JP2754000B2 - 細菌抗原、抗体、ワクチン及びその製造方法 - Google Patents

細菌抗原、抗体、ワクチン及びその製造方法

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Description

【発明の詳細な説明】 発明の背景 本発明は、Ｂ群のストレプトコッカス細菌の免疫決定
子を有する抗原、これら細菌に対し保護するワクチン、
この種のワクチンの製造方法、並びに細菌多糖類からの
オリゴ糖の製造方法に関するものである。本明細書に使
用するＢ群のストレプトコッカス（すなわちGBS）細菌
という用語は、特にランスフィールド、ジャーナル・エ
キスペリメンタル・メジスン、第108巻、第329〜341頁
（1938）、並びにＢ群の血清型を特性化するその後の研
究、たとえばラッセル−ジョンズ、ジャーナル・エキス
ペリメンタル・メジスン、第160巻、第1476頁（1984）
を参照して当業者により理解されているように用いられ
る。特にこの用語は、分類学的にストレプトコッカス・
アガラクチア（Streptococcus agalactiae）と命名され
た細菌を包含する。 GBSは、幼児における菌血症及び（又は）脳膜炎、並
びに成人における感染症に対する認められた病因学的薬
剤である［ベーカー、「Ｂ群のストレプトコッカス感
染」、アドバンシス・イン・インターナル・メジスン、
第25巻、第475〜500頁（1980）］。したがって、GBS感
染を診断するための迅速かつ明確な分析法並びに特に幼
児及び汚染された個人におけるGBSに対する保護の発生
方法を開発することが重要である。 GBSカプセル状多糖類は、GBS毒性及び免疫に対し重要
であることが知られている［ベーカー、上記］。さら
に、認められたGBS型及び亜型は化学的に相関するが抗
原的には相違したカプセル状多糖類を有し、これら多糖
類はガラクトトース、グルコース、Ｎ−アセチルグルコ
サミン及びＮ−アセチル−ノイラミン（シアリン）酸で
構成された反復構造を有する［ベーカー、上記］。III
型GBSカプセル状多糖類は、第１図に示したような分岐
した五糖類の反復単位で構成された骨格を有する［ジェ
ニングス等、キャナディアン・ジャーナル・バイオケミ
ストリー、第58巻、第112〜120頁（1980）］。 III型GBS多糖類に関する１つの研究は、天然の免疫決
定子部位が側鎖−骨格の接合部に位置することを示唆し
ている［ジェニングス等、バイオケミストリー、第20
巻、第4511〜4518頁（1981）］。側鎖の末端Ｎ−アセチ
ル−ノイラミン酸残基の存在は、免疫決定子の発現に対
し臨界的であると報告されている。 さらに、GBS蛋白免疫性の研究も報告されている。ラ
ンスフィールド等［ジャーナル・エキスペリメンタル・
メジスン、第142巻、第165〜179頁（1975）］は、GBSの
いわゆるＣ蛋白は免疫原として存在すれば全生物に対し
保護抗体を誘発することができると報告している。「Ｃ
蛋白」という命名は、ヘンリックセン等によりインター
ナショナル・ジャーナル・オブ・システマティック・バ
イテリオロジー、第34巻、第500頁（1984）に定義され
ているように用いられ、この用語は従来Ibc蛋白と命名
された蛋白を包含する。 Ｃ蛋白の分子に対する研究が示すところでは、これら
の物質は種々の分子量を有する蛋白の複雑な群を構成す
る［ウイルキンソン等、インフェクション・イミュノロ
ジー、第４巻、第596〜604頁（1971）：ベバンガー等、
アクタ・パソロジカル・マイクロバイオロジー・スカン
ジナビヤ・セクションＢ、第87巻、第51〜54頁（197
9）；ラッセル−ジョーンズ等、ジャーナル・エキスペ
リメンタル・メジスン、第160巻、第1476〜1484頁（198
4）；ベバンガー等、アクタ・パソロジカル・マイクロ
バイオロジー・スカンジナビア・セクションＢ、第89
巻、第205〜209頁（1981）］。 ウイルキンソン等は、全IC型GBSの熱酸抽出物か種々
異なる分子寸法（ポリアクリルアミドゲル電気泳動によ
り測定）を有しかつIc型抗血清に対し寒天ゲルにおいて
血清学的反応性を有する13種の蛋白を与えることを開示
している。ベバンガー等（1979）は、９種のトリプシン
感受性蛋白と５種のトリプシン耐性であるがペプチン感
受性の蛋白とを含有するGBS酸抽出物を開示している。
ベバンガー等（1981）は、部分精製された酸抽出蛋白の
免疫性を開示している。ラッセル−ジョーンズ等は、2
0,000〜130,000の範囲で分子量が変化する30種までの蛋
白を含有する抽出物を開示しており、130kdの蛋白が主
体である。さらにラッル−ジョーンズ等は、多数の蛋白
が単一のモノクローナル抗体に対し免疫（ウエスタン）
ブロットにより反応したと報告しており、このことは或
る種の蛋白が他の蛋白の分解生成物であったことを示唆
している。他のモノクローナル抗体を用いて、130,000M
Wの蛋白及び10,000〜120,000MWの範囲の12種の他の蛋白
は共通のエピトープを有すると思われる。 インセル及びアンデルセン、ジャーナル・エキスペリ
メンタル・メジスン、第163巻、第262頁（1986）は、ヘ
モフィルス・インフレンザ（Haemophilus influenzae）
カプセル状多糖類を蛋白キャリヤに結合させて、このカ
プセルをより胸腺依存性の免疫原に変換する試みを開示
している。 発明の要点 今回、III型Ｂ群のストレプトコッカス（III−GBS）
多糖類カプセルの反復五糖類単位（及び単一の単位だけ
でも）のオリゴマーが抗原性を示すことを突き止めた。
この単位を含む抗原、特に反復単位を有する抗原は、II
I−GBSワクチンの成分として使用することができる。し
たがって、本発明の一面は、III型Ｂ群のストレプトコ
ッカス（IIIGBS）細菌に対し選択的免疫反応性である抗
体を生成することができかつ次式：［式中、ｎ＝１〜50であり、GlcNAcpはＮ−アセチル−
グルコサミン（ピラノース型）を示し、Galpはガラクト
ース（ピラノース型）を示し、Glcpはグルコース（ピラ
ノース型）を示しかつα−Ｄ−NeuNAcはＮ−アセチル−
ノイラミン（シアリン）酸を示す］ を有する精製オリゴ糖からなる抗原を特徴とする。 「精製」という用語は、オリゴ糖と共に天然に存在す
る種々の蛋白、脂質及び炭水化物成分から実質的に分離
されることを意味する。特に、精製オリゴ糖は完全IIIG
BS多糖類カプセル又は、100,000以上の分子量を有する
その断片を実質的に含まない。微量の外来成分が精製オ
リゴ糖に存在したとしても、この精製物質をワクチンに
使用したり或いは抗原として使用することを妨げない。
「精製」という用語は、人工的な合成を伴なう合成オリ
ゴ糖調製物を排除することを意図せず、またこの用語は
調製物が再現性のあるオリゴ糖特性データ、たとえば分
子量、糖残部含有量、糖結合、クロマトグラ反応及び免
疫学的挙動を示す限り若干の不純物を含むような調製物
を排除することを意味するものでもない。 第二面において本発明は、IIIGBSに対し保護を示すこ
とができかつ医薬上許容しうるベヒクルと必要に応じキ
ャリヤに結合された上記抗原とからなるワクチンを特徴
とする。 本発明の第三の面は上記抗原の製造方法を特徴とし、
この方法は：（１）III−GBS細菌を適当な培地で培養
し；（２）培地又は細菌細胞から多糖類を回収し；
（３）この多糖類を結合S1（１→３）−β−gal（１→
４）S2［式中、S1及びS2は独立してグルコース、グルコ
サミン又はＮ−アセチル−グルコサミンから選択され
る］の開裂につき特異性であるエンド−β−ガラクトシ
ダーゼによって切断し；かつ（５）培地又は細菌からオ
リゴ糖抗原を回収することからなっている。必要に応
じ、オリゴ糖は下記するようにキャリヤに結合される。 前記３種の局面の好適具体例において、オリゴ糖抗原
は、上記結合に対し特異性のエンド−β−ガラクトシダ
ーゼを用いてIIIGBSカプセル状多糖類を酵素加水分解し
て生成される。この種の１種のエンド−β−ガラクトシ
ダーゼはフラボバクテリウム・ケラトリチクス（Flavob
acterium keratolyticus）に見出される。さらに好まし
くは、オリゴ糖は細菌免疫決定子部位を有するたとえば
蛋白、特に細菌トキソイド又は細菌表面蛋白のようなキ
ャリヤに共有結合される（たとえば第２アミン結合を介
する）。 第四の面において、一般に本発明はさらに上記結合を
有する細菌多糖類の酵素開裂を特徴とし、すなわち精製
オリゴ糖の製造方法に関し、この方法は特に表面多糖類
（たとえば多糖類カプセル若しくは膜）を有する細菌を
培養しかつこの多糖類を抽出し、次いでこれを上記酵素
で切断し、さらにオリゴ糖を回収する。好ましくは、細
菌はグラム陽性菌、たとえばIIIGBSである。或いは、こ
の細菌はたとえば14型ストレプトコッカス・ニューモニ
ア（Streptococcus pneumoniae）（たとえばATCCNo.631
4）のような表面カプセル状多糖類を有する菌種とする
ことができる。 第五の面において、本発明はIa/c型Ｂ群のストレプト
コッカスの実質的に精製されたトリプシン耐性のＣ表面
蛋白を特徴とし、この蛋白は約14,000の分子量を有しか
つＢ群のストレプトコッカス細菌多糖類に対し非交差免
疫反応性であるが、Ia/c型GBSに対し交差免疫性を有す
る。他の局面において、上記蛋白はIa/c型（及びIb/c
型）GBSに対し保護を示すワクチンに使用され、このワ
クチンは蛋白（必要に応じ、たとえば上記したIII型GBS
オリゴ糖のようなオリゴ糖に結合される）と医薬上許容
しうるキャリヤとからなっている。得られる結合体はGB
Sに対し広範な保護を与え、IIIGBS及びＣ蛋白を有するG
BSに対し保護を示す。 さらに他の局面において、本発明はGBSに対し受働保
護を与えうるγグロブリンフラクションを特徴とし、こ
のフラクションは哺乳動物を上記ワクチンの１種で免疫
化することにより生成される。次いで、このフラクショ
ンを個人に投与して、GBS感染に対し保護を与えるか又
は進行中の感染を処置する。 最後に、本発明は抗GBS抗体に関する試料の分析方法
を特徴とし、この方法は試料へ上記オリゴ糖又は蛋白抗
原を添加し、次いで免疫複合体の生成を検出することか
らなっている。或いは、試料をGBS免疫決定子の存在に
つき分析し、その際オリゴ糖若しくは蛋白抗原に対する
抗体を生成させ、この抗体を試料に添加し、かつ免疫複
合体の生成を検出する。 骨格グリコシド結合の酵素選択加水分解は、単純な酸
加水分解よりも優れている。何故なら、後者の技術は側
鎖シアリン酸残基の損失を伴い、かつ結合を非選択的に
切断して免疫性の減少した不均質混合物を生成するから
である。これに対し、酵素切断法はシアリン酸残基を保
持し、かつ骨格反復単位につき一旦生ずるとgal−β１
−４−glc結合においてのみ骨格の切断をもたらす。 本発明の他の特徴及び利点は、好適具体例に関する以
下の説明から明らかとなるであろう。 好適具体例の説明 以下、本発明の好適具体例につき説明し、先ず最初に
図面につき簡単に説明する。 I.図面 第１図はIII型GBSカプセル状多糖類の反復五糖類の図
面である。 II.III型GBS抗原及びワクチン A.オリゴ糖 上記特定の五糖類は、III型GBSを培養しかつ多糖類カ
プセルを上澄ブロスから又は細菌細胞からジェニングス
等の一般的方法［キャナディアン・ジャーヤル・バイオ
ケミストリー、第58巻、第112〜120頁（1980）］により
抽出して得られる。多糖類抽出物を、構造： S1（１→３）βgal（１→４）βS2 ［ここでS1及びS2は独立してグルコース、グルコサミン
又はＮ−アセチル−グルコサミンから選択される］を特
異的に切断するエンド−β−ガラクトシダーゼによって
切断する。上記構造はIII型GBS多糖類カプセルの反復単
位１個につき一回発生し、かつ得られた切断生成物は１
個若しくはそれ以上の上記五糖類反復単位を有するオリ
ゴ糖である。 酵素は、必須の特異的切断を触媒する酵素を産生する
ことが知られた細菌から得られる。この種の好適な１種
の細菌はフラボバクテリウム・ケラトリチクスである。
必須の特異的活性を有する酵素を産生すると思われる他
の細菌は、バクテロイデス・フラギリス（Bacteroides
fragilis）である。キタミカデス等［下記］は、エッシ
エルキヤ・フロインディ（Escherichia freundii）、シ
ュードモナス・sp.（Ps−eudomonas sp.）及びココバチ
ルス・sp.（Cocobacillus sp.）にも硫酸ケラタン上で
誘発させれば必須のエンド−β−ガラクトシダーゼ活性
が存在することを報告している［ナカガワ等、ジャーナ
ル・バイオロジカル・ケミストリー、第250巻、第912〜
917頁；及びヒラノ等、コネクティブ・ティシュー・リ
サーチ、第２巻、第１〜10頁］。適するF.ケラトリチク
スは日本国、大阪在、醗酵研究所（IFO）からIFO No.14
087として得ることができる。エンド−β−ガラクトシ
ダーゼを作成するための適する一般的方法は、キタミカ
ド等によりジャーナル・バイオロジカル・ケミストリ
ー、第２巻、第3906〜3909頁（1981）に示されている。 上記のように作成した抽出III型GBS多糖類カプセルを
緩衝酵素調製物に添加しかつ培養する（たとえば、37
℃、48時間）。切断後、オリゴ糖をゲル濾過クロマトグ
ラフィー、たとえばセファデックスG75（ファルマシア
社）により分子量で分離し、かつ陰イオン交換クロマト
グラフィー、たとえば陰イオン交換高性能液体クロマト
グラフィー（HPLC）、モノＱ（ファルマシア社）又はQA
Eセファデックス（ファルマシア社）によって精製す
る。 約１〜50個（特に好ましくは約２〜30個）の五糖類単
位からなる精製されたオリゴ糖をクロマトグラフ群から
選択し、次いでこれをワクチンに使用するための蛋白に
結合させる。この蛋白は不活性キャリヤとすることがで
き、或いはそれ自身にて保護を与えるよう、特に他の種
類のGBS又は他の細菌に対し保護を誘発することにより
オリゴ糖で誘発される保護を補完して保護を与えるよう
選択することができる。非毒性のジフテリヤ毒素同族体
（CRM197）を、インセル等（1986）によりジャーナル・
エキスペリメンタル・メジスン、第163巻、第262頁及び
アンデルセン等、ジャーナル・クリニカル・インベスチ
ゲーション、第76巻、第52頁（1985）に記載されたよう
に使用することもできる。使用しうる他のトキソイド
は、マサチューセッツ州、ジャマイカ・プレイン、サウ
スストリート在、マサチューセッツ州立ラボラトリーか
ら入手しうる破傷風毒素又は標準的ジフテリア毒素を包
含する。 蛋白−オリゴ糖結合体は、たとえばシュワルツ及びグ
レーの一般的方法［アーキテクチャー・バイオケミカル
・バイオフィジオロジー（1977）、第181巻、第542頁］
のようなカップリング反応によって得られ、この方法は
還元糖を蛋白へ直接に結合させる。脱アミノ化によって
生成されたオリゴ糖断片を、シアノ硼水素化物を介して
キャリヤ蛋白へ直接に結合させることができる。IIIGBS
の場合、蛋白における窒素とオリゴ糖の脱アミノ化によ
り生成された2,5−アンヒドロマンノースにおけるアル
デヒド基との間の結合によって第２アミンが生成され
る。このアルデヒドは、シアノ硼水素化物を用いる直接
的カップリングによって得られる。 得られたオリゴ糖−蛋白結合体を、発熱物質を含有し
ない塩水又は他の任意の生理学上許容しうる無毒性ベヒ
クル若しくは媒体に懸濁させ、これらの媒体は任意慣用
の安定化剤又は他の添加剤を所望に応じて含有すること
ができる。抗原の濃度は臨界的でなく広範囲に変化しう
るが、多くの目的には10〜1000μg/mlの範囲が便利かつ
好適である。この形態において、４℃にて長期間貯蔵す
る際に安定となり、さらにフッド・アンド・ドラッグ・
アドミニストレーション・レジスレーション（第21節、
第610.11〜610.13項）に記載されたような動物試験にか
けた際無菌・無毒かつ非発熱性である。上記塩水懸濁物
の適する容量（たとえば約0.5ml）を投与して（たとえ
ば皮下注射により）、IIIGBS保護を誘発させる。 さらに、本発明は特に幼児又は汚染した成人に使用さ
れる受働免疫法を特徴とし、この方法はオリゴ糖−蛋白
結合体のワクチンをヒトに注射して高タイターで抗体を
発生せしめ、抗血清をヒトの血液から分離し、かつ抗血
清を分画して受働免疫に作用しうる抗体を含んだγグロ
ブリンフラクションを生成させる。受働免疫のための供
与体を作成するこの方法は、免疫化されていないヒト成
人が極めて高レベルのタイプ特異性GBS抗体をその血清
中に有するが、充分高いタイターのグロブリンフラクシ
ョンを受働免疫に使用すべく血漿を貯蔵しうる個体を選
択するには極めて多数の試料をスクリーニングする必要
があるので有用である。免疫化されてない成人からの幾
種かの貯蔵ヒトγグロブリンのロットを抗−Ia及びIc
型、抗−II型及び抗−III型多糖類抗体につき分析し
て、僅か５〜20kg/mlの血清を含有することが判明し
た。このような低タイターのグロブリンの静脈内注射に
よる免疫化は、恐らく逆反応の危険性を伴う多量の投与
量を必要とする。 受働免疫化には、上記結合多糖類ワクチンでワクチン
接種した選択個人からのヒト血清保存物を濃縮しかつ常
法により分画して、タイプ特異性抗体の大部分及び充分
高い活性を有するグロブリンフラクションを与えること
ができ、この高免疫グロブリンはたとえば規定濃度の塩
水のような適当な生理学上許容しうるキャリヤにて静脈
内又は筋肉内投与する際0.3〜1ml、好ましくは約0.5ml
という少投与量にて有効である。キャリヤ中のグロブリ
ンの濃度は５〜20重量％とすることができる。この高免
疫グロブリンは、出産前の妊娠した婦人、新生児又は免
疫学的に汚染した個人に投与して受働免疫又は治療を与
えることができる。 III.オリゴ糖抗体 一般に、オリゴ糖は細菌多糖類のエンド−β−ガラク
トシダーゼ切断によって回収することができる。上記説
明はIIIGBSオリゴ糖並びにワクチンにおけるその使用に
関するものであるが、さらにオリゴ糖はたとえば哺乳動
物にオリゴ糖−蛋白結合体を注射しかつ得られた抗体を
回収することにより哺乳動物を処理して、実験哺乳動物
中に抗体を発生させるべく使用することもできる。さら
に、標準技術によってモノクローナル抗体を発生させる
こともできる。得られる抗体は、たとえばGBS或いは特
にIIIGBSに対する免疫分析に有用である。たとえば、オ
リゴ糖に対する抗体を、当業界で知られた競合若しくは
サンドイッチ免疫分析のような免疫分析に使用すること
もできる。 以下の実施例によりオリゴ糖抗原、オリゴ糖の分離方
法、ワクチン及び受働免疫化法につき説明する。 例1:エンド−β−ガラクトシダーゼの作成 F.ケラトリチクスを１晩培養し、かつこれを使用して
改変トリプチカーゼペプトンブロス（BBLマイクロバイ
オロジー・システムス社、ミズーリー州、コッケイスビ
ル在からの３％のトリプチカーゼペプトン）;0.1％酵母
抽出物（ジフコ・ラボラトリース社、ミシガン州、デト
ロイト在）;0.2％NaCl、pH7.0に接種した。このブロス
を18時間培養し（フランス国、ラフイット在、ビオラフ
ィッテ、ファメンタ）、その間通気（15l/min.）、撹拌
（150rpm）、温度（25℃）及びpH（7.0）を調節した。
遠心分離によって細菌を除去し、そして上澄液を濃縮し
た（マサチューセッツ州、ベッドフォード在、ペリコン
・カセット・システム、ミリポア・コーポレーション
社）。固体の(NH4)2SO4を75％飽和まで添加しかつ溶液
を４℃にて１晩静置した。 沈澱物を遠心分離によって除去しかつ10mlの酢酸ナト
リウム（0.2M NaCl、pH6.0）に溶解させた。この溶液を
５×90cmのセファデックスG 100カラム（ニュージャジ
ー州、ピスカタウエイ在、フェルマシア・ファイン・ケ
ミカルス社）に充填し、かつ同じ緩衝液を用い４℃で40
ml/hr.の速度にて溶出させた。活性フラクションをエン
ド−β−ガラクトシダーゼ活性につき分析して同定し、
次いで貯蔵した。特に、これらフラクションを牛角膜の
硫酸ケラタン（ミズーリ州、セントルイス在、シグマ・
ケミカル・カンパニー社）と共に37℃にて１晩培養し
た。還元糖の生成を、パーク及びジョンソン、ジャーナ
ル・バイオロジカル・ケミストリー、第181巻、第149〜
151頁（1949）の一般的方法により測定した。 貯蔵した活性フラクションを透析し、凍結乾燥し、か
つ緩衝液（50mM酢酸ナトリウム、2mM CaCl2、pH6.0）に
溶解させた。この緩衝した酵素調製物を、上半分にDEAE
セファセル（ファルマシア社）を含有しかつ下半分にビ
オレックス70（ニューヨーク州、ロックビル・センター
在、ビオラド・ラボラトリース社）を含有する2.5×14c
mのカラムに充填した。この酵素を上記緩衝液250mlで溶
出させた。残留した結合蛋白を1.0M NaClで溶出させ、
かつ活性貯蔵フラクションを10mM酢酸ナトリウム、2mM
CaCl2（pH7.0）で透析しかつ凍結乾燥した。 例2.多糖類切断 III型GBS多糖類を上記ジェニングスの一般的技術（19
80）によって抽出した。DEAEセファセル／ビオレックス
70カラムの試験から得られた凍結乾燥したエンド−β−
ガラクトシダーゼ調製物を10mlの10mM酢酸ナトリウム、
2mM塩化カルシウム（pH7.0）に溶解させ、かつ2lの同じ
緩衝液に対し４℃にて浴を１回交換して１晩透析した。
20mgの精製されたIII型GBSカプセル多糖類を酵素調製物
に添加した。この混合物を濾過滅菌し、かつ撹拌しなが
ら37℃で48時間培養した。 例3:オリゴ糖の精製及び特性化 切断後、オリゴ糖を12,000〜14,000ダルトンの孔径の
膜（カリホルニア州、ロスアンゼルス在、スペクトラム
・メジカル・インダストリーズ社）を介しての水に対す
る透析により大分子量と小分子量との貯蔵物に分離し
た。１個（五糖類）及び２個（十糖類）の反復単位に対
応するオリゴ糖を陰イオン交換クロマトグラフィーによ
って精製した。少量のオリゴ糖（1mg若しくはそれ以
下）は、陰イオン交換高性能液体クロマトグラフィー
（HPLC）により精製することができる。500μｇの切断
混合物（小分子量貯蔵物）を５×50mmのモノＱカラム
（ファルマシア社）に充填し、かつ１個及び２個の反復
単位のオリゴ糖を20mMトリスHCl緩衝液（pH7.2）によっ
て平等に溶出させた。より大きいオリゴ糖は、より高い
塩濃度で溶出させることができる。多量のオリゴ糖を精
製するため、QAEセファデックスA50（ファルマシア社）
を充填した1.2×10cmのカラムを用いた。２〜8mgの試料
を、20mM N−メチルジエタノールアミンアセテート（pH
9.6）の出発緩衝液にてこのカラムに充填した。カラム
を30mlの出発緩衝液で1ml/min.の速度にて洗浄し、次い
で単一反復単位のオリゴ糖を50mlの15mM酢酸ナトリウム
を含有する出発緩衝液で溶出させた、2mlのフラクショ
ンを集め、1M酢酸で中和しかつ薄層クロマトグラフィー
（TLC）によって分析した。単一反復単位のオリゴ糖を
含有するフラクションを集め、凍結乾燥し、2mlの水に
溶解させ、かつセファデックスG15（ファルマシア社）
を含有する1.6×25cmのカラムで脱塩した。 主たる切断生成物は四糖類と十糖類との標準間で移動
するバンドに対応し、第１図の五糖類単位につき予測さ
れる物質に適合した分子寸法を有する。このバンドのジ
フェニルアミン及びレゾルシノール染色はシアリル化さ
れた糖類に一致した。メチル化分析は、この構造が完全
に五類反復単位であることを確認した。 １個及び２個の反復単位オリゴ糖を陰イオン交換クロ
マトグラフィーにより分析した。陰イオン交換HPLCは、
少量のオリゴ糖（１〜2mg若しくはそれ以下）を精製す
るための迅速かつ便利な方法である。単一反復単位のオ
リゴ糖はボイド空間に溶出し、２個反復単位のオリゴ糖
は平等相中にその後に溶出する。より大きいオリゴ糖又
は天然多糖類は平等相に保持されるが、0.5M塩化ナトリ
ウムによりこのカラムから容易に溶出される。この方法
を用いて、放射性抗体結合分析（PABA）研究に使用する
ためのトリチウム化された１個及び２個の反復単位のオ
リゴ糖を精製することができる［シフェルレ（1985）、
ジャーナル・イミュノロジー、第135巻、第4164頁参
照］。多量の単一反復単位のオリゴ糖を精製するため、
開放陰イオン交換カラムを用いて、より大きい結合容量
を与えることができる。このQAEセファデックスA50カラ
ムを用いて、単一反復単位並びにそれより大きいオリゴ
糖を出発緩衝液に保持した。より大きいオリゴ糖を含ま
ない単一反復単位を、15mM酢酸ナトリウムを含有する出
発緩衝液で溶出させた。より大きいオリゴ糖は結合状態
に維持され、かつ塩濃度を増加させて溶出することがで
きる。20mgのIII型天然多糖類の切断物から、6mgの精製
された単一反復単位のオリゴ糖が得られた。TLC上にて
単一反復単位から離間移動する少量バンドに対応するオ
リゴ糖も、陰イオン交換カラムにより若干多量に維持さ
れた。調製試験では完全分離が達成されないが、このよ
うに精製した単一反復単位のオリゴ糖はTLC及びメチル
化分析により純度95％であると推定される。さらに、よ
り大きいオリゴ糖をクロマトグラフィー、たとえばセフ
ァデックスG75カラムによって分画した。 例4:オリゴ糖に対する結合分析 クロマトグラム結合分析を用いて、天然多糖類に指向
した抗体を結合するTLCにより可使化されるオリゴ糖バ
ンドの能力を直接に検査した。単一反復単位のバンドに
結合する抗体が明らかに証明された。この分析は定量的
でないが、放射能写真におけるバンドの相対強度から天
然多糖類はより効率的に抗体を結合することが明らかで
ある。この分析は天然II型多糖類につき極めて特異性で
あり、交差反応は脱シアリル化されたコア多糖類、Ｂ群
多糖類或いは他のGBS血清型からのカプセル多糖類につ
いては見られない。 上記オリゴ糖抗原を次いで上記のように蛋白に結合さ
せ、かつ発熱物質を含まない塩水溶液に上記と同様に懸
濁させてワクチンを作成した。 単一反復単位の五糖類（第１図）は放射性抗体結合分
析、阻止TLC結合分析及び直接的放射性抗体結合分析を
用いて弱い抗原性であった。オリゴ糖寸法を２反復単位
まで増大すると、抗原結合において８倍の増加を示し
た。特に好ましくは、免疫原は２〜50単位を有する。 IV.GBS蛋白抗原 抗原性GBS C蛋白をIc型GBSの培養上澄液から次の例に
示すように分離した。この蛋白はP10GBS蛋白フラクショ
ン、すなわち10,000〜30,000のMWの蛋白を含むフラクシ
ョンに対する抗血清（たとえばネズミ抗血清）に対し免
疫学的に反応性である。精製された蛋白は、Ib型GBSで
の処理に対しネズミを保護するウサギ抗血清を発生す
る。この保護能力は、GBS多糖類と共に培養しても影響
されない。 例5:蛋白抗原の産生及び精製 Ia/c型GBS（たとえばニューヨーク州、チャニング・
ラボラトリー・ストレインA909、ロックフェラー大学、
ニューヨーク、ATCC27591）を、トッド・ヘベット・ブ
ロス（ミシガン州、デトロイト在、ジフコ・ラボラトリ
ーズ社、THB）の透析物における後期対数増殖期まで培
養し、次いでレビー等、J,Infect・Dis、第149巻、第85
1〜868頁（1984）の一般的方法により0.15M燐酸ナトリ
ウム緩衝液（pH7.4）における0.3％ホルマリンに再懸濁
させた。 Ic型の対数増殖期の培養物１を15lのTHBの透析物
（10,000MWの排析膜で透析）に添加し、10％グルコース
を補添し、かつ滴定により中性pHを維持しながら醗酵装
置（ニュージャジー州、プリンストン在、LSLビオラフ
ィッテ・インコーポレーション社、ビオラフィッテBL2
0.2型）で後期対数増殖期まで増殖させた。10,000gにて
ペレット化させることにより細菌を除去した後、上澄液
を10,000MWの排析膜を備えたペリコン装置（マサチュー
セッツ州、ベッドフォード在、ミリポア・コーポレーシ
ョン社）にて、100mlまで濃縮し、徹底的にH2Oで透析し
かつ−20℃にて凍結させた。 培養上澄液を、限外濾過により大凡の分子寸法によっ
て分離した。２種のフラクションが得られ、一方のフラ
クションはPM30膜（P30;30,000MWより大）によって保持
されかつ他方のフラクションはPM10膜により保持される
がPM30では保持されない（P10;10,000MWより大かつ30,0
00MWより小）。P10を0.15M NaClを含む0.05M燐酸ナトリ
ウム緩衝液（pH7.4）にて透析し、かつセファデックス
Ｇ−75カラム（1.6×82cm）（ファルマシア社）で分画
した。これらフラクションの蛋白含有量をラウリー分析
［ジャーナル・バイオロジカル・ケミストリー、第193
巻、第265〜275頁（1951）］にて750nmにおける吸収に
より監視した。 例6:SDS−PAGE及びウエスタンブロット 試料をレムリの方法［ネイチャー、第227巻、第680〜
684頁（1970）］にしたがってSDS−PAGEにより分析し
た。蛋白の分子量に応じて、５〜15％又は10〜20％のい
ずれかの濃度勾配のゲルを用いた。電気泳動用の試料
を、0.1Mトリス（pH8）と１％SDSと4M尿素と60mMヨード
アセタミドとを最終濃度として含有する緩衝液にて希釈
した。これら試料の還元を必要とする場合は、50mMジチ
オスレイトールを緩衝液に含ませた。100μｇの蛋白を
含有する100μｌの試料を各穴部に入れた。電気泳動の
後、これら蛋白をクーマシー・ブリリアント青染色によ
って可視化させた。 免疫反応性抗原を同定するため、ウエスタンブロット
を用いた。蛋白を先ず最初に電気泳動にかけ、SDS−PAG
Eゲルを0.02Mトリス緩衝液（pH8.5）と0.15Mグリシン及
び20％メタノールとで構成された緩衝液Ａで洗浄した。
これら蛋白をニトロセルロースシート（ニューハンプシ
ャー州、キーン在、シュライヒャ・アンド・シュエル
社）に移して緩衝液Ａで電気泳動し（150mA、20h）、か
つ0.01Mトリス緩衝液（pH7.4）と0.5M NaCl及び0.1％ブ
リッグ58（緩衝液Ｂ）で洗浄した。次いで、このシート
を抗血清と共に22℃にて２時間培養し、かつ緩衝液Ｂで
洗浄した。I125蛋白Ａと共に22℃にて30分間培養した
後、このシートを緩衝液Ｂで洗浄し、乾燥プロットし、
かつコダックXAR5番フィルムに露出した。 例7:ネズミ保護試験 体重22〜24gの異系交配された雄CD−１ネズミを、チ
ャールス・リバー・ブリージング・ラボラトリース（マ
サチューセッツ州、ウイルミントン在）から入手した。
このネズミから得られた血清は、RABAにより試験してIa
/c型GBS多糖類抗原に対する検出可能な抗体を含有しな
かった。各実験群は５〜10匹の動物を含んだ。ネズミ保
護試験のため、これらネズミに1mlのネズミ若しくはウ
サギ抗血清を腹腔内注射し、かつ24時間後に1b/c型GBS
の１×106CFUを腹腔内接種した。比較として、予備免疫
ウサギ若しくはネズミ血清を用いた。これらのネズミを
24時間毎に検査し、生存するネズミの個数を細菌接種し
てから48時間後に計算した。 抗血清からの保護抗体を吸収するため、1ml当り1mgの
濃度にてGBS多糖類又は蛋白フラクションを用いた。1ml
の抗血清及び1mlの多糖類若しくは蛋白を37℃にて２時
間培養し、次いで４℃にて１晩培養した。次いで、この
混合物を13,000gにて３分間ペレット化させ、かつ上澄
液を保護研究用として0.15M NaClで希釈した。 カラムクロマトグラフィーによって部分精製した後、
14,000MWの蛋白を調製用SDS−PAGEゲルから再分離し、
かつこれを用いウサギ中に抗血清を発生させた。ネズミ
保護試験において、このウサギ抗血清はIa/c型GBS接種
に対しネズミを89％保護した。 P10フラクションが異質GBS株に対しネズミ保護抗体を
発生しうるかどうかを検討するため、ネズミをIa/c型P1
0フラクションで免疫化した。次いで、免疫後の抗血清
を集め、かつIb型GBSの接種に対しネズミを保護する能
力につき検査した。これらネズミにP10フラクションに
対する保存ネズミ抗血清の種々の希釈物を腹腔内注射
し、その24時間後にIb/c型株を接種した。血清の保護能
力は、1:80の血清希釈率にて消失し始めた。したがっ
て、これらの実験には1:40の最適希釈率にて血清を使用
した。ネズミ保護試験において、この免疫血清はIb型株
での接種に対し、同じ希釈率における正常なネズミ血清
と比較して、ネズミを保護した（Ｐ＜0.001）。この保
存血清は、RABAで測定しIa型多糖類に対する検出可能な
抗体を含有しなかった。さらに、Ia型若しくはIb型多糖
類を有する保存抗血清の吸収は、保護レベルを顕著には
変化させなかった。Ic型からのP10フラクションに対す
るネズミ抗血清の保護効果はネズミに抗体を発生する非
カプセル状抗原を含有し、これはIb型GBSでの接種に対
しネズミを受働保護した。 特に、IC型GBSからのSDS−PAGE溶出された14,000MWの
蛋白に対するウサギ抗血清を、次いでネズミ保護試験に
使用した。ネズミに抗血清を腹腔内注射し、かつ24時間
後にIb型GBSを接種した。SDS−PAGE溶出された14,000MW
の蛋白に対し発生した抗血清は、1:5及び1:10の希釈率
にてネズミで保護を示した。SDS−PAGE溶出された14,00
0MWの蛋白に対し発生した抗血清と正常なウサギ血清と
の間の差は顕著であった。 その他の具体例については以下の請求の範囲に示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｐ 19/26 Ｃ１２Ｐ 19/26 (72)発明者 レビー，ナンシー ジェイ. アメリカ合衆国 02159 マサチューセ ッツ，ニュートンセンター，コモンウェ ルス アベニュー 943 (72)発明者 ウェセルズ，マイケル アール. アメリカ合衆国 02146 マサチューセ ッツ，ブルックライン，スターンズ ロ ード 75

Claims (1)

  1. (57)【特許請求の範囲】 １．下記式 ［式中、ｎ＝１〜50であり、GlcNAcpはＮ−アセチルグ
    ルコサミン（ピラノース型）を示し、Galpはガラクトー
    ス（ピラノース型）を示し、Glcpはグルコース（ピラノ
    ース型）を示しかつα−Ｄ−NeuNAcはＮ−アセチルノイ
    ラミン（シアリン）酸を示す］を有する精製オリゴ糖。 ２．オリゴ糖が、結合： S1−β（１→３）−gal−β（１→４）S2 ［ここでS1及びS2は独立してグルコース、グルコサミン
    又はＮ−アセチルグルコサミンから選択される］ の開裂につき特異的であるエンド−β−ガラクトシダー
    ゼを用いるIIIGBS多糖類カプセルの酵素加水分解によっ
    て得られる請求項１に記載の精製オリゴ糖。 ３．エンド−β−ガラクトシダーゼがフラボバクテリウ
    ム・ケラトリチクスから得られる請求項２に記載の精製
    オリゴ糖。 ４．III型Ｂ群のストレプトコッカス（IIIGBS）細菌に
    対し選択免疫反応性である抗体を生ぜしめる抗原であっ
    て、式： ［式中、ｎ＝１〜50であり、GlcNAcpはＮ−アセチルグ
    ルコサミン（ピラノース型）を示し、Galpはガラクトー
    ス（ピラノース型）を示し、Glcpはグルコース（ピラノ
    ース型）を示しかつα−Ｄ−NeuNAcはＮ−アセチルノイ
    ラミン（シアリン）酸を示す］を有する精製オリゴ糖が
    蛋白に共有結合してなることを特徴とする抗原。 ５．蛋白がオリゴ糖に対し第２アミン機能によって結合
    されている請求項４に記載の抗原。 ６．蛋白が細菌表面蛋白からなる請求項４に記載の抗
    原。 ７．蛋白が細菌トキソイドからなる請求項４に記載の抗
    原。 ８．100,000より大きい分子量を有する完全IIIGBS多糖
    類カプセル又はその断片を実質的に含まない請求項１に
    記載の精製オリゴ糖。 ９．（ａ）III型Ｂ群のストレプトコッカス細菌を培養
    し、 （ｂ）培地又は細菌細胞中における多糖類を回収し、 （ｃ）前記多糖類を結合： S1（１→３）β−gal−β（１→４）S2 ［式中、S1及びS2は独立してグルコース、グルコサミン
    及びＮ−アセチルグルコサミンから選択される］ の開裂に対し特異的であるエンド−β−ガラクトシダー
    ゼによって切断し、 （ｄ）オリゴ糖を回収し、かつ必要に応じ （ｅ）前記オリゴ糖をキャリヤに結合させることを特徴
    とする請求項４に記載の抗原の作成方法。 １０．エンド−β−ガラクトシダーゼがフラボバクテリ
    ウム・ケラトリチクスから得られる請求項９に記載の方
    法。 １１．オリゴ糖を蛋白に結合させる請求項９に記載の方
    法。 １２．蛋白を第２アミン機能によってオリゴ糖に結合さ
    せる請求項11に記載の方法。 １３．蛋白が細菌表面蛋白からなる請求項11に記載の方
    法。 １４．蛋白が細菌トキソイドからなる請求項11に記載の
    方法。 １５．III型Ｂ群のストレプトコッカス細菌に対し保護
    を与えるワクチンにおいて、医薬上許容し得るベヒクル
    と請求項４に記載の抗原とからなるワクチン。 １６．少なくとも１個の結合： S1（１→３）β−gal−β（１→４）S2 ［式中、S1及びS2は独立してグルコース、グルコサミン
    及びＮ−アセチルグルコサミンから選択される］ を有する表面多糖類を含む細菌を培養し、 前記表面多糖類を抽出し、 この多糖類を前記結合に対し特異的であるエンド−β−
    ガラクトシダーゼによって切断し、かつ 精製オリゴ糖を回収する ことを特徴とする請求項１に記載の精製オリゴ糖の製造
    方法。 １７．細菌がグラム陽性細菌であり、かつ表面多糖類が
    カプセル状多糖類である請求項16に記載の方法。 １８．細菌がIII型Ｂ群のストレプトコッカス細菌であ
    る請求項17に記載の方法。 １９．細菌が14型ストレプトコッカス・ニューモニアで
    ある請求項16に記載の方法。
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Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5648241A (en) * 1989-09-15 1997-07-15 The General Hospital Corporation Conjugate vaccine against group B streptococcus
IL95578A (en) * 1989-09-15 1998-08-16 Gen Hospital Corp A vaccine made from polysaccharide and protein
EP0493521A4 (en) * 1989-09-18 1993-05-05 Brigham And Women's Hospital Enzymatic generation and recovery of group b streptococcus type iii capsular oligosaccharides
CA2059692C (en) * 1991-01-28 2004-11-16 Peter J. Kniskern Pneumoccoccal polysaccharide conjugate vaccine
CA2059693C (en) * 1991-01-28 2003-08-19 Peter J. Kniskern Polysaccharide antigens from streptococcus pneumoniae
JP2631035B2 (ja) * 1991-03-12 1997-07-16 アメリカ合衆国 多糖類−タンパク質複合体
FR2682388B1 (fr) * 1991-10-10 1995-06-09 Pasteur Merieux Serums Vacc Procede de preparation d'un oligoside par depolymerisation d'un polyoside issu d'un agent pathogene, oligoside ainsi obtenu et son utilisation notamment comme agent vaccinal.
EP0667787B1 (en) * 1992-09-24 2001-07-18 Brigham And Women's Hospital Group b streptococcus type ii and type v polysaccharide-protein conjugate vaccines
ZA937034B (en) * 1992-09-24 1995-06-23 Brigham & Womens Hospital Group B streptococcus type II and type V polysaccharide-protein conjugate vaccines
AU722078B2 (en) * 1992-11-02 2000-07-20 Brigham And Women's Hospital Conjugate vaccine against group B Streptococcus
IL107458A0 (en) * 1992-11-02 1994-02-27 Gen Hospital Corp Conjugate vaccine against group b streptococcus
DE69421921T2 (de) * 1994-08-19 2000-05-11 Societe Des Produits Nestle S.A., Vevey Verzweigtes Polysaccharide, es produzierender Mikroorganismus und Zusammensetzungen welche sie enthalten
AU725279B2 (en) * 1995-06-07 2000-10-12 Alberta Research Council Inc. Immunogenic and immunostimulatory oligosaccharide compositions and methods of making and using them
US5695768A (en) * 1995-06-07 1997-12-09 Alberta Research Council Immunostimulating activity of Streptococcus pneumoniae serotype 8 oligosaccharides
US5866132A (en) * 1995-06-07 1999-02-02 Alberta Research Council Immunogenic oligosaccharide compositions
US6284884B1 (en) 1995-06-07 2001-09-04 North American Vaccine, Inc. Antigenic group B streptococcus type II and type III polysaccharide fragments having a 2,5-anhydro-D-mannose terminal structure and conjugate vaccine thereof
JP4402290B2 (ja) * 1997-10-17 2010-01-20 ソシエテ・デ・プロデュイ・ネスレ・エス・アー 新規な乳酸菌種
HUE029265T2 (en) * 2008-10-27 2017-02-28 Glaxosmithkline Biologicals Sa Method of purifying carbohydrates from the group streptococci
CN115572716B (zh) * 2022-09-30 2023-06-16 云南沃森生物技术股份有限公司 抗iii型b群链球菌荚膜多糖单克隆抗体及杂交瘤细胞株

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4207414A (en) * 1978-08-16 1980-06-10 President And Fellows Of Harvard College Polysaccharide antigens
US4413057A (en) * 1980-04-14 1983-11-01 Merck & Co., Inc. Group B streptococcal capsular polysaccharides
US4356263A (en) * 1980-06-09 1982-10-26 President And Fellows Of Harvard College Method of making a polysaccharide vaccine

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CANADIAN JOURNAL OF BIOCHEMISTRY=1980 *

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