JPH08277298A - 細菌抗原、抗体、ワクチン及びその製造方法 - Google Patents

細菌抗原、抗体、ワクチン及びその製造方法

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JPH08277298A
JPH08277298A JP8094730A JP9473096A JPH08277298A JP H08277298 A JPH08277298 A JP H08277298A JP 8094730 A JP8094730 A JP 8094730A JP 9473096 A JP9473096 A JP 9473096A JP H08277298 A JPH08277298 A JP H08277298A
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gbs
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Dennis L Kasper
エル． カスパー，デニス
Harold J Jennings
ジェイ． ジェニングズ，ハロルド
Nancy J Levy
ジェイ． レビー，ナンシー
Michael R Wessels
アール． ウェセルズ，マイケル
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Brigham and Womens Hospital Inc
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Abstract

(57)【要約】 【課題】 Ｉｃ型Ｂ群のストレプトコッカス細菌におけ
る実質的に精製されたトリプシン耐性のＣ表面蛋白質に
おいて、Ｉｂ／ｃ型Ｂ群及びＩａ／ｃ型Ｂ群のストレプ
トコッカス細菌に対し保護を与え、約14,000の分子量を
有し、Ｂ群のストレプトコッカス細菌多糖類に対し非交
差免疫反応性であり、Ｉｂ／ｃ型Ｂ群のストレプトコッ
カス細菌に対し交差免疫性であることを特徴とする蛋白
質を提供すること。 【解決手段】 上記の蛋白質を提供することによる。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、Ｂ群のストレプト
コッカス細菌の免疫決定基を有する抗原、これら細菌に
対し保護するワクチン、この種のワクチンの製造方法、
並びに細菌多糖類からのオリゴ糖の製造方法に関するも
のである。本明細書に使用するＢ群のストレプトコッカ
ス（すなわちＧＢＳ）細菌という用語は、特にランスフ
ィールド、ジャーナル・エキスペリメンタル・メジス
ン、第１０８巻、第３２９〜３４１頁（１９３８）、並
びにＢ群の血清型を特性化するその後の研究、たとえば
ラッセル−ジョンズ、ジャーナル・エキスペリメンタル
・メジスン、第１６０巻、第１４７６頁（１９８４）を
参照して当業者により理解されているように用いられ
る。特にこの用語は、分類学的にストレプトコッカス・
アガラクチア（ Streptococcus agalactiae ）と命名
された細菌を包含する。
【０００２】ＧＢＳは、幼児における菌血症及び（又
は）脳膜炎、並びに成人における感染症に対する認めら
れた病因学的薬剤である［ベーカー、「Ｂ群のストレプ
トコッカス感染」、アドバンシス・イン・インターナル
・メジスン、第２５巻、第４７５〜５００頁（１９８
０）］。したがって、ＧＢＳ感染を診断するための迅速
かつ明確な分析法並びに特に幼児及び汚染された個人に
おけるＧＢＳに対する保護の発生方法を開発することが
重要である。
【０００３】ＧＢＳ莢膜多糖類は、ＧＢＳ毒性及び免疫
に対し重要であることが知られている［ベーカー、上
記］。さらに、認められたＧＢＳ型及び亜型は化学的に
相関するが抗原的には相違した莢膜多糖類を有し、これ
ら多糖類はガラクトトース、グルコース、Ｎ−アセチル
グルコサミン及びＮ−アセチル−ノイラミン（シアリ
ン）酸で構成された反復構造を有する［ベーカー、上
記］。III 型ＧＢＳ莢膜多糖類は、図１に示したような
分枝した五糖類の反復単位で構成された骨格を有する
［ジェニングス等、キャナディアン・ジャーナル・バイ
オケミストリー、第５８巻、第１１２〜１２０頁（１９
８０）］。
【０００４】III 型ＧＢＳ多糖類に関する１つの研究
は、天然の免疫決定基部位が側鎖−骨格の接合部に位置
することを示唆している［ジェニングス等、バイオケミ
ストリー、第２０巻、第４５１１〜４５１８頁（１９８
１）］。側鎖の末端Ｎ−アセチル−ノイラミン酸残基の
存在は、免疫決定基の発現に対し臨界的であると報告さ
れている。
【０００５】さらに、ＧＢＳ蛋白質免疫性の研究も報告
されている。ランスフィールド等［ジャーナル・エキス
ペリメンタル・メジスン、第１４２巻、第１６５〜１７
９頁（１９７５）］は、ＧＢＳのいわゆるＣ蛋白質は免
疫原として存在すれば全生物に対し保護抗体を誘発する
ことができると報告している。「Ｃ蛋白質」という命名
は、ヘンリックセン等によりインターナショナル・ジャ
ーナル・オブ・システマティック・バクテリオロジー、
第３４巻、第５００頁（１９８４）に定義されているよ
うに用いられ、この用語は従来Ｉｂｃ蛋白質と命名され
た蛋白質を包含する。
【０００６】Ｃ蛋白質の分子に対する研究が示すところ
では、これらの物質は種々の分子量を有する蛋白質の複
雑な群を構成する［ウイルキンソン等、インフェクショ
ン・イミュノロジー、第４巻、第５９６〜６０４頁（１
９７１）；ベバンガー等、アクタ・パソロジカル・マイ
クロバイオロジー・スカンジナビヤ、セクションＢ、第
８７巻、第５１〜５４頁（１９７９）；ラッセル−ジョ
ーンズ等、ジャーナル・エキスペリメンタル・メジス
ン、第１６０巻、第１４７６〜１４８４頁（１９８
４）；ベバンガー等、アクタ・パソロジカル・マイクロ
バイオロジー・スカンジナビヤ・セクションＢ、第８９
巻、第２０５〜２０９頁（１９８１）］。
【０００７】ウイルキンソン等は、全ＩＣ型ＧＢＳの熱
酸抽出物が種々異なる分子寸法（ポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動により測定）を有しかつＩｃ型抗血清に対し
寒天ゲルにおいて血清学的反応性を有する１３種の蛋白
質を与えることを開示している。ベバンガー等（１９７
９）は、９種のトリプシン感受性蛋白質と５種のトリプ
シン耐性であるがペプチン感受性の蛋白質とを含有する
ＧＢＳ酸抽出物を開示している。ベバンガー等（１９８
１）は、部分精製された酸抽出蛋白質の免疫性を開示し
ている。ラッセル−ジョーンズ等は、２０，０００〜１
３０，０００の範囲で分子量が変化する３０種までの蛋
白質を含有する抽出物を開示しており、１３０ｋｄの蛋
白質が主体である。さらにラッセル−ジョーンズ等は、
多数の蛋白質が単一のモノクローナル抗体に対し免疫
（ウエスタン）ブロットにより反応したと報告してお
り、このことは或る種の蛋白質が他の蛋白質の分解生成
物であったことを示唆している。他のモノクローナル抗
体を用いて、１３０，０００ＭＷの蛋白質及び１０，０
００〜１２０，０００ＭＷの範囲の１２種の他の蛋白質
は共通のエピトープを有すると思われる。
【０００８】インセル及びアンデルセン、ジャーナル・
エキスペリメンタル・メジスン、第１６３巻、第２６２
頁（１９８６）は、ヘモフィルス・インフレンザ（ Hae
mophilus influenzae）莢膜多糖類を蛋白質キャリアー
に結合させて、この莢膜をより胸腺依存性の免疫原に変
換する試みを開示している。
【０００９】
【課題を解決するための手段】今回、III 型Ｂ群のスト
レプトコッカス（III −ＧＢＳ）多糖類莢膜の反復五糖
類単位（及び単一の単位だけでも）のオリゴマーが抗原
性を示すことを突き止めた。この単位を含む抗原、特に
反復単位を有する抗原は、III −ＧＢＳワクチンの成分
として使用することができる。したがって、本発明の一
面は、III 型Ｂ群のストレプトコッカス（III ＧＢＳ）
細菌に対し選択的免疫反応性である抗体を生成すること
ができかつ次式：
【化１】 ［式中、ｎ＝１〜５０であり、ＧｌｃＮＡｃｐはＮ−ア
セチル−グルコサミン（ピラノース型）を示し、Ｇａｌ
ｐはガラクトース（ピラノース型）を示し、Ｇｌｃｐは
グルコース（ピラノース型）を示しかつα−Ｄ−Ｎｅｕ
ＮＡｃはＮ−アセチル−ノイラミン（シアリン）酸を示
す］を有する精製オリゴ糖からなる抗原を特徴とする。
【００１０】「精製」という用語は、オリゴ糖と共に天
然に存在する種々の蛋白質、脂質及び炭水化物成分から
実質的に分離されることを意味する。特に、精製オリゴ
糖は完全III ＧＢＳ多糖類莢膜又は１００，０００以上
の分子量を有するその断片を実質的に含まない。微量の
外来成分が精製オリゴ糖に存在したとしても、この精製
物質をワクチンに使用したり或いは抗原として使用する
ことを妨げない。「精製」という用語は、人工的な合成
を伴なう合成オリゴ糖調製物を排除することを意図せ
ず、またこの用語は調製物が再現性のあるオリゴ糖特性
データ、たとえば分子量、糖残部含有量、糖結合、クロ
マトグラフ反応及び免疫学的挙動を示す限り若干の不純
物を含むような調製物を排除することを意味するもので
もない。
【００１１】第二面において本発明は、III ＧＢＳに対
し保護を示すことができかつ医薬上許容しうるビヒクル
と必要に応じキャリアーに結合された上記抗原とからな
るワクチンを特徴とする。
【００１２】本発明の第三の面は上記抗原の製造方法を
特徴とし、この方法は：（１）III−ＧＢＳ細菌を適当
な培地で培養し；（２）培地又は細菌細胞から多糖類を
回収し；（３）この多糖類を結合Ｓ1 （１→３）−β−
ｇａｌ（１→４）Ｓ2 ［式中、Ｓ1 及びＳ2 は独立して
グルコース、グルコサミン又はＮ−アセチル−グルコサ
ミンから選択される］の開裂につき特異性であるエンド
−β−ガラクトシダーゼによって切断し；かつ（５）培
地又は細菌からオリゴ糖抗原を回収することからなって
いる。必要に応じ、オリゴ糖は下記するようにキャリア
ーに結合される。
【００１３】前記３種の局面の好適具体例において、オ
リゴ糖抗原は、上記結合に対し特異性のエンド−β−ガ
ラクトシダーゼを用いてIII ＧＢＳ莢膜多糖類を酵素加
水分解して生成される。この種の１種のエンド−β−ガ
ラクトシダーゼはフラボバクテリウム・ケラトリチクス
（ Flavobacterium keratolyticus）に見出される。さ
らに好ましくは、オリゴ糖は細菌免疫決定基部位を有す
るたとえば蛋白質、特に細菌トキソイド又は細菌表面蛋
白質のようなキャリアーに共有結合される（たとえば第
２アミン結合を介する）。
【００１４】第四の面において、一般に本発明はさらに
上記結合を有する細菌多糖類の酵素開裂を特徴とし、す
なわち精製オリゴ糖の製造方法に関し、この方法は特に
表面多糖類（たとえば多糖類莢膜若しくは膜）を有する
細菌を培養しかつこの多糖類を抽出し、次いでこれを上
記酵素で切断し、さらにオリゴ糖を回収する。好ましく
は、細菌はグラム陽性菌、たとえばIII 型ＧＢＳであ
る。或いは、この細菌はたとえば１４型ストレプトコッ
カス・ニューモニア（ Streptococcus pneumoniae）
（たとえばＡＴＣＣ No.６３１４）のような表面莢膜多
糖類を有する菌種とすることができる。
【００１５】第五の面において、本発明はＩａ／ｃ型Ｂ
群のストレプトコッカスの実質的に精製されたトリプシ
ン耐性のＣ表面蛋白質を特徴とし、この蛋白質は約１
４，０００の分子量を有しかつＢ群のストレプトコッカ
ス細菌多糖類に対し非交差免疫反応性であるが、Ｉａ／
ｃ型ＧＢＳに対し交差免疫性を有する。他の局面におい
て、上記蛋白質はＩａ／ｃ型（及びＩｂ／ｃ型）ＧＢＳ
に対し保護を示すワクチンに使用され、このワクチンは
蛋白質（必要に応じ、たとえば上記したIII 型ＧＢＳオ
リゴ糖のようなオリゴ糖に結合される）と医薬上許容し
うるキャリアーとからなっている。得られる結合体はＧ
ＢＳに対し広範な保護を与え、III ＧＢＳ及びＣ蛋白質
を有するＧＢＳに対し保護を示す。
【００１６】さらに他の局面において、本発明はＧＢＳ
に対し受働保護を与えうるγグロブリンフラクションを
特徴とし、このフラクションは哺乳動物を上記ワクチン
の１種で免疫化することにより生成される。次いで、こ
のフラクションを個人に投与してＧＢＳ感染に対し保護
を与えるか又は進行中の感染を処置する。
【００１７】最後に、本発明は抗ＧＢＳ抗体に関する試
料の分析方法を特徴とし、この方法は試料へ上記オリゴ
糖又は蛋白質抗原を添加し、次いで免疫複合体の生成を
検出することからなっている。或いは、試料をＧＢＳ免
疫決定基の存在につき分析し、その際オリゴ糖若しくは
蛋白質抗原に対する抗体を生成させ、この抗体を試料に
添加し、かつ免疫複合体の生成を検出する。
【００１８】骨格グリコシド結合の酵素選択加水分解
は、単純な酸加水分解よりも優れている。何故なら、後
者の技術は側鎖シアリン酸残基の損失を伴い、かつ結合
を非選択的に切断して免疫性の減少した不均質混合物を
生成するからである。これに対し、酵素切断法はシアリ
ン酸残基を保持し、かつ骨格反復単位につき一旦生ずる
とｇａｌ−β１−４−ｇｌｃ結合においてのみ骨格の切
断をもたらす。
【００１９】本発明の他の特徴及び利点は、好適具体例
に関する以下の説明から明らかとなるであろう。
【００２０】
【発明の実施の形態】以下、本発明の好適具体例につき
説明する。
【００２１】I. 図１は、III ＧＢＳ莢膜多糖類の反復
五糖類を示す。 II. III 型ＧＢＳ抗原及びワクチン Ａ. オリゴ糖 上記特定の五糖類は、III 型ＧＢＳを培養しかつ多糖類
莢膜を上澄ブロスから又は細菌細胞からジェニングス等
の一般的方法［キャナディアン・ジャーヤル、バイオケ
ミストリー、第５８巻、第１１２〜１２０頁（１９８
０）］により抽出して得られる。多糖類抽出物を、構
造： Ｓ1 （１→３）βｇａｌ（１→４）βＳ2 ［ここでＳ1 及びＳ2 は独立してグルコース、グルコサ
ミン又はＮ−アセチル−グルコサミンから選択される］
を特異的に切断するエンド−β−ガラクトシダーゼによ
って切断する。上記構造はIII 型ＧＢＳ多糖類莢膜の反
復単位１個につき一回発生し、かつ得られた切断生成物
は１個若しくはそれ以上の上記五糖類反復単位を有する
オリゴ糖である。
【００２２】酵素は、必須の特異的切断を触媒する酵素
を産生することが知られた細菌から得られる。この種の
好適な１種の細菌はフラボバクテリウム・ケラトリチク
スである。必須の特異的活性を有する酵素を産生すると
思われる他の細菌は、バクテロイデス・フラギリス（ B
acteroides fragilis）である。キタミカデス等［下
記］は、エッシエルキヤ・フロインディ（ Escherichia
freundii）、シュードモナス・ｓｐ．（ Pseudomonas
sp. ）及びココバチルス・ｓｐ．（ Cocobacillus s
p.）にも硫酸ケラタン上で誘発させれば必須のエンド−
β−ガラクトシダーゼ活性が存在することを報告してい
る［ナカガワ等、ジャーナル・バイオロジカル・ケミス
トリー、第２５０巻、第９１２〜９１７頁；及びヒラノ
等、コネクティブ・ティシュー・リサーチ、第２巻、第
１〜１０頁］。適するＦ．ケラトリチクスは日本国、大
阪在、醗酵研究所（ＩＦＯ）からＩＦＯ No.１４０８７
として得ることができる。エンド−β−ガラクトシダー
ゼを作成するための適する一般的方法は、キタミカド等
によりジャーナル・バイオロジカル・ケミストリー、第
２巻、第３９０６〜３９０９頁（１９８１）に示されて
いる。
【００２３】上記のように作成した抽出III 型ＧＢＳ多
糖類莢膜を緩衝酵素調製物に添加しかつ培養する（たと
えば、３７℃、４８時間）。切断後、オリゴ糖をゲル濾
過クロマトグラフィー、たとえばセファデックスＧ７５
（ファルマシア社）により分子量で分離し、かつ陰イオ
ン交換クロマトグラフィー、たとえば陰イオン交換高性
能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、モノＱ（ファ
ルマシア社）又はＱＡＥセファデックス（ファルマシア
社）によって精製する。
【００２４】約１〜５０個（特に好ましくは約２〜３０
個）の五糖類単位からなる精製されたオリゴ糖をクロマ
トグラフ群から選択し、次いでこれをワクチンに使用す
るための蛋白質に結合させる。この蛋白質は不活性キャ
リアーとすることができ、或いはそれ自身にて保護を与
えるよう、特に他の種類のＧＢＳ又は他の細菌に対し保
護を誘発することによりオリゴ糖で誘発される保護を補
完して保護を与えるよう選択することができる。非毒性
のジフテリヤ毒素同族体（ＣＲＭ １９７）を、インセ
ル等（１９８６）によりジャーナル・エキスペリメンタ
ル・メジスン、第１６３巻、第２６２頁及びアンデルセ
ン等、ジャーナル・クリニカル・インベスチゲーショ
ン、第７６巻、第５２頁（１９８５）に記載されたよう
に使用することもできる。使用しうる他のトキソイド
は、マサチューセッツ州、ジャマイカ・プレイン、サウ
スストリート在、マサチューセッツ州立ラボラトリーか
ら入手しうる破傷風毒素又は標準的ジフテリア毒素を包
含する。
【００２５】蛋白質−オリゴ糖結合体は、たとえばシュ
ワルツ及びグレーの一般的方法［アーキテクチャー・バ
イオケミカル・バイオフィジオロジー（１９７７）、第
１８１巻、第５４２頁］のようなカップリング反応によ
って得られ、この方法は還元糖を蛋白質へ直接に結合さ
せる。脱アミノ化によって生成されたオリゴ糖断片を、
シアノ硼水素化物を介してキャリアー蛋白質へ直接に結
合させることができる。III ＧＢＳの場合、蛋白質にお
ける窒素とオリゴ糖の脱アミノ化により生成された２，
５−アンヒドロマンノースにおけるアルデヒド基との間
の結合によって第２アミンが生成される。このアルデヒ
ドは、シアノ硼水素化物を用いる直接的カップリングに
よって得られる。
【００２６】得られたオリゴ糖−蛋白質結合体を、発熱
物質を含有しない塩水又は他の任意の生理学上許容しう
る無毒性ビヒクル若しくは媒体に懸濁させ、これらの媒
体は任意慣用の安定化剤又は他の添加剤を所望に応じて
含有することができる。抗原の濃度は臨界的でなく広範
囲に変化しうるが、多くの目的には１０〜１０００μｇ
／ｍl の範囲が便利かつ好適である。この形態におい
て、４℃にて長時間貯蔵する際に安定となり、さらにフ
ッド・アンド・ドラッグ・アドミニストレーション・レ
ジスレーション（第２１節、第６１０．１１〜６１０．
１３項）に記載されたような動物試験にかけた際無菌、
無毒かつ非発熱性である。上記塩水懸濁物の適する容量
（たとえば約０．５ｍl ）を投与して（たとえば皮下注
射により）、III ＧＢＳ保護を誘発させる。
【００２７】さらに、本発明は特に幼児又は汚染した成
人に使用される受働免疫法を特徴とし、この方法はオリ
ゴ糖−蛋白質結合体のワクチンをヒトに注射して高タイ
ターで抗体を発生せしめ、抗血清をヒトの血液から分離
し、かつ抗血清を分画して受働免疫に使用しうる抗体を
含んだγグロブリンフラクションを生成させる。受働免
疫のための供与体を作成するこの方法は、免疫化されて
いないヒト成人が極めて高レベルのタイプ特異性ＧＢＳ
抗体をその血清中に有するが、充分高いタイターのグロ
ブリンフラクションを受働免疫に使用すべく血漿を貯蔵
しうる個体を選択するには極めて多数の試料をスクリー
ニングする必要があるので有用である。免疫化されてな
い成人からの幾種かの貯蔵ヒトγグロブリンのロットを
抗−Ｉａ及びＩｃ型、抗−II型及び抗−III 型多糖類抗
体につき分析して、僅か５〜２０μｇ／ｍl の血清を含
有することが判明した。このような低タイターのグロブ
リンの静脈内注射による免疫化は、恐らく逆反応の危険
性を伴う多量の投与量を必要とする。
【００２８】受働免疫化には、上記結合多糖類ワクチン
でワクチン接種した選択個人からのヒト血清保存物を濃
縮しかつ常法により分画して、タイプ特異性抗体の大部
分及び充分高い活性を有するグロブリンフラクションを
与えることができ、この高免疫グロブリンはたとえば規
定濃度の塩水のような適当な生理学上許容しうるキャリ
アーにて静脈内又は筋肉内投与する際、０．３〜１ｍl
、好ましくは約０．５ｍl という少投与量にて有効で
ある。キャリアー中のグロブリンの濃度は５〜２０重量
％とすることができる。この高免疫グロブリンは、出産
前の妊娠した婦人、新生児又は免疫学的に汚染した個人
に投与して受働免疫又は治療を与えることができる。
【００２９】III. オリゴ糖抗体 一般に、オリゴ糖は細菌多糖類のエンド−β−ガラクト
シターゼ切断によって回収することができる。上記説明
はIII ＧＢＳオリゴ糖並びにワクチンにおけるその使用
に関するものであるが、さらにオリゴ糖はたとえば哺乳
動物にオリゴ糖−蛋白質結合体を注射しかつ得られた抗
体を回収することにより哺乳動物を処理して、実験哺乳
動物中に抗体を発生させるべく使用することもできる。
さらに、標準技術によってモノクローナル抗体を発生さ
せることもできる。得られる抗体は、たとえばＧＢＳ或
いは特にIII ＧＢＳに対する免疫分析に有用である。た
とえば、オリゴ糖に対する抗体を、当業界で知られた競
合若しくはサンドイッチ免疫分析のような免疫分析に使
用することもできる。
【００３０】
【実施例】以下の実施例によりオリゴ糖抗原、オリゴ糖
の分離方法、ワクチン及び受働免疫化法につき説明す
る。
【００３１】例１：エンド−β−ガラクトシダーゼの作
成 Ｆ．ケラトリチクスを１晩培養し、かつこれを使用して
改変トリプチカーゼペプトンブロス（ＢＢＬマイクロバ
イオロジー・システムス社、ミズリー州、コッケイスビ
ル在からの３％のトリプチカーゼペプトン）；０．１％
酵母抽出物（ジフコ・ラボラトリース社、ミシガン州、
デトロイト在）；０．２％ＮａＣl 、ｐＨ７．０に接種
した。このブロスを１８時間培養し（フランス国、ラフ
ィット在、ビオラフィッテ・ファンタ）、その間通気
（１５ ｌ／ｍｉｎ）、撹拌（１５０ｒｐｍ）、温度
（２５℃）及びｐＨ（７．０）を調節した。遠心分離に
よって細菌を除去し、そして上澄液を濃縮した（マサチ
ューセッツ州、ベッドフォード在、ペリコン・カセット
・システム、ミリポア・コーポレーション社）。固体の
（ＮＨ4 ）2 ＳＯ4 を７５％飽和まで添加しかつ溶液を
４℃にて１晩静置した。沈澱物を遠心分離によって除去
しかつ１０ｍl の酢酸ナトリウム（０．２ＭＮａＣl 、
ｐＨ６．０）に溶解させた。この溶液を５×９０ｃｍの
セファデックスＧ １００カラム（ニュージャージー
州、ピスカタウェイ在、ファルマシア・ファイン・ケミ
カルス社）に充填し、かつ同じ緩衝液を用い４℃で４０
ｍl ／ｈｒ．の速度にて溶出させた。活性フラクション
をエンド−β−ガラクトシダーゼ活性につき分析して同
定し、次いで貯蔵した。特に、これらフラクションを牛
角膜の硫酸ケラタン（ミズーリ州、セントルイス在、シ
グマ・ケミカル・カンパニー社）と共に３７℃にて１晩
培養した。還元糖の生成を、パーク及びジョンソン、ジ
ャーナル・バイオロジカル・ケミストリー、第１８１
巻、第１４９〜１５１頁（１９４９）の一般的方法によ
り測定した。
【００３２】貯蔵した活性フラクションを透析し、凍結
乾燥し、かつ緩衝液（５０ｍＭ酢酸ナトリウム、２ｍＭ
ＣａＣl 2 、ｐＨ６．０）に溶解させた。この緩衝し
た酵素調製物を、上半分にＤＥＡＥセファセル（ファル
マシア社）を含有しかつ下半分にビオレックス７０（ニ
ューヨーク州、ロックビル・センター在、ビオラド・ラ
ボラトリース社）を含有する２．５×１４ｃｍのカラム
に充填した。この酵素を上記緩衝液２５０ｍl で溶出さ
せた。残留した結合蛋白質を１．０Ｍ ＮａＣl で溶出
させ、かつ活性貯蔵フラクションを１０ｍＭ酢酸ナトリ
ウム、２ｍＭＣａＣl2（ｐＨ７．０）で透析しかつ凍結
乾燥した。
【００３３】例２：多糖類切断 III 型ＧＢＳ多糖類を上記ジェニングスの一般的技術
（１９８０）によって抽出した。ＤＥＡＥセファセル／
ビオレックス７０カラムの試験から得られた凍結乾燥し
たエンド−β−ガラクトシダーゼ調製物を１０ｍl の１
０ｍＭ酢酸ナトリウム、２ｍＭ塩化カルシウム（ｐＨ
７．０）に溶解させ、かつ２ ｌの同じ緩衝液に対し４
℃にて浴を１回交換して１晩透析した。２０ｍｇの精製
されたIII 型ＧＢＳ莢膜多糖類を酵素調製物に添加し
た。この混合物を濾過滅菌し、かつ撹拌しながら３７℃
で４８時間培養した。
【００３４】例３：オリゴ糖の精製及び特性化 切断後、オリゴ糖を１２，０００〜１４，０００ダルト
ンの孔径の膜（カリホルニア州、ロスアンゼルス在、ス
ペクトラム・メジカル・インダストリーズ社）を介して
の水に対する透析により大分子量と小分子量との貯蔵物
に分離した。１個（五糖類）及び２個（十糖類）の反復
単位に対応するオリゴ糖を陰イオン交換クロマトグラフ
ィーによって精製した。少量のオリゴ糖（１ｍｇ若しく
はそれ以下）は、陰イオン交換高性能液体クロマトグラ
フィー（ＨＰＬＣ）により精製することができる。５０
０μｇの切断混合物（小分子量貯蔵物）を５×５０ｍｍ
のモノＱカラム（ファルマシア社）に充填し、かつ１個
及び２個の反復単位のオリゴ糖を２０ｍＭトリスＨＣl
緩衝液（ｐＨ７．２）によって平等に溶出させた。より
大きいオリゴ糖は、より高い塩濃度で溶出させることが
できる。多量のオリゴ糖を精製するため、ＱＡＥセファ
デックスＡ５０（ファルマシア社）を充填した１．２×
１０ｃｍのカラムを用いた。２〜８ｍｇの試料を、２０
ｍＭ Ｎ−メチルジエタノールアミンアセテート（ｐＨ
９．６）の出発緩衝液にてこのカラムに充填した。カラ
ムを３０ｍl の出発緩衝液で１ｍl ／ｍｉｎ．の速度に
て洗浄し、次いで単一反復単位のオリゴ糖を５０ｍｌの
１５ｍＭ酢酸ナトリウムを含有する出発緩衝液で溶出さ
せた。２ｍl のフラクションを集め、１Ｍ酢酸で中和し
かつ薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によって分析し
た。単一反復単位のオリゴ糖を含有するフラクションを
集め、凍結乾燥し、２ｍｌの水に溶解させ、かつセファ
デックスＧ１５（ファルマシア社）を含有する１．６×
２５ｃｍのカラムで脱塩した。
【００３５】主たる切断生成物は四糖類と十糖類との標
準間で移動するバンドに対応し、図１の五糖類単位につ
き予測される物質に適合した分子寸法を有する。このバ
ンドのジフェニルアミン及びレゾルシノール染色はシア
リル化された糖類に一致した。メチル化分析は、この構
造が完全に五糖類反復単位であることを確認した。
【００３６】１個及び２個の反復単位オリゴ糖を陰イオ
ン交換クロマトグラフィーにより分析した。陰イオン交
換ＨＰＬＣは、少量のオリゴ糖（１〜２ｍｇ若しくはそ
れ以下）を精製するための迅速かつ便利な方法である。
単一反復単位のオリゴ糖はボイド空間に溶出し、２個反
復単位のオリゴ糖は平等相中にその後に溶出する。より
大きいオリゴ糖又は天然多糖類は平等相に保持される
が、０．５Ｍ塩化ナトリウムによりこのカラムから容易
に溶出される。この方法を用いて、放射性抗体結合分析
（ＲＡＢＡ）研究に使用するためのトリチウム化された
１個及び２個の反復単位のオリゴ糖を精製することがで
きる［シフェルレ（１９８５）、ジャーナル・イミュノ
ロジー、第１３５巻、第４１６４頁参照］。多量の単一
反復単位のオリゴ糖を精製するため、開放陰イオン交換
カラムを用いて、より大きい結合容量を与えることがで
きる。このＱＡＥセファデックスＡ５０カラムを用い
て、単一反復単位並びにそれより大きいオリゴ糖を出発
緩衝液に保持した。より大きいオリゴ糖を含まない単一
反復単位を、１５ｍＭ酢酸ナトリウムを含有する出発緩
衝液で溶出させた。より大きいオリゴ糖は結合状態に維
持され、かつ塩濃度を増加させて溶出することができ
る。２０ｍｇのIII 型天然多糖類の切断物から、６ｍｇ
の精製された単一反復単位のオリゴ糖が得られた。ＴＬ
Ｃ上にて単一反復単位から離間移動する少量バンドに対
応するオリゴ糖も、陰イオン交換カラムにより若干多量
に維持された。調製試験では完全分離が達成されない
が、このように精製した単一反復単位のオリゴ糖はＴＬ
Ｃ及びメチル化分析により純度９５％であると推定され
る。さらに、より大きいオリゴ糖をクロマトグラフィ
ー、たとえばセファデックスＧ７５カラムによって分画
した。
【００３７】例４：オリゴ糖に対する結合分析 クロマトグラム結合分析を用いて、天然多糖類に指向し
た抗体を結合するＴＬＣにより可使化されるオリゴ糖バ
ンドの能力を直接に検査した。単一反復単位のバンドに
結合する抗体が明らかに証明された。この分析は定量的
ではないが、放射能写真におけるバンドの相対強度から
天然多糖類はより効率的に抗体を結合することが明らか
である。この分析は天然III 型多糖類につき極めて特異
性であり、交差反応は脱シアリル化されたコア多糖類、
Ｂ群多糖類或いは他のＧＢＳ血清型からの莢膜多糖類に
ついては見られない。
【００３８】上記オリゴ糖抗原を次いで上記のように蛋
白質に結合させ、かつ発熱物質を含まない塩水溶液に上
記と同様に懸濁させてワクチンを作成した。
【００３９】単一反復単位の五糖類（図１）は放射性抗
体結合分析、阻止ＴＬＣ結合分析及び直接的放射性抗体
結合分析を用いて弱い抗原性であった。オリゴ糖寸法を
２反復単位まで増大すると、抗原結合において８倍の増
加を示した。特に好ましくは、免疫原は２〜５０単位を
有する。
【００４０】IV. ＧＢＳ蛋白質抗原 抗原性ＧＢＳ Ｃ蛋白質をＩｃ型ＧＢＳの培養上澄液か
ら次の例に示すように分離した。この蛋白質はＰ１０Ｇ
ＢＳ蛋白質フラクション、すなわち１０，０００〜３
０，０００のＭＷの蛋白質を含むフラクションに対する
抗血清（たとえばマウス抗血清）に対し免疫学的に反応
性である。精製された蛋白質は、Ｉｂ型ＧＢＳでの処理
に対しマウスを保護するウサギ抗血清を発生する。この
保護能力は、ＧＢＳ多糖類と共に培養しても影響されな
い。
【００４１】例５：蛋白質抗原の産生及び精製 Ｉａ／ｃ型ＧＢＳ（たとえばニューヨーク州、チャニン
グ・ラボラトリー・ストレインＡ９０９、ロックフェラ
ー大学、ニューヨーク、ＡＴＣＣ２７５９１）を、トッ
ド・ヘベット・ブロス（ミシガン州、デトロイト在、ジ
フコ・ラボラトリーズ社、ＴＨＢ）の透析物における後
期対数増殖期まで培養し、次いでレビー等、Ｊ．Ｉｎｆ
ｅｃｔ．Ｄｉｓ、第１４９巻、第８５１〜８６８頁（１
９８４）の一般的方法により０．１５Ｍ燐酸ナトリウム
緩衝液（ｐＨ７．４）における０．３％ホルマリンに再
懸濁させた。
【００４２】Ｉｃ型の対数増殖期の培養物１ ｌを１５
ｌのＴＨＢの透析物（１０，０００ＭＷの排析膜で透
析）に添加し、１０％グルコースを補添し、かつ滴定に
より中性ｐＨを維持しながら醗酵装置（ニュージャジー
州、プリンストン在、ＬＳＬビオラフィッテ・インコー
ポレーション社、ビオラフィッテＢＬ２０．２型）で後
期対数増殖期まで増殖させた。１０，０００ｇにてペレ
ット化させることにより細菌を除去した後、上澄液を１
０，０００ＭＷの排析膜を備えたペリコン装置（マサチ
ューセッツ州、ベッドフォード在、ミリボア・コーポレ
ーション社）にて１００ｍｌまで濃縮し、徹底的にＨ2
Ｏで透析しかつ−２０℃にて凍結させた。
【００４３】培養上澄液を、限外濾過により大凡の分子
寸法によって分離した。２種のフラクションが得られ、
一方のフラクションはＰＭ３０膜（Ｐ３０；３０，００
０ＭＷより大）によって保持されかつ他方のフラクショ
ンはＰＭ１０膜により保持されるがＰＭ３０では保持さ
れない（Ｐ１０；１０，０００ＭＷより大かつ３０，０
００ＭＷより小）。Ｐ１０を０．１５Ｍ ＮａＣｌを含
む０．０５Ｍ燐酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）にて
透析し、かつセファデックスＧ−７５カラム（１．６×
８２ｃｍ）（ファルマシア社）で分画した。これらフラ
クションの蛋白質含有量をラウリー分析［ジャーナル・
バイオロジカル・ケミストリー、第１９３巻、第２６５
〜２７５頁（１９５１）］にて７５０ｎｍにおける吸収
により監視した。
【００４４】例６：ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びウエスタンブ
ロット 試料をレムリの方法［ネイチャー、第２２７巻、第６８
０〜６８４頁（１９７０）］にしたがってＳＤＳ−ＰＡ
ＧＥにより分析した。蛋白質の分子量に応じて、５〜１
５％又は１０〜２０％のいずれかの濃度勾配のゲルを用
いた。電気泳動用の試料を、０．１Ｍトリス（ｐＨ８）
と１％ＳＤＳと４Ｍ尿素と６０ｍＭヨードアセタミドと
を最終濃度として含有する緩衝液にて希釈した。これら
試料の還元を必要とする場合は、５０ｍＭジチオスレイ
トールを緩衝液に含ませた。１００μｇの蛋白質を含有
する１００μｌの試料を各穴部に入れた。電気泳動の
後、これら蛋白質をクーマシー・ブリリアント青染色に
よって可視化させた。
【００４５】免疫反応性抗原を同定するため、ウエスタ
ンブロットを用いた。蛋白質を先ず最初に電気泳動にか
け、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを０．０２Ｍトリス緩衝液
（ｐＨ８．５）と０．１５Ｍグリシン及び２０％メタノ
ールとで構成された緩衝液Ａで洗浄した。これら蛋白質
をニトロセルロースシート（ニューハンプシャー州、キ
ーン在、シュライヒャ・アンド・シュエル社）に移して
緩衝液Ａで電気泳動し（１５０ｍＡ、２０ｈ）、かつ
０．０１Ｍトリス緩衝液（ｐＨ７．４）と０．５ＭＮａ
Ｃｌ及び０．１％ブリッグ５８（緩衝液Ｂ）で洗浄し
た。次いで、このシートを抗血清と共に２２℃にて２時
間培養し、かつ緩衝液Ｂで洗浄した。Ｉ125蛋白質Ａと
共に２２℃にて３０分間培養した後、このシートを緩衝
液Ｂで洗浄し、乾燥プロットし、かつコダックＸＡＲ５
番フィルムに露出した。
【００４６】例７：マウス保護試験 体重２２〜２４ｇの異系交配された雄ＣＤ−１マウス
を、チャールス・リバー・ブリージング・ラボラトリー
ス（マサチューセッツ州、ウィルミントン在）から入手
した。このマウスから得られた血清は、ＲＡＢＡにより
試験してＩａ／ｃ型ＧＢＳ多糖類抗原に対する検出可能
な抗体を含有しなかった。各実験群は５〜１０匹の動物
を含んだ。マウス保護試験のため、これらマウスに１ｍ
l のマウス若しくはウサギ抗血清を腹腔内注射し、かつ
２４時間後にＩｂ／ｃ型ＧＢＳの１×１０6 ＣＦＵを腹
腔内接種した。比較として、予備免疫ウサギ若しくはマ
ウス血清を用いた。これらのマウスを２４時間毎に検査
し、生存するマウスの個数を細菌接種してから４８時間
後に計算した。抗血清からの保護抗体を吸収するため、
１ｍl 当り１ｍｇの濃度にてＧＢＳ多糖類又は蛋白質フ
ラクションを用いた。１ｍl の抗血清及び１ｍl の多糖
類若しくは蛋白質を３７℃にて２時間培養し、次いで４
℃にて１晩培養した。次いで、この混合物を１３，００
０ｇにて３分間ペレット化させ、かつ上澄液を保護研究
用として０．１５Ｍ ＮａＣｌで希釈した。
【００４７】カラムクロマトグラフィーによって部分精
製した後、１４，０００ＭＷの蛋白質を調製用ＳＤＳ−
ＰＡＧＥゲルから再分離し、かつこれを用いウサギ中に
抗血清を発生させた。マウス保護試験において、このウ
サギ抗血清はＩａ／ｃ型ＧＢＳ接種に対しマウスを８９
％保護した。
【００４８】Ｐ１０フラクションが異質ＧＢＳ株に対し
マウス保護抗体を発生しうるかどうかを検討するため、
マウスをＩａ／ｃ型Ｐ１０フラクションで免疫化した。
次いで、免疫後の抗血清を集め、かつＩｂ型ＧＢＳの接
種に対しマウスを保護する能力につき検査した。これら
マウスにＰ１０フラクションに対する保存マウス抗血清
の種々の希釈物を腹腔内注射し、その２４時間後にＩｂ
／ｃ型株を接種した。血清の保護能力は、１：８０の血
清希釈率にて消失し始めた。したがって、これらの実験
には１：４０の最適希釈率にて血清を使用した。マウス
保護試験において、この免疫血清はＩｂ型株での接種に
対し、同じ希釈率における正常なマウス血清と比較し
て、マウスを保護した（Ｐ＜０．００１）。この保存血
清は、ＲＡＢＡで測定してＩａ型多糖類に対する検出可
能な抗体を含有しなかった。さらに、Ｉａ型若しくはＩ
ｂ型多糖類を有する保存抗血清の吸収は、保護レベルを
顕著には変化させなかった。Ｉｃ型からのＰ１０フラク
ションに対するマウス抗血清の保護効果はマウスに抗体
を発生する非莢膜抗原を含有し、これはＩｂ型ＧＢＳで
の接種に対しマウスを受働保護した。
【００４９】特に、Ｉｃ型ＧＢＳからのＳＤＳ−ＰＡＧ
Ｅ溶出された１４，０００ＭＷの蛋白質に対するウサギ
抗血清を、次いでマウス保護試験に使用した。マウスに
抗血清を腹腔内注射し、かつ２４時間後にＩｂ型ＧＢＳ
を接種した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ溶出された１４，０００
ＭＷの蛋白質に対し発生した抗血清は、１：５及び１：
１０の希釈率にてマウスで保護を示した。ＳＤＳ−ＰＡ
ＧＥ溶出された１４，０００ＭＷの蛋白質に対し発生し
た抗血清と正常なウサギ血清との間の差は顕著であっ
た。その他の具体例については特許請求の範囲に示す。
【図面の簡単な説明】
【図１】III ＧＢＳ莢膜多糖類の反復五糖類の図面であ
る。
フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｐ 21/08 // Ｃ１２Ｐ 19/04 Ｃ１２Ｐ 19/04 Ｃ (Ｃ１２Ｐ 21/00 Ｃ１２Ｒ 1:46） (Ｃ１２Ｐ 19/04 Ｃ１２Ｒ 1:46） (72)発明者 ジェニングズ，ハロルド ジェイ. カナダ国 ケイ１ジェイ ６ジー６ オン タリオ，グロスター，ウッドグレン クレ セント 2049 (72)発明者 レビー，ナンシー ジェイ. アメリカ合衆国 02159 マサチューセッ ツ，ニュートン センター，コモンウェル ス アベニュー 943 (72)発明者 ウェセルズ，マイケル アール. アメリカ合衆国 02146 マサチューセッ ツ，ブルックライン，スターンズ ロード 75

Claims (3)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 Ｉｃ型Ｂ群のストレプトコッカス細菌に
    おける実質的に精製されたトリプシン耐性のＣ表面蛋白
    質において、Ｉｂ／ｃ型Ｂ群及びＩａ／ｃ型Ｂ群のスト
    レプトコッカス細菌に対し保護を与え、約14,000の分子
    量を有し、Ｂ群のストレプトコッカス細菌多糖類に対し
    非交差免疫反応性であり、Ｉｂ／ｃ型Ｂ群のストレプト
    コッカス細菌に対し交差免疫性であることを特徴とする
    蛋白質。
  2. 【請求項２】 Ｉａ／ｃ型Ｂ群のストレプトコッカス細
    菌に対し保護を与えるワクチンにおいて、医薬上許容し
    得るビヒクルと請求項１に記載の蛋白質又はその免疫決
    定基を含む断片からなる免疫原とを含み、前記蛋白質若
    しくは断片が必要に応じてキャリアーに結合されてなる
    ワクチン。
  3. 【請求項３】 哺乳動物を請求項２に記載のワクチンで
    免疫化し且つ個体からγグロブリンを回収することによ
    り生成されてなる、ＧＢＳに対し受動保護を与え得るγ
    グロブリンフラクション。
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Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5648241A (en) * 1989-09-15 1997-07-15 The General Hospital Corporation Conjugate vaccine against group B streptococcus
IL95578A (en) * 1989-09-15 1998-08-16 Gen Hospital Corp A vaccine made from polysaccharide and protein
JPH05502157A (ja) * 1989-09-18 1993-04-22 ブリガム アンド ウィメンズ ホスピタル グループｂ連鎖球菌３型莢膜オリゴ糖の酵素学的産生及び回収
CA2059692C (en) * 1991-01-28 2004-11-16 Peter J. Kniskern Pneumoccoccal polysaccharide conjugate vaccine
CA2059693C (en) * 1991-01-28 2003-08-19 Peter J. Kniskern Polysaccharide antigens from streptococcus pneumoniae
WO1992016232A1 (en) * 1991-03-12 1992-10-01 The United States Of America, As Represented By The Secretary, U.S. Department Of Commerce Polysaccharide-protein conjugates
FR2682388B1 (fr) * 1991-10-10 1995-06-09 Pasteur Merieux Serums Vacc Procede de preparation d'un oligoside par depolymerisation d'un polyoside issu d'un agent pathogene, oligoside ainsi obtenu et son utilisation notamment comme agent vaccinal.
AU690525B2 (en) * 1992-09-24 1998-04-30 Brigham And Women's Hospital Group B streptococcus type II and type V polysaccharide-protein conjugate vaccines
ZA937034B (en) * 1992-09-24 1995-06-23 Brigham & Womens Hospital Group B streptococcus type II and type V polysaccharide-protein conjugate vaccines
IL107458A0 (en) * 1992-11-02 1994-02-27 Gen Hospital Corp Conjugate vaccine against group b streptococcus
AU722078B2 (en) * 1992-11-02 2000-07-20 Brigham And Women's Hospital Conjugate vaccine against group B Streptococcus
ES2141213T3 (es) * 1994-08-19 2000-03-16 Nestle Sa Polisacarido ramificado, microorganismo que lo produce y composiciones que lo contienen.
US6284884B1 (en) * 1995-06-07 2001-09-04 North American Vaccine, Inc. Antigenic group B streptococcus type II and type III polysaccharide fragments having a 2,5-anhydro-D-mannose terminal structure and conjugate vaccine thereof
KR19990007777A (ko) * 1995-06-07 1999-01-25 듀크두플레시스 면역성 및 면역자극성 올리고당 조성물 및 이를 제조하고 이용하는 방법
US5866132A (en) * 1995-06-07 1999-02-02 Alberta Research Council Immunogenic oligosaccharide compositions
US5695768A (en) * 1995-06-07 1997-12-09 Alberta Research Council Immunostimulating activity of Streptococcus pneumoniae serotype 8 oligosaccharides
CA2305891A1 (en) * 1997-10-17 1999-04-29 Societe Des Produits Nestle S.A. New species of lactic acid bacterium
JP5689064B2 (ja) * 2008-10-27 2015-03-25 ノバルティス アーゲー 精製方法
CN115572716B (zh) * 2022-09-30 2023-06-16 云南沃森生物技术股份有限公司 抗iii型b群链球菌荚膜多糖单克隆抗体及杂交瘤细胞株

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4207414A (en) * 1978-08-16 1980-06-10 President And Fellows Of Harvard College Polysaccharide antigens
US4413057A (en) * 1980-04-14 1983-11-01 Merck & Co., Inc. Group B streptococcal capsular polysaccharides
US4356263A (en) * 1980-06-09 1982-10-26 President And Fellows Of Harvard College Method of making a polysaccharide vaccine

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