項に記載の
弱毒マレック病ウイルス血清型Ｉと医薬的に許容可能な
キャリヤーとを含むことを特徴とするマレック病に対す
る家禽の防御用ワクチン。 - 【請求項９】 無細胞ＨＶＴを更に含むことを特徴とす
る請求項８に記載のワクチン。 - 【請求項１０】 無細胞ＭＤＶ血清型ＩＩを更に含むこ
とを特徴とする請求項８又は９に記載のワクチン。 - 【請求項１１】 他の家禽感染性病原体に由来する抗原
を更に含むことを特徴とする請求項８から１０のいずれ
か一項に記載のワクチン。 - 【請求項１２】 凍結乾燥してあることを特徴とする請
求項８から１１のいずれか一項に記載のワクチン。 - 【請求項１３】 （ａ）有効な免疫感作用量を調製する
ために必要な十分量の無細胞ウイルスが得られるような
細胞培養で血清型Ｉマレック病ウイルスを増殖させる段
階と、（ｂ）細胞を破壊する段階と、（ｃ）次いで無細
胞ウイルスを収集する段階と、（ｄ）段階（ｃ）から得
た材料に、ｉ．遠心分離及び／又は濾過による清澄化、
ｉｉ．緩衝剤添加、ｉｉｉ．安定剤添加、ｉｖ．バイア
ルへの材料充填、ｖ．凍結乾燥のうちの少なくとも１種
の処理を施す段階とを含む、マレック病から家禽を防御
するワクチンの製造方法。 - 【請求項１４】 請求項８から１２のいずれか一項に記
載のワクチンをニワトリに投与することからなる、家禽
におけるマレック病の防御方法。
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