JPH08253581A - 生理活性物質結合高分子化合物および当該化合物を含む放射性医薬品調製用キャリアー - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 放射性医薬品調製用キャリアーおよび当該キ
ャリアーに必須成分として含まれる生理活性物質結合高
分子化合物を提供することを、その課題とする。 【解決手段】 所定のポリアミン化合物と、所定のカル
ボキシル基含有２官能性配位子化合物とを所定の割合で
アミド結合させて反応性高分子化合物を形成する。次い
で、得られた化合物のアミノ基に生理活性物質を結合さ
せて、生理活性物質結合高分子化合物を形成すること
を、その解決手段とする。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明はアミノ基と２官能性
配位子を有する反応性高分子化合物とその利用、特に分
子中に(a) 生理活性物質と結合し得るアミノ基と(b)放
射性金属元素と結合し得る２官能性配位子を有する反応
性高分子化合物および該反応性高分子化合物の放射性医
薬品としての利用に関する。

【０００２】本発明の反応性高分子化合物は文献未載の
新規物質であり、特定の臓器の描出、特定疾患の検出、
生理活性物質の動態検査、疾病の治療などの核医学的用
途に適した安定な放射性金属元素標識つき放射性医薬品
の製造に利用することが出来る。

【０００３】

【従来の技術】特定臓器の描出、特定疾患の検出、動態
検査、放射性同位元素を用いた疾患の治療を目的とした
核医学領域においては、従来ヨード−１３１で標識され
た生理活性物質が汎用されてきた。たとえば、血液循環
系の描出や動態検査に用いられるヨード−１３１標識ヒ
ト血清アルブミンやガンの治療を目的としたヨード−１
３１標識ガン特異抗体などが挙げられる。しかしなが
ら、ヨード−１３１は半減期が約８日と長く、かつ、ガ
ンマー線の他にベータ線を放出するため診断剤として適
しているとは言えない。また、治療への適用においても
ヨード−１３１は、生体内で脱ヨード化反応をうけ、病
巣以外の組織に放射線被曝を与える欠点がある。

【０００４】そこで、核医学的使用目的に応じて、より
適した物理的特性を有する放射性金属元素をより適した
化学的方法により生理活性物質に導入し、有用な放射性
医薬品を得ようとする試みが続けられている。たとえば
ジエチレントリアミン五酢酸(ＤＴＰＡ)、３−オキソブ
チラールビス(Ｎ−メチルチオセミカルバゾンカルボン
酸、デフェロキサミンなどの２官能性配位子化合物の各
種金属に対する強いキレ−ト形成能と、それらの２官能
性配位子化合物の末端に存在するアミノ基やカルボキシ
ル基の種々の生理活性物質に対する反応性に基づいて、
これら２官能性配位子化合物を介して放射性金属元素お
よび生理活性物質を結合させる方法が提案されている。
これらの方法で得られた標識化合物は、比較的安定であ
り、しかも生理活性物質の活性を保持しているので、核
医学領域において非常に興味ある薬剤である。しかしな
がら、これらの方法によって得られた放射性医薬品は、
分子量の大きい生理活性物質、たとえば血栓診断やガン
の診断及び治療に使用されるそれぞれ分子量約34万のフ
ィブリノ−ゲンや分子量約15万の免疫抗体(ＩgＧ)を用
いた場合、診断及び治療に必要な高比放射能のものが得
られない欠点がある。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは種々研究
を重ねた結果、ポリアミン化合物に２官能性配位子化合
物と生理活性物質を結合させた生理活性物質結合高分子
化合物が放射性金属元素の担体として有用であり、かか
る担体に放射性金属元素を担持させた放射性金属元素結
合化合物は前記欠点が克服された放射性医薬品として有
用である事実を見出だした。この放射性医薬品は、１分
子当たり多数の２官能性配位子を持つものであり、この
ことはとりも直さず１分子当たりに結合する放射性金属
元素の数が従来の２官能性配位子化合物そのものの使用
に比して格段に多いことを意味する。そして、本発明に
おける反応性高分子化合物を使用することにより、生理
活性物質の変性および活性低下をおこすことなく、高比
放射能の放射性医薬品を提供することが可能となった。
一般に分子量の大きい生理活性物質を人体に投与する場
合、その抗原性を考慮するならばその投与量を可及的少
量にすることが望ましい。従って、ここに得られた放射
性医薬品が高比放射能であることはこの点で極めて有利
である。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明によって提供され
る新規高分子化合物は次の４種である: １．分子中に少なくとも３個のアミノ基を有するポリア
ミン化合物(１)と２官能性配位子化合物(２)が前者１分
子当たり後者少なくとも２分子の割合においてアミド結
合(−ＣＯＮＨ−)を介して結合して成る少なくとも１個
の遊離アミノ基を有する反応性高分子化合物(Ａ)。 ２．分子中に少なくとも３個のアミノ基を有するポリア
ミン化合物(１)の少なくとも１個のアミノ基に生理活性
物質(３)が結合して成る生理活性物質結合高分子化合物
(Ｂ')。 ３．反応性高分子化合物(Ａ)に存在する遊離アミノ基の
少なくとも１個に生理活性物質(３)が結合して成る生理
活性物質結合高分子化合物(Ｂ)。 ４．生理活性物質結合高分子化合物(Ｂ)に放射性金属元
素(４)がキレート結合を介して結合して成る放射性金属
元素結合高分子化合物(Ｃ)。

【０００７】

【作用】反応性高分子化合物(Ａ)は、ポリアミン化合物
(１)と２官能性配位子化合物(２)が結合して構成された
ものである。ポリアミン化合物(１)は分子中に少なくと
も３個のアミノ基を持つことが必要であり、アミノ基の
数が多いほど好ましい。それらのアミノ基のうち少なく
とも２個は２官能性配位子化合物(２)との結合に消費さ
れ、他の少なくとも１個は反応性高分子化合物(Ａ)中に
おいて遊離のまま残留し、後に生理活性物質(３)との結
合に役立つ。上記の如くポリアミン化合物(１)としては
分子中に存在するアミノ基の数が多い程望ましいから、
たとえば側鎖に遊離のアミノ基を有する高分子ポリマー
が好んで使用される。その分子量は後に結合させる生理
活性物質(３)の物理的特性や化学的特性を考慮に入れて
適宜に選択すればよい。好んで使用されるポリアミン化
合物(１)の具体例を挙げれば、分子量約500〜1,000,000
のポリリジン、分子量約500〜500,000のポリイミン、な
どがある。

【０００８】一方、２官能性配位子化合物(２)(２官能
性キレート剤)としては、放射性金属元素(４)に対し強
固なキレ−ト結合を形成しかつ比較的緩和な条件下でポ
リアミン化合物(１)のアミノ基と反応し得る官能基(た
とえばカルボキシル基またはそれから誘導された反応性
基)を有するものが使用される。このような２官能性配
位子化合物(２)の具体例としては、式：

【化１】 で表わされるジエチレントリアミン五酢酸サイクリック
酸無水物、式：

【化２】 で表わされるエチレンジアミン四酢酸サクシンイミドな
どが挙げられる。

【０００９】反応性高分子化合物(Ａ)を製造するには、
たとえばポリアミン化合物(１)と２官能性配位子化合物
(２)を自体常套の手段で反応させ、透析法、塩析法、ゲ
ルろ過法、カラムクロマトグラフィ−、高速液体クロマ
トグラフィ−など自体常套の手段により精製すればよ
い。なお、上記反応における副生成物や未反応物がその
後に行なわれる反応性高分子化合物(Ａ)と生理活性物質
(３)との反応に阻害効果を及ぼさない限り、精製手段の
適用は特に必要ではない。２官能性配位子化合物(２)の
官能基、反応条件などの相違により、ポリアミン化合物
(１)１分子に結合する２官能性配位子化合物(２)の分子
数は異なるが、一般的には２またはそれ以上、特に５ま
たはそれ以上が好ましい。ただし、この反応で得られた
反応性高分子化合物(Ａ)のポリアミン化合物(１)部分に
おける少なくとも１個のアミノ基は生理活性物質(３)と
の結合のため遊離のまま残留すべきである。

【００１０】ポリアミン化合物(１)として市販のポリリ
ジン(リジン単位約２〜2000、好ましくは２〜500のも
の)を使用する場合を例に挙げて反応性高分子化合物
(Ａ)の構造を式で示せば次の通りである：

【化３】 ［式中、Ｘは２官能性配位子化合物(２)からカルボニル
基を除去した残基、pは２〜約2000の整数、qは１〜約20
00の整数を表す。ただし、p＋qは３〜2000の整数であ
る。]

【００１１】反応性高分子化合物(Ａ)はその分子中に少
なくとも１個の遊離アミノ基が存在するから、そのアミ
ノ基と適当な架橋剤を介してまたは介することなく生理
活性物質(３)と結合させ、必要に応じ前記した常套の手
段で精製することにより、放射性医薬品調製用キャリア
−として有用な生理活性物質結合高分子化合物(Ｂ)を提
供することができる。

【００１２】ここで言う生理活性物質(３)とは、適当な
器官または組織あるいは特定の病巣に蓄積するか、特定
の生理状態に対応して特異な挙動を示す物質を意味す
る。生理活性物質(３)の具体例としては、血液蛋白質
(たとえばヒト血清アルブミン、フィブリノ−ゲン)、酵
素(たとえばウロキナ−ゼ、ストレプトキナ−ゼ)、ホル
モン(たとえば副腎皮質刺激ホルモン、甲状腺刺激ホル
モン)、免疫抗体(たとえばＩgＧおよびその断片のＦ(a
b')₂、Ｆab'、Ｆab)、抗生物質(たとえばブレオマイシ
ン、マイトマイシン)、神経伝達物質、糖類、脂肪酸、
アミノ酸などが挙げられる。

【００１３】反応性高分子化合物(Ａ)に対して生理活性
物質(３)を結合せしめるには、たとえばカルボジイミ
ド、マレイミド、活性エステル化合物、グルタ−ルアル
デヒドなどの適当な架橋剤を用いてこれを行うのが好ま
しい。反応性高分子化合物(Ａ）の１分子当たり導入さ
れる生理活性物質（３)の分子数は架橋剤、反応条件な
どにより異なるが、通常は１０またはそれ以下、特に３
またはそれ以下が好ましい。ここに生成した反応性高分
子化合物(Ａ)と生理活性物質(３)の結合体、すなわち生
理活性物質結合高分子化合物(Ｂ)は、必要に応じて高分
子物質に適用されるカラムクロマトグラフィ−、ゲルろ
過法、透析法などの自体常套の精製法により精製されて
もよい。

【００１４】ポリアミン化合物(１)として市販のポリリ
ジン(リジン単位約２〜2000、好ましくは２〜500のも
の)を使用する場合を例に挙げて生理活性物質結合高分
子化合物(Ｂ)の構造を式で示せば次の通りである:

【化４】 [式中、Ｘは２官能性配位子化合物(２)からカルボニル
基を除去した残基、Ｙは生理活性物質(3)または生理活
性物質−架橋剤残基結合物の残基、pは２〜約２０００
の整数、ｑは１〜約2000の整数、rは0〜約2000の整数を
表す。ただし、p＋qおよびp＋q＋rはそれぞれ３〜2000
の整数である。]

【００１５】生理活性物質結合高分子化合物(Ｂ)はまた
ポリアミン化合物(１)と生理活性物質(３)を結合せしめ
たうえ、ここに得られた生理活性物質結合高分子化合物
(Ｂ')に２官能性配位子化合物(２)を結合させることに
よっても調製することが出来る。前段の結合と後段の結
合はそれぞれ前記した反応性高分子化合物(Ａ)と生理活
性物質(３)の結合およびポリアミン化合物(１)と２官能
性配位子化合物の結合に準じてこれを行えばよい。

【００１６】生理活性物質結合高分子化合物(Ｂ)は放射
性医薬品調製用キャリア−として有用なものである。す
なわち、該結合体には反応性高分子化合物(Ａ)の部分に
２官能性配位子化合物(２)が複数個存在しており、これ
によって複数個の放射性金属元素(４)を捕捉することが
可能であり、生理活性物質(３)１単位当りの放射性物質
量や比放射能が非常に高い放射性医薬品を提供すること
が出来る。

【００１７】なお、放射性医薬品調製用キャリアーとし
ての生理活性物質結合高分子化合物(Ｂ)は溶液の形で保
存されてもよいが、通常は凍結乾燥法、低温減圧蒸発法
などにより粉末状態に変換して保存され、用に臨み無菌
水、生理食塩水、緩衝液などに溶解される。粉末状態ま
たは溶解後の生理活性物質結合高分子化合物(Ｂ)には必
要に応じ医薬的に許容し得る溶解補助剤(たとえば有機
溶媒)、pＨ調節剤(たとえば酸、塩基、緩衝剤)、安定剤
(たとえばアスコルビン酸)、保存剤(たとえば安息香酸
ナトリウム)、等張剤(たとえば塩化ナトリウム)などや
放射性金属元素(４)の原子価状態を調製するための還元
剤や酸化剤が配合されてもよい。

【００１８】放射性医薬品調製用キャリヤ−の使用量は
最終的に製造される放射性医薬品の標識率が実用上支障
のない程度に高くなるような量であり、かつ薬剤学上許
容され得る範囲であることが必要である。放射性医薬品
調製用キャリヤ−を使用して放射性医薬品を調製するに
は、前記した添加物を含むことのある放射性医薬品調製
用キャリヤ−と適宜の形態の放射性金属元素(４)を水性
媒体中で接触せしめればよい。通常は両者の内の少なく
とも一方を予め水溶液としたうえ、他方をそれに添加す
る。接触させる放射性金属元素(４)の放射能は任意であ
るが、核医学診断を実施する場合には、充分な情報が得
られるような放射能であり、かつ被検者の放射線被曝を
可能な限り低くするような放射能の範囲であることが望
ましい。他方、治療を目的とする場合には、治療効果が
充分に得られるような放射能が必要であると共に、他の
正常臓器や組織への放射線被曝を可能な限り低くするよ
うな放射能の範囲であることが望ましい。

【００１９】上記した放射性金属元素(４)としては、放
射能を有する金属元素であって、核医学的診断や治療に
適した物理的特性や化学的特性を有し、しかも２官能性
配位子化合物(２)の配位子構造により容易に捕捉されう
るものが使用される。その具体例としては、診断の目的
に供されるものとしてガリウム−６７、ガリウム−６
８、タリウム−２０１、インジウム−１１１、テクネチ
ウム−９９mなどが挙げられ、治療の目的に供されるも
のとしてイットリウム−９０、パラジウム−１０９、レ
ニウム−１８６、金−１９８、ビスマス−２１２などが
挙げられる。これらは通常、塩、特に水溶性塩の形で使
用され、水性媒体中において生理活性物質結合高分子化
合物(Ｂ)と接触せしめてその標識化を行う。ただし、放
射性金属元素(４)が安定なキレ−ト錯体を形成しうる原
子価状態にある場合には(たとえばガリウム−６７、イ
ンジウム−１１１)、反応系に他の試剤を存在せしめる
必要はないが、安定なキレ−ト錯体を形成するために原
子価状態を変化させる必要がある場合には(たとえばテ
クネチウム−９９m)、反応系に還元剤または酸化剤を存
在せしめる必要があろう。還元剤の例としては２価のス
ズ塩(たとえばハロゲン化スズ、硫酸スズ、硝酸スズ、
酢酸スズ、クエン酸スズ)が挙げられる。酸化剤の具体
例としては、過酸化水素などがある。たとえば放射性金
属元素(４)としてテクネチウム−９９mを使用する場
合、生理活性物質結合高分子化合物(Ｂ)を水性溶媒中還
元剤としての第一スズ塩の存在下、パ−テクネテ−トの
形のテクネチウム−９９mと処理することによってテク
ネチウム−９９m標識高分子化合物を調製することがで
きる。上記調製に際し、各試剤の混合順序について格別
の制限はないが、通常、水性媒質中で最初に第一スズ塩
とパ−テクネテ−トを混合することは避けた方が望まし
い。第一スズ塩はパ−テクネテ−トを充分に還元出来る
量で使用するのが好ましい。

【００２０】このようにして得られた放射性金属元素結
合高分子化合物(Ｃ)が放射性医薬品として有用であるた
めには、診断または治療を可能とする充分な放射能量と
放射能濃度を有することが必要である。たとえば放射性
金属元素(４)としてテクネチウム−９９mを使用した場
合、投与時に約０.５〜５.０ml当り０.１〜５０mＣiの
放射能濃度を有することが望ましい。また、このような
放射性金属元素結合高分子化合物(Ｃ)は調製後直ちに投
与されてもよいが、好ましくは調製後適当時間保存に耐
えうる程度の安定性を有することが望ましい。なおま
た、放射性金属元素結合高分子化合物(Ｃ)には必要に応
じ溶解補助剤(たとえば有機溶媒)、pＨ調節剤(たとえば
酸、アルカリ、緩衝剤)、安定剤(たとえばアスコルビン
酸)、保存剤(たとえば安息香酸ナトリウム)、等張化剤
(たとえば塩化ナトリウム)などが配合されてもよい。

【００２１】本発明に従って放射性医薬品として有用な
放射性金属元素結合高分子化合物(Ｃ)を調製する場合の
具体例をポリアミン化合物(１)としてポリリジン、２官
能性配位子化合物(２)としてジエチレントリアミン五酢
酸サイクリック酸無水物(ＣＡＤＴＰＡ)、生理活性物質
(３)としてヒト血清アルブミン(ＨＳＡ)、放射性金属元
素(４)としてインジウム−１１１(¹¹¹Ｉn)を使用する場
合につき説明すれば次の通りである。まず、ポリリジン
とＣＡＤＴＰＡを結合させてポリリジン−ジエチレント
リアミン五酢酸(ＤＴＰＡ)結合体を調製し、この結合体
とＨＳＡをＮ−(γ−マレイミドブチリルオキシ)サクシ
ンイミド(ＧＭＢＳ)を介して結合させてＨＳＡ−ポリリ
ジン−ＤＴＰＡ結合体を得る。この結合体と３価のイン
ジウムイオンの形で¹¹¹Ｉnを含む水溶液を接触させるこ
とにより、安定で高化放射能の¹¹¹Ｉn標識ＨＳＡ−ポリ
リジン−ＤＴＰＡ結合体を得る。

【００２２】ここに得られた標識結合体の高速液体クロ
マトグラフィ−的挙動はＨＳＡの挙動とほぼ同じであ
る。また、この標識結合体のラットにおける体内挙動は
従来のヨ−ド−１３１標識ＨＳＡとほぼ同じである。従
来法により得られた¹¹¹Ｉn標識ＨＳＡ−ＣＡＤＴＰＡ結
合体の比放射能は約７mＣi／mgＨＳＡであるのに対し、
本発明により得られた¹¹¹Ｉn標識ＨＳＡ−ポリリジン−
ＤＴＰＡ結合体のそれは３５mＣi／mgＨＳＡ以上であ
る。

【００２３】本発明の放射性医薬品を人体に投与するに
は、通常、経静脈的に行うが、該放射性医薬品中の生理
活性物質(３)部分が投与後その活性を発現するのに適し
ていたり、有利である限り、特にこれに限定されるもの
ではなく、その他の適宜の方法が採用されてよい。以上
の点から明らかなように、本発明にかかる放射性医薬品
調製用キャリヤ−は、放射性金属イオンを含有する水溶
液と接触させるという極めて簡単な方法により、高比放
射能の放射性医薬品を提供することが出来る。しかも得
られた放射性医薬品はそれを構成する生理活性物質(３)
部分に由来する生理活性をそのまま実質的に保有する特
徴を有する。現在、放射性医薬品としては核医学診断を
目的とするものだけでなく、治療を目的とするものも知
られている。治療用放射性医薬品の基礎原理は、放射線
による疾患部の細胞や組織の破壊作用に基づくものであ
って、その実用例としては甲状腺腫に用いるヨ−ド−１
３１標識ヨ−化ナトリウム、腹部、胸部などの体腔の内
表面の悪性腫瘍に用いる金−１９８コロイドなどがあ
り、半減期の比較的短いペ−タ線放出核種が使われてい
る。最近、モノクロ−ナル抗体を始めとして、種々の病
巣に特異的集積が期待できる生理活性物質が開発される
に従い、これらをベ−タ線やアルファ線放出核種、ある
いは電子捕獲、核異性体転移を行う核種で標識した放射
性医薬品による癌治療の可能性が示唆されている。本発
明の放射性金属元素結合高分子化合物(Ｃ)は、このよう
な治療目的に合致したものであり、特に１分子当たりに
多数の放射性金属元素(４)を結合することができるの
で、高放射能および高比放射能による効果的な治療を施
し得る利点がある。以下に実施例を示し、本発明をさら
に具体的に説明する。

【００２４】

【実施例】以下に実施例を示し、本発明を更に具体的に
説明する。実施例１ ヒト血清アルブミン−ポリリジン−ジエチレントリアミ
ン五酢酸(ＨＳＡ−Ｐoly Ｌys−ＤＴＰＡ)結合体を含む
組成物の製造(１):− 分子量約５.０００のポリリジン塩酸塩２００mgをと
り、０.４Ｍリン酸緩衝液(pＨ＝８.０)１０mlに溶解し
マグネティックスタ−ラ−で撹はんしながらジエチレン
トリアミン五酢酸無水物１４８mgを加える。室温で一夜
撹はんして反応させた後、反応液０.０５mlをとり、こ
れに０.１Ｍクエン酸緩衝液０.４５ml、塩化インジウム
(¹¹¹Ｉn)０.２５ml,(０.５mＣi)を加え、薄層クロマト
グラフィ−法(シリカゲル薄層板,メタノ−ル１０％酢酸
アンモニウム液３:１液)で分析しポリリジン１分子に対
して結合しているジエチレントリアミン五酢酸(ＤＴＰ
Ａ)分子数を算出した。 未反応ＤＴＰＡのＲf 0.5〜0.6 ポリリジンＤＴＰＡ 原 点

【００２５】上記反応条件による結合率は５.４ＤＴＰ
Ａ／ポリリジンであった。ここで得られたポリリジン−
ＤＴＰＡ(Ｐoly(Ｌys−ＤＴＰＡ)５.４)１.５mlにＮ−
(γ−マレイイミドブチルオキシ)サクシンイミド(ＧＭ
ＢＳ)のジメチルスルフォキサイド液(３３.６mg／ml)
０.０７５mlを加えマグネティックスタ−ラ−で撹はん
しながら室温で１５分間反応させる。次にこの反応中間
体１.３８mlをとりこれに９０mg／mlヒト血清アルブミ
ンリン酸緩衝液(pＨ＝７.５)０.５mlを加え、撹拌しな
がらさらに室温で一夜反応させる。反応液はカットオフ
10,000の透析チュ−ブに入れ、１Ｍ塩化ナトリウム液に
対して透析した後、生理食塩液で平衡化したセファデッ
クス Ｇ−７５カラム(２２×３００mm)で未反応ポリマ
−を除去し精製した。上記操作のうち結合率の測定以外
は、すべて無菌的に行うほか使用する器具類は全て１８
０℃４時間加熱処理をし、パイロジエンバ−ンするか、
注射用蒸留水で洗浄してオ−トクレ−ブで滅菌して用い
た。また緩衝液は注射用蒸留水を用いて調整しメンブラ
ンフィルタ−を用いるろ過滅菌法により滅菌して用い
た。カラムクロマトグラフィ−用の樹脂は希アルカリ液
で洗浄した後注射用生理食塩液で脱アルカリ化した。こ
こで得られた精製ヒト血清アルブミン−Ｐoly(Ｌys−Ｄ
ＴＰＡ)５.４ １.１mg/mlの０.４５mlをとり、ＤＴＰＡ
１０^-6mole/ml, ０.２ml、０.１Ｍクエン酸緩衝液(pＨ
＝６.０)０.３５ml,塩化インジウム(¹¹¹Ｉn)２mＣi／m
l, ０.５mlを加え、下記の条件の電気泳動法により分析
し、ヒト血清アルブミン１分子に結合しているポリマ−
分子数を算出した。

【００２６】支持体 : セルロ−スアセテ−ト膜 泳動緩衝液: 0.06Ｍベロナ−ル緩衝液 pＨ＝８．６ 泳動条件 ： １mＡ／ｃm 20分 上記反応条件による結合率は、約１分子Ｐoly(Ｌys−Ｄ
ＴＰＡ)５.４／ヒト血清アルブミンであった。ここで得
たＨＳＡ−Ｐoly Ｌys−ＤＴＰＡを０.１Ｍクエン酸緩
衝液(pＨ＝６.０)で希釈して１mg／mlの濃度にし、メン
ブランフィルタ−でろ過しながら１mlずつ無菌バイアル
に分注し、目的とする組成物を得た。

【００２７】実施例２ (ＨＳＡ−Ｐoly Ｌys−ＤＴＰＡ)−¹¹¹Ｉn注射液の製造
及び性質(体内分布):− 実施例１で得た組成物を含むバイアルに市販の塩化イン
ジウム(¹¹¹Ｉn)注射液２mＣi／ml １.０mlを加え目的と
する注射液を得た。以上の操作は、無菌的に行う。ここ
で得られた注射液２５μlをとり、下記の条件の高速液
体クロマトグラフィ−法で分析した所、２量体の存在率
は１％以下、未反応のポリマ−, ＤＴＰＡは検出限界以
下であった。また主成分の保持時間は約２３分であり、
別に得た検量線から計算すると、その平均分子量は約7
0.000であった。

【００２８】カラム : 東洋ソ−ダ製 TSK−2000SW
カラム(０.７５×６０cm) 溶出液 : 0.１Ｍクエン酸緩衝液pＨ＝6.0 溶出速度: ０.７５ml／分 また標識体０.２mlをＳＤ系雌ラットの尾静脈より投与
し、投与後１時間後における体内分布率を測定した。結
果を第１表に示す。対照としてヒト血清アルブミンに直
接ＤＴＰＡを結合させたＨＳＡ−ＤＴＰＡ−¹¹¹Ｉnのデ
−タを示した。結果から明らかなようにＰoly(Ｌys−Ｄ
ＴＰＡ)５.４のＨＳＡへの導入によってもタンパク質の
変性は認められずほぼ同様の分布の様相を示した。

【００２９】

【表１】 ラット体内分布試験 担体 HSA-Poly(Lys-DTPA)5.4*¹ HSA-DTPA*² 臓器 血液 83.0 88.0 肝臓 9.4 9.0 腎臓 2.7 2.0 肺臓 1.8 3.0 膀胱 0.7 0.7 注: ＊１ 単位は％／臓器で示す。 ＊２ 体重の６.４％を全血とした。

【００３０】実施例３ ヒト血清アルブミン−ポリリジン−ジエチレントリアミ
ン五酢酸(ＨＳＡ−Ｐoly Ｌys−ＤＴＰＡ)を含む組成物
の製造(２):− 実施例１と同様の方法で得たＨＳＡ−Ｐoly(Ｌys−ＤＴ
ＰＡ)を０.９％生理食塩液で希釈し、タンパク量として
２mg／mlとなるようにする。その液に塩化第１スズ(Ｓn
Ｃl₂)を１mＭになるように加え、メンブランフィルタ−
でろ過しながら無菌バイアルに１.５mlずつ分注し目的
とする組成物を得た。以上の操作は全て無菌的に行っ
た。

【００３１】実施例４ (ＨＳＡ−Ｐoly Ｌys−ＤＴＰＡ)−９９mＴc注射液の製
造及び性質:− 実施例３で得た組成を含むバイアルに２０mＣi／mlの市
販の過テクネチウム酸ナトリウム(９９mＴc)注射液を１
ml加え(ＨＳＡ−Ｐoly Ｌys−ＤＴＰＡ)−９９mＴc注射
液を得た。ここで得られた標識体について実施例１で示
した薄層クロマトグラフィ−法及び電気泳動法で標識率
を算出したところいずれも９０％以上の高い値が得られ
た。

【００３２】実施例５ 抗ミオシン抗体Ｆab−ポリリジン−ジエチレントリアミ
ン五酢酸(Ｆab−ＰolyＬys−ＤＴＰＡ)結合体を含む組
成物の製造(３):− 実施例１で得られるＰoly(Ｌys−ＤＴＰＡ)5.4,３mlを
とり、これに３−(２−ピリジルジチオ)プロピオン酸Ｎ
−ヒドロキシサクシンイミドエステル(ＳＰＤＰ)のジエ
チルスルフォキサイド液４０mg／ml, ０.１２mlを加え
マグネティックスタ−ラ−で撹拌しながら室温で３５時
間反応させる。反応液にメルカプトエタノ−ル０.０１
３mlを加え、さらに１時間反応させる。反応液はカット
オフ３,５００の透析チュ−ブに入れ０.０４Ｍリン酸緩
衝液−１mＭＥＤＴＡ液に対して透析した後、さらに同
一の緩衝液で平衡化したセファデックスＧ−２５カラム
(２２×３００mm)で未反応ＳＰＤＰを除去しＰoly(Ｌys
−ＤＴＰＡ)−ＳＨを得る。これとは別に抗ミオシン抗
体Ｆab１０mgを０.４Ｍリン酸緩衝液pＨ＝７.０に溶解
し、１０mg／ml液とし抗体溶液１mlに対してＮ−(γ−
マレイイミドブチルオキシ)サクシンイミド(ＧＭＢＳ)
４.２mg／ml−ＤＭＳＯ溶液０.０２mlを加え室温にて１
５分間撹拌して反応させる。この反応液に前述調製のＰ
oly−(Ｌys−ＤＴＰＡ)−ＳＨ, １.７×１０^-6mole／m
l, ２.４mlを加え、室温で一夜撹はんして反応させる。
反応液はカットオフ10,000の透析チュ−ブに入れ１Ｍ塩
化ナトリウム溶液、つづいて０.９％生理食塩液に対し
て透析する。透析後、反応液は０.９％生理食塩液で平
衡化したセファデックスＧ−５０カラム(２２×３００m
m)で未反応Ｐoly(Ｌys−ＤＴＰＡ)−ＳＨを除去し、抗
体Ｆab−Ｐoly(Ｌys−ＤＴＰＡ)を精製し得る。上記操
作はすべて無菌的に行うほか、ここで用いる器具、試薬
類は全て、実施例１で示した方法で無菌パイロジエンフ
リ−化(ＳＰＦ化)したものを用いた。ここで得られた抗
体Ｆab−Ｐoly(Ｌys−ＤＴＰＡ)０.８mg／ml液０.３ml
をとり、ＤＴＰＡ１０^-7mole／mlクエン酸緩衝液(pＨ＝
６.０)０.２ml及び塩化インジウム(¹¹¹Ｉn)注射液２mＣ
i／ml、０.２mlを加え下記条件の電気泳動法で分析し、
抗体１分子に結合しているポリマ−分子数を算出した。

【００３３】支持体 : セルロ−スアセテ−ト膜 泳動緩衝液: ０.０６Ｍベロナ−ル緩衝液 pＨ＝８.６ 泳動条件 : １mＡ／ｃm、２０分 上記反応条件の分析により得られた結合率は０.９分子
Ｐoly(Ｌys−ＤＴＰＡ)５.４／抗体Ｆabであった。ここ
で得たＦab−Ｐoly(Ｌys−ＤＴＰＡ)をタンパク量とし
て１mg／mlになるように０.１Ｍクエン酸緩衝液pＨ＝
６.０で希釈し、メンブランフィルタ−を通して無菌的
に０.５mlずつ無菌バイアルに充填し、目的とする組成
物を得た。

【００３４】実施例６ (Ｆab−Ｐoly Ｌys−ＤＴＰＡ)−¹¹¹Ｉn注射液の製造及
び性質:− 実施例５で得た組成物を含むバイアルに市販に塩化イン
ジウム(¹¹¹Ｉn)注射液(２mＣi／ml)０.５mlを加えて目
的とする注射液を得た。以上の操作は無菌的に行った。
ここで得られた標識体２５mlをとり、下記の条件の高速
液体クロマトグラフィ−法で分析したところ２量体の存
在率は１０％以下、未反応のポリマ−ならびにＤＴＰＡ
分画には、放射能は検出されなかった。

【００３５】カラム : 東洋ソ−ダ製 TSK−3000SW
カラム(０.７５×６０cm) 溶出液 : ０.１Ｍクエン酸緩衝液pＨ＝6.0 溶出速度: ０.７５ml／分 また、主成分の保持時間は約２３分であり、別に得た検
量線から計算すると、その分子量は60,000であった。こ
のような方法で調製した抗体Ｆab−Ｐoly(Ｌys−ＤＴＰ
Ａ)−¹¹¹Ｉnにつき、心筋ミオシンを抗原とするラジオ
メトリックアッセイ法で抗体活性を測定したところ１０
⁸・Ｍ^-1の親和定数が得られた。以上の結果から明らか
なようにＰoly(Ｌys−ＤＴＰＡ)が抗体Ｆabに導入され
ても抗体の免疫活性は失われなかった。

【００３６】実施例７ 抗腫瘍抗体１９−９Ｆab'−ポリリジン−ジエチレント
リアミン五酢酸結合体(１９−９Ｆab'−Ｐoly Ｌys−Ｄ
ＴＰＡ)を含む組成物の製造:− 実施例１で得られるＰoly(Ｌys−ＤＴＰＡ)５.４,２０m
g／mlリン酸緩衝液１.５mlに、Ｎ−(γ−マレイイミド
ブチルオキシ)サクシンイミド(ＧＭＢＳ)２.５２mgを加
え、室温で１５分間反応させる。この反応液１.２mlに
つき、抗腫瘍抗体１９−９Ｆab'１８.７mgを含む、０.
０４Ｍリン酸緩衝液−１mＭＥＤＴＡ液(pＨ＝６.０)３.
５mlを加え、室温で１８時間反応させた。反応液は１Ｍ
食塩液と０.９％生理食塩液に対して透析を行い、さら
に生理食塩液で平衡化したセファデックスＧ−７５カラ
ムを用いて精製した。以上の操作は、すべて無菌的に行
うほか、使用する器具、試薬類は全て実施例１で示した
方法でＳＰＦ化して用いた。ここで得た(１９−９Ｆab'
−Ｐoly Ｌys−ＤＴＰＡ)を生理食塩液で希釈し０.５mg
／ml(タンパク量)になる様にし、無菌バイアルに分注し
目的とする組成物を得た。

【００３７】実施例８ (１９−９Ｆab'−Ｐoly Ｌys−ＤＴＰＡ)−¹¹¹Ｉn注射
液の製造及び性質:−実施例７で得た組成物を含むバイ
アルに市販の塩化インジウム(¹¹¹Ｉn)注射液(２mＣi／m
l)１mlを無菌的に加える事により注射液を得た。このよ
うな方法で標識した抗体につき、１９−９抗原を固定し
たビ−ズを用いるイミノメトリックアッセイで免疫学的
活性を測定したところ、３×１０⁸Ｍ^-1の親和定数(Ｋa)
が得られた。ちなみに１９−９Ｆab'に直接２官能基配
位子であるジエチレントリアミン五酢酸を直接結合させ
たＦab'−ＤＴＰＡのＫa値も約３×１０⁸Ｍ^-1であっ
た。

【００３８】実施例９ ポリエチレンイミン−ジエチレントリアミン五酢酸(Ｐ
ＥＩ−ＤＴＰＡ)結合体の製造:− 平均分子量約70,000の側鎖を持つポリエチレンイミン
(ＰＥＩ)１０％水溶液を０.２Ｍリン酸緩衝液(pＨ７.
８)で希釈し、０.１％水溶液を調製する。この液にモル
量で１０倍量のジエチレントリアミン五酢酸サイクリッ
ク酸無水物を加え、室温にて一夜撹拌した。次にＰＥＩ
１分子当たりに結合しているＤＴＰＡの分子数を測定す
るために反応液２００μlをとり、これに０.１Ｍクエン
酸緩衝液(pＨ６.０)１００μlを加えて混合し、２mＣi
／mlの塩化インジウム(¹¹¹Ｉn)水溶液100μlを加えて標
識した。標識１時間後に下記の薄層クロマトグラフィ−
法によりＰＥＩ−ＤＴＰＡ−¹¹¹Ｉn(原点付近)と遊離の
¹¹¹Ｉn−ＤＴＰＡ(Ｒf値０.５〜０.７)とを分離し、そ
れぞれの放射能量を計測し、結合率を計算した。

【００３９】薄層板 : シリカゲルＧ薄層板(メルク社
製) 展開溶媒: メタノ−ル／１０％酢酸ナトリウム液(１／
１) 展開時間: 約１時間 この結果、上記反応性高分子化合物中においてＰＥＩ１
分子当たりＤＴＰＡ９個が結合していることが確認され
た。

【００４０】ポリエチレンイミン−ジエチレントリアミ
ン五酢酸(ＰＥＩ−ＤＴＰＡ)結合体の平均分子量の測
定:− 実施例９で得られたＰＥＩ−ＤＴＰＡにつき、下記の条
件の高速液体クロマトグラフィ−を行い、平均分子量を
測定した。 カラム : ＴＳＫ−３０００SW 溶媒 : 0.1Ｍクエン酸緩衝液 pＨ＝6.0 圧力 : ３８０psi 流速 : ０.７５ml／min 吸光波長: ２８０nm この系でのＰＥＩ−ＤＴＰＡの保持時間は約２４分、遊
離のＤＴＰＡの保持時間は約３５分であった。分子量既
知の標準タンパク質を用いて得られた標準曲線より上記
ＰＥＩ−ＤＴＰＡの平均分子量は約100,000と計算され
た。

【００４１】

【発明の効果】上記したところから明らかなように、本
発明の高分子化合物、すなわち反応性高分子化合物
(Ａ)、生理活性物質結合高分子化合物(Ｂ)および放射性
金属元素結合高分子化合物(Ｃ)は、いずれも新規物質で
あり、反応性高分子化合物(Ａ)および生理活性物質結合
高分子化合物(Ｂ)の化学構造上の特徴に鑑み、１分子当
り比較的多数の放射性金属元素を含有する、放射性医薬
品として有用な放射性金属元素結合高分子化合物(Ｃ)を
提供することが出来る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ａ６１Ｋ 39/395 Ａ６１Ｋ 43/00 (72)発明者 上田 信夫 千葉県君津郡袖ケ浦町長浦駅前２丁目11番 地の14

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 少なくとも１個の遊離アミノ基を有する
   反応性高分子化合物(Ａ)に存在する遊離アミノ基の少な
   くとも１個に生理活性物質(３)が結合して成る生理活性
   物質結合高分子化合物(Ｂ)(ただし、前記反応性高分子
   化合物(Ａ)は、分子量約５００〜１,０００,０００のポ
   リリジンおよび分子量約５００〜５００,０００のポリ
   イミンから選択された分子中に少なくとも３個のアミノ
   基を有するポリアミン化合物(１)と、カルボキシル基ま
   たはそれから誘導された反応性基を有する２官能性配位
   子化合物(２)とが、前者１分子当たり後者少なくとも２
   分子の割合において、前者のアミノ基と後者のカルボキ
   シル基またはそれから誘導された反応性基との間で形成
   されるアミド結合(−ＣＯＮＨ−)を介して結合して成る
   ものである)。
2. 【請求項２】 少なくとも１個の遊離アミノ基を有する
   反応性高分子化合物(Ａ)に存在する遊離アミノ基の少な
   くとも１個に生理活性物質(３)が結合して成る生理活性
   物質結合高分子化合物(Ｂ)を必須成分とする放射性医薬
   品調製用キャリアー(ただし、前記反応性高分子化合物
   (Ａ)は、分子量約５００〜１,０００,０００のポリリジ
   ンおよび分子量約５００〜５００,０００のポリイミン
   から選択された分子中に少なくとも３個のアミノ基を有
   するポリアミン化合物(１)と、カルボキシル基またはそ
   れから誘導された反応性基を有する２官能性配位子化合
   物(２)とが、前者１分子当たり後者少なくとも２分子の
   割合において、前者のアミノ基と後者のカルボキシル基
   またはそれから誘導された反応性基との間で形成される
   アミド結合(−ＣＯＮＨ−)を介して結合して成るもので
   ある)。