JPH08509704A

JPH08509704A - 原料物質からのタキソールの抽出方法及び装置

Info

Publication number: JPH08509704A
Application number: JP6520295A
Authority: JP
Inventors: カスター，トレバー・ピー
Original assignee: アフィオス・コーポレーション
Priority date: 1993-03-12
Filing date: 1994-03-10
Publication date: 1996-10-15
Anticipated expiration: 2018-12-15
Also published as: EP0689537A1; KR100311330B1; DE69407173D1; EP0689537B1; WO1994020486A1; CN1121347A; JP3478341B2; US5750709A; CN1055087C; US5440055A; CA2158050A1; AU6363494A; ATE160777T1

Abstract

(57)【要約】タキソイド含有原料物質からタキソイドを単離するための方法及び装置。この方法及び装置は観葉イチイの木の針葉のロウ類及び他の成分から臨界または近臨界流体の使用によってタキソイドを単離する。

Description

【発明の詳細な説明】原料物質からのタキソールの抽出方法及び装置発明の分野本発明は、原料物質からのタキソール（taxol）及び他のタキソイド（taxoid ）類の抽出及び精製するための方法及び装置に関する。本方法及び装置は、特に、イチイの木の針葉及び他の部分からタキソール及び他のタキソイド類を抽出及び精製するための臨界流体及び近臨界流体（near critical fluid）に関する。発明の背景抗腫瘍活性を示す種々の化合物が、植物材料、微生物及び海洋微生物の有機溶媒抽出液中で識別されてきた。化学療法学的薬剤及び抗-ＨＩＶ剤としてのこれらの化合物の有用性に関する後続研究は、これらの化合物の天然存在量が少ないこと及び慣用の抽出方法が効果が無いことにより妨げられてきた。このような化合物の一例としては、西洋イチイTexus brevifoliaから誘導したジテルペン植物生成物であるタキソール（taxol：NSC 125973）が挙げられる。この薬物は、現在臨床試験中であるが、卵巣癌及び他の多くの癌の進行したケースに対して顕著な30〜40%応答を示した。しかしながら、この薬剤は供給量が少ない。現在、タキソールは、T．brevifoliaの粉砕した樹皮から主に３段階で有機溶媒により抽出され、次いで主に４段階でクロマトグラフィーにより精製されている。抽出工程は、粉砕した樹皮から開始し、これを50〜55℃でメタノールで３回浸出させる。次いで抽出液をメタノール中で濃縮する。次に濃縮したメタノール抽出液を塩化メチレンと水の間で分別する。タキソールを含む塩化メチレン画分を濃縮する。塩化メチレン濃縮液を50/50アセトン：ヘキサン中に溶解させ、混合物を濾過して不溶物を除去する。この有機抽出工程により固体含有量を含む琥珀色のシロップ状物が得られるが、これは粉砕した樹皮の約1.3%である。慣用法による精製法は、４つの主な段階で実施する。第１段階では、抽出工程からアセトン：ヘキサン混合物を、70/30ヘキサン：アセトン混合物中のFlorisi lカラム上でクロマトグラフィーにかけて、タキソール含有画分を分離する。このタキソール画分を次いで濃縮して乾燥させる。この段階は９回程度の多くの回数で繰り返し得る。第２段階では、タキソール濃縮液をメタノール：水混合物から結晶化させ、次いでアセトン：ヘキサン混合物から再結晶させると、85〜95% の純度のタキソールが得られる。第３段階では、このタキソールを塩化メチレン中2.5%イソプロパノールまたは2.5%ｎ-ブタノールを充填したシリカゲル上でクロマトグラフィーにかけると、約98%純度のタキソールが得られる。第４段階では、このタキソールをアセトン中に溶解させ、溶液を濾過し、次いでアセトン：ヘキサン混合物からタキソールを再結晶させる。この有機相抽出及びクロマトグラフィー精製工程により、99%純度のタキソールが得られるが、これは粉砕した樹皮の約0.014%である。この方法によってタキソールを製造することは、（i）抽出及び精製工程に時間がかかること；（ii）苛酷な環境下での滞留時間が長いこと；及び（iii）全体の収率が低いことによって妨害されている。また、T.brevifoliaの樹皮は、通常、壮年期の木（樹齢100〜200年）から得られる。樹皮は収穫するのが困難且つ高価であり、供給量は限られている。このような木は絶滅の恐れがある。代替の製造経路及び原材料物質を探索するのに多くの研究がなされている。代替の製造経路の幾つかには、関連性の高いタキソイド、10-デアセチルバッカチンIII（10-deacetyl baccati n III）からの全合成及び半合成が含まれる。代替原料としては、観葉植物のイチイの針葉、小枝、芽及び植物細胞培養物が含まれる。未だに達成されておらず、商業化も困難であることが証明されている全合成以外は、これらの方法は全て、バイオマス原料からタキソイド類を抽出及び精製することが必要である。観葉植物のイチイの針葉は、非常に魅力的な原料物質であることが判明し得るだろう。針葉は多量のタキソイド類を含み、種苗場及び農場で迅速に栽培し得る再生可能な原料である。しかしながら、針葉には、さらに工程上に課題がある。針葉は、有機溶媒に抽出される多量の非極性成分及びロウを含んでいる。より非極性のロウの幾つかは、ヘキサンで溶媒前洗浄することにより除去し得る。しかしながら、タキソイド類に非常に近い幾つかの組成物は、塩化メチレンとメタノールとの混合物を使用する主な慣用の溶媒抽出段階でタキソールと一緒に共抽出されてしまう。有機溶媒により針葉から抽出される全質量は、樹皮の場合が25%であるのと比較して、35 〜42%を変動し得る。非常に大きな割合は、より多量のタキソノールを示すのではなく、共抽出する不純物を示している。新鮮な針葉は、かなりの量の水（約60 %）も含んでいる。このように、針葉のタキソール抽出及び精製段階は、上述した樹皮に関する工程よりもずっと複雑で非常に時間がかかる。発明の概要本発明の態様は、ロウ及び他の成分を含むタキソイド含有原料物質からタキソール及び他のタキソイド類を抽出及び精製するための方法及び装置に関する。本発明の態様は、イチイの木の針葉からタキソイド類、例えばタキソールを抽出するのに特に適している。本態様は、特に臨界流体または近臨界流体に関する。本明細書中、「臨界流体（critical fluid）」という用語は、その臨界圧力以上及び臨界温度以上に於ける流体を指す。超臨界流体は、その臨界圧力及びその臨界温度を越える流体を指す。従って、「臨界流体」は、「超臨界流体」という用語を実質的に包含する。「近臨界流体（near critical fluid）」という用語は、臨界圧力及び/又は臨界温度に近いがその臨界圧力及び/又は臨界温度にはない流体、特に臨界圧力以上であるが臨界温度未満の流体を指す。近臨界流体は、臨界流体と酷似する密度を有する流体を示すのに用いられる。これを応用して、臨界流体又は近臨界流体を指すのに「CoNC流体（CoNC fluid）」という用語を使用する。本発明の一態様は、タキソイド含有原料物質からタキソイド類を抽出する方法に関する。本方法は、原料物質がロウ及び他の成分を含み、該他の成分が慣用の溶媒抽出法を使用する際にタキソイド類と一緒に共抽出され得るような場合に特に適用できる。本方法は、原料物質を脱ロウ条件にさらす段階を含む。脱ロウ条件は、原料物質を第１の流体にさらすことを含む。第１の流体は非極性CoNC流体である。ロウは第１の流体に溶解し、ロウを含んだ抽出剤と脱ロウした原料物質が形成される。さらに本方法は、脱ロウした原料物質を第２の流体にさらすことにより、脱ロウした原料物質からタキソイド類を除去し、タキソイド抽出剤と残存物質を形成する段階を含む。第２の流体は、CoNC流体と極性補助溶媒の混合物である。ロウを含んだ抽出剤及びタキソイド抽出剤をクロマトグラフィー手段にかけて、タキソイドと１種以上の溶離剤を形成する。本明細書中、「非極性」という用語は、0.0〜0.1デバイの双極子ムーブメントをもつ物質を指す。「極性」という用語は、約0.1〜.1〜1.7デバイの双極子ムーブメントを有する物質を指す。好ましくは、溶離剤を減圧して共溶離したタキソイド類を分離する。減圧すると、共溶離するタキソイド類はCoNC流体から沈殿する。CoNC流体の減圧時に単離されたタキソイド類をクロマトグラフィー方法により精製して、精製タキソイド類を形成する。好ましくは、減圧した第一及び第二流体を抽出剤冷却装置に通過させ、実質的にタキソイドを含まないＣｏＮＣ流体（これは次いで再循環される）及び廃棄物（これは取り除かれる）を形成する。「実質的にタキソイドを含まない」という用語は、プロセス工程の出発物質に比較してより少ないタキソイドを含有する意味に使用する。クロマトグラフイー手段は一本若しくはそれ以上のクロマトグラフカラムを有する。第二の流体の通過の間に第１カラムに吸収されたタキソイドは、有機溶媒（ヘキサン：ｎ−プロパノール：メタノール３成分グラジエント）の比較的極性の混合物又は第３流体で溶離される。この第３流体は、ＣｏＮＣ流体及び異なる種類又は濃度の補助溶媒、即ち、第２流体から構成される。大量のタキソイドを含有すると確認されているフラクションをさらに追加のカラムを用いてクロマトグラフイーに付す。タキソイドを含まないか少量のタキソイドしか含まないと確認されているフラクションは廃棄物として処理するか又は追加のクロマトグラフイープロセスにより溶離剤として再プロセス及び再循環させる。少量のタキソイドを含む画分（これは廃棄物ではない）を第４流体に付す。第４流体はＣｏＮＣ流体及び極性補助溶媒から構成される。第４流体の圧力及び／又は温度は第３流体よりも高いか又は低いのいずれかであり、非タキソイド溶質を除去する。その後、第４流体の温度及び圧力を調節し、当該流体を第１のクロマトグラフイーカラム中を再循環させる。タキソイド含有画分を更に複数のカラムに付し、次いで、有機溶媒混合物又は第５流体からなる比較的非極性の移動相により溶離する。第５流体はＣｏＮＣ流体及び非極性補助溶媒から構成されている。適切な有機溶媒混合物にはメタノール及びアセトニトリル混合物等がある。精製したタキソール及び密接に関連したタキソイドを含有する画分を集める。タキソイドを含まないか少量のタキソイドしか含まない移動相は廃棄に送られるか又は再処理及び再循環される。同定不可能なタキソイドを含有するＣｏＮＣ流体／溶剤混合物は、この混合物の圧力及び温度を変化させることにより再処理し、不純物にその溶液を残させ、ＣｏＮＣ流体及びＣｏＮＣ流体／再循環に適した補助溶剤混合物を生じさせる。好ましくは、ＣｏＮＣ流体は、二酸化炭素；亜酸化窒素：プロパンのようなアルカン；エチレンのようなアルケン；及びクロロジフルオロメタンのようなフルオロカーボンである化合物から選択される。これらの化合物は標準室温及び圧力で気体である。しかし、低温及び大気圧を超える圧力では、これらの化合物はＣｏＮＣ流体を形成する能力を有する。好ましくは、極性補助溶媒は、メタノール、エタノール、ブタノール、プロパノール、塩化メチレン及びアセトンからなる極性溶媒群から選択される。本方法の実施態様は、タキソール、セファロマンニン（cephalomannine）、バッカチンＩＩＩ、１０−デアセチルバッカチンＩＩＩ、デアセチルタキソール及びデアセチル−７−エピタキソール並びにそれらの誘導体及び前駆物質からなるタキソイドを抽出するのに理想的に適している。本発明の実施態様は、針葉のような更新しうる原料物質からタキソール及びタキソール様組成物の単離と抽出をできる。場合により、針葉をまず乾燥して水分を除去し、処理してこの原料物質の表面積を広げる。表面積を広げる典型的な処理には粉砕又は微粉砕等がある。本発明の一実施態様では、ロウやその他の構成分を含有するタキソイド含有原料物質からタキソイドを抽出するための装置に特徴がある。この装置は、原料物質、第１流体及び第２流体を受け入れる様になっている部屋を有する。この装置は、更に当該部屋と連絡する第１流体源を有する。第１流体は、ＣｏＮＣ流体を含む。第１流体源は、第１流体を部屋内に向けることができ、原料物質を脱ロウ条件にする。第１流体は原料物質のロウを溶解させ、ロウ含有抽出剤と脱ロウした原料物質を生じさせる。装置は、更に第２流体源を有する。この第２流体はある流体と極性補助溶媒との混合物である。第２ＣｏＮＣ流体源は上記部屋に連絡されている。第２流体源は第２流体を部屋内に向けることができ、タキソイド抽出剤と廃棄物を形成する。部屋は、当該部屋からロウ含有抽出剤とタキソイド抽出剤とを受けるためのクロマトグラフイー手段に連絡し、溶離剤と濃縮したタキソイドを形成する。好適なクロマトグラフ手段は一本又はそれ以上のカラムを有する。好ましくは、カラムは溶離液の圧力を減少させるための減圧手段と連絡する。減圧時、タキソイド（溶離剤と共に溶離される）は遊離され、更に処理できる。好ましくは、減圧手段を通過するとき生成したタキソイドを精製し、精製タキソイドを形成する。好ましくは、減圧手段は抽出剤冷却装置と連絡し、減圧手段から溶離剤を受け取る。冷却して、不純物を溶離剤から取り除き溶離剤を再循環させることができる。好ましくは、第１及び第２流体を、クロマトグラフイー手段と連絡する導管及びポンプ手段によりタキソイド及び廃棄物の除去後に再循環させる。本装置の一実施態様は、タキソイド精製手段の一本又はそれ以上のカラムと連絡する導管並びに第１流体源又は第２流体源と連絡する導管を特徴とする。この導管はタキソイドが溶離するまでカラム内を流れる第２流体を受けるようになっている。装置は、更に第２流体を、タキソイドが溶離すると、このような導管から第２カラムに向けるための手段を有し、このようなタキソイドを除去しタキソイド不含ＣｏＮＣ流体を生じさせる。好ましくは、タキソイド不含ＣｏＮＣ流体を減圧して不純物にその溶液を残させ、再循環のために適する第２流体を生成させる。好ましくは、装置は、ＣｏＮＣ流体として二酸化炭素；プロパンのようなアルカン；エチレンのようなアルケン；クロロジフルオロメタンのようなフルオロカーボン；及び又は亜酸化窒素を受け取るようになっている。好ましくは、装置は、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、メチレンクロリド及びアセトンからなる群から選択される極性溶媒を受けるようになっている。本装置は、タキソール、バッカチンＩＩＩ、１０−デアセチルバッカチンＩＩＩ、セファロマンニン、デアセチルタキソール及びデアセチル−７−エピタキソールのようなタキソイドの単離のために理想的に適している。本発明の実施態様は、鑑賞用イチイ材の針葉から、２０．９％のメタノールを含有する超臨界二酸化炭素（４０℃で１，２７４ｐｓｉａ）を用いて、僅か２１分内に０．０４８重量％タキソール（取得可能なタキソールの９９＋％）を抽出できる。このタキソール回収は驚くべきことであり予期されないことである。この短い滞留時間は、工業的プラントの資本及び操業コストを劇的に影響を与え得るので、意味がある。本発明の実施態様は、改良した浸透及び溶媒和により非常に高速の抽出に特徴がある。従来の方法と比較して、プロセスは改良した製造能力と改良したスケーラビリテイー（scalability）を有する。このプロセスは全体的により高い効率及びより少ないプロセス工程を特徴とする。本発明により製造した抽出剤は、可及的に少ない有機溶媒の使用を伴う改良した製造品質を特徴とする。本発明の装置と方法は、研究目的や臨床試験のためにタキソイドの取得可能性を増加させることができる。好適な原料物質には針葉がある。本方法と装置は、典型的には、針葉にのみ見いだされる不純物の存在下にタキソイドを抽出する。しかし、本方法及び装置は、イチイ植物の針葉に加えその他の原料物質から抽出する応用性を有する。本発明のその他の特徴は図面及び以下の詳細な記述の検討により明らかになるであろう。図面の簡単な説明図１は、本発明の特徴を具体化する臨界流体抽出及びクロマトグラフイー装置の略図を表し；図２は、試薬、超臨界流体及び補助溶剤の再循環を含む、本発明の特徴を具体化する臨界流体抽出及びクロマトグラフイー装置を表し；図３は、針状葉から抽出の２２８及び２８０ｎｍにおけるクロマトグラムを表し；図４ａ及びｂは、本発明の方法により採取したフラクションのクロマトグラムを表す。発明の詳細な説明本発明の実施態様を、イチイ木の針葉からのタキソールの抽出のための方法と装置として記載する。本明細書中で使用するとおり、イチイはTaxus media種及びTaxus brevifolia種、並びにTaxus属のその他の植物を包含することを意図している。本発明は、溶剤としてＣｏＮＣ流体の使用を特徴とする。ＣｏＮＣ流体は、気体状の二酸化炭素や亜酸化窒素のような周囲条件において気体として存在する一定の物質から構成される。このような気体が圧縮されそれらの臨界圧や臨界温度に近付くか又は超える条件に移行すると、このような気体は溶媒和力を増強させる。ＣｏＮＣ流体は液体様の密度を示すと同時に拡散率及び粘度の気体様特性を示す。このＣｏＮＣ流体は、広いスペクトルの溶媒和力を示す。何故なら、その密度が温度と圧力の双方に強く依存するからである。一桁又はそれ以上に溶解度を変化させるために、温度と圧力を変えることができる。ＣｏＮＣ流体は、更に微小孔材料内に容易に浸透できる超低表面張力を示す。数字１１によって一般的に示されている、針葉を含む原材料からのタキソイド類のＣｏＮＣ流体抽出を実施するための本発明の特徴を具現化する装置は、図１に記載されている。装置１１は、４つの主要な要素、即ち；抽出器１３；数字１５によって一般的に示されているＣｏＮＣ流体運搬集成装置；数字１７によって一般的に示されているクロマトグラフィー精製集成装置；及び数字１９によって一般的に示されている圧力低下手段から成っている。抽出器１３は、図１Ａにより詳細に記載されている。抽出器１３は、原材料を受け入れるために区画２１を画定する囲い２０を有する。好ましくは、原材料は粉砕またはすりつぶしによって微細な粒子にされている。区画２１は、流体を受け入れるための注入口２３と流体を除去するための排出口２５とを有する。抽出器分路２７は、注入口２３と連絡しており、これによりＣｏＮＣ流体が排出させられる。分路２７を通過するＣｏＮＣ流体の流れは、バルブ２７ａによって調節される。抽出器１３には、一定の温度を維持するためのサーモスタット調節器（示されていない）と原材料を充填するための開口部（示されていない）とが備えつけられている。そのような抽出器の一つとして、IscoモデルSFX 2-10抽出ユニットが知られている。区画２１の注入口２３は、ＣｏＮＣ流体運搬集成装置１５と連絡している。ＣｏＮＣ流体運集成装置１５は以下の主要な要素、即ち；ＣｏＮＣ流体容器２９、補助溶媒容器３１およびシリンジポンプ３３から成っている。シリンジポンプ３３は、導管３５を介して区画２１の注入口２３と連絡している。２つのバルブ３５ａ及び３５ｂは導管３５中の流れを調節する。シリンジポンプ３３を適合させることによって、補助溶媒容器３１からの補助溶媒とＣｏＮＣ流体容器２９からのＣｏＮＣ流体を受け入れる。シリンジポンプ３３は導管３７を介して臨界流体容器２９と連絡している。バルブ３７ａは、導管３７中のＣｏＮＣ流体の流れを調節する。シリンジポンプ３３は、２つの導管４５及び４７を介して補助溶媒容器３１と連絡している。導管４５は、シリンジポンプ３３及び補助溶媒ポンプ４９と直接連絡している。シリンジポンプ３３への補助溶媒の流れは、バルブ４５ａによって調節される。導管４５中の圧力は、圧力計５１によって監視される。導管４７は、補助溶媒ポンプ４９及び補助溶媒容器３１と直接連絡している。補助溶媒は導管４７から補助溶媒ポンプ４９へと受け取られ、導管４５へ押し出される。導管４７を介する補助溶媒ポンプ４９への補助溶媒の流れは、バルブ４７ａによって調節される。抽出器排出口２５は、クロマトグラフィー精製集成装置１７と連絡している。クロマトグラフィー精製集成装置１７は、２つの主要な要素、即ち、ＨＰＬＣカラム６１及びフィルター要素６３から成っている。フィルター要素６３は、５ミクロンのフィルターであり、排出導管６５を介して排出口２５と連絡している。抽出器から導管６５を通って流れるＣｏＮＣ流体は、フィルター要素６７によってろ過される。ＣｏＮＣ流体は導管６７を介してＨＰＬＣカラム６１に入る。ＨＰＬＣカラム６１は正常相ＨＰＬＣカラムである。ＣｏＮＣ流体はＨＰＬＣカラム６１から圧力低下集成装置１９へと流れる。ＣｏＮＣ流体は導管７１を介してＨＰＬＣカラム６１を出ていく。排出口導管７１内の圧力は、圧力計７３によって監視され、圧力低下バルブ７１ａによって調節される。減圧されたＣｏＮＣ流体は、回収容器７７に入る。回収容器７７は、固体または液体の保持相、例えば、塩化メチレンとメタノールとの５０：５０混合物を含む。回収容器７７は、蒸発しない補助溶媒だけでなく、ＣｏＮＣ流体中に保持されたタキソイド類を保持する。ＣｏＮＣ流体は、導管８３を通って排出される。操作においては、乾燥され、かつ粉砕若しくはすりつぶされた原材料、例えば、イチイの木の粉砕若しくはすりつぶされた針葉を、抽出器１３の区画２１内に置く。原材料は最初に、第１の流体、例えばＣｏＮＣ二酸化炭素の流れを受ける。第１のＣｏＮＣ流体は比較的非極性である。原材料のワックス類および他の成分は、ＣｏＮＣ流体中に溶解し、区画２１の排出口２５を通って、そして導管６５を通って除去される。ＣｏＮＣ流体中に保持された原材料のワックスおよび他の非タキソイド成分は、回収容器７７中に回収され、放出される。ＣｏＮＣ流体は出口８３を通って排出される。次いで、第２の流体を、メタノール、エタノールまたはアセトン等の極性補助溶媒と、ＣｏＮＣ流体とを組み合わせることによって形成する。シリンジポンプ３３は、導管３５を介して抽出器区画２１中に注入される第２の流体を受ける。第２の流体は、原材料からタキソールおよび他のタキソイド類を除去する。タキソイドを積んだ第２の流体は、区画２１から排出口２５を通って、クロマトグラフィー集成装置１７のＨＰＬＣカラム６１へと除去される。ＨＰＬＣカラム６１は、タキソール、および１０−デアセチルバッカチン−ＩＩＩのようなタキソイド類を第２のＣｏＮＣ流体から除去する。第２の流体中に共に溶出するタキソイド類および他の不純物は、回収容器７７中に回収される。第２のＣｏＮＣ流体と補助溶媒は圧力低下バルブ７１ａにおいて減圧され、それによりタキソイド類と他の不純物は溶液から出ていくようになる。ＣｏＮＣ流体は出口８３を介して回収容器７７から排出される。ＣｏＮＣ流体と補助溶媒の再循環を特徴とする、本発明の特徴を具現化する装置は、図２に記載されている。数字１１１によって一般的に示されている、タキソイド抽出装置は、以下の主要な要素、即ち；抽出集成装置１１３；数字１１５によって一般的に示されているＣｏＮＣ流体集成装置；数字１１７によって一般的に示されているクロマトグラフィー集成装置；及び、数字１１９によって一般的に示されている圧力低下集成装置から成っている。抽出区画１１３は、図１に関して記載した抽出区画１３の特徴と同様の特徴を有している。即ち、抽出区画１１３は、注入口と排出口（示されていない）とを有する内側の区画（示されていない）を有している。抽出集成装置の区画は、タキソイド類を含む原材料を保持することができる。好ましくは、原材料は、乾燥しており、場合によっては、乾燥およびすりつぶし用集成装置（示されていない）によって微粒子の形態にされている。抽出集成装置１１３は、区画の注入口（示されていない）と連絡した導管１３５を介してＣｏＮＣ流体を受ける。導管１３５を通る流れは、バルブ１３５ａによって調節される。導管１３５は予熱器１３７と連絡している。予熱器１３７はＣｏＮＣ流体と補助溶媒混合物の温度を調整する。予熱器１３７は、導管１４１を介して静止混合器１３９と連絡している。静止混合器１３９は、ＣｏＮＣ流体と補助溶媒とを均一な混合物になるまで混合し、第２のＣｏＮＣ流体を形成する。静止混合器１３９は、導管１４５を介して循環ポンプ１４３と、そして導管１４９を介して補助溶媒補給ポンプ１４７と連絡している。補助溶媒補給ポンプ１４７は、補助溶媒を含む容器（示されていない）と連絡している。補助溶媒ポンプ１４７は、導管１４１中に補助溶媒を注入して、抽出集成装置１１３に供給されたＣｏＮＣ流体中の補助溶媒の濃度を調整することができる。循環ポンプ１４３は、導管１５３を介して過冷却器１５１と連絡している。過冷却器１５１を適合することによって、ＣｏＮＣ流体とＣｏＮＣ流体／補助溶媒混合物とを冷却し、温度を調整する。過冷却器１５１は、導管１５９ａ、１５９ｂ及び１５９ｃを介して、ＣｏＮＣ流体の貯蔵器１５５、及びＣｏＮＣ流体／補助溶媒混合物を含む第２のＣｏＮＣ流体を含む貯蔵器と連絡している。抽出器１１３の区画の排出口（示されていない）は、クロマトグラフィー集成装置１１７と連絡している。クロマトグラフィー集成装置１１７は、以下の主要な要素、即ち；第１の吸着カラム１６１及び第２の吸着カラム１６３から成っている。第１の吸着カラム１６１は、導管１６３を介して抽出集成装置１１３の区画の排出口（示されていない）と連絡している。バルブ１６５ａは、導管１６５中の第２のＣｏＮＣ流体の流れを調節する。第１の吸着カラム１６１は、原材料から抽出された、タキソール、バッカチンＩＩＩ、１０−デアセチルバッカチンＩＩＩ、セファロマンニン及び他の興味のあるタキソイド類を保持するように適合される。第１の吸着カラム１６１は、分路１６７を介して、ＣｏＮＣ流体とＣｏＮＣ流体／補助溶媒混合物の出所と連絡している。分路１６７は、ＣｏＮＣ流体貯蔵器１５５及びＣｏＮＣ流体／補助溶媒貯蔵器１５７と連絡している。バルブ１６７ａは、導管１６７を通る流体の流れを調節する。分路１６７により、ＣｏＮＣ流体とＣｏＮＣ流体／補助溶媒混合物が、第１の吸着カラム１６１によって吸着されたタキソイド類を溶出するようになる。第１の吸着カラム１６１は、導管１６９を介して第２の吸着カラム１６３と連絡している。バルブ１６９ａは、導管１６９におけるＣｏＮＣ流体またはＣｏＮＣ流体／補助溶媒混合物の動きを調節する。第２のＨＰＬＣカラム１６３は、圧力低下集成装置１１９と連絡している。圧力低下集成装置１１９の導管１７１は、第２の吸着カラム１６３からの流れを受ける。導管１７１を通る流体の流れはバルブ１７１ａによって調節される。導管１７１は、溶出したタキソール及びＣｏＮＣ流体／補助溶媒を、圧力低下バルブ１７１ｂ、タキソール加熱器１７３、及びタキソール分離器１７５に運搬する。タキソール加熱器１７３は、第１の流体を希釈し、第２の流体がタキソールをタキソール分離器１７５中で溶液の外へ分離するようにする。タキソールは、導管１７７を通ってタキソール分離器１７５から除去される。バルブ１７７ａは、導管１７７を通る流体の流れを調節する。過臨界流体及び過臨界流体／補助溶媒混合物は、出口線１７９を介してタキソール分離器１７５から除去される。線１７９は、抽出媒体冷却器１８１と連絡している。抽出媒体冷却器１８１は、ＣｏＮＣ流体及びＣｏＮＣ流体／補助溶媒混合物の濃度を高める。抽出媒体冷却器１８１は、導管１８３ａ、１８３ｂ及び１８３ｃを介して、第１の流体貯蔵器１５５及び第２の流体／補助溶媒貯蔵器１５７と連絡している。第１の流体貯蔵器１５５はＣｏＮＣ流体を含む。第２の流体貯蔵器１５７はＣｏＮＣ流体と補助溶媒とを含む第２の流体を含む。バルブ１８３ａ及び１８３ｂは、導管１８３Ａ、１８３Ｂ及び１８３Ｃにおける流体の動きを調節する。タキソイド１０−デアセチルバッカチンＩＩＩは、一定のＣｏＮＣ流体／補助溶媒混合物とともにカラム１６１から溶出する。導管１６９は、バッカチン分路１９１を介して圧力低下集成装置１１９と連絡している。バルブ１９１ａは、バッカチン分路１９１を通る流体の流れを調節する。第１の吸着カラム１６１から溶出した１０−デアセチルバッカチンＩＩＩは、バッカチン分路１９１に向けられる。バッカチン分路１９１は、圧力低下バルブ１９３、バッカチン加熱器１９５及びバッカチン分離器１９７と連絡している。圧力低下バルブ１９３は、ＣｏＮＣ流体／補助溶媒混合物の圧力を減少させる。バッカチン加熱器１９７は、ＣｏＮＣ流体及びＣｏＮＣ流体／補助溶媒混合物を希釈する。低い圧力及び中程度の温度の組み合わせにより、１０−デアセチルバッカチンＩＩＩが、バッカチン分離器１９７において溶液から出てくるようになる。１０−デアセチルバッカチンＩＩＩは、導管１９９を介してバッカチン分離器１９７から除去される。バルブ１９９ａは、バッカチン分離器１９７からの１０ −デアセチルバッカチンＩＩＩの移動を調節する。バッカチン分離器１９７は、導管２０１を介して、抽出媒体冷却器１８１、第１の流体貯蔵器１５５及び第２の流体貯蔵器１５７と連絡している。導管２０１は、ＣｏＮＣ流体とＣｏＮＣ流体／補助溶媒混合物を再循環させるための導管１７９と連絡している。第１の吸着カラム１６１は、第２の分路２１１を介して、圧力低下集成装置１１９と連絡している。バルブ２１１ａは、導管２１１を通るＣｏＮＣ流体及びＣｏＮＣ流体／補助溶媒混合物の動きを調節する。導管２１１は、圧力低下バルブ２１３、抽出媒体加熱器２１５、廃棄物分離器２１７及び分路２１９と連絡している。分路２１９は導管１７１と連絡している。分路２１９は、再循環させるために、第２の吸着カラム１６３から、過臨界流体及び過臨界流体／補助溶媒混合物を受ける。バルブ２１９ａは、導管２１９を通る動きを調節する。導管２１１は、本質的にタキサイドを含まない流体およびＣｏＮＣ流体／補助溶媒の混合物を、ＨＰＣＬ用カラム１６１および分岐路２１９から受け取る。また、圧力減少バルブ２１３は、ＣｏＮＣ流体／補助溶媒の混合物の液圧を、導管２１１を通して減少させる。抽出物用加熱器２１５により、ＣｏＮＣ流体およびＣｏＮＣ流体／補助溶媒の混合物を、導管２１１を通して加熱することになり、圧力低下及び加熱は、廃棄物分離器２１７において、溶液から廃棄物を廃棄するのに役立つ。そして、廃棄物は、廃棄物分離器２１７から、導管２２１を通して、取り除かれ、バルブ２２１ａは、導管２２１を通して廃棄物流体の動きを制御している。廃棄物分離器２１７は、抽出物冷却器１８１、第１流体貯蔵器１５５および第２流体貯蔵器１５７と導管２２１を介して連結されている。そして、導管２２１は、導管１７９と連結しており、ＣｏＮＣ流体およびＣｏＮＣ流体／補助溶媒を、抽出物冷却器１８１に運び、抽出物冷却器１８１は、循環用流体の密度を濃縮させる。ＣｏＮＣ流体の損失は、ＣｏＮＣ流体の補給ポンプ２２５で補償される。そして、ＣｏＮＣ流体の補給ポンプ２２５は、第１ＣｏＮＣ流体貯蔵器１５５および第２ＣｏＮＣ流体貯蔵器１５７と導管２２７ａ，ｂ，ｃを介して連結されている。また、ＣｏＮＣ流体の補給ポンプ２２５は、ＣｏＮＣ流体供給源（図示せず）とも連結している。超臨界流れの二酸化炭素を使用する操作において、乾燥された原料物質は、抽出器１１３の抽出室に、すり砕かれて、入れられる。好適な乾燥された原料物質としては、イチイの針葉である。かかる原料物質は、第１流体を用いて、脱ロウ工程にかけられる。第１流体には、約０．８ｇ／ｍｌの濃度で、超臨界流れの二酸化炭素を含んでいる。飽和した、およそ１０００ｐｓｉの液状二酸化炭素が第１流体貯蔵器１５５から取り出され、若干、ポンプ輸送中のキャビティー発生を防止するために冷却される。循環ポンプ１４３は、第１流体に圧力を加えて、抽出圧力の３０００ｐｓｉにまで高め、そして静止混合器１３９を通して、二酸化炭素を抽出温度である４０℃にするための予熱器１３７にポンプ輸送する。そして、非極性二酸化炭素が、原料物質から非極性のロウやある程度のタキソイドを抽出する。ロウを含む抽出用溶剤は、タキソイドを保持する第１吸着用カラム１６１を通過させられる。二酸化炭素は、バルブ２１１ａを通過したのち、さらに逆圧力制御器２１３を通過する。二酸化炭素は、約１，１００ｐｓｉまで圧力低下し、温度も付随して低下する。第１流体は、再び、抽出器の加熱器２１５で、約４０℃まで加熱される。これらの状態において、準超臨界状態の二酸化炭素の密度は、たったの約０．２ｇ／ｍｌとなり、その結果、取り込まれたロウは、ほとんど溶解性がなく、廃棄物回収分離器２１７において、脱離される。そして、それから清澄化された二酸化炭素は、抽出器における冷却器１８１を通過させられ、液化し、第１ＣｏＣＮ貯蔵器１５５に戻る。脱ロウ化された原料物質は、それから、第２流体を利用したタキソール抽出／吸着工程に資せられることになる。第２流体は、超臨界状態の二酸化炭素および、極性の補助溶媒、例えばアセトンを含んでいる。第２流体は、貯蔵器１５７から、循環ポンプ１４３により取り出される。さらなる補助溶媒が、流れに加えられ、前述のサイクル工程中に失われた流体の損失を補償する。混合された流れは、静止混合器１３９を通って、均一な組成物となり、そしてそれから、予熱器１３７を通った後、抽出容器１１３に入っていく。抽出条件は、ほとんど脱ロウ工程と同じである。抽出液は、タキソール、タキソイドおよび不純物を含んでおり、ポンプで、第１吸着カラム１６１まで送られて、そこで、タキソールおよび類似の化合物が選択的に吸着される。次に、抽出室１１３は、ラインから外れるように設けられており、供せられたり、外されたりして、また再充填されることが可能である。タキソールは、第１吸着カラム１６１から、第３流体を利用して、溶出させられることになる。第３流体は、二酸化炭素や補助溶媒を含んでいる。極性補助溶媒の濃度は、第２流体混合物と比べて第３流体中において高い。第１吸着カラムの通過後の流れは、流れがバルブ１６９ａを通して分岐され、第２吸着カラム１６３につながるポイントにおいて、タキソール／セファロマンニンが溶出するまでは、直接、バルブ２１１ａに通じている。第２吸着カラム１６３は、タキソール、セファロマンニン、タキソイドおよび他の不純物を吸着する。また、臨界状態の流体／補助溶媒は、シリカカラムからバッカチンを脱離させる効果も有しているので、溶出液は、直接バルブ１９１を通って、分離する減圧カループに通され、そこでバッカチンは、バッカチン分離器１９７に回収されることも可能となる。回収されたバッカチンは、この抽出工程においてシリカカラムを通ってきた他の物質を含んでおり、さらに使用前に清澄工程が必要である。バッカチン回収に続いて、臨界流体／補助溶媒混合物は抽出器用の冷却器１８１を通過し、そしてそれから、ＣｏＮＣ流体／補助溶媒貯蔵器１５７に還元される。タキソイドを含まない流れは、吸着カラム１６１および１６３の通過後、バルブ２１９ａに直接つながっており、続いて減圧されて、不純物を脱離する。そして溶媒流れは、それから、抽出器用の冷却器１８１およびＣｏＮＣ流体／補助溶媒貯蔵器１５７に還元される次に、タキソールは、第２吸着カラム１６３から、第４の流体を使用して、溶出されることとなる。第４の流体は、ＣｏＮＣ流体および極性補助溶媒から構成されている。補助溶媒は、第２流体よりも低濃度で存在している。従って、第４の流体は、第２流体よりも極性が少ないということになる。タキソイドは、タキソール分離器１７５の圧力降下により回収される。ＣｏＮＣ流体／補助溶媒混合物は、再び抽出器用の冷却器１８１に導入され、リサイクルされる。一定量の補助溶媒は、回収されたタキソール中に含まれる。これは、沸騰、凝縮および還流により取り除かれる。本技術分野の当業者は、第１、第２、第３および第４の流体が、理想的な、あるいは一様なＣｏＮＣ流体組成を有している場合があり、あるいは異なる流体組成を有している場合もあり、さらには明確な流路において流動することを容易に認識するであろう。同様に、第２、第３および第４の流体が、理想的な、あるいは一様な補助溶媒の組成を有している場合があり、あるいは異なる流体組成を有している場合もあり、さらには明確な流路において流動することを認識するであろう。工程や装置には、さらに別な流体に対して、別途クロマトグラフ工程を設けることも可能である。実施例Ａ一般ＨＰＣＬ用有機溶媒として、ベーカーから入手したアセトニトリル、クロロホルム、ヘキサン、メタノール、およびメチレンクロライド、ＥＭサイエンスから入手したアセトンが使用された。清浄化トルエン（マリンクロドット社）、ｐ− アニスアルデヒド（シグマ社）、ブチルパラベン（シグマ社）、および無水エタノール（ベーカー社）もまた使用した。使用した臨界流体は、ＣＰグレード（９８％＋）の二酸化炭素（ＣＯ₂）、窒化酸素（Ｎ₂Ｏ）、プロパン（Ｃ₃Ｈ₈）および、フレオン２２またはクロロジフルオロメタン（ＣＨＣｌＦ₂）であって、ＭＡ州、エベレツトのアソシエーテッドガスプロダクトから入手したものである。使用したタキソールの標準サンプルは、バッカチンＩＩＩ（ＬＯＴ＃３３０７５３）、セファロマンニン（ＬＯＴ＃３１８７３５）およびタキソール（ＬＯＴ＃ｓ１２５９７３および１２５９７３−Ｌ／２４）であって、ナショナルキャンサーインスチチュートから入手したものであり、また、１０−デアセチルタキソール（ＬＯＴ＃ＧＳ−６Ｓ−１７０−４）、１０−デアセチル−７−エピタキソール（ＬＯＴ＃ＧＳ−６Ｓ−１７０−３）および、７−エピタキソール（ＬＯＴ＃ＧＳ−６Ｓ−１７２−１）であって、ＶＡ州、ブラクスバーグ、バージニアポリテクニック工科州立大学、の、キングストン在住のコンサルタントであるデビット、Ｇ．Ｉ博士から入手したものである。ＬＯＴ＃１２５９７３−Ｌ／２４のタキソールは、不純物を多く含んでおり、標準サンプルとしては使用できなかった。純粋な標準溶液の保管は、メタノール中で行われた。混合標準溶液は、イソクラチック（isocratic）モードおよび勾配モードにおける、異なる移動相に関する、共溶出および、ピーク障害の影響を調べるために使用された。比較的純粋な、タキソールーセファロマニンにおいて、部分的に削除されたＬＯＴ＃６２４９５５−１／１３／０のものが、ＮＣＩから入手され、使用された。使用された原料物質は、新たに１２″に切断された茎であって、Taxus Mediaの“ヒクシー（Ｈｉｃｋｓｉｉ）”を、ＭＩ州、グランドヘブン、ゼレンカナーゼリーのレンカマ農場（Renkema Farms）から入手した。針葉は、手で茎から採取し、６０℃のオーブン中で、一晩乾燥させられた。針葉の典型的な固形分は、約４０％であった。乾燥された針葉を、それから、２０，０００ｒｐｍのジァンカ＆クンケル（Ｊａｎｋｅ＆Ｋｕｎｋｅｌ）の粉砕機を用いてすり砕き、微粒子（７０メッシュ）とした。ＨＰＣＬを用いたタキセン類の分析は、コンピューター制御された３成分系の勾配システム（モデル２３５０ポンプ／モデル２３６０波長変換検知機（モデルＶ４）付きコントローラー、イスコ、リンカーン、ＮＥ州）およびレオダインモデル７１２５インジェクターであった。長さ１５ｃｍ、５マイクロンのフェニルカラムが、フェニル保護カラム（ライニン、ウーバーン、ＭＡ州）とともに使用された。３溶液系のシステムは、グラジエントシステムとして用いられ、Ａ＝６０％メタノール、Ｂ＝４０％メタノール／４０％アセトニトリルおよび、Ｃ＝１００％メタノールである。流量は、１．０ｍｌ／分であり、検出波長は、２２８ｎｍを使用した。この勾配システムは、標準サンプル間の優れた分離効果を示し、バッカチンＩＩＩを、あるサンプルにおいて定量分析が可能な程、十分に溶剤から取り出すことができた。また、５５％メタノール：１２％アセトニトリルを１．０ｍ／ｍｉｎ．で流し、検出波長２２８ｎｍを用いた、イソクラチック移動相も同様に使用された。かかるＨＰＣＬを用いたわれわれの分析技術は、タキソール／セファロマンニンの部分削除サンプルの分析についても、ＮＣＩやポリサイエンス会社において確認評価された（Ｂｉｏ−Ｅｎｇにおいては２３．８％タキソール、４４．３％セファロマンニンの条件で実施し、それに対してＮＣＩでは、２３．８％タキソール、４３．６％セファロマンニンの条件で実施した。）。使用した他の分析または準備装置としては、シングルビームＵＶ／ＶＩＳ分光光度計（日立製、モデル１１０−１０）、フリードリッヒ凝縮器およびフアットマンセルロースシンブル付きソックレー抽出器（ＶＷＲ）、マイクロ回転蒸発器（ビューレーインストルメンツ、モデル４２１４−００）、およびジフェニルおよびシリカプレート付きの薄層クロマトグラフシステムがある。薄層クロマトグラフシステムは、タキソイドに関して、ＨＰＬＣよりもかなり感度に劣ることが確認されたため、他の用途には使用されなかった。一般的なタキソールの分析方法は、有機溶剤、部分的には塩化メチレンを用いた抽出方法に関与しており、アセトニトリル−メタノール−水移動相を使用して、フェニルカラムの同定に使われた。これらのシステムは、木皮サンプルから良好に抽出するものの、針葉試料は、この逆位相システムのタキソールと共溶離する化合物を含んでいる。メタノール抽出、部分的に塩化メチレン抽出およびミニカラムを用いた分析方法の清掃は、２２８ｎｍから２８０ｎｍの純粋なタキソール吸収データについて、共溶離する化合物の影響を除くために行われる。 Taxus brevifoliaのイチイ針葉および樹皮中のタキソールの測定に関する方法が幾つか公表されている。本発明の実施例は、単純化された抽出技術、シリカミニカラムを用いた洗浄、および２２８ｎｍおよび２８０ｎｍにおける吸収データを用いた最終的な定量を含むことを特徴とする。この方法は、これまでに公表された方法によっては測定されない、共に溶離される不純物についての補正を成し遂げる。ＨＰＬＣシステムは、日常的分析業務のためのＩＳＣＯＶ４検出器を含むＩＳＣＯ３３成分勾配装置（Ｌｉｎｃｏｌｎ，ＮＥ）、２２８ｎｍおよび２８０ｎｍにおける同時定量のためのＩＳＣＯＳ５００検出器、および３次元スペクトラルスキャンを生じるスペクトラフィジックススペクトラフォーカスモデルＳＦ１０１−０１２２検出器からなる。シリカミニカラム（０１−００ＳＰＩＣＥカートリッジ）はレイニンインスツルメント社、Ｗｏｂｕｒｎ，ＭＡから得られた。カラムクロマトグラフィーに用いられたシリカはＥＭＳｃｉｅｎｃｅ社からカタログ番号１０１８０−３シリカゲル４０，７０−２３０メッシュとして供給された。 Taxusの枝の試料は６０℃において１６−２０時間乾燥した。針を幹から取り出し、Ｗａｒｉｎｇのブレンダーによりすりつぶし、そして７０メッシュスクリーンで篩にかけた。篩を通過しなかった物質を再びブレンドして、サンプルの９０％がスクリーンを通過するようにした。すりつぶした試料（２００ｍｇ）を４０ｍｌのバイアル中で秤量した。メタノール（３０ｍｌ）を加え、そして磁気撹拌機を用いてサンプルを一晩撹拌した。抽出物を＃４０Ｗｈａｔｍａｎペーパーで濾過して、１５ｍｌの水と１０ｍｌの塩化メチレンを含む２５０ｍｌ分液ロートに集めた。抽出容器は３０ｍｌの塩化メチレンで洗浄して、この洗浄液を濾過して分液ロートに集めた。メタノール−水の層は３倍容のメチレンクロリド（各々５０ｍｌ）で抽出し、そしてこれらの抽出物を２５０ｍｌ回転蒸発フラスコに移した。必要に応じてさらに水およびメタノールを加えて、層の分離を生じさせるかまたは明瞭にした。抽出は２００ｍｌの全容積が回収されるまで続けた。抽出物を蒸発させて乾燥を明確にした。痕跡料の残余の水は２０ｍｌのアセトン、続いて２５ｍｌのヘキサンで除去し、再び抽出物を乾燥させた。次に、サンプルを再び８ｍｌの塩化メチレンに溶解した。抽出物の塩化メチレン溶液をゆっくりとシリカミニカラムを通過させ、そしてカラムは別の４ｍｌの塩化メチレンで洗浄した。この洗浄により、ロウ様の非極性物質が除去され、タキソールはカラム上部付近の緑色のバンド中に含まれた。溶出液を塩化メチレン中の４％アセトンに変更して、緑色のバンドがカラムから出始めたときに溶出を止めた。次に、溶出液を塩化メチレン中の２０％アセトンに変更し、この溶剤の２つの１０ｍｌ部分を用いて、タキソールを含むバンドをカラムから溶出した。抽出物は回転蒸発を用いて乾燥させ、そして残余物を２．００ｍｌのメタノール中に取り出した。ＨＰＬＣカラムは、レイニン８０−Ｄ１５−Ｃ５マイクロソーブ５ミクロン、４．６ｍｍ×１５．０ｃｍフェニル結合相カラムであり、１．５ｃｍのフェニルガードカラムを備えていた。移動相は１２％アセトニトリルおよび５５％メタノールであり、残りは水であった。流速は１．０ｍｌ／分であった。タキソールの標準物を０．０５０ｍｇ／ｍｌの濃度でメタノール中に用意した。注入容積は標準物およびサンプルの両方に関して１０マイクロリットルであった。ピークの高さは２２８ｎｍおよび２８０ｎｍにおけるデュアルチャンネルモードにおいて測定し、そしてタキソールを以下の式により定量した：式中、Ｃ＝濃度（ｍｇ／ｍｌ）Ｈ＝２２８ｎｍチャンネルからのピークの高さそしてＰＦ＝式２（下記参照）のＡ（２８０）／Ａ（２２８）吸収比から計算されるタキソールのピークの精製係数 Taxusの針葉および樹皮両者からの抽出物は古典的な有機層抽出並びに超臨界流体抽出を用いて調製した。分析は、フェニルカラムを用いた逆層ＨＰＬＣ、および２２８ｎｍにおける単一波長検出を用いて、タキソール含有量に関する０．０４％から０．０５％の範囲の乾燥バイオマスの生成量を用いて、我々の実験室で実施された。これらの抽出物の一部は続いて、確認分析のためにナショナルキャンサーインスティテュート（フレデリック、メリーランド）に提出した。フォトダイオードジンレツ検出器を備えたＨＰＬＣを用いて実施されたそれらの分析から、針葉試料に関して２８０ｎｍにおける大きな吸収を示す物質の存在が示された。樹皮サンプル、タキソール対照混合物中のすべての化合物、および純粋なタキソールはこの共に溶出される化合物を示さなかった。この夾雑物の発見により、我々はその単離を促され、その結果、タキソールのピーク中のその存在がそのスペクトルの特徴から補償された。干渉化合物が逆層システムにおいてタキソールと共に溶離されるので、我々は通常相システムを用いて分離をした。タキサスメディアの「Ｈｉｃｋｓｉｉ」針の２７ｇのサンプルはメタノール−トルエンにより抽出され、２２ｍｍ×２５０ｍｍのシリカゲルのカラム上でクロマトグラフされた。迅速な分離が行われ、塩化メチレン中の５０％アセトンを用いてカラムからタキソール画分を取り出した。この抽出物を蒸発により乾燥し、塩化メチレン中の９％アセトンに再び溶解し、そして塩化メチレン中の９％アセトンで平衡化された第二の２２ｍｍ×２５０ｍｍシリカゲルカラム上においた。ゆっくりとしたアセトンの勾配が始まり、そしてアセトン濃度は２７０ｎｍにおいて監視した。アセトン濃度が９％から１５％に徐々に増加した、１３の２００ｍｌ画分を取った。画分＃４は針サンプルのクロマトグラフのスキャンにおける２８０ｎｍに見られたピークのパターンと正確に適合するタキソール保持時間領域におけるピークのパターンを含んだ（図３ａおよび３ｂ）。これらの干渉ピークのスペクトルのスキャンは幾つかの共通の特徴を示した。干渉物質は２８０ｎｍにごく近い吸収最大、２３５ｎｍにごく近い吸収最小、およびＡ（２８０）／Ａ（２２８）に関する約３．５の応答比を有した。画分＃５は画分＃４と同様の吸収パターンを示したが、しかしながら、この画分の物質量は同じクロマトグラフパターンでマスを減少させた。画分＃６、＃７、および＃８は本質的にマスを有さない。タキソールは最初に、画分＃９において大きなピークとしてごく僅かな量のセファロマニンと共に出現した。画分＃１０は大きなピークのタキソールおよびセファロマニン両者を含んだ。これらのタキソールのピークは純粋タキソールと同一のスペクトルスキャンを示し、そしてＡ（２８０）／Ａ（２２８）に関して約０．０５の値を生じた。連立方程式を設定してタキソールのピークのＰＦ（精製因子）を計算した：式中、Ａ（２８０）＝ＡＴ（２８０）＋ＡＵ（２８０）Ａ（２２８）＝ＡＴ（２２８）＋ＡＵ（２２８）および、Ａ（２８０）＝２８０ｎｍにおける全吸収ＡＴ（２８０）＝２８０ｎｍにおけるタキソールの吸収ＡＵ（２８０）＝２８０ｎｍにおける未知物質の吸収但し、Ｋ１＝ＡＵ（２８０）／ＡＵ（２８０）＝３．５０（計算値）Ｋ２＝ＡＵ（２２８）／ＡＵ（２２８）＝０．０５（計算値）および、Ｋ３＝Ａ（２８０）／Ａ（２２８）我々の測定値においてＫ２およびＫ１の代用として、以下の式が得られた：ＰＦ＝１．０１４５−０．２９×Ａ（２８０）／Ａ（２２８）（２）上記の式を用いて実験結果を補正した。サンプルのほとんどは精製因子０．９１を生じる約０．３５の吸収比を与えた。即ち、装飾イチイ、Taxus Media「Ｈｉｃｋｓｉｉ」の針のタキソール含有量の値は２２８ｎｍにおける吸収を用いたフェニルカラムの逆層ＨＰＬＣで０．０５０％と測定され、乾燥バイオマス重量基準により０．０４６％と補正された。フェニルカラム結合カラムを用いてタキソールに関して分析する他の研究者は、彼らのタキソールピークが下に潜んでいる干渉物質が含むかもしれないという可能性に気づくべきであり、そしてタキソールピークのスペクトルスキャンを稼働させ、および／または２２８ｎｍにおける監視に加えて２８０ｎｍにおける監視を行うことによりこれらの干渉物質に関して試験すべきである。実施例実施例１：有機相抽出臨界流体抽出及び精製試験と平行して、比較の目的でいくつかの有機相抽出技術を使用した。これらの技術は一般に、ヘキサン洗浄、メタノール（Ｍ）／塩化メチレン（ＭＣ）抽出、３〜４段階の塩化メチレン−水相分配につづく蒸発による乾燥及びメタノールへの再溶解から成る。ＨＰＬＣ分析の前に、シリカのミニ −カラム（長さ１ｃｍ）を非常に不純な画分を除去するために使用した。最初に、乾燥粉砕粉末をヘキサンで洗浄して非極性のロウ類を除去した。次の２つの手順を使用した：ソックレー抽出及び室温におけるヘキサン過剰（１０ｍＬ／ｇ）での撹拌棒による混合−後者の技術はスネイダー（Ｓｎａｄｅｒ）技術と呼ばれる。この手順にかかった時間は８〜２４時間であった。ヘキサン抽出物を乾燥し、ヘキサンに再溶解し、濾過し、そしてヘキサン：アセトン溶離液を使用してシリカのミニ−カラム上で洗浄した。ヘキサンで洗浄した針葉を乾燥し、次にＭ／ＭＣの５０／５０混合物で抽出した。ソックレー技術によるこの抽出を３時間実施し、さらに１２〜１５時間放置した；スネイダー技術において、試料を一晩回転させた。粗Ｍ／ＭＣ抽出物を蒸発して乾燥し、そしてＭＣへ再溶解した。等量のこの画分と蒸留水とを混合し、次に分液ロート中で分離させた。ＭＣ相を回転蒸発器に入れ、そして水相をＭＣで再抽出した（さらに３回まで）。スネイダー抽出で形成された水／ＭＣエマルジョンを破壊するために少量のメタノールを使用した。ＭＣ部分を回転蒸発器で乾燥し、そして風袋をはかった。ＨＰＬＣ分析のために、乾燥したＭＣ抽出物をメタノールに再溶解した。これらの試験の結果を、タキソールについての初期乾燥バイオマスの百分率及び純度についての乾燥抽出物重量の百分率として、表１に列挙した。実施例２：臨界流体相抽出先の試験は臨界流体抽出が針葉の中の水分の存在によって妨害されたことを示した。したがって、全ての以降の試験は、質量移動抵抗を最小化し、そして暴露表面積を最大化するために観葉（ornamental）イチイの乾燥粉砕した針葉について実施した。試験の第２の結果は、推測されたように、臨界流体抽出が溶媒の極性によって制御されることを示した。この結果において、試料は増加していく極性の臨界流体溶媒によって連続して抽出された。これらの試験の結果（全て３０００ｐｓｉ及び６０℃で実施）を表２に列挙する。上の表２において、タキソールの％はもとの乾燥試料の質量を基準とし、純度の％は抽出した質量を基準としている。実施例３フレオン−２２、クロロジフルオロメタン（ＣＨＣｌＦ₂）の結果を確認しそして改善するために数回の試験を実施した。例えば、ＴＡＸＣ−７をフレオン− ２２の１０試料容量で２０分間のみ実施した。数回の試験は抽出効率についての容量的な処理量及び滞留時間の影響を評価するために行った。試験はまた非常に非極性のロウ類がタキソールの臨界流体相への質量移動（mass transfer）を禁止するかどうかを決定するために実施した。これらの試験は臨界流体の１００試料容量は試料からタキソール全てを抽出するのに十分であるより多いこと、及び極性のロウはタキソールの質量移動を妨害しないことを示唆した。結果として、以降の試験は、ヘキサンで洗浄した針葉かまたは超臨界流体二酸化炭素（ＳＣＦＣＯ₂）抽出した針葉のいずれかについて、臨界流体溶媒の最小の１００試料容量で実施した。ＳＣＦＣＯ₂は試験した条件でのその非極性及び密度によって、非常にヘキサンに類似して挙動し、針葉から約７％の極性ロウ類を抽出し、タキソールを抽出しなかった。オゾン枯渇剤であるフレオン−２２を代替するために、ＳＣＦＣＯ₂の極性をメタノールの添加によって変性した。温度、圧力及び補助溶媒の条件は３０００ｐｓｉｇ及び６０℃でのフレオン−２２に適合するヒルデブランド溶解度パラメーターを基準として選択した。これらの試験の結果を表３に列挙する。これらの試験（残留物の有機相抽出／残留物のＨＰＬＣ分析に基づく）は利用できるタキソールの約９９＋％を抽出した。実施例４：圧力及び温度の影響圧力、温度及びメタノール濃度に対する感受性試験の結果を表４に列挙する。、表４に列挙した試験の残留物のＳＣＦ抽出物及び有機相抽出物の平均タキソール含量は０．０４６８±０．００２２であり、ＴＡＸＣ−２５及び２６の残留物中にタキソールは発見されなかった。ＴＡＸＣ−２９及びＴＡＸＣ−３０がフレオン（表２中のＴＡＸＣ−７）の結果に最も近かった。実施例５：臨界流体抽出及び精製ＣＸＰ極性の変性剤を使用しないフレオン２２を、シリカのＨＰＬＣ（water'sのMic roporasil）カラムが臨界流体相からタキソールを選択的に取り出すために使用できるかどうかを決定するために使用した。これらの試験の結果を表５に列挙する。これらの試験のそれぞれの前留分（forerun）を５０：５０のＭ：ＭＣ溶媒トラップ中に集めた。それぞれの場合において、タキソールは含まないかなりの素材が前留分中に集められた。例えば、オリジナルの乾燥試料素材の１２．１％がＴＡＸＣ−３４の前留分から集められ、これをＴＡＸＣ−３４Ｆと呼ぶ。表５のＴＡＸＣ−３４ＣはシリカＨＰＬＣカラム上に選択的に付着した物質（試料素材の２．３％）を意味する。試験完了後にメタノールでカラムから溶離したこの素材は逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィーによって０．６２６％のタキソールを含有すると定量された。臨界流体処理された試料中のタキソールの残留濃縮物、ＴＡＸＣ-３４Ｒは、有機相抽出及び逆相ＨＰＬＣ分析によって０．０３２４％であると決定された。したがって、試験ＴＡＸＣ−３４の全タキソール含量は０．０４７０％であり、そのうちの３１．１％は１３（０．６２６／０．０４７）の精製係数で回収された。表５に列挙したデータはＴＡＸＣ−３２Ｃにおいて２０００ｐｓｉｇの背圧で最適の結果が得られ、３５の精製係数でタキソールの３４．９％が回収された。実施例６：超臨界ＣＯ₂／極性補助溶媒でのＣＸＰフレオン−２２を置換するために、ＳＣＦＣＯ₂と一緒に数種の補助溶媒系を評価した。メタノールは、シリカカラム上の吸着部位についてタキソールと競合して勝るので、もはや選択される補助溶媒ではない。このことはシリカのミニカラム試験及びシリカＨＰＬＣカラムを使用した以降の試験において確認された。評価した補助溶媒はメタノール、塩化メチレン、アセトン、ブタノール及びエタノールであり、それぞれ３０００ｐｓｉｇ及び６０℃においてＳＣＦＣＯ₂中１０モル％であった。全ての試験を２０００ｐｓｉｇの背圧で実施した。補助溶媒としてメタノール及びエタノールを使用した試験の前留分においてかなりの量でタキソールを見いだした。ブタノールでの結果は不明瞭であった。１０モル％で補助溶媒として塩化メチレン及びアセトンを使用して実施した試験の前留分にはタキソールは発見されなかった。塩化メチレン補助溶媒試験（ＴＡＸＣ−３６Ｃ）において、シリカカラムから１６の精製係数で約半分のタキソール（０．０２４２％）が回収された。ＳＣＦＣＯ₂／アセトン試験（ＴＡＸＣ−３７Ｃ）ではシリカカラムからより少量のタキソール（精製係数１５で０．０１４７％）が得られた。実施例７：勾配クロマトグラフィーによるＣＸＰＨＰＬＣカラムの頭部に付着した物質をクロマトグラフ法によって溶離することによって精製係数がさらに改善された。シリカカラムの歴史及び保持挙動は未知で、低い極性から中くらいの極性へ進める勾配アプローチを選択した。これらの試験の結果を表７に列挙する。シリカカラムから回収された％タキソールは、全タキソール（７つの試験、ＴＡＸＣ−３４〜４０からの平均０．０４７±０．００２５％）とバイオマス残留物中のタキソールとの間の差異によって決定した。前留分にはタキソールは発見されなかった。ＴＡＸＣ−４１Ｃは、１．０ｍｌ／分の流量で６０分間のヘキサン：塩化メチレン：メタノール勾配によってクロマトグラフ法によって溶離された。指針として２２８ｎｍの吸収を使用して２５の画分を風袋を測った容器に集めた。収集容器をクロマトグラフの走査におけるそれぞれの谷において変更した。画分を蒸発させて乾燥し、そして抽出重量を決定するために秤量した。画分を次に、逆相フェニルカラム上での慣用のＨＰＬＣ分析のために適切な量のメタノールに再溶解した。仮定「タキソールバンド」のクロマトグラムは、この画分は主としてタキソール及びセファロマンニン（cephalomannine）から成ることを示した。隣接するバンドの分析はタキソールの約９５％が仮定「タキソールバンド」中に溶離したことを示した。タキソールの純度は、少しの量の素材が回収されたので確認できなかった。しかし、純度は約１７％であると推定され、ほぼ３６０の精製係数を得た。表７中のＴＡＸＣ−４３Ｃはその臨界流体抽出、選択的付着及びクロマトグラフの溶離条件によってＴＡＸ−４１Ｃと異なる。ＴＡＸ−３４Ｃについて、ヘキサン非洗浄試料を最初に２０００ｐｓｉｇ及び４０℃においてＳＣＦＣＯ₂の１００試料容量で抽出し（ＴＡＸＣ−４２）、ロウ類及び他の非極性成分を除去した。試料乾燥質量の６．６％である抽出物はタキソールを含まなかった。ＴＡＸＣ−４２からの残留物を次にＴＡＸＣ−４３中に１０モル％のアセトンを含むＳＣＦＣＯ₂で抽出した。この抽出は２０００ｐｓｉｇ及び４１℃において実施し、この条件は商業的装置の主たる操作経費を最小化する。さらに、臨界流体再圧縮の経費を最小化するために可能なかぎり等圧に接近させて系を操作した。付着したタキソール及び他の不純物を、画分の増加した分解能が得られるように延長されたキサン：ｎ−プロパノール：メタノール３成分勾配によって、シリカカラムからクロマトグラフ法によって溶離された。この試験において、図４ａに示す７つのみの画分が得られた。この画分を風袋を測った容器に集め、回転蒸発器で乾燥させ、メタノールに再溶解して分析した。画分番号５のＨＰＬＣクロマトグラム（仮定「タキソールバンド」）を図４ｂに示す。この走査はタキソールバンドは主としてタキソール及びセファロマンニンを含むことを示す。精製係数はほぼ１３０であり、％純度はＨＰＬＣ分析及び画分番号５についての４．０ミリグラムの重量に基づき６．２％であった。ＴＡＸＣ−４５Ｃ及びＴＡＸＣ−４７ＣはＴＡＸＣ−４３Ｃと同様の方法で実施した。全ての３つ試験は、ＳＣＦＣＯ₂洗浄を先行した。ＴＡＸＣ−４５Ｃにおいて、１８モル％のアセトンを含むＳＣＦＣＯ₂がカラム全長にわたりタキソールを広げる十分に極性であるので、タキソールは鋭いピークでカラムからクロマトグラム法によって溶離されなかった。このことは個々に、シリカのミニ −カラムを使用した試験において確認された。ＴＡＸＣ−４７Ｃにおいて、ＳＣＦＣＯ₂中の高い塩化メチレン濃度（２１モル％）はＨＰＬＣカラムの頭部にタキソールを保持するのに有効であるが、生のバイオマスからのタキソールの抽出において、２１モル％メタノール補助溶媒のように有効ではなかった。本明細書中において記述した臨界流体抽出及びクロマトグラフ精製法はセファロマンニンよりもタキソールについて選択的であると考えられる。ＴＡＸＣ−４３Ｃび画分番号５中のタキソールのセファロマニンに対する濃度（図４ｂを参照されたい）は２．２２であるが、針葉中の比は１．０８であると測定された。同様のＴ／Ｃ比がＴＡＸＣ−４５Ｃ（２．０４）及びＴＡＸＣ−４７Ｃ（２．０８）について得られた。ＳＣＦＣＯ₂洗浄試料及びＴＡＸＣ−４３、４５及び４７の前留分からの抽出物の試験は、１０−デアセチルバカチンＩＩＩ及びバカチンが、いくつかの極性可溶物及びタキソールから有効に分離され得ることを示す。我々は、これらのバカチンは試験条件において極性の補助溶媒を含むＳＣＦＣＯ₂に非常に溶解性であり、そして高い極性の条件（２０％を超えるアセトン−その抽出及び臨界流体による精製に有利な条件）でシリカカラム上に選択的に吸着され得ることを発見した。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９５年２月１０日【補正内容】差し替え用紙第３及び3/1頁の翻訳文：原翻訳文第２頁25行〜第３頁19行（観葉植物・・・包含する。）と差し替える観葉植物のイチイの針葉は、非常に魅力的な原料物質であることが判明し得るだろう。針葉は多量のタキソイド類を含み、種苗場及び農場で迅速に栽培し得る再生可能な原料である。しかしながら、針葉には、さらに工程上に課題がある。針葉は、有機溶媒に抽出される多量の非極性成分及びロウを含んでいる。より非極性のロウの幾つかは、ヘキサンで溶媒前洗浄することにより除去し得る。しかしながら、タキソイド類に非常に近い幾つかの組成物は、塩化メチレンとメタノールとの混合物を使用する主な慣用の溶媒抽出段階でタキソールと一緒に共抽出されてしまう。有機溶媒により針葉から抽出される全質量は、樹皮の場合が25%であるのと比較して、3 5〜42%を変動し得る。非常に大きな割合は、より多量のタキソノールを示すのではなく、共抽出する不純物を示している。新鮮な針葉は、かなりの量の水（約60 %）も含んでいる。このように、針葉のタキソール抽出及び精製段階は、上述した樹皮に関する工程よりもずっと複雑で非常に時間がかかる。１９９３年１月７日のＥＰＡ０５２１６２５（Squibb及びSons）は極性溶媒を含む超臨界流体（変性剤とともに使用される）を使用したタキソイド類の抽出を開示する。ケミカルアブストラクト第１１６巻２６号（１９９２年）、コロンバス、オハイオ、ＵＳＡ、アブストラクト２６２３４９、Jennings Dらの「Taxus Brevif olia の樹皮からのタキソールの超臨界抽出」は、Taxus木の粉砕樹皮からの超臨界二酸化炭素または二酸化炭素及びエタノールによるタキソールの抽出を開示する。発明の概要本発明の態様は、ロウ及び他の成分を含むタキソイド含有原料物質からタキソール及び他のタキソイド類を抽出及び精製するための方法及び装置に関する。本発明の態様は、イチイの木の針葉からタキソイド類、例えばタキソールを抽出するのに特に適している。本態様は、特に臨界流体または近臨界流体に関する。本明細書中、「臨界流体（critical fluid）」という用語は、その臨界圧力以上及び臨界温度以上に於ける流体を指す。超臨界流体は、その臨界圧力及びその臨界温度を越える流体を指す。従って、「臨界流体」は、「超臨界流体」という用語を実質的に包含する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＦＩ，ＧＢ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＫ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．タキソイド類をタキソイド含有原料物質から抽出する方法であって、次の工程：ａ）前記原料物質を第１流体にさらすことによって原料物質を脱ロウすること、ここで第１流体は臨界または近臨界流体を含んで成り、前記ロウは第１流体に溶解してロウ含有抽出物及び脱ロウされた原料物質を形成し；ｂ）前記脱ロウされた原料物質を第２流体にさらしてタキソイド抽出物及び廃棄物質を形成すること、ここで前記第２流体は臨界または近臨界流体及び極性補助溶媒を含んで成り、ｃ）クロマトグラフィー手段を通して前記タキソイド抽出物中の不純物からタキソイド類を分離してタキソイド及び溶離液を生成することを含んで成る、前記の方法。２．前記クロマトグラフィー手段が少なくとも１つのカラムを含む、請求項１に記載の方法。３．前記クロマトグラフィー手段が第１カラム及び第２カラムを含み、前記第１カラムがタキソイドを保持するための正常シリカ吸着カラムを含んで成り、前記第２カラムがタキソイドを分離または精製するための逆相吸着カラムを含んで成る、請求項２に記載の方法。４．前記ロウ含有抽出物が前記第１カラムによって受け取られ、前記第１カラムが臨界または近臨界流体／補助溶媒混合物中に溶離するタキソイドを保持している、請求項３に記載の方法。５．前記タキソイド抽出物が前記第１カラムによって受け取られ、前記第１カラムがタキソイド類を保持し、かつ臨界または近臨界流体補助溶媒混合物中に溶離する前記タキソイドを放出して第１タキソイド溶出液を形成し、そして前記第１タキソイド溶出液を減圧してタキソイド類及び臨界または近臨界流体／補助溶媒混合物を生じる、請求項４に記載の方法。６．前記第１カラムに保持された前記タキソイド類が第３流体によってカラムから溶離されて第２溶出液を形成し、前記第３流体は臨界または近臨界流体及び極性補助溶媒の混合物を含んで成り、前記極性補助溶媒は前記第２流体と比較してより大きな極性を示す、請求項５に記載の方法。７．前記第２溶出液が前記第２カラムに向けられ、前記第２カラムがタキソイド類を保持しそして臨界または近臨界流体及び補助溶媒を放出する、請求項６に記載の方法。８．前記第２カラムに保持された前記タキソイド類が第４流体によって溶離されてタキソイド溶出液を形成し、前記第４流体は臨界または近臨界流体及び極性補助溶媒の混合物を含んで成り、前記補助溶媒は前記第２流体より低い濃度で存在する、請求項７に記載の方法。９．前記タキソイド溶出液が減圧されてタキソイド及びタキソイド類を実質的に含まない臨界または近臨界流体及び極性補助溶媒混合物を形成する、請求項８に記載の方法。１０．臨界流体と補助溶媒との混合物がタキソイド類が取り出された後に再循環される、請求項５、７または９に記載の方法。１１．タキソイド類が前記第１カラムから溶離されるまで前記臨界または近臨界流体及び補助溶媒が再循環されそしてその後第２カラムに向けられ、前記タキソイド類が前記第２カラムによって取り出されてタキソイド類を実質的に含まない臨界または近臨界流体／補助溶媒混合物を生成する、請求項３に記載の方法。１２．前記タキソイド類を実質的に含まない臨界または近臨界流体／補助溶媒混合物が減圧されて不純物に溶液を残させるタキソイド類を実質的に含まない臨界または近臨界流体／補助溶媒混合物を生成する、請求項１１に記載の方法。１３．前記タキソイド類バカチンＩＩＩ及び１０−デアセチルバカチンＩＩＩが第１カラムから溶離される、請求項５に記載の方法。１４．減圧で生成された前記精製されたタキソイドがバカチンＩＩＩ及び１０ −デアセチルバカチンＩＩＩである、請求項５に記載の方法。１５．減圧で生成された前記タキソイドがタキソール及びセファロマンニンであり、請求項９に記載の方法。１６．前記臨界または近臨界流体及び補助溶媒混合物が抽出物冷却器を通って、再循環される精製された臨界または近臨界流体及び補助溶媒を形成する、請求項５、７または９に記載の方法。１７．前記補助溶媒が、メタノール、エタノール、ブタノール、プロパノール、塩化メチレン及びアセトンより成る極性溶媒の群から選択される極性溶媒である、請求項１に記載の方法。１８．前記超臨界流体が、二酸化炭素、フッ化炭化水素及び亜酸化窒素より成る群から選択される１種以上のガスを含んで成る、請求項１に記載の方法。１９．前記タキソイドが、タキソール、セファロマンニン、バカチンＩＩＩ、１０−デアセチルバカチンＩＩＩ、及びデアセチル−７−エピタキソールより成る１種以上のタキソイド類から選択される、請求項１に記載の方法。２０．前記原料物質が針葉を含んで成る、請求項１に記載の方法。２１．前記タキソイド類が臨界または近臨界流体及び補助溶媒混合物によって前記第２カラムから溶離され、タキソイド含有抽出物を形成し、前記タキソイド含有抽出物が減圧及び熱にさらされて前記タキソイドを前記溶出液から分離する、請求項１２に記載の方法。２２．ロウ類及び他の成分を含む原料物質からタキソイド類を単離するための装置であって、原料物質、臨界または近臨界流体及び補助溶媒を受け取るために適合した部屋；臨界または近臨界流体を前記部屋に向けかつ前記原料物質を脱ロウ条件にさらしてロウ含有抽出物及び脱ロウされた原料物質を形成するための、前記部屋と連絡している臨界または近臨界流体源；前記ロウ含有抽出物を受け取るための、前記抽出部屋と連絡しているロウ抽出物受取手段；前記臨界または近臨界流体及び極性補助溶媒を前記部屋に向け、かつ前記原料物質を抽出条件にさらしてタキソイド抽出物及び廃棄物質を形成するための、前記部屋と連絡している臨界または近臨界流体及び極性補助溶媒源；並びに前記ロウ抽出物及びタキソイド抽出物を受け取り、そしてクロマトグラフ法によってタキソイド及び溶離液を形成するための前記抽出部屋と連絡しているタキソイド精製手段を含んで成る前記の装置。２３．前記ロウ含有抽出物からバカチンを取り出してバカチン及びタキソイドを含まない臨界または近臨界流体を形成するために、前記ロウ抽出物受取手段がバカチン精製アセンブリーと連絡している、請求項２２に記載の装置。２４．前記タキソイド精製手段が第１シリカ吸収カラムお湯帯第２逆相カラムを含む、請求項２２に記載の装置。２５．前記タキソイドが前記第２逆相カラムから溶離されてタキソイド含有溶出液を形成し、前記溶出液が減圧及び熱にさらされてタキソイド及びタキソイドを実質的に含まない臨界または近臨界流体／補助溶媒混合物を形成する、請求項２４に記載の装置。２６．前記ロウ含有抽出物及び溶出液が減圧及び熱にさらされて廃棄物質及び再循環のための臨界または近臨界流体／補助溶媒混合物を形成する、請求項２２に記載の装置。