JPH08508489A

JPH08508489A - 二官能価ヌクレオシド、それらのオリゴマーならびにそれらの製造方法及び使用方法

Info

Publication number: JPH08508489A
Application number: JP6522130A
Authority: JP
Inventors: ベンカタチャラチャターベデュラ，プラサド; クマーサハ，アシス
Original assignee: スターリングウィンスロップインコーポレイティド
Priority date: 1993-03-31
Filing date: 1994-03-21
Publication date: 1996-09-10
Also published as: WO1994022888A1; US5892024A; HU9501978D0; CA2159628A1; AU6551094A; EP0701564A1

Abstract

(57)【要約】新規二官能価ヌクレオシド類似体、ならびに２個の炭素原子と１個の窒素原子または２個の炭素原子と１個の酸素原子（３’-NCC-５’、３’-CNC-５’、３’-OCC-５’）の、少なくとも２個の連続したヌクレオシド間結合を含む、塩基数が３〜４（三量体及び四量体）及びそれより長いオリゴヌクレオシドが開示される。二官能価ヌクレオシドは、三量体及び四量体の製造に有用であり、この三量体及び四量体は、オリゴヌクレオシドバックボーン中に２個の炭素原子と１個の窒素原子または２個の炭素原子と１個の酸素原子の少なくとも２個の連続したヌクレオシド間結合を有する、塩基数が６〜約60のオリゴヌクレオシド及びキメラオリゴヌクレオチド類似体、好ましくはアンチセンスオリゴヌクレオシド及びオリゴヌクレオチド類似体の製造において、ヌクレオシドと共に有用である。

Description

【発明の詳細な説明】二官能価ヌクレオシド、それらのオリゴマーならびにそれらの製造方法及び使用方法発明の分野本発明は、新規二官能価ヌクレオシド、ならびに炭素原子２個と窒素原子１個または炭素原子２個と酸素原子１個からなるヌクレオシド間結合の連続バックボーンを有する、塩基数が４〜約60のオリゴヌクレオシド配列を有するオリゴヌクレオシド化合物の製造に有用なそれらの二官能価三量体、四量体（及びそれより長いオリゴマー）に関する。本発明はまた、こうして得られたオリゴヌクレオシド、ならびにヌクレオシドが天然ホスホジエステルヌクレオシド間結合で結合されたヌクレオシド配列が挟まれた前記オリゴヌクレオシド配列を含んでなる、塩基数が60以下またはそれ以上の混合オリゴヌクレオチド（キメラオリゴヌクレオチド類似体）に関する。本発明はさらに、本発明の二量体ヌクレオシド化合物を用いた前記オリゴヌクレオシド及びキメラオリゴヌクレオチド類似体化合物の製造方法を含み、該方法は公知の常用の有機合成法によって５’−ヌクレオシド、中間二官能価単位及び３’−ヌクレオシドをつないで、アンチセンス化合物として有用であり得る種々のオリゴマーを生成することからなる。発明の背景アンチセンス化合物は、核酸（RNAまたはDNA）中のヌクレオチド配列に結合するかまたはそれとハイブリッド形成して、核酸の作用（または合成）を阻害する。アンチセンス化合物はRNA及びDNAの両者とハイブリッド形成できるため、転写、RNAプロセッシングまたは翻訳のレベルで遺伝子発現を妨害し得る。遺伝子発現が妨害されると、核酸によってコード化された蛋白質、例えば、組織の蛋白質、種々の細胞成長因子、成長因子レセプター及びガン遺伝子の合成が阻害される。たとえば、Klausner，A.，Biotechnology，8:303-304（1990）で論じられているように、アンチセンス技術の実際への応用は、数々の技術的問題によってその進展が妨げられている。従って、天然の、ホスフェート結合したアンチセンスオリゴマー化合物は、体内の標的細胞などに存在するヌクレアーゼ；たとえば、核酸の３’または５’末端に作用するエクソヌクレアーゼ、及び個々のヌクレオシド間の内部ホスホジエステル結合の位置で核酸を分解するエンドヌクレアーゼによって急速に分解されやすい。このようなヌクレアーゼの作用の結果、投与される多くのアンチセンス化合物の有効半減期は極めて短いため、大用量を短い時間間隔で投与しなければならない。もう１つの問題は、現在入手できるDNA合成装置では、アンチセンスDNAまたは RNAの製造コストが高いことである。Armstrong，L.，（Business Week，1990年３月５日、89ページ）は、１ｇのアンチセンスDNAの製造コストを約＄100,000と見積もった。さらに、体（及び細胞）内の標的へのアンチセンス薬剤の送達に関して別の問題がある。即ち、メッセンジャーRNAを標的とするアンチセンス薬剤は原形質膜を透過しなければ、そしてゲノムDNAを標的とするアンチセンス薬剤は原形質及び核膜を透過しなければ核に入れない。その結果、膜透過性を増大するためには疎水性を増大しなければならないが、他方においては、細胞質及び細胞サイトゾルのような体液中においては親水性（水溶性）を増大しなければならないので、そのいずれかを優先するかを考えなければならない。さらに、アンチセンスDNAのようなオリゴヌクレオチド化合物は、キラール燐（phosphorous）中心の回りで立体配置の変換を受けやすい。このため、化合物が体内で遊離しているかまたは標的核酸に対してハイブリッド形成するかという安定性の問題も生じる。安定性と薬物送達の限界を克服するために、種々のオリゴヌクレオチド類似体が研究されてきた。実際に使用するのに必要なことは、このような類似体が優れた細胞透過性を有し、ヌクレアーゼ分解に対して抵抗性であり、標的核酸に対して配列特異的な優れたハイブリッド形成能を有し、しかもむずかしすぎたり費用がかかりすぎたりしない化学的方法で合成できることである。最近は、前記問題を克服すると同時に、安定で、ヌクレアーゼ抵抗性で、比較的製造コストが低く、しかも体じゅうの核酸標的に送達でき且つそれらとハイブリッド形成できるアンチセンス化合物を製造しようという努力がなされているが、それには、ホスホジエステル構造中への修飾の導入によって、または長さと向きが正常のホスホジエステルヌクレオシド間結合に近い非ホスフェートヌクレオシド間結合を使用することによって、「正常な」ヌクレオシド間ホスホジエステル結合とは異なるヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオシド配列からなるオリゴヌクレオチド類似体を合成することが必要である。Uhlman，E.及びPeyman ，A.，Chemical Reviews,9（4）:544〜584（1990）。これまで報告されている修飾ホスホジエステル結合には、ホスホロチオエート、アルキルホスホトリエステル、メチルホスホネート及びアルキルホスホルアミデートがある。また、非ホスフェートヌクレオシド間結合、たとえば、カーボネート、アセテート、カルバメート、スルホン、スルホキシド、スルホンアミド及びジアルキルまたはジアリール−シリル誘導体を含む種々の非イオン性オリゴヌクレオシド配列も合成され、報告されている。さらに最近になって、炭素原子２個と窒素原子１個または酸素原子１個を含むヌクレオシド結合や炭素原子３個を含むヌクレオシド結合を含むキメラオリゴヌクレオチド類似体が報告された。たとえば、国際特許公開公報WO 9202534参照。発明の要約本発明は、新規二官能化ヌクレオシド類似体ならびに炭素原子２個−窒素原子１個及び炭素原子２個−酸素原子１個（3'-NCC-5'、3'-CNC-5'、3'-0CC-5'）のヌクレオシド間結合の連続ストレッチを含む塩基３〜４個（三量体及び四量体）及びそれ以上のオリゴヌクレオシドを提供する。本発明の二官能価ヌクレオシドは、本発明の三量体及び四量体の製造に有用であり、該三量体及び四量体は、オリゴヌクレオシドバックボーン中に炭素原子２個と窒素原子１個または炭素原子２個と酸素原子１個の少なくとも２個の連続したヌクレオシド間結合を有する、塩基数が６〜約60の本発明のオリゴヌクレオシド及びキメラオリゴヌクレオチド類似体、好ましくは、アンチセンスオリゴヌクレオシド及びオリゴヌクレオチド類似体の製造において、ヌクレオシドと共に有用である。本明細書中で使用する用語「オリゴヌクレオチド」は、「天然の」ホスホジエステルヌクレオシド間結合のみを含む核酸化合物を意味する。他方、用語「キメラオリゴヌクレオチド類似体」は、オリゴヌクレオシド結合及びオリゴヌクレオチド結合の両者を含む配列からなる化合物を意味する。用語「オリゴヌクレオシド」は、合成（天然のホスホジエステルと対立するものとして）ヌクレオシド間結合のみを含むオリゴヌクレオチド類似体を意味する。さらに詳しくは、本発明は下記式Ｉの新規ヌクレオシド類似体及び下記式IIのオリゴヌクレオシドを提供する：［式中、Ｑは、Ｈ、NHZ、OZ、SZ、CHO、COOR、ハロゲン、ホスホニウム塩及びホスホネートからなる群から選ばれ；Ｌは、NHZ、OZ、SZ、CHO、COOR、ハロゲン、ホスホニウム塩及びホスホネートからなる群から選ばれ； Q-（HCR）n-及びL-（HCR）m-はまた、独立してであることができ；各Ｒは独立して、Ｈ、低級アルキル、低級アルケニル、アリール及びアシルからなる群から選ばれ；各Ｚは独立して、Ｈ、低級アルキル、低級アルケニル、アリール、アシルならびにＯ−、Ｓ−及びＮ−の保護基からなる群から選ばれ；各Ｅは独立して、Ｈ及びOZからなる群から選ばれ；各Ｒ₂は独立して、P（O₂）OZ、OZ、NHZ、SZ、CHRCHRNHZ及びCR=CRNHZからなる群から選ばれ；ｍは０または１〜４の整数であり；ｎは１〜５の整数であり；各Ｂは独立して、アデニン、シトシン、グアニン、チミン、ウラシル、またはそれらの修飾形からなる群から選ばれ、該修飾形は、オリゴヌクレオシドまたはキメラオリゴヌクレオチド類似体のそのアンチセンス対応物（塩基はアデニン、シトシン、グアニン、チミン及びウラシルからなる群から選ばれる）に対する親和性を本質的には妨害せず；ＷはD-D-Dであり、各Ｄは独立して、（HCR）、酸素またはNHRであるが、ただし、各ＷのＤのうち２個は（HCR）であり、第３のＤは−Ｏまたは-NHRであり；ｊは１〜60の整数であり；ｋは０または１〜60の整数であり；且つｑは０または１〜60の整数であるが、ただし、ｊ＋ｋ＋ｑの合計は３〜約60である］。本発明はまた、前記式II［式中、Ｒ、Ｚ、Ｅ、Ｒ₂、Ｒ₁、ｍ、ｎ、Ｂ、Ｗ、ｊ、ｋ及びｑは各々前に定義した通りであるが、Ｗの少なくとも１個は天然のホスホジエステル結合であり且つ少なくとも２個の隣接しているＷはD-D-Dである］の構造を有するキメラオリゴヌクレオチド類似体を提供する。本発明はさらに、炭素原子２個と窒素原子１個または炭素原子２個と酸素原子１個からなる、少なくとも２個１組の連続したヌクレオシド間結合を有する、塩基数３〜60のヌクレオシド配列からなる化合物の合成方法を提供し、該方法は５’−ヌクレオシド、式Ｉの中間二官能価単位及び３’−ヌクレオシドをつなげて、アンチセンスオリゴヌクレオシドとして、または天然ホスホジエステルヌクレオシド間結合または当業者には公知の他の適当なヌクレオシド間結合をさらに含むより大きいオリゴヌクレオシドの成分として有用であり得る式IIのオリゴマーを生成することからなり、該方法は本発明の化合物を、好ましくは遺伝子自動合成装置中で、試薬として使用する。発明の詳細な説明本発明のヌクレオシド類似体は、式Ｉを有する：［式中、Ｑは、Ｈ、NHZ、OZ、SZ、CHO、COOR、ハロゲン、ホスホニウム塩及びホスホネートからなる群から選ばれ；Ｌは、NHZ、OZ、SZ、CHO、COOR、ハロゲン、ホスホニウム塩及びホスホネートからなる群から選ばれ； Q-（HCR）n-及びL-（HCR）m-はまた、独立してであることができ；各Ｒは独立して、Ｈ、低級アルキル、低級アルケニル、アリール及びアシルからなる群から選ばれ；各Ｚは独立して、Ｈ、低級アルキル、低級アルケニル、アリール、アシルならびに、Ｏ−、Ｓ−及びＮ−の保護基からなる群から選ばれ；各Ｅは独立して、Ｈ及びOZからなる群から選ばれ；ｍは０または１〜４の整数であり；ｎは１〜５の整数であり；各Ｂは独立して、アデニン、シトシン、グアニン、チミン、ウラシル、またはそれらの修飾形からなる群から選ばれ、該修飾形は、オリゴヌクレオシドまたはキメラオリゴヌクレオチド類似体のそのアンチセンス対応物（塩基はアデニン、シトシン、グアニン、チミン、ウラシルまたはそれらの天然の修飾形からなる群から選ばれる）に対する親和性を本質的には妨害しない］。本発明の三量体、四量体及びそれより長いオリゴヌクレオシドは下記式IIを有する：［式中、各Ｒ₂は独立して、P（O₂）OZ、OZ、NHZ、SZ、CHRCHRNHZ及びCR=CRNHZからなる群から選ばれ；各Ｒは独立して、Ｈ、低級アルキル、低級アルケニル、アリール及びアシルからなる群から選ばれ；各Ｚは独立して、Ｈ、低級アルキル、低級アルケニル、アリール、アシルならびにＯ−、Ｓ−及びＮ−の保護基からなる群から選ばれ；各Ｅは独立して、Ｈ及びOZからなる群から選ばれ；各Ｂは独立して、アデニン、シトシン、グアニン、チミン、ウラシル、またはそれらの修飾形からなる群から選ばれ、該修飾形は、オリゴヌクレオシドまたはキメラオリゴヌクレオチド類似体のそのアンチセンス対応物（塩基はアデニン、シトシン、グアニン、チミン、ウラシルまたはそれらの天然の修飾形からなる群から選ばれる）に対する親和性を本質的には妨害せず；ＷはD-D-Dであり、各Ｄは独立して、（HCR）、酸素またはNHRであるが、各ＷのＤのうち２個は（HCR）であり、第３のＤは−Ｏまたは-NHRであり；ｊは１〜60の整数であり；ｋは０または１〜60の整数であり；且つｑは０または１〜60の整数であるが、ｊ＋ｋ＋ｑの合計は３〜約60である］。本発明のキメラオリゴヌクレオチド類似体は、前記式II［式中、Ｗの少なくとも１個は天然のホスホジエステル結合であり且つ少なくとも２個の隣接するＷは前に定義したD-D-Dである以外は、Ｒ、Ｚ、Ｅ、Ｒ₂、Ｒ₁、ｍ、ｎ、Ｂ、Ｗ、ｊ、ｋ及びｑは各々、前に定義した通りである］の構造を有する。本明細書中で使用する以下の用語は、特に断らない限り、以下の意味を有するものと理解されたい：「アルキル」は、直鎖または分枝鎖のいずれかであることができる飽和脂肪族炭化水素を意味する。好ましい基は、炭素数が約12以下であり、メチル、エチルならびにプロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル及びドデシルの構造異性体であることができる。「低級アルキル」は、炭素数が１〜７の前記アルキル基を意味する。適当な低級アルキル基はメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ブチル、tert− ブチル、ｎ−ペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル及びｎ−ヘプチルである。「アリール」は、フェニル、ナフチル、置換フェニル及び置換ナフチルを意味する。「置換フェニル（またはナフチル）」は、１個またはそれ以上の水素が、ハロ、低級アルキル、ニトロ、アミノ、アシルアミノ、ヒドロキシル、低級アルコキシ、アリール、ヘテロアリール、低級アルコキシ、アルキルスルホニル及びトリフルオロメチルから選ばれる同一または異なる置換基で置換されたフェニル（またはナフチル）基を意味する。「ヘテロアリール基」は、ピリジル、フリル、チエニルまたはイミダゾリルのような基を意味する。「置換ヘテロアリール」は、１個またはそれ以上の水素が、ハロ、低級アルキル、ニトロ、アミノ、アシルアミノ、ヒドロキシル、低級アルコキシ、アリール、ヘテロアリール、低級アルコキシ、アルキルスルホニル及びトリフルオロメチルから選ばれた同一または異なる置換基で置換されたヘテロアリール基を意味する。「低級アルケニル」は、炭素数２〜８の不飽和脂肪族炭化水素、例えば、エチレン、プロピレン、ブチレン、イソブチレンなどを意味し、それらの全ての構造異性体及び幾何異性体を含む。「ハロ」は、ブロモ、クロロまたはフルオロを意味する。「Ｏ−、Ｓ−またはＮ−保護基」は、各々、酸素、硫黄または窒素官能価を不所望な反応から保護するように働く、酸素、硫黄または窒素原子に結合した基である。このような保護基は公知であり；その多くが“The Peptides．”E．Gross 及びJ．Meienhofer，Eds.Vol．３Academic Press，NY（1981）に記載されている。Ｎ−保護基は、Ｎ−アシル、Ｎ−アルコキシカルボニル、Ｎ−アリールメトキシ−カルボニル、トリフルオロメチルアシル及びＮ−アリールスルホニル保護基であることができる。適当なＯ−保護基としてはベンジル、tert−ブチル、メチル、トシル、ジメトキシトリチル、tert−ブチル−ジメチルシリル、及びカルボベンゾキシ基が挙げられる。Ｓ−保護基としては、メチル、tert−ブチル、ベンジル及びカルボベンゾキシ基が挙げられる。本発明はまた、本発明の二量体ヌクレオシド化合物を用いた前記オリゴヌクレオシド及びキメラオリゴヌクレオチド類似体化合物の製造方法を提供し、該方法は、公知の常用の有機合成法によって５’−末端ヌクレオシド、中間二官能価単位及び３’−末端ヌクレオシドをつなげて、アンチセンス化合物として有用な種々オリゴマーを生成することからなる。本発明はさらに、対応する５’−ジメトキシトリチルヌクレオシドをニトロメタン中臭化亜鉛で処理することによって、３’-O-t-ブチルジメチルシリル２ ’−デオキシヌクレオシド６、25、31及び38を極めて高収率で製造する改良方法を提供する。本発明はさらにまた、容易に入手可能なAZTからの、式Ｉの新規二官能価ヌクレオシド、例えば、10及び18の合成方法を提供する。これらのヌクレオシドは、NCCヌクレオシド間結合を有する、塩基数が３またはそれ以上の本発明のオリゴヌクレオチド類似体中の反復単位の前駆体として有用である。本発明のさらに別の新しい側面は、これまで文献記載のない５’−炭素官能化２’−デオキシヌクレオシド26〜28、32〜34及び39〜41の合成である。これらのヌクレオシドはまた、NCC結合オリゴヌクレオシドの合成において重要な中間体である。さらに、39の合成に関して本明細書中に記載した、一般的に応用できる Dess-Martin酸化（Zon）/Horner-Emmons反応の組み合わせは、文献に記載されている、５’−炭素官能価に関するSwern/Wittigプロトコールよりも改良されている。 NCCヌクレオシド間結合によって均一に結合されたオリゴヌクレオシドの一般的合成方法を反応式Ｉに記載する。例えば、反応式１に関して、二官能価ヌクレオシド２と７’−アルデヒド３との還元的カップリングによって７’−官能価二量体が生成される。この二量体は、７’−アルデヒドへの合成後、５’−末端シントン１にカップリングして三量体を生成することもできるし、またはシントン２との反復カップリングによって連鎖延長サイクルを継続させて、NCCバックボーンによって均一に結合された長鎖オリゴマー類似体４を生成することもできる。トリヌクレオシドの合成を反応式２に示す。たとえば、二量体11は、アルデヒド９及び二官能価アミン−ヌクレオシド10ならびにシアノ硼水素化ナトリウムから還元的アミノ化条件下で合成する。同様に、二量体アルデヒド13は、対応するエステル12から製造し、それをアミン14と還元的にカップリングさせて、２個の NCCヌクレオシド間結合を含む三量体を生成する。反応式３は、式Ｉの二官能価ヌクレオシドの合成経路を示す。反応式４は、NCCヌクレオシド間結合を含むヘテロ三量体及びそれより長いオリゴマーの合成に使用される重量な中間体25〜28、31〜34及び37〜 40の合成経路を示し；これらの中間体を使用したNCCヌクレオシド結合を有するヘテロ二量体の合成を示している。 OCC結合三量体48及びそれより長いオリゴマーの合成のための重要な中間体である５’−Ｏ−カルベトキシ−５’−ビニル−３’−ｔ−ブチルジメチルシリルチミジン45の製造を反応式５に要約する。二官能価ヌクレオシド45は、アルデヒド44と臭化ビニルマグネシウムとの間でグリニャール反応を行い、次いで、得られたアルコールをクロロ蟻酸エチルでカルボエトキシル化し、そしてベンゾイル化することによって合成する。反応式６に要約した新規二官能価アミン−ヌクレオシド52とホルミル−ヌクレオシド51との間の還元的アルキル化を用いて、CNC結合三量体54及びそれより長いオリゴマーを製造できる。 CNN結合三量体60及びそれより長いオリゴマーを合成するための一般式を反応式７に示す。本発明のさらに別の新しい側面は、３’−ビニル−ヌクレオシド56のOSO₄ヒドロキシル化、及びそれに続くジオールのNaIO₄による酸化によるＮ−保護−３’ −アセトアルデヒド−ヌクレオシド57の合成である。３’−アルデヒド57及び５ ’−アミン58の同様な還元的アルキル化によって、種々のCCN二量体59、三量体6 0及びそれより長いオリゴマーが生成される。この改良法によって、天然ホスホジエステルヌクレオシド間結合の代わりに炭素原子３個と窒素原子１個または炭素原子３個と酸素原子１個を有する、塩基数３またはそれ以上のオリゴヌクレオシド配列の製造が容易になる。文献（Uhlmannら、Chemical Review，9（4）:544 〜584；Matteucci，M.，Tetrahedon Letters，1990，2385）に報告されているように、本発明のオリゴヌクレオシド及びキメラオリゴヌクレオチド類似体のような、２個またはそれ以上の非ホスホジエステルヌクレオシド間結合の隣接ストレッチを有するオリゴヌクレオチド類似体は、孤立した（一度に１個の）非ホスホジエステルヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオチド類似体よりはるかに優れたヌクレアーゼ耐性を示すことが予想される。反応式１^a.b.c.dNCC結合オリゴヌクレオシド合成の一般反応式反応式２NCC結合三量体の合成^a 反応式３二官能価ヌクレオシドの合成反応式４ヘテロ三量体、四量体などの合成のための重要な中間体反応式４（続）ヘテロ三量体、四量体などの合成のための重要な中間体反応式５ 0CC結合三量体、四量体及びそれより長いオリゴマーの合成のための一般式反応式６CNC結合三量体、四量体及びそれより長いオリゴマーの合成のための一般式反応式７CNN結合三量体、四量体及びそれより長いオリゴマーの合成のための一般式本発明においてはまた、式Ｉの化合物の医薬として許容され得る塩も考えられる。薬理学の業界ではよく知られたことであるが、薬理活性のあるアミン化合物の無毒性付加塩はそれらの遊離塩基と活性の点では異ならない。医薬として許容され得る塩としては、酸付加塩及び塩基付加塩の両者が挙げられる。「医薬として許容され得る塩」は、遊離塩基の生物学的有効性及び性質を保持するが、生物学的にまたは他の点で有害ではないそれらの塩を指す。適当な医薬として許容され得る酸付加塩は、無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、燐酸など及び有機酸、たとえば、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸及びｐ−トルエンスルホン酸などを用いて形成できる。医薬として許容され得る塩基付加塩としては、無機塩基、例えば、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウム塩などから誘導されるものが挙げられる。特に好ましいのは、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、カルシウム及びマグネシウム塩である。医薬として許容され得る無毒性有機塩基から誘導される塩としては、第一、第二及び第三アミン、置換アミン（例えば、天然置換アミン）、環状アミン及び塩基性イオン交換樹脂、例えば、イソプロピルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、ジシクロヘキシルアミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン（hydrabamine）、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、プリン、ペペリジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂などの塩が挙げられる。特に好ましい有機無毒性塩基は、イソプロピルアミン、ジエチルアミン、エタノール−アミン及びジシクロヘキシルアミンである。一実施態様において、本発明の化合物は、塩基数が約６〜約60、好ましくは約９〜約50、より好ましくは約12〜約25、最も好ましくは15〜18の、式IIに示したようなオリゴマーアンチセンス薬剤を含む。これらのアンチセンス薬剤は、１種またはそれ以上の無毒性の生理的に許容され得る担体、補助剤または賦形剤（本明細書中においてはこれらをひとまとめにして担体と称する）と共に、固体または液体の形態の非経口注射または経口投与用、直腸または局所投与用などの組成物に製剤化できる。組成物は、ヒトまたは動物に経口、直腸、非経口（静脈内、筋肉内または皮下）、槽内、腟内、腹腔内、局所（散剤、軟膏剤または点滴剤）投与することもできるし、頬または鼻用噴霧剤として投与することもできる。非経口注射に適当な組成物は、生理的に許容され得る水性または非水性の滅菌溶液、分散液、懸濁液または乳濁液及び滅菌注射溶液もしくは分散液に再構成される滅菌散剤を含むことができる。適当な水性及び非水性担体、希釈剤、溶剤または賦形剤の例としては、水、エタノール、ポリオール（プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセロールなど）、それらの適当な混合物、植物油（例えば、オリーブ油）及び注射可能な有機エステル、例えば、オレイン酸エチルが挙げられる。適当な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティングの使用、分散液の場合には必要な粒度の保持、及び界面活性剤の使用によって保持できる。これらの組成物はまた、補助剤、例えは、保存剤、湿潤剤、乳化剤及び分散助剤を含むことができる。微生物の作用は、種々の抗菌剤及び抗真菌剤、たとえば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などによって確実に防止できる。等張化剤、たとえば、糖、塩化ナトリウムなどを添加するのも望ましい。注射用剤形の吸収の延長は、吸収を遅らせる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを用いれば可能である。経口投与用の固体剤形としては、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤及び顆粒剤が挙げられる。このような固体剤形の場合には、活性化合物は、少なくとも１種の常用の不活性賦形剤（または担体）、たとえば、クエン酸ナトリウムもしくは燐酸二カルシウムまたは（ａ）充填剤または増量剤、例えば、澱粉、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール及び珪酸、（ｂ）結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース及びアラビアゴム、（ｃ）保湿剤、例えば、グリセロール、（ｄ）崩壊剤、たとえば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカ澱粉、アルギン酸、ある種の複合珪酸塩及び炭酸ナトリウム、（ｅ）溶解遅延剤、例えば、パラフィン、（ｆ）吸収促進剤、例えば、第四アンモニウム化合物、（ｇ）湿潤剤、例えば、セチルアルコール及びモノステアリン酸グリセロール、（ｈ）吸着剤、たとえば、カオリン及びベントナイト、ならびに（ｉ）滑沢剤、たとえば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムまたはそれらの混合物と混合する。カプセル剤、錠剤及び丸剤の場合には、剤形はさらに緩衝剤を含むことができる。同様な型の固体組成物はまた、ラクトース、すなわち、乳糖及び高分子量ポリエチレングリコールなどのような賦形剤を用いて、軟ゼラチンカプセル剤及び硬ゼラチンカプセル剤中に充填剤として使用できる。固体剤形、例えは、錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸剤及び顆粒剤は、当業界において公知の皮膜及び外皮、たとえば、腸溶性皮膜などを用いて調製できる。それらは不透明化剤を含むことができ、さらに、腸管の一定部分で活性化合物を遅れて遊離するような組成物であることもできる。使用できる埋蔵組成物の例としては、ポリマー物質及びロウがある。活性化合物はまた、適当であるならば、１種またはそれ以上の前記賦形剤と共にミクロカプセル剤の形態にすることもできる。経口投与用の液体剤形としては、医薬として許容され得る乳剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤及びエリキシル剤が挙げられる。液体剤形は、活性化合物の他に、常用の不活性希釈剤、例えば、水または他の溶剤、可溶化剤及び乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油、特に、綿実油、ピーナッツ（ground-n ut）油、コーン胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油及びゴマ油、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコールならびにソルビタンの脂肪酸エステルまたはこれらの物質の混合物などを含むことができる。このような不活性希釈剤の他に、組成物は補助剤、例えは、湿潤剤、乳化剤及び懸濁化剤、甘味剤、香味剤ならびに芳香剤を含むこともできる。懸濁剤は、活性化合物の他に、懸濁化剤、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステル、微晶質セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天及びトラガカント、またはこれらの物質の混合物などを含むことができる。直腸または腟内投与用の組成物は座剤であるのが好ましく、座剤は、本発明の化合物を適当な非刺激性賦形剤または担体、例えば、カカオ脂、ポリエチレングリコールまたは座剤用ロウと混合することによって調製できる。座剤は常温では固体であるが体温では液体であるため、直腸または腟内で溶融して、活性成分を放出する。局所投与用の剤形としては、軟膏剤、散剤、噴霧剤及び吸入剤が挙げられる。活性成分は、生理的に許容され得る担体及び必要に応じて任意の保存剤、緩衝剤または噴霧剤と滅菌条件下で混合する。眼用製剤、眼軟膏剤、散剤及び液剤も考えられる。組成物中の活性成分の実際の投薬量は、個々の組成物及び投与方法に関して、所望の治療反応を得るのに有効な活性成分の量が得られるように変化させることができる。従って、選択される投薬量は、所期の治療作用、投与経路、所期の治療持続時間及び他の因子によって決まる。宿主に一度にまたは分割して投与される活性成分の総日用量は、例えば、体重 kg当たり約0.5mg〜約10mgの量であることができる。投薬単位組成物は、合計して日用量を構成できるような量または日用量の約数量（submultiple amount）を含むことができる。しかしながら、個々の患者に関する具体的な用量レベルは、体重、全身健康状態、性別、食事、投与時間及び投与経路、吸収速度及び排出速度、他の薬物との併用の有無、及び治療される個々の疾病の重症度によって決まるであろうことを理解されたい。本発明はさらに、遺伝子発現の抑制が必要な宿主哺乳類に、抑制有効量の式II の化合物を投与することを含んでなる遺伝子発現の抑制方法であって、該化合物が発現を抑制すべき遺伝子のヌクレオチド配列に対してハイブリッド形成する方法に関する。好ましい一実施態様において、式IIの化合物は生理的に許容され得る担体中に溶解または分散させる。本明細書の別の箇所で論じたように、遺伝子発現の抑制は、転写、翻訳、またはRNAプロセッシングを妨害することによって行うことができる。従って、アンチセンス分子の活性は、メッセンジャーRNAまたはゲノムDNAのレベルであり得る。従って、例えば、アンチセンス分子がメッセンジャーRNAに対してハイブリッド形成する場合には、翻訳が抑制される。アンチセンス分子がゲノムDNAに対してハイブリッド形成する場合には、転写が抑制される。アンチセンス分子は異種の核RNA（hnRNA）または前メッセンジャーRNAを含む細胞中の他の核酸種に結合することもできる。遺伝子発現の抑制が必要な宿主哺乳類は、遺伝子発現が関与した疾病状態にある。このような疾病状態には、１種またはそれ以上のがん遺伝子の表現が関与した種々の癌、嚢胞性線維症、ハンチングトン舞踊病、ならびに疾病の状態の原因の全部または一部分が、正常な遺伝子の異常な発現または異常な遺伝子の発現である他のこのような疾病状態がある。本明細書中において使用する「抑制有効量」は、発現を抑制すベき遺伝子の発現を抑制するのに充分な、本発明の化合物の量である。抑制有効量を求める手段は、当業界でよく知られる通り、抑制すべき遺伝子の性質、目的とする抑制の型（すなわち、翻訳もしくは転写またはその両方の抑制）、治療される患者の体重によって決まるであろう。遺伝子の発現の抑制に使用する式IIの化合物は、その遺伝子の発現を抑制するような方法でその遺伝子の配列に対してハイブリッド形成しなければならないことを理解されたい。すなわち、式IIの化合物を作るのに使用するヌクレオチド塩基（前記式II中のＢ）は、発現を抑制すべき遺伝子のヌクレオチド配列に対してハイブリッド形成しなければならない。このような配列はその遺伝子の公知の配列から容易に確認することができるので、式IIの適当なアンチセンス分子を製造することができる。本発明において考えられるのは、相同性（同一性）が約90％より大きい、より好ましくは約99％より大きいハイブリッド形成である。以下の例は本発明をさらに説明するものであるが、決して明細書及び請求の範囲を限定するものと解してはならない。実施例：例１：３’-Ｏ-ｔ-ブチルジメチルシリルチミジン（６）臭化亜鉛（21ｇ）をニトロメタン（150ml）及び水（1.5ml）中に溶解させることによって、臭化亜鉛の原液を調製した。室温で、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−３’-Ｏ-ｔ-ブチルジメチルシリルチミジン（12.34ｇ；18.75mM）のニトロメタン（150ml）中攪拌溶液に臭化亜鉛溶液（93.75mM；5eq.）を添加した。20分後に薄層クロマトグラフィー（TLC）で検査したところ、出発原料は全て完全の消失していることが示された。反応混合物を１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（450m l）中に注ぎ、酢酸エチル（200ml×２）中に抽出した。有機層を合し、ブライン（200ml）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。粗製生成物をフラッシュクロマトグラフィー（SiO₂：60％EtOAC/Hex）によって精製して、純粋な表題化合物6.33ｇ（95％）が得られた。例２：５’−カルベトキシメチレン−３’−アミノエチル−５’，３’−ジデオキシチミジニル［3’（0）-〉5'(C)］−３’”tert−ブチルジメチルシリル−５ ”−デオキシチミジン（11）０℃においてアミン10（500mg；1.77mM）及び７’−アルデヒド（９；812mg）のエタノール（18ml）及び燐酸塩緩衝液（pH5.5；3.5ml）中溶液に、２時間にわたってシリンジポンプによってシアノ硼水素化ナトリウム（THF中１Ｍ；4.25mM; 4.25ml）を添加した。０℃においてさらに３時間攪拌した後、TLCで検査したところ、反応は完了していることが示された。反応混合物をクロロホルム（25ml）で希釈し、水（５ml）及びブライン（５ml）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。粗製生成物をフラッシュクロマトグラフィー（SiO₂：100ｇ；５％飽和NH₃／Et OAc中MeOH）によって精製した。反応生成物の収率（500mg）は50％であった。R_f =0.33（10％飽和NH₃／EtOAc 中MeOH）。FABMS：MH⁺＝676．¹HNMR（CDCl₃）：7.0 8（ｓ，１Ｈ），6.97（ｓ，１Ｈ），6.93（dd，１Ｈ，Ｊ＝15Hz，５Hz），6.18 （ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６Hz），6.04（dd，１Ｈ，Ｊ＝５Hz，３Hz），6.0（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６Hz），4.14（ｑ．１HJ＝７Hz），3.97（ｍ，１Ｈ），3.68（ｍ，１Ｈ），3.18（ｍ，１Ｈ），2.61（ｍ，１Ｈ），2.16（ｍ，４Ｈ），1.7-1.6（ｍ，１Ｈ），1.81（Ｓ，６Ｈ），1.25（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７Hz），0.78（Ｓ，９Ｈ），− 0.1−（Ｓ，６Ｈ）ppm．例３：５’−カルベトキシメチル−３’−アミノエチル−５’，３’ジデオキシチミジニル［3’（O）- >5’（C）］-3”−tert−ブチルジメチルシリル−５”− デオキシチミジン（12）１気圧の水素下、10％ Pd／Ｃ（90mg;20重量％）の存在下において18時間、不飽和二量体（11：450mg）のメタノール中溶液を攪拌した。次いで、触媒をセライトを通して濾過し、濾液を蒸発させて目的エステル12を450mg生成した。R_f ＝0.33（10％飽和NH₃／EtOAc中MeOH）。FABMS：MH⁺＝678．¹HNMR（CDCl₃）：7.0 3（ｓ，１Ｈ），6.99（Ｓ，１Ｈ），6.02（ｔ，２Ｈ），4.01（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７Hz），3.97（ｍ，１Ｈ），3.63（ｍ，２Ｈ），2.54（ｍ，１Ｈ），2.33（ｍ，２Ｈ），2.08−1.8（ｍ，10Ｈ），1.81（ｓ，６Ｈ），1.51（ｍ，２Ｈ），1.25 （ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７Hz），0.78（Ｓ，９Ｈ），−0.1（Ｓ，６Ｈ）ppm．例４：５’−ホルミルメチル−３’−アミノエチル−５’，３’ジデオキシチミジニル［３’（O）-５’（C）］-３”−tert−ブチルジメチルシリル−５”−デオキシチミジン（13） −78℃において二量体（12;200mg；0.3mM）の無水THF（３ml）中溶液にシリンジによって徐々に水素化ジイソブチルアルミニウム（ヘキサン中１Ｍ；1.8mM；1 .8ml）を添加した。−78℃で３時間の後にTLCで検査したところ、出発原料は全て消失していることが示された。−78℃においてメタノール（193μｌ）を添加することによって反応を抑えた。次いで、反応混合物を０℃に加温し、硫酸ナトリウム水溶液（350μｌ）を添加し、次いで、エーテル（5.2ml）及び硫酸ナトリウムを添加した。混合物を室温で20分間激しく攪拌した後、ブフナー漏斗を通して濾過した。濾液を蒸発させて粗製アルデヒド13を155mg生成した。この粗製生成物を¹HNMRで検査したところ、9.64ppmにアルデヒドのプロトンが明白に示された。このアルデヒドを、さらに精製せずに次の工程に使用した（収率＝50％）。例５：５’−ジメトキシトリチルメチル−３’−アミノエチル−５’，３’ジデオキシチミジニル［３’（O）-〉５’（C）］−３’−アミノエチル−５’，３ ’−ジデオキシチミジル［３’（O）-〉５’（C）］−３’−tert−ブチルジメチルシリル−５”−デオキシチミジン０℃において粗製アルデヒド（13；155mg；約0.15mM）及び３’−アミノ−３ ’−デオキシ−５’−ジメオキシトリチルチミジン（14；0.14mM；75mg）のエタノール（1.5ml）及び燐酸緩衝液（pH5.5,0.3ml）中溶液に、シリンジによって徐々にシアノ硼水素化ナトリウム（THF中１Ｍ；0.3mM；0.3ml）を添加した。０℃ においてさらに３時間攪拌した後にTLCによって検査したところ、反応が完了していることが示された。反応混合物を酢酸エチル（15ml）で希釈し、水（４ml）及びブライン（２ml）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。粗製生成物をフラッシュクロマトグラフィー（SiO₂：５ｇ，５％飽和NH₃／EtOAc 中MeOH）によって精製した。表題化合物（三量体）の収率は5 0％（81mg）であった。R_f＝0.15（５％飽和NH₃／EtOAc中MeOH）。 ¹HNMR（CDCl₃）：7.62（ｓ，１Ｈ），7.44−7.28（ｍ，９Ｈ），7.18（ｓ，１Ｈ），7.10（ｓ，１Ｈ），6.30（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６Hz），6.13（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６Hz），6.05（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６Hz），4.11（ｍ，１Ｈ），3.92（ｍ，１Ｈ）， 3.84（ｍ，１Ｈ），3.80（ｓ，６Ｈ），3.75（ｍ，１Ｈ），3.55−3.4（ｍ，２Ｈ），2.65−2.2（ｍ，14Ｈ），1.92（ｓ，３Ｈ），1.90（ｓ，３Ｈ），1.68（ｍ，４Ｈ），1.52（ｓ，３Ｈ），0.85（ｓ，９Ｈ），0.05（ｓ，６Ｈ）ppm．例６：５’−ジメトキシトリチル−３’−（Ｎ−トリフルオロアセチル）アミノエチル−５’，３’ジデオキシチミジニル［（３’（O）-〉５’（C）］- ３’- （Ｎ−トリフルオロアセチル）アミノエチル−５’，３’−ジデオキシチミジル［３’（O）-〉５’（C）］−３’−tert−ブチルジメチシリル−５”−デオキシチミジン（15）０℃において例５の三量体（70mg：0.06mM）及びトリエチルアミン（1.2mM；1 67μｌ）の塩化メチレン（１ml）中溶液にシリンジによって、無水トリフルオロ酢酸（0.6mM；84.75μｌ）を滴加した。30分後にTLCによって検査したところ、全ての出発原料は完全に消失していることが示された。反応混合物を蒸発乾固し、残渣を短カラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得た。R_f ＝0.55（５％飽和NH₃／EtOAc中MeOH）。FABMS：MH⁺＝1353：（Ｍ−Ｈ）^-＝1351 ． ¹HNMR（CDCl₃）：7.55（ｓ，１Ｈ；５’−チミン５−Ｈ）；7.10（ｓ，１Ｈ，チミン５−Ｈ），7.02（ｓ，１Ｈ，チミン５−Ｈ），6.38（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６Hz；５’−リボース１’−Ｈ），6.10（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６Hz；リボース１’−Ｈ），5.95（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６Hz；リボース１’ −Ｈ），1.96（ｓ，３Ｈ，チミン５−Me），1.90（ｓ，３Ｈ，チミン５−Me ），1.6（ｓ，３Ｈ，５’−チミン −５−Me），0.85（ｓ，（Ｈ，ｔ−BuSi），0.05（Ｓ，６Ｈ，Si−Me₂）．例７：５’−カルベトキシメチレン−３’−アジド−５’，３’ジデオキシチミジン（16）窒素下で−78℃において塩化オキサリル（288μｌ，3.3mM）の塩化メチレン（ 7.6ml）中攪拌溶液に、DMSO（426μｌ，６mM）の塩化メチレン（1.5ml）中溶液を添加した。５分後に、３’−アジド−３’−デオキシチミジン（801mg；３mM ）のDMSO／CH₂Cl₂（1.12ml／3.47ml）中溶液を10分間にわたって添加した。攪拌を20分間続けた後、トリエチルアミン（2.09ml，15mM）を添加し、反応混合物をさらに５分間攪拌した。（カルベトキシメチレン）トリフェニルホスホラン（1. 57ｇ；4.5mM）を塩化メチレン（９ml）の溶液中に添加し、反応混合物を−78℃ において30分間攪拌し、次いで、室温に１時間放置した。次に、粗製反応混合物を冷水（20ml）で急冷し、酢酸エチル（２×50ml）中に抽出し、ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。粗製生成物をフラッシュクロマトグラフィー（SiO₂：60ｇ：60％酢酸エチル／ヘキサン）によって精製して、表題化合物765mg（76％）を生成した。R_f＝0.47（７／３EtOAc／ヘキサン）。 IR：2107cm^-（Ｎ₃）：FAB-MS：MH⁺＝336；¹ HNMR（CDCl₃）：7.04（ｓ，１Ｈ），6.94（dd，１Ｈ，Ｊ＝5.5Hz，1.8Hz），6. 16-6.10（ｍ，２Ｈ），4.34（ｔ，１ＨＪ＝６Hz），4.20（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７H z），4.09（ｍ，１Ｈ），2.4（ｍ，２Ｈ），1.91（ｓ，３Ｈ），1.28（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７Hz）．例８：５’−カルベトキシメチル−３’−アミノ−５’，３’−ジデオキシチミジン（18） Parr装置（30psi）中で10％Pd／Ｃ（210mg；30重量％）の存在下において、例７のエステル（16；700mg，2.09mM）のメタノール（15ml）中溶液を水素添加に供した。水素添加反応は24時間後に完了した。触媒を濾過し、濾液を蒸発させて、表題化合物620mg（96％）を生成した。R_f＝0.3（５％飽和NH₃／EtOAc中MeOH）。FAB-MS：MH⁺＝312。¹ HNMR（CDCl₃：7.4（ｓ，１Ｈ），6.11（dd，１Ｈ，Ｊ＝５Hz，３Hz），4.1（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７Hz），3.62（ｍ，１Ｈ），2.51−2.10（ｍ，７Ｈ），1.87（ｓ，３Ｈ），1.24（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７Hz）ppm．例９：５’−カルベトキシメチレン−３’−アミノ−５’，３’−ジデオキシチミジン（10）例７のエステル（16；700mg：2.09mM）のTHF／H₂O（10ml／１ml）中攪拌溶液にトリフェニルホスフィン（786mg；３mM）を添加し、反応を付属のガスバブラーからのガス発生によって監視した。反応は３時間に完了した。混合物を減圧蒸発させ、粗製油をSiO₂（50ｇ）上でクロマトグラフ処理し、５％飽和アンモニア（メタノール／酢酸エチル中）で溶離させて、表題化合物を93％の収率（600mg ）で生成した。R_f＝0.3（５％飽和NH₃／EtOAc中MeOH）。FAB-MS：MH⁺＝310。¹ HNMR（CDCl₃）：7.17（ｓ，１Ｈ），6.84（dd，１Ｈ，Ｊ＝15.5Hz，5.5Hz），5 .96（dd，１Ｈ，Ｊ＝５Hz，３Hz），5.72（dd，１Ｈ，Ｊ＝15.5Hz，1.5Hz），3. 95（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７Hz），3.2（ｍ，１Ｈ），2.2−1.9（ｍ，３Ｈ），1.67（Ｓ，３Ｈ），1.04（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７Hz）ppm．例10：５’−Ｏ−ジメトキシトリチルＮ−ベンゾイル−チミジン５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−３’-Ｏ-t-ブチルジメチルシリルチミジン（５ｇ）を無水ピリジン（50ml）中に溶解させ、次いで、この溶液に塩化ベンゾイル（1.5eq.）及びジイソプロピ−エチルアミン（1.5eq.）を添加した。得られた混合物を室温で一晩攪拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を酢酸エチルで希釈し、水、次いで、ブラインで洗浄し、フラッシュクロマトグラフィーによって30％酢酸エチル／ヘキサンを用いて精製した。ベンゾイル化生成物（2.0ｇ）をTHF（25ml ）中に溶解させ、−78℃に冷却し、次いで、THF（1.5eq.）中1.0Ｍ Bu₄NF溶液に添加した。２時間後、反応混合物を酢酸エチルで希釈し、水、次いで、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。表題化合物をフラッシュクロマトグラフィーによって、70％酢酸エチル／ヘキサンを用いて精製した。例11：５’−ビニル−３’-Ｏ-ｔ-ブチルジメチルシリルチミジン３’-O-t-ブチルジメチルシリルチミジン４’−アルデヒド（5.0ｇ；トルエン 25mlを用いて２回共沸蒸留した）を無水THF（60ml）中に溶解させ、−78℃に冷却し、次いで、THF中臭化ビニルマグネシウム（2.5eq.）の1.0Ｍ溶液を添加した。反応混合物を30分間攪拌した後、飽和NH₄Cl水溶液を用いて急冷し、酢酸エチルで希釈し、水（２×100ml）、次いで、ブラインで洗浄した。次に、有機層を乾燥させた。表題化合物をフラッシュクロマトグラフィーによって、30％酢酸エチル／ヘキサンを用いて精製して、目的アルコールを43％の収率で生成した。例12：５’−Ｏ−カルベトキシ−５’−ビニル−３’-Ｏ-t-ブチルジメチルシリルチミジン５’−ビニル−３’-Ｏ-t-ブチルジメチルシリルチミジン（2.0ｇ）の塩化メチレン30ml中溶液に、クロロ蟻酸エチル（６eq.）及びピリジン（12e q.）を添加し、得られた混合物を２時間攪拌した。混合物を酢酸エチルで希釈し、炭酸水素ナトリウム水溶液、次いで水（２×25ml）、その次にブラインで洗浄した。次いで、有機層を乾燥させた。表題化合物をフラッシュクロマトグラフィーによって20％酢酸エチル／ヘキサンを用いて精製した。例13：５’−Ｏ−カルベトキシ−５’−ビニル−３’-Ｏ-t-ブチルジメチルシリルＮ−ベンゾイル−チミジン５’−Ｏ−カルベトキシ−５’−ビニル−３’-Ｏ-t-ブチルジメチルシリルチミジン（1.7ｇ）のピリジン20ml中溶液に塩化ベンゾィル（2.5eq）及びジイソプロピル−エチルアミン（95.0eq）を添加し、得られた混合物を15時間攪拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、炭酸水素ナトリウム水溶液、次いで、ブラインで洗浄した後、有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。表題化合物をフラッシュクロマトグラフィーによって20％酢酸エチル／ヘキサンを用いて精製した。例14：５’−ジメトキシトリチルメチル−３’−Ｏ−エチル−Ｎ−ベンゾイル− チミジニル［３’（O）-〉５’（C）］−５’−デオキシ−Ｎ−ベンゾイル−チミジン窒素下、無水THF４ml中トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（Ｏ）（75mg）の溶液に、１，４−ビスジフェニルホスフィノブタン（144mg）を添加し、得られた混合物を15分間攪拌した。次いで、混合物を５分間50℃に加熱した後、室温に戻した。前記混合物に５’−Ｏ−ジメトキシ−トリチルＮ−ベンゾイル−チミジン（580mg）を添加し、50℃に加熱しながら10分間攪拌した。前記反応混合物にTHF６ml中５’−Ｏ−カルベトキシ−５’−ビニル−３’−Ｏ-t-ブチルジメチルシリルＮ−ベンゾイル−チミジン1.0ｇを１時間にわたって滴加した。粗製生成物をフラッシュクロマトグラフィーによって 25〜35％酢酸エチル／ヘキサンを用いて精製して、二量体を58％の収率で生成した。得られた不飽和二量体を窒素下で酢酸エチル50ml中に溶解させ、10％Pd／Ｃを70mg添加し、得られた混合物を水素雰囲気下で２時間攪拌した。触媒をセライトパッドを用いて濾過し、溶媒を減圧下で除去して、還元二量体400mgを生成した。シリル化還元二量体をTHF 20ml中に溶解させ、−78℃に冷却し、次いで、Bu₄ NF（1.5eq.）を添加し、得られた反応混合物１時間攪拌し、酢酸エチルで希釈し、水、次いで、ブラインで洗浄し、次に、有機層を乾燥させた。表題二量体化合物をフラッシュクロマトグラフィーによって３％メタノール／塩化メチレンを用いて精製した。例15：５’−ジメトキシトリチル−３’−Ｏ−エチル−Ｎ−ベンゾイル−チミジニル［３’（O）-〉5’（C）］−５’−デオキシ−３’−Ｏ−エチル−Ｎ−ベンゾイル−チミジル［３’（O）-〉５’（C）］−３’−tert−ブチルジメチルシリル−５”−デオキシチミジントリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（Ｏ）（４モル％）及び１，４−ビスジフェニルホスフィノブタン（12モル％）の溶液に、５’−ジメトキシ −トリチル−３’−Ｏ−エチル−Ｎ−ベンゾイル−チミジニル［３’（O）->５ ’（C）］−５’−デオキシ−Ｎ−ベンゾイル−チミジン80mgを添加し、混合物を50℃に加熱した。前記反応混合物にTHF１ml中５’−Ｏ−カルベトキシ−５’ −ビニル−３’-Ｏ-t-ブチルジメチルシリル−Ｎ−ベンゾイル−チミジン（２eq .）を30分間にわたって滴加した。粗製三量体を調製用薄層クロマトグラフィーによって60％酢酸エチル／ヘキサンを用いて精製した。生成物を酢酸エチルで抽出し、溶媒を減圧下で除去した。三量体を窒素下で酢酸エチル10ml中に溶解させた。次いで、10％Pd／Ｃ10 mgを添加し、得られた混合物を水素雰囲気下で攪拌した。触媒をセライトパッド上で濾過した。三量体の¹H NMR分析によって、目的とする表題化合物の形成が確認された。例16：５’−ビニル−５’−デオキシ−３’−ｔ−ブチルジメチルシリルデオキシチミジン０℃においてメチルトリフェニルホスホニウムブロミド（0.7ミリモル）の無水THF中溶液に、ナトリウムビス（トリメチルシリルアミド）（0.6ミリモル）の溶液を滴加した。30分後、窒素下で３’-Ｏ-t-ブチルジメチルシリルチミジン４ ’−アルデヒドのTHF中溶液を滴加した。反応混合物を２時間攪拌し、酢酸エチルで希釈し、水、次いでブラインで洗浄し；有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、表題化合物をフラッシュクロマトグラフィーによって20％酢酸エチル／ヘキサンを用いて精製して、表題化合物を55％の収率で生成した。例17：３’-Ｏ-t-ブチルジメチルシリル−５’−デオキシ−５’−ヒドロキシメチルチミジン０℃において無水THF３ml中２Ｍの２−メチル−２−ブテン（1.5ml，３ミリモル）の溶液に、窒素下で徐々に１Ｍボラン−テトラヒドロフラン複合体（３ml，２ミリモル）1.6eq.を添加した。溶液を10分間攪拌した後、無水THF５ml中５ ’−ビニル−５’−デオキシ−３’−ｔ−ブチルジメチルシリルチミジン（0.7 ｇ，1.9ミリモル）を添加した。反応混合物を45分間攪拌した後、２日間冷蔵庫に入れて置いた。２Ｍ酸化ナトリウム3.1eq.及び30％過酸化水素3.1eq.を含む水溶液を用いて処理を行った。溶液は０℃において添加漏斗を通して反応混合物に徐々に添加し、１時間攪拌し、氷浴から除去し、酢酸エチルで希釈し、水、次いで、飽和塩化ナトリウムで洗浄した後、有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。表題化合物をフラッシュクロマトグラフィーによって酢酸エチル／ヘキサンの20〜80％勾配を用いて精製した。例18：３’-Ｏ-t-ブチルジメチルシリル−５’−デオキシ−５’−ホルミルチミジン例11において３’-Ｏ-t-ブチル−ジメチルシリルチミジン４’−アルデヒドに関して記載したのと同様な方法を用いて、３’-Ｏ-t-ブチルジメチルシリル−５ ’−デオキシ−５’−ヒドロキシメチルチミジンを酸化して表題アルデヒドに生成した。例19：３’-Ｏ-t-ブチルジメチルシリル−５’−デオキシ−５’−カルベトキシエチルチミジン３’-Ｏ-t-ブチルジメチルシリル−５’−カルベトキシメチレン−５’−デオキシ−チミジン（4.24ｇ，10ミリモル）の酢酸エチル中攪拌溶液に、窒素雰囲気下において10％Pd／Ｃ200mgを添加した。窒素ガスを減圧によって除去し、水素を導入した。この操作を２回繰り返し、水素雰囲気下で16時間攪拌を続けた。触媒をセライトパッド上で濾過し、溶媒を減圧除去した。表題化合物をヘキサン／酢酸エチルから結晶化した。表題化合物を95％の収率で得た。例20：５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−３’−アセトキシメチル−３’−デオキシ−チミジン５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−３’−ヒドロキシメチル−３’−デオキシ− チミジンの塩化メチレン20ml中溶液に触媒量のジメチルアミノ−ピリジン及び過剰の無水酢酸を添加した。１時間後、反応混合物を酢酸エチルで希釈し、炭酸水素ナトリウム水溶液、次いで、ブラインで洗浄し、有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。表題化合物をフラッシュクロマトグラフィーによって25％酢酸エチル／ヘキサンを用いて精製した。例21：５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−３’−メチレン−３’−デオキシ−チミジン M．Sharma及びM Bobek（Tetrahedron Letters：5839〜5842，1990）によって記載された方法に従って、表題化合物を製造した。例22：５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−３’−ヒドロキシメチル−３’−デオキシ−チミジン −23℃において５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−３’−メチレン−３’−デオキシ−チミジン（200mg）の塩化メチレン５ml中溶液に、攪拌しながら、THF（2. 5eq.）中ボランの１Ｍ溶液を添加した。１時間後、THF（1.5eq.）中１Ｍボランをさらに加え、混合物を２時間攪拌した。反応混合物を0.5Ｍ NaOH-H₂O₂の混合物で急冷し、15分間攪拌した。目的生成物を酢酸エチルで抽出し、水、次いで、ブラインで洗浄し、有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。表題化合物をフラッシュクロマトグラフィーによって90％酢酸エチル／ヘキサンを用いて精製した。例23：５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−３’−ホルミル−３’−デオキシ−チミジン５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−３’−ヒドロキシメチル−３’−デオキシ− チミジン（215mg，0.39ミリモル）の塩化メチレン４ml中溶液に、０℃においてD ess-Martin Periodinate（245mg，1.5eq.）を添加し、混合物を30分間攪拌した。10％チオ硫酸水素ナトリウム水溶液（３ml）を前記混合物に添加し、５分間攪拌した。得られた混合物を酢酸エチルで希釈し、水、次いで、ブラインで洗浄し、有機層を乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、粗製アルデヒドをクロロホルム 20ml中に溶解させた。DBUを１滴添加し、得られた反応混合物を６時間攪拌した。表題化合物をフラッシュクロマトグラフィーによって５％メタノール／塩化メチレンを用いて精製した。例24：３’-Ｏ-t-ブチルジメチルシリル−５’−アミノメチル−５ ’−デオキシチミジン３’-Ｏ-t-ブチルジメチルシリル−５’−デオキシ−５’−カルボキシメチルチミジン（400mg）の無水トルエン10ml中攪拌溶液に、トリエチルアミン（1.1eq .）及びジフェニルホスホリルアジド（1.1eq.）を添加し、混合物を40分間攪拌しながら60℃に加熱した。過剰のベンジルアルコールを混合物に添加し、４時間攪拌を続けた。カルバメートをフラッシュクロマトグラフィーによって５％メタノール／塩化メチレンを用いて精製した。カルバメート（300mg）を酢酸エチル５ml中に溶解させ、この溶液にPd（OH）₂ 30mgを添加した。得られた混合物を水素雰囲気下で12時間攪拌した。触媒を濾過し、表題化合物をフラッシュクロマトグラフィーによってメタノール／塩化メチレンの10〜30％の勾配を用いて精製した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＣ０７Ｈ 21/04 8615−4ＣＣ０７Ｈ 21/04 Ｚ // Ｃ１２Ｎ 15/09 9162−4ＢＣ１２Ｎ 15/00 Ａ

Claims

【特許請求の範囲】１．構造式：［式中、ＱはＨ、NHZ、OZ、SZ、CHO、COOR、ハロゲン、ホスホニウム塩及びホスホネートからなる群から選ばれ；Ｌは、NHZ、OZ、SZ、CHO、COOR、ハロゲン、ホスホニウム塩及びホスホネートからなる群から選ばれ； Q-（HCR）n-及びL-（HCR）m-はまた、独立してであることができ；各Ｒは独立して、Ｈ、低級アルキル、低級アルケニル、アリール及びアシルからなる群から選ばれ；各Ｚは独立して、Ｈ、低級アルキル、低級アルケニル、アリール、アシルならびにＯ−、Ｓ−及びＮ−の保護基からなる群から選ばれ；各Ｅは独立して、Ｈ及びOZからなる群から選ばれ；ｍは０または１〜４の整数であり；ｎは１〜５の整数であり；各Ｂは独立して、アデニン、シトシン、グアニン、チミン、ウラシル、またはそれらの修飾形からなる群から選ばれ、該修飾形は、オリゴヌクレオシドまたはキメラオリゴヌクレオチド類似体のそのアンチセンス対応物（塩基はアデニン、シトシン、グアニン、チミン及びウラシルからなる群から選ばれる）に対する親和性を本質的には妨害しない］を有する化合物。２．ＱがCHO及びCOORからなる群から選ばれ、ｎが２であり、ｍが０であり、且つＬがOZである請求の範囲第１項の化合物。３．ＱがCHO及びCOORからなる群から選ばれ、ｎが２であり、ｍが０であり、且つＬがNHZである請求の範囲第１項の化合物。４．下記式II：［式中、各Ｒ₂は独立して、P（O₂）OZ、OZ、NHZ、SZ、CHRCHRNHZ及びCR＝CRNHZからなる群から選ばれ；各Ｒは独立して、Ｈ、低級アルキル、低級アルケニル、アリール及びアシルからなる群から選ばれ；各Ｚは独立して、Ｈ、低級アルキル、低級アルケニル、アリール、アシルならびにＯ−、Ｓ−及びＮ−の保護基からなる群から選ばれ；各Ｅは独立して、Ｈ及びOZからなる群から選ばれ；各Ｂは独立して、アデニン、シトシン、グアニン、チミン、ウラシル、またはそれらの修飾形からなる群から選ばれ、該修飾形は、オリゴヌクレオシドまたはキメラオリゴヌクレオチド類似体のそのアンチセンス対応物（塩基はアデニン、シトシン、グアニン、チミン及びウラシルからなる群から選ばれる）に対する親和性を本質的には妨害せず；ＷはD-D-Dであり、各Ｄは独立して、（HCR）、酸素またはNHRであるが、ただし、各ＷのＤのうち２個は（HCR）であり、第３のＤは−Ｏまたは-NHRであり；ｊは１〜60の整数であり；ｋは０または１〜60の整数であり；且つｑは０または１〜60の整数であるが、ただし、ｊ＋ｋ＋ｑの合計は３〜約60である］を有する化合物。５．ｊ＋ｋ＋ｑの合計が３または４である請求の範囲第４項の化合物。６．ｊ＋ｋ＋ｑの合計が６〜60である請求の範囲第４項の化合物。７．ｊ＋ｋ＋ｑの合計が９〜50である請求の範囲第４項の化合物。８．ｊ＋ｋ＋ｑの合計が12〜25である請求の範囲第４項の化合物。９．ｊ＋ｋ＋ｑの合計が15〜18である請求の範囲第４項の化合物。 10．ＷがNHR-CHR-CHRである請求の範囲第４項の化合物。 11．ＷがO-CHR-CHRである請求の範囲第４項の化合物。 12．ＷがCHR-CHR-NHRである請求の範囲第４項の化合物。 13．ＷがCHR-NHR-CHRである請求の範囲第４項の化合物。 14．Ｒ₂がP（O₂）OZまたはOZである請求の範囲第４項の化合物。 15．下記構造式II：［式中、各Ｒ₂は独立して、P（O₂）OZ、OZ、NHZ、SZ、CHRCHRNHZ及びCR＝CRNHZからなる群から選ばれ；各Ｒは独立して、Ｈ、低級アルキル、低級アルケニル、アリール及びアシルからなる群から選ばれ；各Ｚは独立して、Ｈ、低級アルキル、低級アルケニル、アリール、アシルならびにＯ−、Ｓ−及びＮ−の保護基からなる群から選ばれ；各Ｅは独立して、Ｈ及びOZからなる群から選ばれ；各Ｂは独立して、アデニン、シトシン、グアニン、チミン、ウラシル、またはそれらの修飾形からなる群から選ばれ、該修飾形は、オリゴヌクレオシドまたはキメラオリゴヌクレオチド類似体のそのアンチセンス対応物（塩基はアデニン、シトシン、グアニン、チミン及びウラシルからなる群から選ばれる）に対する親和性を本質的には妨害せず；Ｗは、D-D-D（各Ｄは独立して（HCR）、酸素またはNHRであるが、ただし、各ＷのＤのうち２個は（HCR）であり、第３のＤは−Ｏまたは-NHRである）及び天然ホスホジエステルヌクレオシド間結合からなる群から選ばれるが、少なくとも１個のＷは天然のホスホジエステル結合であり且つ少なくとも２個の隣接するＷはD-D-Dであり；ｊは１〜60の整数であり；ｋは０または１〜60の整数であり；且つｑは０または１〜60の整数であるが、ｊ＋ｋ＋ｑの合計は３〜約60である］を有する化合物。 16．２個の炭素原子と１個の窒素原子または２個の炭素原子と１個の酸素原子の、少なくとも２個１組の連続ヌクレオシド間結合を有する、塩基数３〜60のヌクレオシド配列からなる化合物の合成方法であって、５’−ヌクレオシド、中間二官能価ヌクレオシド一量体、二量体、三量体または四量体、及び３’−ヌクレオシドをつなげて、下記構造式II：［式中、各Ｒ₂は独立して、P（O₂）OZ、OZ、NHZ、SZ、CHRCHRNHZ及びCR＝CRNHZからなる群から選ばれ；各Ｒは独立して、Ｈ、低級アルキル、低級アルケニル、アリール及びアシルからなる群から選ばれ；各Ｚは独立して、Ｈ、低級アルキル、低級アルケニル、アリール、アシルならびにＯ−、Ｓ−及びＮ−の保護基からなる群から選ばれ；各Ｅは独立して、Ｈ及びOZからなる群から選ばれ；各Ｂは独立して、アデニン、シトシン、グアニン、チミン、ウラシル、またはそれらの修飾形からなる群から選ばれ、該修飾形は、オリゴヌクレオシドまたはキメラオリゴヌクレオチド類似体のそのアンチセンス対応物（塩基はアデニン、シトシン、グアニン、チミン及びウラシルからなる群から選ばれる）に対する親和性を本質的には妨害せず；ＷはD-D-Dであり、各Ｄは独立して、（HCR）、酸素またはNHRであるが、各ＷのＤのうち２個は（HCR）であり、第３のＤは−Ｏまたは-NHRであり；ｊは１〜60の整数であり；ｋは０または１〜60の整数であり；且つｑは０または１〜60の整数であるが、ただし、ｊ＋ｋ＋ｑの合計は３〜約60である］を有するオリゴマーを生成する方法。 17．前記反応を遺伝子自動合成装置中で実施する請求の範囲第16項の方法。 18．遺伝子発現の抑制の必要な宿主哺乳類に、抑制有効量の、請求の範囲第４項の化合物を投与することを含んでなる遺伝子発現の抑制方法であって、該化合物が該遺伝子のヌクレオチド配列に対してハイブリッド形成する方法。 19．医薬として許容され得る塩を含んでなる請求の範囲第１項の化合物。 20．生理的に許容され得る担体中に溶解または分解された、請求の範囲第４項の化合物を含んでなる医薬組成物。