JPH08504325A

JPH08504325A - 核のホルモン受容体と相互作用するポリペプチド及び関連する分子並びに方法

Info

Publication number: JPH08504325A
Application number: JP6511358A
Authority: JP
Inventors: デビッドディームーア; ジャウォンリー
Original assignee: ザゼネラルホスピタルコーポレーション
Priority date: 1992-10-30
Filing date: 1993-10-29
Publication date: 1996-05-14
Also published as: AU685412B2; AU5589094A; US5866686A; WO1994010338A1; US5962256A; EP0666926A1; EP0666926A4; US5846711A

Abstract

(57)【要約】供試タンパク質が核のホルモン受容体タンパク質と相互作用する能力を有するかどうかを確定する方法が開示される。当該方法は以下の事項を含むことを特徴とする。(a)宿主細胞を提供し、当該細胞は以下の遺伝子を含む。(i)タンパク質結合部位に機能作動的に連結されたリポーター遺伝子、(ii)第一の融合タンパク質を発現する第一の融合遺伝子、当該第一の融合タンパク質は、上記タンパク質結合部位に特異的に結合することの出来る結合部分に共有結合されている核のホルモン受容体タンパク質を含み、及び(iii)第二の融合タンパク質を発現する第二の融合遺伝子、当該第二の融合タンパク質は弱い遺伝子活性化部分に共有結合された上記の供試タンパク質を含み、並びに(b)上記の供試タンパク質が、上記の核ホルモン受容体と相互作用する能力の指標として上記リポーター遺伝子の発現を増大するかどうかを確定する。この様な相互作用はホルモン依存性、ホルモン非依存性、或いはホルモン感受性であり得る。

Description

【発明の詳細な説明】核のホルモン受容体と相互作用するポリペプチド及び関連する分子並びに方法発明の背景本発明は受容体タンパク質に関わる。甲状腺ホルモンの受容体（例えば、T3）の多様な生理学的及び発育上の効果は上記T3受容体の3つのホルモン結合イソ型TRα1、TRβ1及びTRβ2を介するものである。上記ホルモンの効果はこれらの受容体へのT3の結合の結果である広範な標的遺伝子の発現の変化の結果である。リガンドの受容体への結合が実際如何にして遺伝子発現にこの様な変化を引起こすかは不明であるが、転写速度に対する基本的効果は、TRとRNAポリメラーゼ或いは関連タンパク質の様な基本的な転写装置との間の直接或いは間接のタンパク質とタンパク質の接触の結果であると信じられている。これに加えて、TRと他の転写関連因子との相互作用は、種々の複雑な組合わせによる調節効果の原因であると考えられている。近年、遺伝子発現の制御におけるT3の作用機構の最も基本的な観点の解明は極めて急速に進展している（最近の総説についてはBrentら、Ann．Rev．Physiol． 53:17-35，1991参照）。今では、T3受容体は細胞核のホルモン受容体に関連するスーパーファミリーに属することが明らかである。このファミリーのタンパク質は、多様なリガンドのみならず、類似のDNA結合部位の複雑な連続体とも相互作用する。他のDNAを結合する転写因子の様に、TRは連結されたプロモーターからの転写開始速度を増大（或いは、ある場合には、減少）することによって機能する。この様な変化を引起こす機構の詳細は依然として不明であり、多数の系における熱心な研究の焦点である（総説についてはLewin，Cell 61:1161-1164，1990、 Ptashne，Sci．Am．260:40-47，1989、Ptashne and Gann、Nature 346:329-331 ，1990参照）。しかしながら、2つの概略論旨が明らかである。その第一は、一般に転写因子は、しばしば分別機能的で、別々のDNA結合機能と転写調節機能とを備えた別個の領域からなるというものである。例えば、TRsについては、DNA 結合領域とリガンド結合領域は全く別個であることは明らかであり、キメラ受容体を用いた実験によりT3依存性の遺伝子発現の活性化は異種のDNA結合領域に転移出来ることが明らかにされている（例えば、Holloway，Proc．Natl．Acad．Sc i．USA 87:8160-8164，1990、Thompson and Evans，Proc．Natl．Acad．Sci．US A 86:3494-3498，1989参照）。もう一つの論旨は、転写因子の機能は基本的な転写装置とのタンパク質とタンパク質との相互作用の結果であると考えられるというものである。これらの相互作用は共活性化因子或いはアダプターと呼ばれるタンパク質によって仲介されると考えられている（Ptashne and Gann，Nature 346:329-331，1990参照）。特性が十分には解明されていないこれらのタンパク質は、転写因子によってDNAに拘束される転写活性化領域と転写開始部位に結合したRNAポリメラーゼ複合体の間を架橋するものとして作用する。未知の機構を介して、この相互作用はプロモーター活性を増大する結果となる。タンパク質とタンパク質の接触は、又、転写因子間の驚くほど多種類の正及び負の相互作用に欠くことの出来ないものである。幾つかの系における最近の成果は、この機構が種々の情報伝達経路間の情報交換を可能にする複雑な調節連絡網を形成する結果となることを示唆している。甲状腺ホルモン受容体の場合、今日迄にこの様な相互作用が3つ記載されている。その第一は、TRsの関連RXRsとのヘテロ二量体的相互作用である（Buggeら、EMBO J 11:1409-1418，1992、Kliewer ら、Nature 355:446-449，1992、Liedら、Cell 68:377-395，1992、Marksら、EM BO J 11:1419-1435，1992、Yuら、Cell 67:1251-1266，1991、Zhangら、Nature 355:441-446，1992）。TR/RXRヘテロ二量体は、元来、TRホモ二量体を結合するものとして特徴確定された甲状腺ホルモン応答要素（即ち、T3RE部位）に対してより高いDNA結合親和性を示すが（例えば、Williamsら、J．Biol．Chem．266:19 636-19644，1991）、ヘテロ二量体化は部位特異性を変更するようには思えない。もう一つの、より直接的ではない相互作用がTRsとc-jun及びc-fosがん元遺伝子との相互拮抗効果に反映されている（Desboisら、Cell 67:731-740，1991、Zh angら、Mol．Cell．Biol．11:6016-6025，1991）。これら2つのロイシン・ジッパー転写因子のヘテロ二量体複合体はしばしばAP-1と呼ばれるけれどもjun-ju nホモ二量体及び関連しているが十分には特徴づけられていないタンバク質を含む他の複合体も又、共通のAP-1部位に結合出来る。これらの部位も又TPA応答要素（即ち、TREs）（本申請書ではT3REsと区別されている）と呼ばれる。それは、TPA或いは他のホルボールエステルによるタンパク質キナーゼC活性の誘導がAP -1活性の極めて急速な誘導の原因となるからである（Curran and Franza，Cell 55:395-397，1988）に総説がある）。TRsの活性は活性のjun或いはfosの同時発現によて拮抗され、TRsはjun及びfosの活性に相補的な阻害を及ぼす。この相互作用の機作は不明であるが、重複したDNA結合部位の存在は必要ではない。従って、TRsはT3REを含まないプロモーターに対するTPA応答に拮抗し、jun及びfosは TREを含まないプロモーターに対するT3応答に拮抗する。興味のあることに、TRs は常に核にあり、ホルモンが存在する、しないに拘らずT3REsを結合出来るけれども、その拮抗的な機能はT3が存在する場合に観察されるのみである。 jun及びfosとの拮抗的な相互作用は又RARs（Desboisら、Cell 67:731-740，19 91、Schuleら、Proc．Natl．Acad．Sci．USA 88:6092-6096，1991）ならびにGRs （Jonatら、Cell 62:1189-1204、Schuleら、Cell 62:1217-1226，1990、Yang-Ye nら、Cell 62:1205-1215，1990）を含むスーパーファミリーの他のメンバーについても観察されている。GRとの相互作用は最初に記載されたものであり、最もよく特性が明らかにされているが、その効果に対する生化学的基盤は不明のままである（総説についてはPontaら、Acta 1129:255-261，1992参照）。核のホルモン受容体とタンパク質キナーゼCの信号伝達経路との見掛けの情報交換の潜在的重要性にも拘らず、その生理学的効果も又不明のままである。最後に、TRsは又細胞タイプに特異的な転写活性化因子Pit-1と機能的にも並びに生化学的にも相互作用すると報告されている（Schaufeleら、Mol．Endocrinol ．6:656-665，1992）。TRs及びAP-1の拮抗的効果とは異なり、この相互作用は明らかに結果として相乗的な活性化をもたらす。転写活性化の調節に対するこれらの個別の機構は全く不明のままである。TRs と特異的に相互作用することの出来るタンパク質の同定と特徴決定がこれらの過程及び細胞増殖の調節の様な受容体の他の潜在的機能に対する重要な手掛かりを提供し得ることは明らかである（Halperinら、Endocrinology 126:2321-2326，1 990）。更に、相互作用するタンパク質は甲状腺ホルモン受容体の機能を制御並びに調節する手段を提供する。発明の開示第一の観点では、本発明は一般に供試タンパク質が核のホルモン受容体タンパク質と相互作用することが出来るかどうかを決定する方法を特徴とする。本方法は以下の事項を含む、即ち、（a）宿主細胞を提供し、当該宿主細胞は以下の遺伝子を含む。（i）タンパク質結合部位に機能作動的に連結されているリポーター遺伝子、（ii）第一の融合タンパク質を発現する第一の融合遺伝子、当該第一の融合タンパク質は核のホルモン受容体タンパク質を含み、当該タンパク質はその結合部位に特異的に結合出来る結合部分に共有結合されており、及び（iii）第二の融合タンパク質を発現する第二の融合遺伝子、当該第二の融合タンパク質は弱い遺伝子活性化部分に共有結合された供試タンパク質を含み、及び、（b）上記供試タンパク質が上記の核のホルモン受容体タンパク質と相互作用する能力の指標として上記リポーター遺伝子の発現を増大するかどうかを測定する。好適な実施態様において、本方法は更に、上記の核のホルモン受容体タンパク質に結合するリガンドで上記宿主細胞を処理し、上記リガンドによる上記細胞の処理の場合においてのみ上記リポーター遺伝子の発現を増大する活性を目安にしてホルモン依存性の相互作用タンパク質を同定することを含む。もう一つの実施態様においては、本方法は更に上記宿主細胞を上記の核のホルモン受容体に結合するリガンドで処理し、リガンド処理の存在下及び非存在下のいずれにおいても上記リポーター遺伝子の発現を増大する能力を指標にしてホルモン非依存的に相互作用するタンパク質を同定することを含む。更に他の実施態様において、本方法は尚、上記宿主細胞を上記の核のホルモン受容体に結合するリガンドで処理し、上記リガンド処理の存在下ではなく、非存在下にリポーター遺伝子の発現を増大する活性を指標にしてリガンド感受性の相互作用タンパク質を同定することを含む。好適には上記リガンドは甲状腺ホルモンである。他の好適な実施態様において、上記の弱い遺伝子活性化部分はB42の遺伝子活性化部分、或いはより低い活性化潜勢を持つ遺伝子活性化部分であり、又、上記の核のホルモン受容体は甲状腺ホルモン受容体である。もう一つの観点において、本発明は甲状腺ホルモン受容体（TR）と相互作用するタンパク質（本明細書ではTR−相互作用タンパク質と略）の実質的に純粋な調製品を特徴とする。好適には、上記のTR−相互作用タンパク質はJL-1或いはJL-2 であり、図2-28のいずれか（配列番号1，3，6-30）に示されているアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含み、哺乳類、例えば、ヒトに由来する。関連した観点では、本発明は，ヒトのTR−相互作用タンパク質をコードする、例えば、TR−相互作用タンパク質であるJL-1或いはJL-2をコードする配列を含む精製DNA（例えばcDNA）を特徴とする。他の関連した観点において、本発明は本発明の精製されたDNAを含むベクター及び細胞、本発明のTR−相互作用タンパク質と特異的に結合する精製された抗体、並びに、上記細胞内での発現のために配置されているTR−相互作用タンパク質をコードするDNAで形質転換された細胞を提供することを含めて組換えTR−相互作用タンパク質を調製する方法、上記DNAを発現する条件下に上記形質転換された細胞を培養する方法、及び上記のTR−相互作用組換えタンパク質を分離する方法を特徴とする。本発明は更に、本発明の精製DNAのこの様な発現によって生成される組換えTR−相互作用タンパク質を特徴とする。尚もう一つの観点では、本発明は、本発明のTR−相互作用タンパク質を活性成分として含む治療用組成物を特徴とし、上記活性成分は生理学的に認容し得る担体内に処方されている。この様な治療用組成物は、当該治療用組成物を甲状腺機能の増進（甲状腺機能低下症の場合）、或いは甲状腺機能の低下（甲状腺機能亢進症の場合）に効果的な用量で投与することを含め、哺乳動物における甲状腺疾病を治療する方法に有用である。本申請書で用いられている様に、「リポーター遺伝子」とは、その発現が検定され得る遺伝子を意味し、この様な遺伝子にはlacZ、アミノ酸生合成遺伝子、例えば、酵母のLEU2遺伝子、或いは哺乳動物のクロラムフェニコール・トランスアセチラーゼ（CAT）遺伝子が含まれる。リポーター遺伝子は染色体に組込まれるか、或いは自己複製プラスミド（例えば、酵母の2μプラスミド）上に担載されてもよい。「機能作動的に連結されている」は、遺伝子と調節配列が、当該調節配列に適当な分子（例えば、転写活性化タンパク質、或いは転写活性化領域を含むタンパク質）が結合された場合に遺伝子の発現を可能にする様な状態で連結されていることを意味する。「結合部分」は、特異的ポリペプチドの、特定のDNA配列（即ち、タンパク質結合部位）への結合を指令することの出来る一連のアミノ酸連続を意味する。Le xAは本発明における一つの好適なDNA結合部分の代表である。しかしながら、何等かの他の転写的には不活性な、或いは本質的に転写的には不活性なDNA結合領域で置換されることもある。GAL4 DNA結合領域は、本申請書に記載の系に対する幾分好適ではないDNA結合部分を代表する。「弱い遺伝子活性化部分」とは、それが遺伝子の制御領域に結合すると、遺伝子の発現を弱く誘発することの出来る一連のアミノ酸連続を意味する。本申請書に用いられている様に、「弱く」とは、GAL4活性化領域IIによってもたらされる活性化レベル以下であり（Ma and Ptashne，Cell 48:847，1987）、好適には、M aとPtashneのB42活性化領域によりもたらされる活性化レベルか、それ以下であることを意味する（Cell 51:113，1987）。活性化レベルは、何等かの下流のリポーター遺伝子系を用い、平行して行う検定において、上記GAL4-或いはB42-ポリペプチドによって促進される発現レベルを試験されるべき上記ポリペプチドにより促進された発現レベルと比較することによって測定することが可能である。「TRと相互作用するタンパク質（TR−相互作用タンパク質）」とは、本申請書に記載の生体内のタンパク質相互作用において甲状腺ホルモン受容体と直接或いは間接に物理的に相互作用するポリペプチドを意味する。この様な相互作用は甲状腺ホルモン依存性或いは非依存性であってもよく、或いは甲状腺ホルモン感受性であってもよい。それは又一過性の性質のものかも知れない。好適には、この様なポリペプチドは、上記甲状腺ホルモン受容体との相互作用点において、本申請書記載の相互作用タンパク（例えば、JL-1或いはJL-2）のアミノ酸配列と少なくとも80%、好適には90%、最も好適には95%或いはまさに99%、或いは全般的に少なくとも80%、好適には90%の相同性のあるアミノ酸配列を持つ。本申請書に用いられている様に、「TR−相互作用タンパク質」はいかなるRXRタンパク質或いはPit-1をも含まない。「甲状腺ホルモン」とは、T3、トライアク、或いはT4及びより好適ではないがリバースT3を意味する。「実質的に純粋」とは、少なくとも重量（乾燥重量）で60%が関心のある化合物、即ち、TR−相互作用タンパク質である調製品を意味する。好適には、上記調製品は重量で少なくとも75%、更に好適には少なくとも90%、最も好適には99%が関心のある化合物である。純度は何か適当な方法、例えば、カラムクロマトグラフィー、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、或いはHPLC分析によって測定出来る。「精製されたDNA」とは、それが由来する生物の天然に存在するゲノムにおいては直接に隣接している（一つは5'末端及び一つは3'末端）コーディング配列の両方に直接に隣接していない状態のDNAを意味する。従って、この専門用語はベクター、自己増殖性プラスミド或いはウイルス、原核生物或いは真核生物のゲノムDNAに取込まれている組換えDNA、或いは分離され（例えば、PCR或いは制限エンドヌクレアーゼ処理によって生成されたcDNA又はゲノムDNAの断片）他の配列から独立した分子として存在するものを含む。上記用語は又追加のポリペプチド配列をコードするハイブリド遺伝子の部分である組換えDNAを含む。「実質的に同一な」とは、同類アミノ酸置換、例えば、一つのアミノ酸を同類の他のアミノ酸の代わりに置換（例えば、グリシンの代わりにバリン、リジンの代わりにアルギニン、等）によってのみ、或いは、上記タンパク質の機能を破壊しないアミノ酸配列の位置に局在した一つ或いはそれ以上の非同類置換、欠失或いは挿入によってのみ異なるアミノ酸配列を意味する（例えば、本申請書に記載の様に検定される）。好適には、この様な配列は、図2-28（配列番号1、3、6-30 ）の配列の一つに少なくとも80%、更に好適には90%、最も好適には95%相同である。「実質的に同一な」核酸配列は、上記の様に、実質的に同一なアミノ酸配列をコードする。「形質転換細胞」は、組換えDNA技法の手段によって、TR−相互作用タンパク質をコードするDNA分子（本申請書に用いられている様に）を導入された細胞（或いは、その先祖細胞）を意味する。「発現のために配置された」とは、上記DNA分子が上記配列の転写及び翻訳を指令する（即ち、TR−相互作用タンパク質の生成を容易にする）DNA配列に近接して配置されていることを意味する。「精製された抗体」は、それが天然で連繋しているタンパク質及び天然由来の有機化合物分子を含まない重量で少なくとも60%の抗体を意味する。好適には、上記調製品は少なくとも75%、更に好適には少なくとも90%、そして最も好適には少なくとも99%が抗体、例えば、TR−相互作用タンパク質に特異的な抗体である。精製されたTR−相互作用タンパク質抗体は、例えば、組換え法で生成されたTR −相互作用タンパク質及び標準技法を用いるアフィニティークロマトグラフィーによって得ることが可能である。「特異的に結合する」は、TR−相互作用タンパク質を認識して結合するが、試料、例えば当然TRと相互作用するタンパク質を含む生物学的試料中の他の分子を実質的には認識して結合しない抗体を意味する。本発明の他の特徴と利点は本発明の以下の詳細な記載及び請求の範囲から明らかになるであろう。図面の簡単な説明始めに図面について簡単に説明する。図1は酵母におけるTR−相互作用タンパク質をコードするcDNAsの分離に対する遺伝的選択を示す。LexA/TRβキメラはLEU2遺伝子の上流のlexA結合部位（lexAo p）に結合する。（A）上記lexA/TRキメラと特異的に相互作用をしないタンパク質とそれに融合されたB42トランス活性化（TA）領域とからなる融合タンパク質を発現する細胞において、上記LEU2遺伝子は発現されず、細胞は成育のためにロイシンの補充を必要とする。（B）上記lexA/TRキメラと結合することの出来るタンパク質とTAとの融合体を発現する細胞において、上記TA領域はプロモーターに特異的に運ばれ、LEU2発現は増大されて、細胞は補充ロイシンを必要としない。図2は最近同定されたS．cerevisiaeの転写の共活性化因子SUG1（Swaffieldら、Nature 357:698-700，1992）（配列番号2）と同列に並べられたJL1（配列番号 1）の完全なアミノ酸配列を示す。同一性及び同類置換が示されている。全般の配列同一性は73%である。190から197（JL1）迄の箱入り及び太字の残基はこの系列群のすべてのメンバーに保存されている潜在的ATP結合部位を表す。45から66 （JL1）の箱入りの残基は、この完全長の配列においてN末端に7個群一つ分だけ延長された推定ロイシンジッバーであり、JL1及びSUG1に独特のものと考えられる。JL1配列のN末端部分はJL1のmRNAの5'末端に対応するサブクローニングされたPCR生成物から誘導された。同一配列を持つ別個のクローンがHeLa細胞のcDNA ライブラリーを鋳型として内部JL1及びベクタープライマーを用いて分離された。開始コドンとして割当てられたメチオニン残基は僅か9個のヌクレオチド上流にある停止コドンに先行されている。図3の（A）はJL2（配列番号3）のアミノ酸配列を示す。二つのLIM領域は下線が付けられ、共通のC/D及びD残基は太字で示されている。この配列はlexA/TRβ キメラの活性化因子として分離された融合タンパク質のヒトの場合の部分を示す。（B）はJL2のLIM領域（配列番号4）とLin11（配列番号5）のLIM領域とを並列させたものを示す。両タンパク質におけるこれらの領域はすべての共通部位に対する一致箇所を含み、全般の配列の同一性は35%である。図4（配列番号6）はTR−相互作用タンパク質S112a-の部分核酸配列及び推定アミノ酸配列を示す。図5（配列番号7）はTR−相互作用タンパク質S103aの部分核酸配列及び椎定アミノ酸配列を示す。図6（配列番号8）はTR−相互作用タンパク質S203aの部分核酸配列及び推定アミノ酸配列を示す。図7（配列番号9）はTR−相互作用タンパク質S204bの部分核酸配列及び推定アミノ酸配列を示す。図8（配列番号10）はTR−相互作用タンパク質S205aの部分核酸配列及び椎定アミノ酸配列を示す。図9（配列番号11）はTR−相互作用タンパク質Ｓ249aの部分核酸配列及び推定アミノ酸配列を示す。図10（配列番号12）はTR−相互作用タンパク質S351aの部分核酸配列及び推定アミノ酸配列を示す。図11（配列番号13）はTR−相互作用タンパク質S101aの部分核酸配列及び推定アミノ酸配列を示す。図12（配列番号14）はTR−相互作用タンパク質S223aの部分核酸配列及び推定アミノ酸配列を示す。図13（配列番号15）はTR−相互作用タンパク質S239aの部分核酸配列及び推定アミノ酸配列を示す。図14（配列番号16）はTR−相互作用タンパク質S410aの部分核酸配列及び推定アミノ酸配列を示す。図15（配列番号17）はTR−相互作用タンパク質S418aの部分核酸配列及び推定アミノ酸配列を示す。図16（配列番号18）はTR−相互作用タンパク質S419aの部分核酸配列及び推定アミノ酸配列を示す。図17（配列番号19）はTR−相互作用タンパク質S107a-の部分核酸配列及び推定アミノ酸配列を示す。図18（配列番号20）はTR−相互作用タンパク質S213a-の部分核酸配列及び推定アミノ酸配列を示す。図19（配列番号21）はTR−相互作用タンパク質S113a-の部分核酸配列及び推定アミノ酸配列を示す。図20（配列番号22）はTR−相互作用タンパク質S116a-の部分核酸配列及び推定アミノ酸配列を示す。図21（配列番号23）はTR−相互作用タンパク質S309a-の部分核酸配列及び推定アミノ酸配列を示す。図22（配列番号24）はTR−相互作用タンパク質S227b-の部分核酸配列及び推定アミノ酸配列を示す。図23（配列番号25）はTR−相互作用タンパク質S215a-の部分核酸配列及び推定アミノ酸配列を示す。図24（配列番号26）はTR−相互作用タンパク質S223a-の部分核酸配列及び推定アミノ酸配列を示す。図25（配列番号27）はTR−相互作用タンパク質S240a-の部分核酸配列及び推定アミノ酸配列を示す。図26（配列番号28）はTR−相互作用タンパク質S139aの部分核酸配列及び推定アミノ酸配列を示す。図27（配列番号29）はTR−相互作用タンパク質S110a-の部分核酸配列及び推定アミノ酸配列を示す。図28（配列番号30）はTR−相互作用タンパク質S243bの部分核酸配列及び推定アミノ酸配列を示す。図29はヒトの種々の組織におけるJL1及びJL2発現のノーザン分析を示す。即ち、表示されている組織（H 心臓、B 脳、Pl 胎盤、Lu 肺、Li 肝臓、SM 骨格筋、 K 腎臓、Pa 膵臓、すべてClontech、パロアルト、カルフォルニア州から入手）から採取した2μgのポリA⁺mRNAを標準技法によりJL1及びJL2プローブにハイブリダイズさせ、高度の緊縮条件下で洗浄した（Ausubelら、以下参照）。RNAの当量負荷はヒトのアクチンcDNAプローブとのハイブリダイゼーションによって証明された。以下に、甲状腺ホルモン受容体と物理学的に連繋するタンパク質の分離のための生体内の相互作用捕捉系の使用、及び典型的な相互作用タンパク質（TR−相互作用タンパク質と呼ばれる）が記載される。上記の系は核のホルモン受容体と相互作用するタンパク質の分離に対して極めて一般的に適用されるので、本例は本発明を説明するためで、これを限定するために企画されたものではない。詳細な説明申請者らは、核のホルモン受容体、特にラットの受容体TRβのリガンド結合領域と物理学的に相互作用するタンパク質を同定して分離するために生体内の相互作用捕捉系（Dr．Roger Brentの研究室で開発された）を使用した。この系は転写因子の機能小域性に基き、所望のタンパク質と相互作用することの出来るタンパク質に対する直接の遺伝子選択を可能にする。一般に、上記の所望のタンパク質をコードするDNAを、あるDNA結合領域、例えば、細菌のリプレッサーLexAタンパク質のDNA結合領域、のC-末端をコードするD NAに融合して、キメラ転写因子を生成し、これを酵母で機能検査することが出来る。この場合、TRβのヒンジ領域、リガンド結合領域、及びC末端（D、E、及びF）領域に融合した無傷のlexAからなるlexA/TRキメラは、T3リガンドの存在或いは非存在のいずれの場合にも転写を活性化することが完全に出来ないことが見出された。上記lexA/TRキメラによる転写活性化の欠除が申請者らの遺伝子選択に対する基盤を提供した。図1に示される様に、上記LEU2遺伝子の発現が、上流のlexA結合部位（即ち、オペレーター）への活性化因子の結合に依存している酵母は、このキメラが発現された場合、ロイシンの補充がないと生育することが出来ない。しかしながら、この様な株が、lexA/TRと特異的に相互作用することの出来るタンパク質に融合された比較的弱い転写活性化領域（例えば、Ma and P tashne，Cell 51:113，1987に記載の上記B42活性化領域）を含むもう一つのキメラタンパク質を発現するならば、LEU2遺伝子発現は活性化されて、生育にロイシンは要求されない。この系を用いて、甲状腺ホルモン受容体と相互作用する多数のタンパク質が以下の様に分離された。プラスミドcDNAライブラリーを標準技法によってHeLa細胞のmRNAから生成し、約10⁶個の元メンバーを得た。これらのcDNA挿入断片の各々を上記のB42転写活性化領域（Ma and Ptashne，Cell 51:113，1987）に融合し、上記融合タンパク質の発現を誘導可能な酵母のGAL10プロモーターの制御下に置いた。上記B42活性化領域に加え、この発現構成物は、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、タンパク質発現のためのATG、任意の核配置配列、及び融合タンパク質合成の迅速な免疫学的検出のための任意の抗原決定基標識を持っていた。上記プラスミドは又酵母及びE．coliに対する複製起点並びに両者に対する選択性マーカーを含んだ。融合タンパク質ライブラリーは、上記lexA/TRβキメラを発現し、又、2つのリポーター遺伝子、lexAop/LEU2選択構成物及びlexAop/β−ガラクトシダーゼ指標構成物を含む酵母株に導入された。約10⁷個の初期の形質転換体が非選択的条件下に生成され、これは上記ライブラリー内のクローンの元の数と比較して数倍の重複に相当した。これらの形質転換体を回収して、選択的（leu^-）条件下、甲状腺ホルモンの存在或いは非存在下にプレートに再散布した。酵母における無傷の TRsの機能分析の結果に基き（Privalskyら、Cell 63:1277-1286，1990）、高濃度のトライアク（10^-5M）が直接プレートに加えられた。候補のTRと相互作用するcDNAsを含む多数のロイシン非依存性コロニーが両方の条件下に得られた。 TRと候補のTR−相互作用タンパク質間の相互作用の特異性は数種の方法で検討された。例えば、lexA/β−ガラクトシダーゼ構成物の発現を活性化しないクローンは排除することが出来る。これらのクローンは一般に上記LEU2プロモーターを活性化する酵母の突然変異体、或いは上記lexA結合部位を介するのとは別の手段によって活性化する哺乳動物のcDNAを含む。上記cDNAライブラリーの融合タンパク質の発現は誘導可能なプロモーターの制御下にあるので、リポーター遺伝子発現のこのキメラへの依存性も又この基準によって検査することが出来る。 cDNAライブラリープラスミドは上記の検査を通ったそれらの酵母株から回収された。夫々のプラスミドは上記の元のlexA/TR株に再導入され、それらが特異的に発現を活性化する能力が再確認された。この段階が加えられたのは、酵母の形質転換体は、上記の選択性条件下の生存を可能にするプラスミドに加えて、しばしば、一つ或いはそれ以上のプラスミドを含むからである。TRβ相互作用に対するそれらの特異性を確認するために、上記の救済されたプラスミドも又Brent博士の研究室で生成された他のlexAキメラを含む株に導入され、これらはlexA/myc およびlexA/cdc2を含んだ。上記クローンのすべては、この基準によりTRβに特異的であることが見出された。上記の試験のすべてを通過したcDNAクローンはle xA/TRキメラと特異的に相互作用することの出来るタンパク質をコードするものと結論された。制限酵素切断地図作成に基き、これらのクローンは別個の系統群に分類された。各系統群のメンバーは転写活性化領域との融合接合部を横断して配列決定された。これらのタンパク質の多くの配列は図2-28（配列番号1、3、6-30）に示されている。配列データベースの検索において、クローンのあるものは何等有意な類似性を示さなかったが、大抵のクローンは既知のタンパク質にある程度の関連を示した。以下に述べる様に、２つの系統群は限られた領域に渡って、核の転写因子と強い適合を示した。１つのクローンは意外なことにヒトのクラスリンのH鎖の断片をコードする様に思われた。細胞生物学を考慮して論じると、TRβが哺乳動物の細胞においてクラスリンと生物学的に妥当な相互作用を持つことは全く有り得ないので、上記の選択系の感度は、全く簡単な化学的相互作用に基いて、TRに対していくらかの親和性を示すタンパク質の断片の分離を可能にすると推定することが出来る。この種の相互作用タンパク質は甲状腺ホルモン受容体機能を妨害するペプチドの生成に有用である（以下参照）。 RXRβはTRと相互作用し、HeLa細胞において発現されるので（Liedら、Cell 68 :377-395，1992）、RXRとの融合はリポーター遺伝子発現を活性化することが期待され、この選択法で分離されるであろう。この予測を検討するために、RXRα ヒンジ領域及びリガンド結合領域をコードする断片が、上記の元のcDNAライブラリーを生成するために用いられた上記の転写活性化領域融合ベクターにフレームを合わせて挿入された。予想された様に、このRXR融合構成物は上記のlexA/TR試験株がロイシン非存在下に生存することを可能にしたが、他のlexAキメラを発現している株には生存を可能にせず、又、上記lexA/β−ガラクトシダーゼリポーター遺伝子の発現を活性化した（表2参照）。しかしながら、RXRは最初のスクリーンでは同定されなかった。これは、最初のライブラリーは大きくはあったが、極度に増幅されていたので、このことが希少なcDNAの表示を減少し得るという事実によって尤もらしく説明される。更に、転写活性化領域への融合は、正しい枠内でなければならず、もし、上記の融合が相対的に限られた数の位置においてのみ起こるならば、機能的であり得る。核のホルモン受容体超系統群のメンバーは一般に極めて低レベルで発現されるので、最もあり得ることは適当なRXRクローンは最初に選別された増幅ライブラリーには全く存在しなかったということである。意外なことに、上記lexA/TRと相互作用するcDNAの殆どすべてが活性化に対して非常に強いホルモン依存性を示した。トライアクの存在下、最初の選択で分離された2つのタンパク質、JL1及びJL2は、β−ガラクトシダーゼの発現のレベルで判断すると、両方ともトライアクが存在する場合更に強く上記lexA/TRキメラと相互作用した。トライアクが存在しない場合にのみ相互作用するホルモン^-のグルーブには少数のクローンが存在したが、このホルモン⁺のグループは分離されたクローン（>10の異なったクラス）の大部分を占めた。これらのクラスが表1に示されている。表１クラス１ JL1； HIV/TATと相互作用するタンパク質MSS1（Nature 357:700-702，199 2）、及び酵母のSUG1（Nature 357:698-700，1992）に相同 JL2； LIM領域を含む（Nature 344:876-879，1992） 112a-；現行のデータバンク内のいかなる既知の遺伝子にも有意な相同性なし 103a；ホメオボックスタンパク質CUTに相同（Nature 333:629-635，1988） 203a；ウシのホスファチジルエタノールアミン結合タンパク質に相同（EUR．J．BIOCHEM．166，333-338，1987） 204b；カイネシン関連タンパク質に相同（Mol.Cell．Biol．11:3395-3398， 1991） 205a；現行のデータバンク内のいかなる既知の遺伝子にも有意な相同性なし 249a；現行のデータバンク内のいかなる既知の遺伝子にも有意な相同性なし 351a； BCL3に相同（Cell 60:991-997，1997） 101a； GRP94に相同（J．Biol．Chem．262:8875-8883，1987） 223a；現行のデータバンク内のいかなる既知の遺伝子にも有意な相同性なし 239a； HMGボックスを含む（Nature 357:282-283，1992） 410a； SH3領域を含む（Science 252:668-674，1991） 417a；ヒトのdUTPピロホスファターゼと同一（Proc．Natl．Acad．Sci．U.S.A．89:8020-8024，1992） 418a；現行のデータバンク内のいかなる既知の遺伝子にも有意な相同性なし 419a；酵母のN-ミリストイルトランスフェラーゼに相同（Science 243:796-800，1989）クラス２ 107a-；ラットのクラスリンのＨ鎖に相同（Proc．Natl．Acad．Sci．U.S.A．84:8805-8809，1987） 213a-；現行のデータバンク内のいかなる既知の遺伝子にも有意な相同性なし 113a-；現行のデータバンク内のいかなる既知の遺伝子にも有意な相同性なし 116a-；現行のデータバンク内のいかなる既知の遺伝子にも有意な相同性なし 309a-；マウスのパーポリンに相同（Proc．Natl．Acad．Sci．U.S.A．86:247-251，1989） 227b-；ミトコンドリアのhsp70に相同（DNA8:233-243，1989） 224a-；ヒトのフェリチンのＨ鎖と同一（EMBO J．3:23-27，1984） 312b-；ヒトのhnRNP C1/2と同一（Proc．Natl．Acad．Sci．U.S.A．86:9788-9792，1989） 215a-；現行のデータバンク内のいかなる既知の遺伝子にも有意な相同性なし 223a-；（2'-5'）オリゴアデニル酸シンセターゼに相同（EMBO J．4:2249-2256，1985） 240a-；現行のデータバンク内のいかなる既知の遺伝子にも有意な相同性なしクラス３ 139a；転写因子の可能性のあるVAClに相同（J．Biol．Chem．267:618-623，1992） 110a-；現行のデータバンク内のいかなる既知の遺伝子にも有意な相同性なし実際的に上記の分離されたクローンのすべてが一つのホルモン状態或いは他の状態に特異的であったという事実は驚くべきことであった。試料のTR−相互作用タンパク質及びRXRタンパク質の遺伝的性質が表２に纏められている。表２に示されている酵母株の各々は、表示されている転写活性化(TA)領域融合タンパク質と共にlexAop/LEU2及びlexAop/βガラクトシダーゼ・リポーター構成物の両方を含んでいた。上記cDNAクローニングベクターはB42転写活性化領域のみを発現した（Ma and Ptashne，Cell 51:113-119,1987）。表示のTA融合タンパク質を含む細胞は表示のlexA融合ベクターの夫々で形質転換され、表現型が種々の条件下で検査された。+/-T3はプレートに10^-5Mのトライアク存在或いは非存在を示し(Privalskyら、Cell 63:1277-1286，1990）、leu^-/+は上記の形質転換された細胞がロイシン欠除のプレート上で生育する能力を表し、W/Bは指示薬X-gal を含む指示薬プレート上の白色或いは青色のコロニーの形成を示す。予期された様に、JL1、JL2及びRXR融合タンパク質によって与えられる活性化は、それらの発現を制御するGAL10プロモーターの特異的誘導に依存的であった。 lexA/TRと相互作用するcDNAの最大のクラス（17の個別分離体）はJL1をコードした。ホルモンの有無でβ−ガラクトシダーゼの発現レベルに幾分の変動が、上記B42トランスアクティベーション領域との接合部位に変化のあるクローンで認められたものの、上記クラスのメンバーのすべてが上に纏められた性質を表した。JL1は、図２に示される様に、いくつかの以前に同定されたタンパク質、特にT BP1に全く類似している。この系統群のタンパク質の機能は多様である。TBP1 はHIVの転写調節に十分には理解されてはいないが重要と思われる役割を持つ核タンパク質であり（Nelbockら、Science 248:1650-1653，1990）、一方、哺乳動物のタンパク質VCP（Koller and BrownStein，Nature 325:542-545，1987）及びその酵母の相同体と思われるCDC48（Frohlichら、J.Cell．Biol．114:443-453， 1991）は機能未知の細胞質のタンパク質である。TBP1はラムダgt11発現ライブラリーを選別するために標識したHIV TATタンパク質を用いて分離され、上記の重要なウイルス調節因子と直接相互作用するがDNAとは直接相互作用しないことが見出されている。最初は同時形質移入におけるTAT機能の阻害剤として記載されたが、更に最近の報告によれば、TBP1はTAT活性を刺激する様に作用する可能性があり、それ自身独立して直接の転写活性化機能を持つことがあり得る（Rosen 、抄録、Cold Spring Harbor Symp．Quant．Biol．57:267，1992）。これらに基いて、TBPは転写の共同活性化因子の候補と考えてもよい。JL1は上記のGAL4活性化因子の欠損型のサプレッサーとして最近分離された酵母遺伝子であるSUG1（図２）に更に一層相同性が高い（Swaffieldら、Nature 357:698，1992）。遺伝分析により、SUG1はGAL4と特異的に相互作用することが出来る共同活性化因子であると思われ、上記JL1が同様に共同活性化因子タンパク質をコードするという仮説を支持した。 JL2は単一の回収されたcDNAによってコードされ、元来、３つの推定転写因子L in-11（Freydら、Nature 344:876-879，1990）、Isl-1（Karlssonら、Nature344 :879-882，1990）及びMec-3（Way and Calfie，Cell 54:5-16，1988）に保存されているモチーフとして同定された上記LIM領域の２コピーを含む。遺伝子発現の内分泌的制御に関連して、isl-1は、インシュリン・エンハンサーの活性化因子であるので特に興味深い。それは発生段階及び成熟したランゲルハンス島細胞の両方に発現し、インシュリン発現を調節すると推定される役割に加えて、上記の島細胞の初期の分化に関与すると考えられている。isl-1は又成人におけるニューロンのサブセットに発現し、又、最近では胚の運動ニューロン分化の極めて初期の段階で発現することが見出されている。この初期発現のパターンはis1-1 が脊索及び底板からの誘導シグナルに応答して運動ニューロン細胞の運命を最初に決定するに当って重要な役割を演じているかも知れない（Ericksonら、Sc ience 256:155-1560，1992）。この可能性と一致して、lin-11及びmec-3は共にC ．elegansの発生調節因子であり、夫々、機械感覚ニューロン及び陰門前駆細胞の細胞整列決定に関連している。 lin-11，isl-1及びmec-3はこの系統群の最近同定された他のメンバーの様に、 LIM領域の２コピーに加えてホメオボックス型のDNA結合領域を含む（例えば、Co henら、Genes & Dev．6:715-729，1992、Tairaら、Genes & Dev．6:356-366，19 92参照）。しかしながら、１つのポメオ領域がロンボティン1-3と呼ばれる３つの関連したLIM領域包含タンパク質に存在せず、その内少なくとも２つは推定癌原遺伝子の生成物である（Rosen、抄録、Cold Spring Harbor Symp．Qaunt．Bio l．57:267，1992）。上記LIM領域の共通配列は保存されたシステイン及びヒスチジン残基を含み、少なくとも上記lin-11型は金属イオンを結合することが最近証明された（２原子のZn及び４原子のFe、Liら、Proc．Natl．Acad．Scl．USA 88: 9210，1991）。図３に示す様に、JL2はlin-11における上記LIMの共通配列と良く一致しているが、しかしながら、ホメオボックスを含んでいない。この点に関し、JL2は転写因子lin-11、isl-1及びmec-3に似ているというよりも、ロンボティンに類似している様に思われる。 JL1及びJL2の発現様式の最初の決定が開始されている。図29に示されている様に、凡そ2.1kbのJL1のmRNAが検討されたすべてのヒトの組織で種々のレベルで発現される。少しばかり小さな1.8kbのJL2のmRNAがやや狭い範囲の組織で発現されている。上記のバンドを視覚化するに要する時間量から考えると、両mRNAは極めて低レベルで存在し、調節的役割に一致している。露出時間から判断すると、分離されたJL1クローンの数がより高かったことから予想される様に、JL1のmRNAは JL2よりも約６倍高いレベルで発現されている様に思われる。 TR−相互作用タンパク質がTRの機能に正或いは負の効果を及ぼすかどうかを決定するために、TR−相互作用タンパク質の発現ベクター及びTRβあるいはTRαの発現ベクターの同時形質移入を標準技法により、好適には、上記TR−相互作用タンパク質が有意なレベルで発現されない宿主細胞系で行う（例えば、Ausubelら、Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley & Sons，1989参照）。正の調節因子（例えば、共同活性化因子）として作用するTR-相互作用タンパク質は、この様な検定において増大されたTR活性によって表示される。逆に、負調節因子として作用するTR−相互作用タンパク質はTR活性の低減によって表示される。この種の同時形質移入検定はAusubeら（前出）の書に全般的に記述されている。一つの特例において、上記のTR−相互作用タンパク質をコードするcDNAがCDM8 ベクターに挿入され（Seed，B.，Nature 329:840，1987）、このプラスミドの用量を増大しながらTRβ発現ベクター（Brentら、J．Biol．Chem．264:178，1989 ）並びに、例えば、ヘルペスウイルスのヂミジンキナーゼ(TK)遺伝子（Brent前出）に連結された種々のT3REを含む幾つかの異なったリポーター遺伝子の一つを用いて同時形質移入する。これらの形質移入において、総発現ベクターのレベルは、もし必要であればCDM8を加えて一定のレベルに維持される。形質移入効率の変動及び上記TKプロモーターに対するTR-相互作用タンパク質の効果に対する制御のために、形質移入は又pTKGH（Seldenら、Moll．Cell．Biol．6:3173，1986 ）、即ち、同一のTKプロモーターの制御下にヒト成長ホルモンの発現を指令するプラスミドを含む。調節効果の制御として、Pit-1、c-fos及びc-junも又TRβ及び上記T3REリポーターと共に同時形質移入されてもよい。 TRβ及びその潜在的パートナーの発現の相対的並びに絶対的レベルはいかなる効果にせよその観察に重大であり得るので、負の結果が先ず各ベクターの種々の用量で確定される。幾つかの細胞系も又検討される。しかしながら、もし、これらの段階を経た後、TR−相互作用タンパク質のTR機能に対する特異的効果の証拠が観察されないならば、TRβとの相互作用は、上記タンパク質の分離に元来用いられた遺伝的選択の感度の人為的な結果らしいと結論されるであろう。他方、もし、TR−相互作用タンパク質がTRの機能を変えるならば、上記効果の特異性が検討される。上記TR−相互作用タンパク質の発現ベクターとRSVCATベクター或いはTKCATベクターとの単純な同時形質転換移入が用いられて、いかなる負の結果も抑圧の結果ではないことを確立する（Ptashne and Gann，Nature 346 :329-331，1990）。TR−相互作用タンパク質の発現ベクター並びにTRα、RARs、 VDR、GR、ER或いはその他を発現するベクターと共に適当なリポーターの同時形質移入も又行われることがある。機能的相互作用に必要とされる何等かの特定のTR−相互作用タンパク質の諸部分が、標準の欠失解析により、上記の同時形質移入検定を用い変異タンパク質が検査されることで、先ず測定されてもよい。この様なマッピングの結果は、酵母におけるlexA/TR依存性発現の活性化に対する同じ変異の効果を検査することにより、又以下に述べる生化学的相互作用検定によって確認され拡張されるかも知れない。 TR−相互作用タンパク質が甲状腺ホルモン受容体と相互作用することが出来るかどうかを直接測定するために、潜在的なパートナーの一つに対する抗血清が他のパートナーを同時免疫沈降する活性について検査する。これは細菌によって生成されたTRタンパク質および抗血清或いはTRβタンパク質のある領域を認識する単クローン性抗体を用いて直接検査し得る。この様な検査の一特例では、試験管中で翻訳され、³⁵Ｓで標識されたTR−相互作用タンパク質をTRβタンパク質とT3 の存在或いは非存在下に混合して、当該混合物を上記TRのN-末端を認識する抗血清で免疫沈降する。この様な操作において、TRβと強く相互作用することが知られているRXRβタンパク質を同様に標識したものを正の対照として用いる。上記の免疫沈降された物質はSDS PAGEにより分離され、この様な免疫沈降物中のTR− 相互作用タンパク質或いはRXRの存在をオートラジオグラフィーによって査定する。潜在的TR結合タンパク質のTRとのT3依存性の同時免疫沈降が観察されれば、上記受容体との直接相互作用に対する強力な証拠を提供することになる。タンパク質の試験管中での翻訳についての一般的記述はHope and Struhl，Cell 43:177 -188，1985に述べられている。タンパク質の³⁵Ｓによる標識、抗体の生成（単クローン性抗体を含め）、及び免疫沈降操作はAusubelの報文（下出）に述べられている。この様な同時免疫沈降の欠損は、特定のタンパク質とTRとの相互作用が余りにも一時的でこの研究法では検出出来ないことを示唆するのかも知れない。このことは、例えば、GRのAP-1との相互作用の分析で記載されている様に（Yang-Yenら、Cell 62:1205-1215，1990）、種々の架橋試薬を結合反応に添加することによって検査出来る。この様な研究の解釈を複雑にしかねない多様な人為的な連繋に対する制御が重要である。もし、架橋操作が、追加の必要な補助因子を供給する可能性のある抽出液の存在下でさえもTR-相互作用タンパク質とTRβ間の相互作用を現さないならば、酵母におけるそれらの相互作用は人為的結果である可能性がある。 TR−相互作用タンパク質の短縮断片型も又この方法で検査してTRとの相互作用に必要な各タンパク質の特定の部分を同定することが出来る。この様な断片はTR の機能の特異的阻害剤の生成を容易にする可能性があるので、このことは、上記の相互作用に対して可能性のある薬理学的妨害の見地から特に重要である。 TR−相互作用タンパク質及び抗体ポリペプチドの発現一般に、本発明によるポリペプチドは、TR−相互作用タンパク質をコードする cDNA断片（例えば、前述の上記cDNA）の全体或いは一部を含む適当な発現伝達体で適当な宿主細胞を形質転換することによって生成してもよい。分子生物学に携わる当事者は広範多様な発現系のいずれかを用いて組換えタンパク質の提供し得ることを理解するであろう。使用される宿主細胞の厳密性は本発明にとって重要ではない。上記のTR−相互作用タンパク質は原核生物の宿主（例えば、E．coli）或いは真核生物宿主（例えば、Saccharomyces cerevisiae或いは哺乳動物細胞、例えば、COS 1、NlH 3T3、或いはHeLa細胞）で生成され得る。この様な細胞は広範囲な供給源から入手可能である（例えば、アメリカンタイプカルチャーコレクション（American Type Culture Collection）、ロックランド、メリーランド州、又、例えば、Ausubelら、Current Porotocols in Molecul ar Biology，John Wiley & Sons、ニューヨーク、1989参照）。形質転換並びに形質移入の方法、或いは発現伝達体の選択は選択された宿主系に依存する。形質転換及び形質移入の方法は、例えば、Ausubelら（Current Protocols in Molecu lar Biology，John Wiley & Sons、ニューヨーク、1989）の書に記載されており、発現伝達体は、例えば、Cloning Vectors:A Laboratory Manual（P．H．Pouwe lsら、1985、補遺）に用意されているものから選ぶことが可能である。一つの好適な発現系はpMAMneo発現ベクター（Clontech、パロアルト、カルフォルニア州）を形質移入されたマウスの3T3繊維芽細胞を宿主細胞としたものである。pMAMneoが提供するのは、デキサメサゾンで誘導可能なMMTV-LTRプロモーターに連結されたRSV-LTRエンハンサー、哺乳動物系における複製を可能にするS V40複製起点、選択可能なネオマイシン遺伝子、及びSV40のスプライシング並びにポリアデニル化部位である。TR−相互作用タンパク質をコードするDNAは上記p MAMneoベクターに発現を可能にする様に企画した配向で導入されるであろう。上記の組換えTR−相互作用タンパク質は以下の記載の様にして分離され得る。上記のpMAMneo発現伝達体に関連して用い得る他の好適な宿主細胞にはCOS細胞及びCH O細胞が含まれる（ATCC寄託番号は夫々CRL 1650とCCL 61）。又は、TR−相互作用タンパク質は安定に形質移入された哺乳動物細胞系によって生成される。哺乳動物細胞の安定な形質移入に適当な多数の細胞が一般公衆に入手可能であり、例えば、Pouwelsらの文献（前出）参照のこと。この様な細胞系を構築する方法も又一般に、例えばAusubelら（前出）の文献で入手可能である。一例では、上記TR−相互作用タンパク質をコードしているcDNAはジヒドロ葉酸レダクターゼ(DHFR)遺伝子を含む発現ベクターにクローンされる。従って、上記のプラスミド及びTR−相互作用タンパク質をコードする遺伝子の宿主細胞染色体への組み込みは、細胞培養培地に0.01-300μMのメトトレキセートを含ませることによって選別される（Ausubelらの前出文献に記載の様に）。この優勢選択は大抵の細胞タイプで達成することが出来る。組換えタンパク質の発現はDHFRによって仲介される上記の形質移入された遺伝子の増幅によって増大する。遺伝子増幅を伴う細胞系の選択方法はAtlsubelら（前出）の文献に記載されている。一般に、この様な方法は、漸次上昇するレベルのメトトレキセートを含む培地における長期延長培養を含む。この目的のために通常用いられるDHFR含有の発現ベクターにはpCVSEII-DHRF及びpAdD26SV(A)が含まれる（Ausubelらの前出文献に記載）。上記の宿主細胞のいずれか、或いは好適にはDHFR欠損のCHO細胞系（例えば、CHO DHFR^-細胞、ATCC寄託番号CRL 9096）が、安定に形質移入された細胞系のD HFR選択或いはDHFRを介する遺伝子増幅に好適な宿主細胞の中に存在する。一旦、組換えTR−相互作用タンパク質が発現されると、それは、例えば、アフィニティークロマトグラフィーを用いて分離される。一例において、抗TR−相互作用タンパク質抗体（例えば、本申請書に記載の様にして生成される）をカラムに付着させてTR−相互作用タンパク質の分離に用いてもよい。アフィニティクロマトグラフィーに先立つ、TR−相互作用タンパク質を温存している細胞の溶解及び分画は標準の方法で行われてよい（例えば、Ausubelら、前出参照）。又は、T R−相互作用タンパク質の融合タンパク質、例えば、TR−相互作用タンパク質− マルトース結合タンパク質、TR−相互作用タンパク質−β−ガラクトシダーゼ、或いはTR−相互作用タンパク質−treE融合タンパク質が構築されてTR−相互作用タンパク質の分離に用いられることもあり得る（例えば、Ausubelら、前出、New England Blolabs、ベバリー、マサチュセッツ州）。一旦、分離した後、もし要求されれば上記の組換えタンパク質を、例えば、高性能液体クロマトグラフィーによって更に精製することが出来る（例えば、Fish er，Laboratory Techniques In Biochemistry And Molecular Biology，編集Wo rkとBurdon、Elsevier，1980 参照）。本発明のポリペプチド、特に短鎖のTR-相互作用タンパク質の断片は化学合成によっても又生成することが出来る（例えば、Solid Phase Peptide Synthesis 、二版、1984、The Pierce Chemcal Co.，ロックフォード、イリノイ州）。ポリペプチドの発現及び精製に関するこれらの一般的技術は又有用なTR−相互作用タンパク質の断片或いは同族体の生成或いは分離に用いることが出来る（本申請書に記載）。抗TR−相互作用タンパク質抗体ヒトのTR−相互作用タンパク質（或いは免疫原性断片或いは類似体）を本発明に有用な抗体の生成に用いてもよい。この様なポリペプチドは組換え或いはペプチド合成技術で生成し得る（Solid Phase Peptide Synthesis，前出、Ausubelら、前出参照）。上記ペプチドをAusubelら、前出に記載されている様にKLHの様な担体タンパク質に結合させてもよい。上記のKLH-ペプチドはフロインドのアジュバントと混合してモルモット、ラット、或いは好適にはウサギに注射される。抗体はペプチド抗原アフィニティークロマトグラフィーによって精製され得る。単クローン性抗体も又上記のTR-相互作用タンパク質及び標準のハイブリドーマ技法を用いて生成することが可能である（例えば、Kohlerら、Nature 256:495 ，1975、Kohlerら、Eur．J．Immunol．6:511，1976、Kohlerら、Eur．J．lmmuno 1．6:292，1976、Hammerlingら、In Monoclonal Antibodies and T Cell Hybrid omas，Elsevier，ニューヨーク、1981、Ausubelら、前出参照）。一旦生成されれば、多クローン性或いは単クローン性抗体は、ウエスターンブロット或いは免疫沈降分析によって特異的なTR−相互作用タンパク質認識の有無について検査される（Ausubelら、前出に記載の方法によって）。TR−相互作用タンパク質を特異的に認識する抗体は、本発明に有用と考えられる。この様な抗体は、例えば、哺乳動物によって生成されるTR−相互作用タンパク質のレベルを追跡監視し、或いは、何等かのこれら甲状腺ホルモン受容体調節タンパク質の細胞内局在性を決定する免疫学的検査に用いてもよい。好適には、本発明の抗体は、高度に保存されている領域の外側に位置し、高頻度の荷電残基の存在の様な基準によって抗原性であると思われる上記のTR−相互作用タンパク質の断片を用いて生成される。一つの特例において、この様な断片はPCRの標準技法によって生成され、上記のpGEX発現ベクターにクローンされる（Ausubel，F.M.ら、Current Porotcols in Molecular Biology（Greene Pub．A ssoc.、ニューヨーク、1992））。融合タンパク質はE．coliに発現され、（Ausu bel，F.M.ら、Current Protocols in Molecular Biology（Greene Pub．Assoc. 、ニューヨーク、1992））に記載の様なグルタチオンアガローズアフィニティーマトリックスを用いて精製される。抗血清の低親和性或いは低特異性の潜在的諸問題を最小限にすることを意図して、各タンパク質に対して２つ或いは３つのこの様な融合物が生成され、各融合物が２匹のウサギに注射される。抗血清は、少なくとも３回の追加免疫注射を含む１系列の注射によって生成される。この研究方法は申請者らにより、異なったTRのイソ型を区別することの出来る抗体の生成に用いられて成功を収めている。抗血清は、グルタチオンカラムに固定化されたGSTを用いて抗GST抗体を除去され、又、上記抗血清は、GST融合タンパク質を対照として用いてELISAにより抗体価及び特異性について検査される。抗血清は又、翻訳されたTR−相互作用タンパク質或いはPit-1或いはRARαの様な対照のタンパク質を試験管中で免疫沈降する活性についても検査される。HeLa細胞タンパク質の全体或いは核と細胞質とに分画されたタンパク質のウエスターンブロットも又上記抗血清で探査されて特異性の査定及び細胞内区画の特徴づけが行われる。これら及び他の免疫学的検査において、特異性は上記のGST融合タンパク質との特異的競合によって確認される。一旦、抗血清の特異性が確認されれば、それは何等かの標準の間接的免疫蛍光操作に用いられて、特定の細胞型における上記TR−相互作用タンパク質の細胞内分布を決定する。TR−相互作用タンパク質の、核の転写調節因子との類似性及び TRsとの相互作用に基づくと、これらのタンパク質は核に局在している模様である。応用本申請書に記載の上記タンパク質は甲状腺ホルモン受容体と相互作用し、その様にしてTRの機能を仲介し或いは調節する。甲状腺ホルモン受容体活性に対するこれらタンパク質の効果に基づいて考えると、これらのタンパク質（或いはこれらのタンパク質に由来するペプチド、特にTRと相互作用することの出来る短鎖のペプチド）は、受容体機能の薬理学的修飾剤の生成に便宜を与える可能性がある。特に、TR機能を生体内或いは試験管中で積極的に調節する本発明のTR−相互作用タンパク質は（例えば、前記の様に同時形質移入で検査された様に）、TRとの相互作用領域を含むがTR活性増強領域、例えば、転写装置と相互作用する領域を欠失する治療用ペプチドの生成に用いてもよい。この様なペプチドの効能は又、例えば前記の様にして検査し得る。この様なペプチドはTRに結合し、天然のTR- 相互作用タンパク質による受容体結合を妨害し、それによってTR活性を低下させる。この種のペプチドは甲状腺機能昂進症の治療に有用である。これとは逆に、生体内或いは試験管中で検査される場合（再び、例えば前記の検査法によって）に、TR機能を負に調節するTR−相互作用タンパク質に由来する相互作用性ペプチドは、受容体と負に作用するTR−相互作用タンパク質との間の正常の相互作用を遮断する治療用ペプチドの生成に用いてもよい。これらのペプチドは、甲状腺疾病を治療するために哺乳動物に同様に投与してもよい。本発明のこの様な治療用ポリペプチドは何らかの適当な経路により、例えば、静脈内に甲状腺機能の増加或いは低下に効果的な用量で投与してもよい。治療処置は病気の症状を緩和するために必要な場合は反復してもよい。本発明のペプチドは又甲状腺ホルモン受容体の機能に重要なタンパク質を含む哺乳動物の細胞のこの様な細胞内区画の確認にも有用である。特定のTR−相互作用タンパク質（或いは何らかの核のホルモン受容体と相互作用するタンパク質）に対して特異的な抗体は前記の様にして生成され得る。次いで、上記タンパク質の正常の細胞内局在性は、細胞内原位置で或いは分画された細胞を用いて何らかの免疫学的または免疫組織化学的操作によって決定される（例えば、Ausubelら、前出、BancroftとStevens，Theory and Practice of Histological Technique s，Churchill Livingstone，1982、参照）。 TR−相互作用タンパク質に特異的な抗体は、又甲状腺疾病の検出或いは追跡監視に診断上の利用の道がある。試料中のTR−相互作用タンパク質のレベルは何らかの標準の技法によって検定し得る。例えば、その発現は標準のノーザンブロット分析によって追跡監視され、或いはPCRを援助手段に用いて測定され得る（例えば、Ausubelら、前出、PCR Technology：Principles and Applications forDN A Amplification，H.A．Ehrlich編集、Stockton Press，ニューヨーク参照）。これらの技法は、本申請書に記載の上記TR−相互作用タンパク質の配列が提供されて可能となるものである。又、標準の免疫学的或いは免疫組織化学的な操作（例えば、前記の諸操作）は、TR−相互作用タンパク質の検出のために本申請書に記載の抗体と共に用いてもよい。他の実施態様他の実施態様において、本発明はヒトのTR−相互作用タンパク質に実質的に相同ないかなるタンパク質をも包含する（図2-28、配列番号1、3、6-30）。この様な相同体は、他の実質的に純粋な天然由来の哺乳動物のTR−相互作用タンパク質のみならず対立遺伝子変異体、天然の突然変異体、誘導された変異体、図2-28（配列番号1、3、6-30）のいずれかのTR−相互作用タンパク質配列と高緊縮条件下或いは低緊縮条件下（例えば、少なくとも40ヌクレオチドのプローブ長を用い、 40℃で２回SSCで洗浄）でハイブリダイズするDNAによってコードされるタンパク質、及び、あるTR−相互作用タンパク質に対する抗血清、特に上記TR−相互作用タンパク質の上記TR結合領域に対する抗血清により特異的に結合されるポリペプチド或いはタンパク質を含む。この専門用語は又TR−相互作用タンパク質の断片を含むキメラポリペプチドをも包含する。本発明は更にいかなる天然由来のTR−相互作用タンパク質の類似体をも含む。類似体は天然由来のTR−相互作用タンパク質とアミノ酸配列の相違、翻訳後修飾、或いはその両方の点で相違することが出来る。本発明の類似体は、天然由来の TR−相互作用タンパク質配列の全体或いは部分に対して一般に少なくとも80%、更に好適には90%、最も好適には95%或いは99%さえもの相同性を示すであろう。比較する配列の長さは、少なくとも８アミノ酸残基、好適には少なくとも24アミノ酸残基、及び更に好適には35アミノ酸残基以上である。修飾にはポリペプチドの生体内及び試験管中における化学的誘導体化、例えば、アセチル化、カルボキシル化、リン酸化、或いはグリコシル化が含まれる。この様な誘導体化は、ポリペプチドの合成、或いはプロセシング、或いは分離された修飾化酵素による爾後処理の間に起こることがある。類似体は又天然由来のTR-相互作用タンパク質と一次配列の変更によっても異なることがあり得る。この様な類似体には、自然の及び誘導された遺伝的変異体が含まれる（例えば、照射、或いはエタンメチルスルホン酸への露呈による無作為の突然変異誘発の結果、或いはSambrook，Fritsc h and Maniatis，Molecular Cloning：A Laboatory Manual（二版）、CSH Press ，1989、本申請書に参考文献として取込まれている、或いはAusubelら、Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley & Sons，1989，本申請書に参考文献として取込まれている、に記載されている様な部位特異的突然変異誘発にもよる）。又、環状ペプチド分子及びL-アミノ酸以外の残基、例えば、D-アミノ酸、或いは非天然由来の、または合成のアミノ酸、例えば、β或いはγアミノ酸を含む類似体も包含される。完全長のポリペプチドに加えて、本発明は又TR−相互作用タンパク質の断片も含む。本申請書で用いられている様に、上記専門用語「断片」は、少なくとも10 の隣接したアミノ酸、好適には少なくとも30の隣接したアミノ酸、更に好適には 50の隣接したアミノ酸、最も好適には少なくとも60から80或いはそれ以上の隣接したアミノ酸を意味する。TR−相互作用タンパク質の断片は、この分野の当事者には既知の方法で生成することが出来るが、或いは正常のタンパク質のプロセシングの結果、生じることもある（例えば、初期のポリペプチドから生物学的活性に必要とされないアミノ酸の除去、或いはもう一つ別のmRNAスプライシング或いはもう一つ別のタンパク質プロセシングの結果によるアミノ酸の除去）。本発明に基く好適な断片或いは類似体は上記ペプチドの甲状腺ホルモン受容体との相互作用を容易にするものである。配列リスト (1)一般情報： (i)出願人：デビッドディームーアジャダブリューリー (ii)発明の名称：核のホルモン受容体と相互作用するポリペプチド及び関連する分子並びに方法 (iii)配列の数：３０ (iv)対応アドレス： (A)名宛人：フィッシュアンドリチャーソン (B)通り： 225フランクリンストリート (C)市：ボストン (D)州：マサチューセッツ (E)国：アメリカ合衆国 (F)郵便番号： 02110-2804 (v)コンピュータ読み出し形態： (A)媒体形式： 3.5" ディスク，1.44Mb (B)コンピュータ： IBM PS/2 モデル50Z または55SX (C)作動システム： MS-DOS（バージョン5.0） (D)ソフトウェア：ワードパーフェクト（バージョン5.1） (vi)現出願データ： (A)出願番号： 07/969,136 (B)出願日：１９９２年１０月３０日 (C)分類： 424 (vii)優先出願データ： (A)出願番号： (B)出願日 (viii)代理人情報： (A)氏名：ポールティークラーク (B)登録番号： 30,162 (C)整理番号： 00786/099002 (ix)遠隔通信情報： (A) 電話番号： (617)542-5070 (B) ファックス番号： (617)542-8906 (C) テレックス缶号： 200154 (2)配列番号１の情報： (i) 配列の特徴： (A) 配列の長さ： 406 (B) 配列の型：アミノ酸 (C) 鎖の数： N/A (D) トポロジー： N/A (xi)配列番号１の記載： (2)配列番号２の情報： (i) 配列の特徴： (A) 配列の長さ： 405 (B) 配列の型：アミノ酸 (C) 鎖の数： N/A (D) トポロジー： N/A (xi)配列番号２の記載： (2)配列番号３の情報： (i) 配列の特徴： (A) 配列の長さ： 185 (B) 配列の型：アミノ酸 (C) 鎖の数： N/A (D) トポロジー： N/A (xi)配列番号３の記載： (2)配列番号４の情報： (i) 配列の特徴： (A) 配列の長さ： 122 (B) 配列の型：アミノ酸 (C) 鎖の数： N/A (D) トポロジー： N/A (xi)配列番号４の記載： (2)配列番号５の情報： (i) 配列の特徴： (A) 配列の長さ： 114 (B) 配列の型：アミノ酸 (C) 鎖の数： N/A (D) トポロジー： N/A (xi)配列番号５の記載： (2)配列番号６の情報： (i) 配列の特徴： (A) 配列の長さ： 495 (B) 配列の型：核酸 (C) 鎖の数：二本鎖 (D) トポロジー：直鎖状 (xi)配列番号６の記載： (2)配列番号７の情報： (i) 配列の特徴： (A) 配列の長さ： 885 (B) 配列の型：核酸 (C) 鎖の数：二本鎖 (D) トポロジー：直鎖状 (xi)配列番号７の記載： (2)配列番号８の情報： (i) 配列の特徴： (A) 配列の長さ： 201 (B) 配列の型：核酸 (C) 鎖の数：二本鎖 (D) トポロジー：直鎖状 (xi)配列番号８の記載： (2)配列番号９の情報： (i) 配列の特徴： (A) 配列の長さ： 237 (B) 配列の型：核酸 (C) 鎖の数：二本鎖 (D) トポロジー：直鎖状 (xi)配列番号９の記載： (2)配列番号10の情報： (i) 配列の特徴： (A) 配列の長さ： 126 (B) 配列の型：核酸 (C) 鎖の数：二本鎖 (D) トポロジー：直鎖状 (xi)配列番号10の記載： (2)配列番号11の情報： (i) 配列の特徴： (A) 配列の長さ： 570 (B) 配列の型：核酸 (C) 鎖の数：二本鎖 (D) トポロジー：直鎖状 (xi)配列番号11の記載： (2)配列番号12の情報： (i) 配列の特徴： (A) 配列の長さ： 624 (B) 配列の型：核酸 (C) 鎖の数：二本鎖 (D) トポロジー：直鎖状 (xi)配列番号12の記載： (2)配列番号13の情報： 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(xi)配列番号23の記載： (2)配列番号24の情報： (i) 配列の特徴： (A) 配列の長さ： 192 (B) 配列の型：核酸 (C) 鎖の数：二本鎖 (D) トポロジー：直鎖状 (xi)配列番号24の記載： (2)配列番号25の情報： (i) 配列の特徴： (A) 配列の長さ： 582 (B) 配列の型：核酸 (C) 鎖の数：二本鎖 (D) トポロジー：直鎖状 (xi)配列番号25の記載： (2)配列番号26の情報 (i) 配列の特徴： (A) 配列の長さ： 487 (B) 配列の型：核酸 (C) 鎖の数：二本鎖 (D) トポロジー：直鎖状 (xi)配列番号26の記載： (2)配列番号27の情報： (i) 配列の特徴： (A) 配列の長さ： 768 (B) 配列の型：核酸 (C) 鎖の数：二本鎖 (D) トポロジー：直鎖状 (xi)配列番号27の記載： (2)配列番号28の情報： (i) 配列の特徴： (A) 配列の長さ： 1121 (B) 配列の型：核酸 (C) 鎖の数：二本鎖 (D) トポロジー：直鎖状 (xi)配列番号28の記載 (2)配列番号29の情報： (i) 配列の特徴： (A) 配列の長さ： 108 (B) 配列の型：核酸 (C) 鎖の数：二本鎖 (D) トポロジー：直鎖状 (xi)配列番号29の記載： (2)配列番号30の情報： (i) 配列の特徴： (A) 配列の長さ： 219 (B) 配列の型：核酸 (C) 鎖の数：二本鎖 (D) トポロジー：直鎖状 (xi)配列番号30の記載：

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＣ１２Ｎ 5/10 15/09 ＺＮＡＣ１２Ｑ 1/02 6807−4ＢＧ０１Ｎ 33/566 8310−2Ｊ 9455−4ＣＡ６１Ｋ 37/02 ＡＥＧ

Claims

【特許請求の範囲】 1．供試ペプチドが核のホルモン受容体タンパク質と相互作用する能力を有するかどうかを確定する方法であって、当該方法が以下の事項よりなることを特徴とする。（a）宿主細胞を提供し、当該宿主細胞は、以下の遺伝子を含む。（i）タンパク質結合部位に機能作動的な状態で連結されたリポーター遺伝子、（ii）第一の融合タンパク質を発現する第一の融合遺伝子、当該第一の融合タンパク質は上記のタンパク質結合部位に特異的に結合する能力のある結合部分に共有結合された核のホルモン受容体タンパク質からなり、及び、（iii）第二の融合タンパク質を発現する第二の融合遺伝子、当該第二の融合タンパク質は弱い遺伝子活性化部分に共有結合された上記供試タンパク質からなり、及び（b）上記供試タンパク質が上記リポーター遺伝子の発現を、上記核のホルモン受容体タンパク質と相互作用する能力の指標として増大するかどうかを確定することを特徴とする。 2．請求項1に記載の方法であって、上記方法が更に上記宿主細胞を上記核ホルモン受容体に結合するリガンドで処理し、上記リポーター遺伝子の発現を上記細胞を上記リガンドで処理する場合のみ増大する能力によって、ホルモン依存性相互作用タンパク質を同定することからなることを特徴とする。 3．請求項1に記載の方法であって、上記方法が更に上記宿主細胞を上記核ホルモン受容体に結合するリガンドで処理し、上記リポーター遺伝子の発現を上記リガンド処理の有無の両方の場合に増大する能力によって、ホルモン非依存性相互作用タンパク質を同定することからなることを特徴とする。 4．請求項1に記載の方法であって、上記方法が更に上記宿主細胞を上記核ホルモン受容体に結合するリガンドで処理し、上記リポーター遺伝子の発現を上記リガンド処理が無い場合に増大し、有る場合には増大しない能力によって、リガンド感受性相互作用タンパク質を同定することからなることを特徴とする。 5．請求項1に記載の方法であって、上記の弱い遺伝子活性化部分がB42の遺伝子活性化部分であることを特徴とする。 6．請求項1に記載の方法であって、上記の核ホルモン受容体が甲状腺ホルモン受容体であることを特徴とする。 7．請求項2或いは3に記載の方法であって、上記リガンドが甲状腺ホルモンであることを特徴とする。 8．実質的に純粋なTR−相互作用タンパク質を特徴とする。 9．請求項8に記載のポリペプチドであって、図2に示されているJL1のアミノ酸配列（配列番号1）に実質的に同一なアミノ酸配列からなることを特徴とする。 10．請求項8に記載のポリペプチドであって、図3に示されているJL3のアミノ酸配列（配列番号3）に実質的に同一なアミノ酸配列からなることを特徴とする。 11．請求項8に記載のポリペプチドであって、図4に示されているS112a-のアミノ酸配列（配列番号6）に実質的に同一なアミノ酸配列からなることを特徴とする。 12．請求項8に記載のポリペプチドであって、図5に示されているS103aのアミノ酸配列（配列番号7）に実質的に同一なアミノ酸配列からなることを特徴とする。 13．請求項8に記載のポリペプチドであって、図6に示されているS203aのアミノ酸配列（配列番号8）に実質的に同一なアミノ酸配列からなることを特徴とする。 14．請求項8に記載のポリペプチドであって、図7に示されているS204bのアミノ酸配列（配列番号9）に実質的に同一なアミノ酸配列からなることを特徴とする。 15．請求項8に記載のポリペプチドであって、図8に示されているS205aのアミノ酸配列（配列番号10）に実質的に同一なアミノ酸配列からなることを特徴とする。 16．請求項8に記載のポリペプチドであって、図9に示されているS249aのアミノ酸配列（配列番号11）に実質的に同一なアミノ酸配列からなることを特徴とする。 17．請求項8に記載のポリペプチドであって、図10に示されているS351aのアミノ酸配列（配列番号12）に実質的に同一なアミノ酸配列からなることを特徴とする。 18．請求項8に記載のポリペプチドであって、図11に示されているS101aのアミノ酸配列（配列番号13）に実質的に同一なアミノ酸配列からなることを特徴とする。 19．請求項8に記載のポリペプチドであって、図12に示されているS223aのアミノ酸配列（配列番号14）に実質的に同一なアミノ酸配列からなることを特徴とする。 20．請求項8に記載のポリペプチドであって、図13に示されているS239aのアミノ酸配列（配列番号15）に実質的に同一なアミノ酸配列からなることを特徴とする。 21．請求項8に記載のポリペプチドであって、図14に示されているS410aのアミノ酸配列（配列番号16）に実質的に同一なアミノ酸配列からなることを特徴とする。 22．請求項8に記載のポリペプチドであって、図15に示されているS418aのアミノ酸配列（配列番号17）に実質的に同一なアミノ酸配列からなることを特徴とする。 23．請求項8に記載のポリペプチドであって、図16に示されているS419aのアミノ酸配列（配列番号18）に実質的に同一なアミノ酸配列からなることを特徴とする。 24．請求項8に記載のポリペプチドであって、図17に示されているS107a-のアミノ酸配列（配列番号19）に実質的に同一なアミノ酸配列からなることを特徴とする。 25．請求項8に記載のポリペプチドであって、図18に示されているS213a-のアミノ酸配列（配列番号20）に実質的に同一なアミノ酸配列からなることを特徴とする。 26．請求項8に記載のポリペプチドであって、図19に示されているS113a-のアミノ酸配列（配列番号21）に実質的に同一なアミノ酸配列からなることを特徴とする。 27．請求項8に記載のポリペプチドであって、図20に示されているS116a-のアミノ酸配列（配列番号22）に実質的に同一なアミノ酸配列からなることを特徴とする。 28．請求項8に記載のポリペプチドであって、図21に示されているS309a-のアミノ酸配列（配列番号23）に実質的に同一なアミノ酸配列からなることを特徴とする。 29．請求項8に記載のポリペプチドであって、図22に示されているS227b-のアミノ酸配列（配列番号24）に実質的に同一なアミノ酸配列からなることを特徴とする。 30．請求項8に記載のポリペプチドであって、図23に示されているS215a-のアミノ酸配列（配列番号25）に実質的に同一なアミノ酸配列からなることを特徴とする。 31．請求項8に記載のポリペプチドであって、図24に示されているS223a-のアミノ酸配列（配列番号26）に実質的に同一なアミノ酸配列からなることを特徴とする。 32．請求項8に記載のポリペプチドであって、図25に示されているS240a-のアミノ酸配列（配列番号27）に実質的に同一なアミノ酸配列からなることを特徴とする。 33．請求項8に記載のポリペプチドであって、図26に示されているS139aのアミノ酸配列（配列番号28）に実質的に同一なアミノ酸配列からなることを特徴とする。 34．請求項8に記載のポリペプチドであって、図27に示されているS110a-のアミノ酸配列（配列番号29）に実質的に同一なアミノ酸配列からなることを特徴とする。 35．請求項8に記載のポリペプチドであって、図28に示されているS243b-のアミノ酸配列（配列番号30）に実質的に同一なアミノ酸配列からなることを特徴とする。 36．請求項8に記載のポリペプチドであって、上記ポリペプチドが哺乳動物に由来することを特徴とする。 37．請求項36に記載のポリペプチドであって、上記哺乳動物がヒトであることを特徴とする。 38．請求項8或いは9に記載のポリペプチドをコードする配列からなる精製されたDNAを特徴とする。 39．請求項38に記載の精製DNAであって、上記DNAがcDNAであることを特徴とする。 40．請求項38に記載の精製DNAであって、上記DNAがヒトのTR−相互作用タンパク質をコードすることを特徴とする。 41．請求項38に記載の精製DNAからなるベクターを特徴とする。 42．請求項38に記載の精製DNAを含む細胞を特徴とする。 43．組換えTR−相互作用タンパク質を生成する方法であって、上記細胞内での発現のために配置されたTR−相互作用タンパク質をコードするDNAで形質転換された細胞を提供し、上記の形質転換細胞を上記DNAを発現するための条件下に培養して、上記の組換えTR−相互作用タンパク質を分離することからなることを特徴とする。 44．請求項38に記載の上記精製cDNAの発現によって生成されるTR−相互作用タンパク質を特徴とする。 45．請求項8に記載のポリペプチドに特異的に結合する精製抗体を特徴とする。 46．請求項8によるポリペプチドを活性成分として含む治療用組成物であって、上記の活性成分が生理学的に許容されている担体内に処方されていることを特徴とする。 47．哺乳動物の甲状腺疾病を治療する方法であって、請求項46に記載の上記治療用組成物を甲状腺ホルモン受容体の活性調節に有効な用量で上記哺乳動物に投与することからなることを特徴とする。