【発明の詳細な説明】
発芽する種子材料の処理方法
発明の分野：
本発明は、発芽する種子材料の処理方法に関するものである。
発明の背景：
本明細書中において、発芽工程とは、貯蔵−乾燥種子から始まる、発芽物を製
造するために必要である一般的な処理工程であると解する。例えば、醸造や蒸留
工業においては、麦芽製造工程である、発芽工程は、ビール、または他のアルコ
ール飲料、即ち、大麦麦芽酒（barley malt）、ライ麦麦芽酒（rye malt）若し
くはいずれかの麦芽酒等の穀類の麦芽酒（cereal malt）の重要な原材料を製造
するのに用いられる。さらに、発芽工程は、豆の胚芽（sprout）若しくはヒトの
栄養素に用いられる胚芽等の、様々な市販の胚芽製品を製造するのに用いられて
いる。
発芽処理は、一般的には無菌ではない条件下で行われる。
種子を処理すると、成長の環境または貯蔵から微生物が発生する。発芽工程中の
条件は、種子上に存在する微生物にとって最も好ましいものであり、このためこ
のような微生物は一般的にこの工程期間中に繁殖する。微生物は、発芽物にまた
は発芽物から最終的に作られる最終産物に有害な
作用を及ぼすが、その一方、発芽するものに好ましい影響をも同様に及ぼす。
ビールの醸造工程の主な段階としては：製麦、麦汁製造、１次及び２次発酵、
および沈降処理（downstream processing）がある。麦芽製造の目的は、仕込段
階で穀粒の内胚乳物質を麦汁に可溶な形態に分解する酵素を穀粒中に生成するこ
とである。例えば、大麦の種子の製麦工程が以下の３段階からなることはよく知
られている；浸麦、発芽及び焙燥。洗浄及び選粒された大麦の穀粒を、目的とす
る水分が例えば４３〜４４％のオーダーになるまで水中に浸麦する。浸麦の一部
はいわゆる空気休止（air rest）においてなされる。大麦を制御された条件下で
発芽させ、発芽した大麦は、発芽が最終に至るまで熱風流中で焙燥される。焙燥
が終了した際、幼根を麦芽から除去する。製麦段階の調節は、温度、風量及び水
分／湿度の制御に基づく。
麦芽の質は、製麦技術及び製麦条件に、さらには麦芽粒の微生物叢によっても
、影響され、この叢は、例えば、穀物の種類、天候条件、成長部位、成長期の長
さ及び貯蔵条件等によってかなり変化する。
大麦は製麦に最も頻繁に使用される穀物である。大麦の本来の、自然の微生物
叢は、分野及び貯蔵として、カビ、細菌および酵母に分類できる。大麦の最も一
般的な分野のカビは以下の通りである：フザリウム（Fusarium）、アルテルナリ
ア（Alternaria）、クラドスポリウム（C1adosporium）、
セファロスポリウム（Cepha1osporium）、エピコッカム（Epicoccum）、及びヘ
ルミントスポリウム（He1minthosporium）。
カビの発生は様々な国及び様々な年によって異なる。穀物の成長期、特に収穫の
間が湿った天候の条件は、フザリウム（Fusarium）カビの増殖に適している。フ
ザリウムの汚染は、雨の多い成長期では特にひどい。穀物に関する最も一般的な
細菌の一つにエンテロバクター アグロメランス（Enterobacter agglomerans）
がある。特記すべき他の細菌としては以下が挙げられる：大腸菌（Escherichia coli）
、及びシュードモナス（Pseudomonas）、ミクロコッカス（Micrococcus）
及びバシラス（Bacillus）属の細菌、および乳酸菌。大麦の細菌のコロニー数は
、約１０5〜１０8ＣＦＵ／ｇ（１ｇ当たりのコロニー形成単位）である。
大麦におけるカビや細菌は製麦中に増加し、濃度のピークは一般的には発芽段
階中に達する。フザリウム（Fusarium）カビ、および特に乳酸菌は最も繁殖しや
すい。酵母も製麦中に増加する。焙燥段階では、カビ、酵母及び細菌の濃度は原
則として再度減少する。一部の大麦に存在する微生物は麦芽製造およびビール等
の麦芽から作られる製品の観点において有用な効果を有する。麦芽中の酵素の４
０〜５０％までが微生物由来であると考えられている。一方、一部の微生物は大
麦および／または麦芽に有害な影響を及ぼす。
好ましくない微生物のうち、フザリウムカビは特記する
に値し、このカビは他のカビよりも頻繁に好ましくないビールの噴き（gushing
）を特に生じさせ、さらにこのカビによって産生されたペプチドは強力な噴きの
状態でビール瓶から噴き出るガスの泡の主原因を構成する。５０％を超える製麦
された穀粒がフザリウムカビで汚染されると、噴きの危険性が明らかに増加する
。
さらに、シュードモナス（Pseudomonas）やフラボバクテリウム（F1avobacterium）
属に属する種等の、大麦中に存在するグラム陰性細菌、およびリューコノ
ストック（Leuconostoc）属のグラム陽性細菌は、麦汁の製造に関連したマイシ
ェ（糖化もろみ）(mash)の濾過を遅延させることが知られている。また、大麦中
に存在する様々な微生物によって、例えば、発芽を阻害する、風味のなくさせる
または麦汁やビールの分析上の価値を好ましくなく変化させる等の、他の好まし
くない効果が生じる。
麦芽となる大麦の質の必要条件は、毎年確立される栽培の契約や引渡しの交渉
で明細に記される。カビは、質に関する明細書中に頻繁に記載される微生物の一
群である。多くの製麦用植物は特定のカビの上限がさらに課される。フザリウム
が汚染した穀粒の割合が６５％を超えるまたはアスペルギルス（Aspergillus）
及びぺニシリウム（Penicillium）カビの相当する割合が５０％を超える際には
、その大麦は、質が悪いとまたは製麦に使用するのは不適当とさえ分類される。
カビによって誘導される噴きを防止する試みが、良質の大麦を用いることによ
ってまたは大麦、麦芽若しくはビールのバッチを混合することによって成されて
きた。多雨の年には、ほとんどすべての大麦の穀物の質が悪く、この場合には良
質の大麦を得ることができない。殺菌剤もまたカビの量を減らすために試みられ
たが、安全でかつ通常許容できる薬品が見つからなかった。
栄養物摂取のために使用される胚芽を得るための発芽工程は、同様にして、例
えばカビや細菌の繁殖に好都合な条件をも提供する。このため、このような胚芽
製品は直ぐに腐ってしまう。さらに、発芽に関連して、このような増加は、例え
ば、サルモネラ（Sa1monella）、ヤーシニア（Yersinia）および／またはリステ
リア（Listeria）細菌等の、食物毒を引き起こす食品病原体に代わる。
発明の要約：
本発明の目的は、上記した欠点を排除することである。
詳しくは、本発明の目的は、発芽物やこれから作られる最終生成物の質には悪
影響を及ぼさずに、微生物叢の量および質を発芽工程中に念入りに制御できる方
法を提供することである。
本発明を特定する事項に関して、請求の範囲を参照する。
発明の詳細な説明：
本発明は、乳酸菌が発芽する製品の質を向上させるのに使用できるという予期
せぬ観察がなされたことに関連した
研究を基礎とするものである。本発明の調製物からなるおよび／または該調製物
によって製造される物質、すなわち殺菌剤は、発芽工程に関連して生じる有害な
微生物の成長を阻害する。
食品および動物用飼料工業における乳酸菌の使用は当該分野において既知であ
る。この乳酸菌は、生成物の組成や風味には影響を与えるが当該生成物を腐らせ
る病原性の微生物の成長を阻害するような化合物を発酵条件下で製造する。乳酸
菌は、一般的に日用製品、肉製品、野菜発酵品及びパン製品に、さらには飼料の
保存に用いられてきた。
乳酸菌または乳酸の添加は、ある種の麦芽タイプの、いわゆるサウエルモルツ
（Sauermalz）の製造で行われている。このような添加は、焙燥段階中、仕込の
前または仕込中に麦芽に対して成される。添加による目的は、単に麦汁のｐＨの
低下を引き起こすことにより、仕込工程の期間中及び仕上げられたビールの質に
影響を及ぼすことである。しかしながら、乳酸菌は、従来、本発明によって示唆
されるようには：即ち、発芽工程に関連した望ましくない微生物の成長を阻害す
ることに、使用されていなかった。
本発明の調製物は、発芽工程のいずれの段階の発芽すべき生成物に添加しても
よい。
特に好ましい実施態様においては、乳酸菌調製物、または乳酸菌によって製造
された調製物を、製麦期間中、大麦穀粒等の、穀物材料に添加する。添加された
調製物は、カ
ビ、特に有害なフザリウムカビ、および細菌の成長を阻害し、その結果、例えば
、フザリウムカビによるビールの噴きの危険性を減少させる。しかしながら、上
記調製物は、得られる麦芽やそれから製造されるビールの質に関する有用な微生
物叢の作用には実質的に作用しない。麦芽の質への添加される調製物の有害な効
果は観察されず、また、麦芽若しくはビールを製造する点において有害である化
合物を含まないまたはこのような化合物を製造しないことも分かった。
製麦工程では、乳酸菌調製物、または乳酸菌によって製造された調製物を、浸
麦の前、浸麦段階においてまたは発芽段階において、大麦穀粒に添加することが
できる。浸麦または発芽段階で添加することが好ましい。製麦工程を、他の部分
に関しては、それ自身既知の方法で、行ってもよい。必要であれば、例えば、栄
養素を製麦される大麦に加えてもよく、または、乳酸菌の成長条件を最適化する
ために、例えば、乳酸を添加する等の、条件を調節してもよい。
本発明において、微生物の成長を阻害する効果を有するものであれば一般的に
使用される乳酸菌を使用することが可能である。以下に使用できる乳酸菌の属を
記載する：ラクトコッカス（Lactococcus）、リューコノストック（Leuconostoc ）
、ペディオコッカス（Pediococcus）及びラクトバシラス（Lactobaci1lus）。
以下に本発明に好ましい種を記載する：ラクトコッカス ラクティス（Lactococ cus lacti
s）
、リューコノストック メセンテロイデス（Leuconostoc mesenteroides）
、ペディオコッカス ダムノサス（Pediococcus damnosus）、ペディオコッカス
パルヴァラス（Pediococcus parvulus）、ペディオコッカス ペントサセウス（Pediococcus pentosaceus）
、ラクトバシラス カーヴァタス（Lactobacillus curvatus）
及びラクトバシラス プランタラム（Lactobacillus plantarum）、
またはこれらの混合物。これらのうち、以下が特に好ましい：ラクトバシラス
プランタラム（Lactobacillus plantarum）及びぺディオコッカス ペントサセ
ウス（Pediococcus pentosaceus）、またはこれらの混合物。遺伝子修飾された
乳酸菌を使用してもよい。
乳酸菌調製物は、細胞を含む若しくは含まない、肉汁培養液（culture broth
）から、または濃縮された肉汁培養液（culture broth）（細胞を含む）から構
成される。乳酸菌によって製造される調製物は、細胞を含まない培養濾液から、
濃縮された培養濾液から、分画された培養濾液から、または純粋な若しくは部分
的に精製された殺菌生成物から構成される。
特に好ましい実施態様によると、処理は濃縮されたまたは分画された肉汁培養
液を用いて行われ、この肉汁培養液は細胞を含まなくても若しくは細胞を含んで
いてもよい。濃縮は、例えば、凍結乾燥によってまたは蒸発によって成される。
肉汁培養液は、例えば、２〜２０〜４０倍に濃縮
される。
分画、即ち、殺菌生成物の精製は、クロマトグラフィー法を用いてあるいは限
外濾過によって等の既知の方法で行うことができる。
本発明の方法において、種子材料に添加される、乳酸菌を含む調製物、または
乳酸菌によって製造された調製物の微生物の成長阻害活性は、例えば、１ｋｇの
処理される種子材料当たり約１０〜１０，０００ｍｌの肉汁培養液量に相当し、
好ましくは１ｋｇの処理される種子材料当たり３０〜７，０００ｍｌであり、よ
り好ましくは１ｋｇの処理される種子材料当たり４０〜５，０００ｍｌである。
肉汁培養液の調製方法は実施例に記載する。本出願において考究されたものであ
るが、調製物の活性は使用する肉汁培養液で定義していることに留意すべきであ
る。等価の微生物成長阻害活性を有する本発明による調製物が他の肉汁培養液お
よび／または方法を用いて同様に製造できることは当業者には明らかである。
本発明によると、調製物は殺菌化合物を含む、および／または該調製物によっ
て発芽工程期間中に殺菌化合物を産生する。細胞調製物を用いる際には、細胞の
成長を、必要であれば、例えば、発芽工程中の条件を調節することによって、ま
たは栄養素を添加することによって、促進してもよい。また、この調製物は発芽
する材料中に存在する他の乳酸菌の成長を促進してもよい。
食品中の乳酸菌の使用が可能であり一般的には好ましいものと考えられている
ため、成長する乳酸菌由来の調製物もまた安全に使用できる。乳酸菌は、一般的
には、大麦の穀粒等の、発芽する種子の自然の微生物叢に含まれている。したが
って、本発明の方法は最大限天然である。また、種子上に本来存在する菌株を乳
酸菌株として使用することも可能である。
本発明によって、製麦において、ビールの噴き等の、フザリウムの汚染から生
じる有害性を減少することが可能になる。
さらに、上記方法は、予期せぬことに、醸造工程における濾過特性を向上する
ことも分かった。このことは、本発明の調製物がリューコノストック（Leuconos toc）
、シュードモナス（Pseudomonas）及びフラボバクテリウム（Flavobacteri um）
属に属する種等の、製麦中に発生し、マイシュの濾過を遅らせる有害な種の
菌数をも抑えるという事実によることが分かった。
他の好ましい実施態様によると、乳酸菌調製物または乳酸菌によって製造され
た調製物は、食品に使用される胚芽を製造する際に種子材料に添加される。
本発明によると、有害な微生物の成長が発芽工程中に抑制できる。本発明によ
って、生物学的な手段が工業的な発芽工程中に発芽する種子上で発生する有毒な
細菌の成長を防止するために初めて使用することが可能になる。
本発明の方法によって、全体としての発芽工程の一般的な衛生基準が向上する
。
以下に、本発明を実施例を参照しながら詳細に説明するが、単に詳細に説明す
るのみであり、本発明が実施例によって制限されるものではない。本発明の処理
は他の発芽工程においても使用できる。
図１は、比濁分析法によって測定された、乳酸菌培養濾液中の殺菌活性を表わ
すグラフである。図１では、標準成長曲線は試験生物であるエンテロバクター
アグロメランス（E．agglomerans）Ｅ−３９６を用い、生産株であるラクトバシ
ラス プランタラム（L．plantarum）Ｅ−７６及びペディオコッカス ペントサ
セウス（P．pentosaceus）Ｅ−３９０の培養濾液によって該試験生物の成長に及
ぼされる阻害効果が示される。
図２は、様々な製麦段階で添加されたペディオコッカス ペントサセウス（P ．pentosaceus）
Ｅ−３９０の肉汁培養液の製麦物（malting）の全細菌数に関す
る効果を示すものである。
図３は、様々な製麦段階で添加されたペディオコッカス ペントサセウスＥ−
３９０細胞のの製麦物（malting）の全細菌数に関する効果を示すものである。
図４は、大麦の浸麦水への、ペディオコッカス ペントサセウスＥ−３９０及
びラクトバシラス プランタラム（L．plantarum）Ｅ−７６の肉汁培養液、また
は濃縮された肉
汁培養液の添加の際の様々な実験製麦段階での全細菌数を示すものである。
図５は、大麦の浸麦水への、ペディオコッカス ペントサセウスＥ−３９０及
びラクトバシラス プランタラムＥ−７６の肉汁培養液、または濃縮及び分画さ
れた肉汁培養液の添加の際の様々な実験製麦段階での全細菌数を示すものである
。
図６は、マイシュの濾過（テプラル（Tepral）濾過）の際の、製麦物に添加さ
れた乳酸菌培養物の効果を示すものである。実施例１
：製麦物中に生じる微生物への様々な乳酸菌株の殺菌効果
本実験において、様々な乳酸菌株によって製造された調製物による製麦物中に
生じる微生物の殺菌効果を研究した。濾過滅菌した肉汁培養液を調製物に使用し
た。
１．生産株：
以下の乳酸菌株を生産株として用いた：ラクトバシラス
ラクティス（Lactobacillus lactis）
亜種 ラクテイス（ssp．lactis） VTT-E-90414(E-414)
亜種 ジアシティラクティス（ssp．diacitiactis） VTT-E-90423(E-423)リューコノストック
メセンテロイデス（Leuconostoc mesenteroides）
亜種 メセンテロイデス（mesenteroides） VTT-E-90389(E-389)
亜種 メセンテロイデス（mesenteroides） VTT-E-90415(E-415)
亜種 メセンテロイデス（mesenteroides） VTT-E-90466(E-466)ペディオコッカス
ダムノサス（Pediococcus damnosus） VTT-E-76065(E-65)ペディオコッカス
パルヴァラス（Pediococcus parvulus） VTT-E-88315(E-315)ペディオコッカス
ペントサセウス（Pediococcus pentosaceus） VTT-E-76067(E-67)ペディオコッカス
ペントサセウス（Pediococcus pentosaceus） VTT-E-76068(E-68)ペディオコッカス
ペントサセウス（Pediococcus pentosaceus） VTT-E-88317(E-317)ペディオコッカス
ペントサセウス（Pediococcus pentosaceus） VTT-E-90390（E-390）
(DSM 7389)ラクトバシラス
カーヴァタス（Lactobacillus curvatus） VTT-E-90391（E-391）ラクトバシラス
プランタラム（Lactobacillus plantarum） VTT-E-78076(E-76)
(DSM 7388)ラクトバシラス
プランタラム（Lactobacillus plantarum） VTT-E-79098(E-98)
これらの菌株は、ブイブイティ（VVT）、コレクションオブ インダストリア
ル マイクロオルガニズムズ（Collection of Industrial Microorganisms）（
バイオテクニカル ラボラトリー（Biotechnical Laboratory）、フィンランド
）より得た。ラクトバシラス プランタラム（Lactobacillus plantarum）（Ｅ
−７６）は、ＤＳＭ（ドイシュサムルンク フォン ミクロオルガニズメン ウ
ント ツェルクルツレン（Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellku
lturen））に受託番号７３８８で寄託した。Ｅ−７６株（ＤＳＭ ７３８８）は
、液状製品に関して使用される既知の技術によってビールから単離され、既知の
分析方法を用いて分析／同定された。ペディオコッカス ペントサセウス（Pedi ococcus pentosaceus）
（Ｅ−３９０）は、ＤＳＭ（ドイシュ サムルンク フ
ォン ミクロオルガニズメン ウント ツェルクルツレン）に受託番号７３８９
で寄託した。Ｅ−３９０株（ＤＳＭ ７３８９）は、割砕大麦穀粒（split barl
ey kernel）の均質化サンプルから単離され、既知の技術を用いて同定／分析さ
れた［ハイカラ，エー（Hikara，A.）及びホーム，エス（Home，S.）、マィシュ
フィルトレーション ディフィカルティーズ コースト バイ スピリット
バーレイ カーネルズ：アミクロバイオロジカル プロブレム（Mash Filtratio
n difficulties caused by split barley kernels:a Microbiological problem
）を参照、イービーシー コングレス（EBC
Congress）出版、１９９１年（クォリティ コントロール（Quality Control）
）］。寄託はブダペスト条約の規定に基づくものである。
２．試験菌株：
上記したうち、製麦時に生じる様々な有害な微生物種を試験菌株として用い、
さらに、乳酸菌株を生産株として用いた。
有害なカビとしては、試験において、フザリウム（Fusarium）カビ［ジベレラ
アヴェナセア（Gibberella avenacea）（前者はフザリウム アヴェナセウム（Fusarium avenaceum)
ＶＴＴ−Ｄ−８０１４１（Ｄ−１４１）及びＶＴＴ−Ｄ
−８０１４７（Ｄ−１４７）、およびフザリウム クルモラム（Fusarium culmo rum）
ＶＴＴ−Ｄ−８０１４８（Ｄ−１４８）及びＶＴＴ−Ｄ−８０１４９（Ｄ
−１４９）、コレクション オブ インダストリアル マイクロオルガニズムズ
（Collection of Industrial Microorganisms）、バイオテクニカル ラボラト
リー オブ ブイブイティ（Biotechnica1 Laboratory of VVT）］、および一ア
スペルギルス（Aspergillus）種を用いた。
有害なグラム陰性細菌としては、エンテロバクター（Enterobacter）属から２
菌株およびフラボバクテリウム（Flavobacterium）属及びシュードモナス（Pseu domonas）
属からそれぞれ１菌株が挙げられる。乳酸菌は、生産株として用いら
れる上記菌株、およびラクトコッカス（Lactococcus）種
Ｅ−４１６から構成される。
３．生産株の培養、および濾過滅菌された肉汁培養液の調製：
乳酸菌をＭＲＳブロス（MRS broth）（エムアールエスブロス（MRS BR0TH）、
オキソイド製（Oxoid））で培養した。ペディオコッカス（Pediococcus）株 Ｅ
−６５、Ｅ−６７及びＥ−６８は２５℃で好気的に培養し、すべての他の生産株
は３０℃で嫌気的に培養し、それぞれの培養時間を２から５日間で変化させた。
次に、細胞を遠心し、上清を濾過滅菌した。
４．試験菌株の培養：
胞子の懸濁液を、フザリウムカビの菌株を２５℃で５から６日間振盪培養によ
ってＣＭＣ（カルボキシメチルセルロース）溶液中で培養し、胞子形成物をツィ
ーン（TWEEN）溶液中に分散させ、懸濁液を濾過し、さらに濾液を回収すること
によって、フザリウムカビから作製した。
アスペルギルス（Aspergillus）カビの胞子の懸濁液は、ＰＤ寒天（２５℃、
３日間）（ポテトデキストロース（Potato dextrose）、ディフコ製（Difco））
上で直接作製した。
グラム陰性細菌は、ＮＢブロス（NB broth）（栄養ブイヨン、ディフコ製（Di
fco））中で１日間好気的に培養し、この際、エンテロバクター（Enterobacter ）
株は３０℃で、およびフラボバクテリウム（Flavobacterium）及びシュードモ
ナス（Pseudomonas）株は２５℃でそれぞれ培養した。
乳酸菌は上記３．に記載したのと同様にして培養した。
５．乳酸菌の殺菌効果の試験：
肉汁培養液における殺菌活性を、ディスク法（disk method）によって、また
は比濁分析法によって測定した。
５．１．殺菌活性の測定を目的としたディスク法：
１００μｌの、濾過滅菌した肉汁培養液、またはこの希釈液を、濾紙のディス
ク（直径；１２．７ｍｍ）上にピペットで滴下した。このディスクを、０．３ｍ
ｌの試験生物の希釈液（１０-2個）をポアプレートした（pour plate）平板菌数
測定用の寒天の入ったシャーレ（Plate Count agardish）上に置いた。この試料
を３０℃で２４時間培養した後、形成した阻止域の直径（ｍｍ）を測定した。
５．２．殺菌活性の測定を目的とした比濁分析法：
自動比濁分析器（バイオスクリーン（Bioscreen）、ラブシステムズ製（Labsy
stems））を本工程に用いた。
サンプルは、１０容量％の試験生物及び１０容量％の濾過滅菌された生産株の
肉汁培養液（各割合はサンプルの容量を元に算出した）、および増殖培地を含ん
でいた。コントロールとして、濾過滅菌調製物の代わりに、ｐＨを乳酸で濾過滅
菌した調製物のものと同じ値に調節した蒸留水を使用した。
使用した増殖培地は、各試験菌株では、試験菌株の培養におけるものと同様の
培地を使用した。
フザリウム及びアスペルギルスカビに関する増殖条件は
以下の通りであった：５日間、２５℃、強力な振盪培養。グラム陰性細菌に関す
る増殖条件は以下の通りであった：エンテロバクター株については３０℃で、他
の菌株については２５℃で、２日間、振盪培養。乳酸菌の増殖条件は以下の通り
であった：３日間、３０℃、振盪培養。
装置を用いて、４２０〜５８０ｎｍの可視波長におけるサンプルの吸光度が測
定された。培養後、各サンプルの成長曲線を作成し、曲線によって定められた領
域を算出した。
試験菌株の成長に関する生産株の殺菌効果は、コントロールとのおよび生産株
の濾過滅菌した調製物とのそれぞれの成長領域の大きさの比較によって得られた
、阻止率（％）で表わした。
６．特定の乳酸菌の殺カビ効果の試験：
試験菌株として使用したすべてのフザリウムカビに関して、それぞれ、乳酸菌
６菌株、Ｅ−７６、Ｅ−９８、Ｅ−３１５、Ｅ−３１７、Ｅ−４１４及びＥ−４
１５の殺カビ効果を研究した。本試験では、各乳酸菌培養物からの濾過滅菌調製
物を表３に示される様々な希釈率で添加したカビ培養物における濁りの形成を目
視で試験した。
コントロールでは、ミリ−Ｑ（Milli-Q）による滅菌水および乳酸でｐＨを３
．６に調節したミリ−Ｑによる濾過水を、肉汁培養液の代わりに用いた。
培養は、２５℃で５日間、ＣＭＣブロス（CMC broth）中で試験管培養によっ
て行った。結果は肉眼で読取った。
７．結果：
表１及び２、および図１は、ディスク法によっておよび比濁分析法によってそ
れぞれ様々な乳酸菌について測定された殺菌活性を示すものである。
表３は、目視で測定された殺カビ活性を示すものである。
これらの結果から、上記した乳酸菌株は、製麦工程中に生じる有害なフザリウ
ムカビおよび他の有毒な微生物の成長を阻害するが、有益な微生物には影響を実
質的に及ぼさないことは明らかである。また、これらの結果から、本発明の方法
における乳酸菌の有用性が示される。実施例２
：食品の病原体に関するおよび食品に有害な微生物に関する特定の乳酸
菌株の殺菌効果
本実験では、食品の病原体に関するおよび食品に有害な微生物に関するペディ
オコッカス ペントサセウス（Pediococcus pentosaceus） ＶＴＴ−Ｅ−９０
３９０（Ｅ−３９０）株およびラクトバシラス プランタラム（Lactobacillus
plantarum） ＶＴＴ−Ｅ−７８０７６（Ｅ−７６）株を用いて製造された調製
物の殺菌効果について研究を行った。試験生物としては、バシラス（Bacillus）
、ヤーシニア（Yersinia）、リステリア（Listeria）、シュードモナス（Pseudo monas）
、サルモネラ（Sa1monella）及びスタフィロコッカス（Staphylococcus ）
属に属する菌株を使用した。
調製物としては、実施例１と同様にして調製した、乳酸菌の滅菌した肉汁培養
液を用いた。リステリア株を除くすべての他の試験菌株はイソーセンシテスト
ブロス（Iso-Sensitest broth）（オキソイド製（Oxoid））中で１６から１８時
間培養し、リステリア株はトリプトース／ホスフェート ブロス（tryptose/pho
sphate broth）中で成育させた。サルモネラ、リステリア及びスタフィロコッカ
ス株以外の
培養温度は３０℃であり、これらの培養温度は３７℃であった。
殺菌活性は、実施例１と同様に、比濁分析法によって測定した。成長基質及び
温度に関する、実験条件は前記したのと同様であった。バシラス及びヤーシニア
株以外のインキュベーション時間は２４時間であり、これらの時間は４８時間で
あった。
これらの結果を表４に示す。表４より、本発明の乳酸菌調製物を添加すること
によって、食品の病原体及び食品に有害な微生物の成長が阻害されることが示さ
れる。
実施例３：製麦物の微生物叢に関する及び麦芽の質に関する乳酸菌調製物及び乳
酸菌によって製造される調製物の効果
１．使用した菌株：
乳酸菌株、ペディオコッカス ペントサセウス ＶＴＴ−Ｅ−９０３９０（Ｅ
−３９０）を本実験に使用した。
ＭＲＳブロスをイノキュラムの増殖培地として使用した。細菌を、３０℃の温
度で、１０ｍｌのＭＲＳブロス中で２日間嫌気的に培養した。接種容量は増殖用
溶液容量の１％であった。
２．大麦：
１９９０年に収穫したキンピー大麦（Kymppi barley）を用い、この中のフザ
リウムカビに汚染された穀粒の割合は５５％であった。
３．製麦工程：
１，０００ｇの大麦のバッチを１２℃で１時間水浴中で洗浄した。洗浄水を第
一の浸麦水と交換し、さらに５時間後にこの水を第二の浸麦水と交換した。１６
時間後に、空気休止を開始した。空気休止の目的は、穀粒の表面上の水を除去す
ることであった。空気休止時間は８時間であった。浸麦中の大麦の水分は４４％
であった。大麦は、浸麦工程の間中、通気した。
浸麦は、発芽まで継続して行われた。大麦を、１４℃で６日間発芽箱中で発芽
させた。水分を４４％の値に維持す
るために、大麦のバッチを、毎日、湿潤化し、上下を混合した。このようにして
得られた緑麦芽を２１時間毎の温度制御で乾燥した。この温度は、４．５時間が
５０℃で、次の４．５時間の間に６０℃まで上昇させ、さらにこの温度を４時間
維持し、さらに、温度を５時間の間に均一に８５℃まで上昇させ、残りの３時間
はこの温度を維持した。麦芽の最終的な水分含量は約４％になっていた。最終的
には、幼根を物理的に除去した。
添加しなかった以外は同様にして製麦を行ったものをコントロールとした。
４．乳酸菌調製物および乳酸菌によって製造された調製物：
肉汁培養液から単離された乳酸菌細胞および殺菌化合物を含む肉汁培養液を、
組み合わせてあるいは単独で、調製物として用いた。細胞を含む肉汁培養液を１
ｋｇの大麦当たり１２０ｍｌ添加した、または細胞を１２０ｍｌの肉汁培養液か
ら分離した。上記分離は、肉汁培養液を遠心することによって行い、細胞を水に
懸濁した。肉汁培養液を添加する場合には、肉汁培養液を上記したのと同様に用
いた。添加した調製物の細胞数は約１０8〜１０9ＣＦＵ／ｍｌのオーダーであっ
た。
５．乳酸菌調製物の添加：
乳酸菌調製物の添加は、大麦に、浸麦Ｉの始めに、浸麦Ｉ及びＩＩの始めに、
または発芽の始めのいずれかに対して行った。
６．行われた分析：
サンプルを各製麦段階から抽出した。
６．１．カビを以下のようにして評価した。フザリウムカビに汚染された穀粒の
割合（％）を、フザリウムカビに選択的である、ツァペック イプロディオン
デイクロラル アガー（CZAPEK IPR0DION DICL0RAL agar）（ＣＺＩＤアガー）
および湿った濾紙（イービーシー−アナリティカ マイクロバイオロジカ（EBC-
Analytica Microbiologica）製、パートＩＩ、１９８７年）によって測定した。
フザリウムカビは、その特徴的なコロニー及び胞子の形態によっておよび赤色に
よって同定された。
アスペルギルス及びペニシリウムカビは、選択的麦芽塩寒天（malt salt agar
）（イービーシー−アナリティカ マイクロバイオロジカ（EBC-Analytica Micr
obiologica）製、バートＩＩ、１９８７年）を用いて測定した。他の最も一般的
なカビは、湿った濾紙上で測定した。
６．２．乳酸菌を、添加された培養物および製麦物サンプルの場合においてＭＲ
Ｓ寒天上で評価した。
６．３．全細菌数を平板菌数測定用の寒天（Plate Count agar）（ディフコ製（
Difco））上で測定した。
６．４．麦芽の化学的な特性を、モルティング（malting）（イービーシー−ア
ナリティカ（EBC-Analytica）、１９８７年、第４版）の明細書から既知の方法
を用いて測定した。
７．結果：
表５に、Ｅ−３９０の肉汁培養液を加えた際の様々な製麦段階におけるフザリ
ウムカビおよび乳酸菌の数を示す。
図２及び３には、Ｅ−３９０の肉汁培養液およびＥ−３９０細胞に関する様々
な製麦段階における全細菌数を示す。
表６は、Ｅ−３９０の肉汁培養液またはＥ−３９０細胞を加えた際の麦芽の分
析結果を示すものである。
得られた結果から、本発明による処理によって、特にフザリウムカビの量及び
様々な製麦段階における全細菌数が減少することが示される。
調製物の添加は、麦芽の質に有害な効果を及ぼさなかった。事実、それとは反
対である：つまり、本発明による処理によって、麦汁由来のマイシュの濾過が改
善され、さらに麦芽のβ−グルカン含量が減少した。実施例４
：乳酸菌によって製造される調製物の製造
１．濃縮された肉汁培養液の調製：
生産株である、ペディオコッカス ペントサセウス（Pediococcus pentosaceu s
）ＶＴＴ−Ｅ−９０３９０（Ｅ−３９０）およびラクトバシラス ブランタラ
ム（Lactobacillus platlarum）ＶＴＴ−Ｅ−７８０７６（Ｅ−７６）を、１５
リットル、発酵槽で培養した。イノキュラムの容量は６％から７％であり、培養
は微好気的な条件下で２日間、３０℃でＭＲＳ培地で行われた。肉汁培養液を、
凍結乾燥及び蒸発方法によって１０倍及び２０倍に濃縮した。濃縮液の殺菌活性
をディスク法で確認した。
２．殺菌化合物を含有する精製溶液の調製：
乳酸菌の肉汁培養液を、分子の大きさによるゲルクロマトグラフィーによる分
画によって精製した。ディスク法及び比濁分析法によって活性があることが示さ
れた画分を収集し、再度ゲルカラムにかけた。実施例５
：製麦物の微生物叢および麦芽の質に関する乳酸
菌調製物及び乳酸菌によって製造された調製物の効果
１．使用された菌株および該菌株から製造された調製物：
以下の細菌株を使用した：
ラクトバシラス プランタラム VTT-E-78076(E-76)
（Lactobacillus plantarum）
ペディオコッカス ペントサセウス VTT-E-90390(E-390)
（Pediococcus pentosaceus）
これらの菌株は、ブイブイティ（VVT）、コレクションオブ インダストリア
ル マイクロオルガニズムズ（Collection of industrial Microorganisms）（
バイオテクニカル ラボラトリー（Biotechnical Laboratory）、フィンランド
）より得た。
調製物を、実施例１、第３項、実施例３、第１項、および実施例４、第１及び
２項に記載されたのと同様にして作製した。
２．大麦：
使用した大麦は、１９９１年に収穫したキンピー大麦（Kymppi barley）であ
った。
３．製麦工程：
製麦は、発芽段階の期間を８日間とした以外は、実施例３に記載されたのと同
様にして行った。麦芽の最終的な水分含量は５％未満になっていた。
４．製麦物：
２種の実験用の製麦物を作製した。何も加えない製麦物をコントロールとした
。
４．１．第一の製麦物（malting）：
細胞を含まない肉汁培養液、細胞を含む１０倍に濃縮され、および無処理の肉
汁培養液を実験用製麦物における調製物として用いた。調製物を，浸麦Ｉの始め
にまたは浸麦Ｉ及びＩＩの始めに添加した。以下のようにして製麦実験１〜８を
行った。
試験番号１：コントロール、１９９１年に収穫したキンピー大麦（Kymppi barle
y）；
試験番号２：浸麦Ｉ及びＩＩの始めに、１２０ｍｌの細胞を含むＥ−７６の肉汁
培養液を添加する；
試験番号３：浸麦Ｉの始めに、１２０ｍｌの１０倍に濃縮されたＥ−７６の培養
濾液を添加する；
試験番号４：浸麦Ｉ及びＩＩの始めに、１２０ｍｌの１０倍に濃縮されたＥ−７
６の培養濾液を添加する；
試験番号５：浸麦Ｉ及びＩＩの始めに、１２０ｍｌのＥ−３９０の肉汁培養液を
添加する；
試験番号６：浸麦Ｉの始めに、１２０ｍｌの１０倍に濃縮されたＥ−３９０の培
養濾液を添加する；
試験番号７：浸麦Ｉ及びＩＩの始めに、１２０ｍｌの１０倍に濃縮されたＥ−３
９０の培養濾液を添加する；
試験番号８：浸麦Ｉ及びＩＩの始めに、６０ｍｌの細胞を含むＥ−７６の肉汁培
養液および６０ｍｌの細胞を含むＥ
−３９０の肉汁培養液を添加する。
４．２．第二の製麦物：（malting）
実験用製麦物において、細胞を含まない２０倍に濃縮された培養濾液、細胞を
含まない精製された殺菌画分および細胞を含む無処理の肉汁培養液を調製物とし
て用いた。浸麦水のｐＨを制御した。調製物を浸麦Ｉ及びＩＩの始めに添加した
。以下のようにして製麦実験９〜１６を行った。
試験番号９：コントロール、１９９１年に収穫したキンピー大麦（Kymppi barle
y）；
試験番号１０：浸麦Ｉ及びＩＩの始めに、１２０ｍｌの水を添加する、ｐＨ ３
．８；
試験番号１１：浸麦Ｉ及びＩＩの始めに、１２０ｍｌの細胞を含むＥ−７６の肉
汁培養液を添加する；
試験番号１２：浸麦Ｉ及びＩＩの始めに、１２０ｍｌのＥ−７６の分画された濃
縮液を添加する、ｐＨ ３．８；
試験番号１３：浸麦Ｉ及びＩＩの始めに、１２０ｍｌの２０倍に濃縮されたＥ−
７６の培養濾液を添加する；
試験番号１４：浸麦Ｉ及びＩＩの始めに、１２０ｍｌの細胞を含むＥ−３９０の
肉汁培養液を添加する；
試験番号１５：浸麦Ｉ及びＩＩの始めに、１２０ｍｌのＥ−３９０の分画された
濃縮液を添加する、ｐＨ ３．８；
試験番号１６：浸麦Ｉ及びＩＩの始めに、１２０ｍｌの２０倍に濃縮されたＥ−
７６の培養濾液を添加する。
５．行われた分析：
サンプルを各製麦段階から抽出した。
麦芽のカビ、乳酸菌、全細菌数および物理的及び化学的質の特性を、実施例３
に記載されたのと同様にして測定した。
６．結果：
図４及び５は、浸麦水における細胞を含む乳酸菌の肉汁用した際の製麦工程中
の様々な段階での全細菌数を示すものである。
表７、８、９及び１０は、両方の製麦操作（malting run）における、様々な
製麦段階におけるフザリウムカビ及び他のカビ、および乳酸菌の濃縮液を示すも
のである。
表１１及び１２は、両方の製麦操作（malting run）による麦芽の分析結果を
示すものである。
このようにして得られた結果から、本発明による方法によって、特に、様々な
製麦段階におけるフザリウムカビの量および全細菌数が減少することが示される
。さらに、肉汁培養液に加えて、特に濃縮及び分画された培養濾液は、フザリウ
ムカビに関して等、好ましい効果を有することも示される。
麦芽の分析より、Ｅ−７６及びＥ−３９０株の肉汁培養液の添加が麦芽から作
られる麦汁の濾過能を向上させる効果を有するという推論が引き出せる；すなわ
ち、各麦芽中のβ−グルカン含量もコントロールの麦芽中のものに比べて低い。
実施例６：製麦物中に加えられた、乳酸菌によって製造された調製物のマイシュ
の濾過に関する効果
図６には、本発明によって処理された麦芽を用いて製造されたマイシュの濾過
に関する乳酸菌株山来の調製物（１ｋｇの大麦当たり１２０ｍｌの肉汁培養液）
による処理の効果を示すグラフを再度記載したものである。
実施例１において記載された菌株を本実験に使用した：Ｅ−３９０、Ｅ−４１
６、Ｅ−９８、Ｅ−３１７、Ｅ−３９０、Ｅ−７６、およびＥ−３１５。本試験
を、テプラルの濾過法（Tepral filtration method）を用いて行った（バイオス
（BIOS.） １９、１９８８年、グランドクラーク，ジェー（Grandclerc，J.）
ら、「シンプリフィケーション デ ラ メソッデ デ フィルトレーション
デュ ブラッ
シン テプラル ディスクリプション デ ラ メソッデ（Simplificalaion de
la methode de filtration du brassin tepral description de la methode）
」、ページ８８〜９２）。
これらの結果から、本発明による処理によって、マイシュの濾過が改善される
ことが明らかである。
Detailed Description of the Invention
Method for treating germinated seed material
Field of invention:
The present invention relates to a method for treating germinated seed material.
Background of the invention:
In the present specification, the germination step refers to the production of germinated products starting from storage-dried seeds.
It is understood that this is a general processing step required for manufacturing. For example, brewing or distillation
In industry, the germination process, which is the malt production process, is the process of beer or other alcohol.
Liquor, namely barley malt, rye malt
Manufactures important raw materials for cereal malt such as either malt
Used to do. In addition, the germination process may involve the use of bean sprouts or human sprouts.
Used to make a variety of commercial germ products, including germs used for nutrients
There is.
Germination treatment is generally performed under non-sterile conditions.
Treatment of seeds produces microorganisms from the environment of growth or storage. During the germination process
The conditions are the most favorable for the microorganisms present on the seeds and this is why
Microorganisms such as are generally propagated during this process. Microorganisms can also sprout
Is harmful to the final product that is finally made from germinated material
It has an effect, but on the other hand, it also has a positive effect on what germinates.
The main stages of the beer brewing process are: malting, wort production, primary and secondary fermentation,
And downstream processing. The purpose of malt production is the preparation stage
It is possible to generate an enzyme in the grain that decomposes the endosperm material of the grain into a wort-soluble form at the floor.
And. For example, it is well known that the barley seed malting process consists of the following three steps:
Used; steeping, germination and roasting. Target the washed and sized grain of barley.
It is soaked in water until the water content is on the order of, for example, 43 to 44%. Part of steeping
Is done in a so-called air rest. Barley under controlled conditions
The barley that has been germinated and germinated is dried in a hot air stream until the germination reaches the end. Roast
At the end of the step, the radicles are removed from the malt. The adjustment of the malting stage is performed by adjusting the temperature, air volume and water.
Based on minute / humidity control.
The quality of malt depends on the malting technology and conditions and also on the microflora of malt grains.
This flora is affected, for example, by grain type, weather conditions, growth site, growing season.
Temperature and storage conditions, etc.
Barley is the most frequently used grain in barley. The natural, natural microorganisms of barley
The flora can be divided into fungi, bacteria and yeasts by sector and storage. Most of barley
Common areas of mold are: Fusarium(Fusarium), Alternari
A(Alternaria), Cladosporium(C1adosporium),
Cephalosporium(Cepha1osporium), Epicoccum(Epicoccum), And f
Lumint Sporium(He1minthosporium).
Mold development varies in different countries and in different years. During the growing season of grain, especially during harvest
Fusarium is the condition of damp weather(Fusarium)Suitable for mold growth. F
Zarium pollution is particularly severe during the rainy growing season. The most common regarding cereals
Enterobacter agglomerans as one of the bacteria(Enterobacter agglomerans)
There is. Other bacteria of note include: E. coli(Escherichia coli)
, And Pseudomonas(Pseudomonas), Micrococcus
And Bacillus(Bacillus)Genus bacteria, and lactic acid bacteria. The number of barley colonies
, About 10Five-108CFU / g (colony forming units per gram).
Molds and bacteria in barley increase during malting and peak concentrations are generally at the germination stage.
Reach the middle floor. Fusarium(Fusarium)Molds, and especially lactic acid bacteria, are the most breeding species
Sui. Yeast also increases during malting. During the drying stage, the concentrations of mold, yeast and bacteria are
As a rule, it decreases again. Microorganisms present in some barley are malt production, beer, etc.
It has a useful effect in terms of products made from malt. 4 of enzymes in malt
It is believed that 0 to 50% is of microbial origin. On the other hand, some microorganisms are large
Harmful effects on wheat and / or malt.
Of the undesirable microorganisms, Fusarium must be noted
Worth this mold to die more often than other molds, with less favorable beushing (gushing).
), And the peptides produced by this mold are
In the state constitutes the main cause of gas bubbles erupting from the beer bottle. Over 50% malting
Contamination of burned kernels with Fusarium mold clearly increases the risk of spouting
.
In addition, Pseudomonas(Pseudomonas)And flavobacterium (F1avobacterium)
Gram-negative bacteria present in barley, such as species belonging to the genus, and leuco
stock(Leuconostoc)Gram-positive bacteria of the genus are mycobacteria associated with wort production.
It is known to delay the filtration of mash (saccharified moromi). Also in the barley
By various microorganisms present in, for example, inhibiting germination, rendering it tasteless
Or any other preference, such as unfavorably changing the analytical value of wort or beer.
The effect is not produced.
The requirements for the quality of malted barley are established annually through cultivation contracts and negotiations for delivery.
Are described in the specification. Molds are one of the micro-organisms often mentioned in quality specifications.
It is a group. Many malting plants are further subject to certain mold limits. Fusarium
More than 65% of contaminated kernels or Aspergillus
And penicillium(Penicillium)When the corresponding proportion of mold exceeds 50%
, The barley is classified as poor quality or even unsuitable for use in malting.
Attempts to prevent mold-induced squirt have been attributed to the use of good quality barley.
Or by mixing a batch of barley, malt or beer
Came. In rainy years, almost all barley grains are poor and in this case good
You can't get quality barley. Bactericides have also been tried to reduce the amount of mold
However, no safe and normally acceptable chemical was found.
The germination process to obtain the germs used for nutrient intake is similar to the example
It also provides favorable conditions for the growth of mold and bacteria. Because of this, such a germ
The product rots quickly. Furthermore, in connection with germination, such an increase could be
For example, Salmonella(Sa1monella), Yersinia(Yersinia)And / or list
rear(Listeria)It replaces food pathogens that cause food poisoning, such as bacteria.
Summary of the invention:
The object of the present invention is to eliminate the drawbacks mentioned above.
In particular, the purpose of the present invention is to impair the quality of the germinated product and the final product made from it.
Those who can carefully control the quantity and quality of the microbiota during the germination process without affecting
To provide the law.
Reference will be made to the claims for identifying the invention.
Detailed description of the invention:
The present invention anticipates that lactic acid bacteria can be used to improve the quality of germinated products.
Related to unobserved observations
It is based on research. Consisting of and / or of the preparations according to the invention
The substances produced by, i.e., fungicides, are harmful to the germination process.
Inhibits microbial growth.
The use of lactic acid bacteria in the food and animal feed industry is known in the art.
It This lactic acid bacterium affects the composition and flavor of the product, but it does not rot the product.
Compounds that inhibit the growth of pathogenic microorganisms are produced under fermentative conditions. Lactic acid
Fungi are commonly found in daily products, meat products, fermented vegetables and bread products, as well as in feed.
It has been used for preservation.
Lactic acid bacteria or the addition of lactic acid is of a certain malt type, the so-called Sauer Malt's.
(Sauermalz) is being manufactured. Such additions are
Made to malt before or during preparation. The purpose of the addition is simply to adjust the pH of the wort.
It causes a decline in the quality of the beer during and during the preparation process.
To have an impact. However, lactic acid bacteria have hitherto been suggested by the present invention.
As is done: ie inhibits the growth of unwanted microorganisms associated with the germination process
It was never used.
The preparation of the invention may be added to the product to be germinated at any stage of the germination process.
Good.
In a particularly preferred embodiment, a lactic acid bacterium preparation or produced by a lactic acid bacterium
The prepared preparation is added to grain material, such as barley grain, during the malting period. Added
The preparation is
Inhibits the growth of bacteria, especially harmful Fusarium molds, and bacteria, resulting in, for example,
, Reduce the risk of beer spouting by Fusarium mold. However, on
The preparations described above are useful microbiota for the quality of the malt obtained and the beer produced from it.
It has virtually no effect on the action of the flora. Harmful effects of added preparations on malt quality
No fruit is observed and it is harmful in producing malt or beer.
It has also been found to be compound free or not to produce such compounds.
In the malting process, the lactic acid bacterium preparation or the preparation produced by the lactic acid bacterium is immersed in
Can be added to barley kernels before barley, during the steeping stage or during the germination stage
it can. It is preferably added at the steeping or germination stage. Other parts of the malting process
May be performed in a manner known per se. If necessary, for example, Sakae
Nutrients may be added to the barley being milled or the growth conditions of lactic acid bacteria are optimized.
Therefore, the conditions may be adjusted, for example, by adding lactic acid.
In the present invention, as long as it has an effect of inhibiting the growth of microorganisms,
It is possible to use the lactic acid bacteria used. The genus of lactic acid bacteria that can be used below
Describe: Lactococcus(Lactococcus), Leuconostok(Leuconostoc )
, Pediococcus(Pediococcus)And Lactobacillus(Lactobaci1lus).
The following are preferred species for the present invention: Lactococcus lactis(Lactococ cus lacti
s)
, Leuconostok Mecenteroides(Leuconostoc mesenteroides)
, Pediococcus damnosus(Pediococcus damnosus), Pediococcus
Parvalas(Pediococcus parvulus), Pediococcus pentosaceus(Pediococcus pentosaceus)
, Lactobacillus carvatus(Lactobacillus curvatus)
And Lactobacillus plantarum(Lactobacillus plantarum),
Or a mixture of these. Of these, the following are particularly preferred: Lactobacillus
Plantarum(Lactobacillus plantarum)And Pediococcus pentosase
Uss(Pediococcus pentosaceus), Or a mixture of these. Genetically modified
Lactic acid bacteria may be used.
A lactic acid bacterium preparation may be a culture broth with or without cells.
) Or from a concentrated culture broth (including cells).
Is made. The preparation produced by lactic acid bacteria is a cell-free culture filtrate,
From concentrated culture filtrate, from fractionated culture filtrate, or pure or partial
It is composed of chemically purified germicidal products.
According to a particularly preferred embodiment, the treatment is a concentrated or fractionated broth culture.
The broth is either cell-free or cell-free.
May be. Concentration is done, for example, by freeze-drying or by evaporation.
The broth culture solution is concentrated 2 to 20 to 40 times, for example.
Is done.
Fractionation, that is, purification of sterilized products, can be performed using chromatographic methods or
It can be carried out by a known method such as by external filtration.
In the method of the present invention, a preparation containing lactic acid bacteria, which is added to seed material, or
The microbial growth-inhibiting activity of the preparations produced by lactic acid bacteria is, for example, 1 kg of
Corresponding to about 10-10,000 ml of broth broth per seed material treated,
Preferably from 30 to 7,000 ml per kg of seed material treated,
More preferably 40 to 5,000 ml per kg of seed material treated.
The method for preparing the broth culture is described in the examples. Which was investigated in this application
However, it should be noted that the activity of the preparation is defined by the broth medium used.
It Preparations according to the invention having an equivalent microbial growth-inhibiting activity can be used in other broth cultures.
It will be apparent to those skilled in the art that similar methods and / or methods can be used.
According to the invention, the preparation comprises a bactericidal compound and / or
Produce germicidal compounds during the germination process. When using cell preparations,
Growth is controlled if necessary, for example by adjusting the conditions during the germination process.
Alternatively, it may be promoted by adding nutrients. This preparation also germinated
The growth of other lactic acid bacteria present in the material may be promoted.
Use of lactic acid bacteria in foods is possible and generally considered to be preferable
Therefore, preparations derived from growing lactic acid bacteria can also be used safely. Lactic acid bacteria are common
Is contained in the natural microflora of germinated seeds such as barley grains. But
Thus, the method of the present invention is maximally natural. In addition, milk the strain originally present on the seeds
It is also possible to use it as an acid bacteria strain.
According to the present invention, in malting, raw materials such as beer spouts can be recovered from contamination of Fusarium.
It is possible to reduce the harmful effects of tampering.
Moreover, the above method unexpectedly improves the filtration properties in the brewing process.
I also understood that. This means that the preparation according to the invention(Leuconos toc)
, Pseudomonas(Pseudomonas)And flavobacterium(Flavobacteri um)
Of harmful species such as species belonging to the genus that occur during malting and delay the filtration of miche
It turned out to be due to the fact that the number of bacteria was also suppressed.
According to another preferred embodiment, a lactic acid bacterium preparation or produced by a lactic acid bacterium
The prepared preparation is added to the seed material during the production of the germ used in food.
According to the present invention, the growth of harmful microorganisms can be suppressed during the germination process. According to the invention
Therefore, the biological means that no toxic substances are generated on the seeds germinated during the industrial germination process.
It can be used for the first time to prevent bacterial growth.
The method of the invention improves the general hygiene standards of the overall germination process
.
Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to Examples, but only in detail.
However, the present invention is not limited to the examples. Processing of the present invention
Can also be used in other germination steps.
Figure 1 shows the bactericidal activity in the lactic acid bacterium culture filtrate measured by nephelometry.
It is a graph. In Figure 1, the standard growth curve is the test organism, Enterobacter.
Agglomerans(E. agglomerans)Using E-396, the production strain Lactobacillus
Russ plantarum(L. plantarum)E-76 and Pediococcus pentosa
Seus(P. pentosaceus)The growth of the test organism was affected by the culture filtrate of E-390.
Inhibited effect is shown.
Figure 2 shows Pediococcus pentosaceus added at various stages of malting.(P . pentosaceus)
It relates to the total number of bacteria in the malting of the meat broth of E-390.
It shows the effect.
Figure 3 shows Pediococcus pentosaceus E- added at various malting stages.
Figure 3 shows the effect of 390 cell malting on total bacterial count.
Figure 4 shows Pediococcus pentosaceus E-390 and barley in steeping water.
And Lactobacillus plantarum(L. plantarum)E-76 broth culture,
Is concentrated meat
It shows the total number of bacteria at various experimental malting stages during addition of the broth.
Fig. 5 shows the results of Pediococcus pentosaceus E-390 and soaking water of barley.
And Lactobacillus plantarum E-76 in broth or concentrated and fractionated
FIG. 3 shows the total bacterial counts at various experimental malting stages with the addition of fresh broth culture.
.
Figure 6 shows the addition of malt during the filtration of maish (Tepral filtration).
It shows the effect of the lactic acid bacterium culture prepared.Example 1
: Sterilizing effect of various lactic acid bacterial strains on microorganisms produced in barley
In this experiment, the malt produced by the preparations produced by various strains of lactic acid bacteria
The bactericidal effect of the resulting microorganisms was studied. Filter sterilized meat broth was used in the preparation
It was
1. Production stock:
The following lactic acid bacterium strains were used as production strains: Lactobacillus
Ractis (Lactobacillus lactis)
Subspecies Lactite (ssp.lactis) VTT-E-90414 (E-414)
Subspecies diacity lactis (ssp.diacitiactis) VTT-E-90423 (E-423) Leuconostok
Mecenteroides(Leuconostoc mesenteroides)
Subspecies Mecenteroides(Mesenteroides) VTT-E-90389 (E-389)
Subspecies Mecenteroides(Mesenteroides) VTT-E-90415 (E-415)
Subspecies Mecenteroides(Mesenteroides) VTT-E-90466 (E-466) Pediococcus
Damnosus(Pediococcus damnosus) VTT-E-76065 (E-65) Pediococcus
Parvalas(Pediococcus parvulus) VTT-E-88315 (E-315) Pediococcus
Pentosaceus(Pediococcus pentosaceus) VTT-E-76067 (E-67) Pediococcus
Pentosaceus(Pediococcus pentosaceus) VTT-E-76068 (E-68) Pediococcus
Pentosaceus(Pediococcus pentosaceus) VTT-E-88317 (E-317) Pediococcus
Pentosaceus(Pediococcus pentosaceus) VTT-E-90390 (E-390)
(DSM 7389) Lactobacillus
Carvatus(Lactobacillus curvatus) VTT-E-90391 (E-391) Lactobacillus
Plantarum(Lactobacillus plantarum) VTT-E-78076 (E-76)
(DSM 7388) Lactobacillus
Plantarum(Lactobacillus plantarum) VTT-E-79098 (E-98)
These strains are known as VUV, VVT, Collection of Industry.
Le Micro Organisms (Collection of Industrial Microorganisms) (
Biotechnical Laboratory, Finland
) Obtained. Lactobacillus plantarum(Lactobacillus plantarum)(E
-76) is a DSM (Duish Samrung von Microorganism
Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellku
lturen)) under the deposit number 7388. E-76 strain (DSM 7388)
Isolated from beer by known techniques used for liquid products, known
Analyzed / identified using analytical methods. Pediococcus pentosaceus(Pedi ococcus pentosaceus)
(E-390) is a DSM
Wrong microorganism und zerkulturen) with accession number 7389
Deposited at. E-390 strain (DSM 7389) is a split barl grain.
ey kernel) homogenized sample and identified / analyzed using known techniques.
[Hikara, A. and Home, S., Mysh
Filtration Difficulties Coast By Spirit
Burleigh Kernels: A Microbiological Problem (Mash Filtratio
n difficulties caused by split barley kernels: a Microbiological problem
) See the EBC Congress (EBC
Congress), 1991 (Quality Control)
)]. The deposit is based on the provisions of the Budapest Treaty.
2. Test strain:
Among the above, various harmful microbial species that occur during malting are used as test strains,
Furthermore, a lactic acid bacterium strain was used as a production strain.
As a harmful mold, in the test, Fusarium(Fusarium)Mold [Gibberella
Avenacea(Gibberella avenacea)(The former is Fusarium avenaceum(Fusarium avenaceum)
VTT-D-80141 (D-141) and VTT-D
-80147 (D-147), and Fusarium curmorum(Fusarium culmo rum)
VTT-D-80148 (D-148) and VTT-D-80149 (D
-149), Collection of Industrial Microorganisms
(Collection of Industrial Microorganisms), Biotech Laboratories
Lee of Vivity (Biotechnica1 Laboratory of VVT)], and
Spell gills(Aspergillus)Seeds were used.
Enterobacter is a harmful Gram-negative bacterium(Enterobacter)2 from the genus
Strains and flavobacterium(Flavobacterium)Genus and Pseudomonas(Pseu domonas)
One strain is included from each genus. Lactic acid bacteria are not used as a production strain.
The above strains, and Lactococcus(Lactococcus)seed
It is composed of E-416.
3. Cultivation of production strain and preparation of broth culture sterilized by filtration:
Lactobacillus is MRS broth (MRS broth) (MRS BR0TH),
It was cultured in Oxoid). Pediococcus(Pediococcus)Stock E
-65, E-67 and E-68 were cultivated aerobically at 25 ° C and all other producers
Were anaerobically cultivated at 30 ° C., and the respective culturing time was changed from 2 to 5 days.
The cells were then centrifuged and the supernatant was filter sterilized.
4. Culture of test strains:
The spore suspension was subjected to shaking culture of a Fusarium fungal strain at 25 ° C for 5 to 6 days.
Culture in a CMC (carboxymethyl cellulose) solution to remove sporulated products.
Dispersing in TWEEN solution, filtering the suspension and collecting more filtrate
Made from Fusarium mold.
Aspergillus(Aspergillus)The mold spore suspension is PD agar (25 ° C,
3 days) (Potato dextrose, Difco)
Made directly above.
Gram-negative bacteria are NB broth (nutrition broth, manufactured by Difco (Di
aerobically cultivated in fco)) for 1 day, with Enterobacter(Enterobacter )
Strains at 30 ° C, and Flavobacterium and Pseudomonas
Eggplant (Pseudomonas) strains were respectively cultured at 25 ° C.
For lactic acid bacteria, see 3. Cultures were performed as described in.
5. Test of bactericidal effect of lactic acid bacteria:
The bactericidal activity in the broth was determined by the disk method and
Was measured by nephelometry.
5.1. Disc method for measuring bactericidal activity:
100 μl of filter sterilized meat broth or its diluted solution was added to a filter paper disc.
Pipette (diameter; 12.7 mm). This disc is 0.3m
l test organism dilution (10-2Pour plate)
It was placed on a plate (Plate Count agardish) containing agar for measurement. This sample
After culturing for 24 hours at 30 ° C., the diameter (mm) of the formed inhibition zone was measured.
5.2. Nephelometric method for measuring bactericidal activity:
Automatic turbidimetric analyzer (Bioscreen, Labsystems (Labsy
stems)) was used in this step.
Samples of 10% by volume of test organisms and 10% by volume of filter-sterilized production strains
Contains meat broth (each proportion was calculated based on sample volume) and growth medium
I was out. As a control, filter out the pH with lactic acid instead of filter-sterilized preparation.
Distilled water adjusted to the same value as that of the inoculated preparation was used.
The growth medium used for each test strain was similar to that used in the culture of the test strain.
The medium was used.
The growth conditions for Fusarium and Aspergillus
It was as follows: 5 days, 25 ° C., strong shaking culture. Related to Gram-negative bacteria
The growth conditions were as follows: for Enterobacter strains at 30 ° C, etc.
For 2 days, shake culture at 25 ° C. for 2 days. The growth conditions of lactic acid bacteria are as follows
Was: 3 days, 30 ° C., shaking culture.
The instrument is used to measure the absorbance of the sample at visible wavelengths of 420 to 580 nm.
Was determined. After culturing, create a growth curve for each sample and define the area defined by the curve.
The area was calculated.
The bactericidal effect of the production strain on the growth of the test strain is
Obtained by comparing the size of each growth area with a filter-sterilized preparation of
, Inhibition rate (%).
6. Testing the fungicidal effect of certain lactic acid bacteria:
For all Fusarium molds used as test strains,
6 strains, E-76, E-98, E-315, E-317, E-414 and E-4
15 fungicidal effects were studied. In this test, filter sterilization preparation from each lactic acid bacteria culture
The formation of turbidity in fungal cultures with various additions of various substances shown in Table 3 was observed.
Visually tested.
As a control, the pH was adjusted to 3 with sterile water and lactic acid by Milli-Q.
． Milli-Q filtered water adjusted to 6 was used instead of the broth culture.
The culture was carried out at 25 ° C for 5 days in a CMC broth by test tube culture.
I went. The results were read visually.
7. result:
Tables 1 and 2 and FIG. 1 are prepared by the disc method and nephelometry.
Each of them shows the bactericidal activity measured for various lactic acid bacteria.
Table 3 shows the fungicidal activity measured visually.
From these results, the above-mentioned lactic acid bacterium strain is harmful to Fusarium
Inhibits the growth of mold and other toxic microorganisms, but does not affect beneficial microorganisms.
It is clear that it does not reach qualitatively. In addition, from these results, the method of the present invention
The utility of lactic acid bacteria in is shown.Example 2
: Specific lactic acid for food pathogens and food-harmful microorganisms
Sterilizing effect of strain
In this experiment, a pedigree on food pathogens and food-harmful microorganisms
Ococcus pentosaceus(Pediococcus pentosaceus) VTT-E-90
390 (E-390) strain and Lactobacillus plantarum(Lactobacillus
plantarum) Preparation prepared using VTT-E-78076 (E-76) strain
The sterilization effect of the product was studied. As a test organism, Bacillus(Bacillus)
, Yersinia(Yersinia), Listeria(Listeria), Pseudomonas(Pseudo monas)
, Salmonella(Sa1monella)And Staphylococcus(Staphylococcus )
Strains belonging to the genus were used.
The preparation was sterilized broth culture of lactic acid bacteria, prepared in the same manner as in Example 1.
The liquid was used. All other test strains except Listeria strains are isosensitized
16:00 to 18:00 in Iso-Sensitest broth (Oxoid)
After incubating, the Listeria strain was tryptose / phosphate broth (tryptose / pho
sphate broth). Salmonella, Listeria and Staphylococcus
Other than stock
The culturing temperature was 30 ° C, and the culturing temperature was 37 ° C.
The bactericidal activity was measured by the turbidimetric analysis method as in Example 1. Growth substrate and
The experimental conditions regarding temperature were the same as described above. Bacillus and Yersinia
Non-strain incubation time is 24 hours, these times are 48 hours
there were.
Table 4 shows the results. From Table 4, adding the lactic acid bacterium preparation of the present invention
Inhibits the growth of food pathogens and food-harmful microorganisms
Be done.
Example 3: Lactobacillus preparations and milk for the microflora of malted products and for the quality of malt
Effect of preparations produced by acid bacteria
1. Strains used:
Lactic acid bacterium strain, Pediococcus pentosaceus VTT-E-90390 (E
-390) was used in this experiment.
MRS broth was used as the growth medium for the inoculum. Bacteria at a temperature of 30 ℃
Incubate anaerobically for 2 days in 10 ml MRS broth. Inoculation volume for growth
It was 1% of the solution volume.
2. barley:
Using Kymppi barley harvested in 1990, the fussa in this
The percentage of grains contaminated with moulds was 55%.
3. Malting process:
A batch of 1,000 g barley was washed in a water bath at 12 ° C for 1 hour. Wash water first
It was exchanged with the first steeping water, and after 5 hours, this water was exchanged with the second steeping water. 16
After an hour, an air dwell was started. The purpose of the air pause is to remove water on the surface of the grain.
It was to be. The air dwell time was 8 hours. Moisture of barley during steeping is 44%
Met. Barley was aerated throughout the steeping process.
The steeping was continued until germination. Germinate barley at 14 ° C for 6 days in germination box
Let Keep moisture at 44%
For the purpose, batches of barley were moistened daily and mixed upside down. In this way
The obtained green malt was dried under temperature control every 21 hours. This temperature is 4.5 hours
At 50 ° C, raise to 60 ° C during the next 4.5 hours, then raise this temperature for 4 hours
Maintain and raise the temperature evenly over 5 hours to 85 ° C for the remaining 3 hours
Maintained this temperature. The final water content of the malt was about 4%. Final
The radicles were physically removed.
A barley prepared in the same manner except that it was not added was used as a control.
4. Lactic acid bacteria preparations and preparations produced by lactic acid bacteria:
A broth culture medium containing lactic acid bacteria cells and a bactericidal compound isolated from the broth culture medium,
Used as a preparation, either in combination or alone. 1 broth culture medium containing cells
120 ml per kg of barley, or cells with 120 ml of broth
Separated. The above separation is performed by centrifuging the broth culture solution, and the cells
Suspended. When adding broth culture, use the broth as described above.
I was there. The number of cells in the added preparation is approximately 108-109On the order of CFU / ml
It was
5. Addition of lactic acid bacteria preparation:
The addition of the lactic acid bacterium preparation is to barley, at the beginning of steeping I, at the beginning of steeping I and II,
Or it was done either for the beginning of germination.
6. Analysis performed:
Samples were extracted from each malting stage.
6.1. Molds were evaluated as follows. Of grain contaminated with Fusarium mold
Czapek Iprodion, percentage of which is selective for Fusarium mold
Day Chloral Agar (CZAPEK IPR0DION DICL0RAL agar) (CZID Agar)
And damp filter paper (EBC-Analytica Microbiological (EBC-
Analytica Microbiologica), Part II, 1987).
Fusarium mold is red due to its characteristic colony and spore morphology
Therefore, it was identified.
Aspergillus and Penicillium mold are selective malt salt agar.
) (EBC-Analytica Micr (EBC-Analytica Micr
obiologica), Bert II, 1987). Other most common
Molds were measured on moist filter paper.
6.2. MR in the case of cultures and barley samples spiked with lactic acid bacteria
Evaluation was performed on S agar.
6.3. Plate count agar for total bacterial count (Plate Count agar) (Difco (
Difco)).
6.4. The chemical properties of malt can be determined by malting (EBC-A).
Method known from the specification of Naltica (EBC-Analytica), 1987, 4th edition)
Was measured using.
7. result:
Table 5 shows the fusari at various malting stages when E-390 broth culture was added.
The numbers of eubacteria and lactic acid bacteria are shown.
Figures 2 and 3 show various aspects of E-390 broth and E-390 cells.
The total number of bacteria at various malting stages is shown.
Table 6 shows the malt content when E-390 broth culture medium or E-390 cells were added.
It shows the analysis results.
The results obtained show that the treatment according to the invention in particular
It is shown that the total bacterial count is reduced at various malting stages.
The addition of the preparation had no detrimental effect on malt quality. In fact, the opposite
Pair: that is, the treatment according to the invention improves the filtration of wort-derived misch.
And the β-glucan content of malt was further reduced.Example 4
: Production of preparations produced by lactic acid bacteria
1. Preparation of concentrated broth culture:
Production strain, Pediococcus pentosaceus(Pediococcus pentosaceu s
) VTT-E-90390 (E-390) and Lactobacillus bluntara
Mu(Lactobacillus platlarum) VTT-E-78076 (E-76), 15
L, cultivated in fermentor. Inoculum capacity is 6% to 7%, culture
Were performed in MRS medium at 30 ° C. for 2 days under microaerobic conditions. Broth culture,
It was concentrated 10 and 20 times by freeze-drying and evaporation methods. Bactericidal activity of concentrate
Was confirmed by the disk method.
2. Preparation of a purified solution containing a bactericidal compound:
The broth culture of lactic acid bacteria was separated by gel chromatography according to molecular size.
Purified by fractions. Active by disk method and nephelometry
The collected fractions were collected and loaded again on the gel column.Example 5
: Lactic acid on the microbiota and malt quality of malted products
Effects of fungal preparations and preparations produced by lactic acid bacteria
1. Strains used and preparations produced from them:
The following bacterial strains were used:
Lactobacillus plantarum VTT-E-78076 (E-76)
(Lactobacillus plantarum)
Pediococcus pentosaceus VTT-E-90390 (E-390)
(Pediococcus pentosaceus)
These strains are known as VUV, VVT, Collection of Industry.
Le Micro Organisms (Collection of industrial Microorganisms) (
Biotechnical Laboratory, Finland
) Obtained.
The preparations were prepared according to Example 1, Section 3, Example 3, Section 1, and Example 4, Section 1 and Section 2.
It was prepared in the same manner as described in Section 2.
2. barley:
The barley used was the Kymppi barley harvested in 1991.
It was.
3. Malting process:
The malting was the same as described in Example 3, except that the germination stage was 8 days.
I went like this. The final water content of the malt was less than 5%.
4. Malt:
Two types of experimental barley were made. The barley with no addition was used as a control
.
4.1. First malting:
Cell-free broth, 10-fold concentrated cell-free and untreated meat
Broth broth was used as a preparation in laboratory malts. Preparation of steeping I
Or at the beginning of steepings I and II. Perform malting experiments 1-8 as follows
went.
Test No. 1: Control, Kymppi barle harvested in 1991
y);
Test No. 2: E-76 broth containing 120 ml of cells at the beginning of steeping I and II
Add culture medium;
Test number 3: 120 ml of a 10-fold concentrated culture of E-76 at the beginning of steeping I
Add filtrate;
Test number 4: 120 ml of 10 times concentrated E-7 at the beginning of steeping I and II
Add 6 culture filtrates;
Test No. 5: At the beginning of steeping I and II, 120 ml of E-390 broth culture was added.
Added;
Test No. 6: At the beginning of Soaking I, a culture of E-390 concentrated to 10 times 120 ml.
Add nutrient filtrate;
Test number 7: 120 ml of 10 times concentrated E-3 at the beginning of steeping I and II
Add 90 culture filtrates;
Test No. 8: E-76 broth culture containing 60 ml of cells at the beginning of steeping I and II
E containing nutrient solution and 60 ml of cells
-390 meat broth is added.
4.2. Second malt: (malting)
In the laboratory malt, the culture filtrate and cells that were 20 times concentrated without cells were
The preparation was an untreated broth culture medium containing purified germicidal fraction and cells without
Used. The pH of the steeping water was controlled. Preparation added at the beginning of steeping I and II
. Malting experiments 9 to 16 were performed as follows.
Test No. 9: Control, Kymppi barle harvested in 1991
y);
Test No. 10: At the beginning of steeping I and II, add 120 ml of water, pH 3
． 8;
Test No. 11: E-76 meat with 120 ml of cells at the beginning of steeping I and II
Add broth;
Test No. 12: 120 ml of E-76 fractionated concentrate at the beginning of steeping I and II
Add contraction, pH 3.8;
Test No. 13: 120 ml of 20 ml concentrated E-at the beginning of steeping I and II
Add 76 culture filtrates;
Test No. 14: At the beginning of steeping I and II, of E-390 containing 120 ml of cells
Add meat broth;
Test No. 15: 120 ml of E-390 fractionated at the beginning of steeping I and II
Add concentrate, pH 3.8;
Test No. 16: 120 ml of 20 ml concentrated E-at the beginning of steeping I and II
Add 76 culture filtrates.
5. Analysis performed:
Samples were extracted from each malting stage.
Malt mold, lactic acid bacteria, total bacterial counts and physical and chemical quality characteristics were determined in Example 3.
It was measured in the same manner as described in 1.
6. result:
4 and 5 show the malting process when using the broth of lactic acid bacteria containing cells in steeping water.
It shows the total number of bacteria at various stages of.
Tables 7, 8, 9 and 10 show various malting runs for both malting runs.
A concentrated solution of Fusarium mold and other molds in the malting stage, and lactic acid bacteria is also shown.
Of.
Tables 11 and 12 show the results of malt analysis by both malting runs.
It is shown.
From the results thus obtained, the method according to the present invention, in particular,
Fusarium mold content and total bacterial count are shown to be reduced during the malting stage
. Furthermore, in addition to the broth culture solution, the particularly concentrated and fractionated culture filtrate is
It is also shown to have a positive effect, such as for molds.
According to the malt analysis, addition of the broth culture solution of E-76 and E-390 strains produced from malt.
Inference can be drawn that it has the effect of improving the filterability of the wort produced;
The β-glucan content in each malt is also lower than that in the control malt.
Example 6: Meish of a preparation produced by lactic acid bacteria added into a malt product
On the filtration of
FIG. 6 shows the filtration of Maisch produced using malt treated according to the present invention.
Preparation of lactic acid bacterium strain Yamaki (120 ml broth culture medium per 1 kg barley)
2 is a graph again showing the effect of the treatment by.
The strains described in Example 1 were used in this experiment: E-390, E-41.
6, E-98, E-317, E-390, E-76, and E-315. main exam
Was carried out using the Tepral filtration method (bios
(BIOS.) 19, 1988, Grandclerc, J.
Et al., "Simplification de la Methode de Filtration.
Dublath
Simplificalaion de
la methode de filtration du brassin tepral description de la methode)
, Pages 88-92).
From these results, the treatment according to the present invention improves the filtration of Misch.
It is clear.
【手続補正書】特許法第１８４条の８
【提出日】１９９５年２月３日
【補正内容】
請求の範囲
１．製麦工程における大麦の穀粒または栄養素として機能する胚芽に変換する予
定の種子材料に、微生物の成長を阻害する効果を有する乳酸菌調製物または乳酸
菌によって製造された調製物を発芽工程に関連して添加することを特徴とする、
発芽する種子材料の処理方法。
２．該乳酸菌がラクトコッカス、リューコノストック、ペディオコッカスまたは
ラクトバシラス属に属するものである、請求の範囲第１項に記載の方法。
３．該乳酸菌調製物または乳酸菌によって製造された調製物がラクトコッカス
ラクティス、リューコノストックメセンテロイデス、ペディオコッカス ダムノ
サス、ペディオコッカス パルブァラス、ペディオコッカス ペントサセウス、
ラクトバシラス カーヴァタス、若しくはラクトバシラス プランタラム種由来
、若しくはこれらの混合物由来であり、好ましくはラクトバシラス プランタラ
ムまたはペディオコッカス ペントサセウス種由来、若しくはこれらの混合物由
来である、請求の範囲第１項または第２項に記載の方法。
４．大麦の穀粒に、フザリウムカビの成長を阻害する効果を有する乳酸菌調製物
または乳酸菌によって製造された調製物を添加する、請求の範囲第１項から第３
項のいずれかに記載の方法。
５．該乳酸菌調製物または乳酸菌によって製造された調製物を浸麦または発芽段
階で添加することを特徴とする、請求の範囲第４項に記載の方法。[Procedure Amendment] Patent Act Article 184-8
[Submission date] February 3, 1995
[Correction content]
The scope of the claims
1. Pre-conversion to barley kernels or germs that function as nutrients during the malting process
Lactic acid bacteria preparations or lactic acid which have the effect of inhibiting the growth of microorganisms on certain seed materials
Characterized in that the preparation produced by the fungus is added in connection with the germination process,
A method for treating a germinated seed material.
2. The lactic acid bacterium is Lactococcus, Leuconostoc, Pediococcus or
The method according to claim 1, which belongs to the genus Lactobacillus.
3. The lactic acid bacterium preparation or the preparation produced by the lactic acid bacterium is lactococcus
Ractis, Ryukono Stock Mecenteroides, Pediococcus damno
Sass, Pediococcus parvulus, Pediococcus pentosaceus,
From Lactobacillus carvatas or Lactobacillus plantarum species
, Or a mixture thereof, preferably Lactobacillus planta
Or Pediococcus pentosaceus species or mixtures thereof
A method according to claim 1 or 2 which is coming.
4. A lactic acid bacterium preparation having the effect of inhibiting the growth of Fusarium mold on barley grains
Alternatively, a preparation produced by lactic acid bacteria is added, and the method according to claims 1 to 3
The method according to any of paragraphs.
5. The lactic acid bacterium preparation or the preparation produced by the lactic acid bacterium is steeped or germinated.
Method according to claim 4, characterized in that it is added in stages.
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，
ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ
Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ
，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，
ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，
ＣＡ，ＣＨ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，Ｈ
Ｕ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＧ
，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，
ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＫ，ＵＡ，ＵＳ，ＶＮ─────────────────────────────────────────────────── ───
Continued front page
(81) Designated countries EP (AT, BE, CH, DE,
DK, ES, FR, GB, GR, IE, IT, LU, M
C, NL, PT, SE), OA (BF, BJ, CF, CG
, CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE, SN,
TD, TG), AT, AU, BB, BG, BR, BY,
CA, CH, CZ, DE, DK, ES, FI, GB, H
U, JP, KP, KR, KZ, LK, LU, LV, MG
, MN, MW, NL, NO, NZ, PL, PT, RO,
RU, SD, SE, SK, UA, US, VN