JPH08325255A - エポキシコハク酸誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 骨粗鬆症、悪性高カルシウム血症、骨ベーチ
ェット病等の骨疾患の予防または治療に有用であり、ま
た、カテプシンＬ活性の異常亢進を伴なう骨関節炎やリ
ウマチ性関節炎の治療に有用であり、更にカテプシンＢ
及びＬが関与する筋ジストロフィーや筋萎縮症などの疾
患の治療剤として有用な薬剤を提供する。 【解決手段】 下記式を有するエポキシコハク酸誘導
体： 【化１】 （上記において、Ｒ¹ は、水素原子、アルキル、アリー
ル、またはアラルキルであり；Ｒ² およびＲ³ は、それ
ぞれ独立に、アリール、アラルキルまたはアルキルであ
り；Ｘは、−Ｏ−または−ＮＲ⁴ −であり；Ｒ⁴ は、水
素原子、アルキルまたはアラルキルである。）

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新規なエポキシコ
ハク酸誘導体およびそれを用いた骨疾患の治療薬に関す
るものである。

【０００２】

【従来の技術】骨組織は破骨細胞による骨吸収と骨芽細
胞による骨形成を繰り返しており、このバランスの上に
骨の構造および量が保持されている。しかし、骨吸収が
優位な状態になると骨粗鬆症、悪性高カルシウム血症、
骨ベーチェット病などの骨疾患を発症する。

【０００３】破骨細胞による骨吸収は、ミネラルの溶解
（脱灰）と骨基質の分解のステップに分けることがで
き、骨基質の分解はリソソーム酵素により起こると考え
られている。最近の研究では、リソソーム酵素の中で中
心的に働いているものはシステインプロテアーゼである
カテプシンＬや、カテプシンＬ類似の酵素であるといわ
れている（掛川、勝沼、Molecular Medicine, 30(10),
1310-1318(1993) および手塚ほか、J. Biol. Chem., 26
9, 1106-1109(1994)）。また、システインプロテアーゼ
阻害剤が骨吸収を抑制することが報告されている（J.M.
Delaisse ほか、Biochem. Biophys., Res. Commun., 1
25, 441-447(1984)）。そこで、カテプシンＬをはじめ
とするシステインプロテアーゼを阻害する化合物は、骨
粗鬆症などの骨疾患の治療に有望であると考えられてい
る。

【０００４】例えば、いくつかのエポキシコハク酸誘導
体を骨疾患の治療に用いることが既に提案されている
（特開昭６３−２８４１２７号、特開平２−２１８６１
０号各公報）。しかしながら、システインプロテアーゼ
阻害剤を臨床的に使用した例はなく、その研究は緒に就
いたばかりである。特公昭６１−５５５０９号公報は、
チオール基がその活性の発現に関与する蛋白分解酵素の
阻害剤として、エポキシコハク酸誘導体（エポキシスク
シナム酸化合物）を開示している。しかしながら、オキ
シラン環に結合しているＮ−置換カルバモイル基の窒素
原子に隣接する炭素原子が分岐している化合物、、例え
ば、ジフェニルメチルカルバモイル、（３−メチル−１
−フェニルブチル）カルバモイル等は開示されていな
い。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、骨粗
鬆症、悪性高カルシウム血症、骨ベーチェット病等の骨
疾患の予防または治療に有用な化合物および薬剤を提供
することである。本発明の目的はまた、カテプシンＬ活
性の異常亢進を伴なう骨関節炎やリウマチ性関節炎の治
療に有用な化合物および薬剤を提供することにもある。
本発明はまた、カテプシンＢ及びＬが関与する筋ジスト
ロフィーや筋萎縮症などの疾患の治療剤として有用な化
合物を提供することもその目的とする。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題の解決のために鋭意研究した結果、下記式（Ｉ）で表
わされる右側のアミドの置換基が分岐していることを特
徴的構成とするエポキシコハク酸誘導体またはその塩
が、前記の特公昭６１−５５５０９号公報に開示されて
いるエポキシコハク酸誘導体と比べて更に強力な骨吸収
抑制作用を示し、骨疾患の予防または治療に有用である
ことを見出し発明を完成した。なお、特公昭６１−５５
５０９号公報記載の化合物の作用は、後述する実施例の
比較実験における比較化合物ＸおよびＹの作用で代表さ
れる。

【０００７】

【化３】

【０００８】（上記式（Ｉ）において、Ｒ¹ は、水素原
子、炭素原子数が１〜３０のアルキル基、炭素原子数が
６〜４０のアリール基、または炭素原子数が７〜４０の
アラルキル基であり；Ｒ² およびＲ³ は、それぞれ独立
に、炭素原子数が６〜４０のアリール基、炭素原子数が
７〜２０のアラルキル基または炭素原子数が３〜１０の
アルキル基であり；Ｘは、−Ｏ−、または−ＮＲ⁴ −で
あり；Ｒ⁴ は、水素原子、炭素原子数が１〜１０のアル
キル基または炭素原子数が７〜２０のアラルキル基であ
る。）

【０００９】

【発明の実施の形態】式（Ｉ）で表わされるエポキシコ
ハク酸誘導体について説明する。

【００１０】

【化４】

【００１１】式（Ｉ）において、Ｒ¹ は、水素原子、ア
ルキル基、アリール基またはアラルキル基であり、なか
でも水素原子、アルキル基またはアラルキル基が好まし
い。これらのアルキル基、アリール基またはアラルキル
基は、いずれも置換基（例、ヒドロキシル基、ハロゲン
原子、炭素原子数１〜１０のアルキル基、炭素原子数１
〜１０のアルコキシ基、炭素原子数６〜２０のアリール
基）を有していてもよい。アルキル基の炭素原子数（置
換基を有する場合には、置換基を含めた総炭素原子数）
は、１乃至３０であることが好ましく、１乃至１５であ
ることがさらに好ましく、１乃至６であることが最も好
ましい。アルキル基は鎖状構造のものでも、あるい環状
構造を有するものでもよい。鎖状アルキル基は、分岐を
有していてもよい。アリール基の炭素原子数（置換基を
有する場合には、置換基を含めた総炭素原子数）は、６
乃至４０であることが好ましく、６乃至３０であること
がさらに好ましく、６乃至２０であることが最も好まし
い。アリール基の例には、フェニルおよびナフチルが含
まれる。アラルキル基の炭素原子数（置換基を有する場
合には、置換基を含めた総炭素原子数）は、７乃至４０
であることが好ましく、７乃至３０であることがさらに
好ましく、７乃至２０であることが最も好ましい。アラ
ルキル基の例には、ベンジル、フェネチルおよびジフェ
ニルメチルが含まれる。

【００１２】式（Ｉ）において、Ｒ² 及びＲ³ は、それ
ぞれ独立に、アリール基、アラルキル基または炭素原子
数が３乃至１０のアルキル基である。これらのアルキル
基、アリール基またはアラルキル基は、いずれも置換基
（例、ヒドロキシル基、ハロゲン原子、炭素原子数１〜
１０のアルキル基、炭素原子数１〜１０のアルコキシ
基、炭素原子数６〜２０のアリール基）を有していても
よい。アリール基の炭素原子数（置換基を有する場合に
は、置換基を含めた総炭素原子数）は、６乃至４０であ
ることが好ましく、６乃至３０であることがさらに好ま
しく、６乃至２０であることが最も好ましい。アリール
基の例には、フェニルおよびナフチルが含まれる。アル
キル基の炭素原子数（３乃至１０）は、置換基を含めた
総炭素原子数を意味する。アルキル基の炭素原子数は、
３乃至６であることが好ましい。アルキル基は鎖状であ
ってもよく、環状構造を有してよい。鎖状アルキル基
は、分岐を有していてもよい。アラルキル基の炭素原子
数（置換基を有する場合には、置換基を含めた総炭素原
子数）は、７乃至２０であることが好ましく、７乃至１
５であることがさらに好ましく、７乃至１０であること
が最も好ましい。アラルキル基の例には、ベンジルおよ
びフェネチルが含まれる。

【００１３】式（Ｉ）において、Ｘは、−Ｏ−または−
ＮＲ⁴ −である。そしてＲ⁴ は、水素原子、アルキル基
またはアラルキル基であり、水素原子およびアルキル基
が好ましく、水素原子が特に好ましい。これらのアルキ
ル基およびアラルキル基は、前記のものと同様な置換基
を有してもよい。Ｒ⁴ のアルキルの炭素原子数（置換基
を有する場合、置換基を含めた総炭素原子数）は、１乃
至１０であることが好ましく、１乃至６であることがさ
らに好ましく、１乃至４であることが最も好ましい。鎖
状アルキルが好ましい。鎖状アルキルは分岐を有してい
てもよい。Ｒ⁴ のアラルキル基の炭素原子数（置換基を
有する場合には、置換基を含めた総炭素原子数）は、７
乃至２０であることが好ましく、７乃至１５であること
がさらに好ましく、７乃至１０であることが最も好まし
い。このアラルキル基の例には、ベンジルおよびフェネ
チルが含まれる。

【００１４】前記式（Ｉ）に示すオキシラン環の二つの
炭素は、共に不斉炭素原子である。式（Ｉ）は、オキシ
ラン環に結合した二つのカルボニル基がトランス型であ
ることを示す。すなわち、本発明のエポキシコハク酸誘
導体は、下記の（Ｔ１）または（Ｔ２）に示される光学
異性体のいずれかのもの、あるいはこれらの混合物であ
る。

【００１５】

【化５】

【００１６】本発明のエポキシコハク酸誘導体の具体例
を、下記第１表に示す。第１表におけるＲ¹ 、Ｒ² 、Ｒ
³ およびＸは、式（Ｉ）に示す各基に相当する。

【００１７】

【表１】

【００１８】本発明のエポキシコハク酸誘導体は、塩と
して用いてもよい。Ｒ¹ が水素原子でＸが−Ｏ−の場合
は、オキシラン環のカルボニルと共にカルボキシル基を
形成し、これが塩基と塩を形成してもよい。塩基のカチ
オンの例としては、アルカリ金属イオン（例、ナトリウ
ム、カリウム）およびアルカリ土類金属イオン（例、カ
ルシウム）を挙げることができる。本発明のエポキシコ
ハク酸誘導体は、特公昭６１−５５５０９号公報および
特開昭５２−３１０２４号各公報に記載の合成方法に類
似する方法、あるいは後述する実施例１〜１０に記載の
合成方法およびそれに類似する方法に従い、容易に合成
することができる。

【００１９】次に本発明のエポキシコハク酸誘導体の薬
理作用について説明する。本発明のエポキシコハク酸誘
導体は、チオールプロテアーゼ阻害作用を有する化合物
である。チオールプロテアーゼには、カテプシンＬやＢ
あるいはカルパインが含まれる。従って、本発明のエポ
キシコハク酸誘導体およびその生理学的に許容できる塩
は、これらのプロテアーゼが関与する疾患に対して、薬
理作用が期待できる。カテプシンＬが関与する疾患に
は、従来の技術で述べたように、骨粗鬆症、悪性高カル
シウム血症や骨ベーチェット病のような骨疾患が含まれ
る。従って、本発明のエポキシコハク酸誘導体およびそ
の生理学的に許容できる塩は、これらの骨疾患の予防薬
あるいは治療薬として有用である。

【００２０】カテプシンＬが関節軟骨を構成するコラー
ゲンのII型、IX型およびXI型を中性領域で分解すること
が報告されている（FEBS Lett. 269, 189-193(199
0））。従って、本発明のエポキシコハク酸誘導体およ
びその生理学的に許容できる塩は、カテプシンＬ活性の
異常亢進を伴う骨疾患である骨関節炎症あるいはリウマ
チ性関節炎に対しても有効であることが期待できる（特
開平５−１７８７５７号公報参照）。本発明のエポキシ
コハク酸誘導体はカテプシンＢ阻害剤としても優れた作
用を示す。すなわち、カテプシンＢなどの、カテプシン
Ｌ以外のチオールプロテアーゼが関与する疾患として
は、筋ジストロフィーや筋萎縮症（カテプシンＢ、カル
パインが関与）、アルツハイマー病（カルパインが関
与）、神経細胞の脱髄によって起こるとされる疾患、例
えば多発性硬化症や末端神経のニューロパシー（カルパ
インが関与）、白内障（カルパインが関与）、アレルギ
ー疾患（チオールプロテアーゼが関与）、劇症肝炎（カ
ルパインが関与）、乳癌、前立腺癌や前立腺肥大症（カ
ルパインが関与）、癌の増殖や転移（カテプシンＢ、カ
ルパインが関与）あるいは血小板の凝集（カルパインが
関与）がある（特開平６−２３９８３５号参照）ところ
から、本発明のエポキシコハク酸誘導体は、これらの疾
患の治療剤および予防薬として有効であると考えられ
る。

【００２１】本発明のエポキシコハク酸誘導体およびそ
の生理学的に許容できる塩は、以上の疾患の予防薬ある
いは治療薬としても有用であることが期待できる。特
に、骨粗鬆症、悪性高カルシウム血症や骨ベーチェット
病のような骨疾患の予防または治療薬として有用であ
る。本発明のエポキシコハク酸誘導体の投与方法は、経
口投与でも非経口投与でもよい。経口投与剤の剤型とし
ては、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤およびシロップ
剤が挙げられる。非経口投与の方法としては、粘膜投
与、体表投与、血管投与および組織内投与がある。粘膜
投与の場合は、点眼剤、吸入剤、噴霧剤あるいは座剤と
して使用する。体表投与の場合は、軟膏剤として使用す
る。血管投与および組織内投与の場合は、注射剤として
使用する。上記経口投与剤の製造は、通常の賦形剤、崩
壊剤、結合剤、滑沢剤、色素や希釈剤を用いて行なうこ
とができる。賦形剤としては、ブドウ糖や乳糖が一般に
使用される。崩壊剤の例には、澱粉およびカルボキシメ
チルセルロースカルシウムが含まれる。滑沢剤として
は、ステアリン酸マグネシウムおよびタルクが挙げられ
る。結合剤としては、ヒドロキシプロピルセルロース、
ゼラチンおよびポリビニルアルコールが用いられる。非
経口投与製剤も通常の方法で製造できる。例えば、注射
剤の場合、通常の注射用蒸留水、生理食塩水あるいはリ
ンゲル液を用いればよい。本発明のエポキシコハク酸誘
導体の投与量は、通常成人において、注射剤で一日０．
０１乃至１００ｍｇ、経口投与で一日０．１乃至１ｇで
ある。もちろん、投与量は、年齢、人種、症状などに応
じて増減する。

【００２２】

【実施例】

実施例１ （２Ｓ，３Ｓ）−３−ジフェニルメチルカルバモイルオ
キシラン−２−カルボン酸エチル（化合物例２） （２Ｓ，３Ｓ）−３−エトキシカルボニルオキシラン−
２−カルボン酸（８．０１ｇ，５０．０ミリモル) の酢
酸エチル（１２０ｍＬ）溶液にＮ−ヒドロキシコハク酸
イミド（５．７６ｇ，５０．０ミリモル) 、続いて氷冷
下にＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（１
０．３ｇ，５０．０ミリモル) を加えた。５℃で１時間
攪拌した後、アミノジフェニルメタン（９．１７ｇ，５
０．０ミリモル) の酢酸エチル（３０ｍＬ）溶液を滴下
し、５℃で１時間、室温で１時間攪拌した。Ｎ，Ｎ’−
ジシクロヘキシルウレア（DC-Urea ）を濾別し、濾液を
１Ｎ塩酸、飽和重曹水及び飽和食塩水で洗浄し、無水硫
酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧留去した後、残留
物を酢酸エチル／ｎ−ヘキサンから再結晶して、標題化
合物を白色結晶として得た（１．２５ｇ，収率７７
％）。¹ Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃ ）δ １．３２（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ） ３．５１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ） ３．７７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ） ４．２〜４．３（２Ｈ，ｍ） ６．２２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ） ６．６７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ） ７．１〜７．４（１０Ｈ，ｍ）

【００２３】実施例２ （２Ｓ，３Ｓ）−３−ジフェニルメチルカルバモイルオ
キシラン−２−カルボン酸（化合物例１） 実施例１で得た（２Ｓ，３Ｓ）−３−ジフェニルメチル
カルバモイルオキシラン−２−カルボン酸エチル（５．
５０ｇ，１６．９ミリモル) をエタノール（３００ｍ
Ｌ）に溶解させ、氷冷下にて０．５Ｎ水酸化ナトリウム
／エタノール溶液（４０．４ｍＬ，２０．２ミリモル）
を加え、室温で３時間攪拌した。溶媒を減圧留去し、水
（３００ｍＬ）を加えた後、エーテル（１００×２）で
洗浄した。水層に２Ｎ塩酸を加えてｐＨを１〜２とし、
酢酸エチル（１００×３）で抽出した。有機層を飽和食
塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を
減圧下で留去し白色結晶性粉末として標題化合物を得た
（４．７６ｇ，収率９５％）¹ Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ₃ ＯＤ）δ ３．５７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ） ３．７１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ） ６．２３（１Ｈ，ｓ） ７．２〜７．４（１０Ｈ，ｍ）

【００２４】実施例３ （２Ｓ，３Ｓ）−３−ジフェニルメチルカルバモイルオ
キシラン−２−カルボン酸ナトリウム（化合物例１のナ
トリウム塩） 実施例２で得た化合物（１００ｍｇ，０．３３６ミリモ
ル) を酢酸エチル（１０ｍＬ) に溶解し、炭酸水素ナト
リウム（２８．２ｍｇ，０．３３６ミリモル)の水（１
０ｍＬ) 溶液を加え、激しく振盪した。水層を分取し、
減圧下で濃縮乾固して、標題化合物を白色粉末として得
た（１０６ｍｇ，収率９９％）¹ Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ₂ Ｏ）δ ３．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ） ３．６３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ） ６．１５（１Ｈ，ｓ） ７．３〜７．５（１０Ｈ，ｍ） ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ^-1：３４１２，３２１９，３０６
４，３０３０，１６７０，１６３２，１５５２，１４９
５，１４５４，１４４８，１３９８，１３１７，１２８
５，１２４８，１０９３，１０８６，１０５１，１０３
０，１００７，９６０，８９９，８６２，７８３，７５
８，７４２，６９８，６７７，６４２，６０２，５７
１，４８２

【００２５】実施例４ （２Ｓ，３Ｓ）−Ｎ−エチル−３−ジフェニルメチルカ
ルバモイルオキシラン−２−カルボキサミド（化合物例
１２） （２Ｓ，３Ｓ）−３−ジフェニルメチルカルバモイルオ
キシラン−２−カルボン酸（１．８６．０５ミリモル)
とＮ−ヒドロキシコハク酸イミド（６９６ｍｇ，６．０
５ミリモル) の塩化メチレン（１０ｍＬ) 溶液に、氷冷
下Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（１．２
５ｇ，６．０５ミリモル）の塩化メチレン（７ｍＬ) 溶
液を加えた。室温３０分攪拌した後、エチルアミン塩酸
塩（４９３ｍｇ，６．０５ミリモル) とトリエチルアミ
ン（０．８４ｍＬ，６．０５ミリモル) の塩化メチレン
（７ｍＬ) 溶液を氷冷下で加えた。５℃で一晩攪拌後、
溶媒を減圧留去して、酢酸エチル（１０ｍＬ）を加え、
Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルウレア（DC-Urea ）を濾別
した。溶液を、水、０．５Ｎ塩酸、飽和炭酸水素ナトリ
ウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリ
ウムで乾燥した。溶媒を減圧留去後、残渣を中圧シリカ
ゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノ
ール＝１／０〜５０／１）を用いて精製し、白色結晶性
粉末として標題化合物を得た（９２８ｍｇ，収率４７
％）。 ｍ．ｐ．：１９０．０〜１９５．０（分解）¹ Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃ ）δ １．１４（３Ｈ，ｔ） ３．３０（２Ｈ，ｄｑ） ３．５１（１Ｈ，ｄ） ３．５５（１Ｈ，ｄ） ５．９５（１Ｈ，ｂｒ．ｓ） ６．２２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ） ６．５９（１Ｈ，ｂｒ．ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ） ７．１〜７．４（１０Ｈ，ｍ） ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ^-1：３２９０，３０８８，３０６
４，３０３０，２９８０，２９３３，２７７３，１６５
３，１５５１，１４９５，１４５２，１４４６，１３７
１，１３５４，１２７９，１２４０，１１５３，１０９
２，１０５３，１０３０，９９９，９６０，８９１，８
６４，８６２，８４７，８０８，７５４，６９６，６４
８，５９８，８７１，８３６，４７８

【００２６】実施例５ （２Ｓ，３Ｓ）−３−［［４−メチル−１−（３−メチ
ルブチル）ペンチル］カルバモイル］オキシラン−２−
カルボン酸エチル（化合物例１０） （２Ｓ，３Ｓ）−３−エトキシカルボニルオキシラン−
２−カルボン酸カリウム（１．９８ｇ，１０．０ミリモ
ル) をベンゼン（４０ｍＬ）に懸濁させ、ベンゼン（１
３ｍＬ）を常圧で留去して水分除去した。室温まで冷却
した後、攪拌下に塩化チオニル（０．８８ｍＬ，１２．
０ミリモル) を滴下し、２．５時間加熱還流し、出発物
質の酸クロリド溶液を得た。４−メチル−１−（３−メ
チルブチル）ペンチルアミン（２．０６ｇ，１２．０ミ
リモル) とトリエチルアミン（１．６７ｍＬ，１２．０
ミリモル) を乾燥ベンゼン（１０ｍＬ）に溶解させて氷
冷下、先の酸クロリド溶液を滴下し、室温で３時間攪拌
した。水（３０ｍＬ）を加え、有機層を分取し、１０％
クエン酸水溶液、水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、
水、飽和食塩水で順次洗浄した。無水硫酸ナトリウムで
乾燥後、溶媒を減圧留去し、残渣を中圧シリカゲルカラ
ムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝５／
１）で精製して黄色油状物として標題化合物を得た
（１．４０ｇ，収率４５％）。¹ Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃ ）δ ０．８〜１．０（１２Ｈ，ｍ） １．１〜１．４（６Ｈ，ｍ） １．３２（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ） １．４〜１．６（４Ｈ，ｍ） ３．４２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ） ３．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ） ３．８３（１Ｈ，ｍ） ４．２〜４．３（２Ｈ，ｍ） ５．７８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ）

【００２７】実施例６ （２Ｓ，３Ｓ）−３−［［４−メチル−１−（３−メチ
ルブチル）ペンチル］カルバモイル］オキシラン−２−
カルボン酸（化合物例９） 実施例５で得た化合物（１．４０ｇ，４．４７ミリモ
ル) 及び０．５Ｎ水酸化カリウム／エタノール溶液（１
０．７ｍＬ，５．３５モル）を用いて、実施例２と同様
に反応及び処理を行なって、淡黄色アモルファス体とし
て標題化合物を得た（１．１５ｇ，収率９０％）。¹ Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃ ）δ ０．８〜０．９（１２Ｈ，ｍ） １．０〜１．４（６Ｈ，ｍ） １．４〜１．６（４Ｈ，ｍ） ３．４６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ） ３．７８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ） ３．８４（１Ｈ，ｍ） ６．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ）

【００２８】実施例７ （２Ｓ，３Ｓ）−３−［［４−メチル−１−（３−メチ
ルブチル）ペンチル］カルバモイル］オキシラン−２−
カルボン酸ナトリウム（化合物例９のナトリウム塩） 実施例６で得た化合物（１１１ｍｇ，０．３８９ミリモ
ル) 及び炭酸水素ナトリウム（３２．７ｍｇ，０．３８
９ミリモル) を用いて、実施例３と同様に反応及び処理
して、淡黄色粉末として標題化合物を得た（収率７５
％）。¹ Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ₂ Ｏ）δ ０．８〜１．０（１２Ｈ，ｍ） １．１〜１．３（４Ｈ，ｍ） １．４〜１．７（６Ｈ，ｍ） ３．４２（１Ｈ，ｓ） ３．５１（１Ｈ，ｓ） ３．７５（１Ｈ，ｍ） ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ^-1：３４１７，３２５３，３０９
３，２９５４，２８７０，１６６０，１５６０，１４６
８，１４３５，１３９８，１３６７，１３１７，１２５
５，１２２３，１１７１，９６２，８９５，８５２，７
９５，７４４，７１２，６７９，４８２

【００２９】実施例８ （２Ｒ，３Ｒ）−３−［（３−メチル−１−フェニルブ
チル）カルバモイル］オキシラン−２−カルボン酸エチ
ル（化合物例２１） （２Ｒ，３Ｒ）−３−エトキシカルボニルオキシラン−
２−カルボン酸カリウム（３．９７ｇ，２０．０ミリモ
ル) 、塩化チオニル（２．８６ｇ，２４．０ミリモル)
、３−メチル−１−フェニルブチルアミン（４．２５
ｇ，２６．０ミリモル) 及びトリエチルアミン（２．６
３ｇ，２６．０ミリモル) を用いて、実施例５と同様に
反応及び処理を行なって、無色粘稠油状物として標題化
合物を得た（５．８６ｇ，収率９６％）。¹ Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃ ）δ ０．９２（１．５Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ） ０．９３（１．５Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ） ０．９４（１．５Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ） ０．９５（１．５Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ） １．２５（１．５Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ） １．３１（１．５Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ） １．４〜１．７（３Ｈ，ｍ） ３．３３（０．５Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ） ３．４７（０．５Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ） ３．６５（０．５Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ） ３．６８（０．５Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ） ４．２〜４．３（２Ｈ，ｍ） ５．０２（１Ｈ，ｍ） ６．２１（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝８Ｈｚ） ７．２〜７．４（５Ｈ，ｍ）

【００３０】実施例９ （２Ｒ，３Ｒ）−３−［（３−メチル−１−フェニルブ
チル）カルバモイル］オキシラン−２−カルボン酸（化
合物例１９） 実施例８で得た化合物（２．１３ｇ，６．９８ミリモ
ル) 及び０．５Ｎ水酸化カルウム／エタノール溶液（１
８ｍＬ，９．０ミリモル) を用いて、実施例２と同様に
反応及び処理を行なって、白色アモルファス体として、
標題化合物を得た（１．７８ｇ，収率９２％）¹ Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃ ）δ ０．８〜１．０（６Ｈ，ｍ） １．４〜１．８（３Ｈ，ｍ） ３．３４（０．５Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ） ３．４７（０．５Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ） ３．６７（０．５Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ） ３．７１（０．５Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ） ５．００（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝８，８Ｈｚ） ６．６３（０．５Ｈ，ｄ，Ｊ＝Ｈｚ） ６．６６（０．５Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ） ７．１〜７．４（５Ｈ，ｍ） ８．１９（１Ｈ，ｂｒｓ）

【００３１】実施例１０ （２Ｒ，３Ｒ）−３−［（３−メチル−１−フェニルブ
チル）カルバモイル］オキシラン−２−カルボン酸ナト
リウム（化合物例１９のナトリウム塩） 実施例９で得た化合物（１．７０ｇ，６．１８ミリモ
ル) 及び炭酸水素ナトリウム（５１５ｍｇ，６．１３ミ
リモル) を用いて、実施例３と同様に反応及び処理し
て、微黄色粉末として標題化合物を得た（１．７６ｇ，
収率９６％）。¹ Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ₂ Ｏ）δ ０．９〜１．０（６Ｈ，ｍ） １．５〜１．８（３Ｈ，ｍ） ３．４１（１Ｈ，ｍ） ３．５５（１Ｈ，ｍ） ４．９３（１Ｈ，ｍ) ７．３〜７．５（５Ｈ，ｍ）

【００３２】実施例１１ （２Ｓ，３Ｓ）−３−［（α−ベンジルフェネチル）カ
ルバモイル］オキシラン−２−カルボン酸エチル （２Ｓ，３Ｓ）−３−エトキシカルボニルオキシラン−
２−カルボン酸（１．０１ｇ，６．３１ミリモル）、Ｎ
−ヒドロキシコハク酸イミド（７２６ｍｇ，６．３１ミ
リモル）、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド
（１．３０ｇ，６．３１ミリモル）、およびα−ベンジ
ルフェネチルアミン（１．４３ｇ，６．３１ミリモル）
を用いて、実施例１と同様に反応と処理とを行ない、得
られた生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー
（クロロホルム／メタノール＝５０／１）で精製するこ
とにより、淡黄色油状物として標題化合物を得た（２．
２２ｇ，定量的収率）。¹ Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃ ）δ １．３０（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ） ２．６５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９，１４Ｈｚ） ２．８６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ） ２．８７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ） ２．９２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６，１４Ｈｚ） ３．５１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ） ４．２〜４．３（２Ｈ，ｍ） ４．４２（１Ｈ，ｍ） ５．７８（１Ｈ，ｂｒ．ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ） ７．１〜７．３（１０Ｈ，ｍ）

【００３３】実施例１２ （２Ｓ，３Ｓ）−３−［（α−ベンジルフェネチル）カ
ルバモイル］オキシラン−２−カルボン酸 上記の実施例１１で得た化合物（２．２２ｇ，６．２８
ミリモル）および０．５Ｎ水酸化カリウム／エタノール
溶液（１５．１ｍＬ，７．５５ミリモル）とを用いて、
実施例２と同様に反応と処理とを行ない、白色アモルフ
ァス体として標題化合物を得た（１．７８ｇ，収率８７
％）。¹ Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ₂ Ｏ）δ ２．６〜２．８（２Ｈ，ｍ） ２．８９（１Ｈ，ｓ） ３．０〜３．１（２Ｈ，ｍ） ３．２２（１Ｈ，ｓ） ４．３３（１Ｈ，ｍ） ７．２〜７．４（１０Ｈ，ｍ）

【００３４】実施例１３ （２Ｓ，３Ｓ）−３−［（α−ベンジルフェネチル）カ
ルバモイル］オキシラン−２−カルボン酸のナトリウム
塩 上記の実施例１２で得た化合物（１．７８ｇ，５．４７
ミリモル）および炭酸水素ナトリウム（４６０ｍｇ，
５．４７ミリモル）とを用いて、実施例３と同様に反応
と処理とを行ない、白色粉末として標題化合物を得た
（１．７７ｇ，収率９３％）。¹ Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ₂ Ｏ）δ ２．７〜２．８（２Ｈ，ｍ） ２．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ） ３．０〜３．１（２Ｈ，ｍ） ３．２３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ） ４．３４（１Ｈ，ｍ） ７．２〜７．４（１０Ｈ，ｍ） ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ^-1：３３９８，３２４６，３０８
９，３０２６，２９５６，２９２７，２８６０，１６６
８，１６２６，１５６６，１４９７，１４５４，１３９
６，１３１１，１２５９，１２１５，１１１９，１０８
４，１０２８，９８２，９５７，８９７，８６４，８４
７，７９８，７４６，６９８，６７７，６０７，５１
９，４９２

【００３５】実施例１４ 骨吸収抑制作用 生後６〜７日齢のＩＣＲマウスから頭蓋冠を無菌的に採
取し、結合組織を取り除いた後、頭蓋冠を正中線に沿っ
て半分に切断した。一対の骨あたり１ｍＬの培養液(mod
ified BGjbメディウム、５％非働化ウシ胎児血清を含
有）中で２４時間前培養（５％ＣＯ₂ 、３７℃）を行な
った。前培養後に、骨の一片ずつを種々の濃度の被検化
合物を含む上記培養液０．５ｍＬに入れ、副甲状腺ホル
モン（ＰＴＨ）３×１０^-7Ｍの存在下にて７２時間培養
した。また、被検化合物及びＰＴＨ非存在下で培養した
ものをコントロールとした。培養終了後、７２時間の間
に培養上清中に遊離したカルシウム量、および骨中（６
Ｎ塩酸１ｍＬにて溶解）のカルシウム量をオルトクレゾ
ールフタレインコンプレキソン（ＯＣＰＣ）法を用いて
測定した。まず、カルシウム遊離率（％）を次式に従っ
て求めた。

【００３６】

【数１】遊離率（％）＝［培養液中に遊離されたＣａ
量］／［培養液中に遊離されたＣａ量＋骨中のＣａ量］
×１００

【００３７】次に、被検化合物による骨吸収抑制率
（％）を次式に従って求めた。

【００３８】

【数２】抑制率（％）＝［１−（ＰＴＨ、薬物存在下で
の遊離率−コントロ−ルの遊離率）／（ＰＴＨ存在下で
の遊離率−コントロールの遊離率）］×１００

【００３９】上記のそれぞれの結果は、後に示す第２表
にまとめて示す。

【００４０】実施例１５ カテプシンＬ阻害作用 （１）ラット肝臓リソソーム分画の調製 ウイスター系雄性ラットを脱血致死させ、門脈より氷冷
した生理食塩水を注入して還流後、肝臓を摘出した。以
下の操作は４℃で行なった。はさみで細切後、５ｇを量
りとり、９倍量の０．２５Ｍスクロース液を加えてホモ
ジナイズ（ポッター型テフロンホモジナイザー）した。
ホモジネートを８００×ｇで１０分間遠心分離して得た
上清を、さらに１２０００×ｇで２０分間遠心分離し
た。得られた沈澱に０．２５Ｍスクロース液２５ｍＬを
加えてホモジナイズした後、１２０００×ｇで２０分間
遠心分離した。得られた沈澱に０．２５Ｍスクロース液
１０ｍＬを加えてホモジナイズしたものをリソソーム分
画とした。次いで、この分画を０．３３％トリトンＸ−
１００を含む０．２５Ｍスクロース液で希釈してカテプ
シンＬ活性の測定に供した。 （２）カテプシンＬ活性の測定 ３４０ｍＭ酢酸ナトリウム、６０mM酢酸、４mMＥＤＴＡ
及び８ｍＭジチオスレイトールを含む溶液（ｐＨ：５．
５）０．２５ｍＬに、リソソーム分画０．１ｍＬ、被検
化合物溶液５μＬおよび蒸留水０．５４５ｍＬを加えて
３０℃で１５分間プレインキュベートした後、基質とし
て５０μＭカルボベンゾキシ−Ｌ−フェニルアラニル−
Ｌ−アルギニン−４−メチルクマリル−７−アミド(Z-P
he-Arg-MCA) 溶液０．１ｍＬを加えて反応を開始した。
３０℃で２０分間反応させた後、１００ｍＭモノクロル
酢酸ナトリウム、３０mM酢酸ナトリウムおよび７０ｍＭ
酢酸を含む溶液（ｐＨ：４．３）１ｍＬを加えて反応を
停止させた。最終溶液の蛍光強度を励起波長３８０ｎ
ｍ、蛍光波長４６０ｎｍで測定した。なお、Z-Phe-Arg-
MCA は、リソソーム分画に含まれるカテプシンＢによっ
ても分解されるため、カテプシンＢ特異的阻害剤である
ＣＡ−０７４［村田他、FEBSLett. 280, 307-310(1991)
］を反応溶液に１０^-7Ｍ添加してカテプシンＢを完全
に阻害した条件下で測定を行なった。以上の実施例１４
および１５の結果を下記第２表に示す。

【００４１】

【表２】 第２表 ──────────────────────────────────── 被検化合物 骨吸収抑制作用（被検化合物濃度） カテプシンＬ阻害 １０^-6Ｍ １０^-5Ｍ １０^-4Ｍ ＩＣ₅₀（Ｍ） ──────────────────────────────────── 実施例３ ９０ ８２ ９５ ２．４×１０^-7 実施例７ ６３ ８７ ８２ １．９×１０^-8 比較化合物Ｘ ２５ ４０ ６６ ７．８×１０^-8 比較化合物Ｙ ２１ ３８ ４４ ３．５×１０^-7 ────────────────────────────────────

【００４２】

【化６】

【００４３】

【化７】

【００４４】以上のように、本発明のエポキシコハク酸
誘導体は、特公昭６１−５５５０９号公報記載の比較化
合物ＸおよびＹ（同公報１４頁の実施例６１および６
２）に比べ、骨吸収抑制作用が優れていることが明らか
になった。

【００４５】実施例１６ カテプシンＢ阻害作用 ３５２ｍＭのＫＨ₂ ＰＯ₄ 、４８ｍＭのＮａ₂ ＨＰＯ
₄ 、５．３２ｍＭのＥＤＴＡ・２Ｎａおよび１０ｍＭの
Ｌ−システインを含む溶液（ｐＨ６．０）０．２５ｍＬ
にリソソーム分画０．１ｍＬ、被検薬物５μＬおよび蒸
留水０．５４５ｍＬを加えて、３０℃で１５分間プレイ
ンキュベ−ションした後、基質として、５０μＭのカル
ボベンゾキシ−Ｌ−アルギニン−Ｌ−アルギニン−４−
メチルクマリル−７−アミド（Z-Arg-Arg-MCA)溶液０．
１ｍＬを加えて反応を開始させた。３０℃で２０分間反
応させた後、その反応液に１００ｍＭのモノクロル酢酸
ナトリウム、３０ｍＭの酢酸ナトリウム及び７０ｍＭの
酢酸を含む水溶液（ｐＨ４．３）１ｍＬを加えて、反応
を停止させた。最終容量の蛍光強度を励起波長３８０ｎ
ｍ、蛍光波長４６０ｎｍで測定した。その結果を下記の
第３表に記す。

【００４６】

【表３】 第３表 ──────────────────────────────────── 被検化合物 カテプシンＢ阻害（ＩＣ₅₀） ──────────────────────────────────── 実施例３ ２．３×１０^-7 実施例７ ３．１×１０^-7 実施例１３ ２．０×１０^-7 ────────────────────────────────────

【００４７】以上の結果から、本発明のエポキシコハク
酸誘導体がカテプシンＬ阻害作用に加えて、カテプシン
Ｂ阻害作用を有することが分る。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記式（Ｉ）で表わされるエポキシコハ
   ク酸誘導体またはその塩： 【化１】 （上記の式において、Ｒ¹ は、水素原子、炭素原子数が
   １〜３０のアルキル基、炭素原子数が６〜４０のアリー
   ル基、または炭素原子数が７〜４０のアラルキル基であ
   り；Ｒ² 及びＲ³ は、それぞれ独立に、炭素原子数が６
   〜４０のアリール基、炭素原子数が７〜２０のアラルキ
   ル基または炭素原子数が３〜１０のアルキルであり；Ｘ
   は、−Ｏ−または−ＮＲ⁴ −であり；Ｒ⁴ は水素原子、
   炭素原子数が１〜１０のアルキル基または炭素原子数が
   ７〜２０のアラルキル基である。）
2. 【請求項２】 下記式（Ｉ）で表わされるエポキシコハ
   ク酸誘導体またはその生理学的に許容できる塩からなる
   骨疾患の治療薬。 【化２】 （上記の式において、Ｒ¹ は、水素原子、炭素原子数が
   １〜３０のアルキル基、炭素原子数が６〜４０のアリー
   ル基、または炭素原子数が７〜４０のアラルキル基であ
   り；Ｒ² 及びＲ³ は、それぞれ独立に、炭素原子数が６
   〜４０のアリール基、炭素原子数が７〜２０のアラルキ
   ル基または炭素原子数が３〜１０のアルキルであり；Ｘ
   は、−Ｏ−または−ＮＲ⁴ −であり；Ｒ⁴ は水素原子、
   炭素原子数が１〜１０のアルキル基または炭素原子数が
   ７〜２０のアラルキル基である。）