JPH08256787A - 多糖類の製造方法及びクレブシエラ・オキシトカｔｎｍ３株 - Google Patents
多糖類の製造方法及びクレブシエラ・オキシトカｔｎｍ３株Info
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- JPH08256787A JPH08256787A JP9310095A JP9310095A JPH08256787A JP H08256787 A JPH08256787 A JP H08256787A JP 9310095 A JP9310095 A JP 9310095A JP 9310095 A JP9310095 A JP 9310095A JP H08256787 A JPH08256787 A JP H08256787A
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- Japan
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- polysaccharide
- strain
- klebsiella oxytoca
- culture
- present
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 効率の良い多糖類の製造方法を提供する。
【構成】 多糖類生産性クレブシエラ・オキシトカＴＮ
Ｍ３株（ＦＥＲＭ ＢＰ−４６６９）又はその変異株を
培養し、培養物から、下記式で表される構造を主要繰り
返し単位として有する多糖類を採取する。 【化１】
Ｍ３株（ＦＥＲＭ ＢＰ−４６６９）又はその変異株を
培養し、培養物から、下記式で表される構造を主要繰り
返し単位として有する多糖類を採取する。 【化１】
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、多糖類の製造方法及び
多糖類生産性新菌株に関する。
多糖類生産性新菌株に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来より、微生物を利用して多くの多糖
類、例えば、ヒアルロン酸、プルラン、ザンタンガム、
カードラン、ゲランガム等が生産されている。
類、例えば、ヒアルロン酸、プルラン、ザンタンガム、
カードラン、ゲランガム等が生産されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】微生物を利用して多糖
類を生産する場合、多糖類の採取・精製の容易さの点か
ら、菌体外に多糖類を生産する微生物が望まれる。
類を生産する場合、多糖類の採取・精製の容易さの点か
ら、菌体外に多糖類を生産する微生物が望まれる。
【０００４】本発明者等は、スクリーニングにより、多
糖類を効率良く菌体外に生産する微生物を見出した。
糖類を効率良く菌体外に生産する微生物を見出した。
【０００５】本発明は、上記の知見を基に完成されたも
のであり、その目的は、多糖類の製造方法を提供するこ
とにある。本発明の他の目的は、クレブシエラ属の新規
な微生物を提供することにある。
のであり、その目的は、多糖類の製造方法を提供するこ
とにある。本発明の他の目的は、クレブシエラ属の新規
な微生物を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明の第１の要旨は、
多糖類生産性クレブシエラ・オキシトカＴＮＭ３株（Ｆ
ＥＲＭ ＢＰ−４６６９）又はその変異株を培養し、培
養物から、下記式で表される構造を繰り返し単位として
有する多糖類を採取することを特徴とする多糖類の製造
方法に存する。
多糖類生産性クレブシエラ・オキシトカＴＮＭ３株（Ｆ
ＥＲＭ ＢＰ−４６６９）又はその変異株を培養し、培
養物から、下記式で表される構造を繰り返し単位として
有する多糖類を採取することを特徴とする多糖類の製造
方法に存する。
【０００７】
【化２】
【０００８】本発明の第２の要旨は、多糖類生産性クレ
ブシエラ・オキシトカＴＮＭ３株（ＦＥＲＭ ＢＰ−４
６６９）又はその変異株に存する。
ブシエラ・オキシトカＴＮＭ３株（ＦＥＲＭ ＢＰ−４
６６９）又はその変異株に存する。
【０００９】以下、本発明を詳細に説明する。先ず、本
発明の製造方法で得られる多糖類について説明する。
発明の製造方法で得られる多糖類について説明する。
【００１０】ゲル濾過クロマトグラフィーにて測定した
多糖類の分子量は、通常、約１×１０3 〜１０×１０6
の範囲である。この分子量は、上記範囲内において、培
養条件の調整や培養後の後処理により、自由に調節可能
である。
多糖類の分子量は、通常、約１×１０3 〜１０×１０6
の範囲である。この分子量は、上記範囲内において、培
養条件の調整や培養後の後処理により、自由に調節可能
である。
【００１１】本発明の製造方法によって得られる多糖類
は次の様な物性を有している。 （１）性状：白色繊維状（凍結乾燥物）。
は次の様な物性を有している。 （１）性状：白色繊維状（凍結乾燥物）。
【００１２】（２）溶解性：水、希酸、希アルカリに対
して可溶であり、メタノール、エタノール、アセトンに
対して不溶である。
して可溶であり、メタノール、エタノール、アセトンに
対して不溶である。
【００１３】（３）赤外吸収スペクトル：ＫＢｒ錠剤法
による測定結果を図１に示す。図１から明らかな通り、
３４００cm-1付近に水酸基の吸収が、１６２０cm-1付近
にウロン酸のカルボキシル基の吸収が、１１００及び１
２５０cm-1付近にエーテル結合の吸収が、２９５０cm-1
付近にアルカン基の吸収がそれぞれ認められる。
による測定結果を図１に示す。図１から明らかな通り、
３４００cm-1付近に水酸基の吸収が、１６２０cm-1付近
にウロン酸のカルボキシル基の吸収が、１１００及び１
２５０cm-1付近にエーテル結合の吸収が、２９５０cm-1
付近にアルカン基の吸収がそれぞれ認められる。
【００１４】（４）呈色反応：フェノール硫酸法及びカ
ルバゾール硫酸法において陽性であった。この結果、本
発明の多糖類は、ウロン酸を含む酸性多糖類であること
が判明した。
ルバゾール硫酸法において陽性であった。この結果、本
発明の多糖類は、ウロン酸を含む酸性多糖類であること
が判明した。
【００１５】（５）構成糖分析：本発明の製造方法によ
って得られる多糖類、及び、その多糖類中のウロン酸残
基のカルボキシル基を還元した多糖類について、２Ｍト
リフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を使用し、１００℃で６時間
酸加水分解を行った後、アルジトールアセテートに誘導
した。得られた各誘導体について、３％ＥＣＮＳＳ−Ｍ
をコートした「Ｇａｓｃｈｒｏｍ Ｑ」（和光純薬社
製）をカラムとするガスクロマトグラフィー分析を行っ
た。その結果、Ｌ−ラムノース、Ｄ−グルコース及びＤ
−ガラクトースから得られる誘導体と同一の保持時間を
有するピークが検出された。
って得られる多糖類、及び、その多糖類中のウロン酸残
基のカルボキシル基を還元した多糖類について、２Ｍト
リフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を使用し、１００℃で６時間
酸加水分解を行った後、アルジトールアセテートに誘導
した。得られた各誘導体について、３％ＥＣＮＳＳ−Ｍ
をコートした「Ｇａｓｃｈｒｏｍ Ｑ」（和光純薬社
製）をカラムとするガスクロマトグラフィー分析を行っ
た。その結果、Ｌ−ラムノース、Ｄ−グルコース及びＤ
−ガラクトースから得られる誘導体と同一の保持時間を
有するピークが検出された。
【００１６】Ｌ−ラムノース（Ｌ−Ｒｈａ）、Ｄ−グル
コース（Ｄ−Ｇｌｃ）及びＤ−ガラクトース（Ｄ−Ｇａ
ｌ）から得られる誘導体を用いて作成した検量線から、
上記二種の多糖類の各構成糖の組成比（モル比）を、最
も近い整数比として算出した結果を表１に示す。
コース（Ｄ−Ｇｌｃ）及びＤ−ガラクトース（Ｄ−Ｇａ
ｌ）から得られる誘導体を用いて作成した検量線から、
上記二種の多糖類の各構成糖の組成比（モル比）を、最
も近い整数比として算出した結果を表１に示す。
【００１７】
【表１】 Ｌ−Ｒｈａ Ｄ−Ｇｌｃ Ｄ−Ｇａｌ ウロン酸残基のカルボキシル基を 還元しない多糖類 ２ １ １ ウロン酸残基のカルボキシル基を還元した多糖類 ３ ２ １
【００１８】表１において、ウロン酸残基のカルボキシ
ル基を還元した多糖類の方が、非還元の多糖類よりも、
Ｌ−ラムノース及びＤ−グルコースのＤ−ガラクトース
に対するモル比が高くなっていることから、ラムノース
にはそれに相当するウロン酸が存在しないので、本発明
の製造方法で得られる多糖類の構成糖として含まれるウ
ロン酸はＤ−グルクロン酸であることが判明した。ま
た、Ｌ−ラムノースのモル比の増加から、Ｌ−ラムノー
ス残基の一部は比較的酸加水分解に強いアルドビオウロ
ン酸単位として存在することが判明した。したがって、
本発明の製造方法で得られる多糖類の構成糖は、Ｌ−ラ
ムノース（Ｌ−Ｒｈａ）、Ｄ−グルコース（Ｄ−Ｇｌ
ｃ）、Ｄ−ガラクトース（Ｄ−Ｇａｌ）及びＤ−グルク
ロン酸（Ｄ−ＧｌｃＵＡ）であり、その組成比（モル
比）がＬ−Ｒｈａ：Ｄ−Ｇｌｃ：Ｄ−Ｇａｌ：Ｄ−Ｇｌ
ｃＵＡ＝３：１：１：１であることと、Ｄ−ＧｌｃＵＡ
−Ｌ−Ｒｈａ単位を部分構造として有することが判明し
た。
ル基を還元した多糖類の方が、非還元の多糖類よりも、
Ｌ−ラムノース及びＤ−グルコースのＤ−ガラクトース
に対するモル比が高くなっていることから、ラムノース
にはそれに相当するウロン酸が存在しないので、本発明
の製造方法で得られる多糖類の構成糖として含まれるウ
ロン酸はＤ−グルクロン酸であることが判明した。ま
た、Ｌ−ラムノースのモル比の増加から、Ｌ−ラムノー
ス残基の一部は比較的酸加水分解に強いアルドビオウロ
ン酸単位として存在することが判明した。したがって、
本発明の製造方法で得られる多糖類の構成糖は、Ｌ−ラ
ムノース（Ｌ−Ｒｈａ）、Ｄ−グルコース（Ｄ−Ｇｌ
ｃ）、Ｄ−ガラクトース（Ｄ−Ｇａｌ）及びＤ−グルク
ロン酸（Ｄ−ＧｌｃＵＡ）であり、その組成比（モル
比）がＬ−Ｒｈａ：Ｄ−Ｇｌｃ：Ｄ−Ｇａｌ：Ｄ−Ｇｌ
ｃＵＡ＝３：１：１：１であることと、Ｄ−ＧｌｃＵＡ
−Ｌ−Ｒｈａ単位を部分構造として有することが判明し
た。
【００１９】また、本発明の製造方法で製造される多糖
類について、０．２Ｍ ＴＦＡを用いた以外は上記と同
条件で酸加水分解を行った後、上記と同様にガスクロマ
トグラフィー分析を行った結果、Ｌ−ラムノースに対す
るＤ−グルコース及びＤ−ガラクトースのモル比が、２
Ｍ ＴＦＡを用いた場合よりも低い値を示した。このこ
とから、比較的酸加水分解を受けやすい、Ｌ−ラムノー
ス残基が連続している、あるいは、Ｌ−ラムノース残基
が末端に位置する部分構造が存在する、と推測される。
類について、０．２Ｍ ＴＦＡを用いた以外は上記と同
条件で酸加水分解を行った後、上記と同様にガスクロマ
トグラフィー分析を行った結果、Ｌ−ラムノースに対す
るＤ−グルコース及びＤ−ガラクトースのモル比が、２
Ｍ ＴＦＡを用いた場合よりも低い値を示した。このこ
とから、比較的酸加水分解を受けやすい、Ｌ−ラムノー
ス残基が連続している、あるいは、Ｌ−ラムノース残基
が末端に位置する部分構造が存在する、と推測される。
【００２０】（６−１）構成糖残基の結合様式分析（メ
チル化分析）：本発明の製造方法によって得られる多糖
類、及び、その多糖類中のウロン酸残基のカルボキシル
基を還元した多糖類について、箱守法によってメチル化
を行った後、８８％のギ酸を用いて、１００℃で１６時
間酸加水分解を行い、ギ酸を留去し、２Ｍ ＴＦＡを用
いて、１００℃で６時間酸加水分解を行った後、アルジ
トールアセテートに誘導し、３％ＥＣＮＳＳ−Ｍをコー
トした「Ｇａｓｃｈｒｏｍ Ｑ」（和光純薬社製）をカ
ラムとするガスクロマトグラフィー分析を行った。
チル化分析）：本発明の製造方法によって得られる多糖
類、及び、その多糖類中のウロン酸残基のカルボキシル
基を還元した多糖類について、箱守法によってメチル化
を行った後、８８％のギ酸を用いて、１００℃で１６時
間酸加水分解を行い、ギ酸を留去し、２Ｍ ＴＦＡを用
いて、１００℃で６時間酸加水分解を行った後、アルジ
トールアセテートに誘導し、３％ＥＣＮＳＳ−Ｍをコー
トした「Ｇａｓｃｈｒｏｍ Ｑ」（和光純薬社製）をカ
ラムとするガスクロマトグラフィー分析を行った。
【００２１】その結果、ウロン酸残基のカルボキシル基
を還元していない多糖類からは、２，３，４−トリ−Ｏ
−メチル−Ｌ−ラムノース、３，４−ジ−Ｏ−メチル−
Ｌ−ラムノース、３，４，６−トリ−Ｏ−メチル−Ｄ−
グルコース及び２，４，６−トリ−Ｏ−メチル−Ｄ−ガ
ラクトースから得られる誘導体と同じ保持時間を有する
ピークが、また、ウロン酸残基のカルボキシル基を還元
した多糖類からは、２，３，４−トリ−Ｏ−メチル−Ｌ
−ラムノース、３，４−ジ−Ｏ−メチル−Ｌ−ラムノー
ス、３，４，６−トリ−Ｏ−メチル−Ｄ−グルコース、
２，６−ジ−Ｏ−メチル−Ｄ−グルコース及び２，４，
６−トリ−Ｏ−メチル−Ｄ−ガラクトースから得られる
誘導体と同じ保持時間を有するピークが検出された。
を還元していない多糖類からは、２，３，４−トリ−Ｏ
−メチル−Ｌ−ラムノース、３，４−ジ−Ｏ−メチル−
Ｌ−ラムノース、３，４，６−トリ−Ｏ−メチル−Ｄ−
グルコース及び２，４，６−トリ−Ｏ−メチル−Ｄ−ガ
ラクトースから得られる誘導体と同じ保持時間を有する
ピークが、また、ウロン酸残基のカルボキシル基を還元
した多糖類からは、２，３，４−トリ−Ｏ−メチル−Ｌ
−ラムノース、３，４−ジ−Ｏ−メチル−Ｌ−ラムノー
ス、３，４，６−トリ−Ｏ−メチル−Ｄ−グルコース、
２，６−ジ−Ｏ−メチル−Ｄ−グルコース及び２，４，
６−トリ−Ｏ−メチル−Ｄ−ガラクトースから得られる
誘導体と同じ保持時間を有するピークが検出された。
【００２２】これらのことから、本発明の製造方法で得
られる構成糖残基の結合様式は、Ｌ−ラムノース残基が
Ｒｈａ（１→及び→２）Ｒｈａ（１→、Ｄ−グルコース
残基が→２）Ｇｌｃ（１→、Ｄ−ガラクトース残基が→
３）Ｇａｌ（１→、Ｄ−グルクロン酸残基が下記の通り
であることが判明した。
られる構成糖残基の結合様式は、Ｌ−ラムノース残基が
Ｒｈａ（１→及び→２）Ｒｈａ（１→、Ｄ−グルコース
残基が→２）Ｇｌｃ（１→、Ｄ−ガラクトース残基が→
３）Ｇａｌ（１→、Ｄ−グルクロン酸残基が下記の通り
であることが判明した。
【００２３】
【化３】
【００２４】また、２，３，４−トリ−Ｏ−メチル−Ｌ
−ラムノース、３，４−ジ−Ｏ−メチル−Ｌ−ラムノー
ス、３，４，６−トリ−Ｏ−メチル−Ｄ−グルコース、
２，６−ジ−Ｏ−メチル−Ｄ−グルコース及び２，４，
６−トリ−Ｏ−メチル−Ｄ−ガラクトースから得られる
誘導体を用いて作成した検量線から、本発明の製造方法
で得られる多糖類の各構成糖残基の存在比（モル比）
を、その結合様式においても区別して、最も近い整数比
で示すと下記の通りであることが判明した。
−ラムノース、３，４−ジ−Ｏ−メチル−Ｌ−ラムノー
ス、３，４，６−トリ−Ｏ−メチル−Ｄ−グルコース、
２，６−ジ−Ｏ−メチル−Ｄ−グルコース及び２，４，
６−トリ−Ｏ−メチル−Ｄ−ガラクトースから得られる
誘導体を用いて作成した検量線から、本発明の製造方法
で得られる多糖類の各構成糖残基の存在比（モル比）
を、その結合様式においても区別して、最も近い整数比
で示すと下記の通りであることが判明した。
【００２５】
【化４】
【００２６】本発明の製造方法で得られる多糖類の酸加
水分解物から得られる誘導体について、さらに、ＤＢ１
（Ｊ＆Ｗ ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ社製）をカラムとした
ガスクロマトグラフィー−マススペクトル分析（ＧＣ−
ＭＳ）を行ったところ、１，５−ジ−Ｏ−アセチル−６
−デオキシ−２，３，４−トリ−Ｏ−メチルヘキシトー
ル、１，２，５−トリ−Ｏ−アセチル−６−デオキシ−
３，４−ジ−Ｏ−メチルヘキシトール、１，２，５−ト
リ−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−メチルヘキ
シトール及び１，３，５−トリ−Ｏ−アセチル−２，
４，６−トリ−Ｏ−メチルヘキシトールを分析をした場
合に得られる開裂パターンと各々一致する結果が得られ
た。また、ウロン酸残基のカルボキシル基を還元した多
糖類を用いた場合には、１，５−ジ−Ｏ−アセチル−６
−デオキシ−２，３，４−トリ−Ｏ−メチルヘキシトー
ル、１，２，５−トリ−Ｏ−アセチル−６−デオキシ−
３，４−ジ−Ｏ−メチルヘキシトール、１，２，５−ト
リ−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−メチルヘキ
シトール、１，３，５−トリ−Ｏ−アセチル−２，４，
６−トリ−Ｏ−メチルヘキシトール及び１，３，４，５
−テトラ−Ｏ−アセチル−２，６−ジ−Ｏ−メチルヘキ
シトールを分析した場合に得られる開裂パターンと各々
一致する結果が得られた。これらのＧＣ−ＭＳ分析の結
果は上述の分析結果を支持する。
水分解物から得られる誘導体について、さらに、ＤＢ１
（Ｊ＆Ｗ ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ社製）をカラムとした
ガスクロマトグラフィー−マススペクトル分析（ＧＣ−
ＭＳ）を行ったところ、１，５−ジ−Ｏ−アセチル−６
−デオキシ−２，３，４−トリ−Ｏ−メチルヘキシトー
ル、１，２，５−トリ−Ｏ−アセチル−６−デオキシ−
３，４−ジ−Ｏ−メチルヘキシトール、１，２，５−ト
リ−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−メチルヘキ
シトール及び１，３，５−トリ−Ｏ−アセチル−２，
４，６−トリ−Ｏ−メチルヘキシトールを分析をした場
合に得られる開裂パターンと各々一致する結果が得られ
た。また、ウロン酸残基のカルボキシル基を還元した多
糖類を用いた場合には、１，５−ジ−Ｏ−アセチル−６
−デオキシ−２，３，４−トリ−Ｏ−メチルヘキシトー
ル、１，２，５−トリ−Ｏ−アセチル−６−デオキシ−
３，４−ジ−Ｏ−メチルヘキシトール、１，２，５−ト
リ−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−メチルヘキ
シトール、１，３，５−トリ−Ｏ−アセチル−２，４，
６−トリ−Ｏ−メチルヘキシトール及び１，３，４，５
−テトラ−Ｏ−アセチル−２，６−ジ−Ｏ−メチルヘキ
シトールを分析した場合に得られる開裂パターンと各々
一致する結果が得られた。これらのＧＣ−ＭＳ分析の結
果は上述の分析結果を支持する。
【００２７】（６−２）構成糖残基の結合様式分析（完
全スミス分解）：本発明の製造方法で得られる本発明の
製造方法によって得られる多糖類、及び、その多糖類中
のウロン酸残基のカルボキシル基を還元した多糖類につ
いて、０．０３Ｍ過ヨウ素酸ナトリウムを用いて、室温
で８日間過ヨウ素酸酸化を行った後、２Ｍ ＴＦＡを用
いて、１００℃で６時間酸加水分解を行い、水素化ホウ
素ナトリウムを用いて還元してから、アセテートへ誘導
した。
全スミス分解）：本発明の製造方法で得られる本発明の
製造方法によって得られる多糖類、及び、その多糖類中
のウロン酸残基のカルボキシル基を還元した多糖類につ
いて、０．０３Ｍ過ヨウ素酸ナトリウムを用いて、室温
で８日間過ヨウ素酸酸化を行った後、２Ｍ ＴＦＡを用
いて、１００℃で６時間酸加水分解を行い、水素化ホウ
素ナトリウムを用いて還元してから、アセテートへ誘導
した。
【００２８】上述（６−１）のメチル化分析の際と同様
にガスクロマトグラフィー分析を行った結果、ウロン酸
残基のカルボキシル基を還元していない多糖類の場合に
は、Ｄ−グリセロール及びＤ−ガラクトースから得られ
る誘導体のピークと同じ保持時間を有するピークと、Ｌ
−ラムノース残基の完全スミス分解産物と考えられる未
同定のピークが検出され、また、ウロン酸残基のカルボ
キシル基を還元した多糖類の場合には、Ｄ−グリセロー
ル、Ｄ−グルコース及びＤ−ガラクトースから得られる
誘導体のピークと同じ保持時間を有するピークが検出さ
れた。
にガスクロマトグラフィー分析を行った結果、ウロン酸
残基のカルボキシル基を還元していない多糖類の場合に
は、Ｄ−グリセロール及びＤ−ガラクトースから得られ
る誘導体のピークと同じ保持時間を有するピークと、Ｌ
−ラムノース残基の完全スミス分解産物と考えられる未
同定のピークが検出され、また、ウロン酸残基のカルボ
キシル基を還元した多糖類の場合には、Ｄ−グリセロー
ル、Ｄ−グルコース及びＤ−ガラクトースから得られる
誘導体のピークと同じ保持時間を有するピークが検出さ
れた。
【００２９】本発明の製造方法によって得られる多糖
類、及び、その多糖類中のウロン酸残基のカルボキシル
基を還元した多糖類の両方について、Ｌ−ラムノースが
検出されなかったことから、Ｌ−ラムノース残基の結合
様式は過ヨウ素酸酸化を受けるＲｈａ（１→、→２）Ｒ
ｈａ（１→又は→４）Ｒｈａ（１→であると判断でき、
両方で検出されたＤ−ガラクトース残基の結合様式は過
ヨウ素酸酸化を受けない→３）Ｇａｌ（１→又は下記の
ような分岐であると判断できる。
類、及び、その多糖類中のウロン酸残基のカルボキシル
基を還元した多糖類の両方について、Ｌ−ラムノースが
検出されなかったことから、Ｌ−ラムノース残基の結合
様式は過ヨウ素酸酸化を受けるＲｈａ（１→、→２）Ｒ
ｈａ（１→又は→４）Ｒｈａ（１→であると判断でき、
両方で検出されたＤ−ガラクトース残基の結合様式は過
ヨウ素酸酸化を受けない→３）Ｇａｌ（１→又は下記の
ような分岐であると判断できる。
【００３０】
【化５】
【００３１】Ｄ−グルコース残基の結合様式について
は、ウロン酸残基のカルボキシル基を還元していない多
糖類について、Ｄ−グリセロールが検出されたことか
ら、過ヨウ素酸酸化を受けるＧｌｃ（１→、→２）Ｇｌ
ｃ（１→又は→６）Ｇｌｃ（１→と判断でき、また、Ｄ
−グルクロン酸残基の結合様式については、ウロン酸残
基のカルボキシル基を還元していない多糖類では検出さ
れなかったＤ−グルコースが、ウロン酸残基のカルボキ
シル基を還元した多糖類で検出されたことから、過ヨウ
素酸酸化を受けない→３）ＧｌｃＵＡ（１→又は下記の
ような分岐であると判断できる。
は、ウロン酸残基のカルボキシル基を還元していない多
糖類について、Ｄ−グリセロールが検出されたことか
ら、過ヨウ素酸酸化を受けるＧｌｃ（１→、→２）Ｇｌ
ｃ（１→又は→６）Ｇｌｃ（１→と判断でき、また、Ｄ
−グルクロン酸残基の結合様式については、ウロン酸残
基のカルボキシル基を還元していない多糖類では検出さ
れなかったＤ−グルコースが、ウロン酸残基のカルボキ
シル基を還元した多糖類で検出されたことから、過ヨウ
素酸酸化を受けない→３）ＧｌｃＵＡ（１→又は下記の
ような分岐であると判断できる。
【００３２】
【化６】
【００３３】これらの結果は、上述のメチル化分析によ
る結果を支持する。
る結果を支持する。
【００３４】（７）比旋光度： 〔α〕25 D ＝＋５５°（ｃ＝０．５、水溶液） 比旋光度と構成糖分析の結果から、本発明の製造方法で
得られる多糖類の各構成糖残基のアノマーは、Ｌ−ラム
ノースがα、Ｄ−グルコースがα、Ｄ−ガラクトースが
β、Ｄ−グルクロン酸がαであると考えられる。
得られる多糖類の各構成糖残基のアノマーは、Ｌ−ラム
ノースがα、Ｄ−グルコースがα、Ｄ−ガラクトースが
β、Ｄ−グルクロン酸がαであると考えられる。
【００３５】上述した分析結果は、カーボハイドレイト
・リサーチ（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒ
ｃｈ）第１５７巻１３〜２５頁（１９８６年）に記載さ
れている、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）Ｋ１
９株の莢膜多糖類に関する分析結果と相違することがな
く、また、 1Ｈ−及び13Ｃ−ＮＭＲスペクトル測定の結
果、本発明の製造方法で得られる多糖類について検出さ
れた各ピークの化学シフトは、上記文献に記載されてい
るデータと一致していたことから、本発明の製造方法で
得られる多糖類は、主要繰り返し単位が下記式で表され
る構造であると判断される。尚、このような繰り返し単
位を有する多糖類を、クレブシエラＫ１９株以外の微生
物が生産することは知られていない。
・リサーチ（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒ
ｃｈ）第１５７巻１３〜２５頁（１９８６年）に記載さ
れている、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）Ｋ１
９株の莢膜多糖類に関する分析結果と相違することがな
く、また、 1Ｈ−及び13Ｃ−ＮＭＲスペクトル測定の結
果、本発明の製造方法で得られる多糖類について検出さ
れた各ピークの化学シフトは、上記文献に記載されてい
るデータと一致していたことから、本発明の製造方法で
得られる多糖類は、主要繰り返し単位が下記式で表され
る構造であると判断される。尚、このような繰り返し単
位を有する多糖類を、クレブシエラＫ１９株以外の微生
物が生産することは知られていない。
【００３６】
【化７】
【００３７】そして、本発明の製造方法においては、微
生物として、多糖類生産性クレブシエラ・オキシトカＴ
ＮＭ３株（ＦＥＲＭ ＢＰ−４６６９）又はその変異株
が使用される。この様な変異株は、紫外線、Ｘ線等の放
射線、または、エチルメタンスルホン酸（ＥＭＳ）、Ｎ
−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（Ｍ
ＮＮＧ）等の化学的突然変異誘発物質の様な公知の突然
変異誘発手段により発生させることが出来る。上記多糖
類の生産性の有無は菌株を培養した培養液を分析するこ
とにより容易に判別できる。
生物として、多糖類生産性クレブシエラ・オキシトカＴ
ＮＭ３株（ＦＥＲＭ ＢＰ−４６６９）又はその変異株
が使用される。この様な変異株は、紫外線、Ｘ線等の放
射線、または、エチルメタンスルホン酸（ＥＭＳ）、Ｎ
−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（Ｍ
ＮＮＧ）等の化学的突然変異誘発物質の様な公知の突然
変異誘発手段により発生させることが出来る。上記多糖
類の生産性の有無は菌株を培養した培養液を分析するこ
とにより容易に判別できる。
【００３８】表２〜４にクレブシエラ・オキシトカＴＮ
Ｍ３株の菌学的性質を示す。
Ｍ３株の菌学的性質を示す。
【００３９】
【表２】 菌学的性質 諸 性 質 形態 桿菌、コロニーはややムコイド状 グラム染色 − ブドウ糖ＯＦ Ｆ型 運動性 − カタラーゼ ＋ オキシターゼ − グルコースからのガス産生 ＋ ＫＣＮ培地での生育 ＋ クエン酸塩の利用 ＋ メチルレッド − ＶＰ ＋
【００４０】
【表３】炭水化物からの酸の生成 グルコース ＋ アドニット ＋ アラビノース ＋ ズルシット ＋ ラクトース ＋ マルトース ＋ マンニット ＋ ラムノース ＋ サリシン ＋ ソルビット ＋ スクロース ＋ トレハロース ＋ キシロース ＋ グリセロール ＋ イノシトール ＋ ラフィノース ＋
【００４１】
【表４】 ゼラチン加水分解 − マロン酸塩 ＋ グルコン酸塩 ＋ 硝酸塩還元 ＋ 硝酸塩からのガス産生 − ウレアーゼ ＋ リジン デカルボキシラーゼ ＋ アルギニン ジヒドロラーゼ − オルニチン カルボキシラーゼ − ＰＡＡ − ＯＮＰＧ ＋ 硫化水素 ＋ エスクリン加水分解 ＋ インドール ＋ 菌体外特定多糖生産能 ＋ （上記の特定の繰り返し単位を有する多糖類の生成能）
【００４２】上記に示す菌学的性質から、本発明の菌株
は、クレブシエラ属に属していることが判明し、バージ
ーズ・マニュアル・オブ・システマチック・バクテリオ
ロジー第１巻（ＢＥＲＧＥＹ’Ｓ ＭＡＮＵＡＬ ＯＦ
Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ
Ｖｏｌｕｍｅ １、１９８４年) ４６４頁に記載のデー
タとの対比から、タイプカルチャーのクレブシエラ・オ
キシトカ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｏｘｙｔｏｃａ）に
ついて菌体外特定多糖生成能に関する記載は認められな
いものの、他の性質は本発明の菌株の性質と一致してい
た。クレブシエラ・オキシトカ種において、特定多糖類
を産生する菌株は知られていないことから、本発明の菌
株は、クレブシエラ・オキシトカの、特定多糖類生産能
を有することを特徴とする新菌株であると考えられ、こ
の菌株をクレブシエラ・オキシトカ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌ
ｌａ ｏｘｙｔｏｃａ）ＴＮＭ３株と命名した。尚、上
記カーボハイドレイト・リサーチに記載のクレブシエラ
Ｋ１９株はクレブシエラ・ニューモニア種に属する。
は、クレブシエラ属に属していることが判明し、バージ
ーズ・マニュアル・オブ・システマチック・バクテリオ
ロジー第１巻（ＢＥＲＧＥＹ’Ｓ ＭＡＮＵＡＬ ＯＦ
Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ
Ｖｏｌｕｍｅ １、１９８４年) ４６４頁に記載のデー
タとの対比から、タイプカルチャーのクレブシエラ・オ
キシトカ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｏｘｙｔｏｃａ）に
ついて菌体外特定多糖生成能に関する記載は認められな
いものの、他の性質は本発明の菌株の性質と一致してい
た。クレブシエラ・オキシトカ種において、特定多糖類
を産生する菌株は知られていないことから、本発明の菌
株は、クレブシエラ・オキシトカの、特定多糖類生産能
を有することを特徴とする新菌株であると考えられ、こ
の菌株をクレブシエラ・オキシトカ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌ
ｌａ ｏｘｙｔｏｃａ）ＴＮＭ３株と命名した。尚、上
記カーボハイドレイト・リサーチに記載のクレブシエラ
Ｋ１９株はクレブシエラ・ニューモニア種に属する。
【００４３】本発明の菌株は、通商産業省工業技術院生
命工学工業技術研究所において、受託番号「ＦＥＲＭ
ＢＰ−４６６９」として、平成６年５月１８日から国際
寄託され保管されている。
命工学工業技術研究所において、受託番号「ＦＥＲＭ
ＢＰ−４６６９」として、平成６年５月１８日から国際
寄託され保管されている。
【００４４】本発明の製造方法において、前記微生物を
培養するための培地としては、クレブシエラ（Ｋｌｅｂ
ｓｉｅｌｌａ) 属に属する微生物が生育でき、多糖類を
生産する、炭素源、窒素源、無機塩類及び微量栄養源を
適量含有するものであれば特に制限されない。そして、
炭素源としては、グルコース、ラクトース、マルトー
ス、キシロース、マンニット、スクロース、ラムノー
ス、アラビノース、トレハロース、ラフィノースなどが
使用される。窒素源としては、硝酸塩、アンモニウム
塩、尿素などの合成化合物、ポリペプトン、コーンステ
ィープリカー、酵母エキス、肉エキス、脱脂大豆抽出
物、ペプチド、アミノ酸などの天然有機物が使用され
る。無機塩類としては、リン酸塩、カリウム塩、硫酸
塩、マグネシウム塩などが使用される。培地には、必要
に応じ、鉄塩、カルシウム塩、マンガン塩などを添加す
ることが出来る。また、微量栄養源としては、酵母エキ
ス、各種ビタミン類などが使用される。
培養するための培地としては、クレブシエラ（Ｋｌｅｂ
ｓｉｅｌｌａ) 属に属する微生物が生育でき、多糖類を
生産する、炭素源、窒素源、無機塩類及び微量栄養源を
適量含有するものであれば特に制限されない。そして、
炭素源としては、グルコース、ラクトース、マルトー
ス、キシロース、マンニット、スクロース、ラムノー
ス、アラビノース、トレハロース、ラフィノースなどが
使用される。窒素源としては、硝酸塩、アンモニウム
塩、尿素などの合成化合物、ポリペプトン、コーンステ
ィープリカー、酵母エキス、肉エキス、脱脂大豆抽出
物、ペプチド、アミノ酸などの天然有機物が使用され
る。無機塩類としては、リン酸塩、カリウム塩、硫酸
塩、マグネシウム塩などが使用される。培地には、必要
に応じ、鉄塩、カルシウム塩、マンガン塩などを添加す
ることが出来る。また、微量栄養源としては、酵母エキ
ス、各種ビタミン類などが使用される。
【００４５】培地の状態は、固体でも液体でも構わな
い。液体培地を使用する場合には、静置培養でもよい
が、振盪培養、通気撹拌培養の方がより高収量に多糖類
を得ることが出来る。培養時のｐＨは、微生物が生育で
きて多糖類を生産し得るｐＨであれば特に制限されない
が、通常は４〜８のｐＨが適切である。培養温度につい
ても、特に制限されないが、通常は２０〜３５℃が適切
である。培養時間は、多糖類の生産量が最大に達する期
間が選ばれるが、通常は１〜７日が適切である。
い。液体培地を使用する場合には、静置培養でもよい
が、振盪培養、通気撹拌培養の方がより高収量に多糖類
を得ることが出来る。培養時のｐＨは、微生物が生育で
きて多糖類を生産し得るｐＨであれば特に制限されない
が、通常は４〜８のｐＨが適切である。培養温度につい
ても、特に制限されないが、通常は２０〜３５℃が適切
である。培養時間は、多糖類の生産量が最大に達する期
間が選ばれるが、通常は１〜７日が適切である。
【００４６】上記の培養方法で得られた培養物から、多
糖類を採取する方法としては、通常の多糖類に適用され
る従来公知の方法を採用することが出来る。例えば、先
ず、遠心分離や濾過などにより、培養物から菌体を除去
した後、得られた培養液にメタノール、エタノール、イ
ソプロパノール、アセトン等の有機溶媒を加えて沈澱を
生じさせる。次いで、沈澱物を水に溶解させた後、水に
対して透析を行ない、通風乾燥、熱風乾燥、噴霧乾燥、
ドラム乾燥、減圧乾燥、凍結乾燥などの方法により、透
析内液を乾燥して多糖類を回収する。
糖類を採取する方法としては、通常の多糖類に適用され
る従来公知の方法を採用することが出来る。例えば、先
ず、遠心分離や濾過などにより、培養物から菌体を除去
した後、得られた培養液にメタノール、エタノール、イ
ソプロパノール、アセトン等の有機溶媒を加えて沈澱を
生じさせる。次いで、沈澱物を水に溶解させた後、水に
対して透析を行ない、通風乾燥、熱風乾燥、噴霧乾燥、
ドラム乾燥、減圧乾燥、凍結乾燥などの方法により、透
析内液を乾燥して多糖類を回収する。
【００４７】上記の採取方法の他に、限外濾過により、
上記の培養液から多糖類以外の成分を除去し、得られた
濃縮液を上述の乾燥工程に供する方法を採用してもよ
い。更に、必要に応じ、通常の多糖類の精製法に従って
精製することにより、高純度精製品を得ることも出来
る。精製法としては、イオン交換、ゲル濾過、アフィニ
ティー等の各種のカラムクロマトグラフィー、四級アン
モニウム塩による沈澱や塩析、有機溶媒による沈澱など
が採用される。
上記の培養液から多糖類以外の成分を除去し、得られた
濃縮液を上述の乾燥工程に供する方法を採用してもよ
い。更に、必要に応じ、通常の多糖類の精製法に従って
精製することにより、高純度精製品を得ることも出来
る。精製法としては、イオン交換、ゲル濾過、アフィニ
ティー等の各種のカラムクロマトグラフィー、四級アン
モニウム塩による沈澱や塩析、有機溶媒による沈澱など
が採用される。
【００４８】本発明の製造方法で得られる多糖類の重合
度は、製造時の培地組成、採取法などの条件を調節する
ことによって変化させることが出来る。また、ＴＦＡ、
ギ酸、塩酸などを使用し且つ条件を調節することによ
り、採取品や精製品を加水分解することが出来る。従っ
て、多糖類の分子量は、約１×１０3 〜１０×１０6 の
範囲で自由に調節することが可能である。
度は、製造時の培地組成、採取法などの条件を調節する
ことによって変化させることが出来る。また、ＴＦＡ、
ギ酸、塩酸などを使用し且つ条件を調節することによ
り、採取品や精製品を加水分解することが出来る。従っ
て、多糖類の分子量は、約１×１０3 〜１０×１０6 の
範囲で自由に調節することが可能である。
【００４９】本発明の製造方法で得られる多糖類は、保
湿性及びフィルム形成性をはじめ、分散性やその他の有
用な特性を有している。特に、保湿性に関しては、保湿
剤の代表的存在であるヒアルロン酸ナトリウムに比べ、
保湿能が湿度条件によって影響を受け難いという特性を
示す。そして、保湿性の点では、特に、分子量が約１０
5 〜１０6 の多糖類が好適に使用される。
湿性及びフィルム形成性をはじめ、分散性やその他の有
用な特性を有している。特に、保湿性に関しては、保湿
剤の代表的存在であるヒアルロン酸ナトリウムに比べ、
保湿能が湿度条件によって影響を受け難いという特性を
示す。そして、保湿性の点では、特に、分子量が約１０
5 〜１０6 の多糖類が好適に使用される。
【００５０】
【実施例】以下、本発明を実施例により更に詳細に説明
するが、本発明は、その要旨を超えない限り、以下の実
施例に限定されるものではない。
するが、本発明は、その要旨を超えない限り、以下の実
施例に限定されるものではない。
【００５１】実施例１ ５００ｍｌ容の坂口フラスコ４本のそれぞれに表５に示
す組成の培地を１００ｍｌ入れ、１２１℃で２０分間湿
熱滅菌後、表５に示す組成の培地を用いて試験管で２日
間液体振盪培養していたクレブシエラ・オキシトカ（Ｋ
ｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｏｘｙｔｏｃａ）ＴＮＭ３株（Ｆ
ＥＲＭ ＢＰ−４６６９）を一白金耳分植菌し、振盪数
毎分１１０ストローク、２８℃で１日間レシプロ振盪培
養を行った。
す組成の培地を１００ｍｌ入れ、１２１℃で２０分間湿
熱滅菌後、表５に示す組成の培地を用いて試験管で２日
間液体振盪培養していたクレブシエラ・オキシトカ（Ｋ
ｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｏｘｙｔｏｃａ）ＴＮＭ３株（Ｆ
ＥＲＭ ＢＰ−４６６９）を一白金耳分植菌し、振盪数
毎分１１０ストローク、２８℃で１日間レシプロ振盪培
養を行った。
【００５２】
【表５】 培地組成（重量％） グルコース １ ％ ポリペプトン ０．１ ％ リン酸一二水素カリウム ０．１５ ％ 硫酸マグネシウム・７水和物 ０．０５ ％ ビタミンＢ1 ０．０００５ ％ ビオチン ０．０００００６％ パントテン酸カルシウム ０．００１ ％ ニコチンアミド ０．０００５ ％ ｐＨ ６．５
【００５３】下記の表６に示す組成の培地８リットルを
入れて前記と同様の滅菌を行った１５リットル容のジャ
ーファーメンターに前記で得られた培養液４００ｍｌを
接種し、温度２８℃、通気量８リットル／分の条件下
で、５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨを７に保
ちながら、８６時間通気攪拌培養を行った。なお、回転
数は、培養１４時間目までは２００ｒｐｍ、それ以降２
１時間目までは３００ｒｐｍ、それ以降６２時間目まで
５５０ｒｐｍ、それ以降８６時間目までは６５０ｒｐｍ
とした。
入れて前記と同様の滅菌を行った１５リットル容のジャ
ーファーメンターに前記で得られた培養液４００ｍｌを
接種し、温度２８℃、通気量８リットル／分の条件下
で、５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨを７に保
ちながら、８６時間通気攪拌培養を行った。なお、回転
数は、培養１４時間目までは２００ｒｐｍ、それ以降２
１時間目までは３００ｒｐｍ、それ以降６２時間目まで
５５０ｒｐｍ、それ以降８６時間目までは６５０ｒｐｍ
とした。
【００５４】
【表６】 培地組成（重量％） グルコース ４ ％ ポリペプトン ０．２ ％ リン酸一水素二カリウム ０．１５ ％ 硫酸マグネシウム・７水和物 ０．０１ ％ ビタミンＢ1 ０．００００９ ％ ビタミンＢ2 ０．００００４６ ％ ビタミンＢ6 ０．００００２２ ％ ビタミンＢ12 ０．００００００１６％ ビオチン ０．００００００９ ％ パントテン酸カルシウム ０．０００１２０ ％ ニコチンアミド ０．０００３３６ ％ 葉酸 ０．０００００１１４％
【００５５】得られた培養物を水で５倍に希釈し、１２
１℃で２０分間湿熱滅菌後、遠心分離により菌体を除去
した。得られた培養上清分について、本発明の多糖類以
外の成分（残留培地成分など）が除去される迄、クロス
フロー方式の限外濾過を繰り返した。限外濾過には、東
ソー社製、限外濾過システム「ＵＦ−ＬＭＳII」（分画
分子量：３×１０6 ）を使用した。限外濾過膜を透過し
なかった濃縮液を凍結乾燥し、培地１リットル当たり、
１５．０ｇの単一な多糖類を得た。なお、多糖類の単一
性の確認は、ＧＰＣモードの高速液体クロマトグラフィ
ーを使用して行った。
１℃で２０分間湿熱滅菌後、遠心分離により菌体を除去
した。得られた培養上清分について、本発明の多糖類以
外の成分（残留培地成分など）が除去される迄、クロス
フロー方式の限外濾過を繰り返した。限外濾過には、東
ソー社製、限外濾過システム「ＵＦ−ＬＭＳII」（分画
分子量：３×１０6 ）を使用した。限外濾過膜を透過し
なかった濃縮液を凍結乾燥し、培地１リットル当たり、
１５．０ｇの単一な多糖類を得た。なお、多糖類の単一
性の確認は、ＧＰＣモードの高速液体クロマトグラフィ
ーを使用して行った。
【００５６】旭化成社製「Ａｓａｈｉｐａｋ ＧＦＡ−
７ＭＦ」をカラムとし、０．１ＭＮａＮＯ3 水溶液を移
動相とした高速液体クロマトグラフィーを使用し、上記
の多糖類の分子量を測定した結果、多糖類のクロマトグ
ラムのピークトップの保持時間は、分子量既知のプルラ
ンを標準サンプルとして作成した分子量−保持時間標準
曲線において、分子量約２．７×１０6 に相当する値を
示した。
７ＭＦ」をカラムとし、０．１ＭＮａＮＯ3 水溶液を移
動相とした高速液体クロマトグラフィーを使用し、上記
の多糖類の分子量を測定した結果、多糖類のクロマトグ
ラムのピークトップの保持時間は、分子量既知のプルラ
ンを標準サンプルとして作成した分子量−保持時間標準
曲線において、分子量約２．７×１０6 に相当する値を
示した。
【００５７】実施例２ ５００ｍｌ容の坂口フラスコに表７に示す組成の培地を
１００ｍｌ入れ、１２１℃で２０分間湿熱滅菌後、上記
の表５に示す組成の培地を用いて、試験管で２日間液体
振盪培養していたクレブシエラ・オキシトカＴＮＭ３株
を一白金耳分植菌し、振盪数毎分１１０ストローク、２
８℃で１日間レシプロ振盪培養を行った。
１００ｍｌ入れ、１２１℃で２０分間湿熱滅菌後、上記
の表５に示す組成の培地を用いて、試験管で２日間液体
振盪培養していたクレブシエラ・オキシトカＴＮＭ３株
を一白金耳分植菌し、振盪数毎分１１０ストローク、２
８℃で１日間レシプロ振盪培養を行った。
【００５８】
【表７】 培地組成（重量％） グルコース ２ ％ ポリペプトン ０．１ ％ リン酸一水素二カリウム ０．１５ ％ 硫酸マグネシウム・７水和物 ０．０５ ％ ビタミンＢ1 ０．０００５ ％ ビオチン ０．０００００６％ パントテン酸カルシウム ０．００１ ％ ニコチンアミド ０．０００５ ％ ｐＨ ６．５
【００５９】下記表８に示す組成の培地８リットルを入
れて前記と同様の滅菌を行った１５リットル容のジャー
ファーメンターに前記で得られた培養液４００ｍｌを接
種し、温度２８℃、通気量５リットル／分の条件下で、
５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨを７に保ちながら、
９５時間通気攪拌培養を行った。なお、回転数は、培養
２４時間目までは２００ｒｐｍ、それ以降３３時間目ま
では４００ｒｐｍ、それ以降９５時間目までは７００ｒ
ｐｍとした。
れて前記と同様の滅菌を行った１５リットル容のジャー
ファーメンターに前記で得られた培養液４００ｍｌを接
種し、温度２８℃、通気量５リットル／分の条件下で、
５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨを７に保ちながら、
９５時間通気攪拌培養を行った。なお、回転数は、培養
２４時間目までは２００ｒｐｍ、それ以降３３時間目ま
では４００ｒｐｍ、それ以降９５時間目までは７００ｒ
ｐｍとした。
【００６０】
【表８】 培地組成（重量％） グルコース ４ ％ ポリペプトン ０．２ ％ リン酸一水素二カリウム ０．１５ ％ 硫酸マグネシウム・７水和物 ０．０１ ％ ビタミンＢ1 ０．０００５ ％ ビオチン ０．０００００６ ％ パントテン酸カルシウム ０．００１ ％ ニコチンアミド ０．０００５ ％
【００６１】得られた培養物を１０％硫酸で４．５に調
整し、１２１℃で２０分間湿熱滅菌後、遠心分離により
菌体を除去した。以下、実施例１と同様に処理した結
果、培地１リットル当たり、２１．０ｇの単一な多糖類
が得られた。実施例１と同様に分子量を求めたところ、
約１．５×１０6であった。
整し、１２１℃で２０分間湿熱滅菌後、遠心分離により
菌体を除去した。以下、実施例１と同様に処理した結
果、培地１リットル当たり、２１．０ｇの単一な多糖類
が得られた。実施例１と同様に分子量を求めたところ、
約１．５×１０6であった。
【００６２】実施例３ 実施例１で得られた多糖類を、精製水に溶解して１％
（ｗ／ｖ）水溶液を調製し、その６０ｍｌを小型圧力容
器に入れて、１０気圧下で１８０℃、１０分間処理し
た。処理後の分子量を実施例１と同様に測定したとこ
ろ、約１．２×１０4であった。
（ｗ／ｖ）水溶液を調製し、その６０ｍｌを小型圧力容
器に入れて、１０気圧下で１８０℃、１０分間処理し
た。処理後の分子量を実施例１と同様に測定したとこ
ろ、約１．２×１０4であった。
【００６３】
【発明の効果】以上に説明した本発明によれば、多糖類
を効率良く製造することが出来る。
を効率良く製造することが出来る。
【図１】本発明の製造方法で得られる多糖類の赤外吸収
スペクトルを示す図である。
スペクトルを示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:22）
Claims (2)
- 【請求項１】 多糖類生産性クレブシエラ・オキシトカ
ＴＮＭ３株（ＦＥＲＭ ＢＰ−４６６９）又はその変異
株を培養し、培養物から、下記式で表される構造を主要
繰り返し単位として有する多糖類を採取することを特徴
とする多糖類の製造方法。 【化１】 - 【請求項２】 多糖類生産性クレブシエラ・オキシトカ
ＴＮＭ３株（ＦＥＲＭ ＢＰ−４６６９）又はその変異
株。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9310095A JPH08256787A (ja) | 1995-03-27 | 1995-03-27 | 多糖類の製造方法及びクレブシエラ・オキシトカｔｎｍ３株 |
| US08/620,285 US5989874A (en) | 1995-03-27 | 1996-03-22 | Humectant, antistatic agent, dispersant and film-forming agent having polysaccharide as active principle, preparation process of polysaccharides, and Kliebsiella ocytoca TNM-3 strain |
| EP96104795A EP0735049B1 (en) | 1995-03-27 | 1996-03-26 | Humectant, antistatic agent, dispersant and film-forming agent having polysaccharide as active principle, preparation process of polysaccharides, and Klebsiella strain |
| DE69616852T DE69616852D1 (de) | 1995-03-27 | 1996-03-26 | Feuchthaltemittel, antistatisches Mittel, Dispergiermittel und filmbildendes Mittel mit Polysaccharid als wirksames Prinzip; Verfahren zur Herstellung von Polysacchariden und Klebsiella Stamm |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9310095A JPH08256787A (ja) | 1995-03-27 | 1995-03-27 | 多糖類の製造方法及びクレブシエラ・オキシトカｔｎｍ３株 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08256787A true JPH08256787A (ja) | 1996-10-08 |
Family
ID=14073112
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9310095A Pending JPH08256787A (ja) | 1995-03-27 | 1995-03-27 | 多糖類の製造方法及びクレブシエラ・オキシトカｔｎｍ３株 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH08256787A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0775490A4 (en) * | 1995-06-05 | 1998-06-03 | Tayca Corp | IMMUNOSTIMULANT |
-
1995
- 1995-03-27 JP JP9310095A patent/JPH08256787A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0775490A4 (en) * | 1995-06-05 | 1998-06-03 | Tayca Corp | IMMUNOSTIMULANT |
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