JPH0821830A - 液体クロマトグラフィ連続分離・精製方法及び装置 - Google Patents
液体クロマトグラフィ連続分離・精製方法及び装置Info
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- JPH0821830A JPH0821830A JP6157419A JP15741994A JPH0821830A JP H0821830 A JPH0821830 A JP H0821830A JP 6157419 A JP6157419 A JP 6157419A JP 15741994 A JP15741994 A JP 15741994A JP H0821830 A JPH0821830 A JP H0821830A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 この発明は、目的物質の分離・精製の精度を
向上させ、かつ所要時間を短縮させることを目的とした
ものである。 【構成】 同一特性を有する長さの異なる２本の分離カ
ラムの、先づ短かい分離カラムに目的物質を短時間分取
し、ついで長い分離カラムへ目的物質を送り、長い時間
をかけて分離・精製することを特徴とした液体クロマト
グラフィ連続分離・精製方法。同一特性を有する長、短
２本の分離カラムと、２台の送液ポンプとにより、溶離
液槽と廃液槽との間に並列処理系を構成すると共に、前
記並列処理系へ、切り替え手段を介装して、長、短２本
の分離カラムを直列処理系又は並列処理系に切替え可能
としたことを特徴とする液体クロマトグラフィ連続分離
・精製装置。
向上させ、かつ所要時間を短縮させることを目的とした
ものである。 【構成】 同一特性を有する長さの異なる２本の分離カ
ラムの、先づ短かい分離カラムに目的物質を短時間分取
し、ついで長い分離カラムへ目的物質を送り、長い時間
をかけて分離・精製することを特徴とした液体クロマト
グラフィ連続分離・精製方法。同一特性を有する長、短
２本の分離カラムと、２台の送液ポンプとにより、溶離
液槽と廃液槽との間に並列処理系を構成すると共に、前
記並列処理系へ、切り替え手段を介装して、長、短２本
の分離カラムを直列処理系又は並列処理系に切替え可能
としたことを特徴とする液体クロマトグラフィ連続分離
・精製装置。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】この発明は目的物質の分離・精製
の精度を向上させ、かつ所要時間を短縮させることを目
的とした液体クロマトグラフィ連続分離・精製方法及び
装置に関する。
の精度を向上させ、かつ所要時間を短縮させることを目
的とした液体クロマトグラフィ連続分離・精製方法及び
装置に関する。
【０００２】
【従来の技術】液体クロマトグラフィによる分離・精製
法の基本構成は、１本の分離カラムに対して１または２
種類の特性の異なる溶離液を１台または２台の液送ポン
プで供給する構成からなつている（例えば特開昭６３−
８５５５号）。または２本の分離カラムに対して、それ
ぞれ異なる特性の２種類の溶離液を２台のポンプで液送
できる構造となっている。あるいは分離・精製機能を向
上させる補助的手段として、２本の同一特性あるいは異
なる特性の分離カラムを直列に接続することによって分
離カラムを延長した効果を期待し１種類の溶離液を１台
のポンプで液送する場合もある。
法の基本構成は、１本の分離カラムに対して１または２
種類の特性の異なる溶離液を１台または２台の液送ポン
プで供給する構成からなつている（例えば特開昭６３−
８５５５号）。または２本の分離カラムに対して、それ
ぞれ異なる特性の２種類の溶離液を２台のポンプで液送
できる構造となっている。あるいは分離・精製機能を向
上させる補助的手段として、２本の同一特性あるいは異
なる特性の分離カラムを直列に接続することによって分
離カラムを延長した効果を期待し１種類の溶離液を１台
のポンプで液送する場合もある。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】液体クロマトグラフィ
の原理は、各成分を分離させることにある。したがって
原理的に各成分の分離精度の向上に伴って、所要時間は
延長されることになり、一度各成分の分離の精度を向上
させた条件下での液体クロマトグラフィーによる分離・
精製を行った後には、目的以外の成分の流失が継続し、
２回目の分離・精製操作ができないという問題点があつ
た。
の原理は、各成分を分離させることにある。したがって
原理的に各成分の分離精度の向上に伴って、所要時間は
延長されることになり、一度各成分の分離の精度を向上
させた条件下での液体クロマトグラフィーによる分離・
精製を行った後には、目的以外の成分の流失が継続し、
２回目の分離・精製操作ができないという問題点があつ
た。
【０００４】通常、分離・精製機能を向上させる補助的
手段として２本の同一特性の分離カラムを直列に接続
し、１種類の溶離液を１台のポンプで液送する場合があ
る。この場合には、所要時間が延長されることになる。
他方、特性の異なる２本の分離カラムを用い、目的とす
る成分がそれぞれの分離カラムに適する特性の異なる２
種類の溶離液を２台のポンプで液送できる構成により、
分離・精製の機能を向上させようとする方法がある。こ
の方法は最初の分離カラム（通常短い分離カラム：プレ
カラム）で短時間に分取し、その後の分離カラムで目的
物質の分離・精製をすることにより、主に目的物質の分
離・精製用の分離カラムの保護を目的とした方法があ
る。この場合には次の問題点がある。
手段として２本の同一特性の分離カラムを直列に接続
し、１種類の溶離液を１台のポンプで液送する場合があ
る。この場合には、所要時間が延長されることになる。
他方、特性の異なる２本の分離カラムを用い、目的とす
る成分がそれぞれの分離カラムに適する特性の異なる２
種類の溶離液を２台のポンプで液送できる構成により、
分離・精製の機能を向上させようとする方法がある。こ
の方法は最初の分離カラム（通常短い分離カラム：プレ
カラム）で短時間に分取し、その後の分離カラムで目的
物質の分離・精製をすることにより、主に目的物質の分
離・精製用の分離カラムの保護を目的とした方法があ
る。この場合には次の問題点がある。
【０００５】第１の問題点は、特性の異なる２本の分離
カラムに対して、目的とする成分がそれぞれの分離カラ
ムに適する特性の異なる２種類の溶離液を選択しなけれ
ばならない。
カラムに対して、目的とする成分がそれぞれの分離カラ
ムに適する特性の異なる２種類の溶離液を選択しなけれ
ばならない。
【０００６】第２の問題点は、最初の短い分離カラムで
分取した成分を含む分画を、その後長い分離カラムに導
く際、最初の分離カラムに適する特性の溶離液が目的物
質の分離・精製用のカラムに多量に流入され目的物質の
分離・精製条件が不安定となり実用性に乏しい。
分取した成分を含む分画を、その後長い分離カラムに導
く際、最初の分離カラムに適する特性の溶離液が目的物
質の分離・精製用のカラムに多量に流入され目的物質の
分離・精製条件が不安定となり実用性に乏しい。
【０００７】
【課題を解決する為の手段】通常の液体クロマトグラフ
ィによる分離・精製の主目的は、すべての成分を分離す
ることなく、目的物質を選択的に分離するところにあ
る。そこで液体クロマトグラフィの各成分の分離精度と
所要時間に関する相反する矛盾の解決について、分離・
精製に関する研究を行った結果、液体クロマトグラフィ
の原理にしたがって目的とする成分の分離には長い時間
をかけ、その他の成分の分離には短時間で行うことによ
り、目的物質の分離・精製の精度を向上させ、かつ所要
時間を短縮できることが判明した。
ィによる分離・精製の主目的は、すべての成分を分離す
ることなく、目的物質を選択的に分離するところにあ
る。そこで液体クロマトグラフィの各成分の分離精度と
所要時間に関する相反する矛盾の解決について、分離・
精製に関する研究を行った結果、液体クロマトグラフィ
の原理にしたがって目的とする成分の分離には長い時間
をかけ、その他の成分の分離には短時間で行うことによ
り、目的物質の分離・精製の精度を向上させ、かつ所要
時間を短縮できることが判明した。
【０００８】そこで同一特性を有する長さの異なる２本
の分離カラムに対して、１種類の溶離液をそれぞれの分
離カラムに供給可能な２台の液送ポンプで構成すること
により、前記問題点を解決することに成功したのであ
る。
の分離カラムに対して、１種類の溶離液をそれぞれの分
離カラムに供給可能な２台の液送ポンプで構成すること
により、前記問題点を解決することに成功したのであ
る。
【０００９】即ち方法の発明は同一特性を有する長さの
異なる２本の分離カラムの、先づ短かい分離カラムに短
時間分取し、ついで長い分離カラムへ目的物質を送り、
長い時間をかけて分離・精製することを特徴とした液体
クロマトグラフィ連続分離・精製方法である。
異なる２本の分離カラムの、先づ短かい分離カラムに短
時間分取し、ついで長い分離カラムへ目的物質を送り、
長い時間をかけて分離・精製することを特徴とした液体
クロマトグラフィ連続分離・精製方法である。
【００１０】また装置の発明は同一特性を有する長、短
２本の分離カラムと、２台の送液ポンプとにより、溶離
液槽と廃液槽との間に並列処理系を構成すると共に、前
記並列処理系へ、切り替え手段を介装して、長、短２本
の分離カラムを直列処理系又は並列処理系に切替え可能
としたことを特徴とする液体クロマトグラフィ連続分離
・精製装置である。次に短かい分離カラムの並列処理系
へ、試料注入部及びモニター用検出器を介装したことを
特徴とするものであり、長い分離カラムの並列処理系
へ、分析用検出器を介装したことを特徴とするものであ
る。
２本の分離カラムと、２台の送液ポンプとにより、溶離
液槽と廃液槽との間に並列処理系を構成すると共に、前
記並列処理系へ、切り替え手段を介装して、長、短２本
の分離カラムを直列処理系又は並列処理系に切替え可能
としたことを特徴とする液体クロマトグラフィ連続分離
・精製装置である。次に短かい分離カラムの並列処理系
へ、試料注入部及びモニター用検出器を介装したことを
特徴とするものであり、長い分離カラムの並列処理系
へ、分析用検出器を介装したことを特徴とするものであ
る。
【００１１】
【作用】この発明によれば、同一性能を有する長さの異
なる２本の分離カラム及び１種類の溶離液をそれぞれの
分離カラムに供給可能な２台の液送ポンプから構成され
た液体クロマトグラフィにより、最初の短い分離カラム
で短時間に分取し、その後、長い分離カラムで十分な時
間をかけて目的物質の分離・精製の精度を向上させるこ
とにより安定した条件のもとで、短い分離カラムで目的
物質以外の成分を洗淨に相当する操作により所要時間を
短縮し、短かい間隔で連続分離・精製できる。また短か
い分離カラムが、分離・精製用の長い分離カラムの保護
的作用をもたらし極めて経済的となる。
なる２本の分離カラム及び１種類の溶離液をそれぞれの
分離カラムに供給可能な２台の液送ポンプから構成され
た液体クロマトグラフィにより、最初の短い分離カラム
で短時間に分取し、その後、長い分離カラムで十分な時
間をかけて目的物質の分離・精製の精度を向上させるこ
とにより安定した条件のもとで、短い分離カラムで目的
物質以外の成分を洗淨に相当する操作により所要時間を
短縮し、短かい間隔で連続分離・精製できる。また短か
い分離カラムが、分離・精製用の長い分離カラムの保護
的作用をもたらし極めて経済的となる。
【００１２】この発明は通常使用されるすべての液体ク
ロマトグラフィによる分離・精製に適用できる。
ロマトグラフィによる分離・精製に適用できる。
【００１３】
【実施例１】β−カロチンの液体クロマトグラフィによ
る定量は、通常β−カロチンの持つ極大波長である４５
０ｎｍで測定される。しかし血清中のβ−カロチンの定
量の場合には、その含有量およそ０．１μｇ／ml濃度で
あり極めて低い濃度であるため吸光度法では測定が困難
である。そこでβ−カロチンが酸化されやすいことに注
目して、電気化学的酸化検出法で行われる。
る定量は、通常β−カロチンの持つ極大波長である４５
０ｎｍで測定される。しかし血清中のβ−カロチンの定
量の場合には、その含有量およそ０．１μｇ／ml濃度で
あり極めて低い濃度であるため吸光度法では測定が困難
である。そこでβ−カロチンが酸化されやすいことに注
目して、電気化学的酸化検出法で行われる。
【００１４】血清中のβ−カロチンの定量は、特にβ−
カロチンは酸化されやすいため、通常あらかじめ酸化防
止剤としてＢＨＴを添加した後、メタノール：クロロホ
ルム溶液で抽出した試料について電気化学検出器を使用
した液体クロマトグラフィで行われる。
カロチンは酸化されやすいため、通常あらかじめ酸化防
止剤としてＢＨＴを添加した後、メタノール：クロロホ
ルム溶液で抽出した試料について電気化学検出器を使用
した液体クロマトグラフィで行われる。
【００１５】通常行われる電気化学的酸化検出−液体ク
ロマトグラフィによる血清中のβ−カロチンの定量時の
測定条件及びその時の液体クロマトグラムの１例を図３
に示す。
ロマトグラフィによる血清中のβ−カロチンの定量時の
測定条件及びその時の液体クロマトグラムの１例を図３
に示す。
【００１６】 電気化学的酸化検出−液体クロマトグラフィ測定条件 分離カラム（１本）：Superiorex ODS 長さ：２５ｃｍ、内径：４．６ｍｍ 溶離液：アセトニトリル：メタノール：イソプロピールアルコール ＝６０：１０：３０（過塩素酸ナトリウム０．７ｇ／１００mlを含む） 流速： １．５ml／min 検出器：Coulochem Model 5100Ａ（ｅｓａ） 酸化電位：＋０．７Ｖ
【００１７】このクロマトグラム（図３）は、抽出した
試料を液体クロマトグラフィに注入した後、第１回目の
クロマトグラムである。試料注入後、約１４分後にβ−
カロチンが他の成分と分離され記録されているので定量
が可能である。しかしここで問題となるのは、試料注入
後、約２４分頃より多くのその他の成分が流出しはじ
め、およそ１時間測定不能状態が継続する。すなわち高
い検出感度で観測すればするほど目的物質以外の成分も
検出される結果となった。
試料を液体クロマトグラフィに注入した後、第１回目の
クロマトグラムである。試料注入後、約１４分後にβ−
カロチンが他の成分と分離され記録されているので定量
が可能である。しかしここで問題となるのは、試料注入
後、約２４分頃より多くのその他の成分が流出しはじ
め、およそ１時間測定不能状態が継続する。すなわち高
い検出感度で観測すればするほど目的物質以外の成分も
検出される結果となった。
【００１８】そこでこの発明の、同一特性を有する長さ
の異なる２本の分離カラム及び１種類の溶離液をそれぞ
れの分離カラムに供給可能な２台の液送ポンプからなる
液体クロマトグラフィによる分離装置により、前記の血
清より抽出した試料について血清中のβ−カロチンを定
量した。
の異なる２本の分離カラム及び１種類の溶離液をそれぞ
れの分離カラムに供給可能な２台の液送ポンプからなる
液体クロマトグラフィによる分離装置により、前記の血
清より抽出した試料について血清中のβ−カロチンを定
量した。
【００１９】 電気化学的酸化検出−液体クロマトグラフィ測定条件 分離カラム（短いカラム）１：Superiorex ODS 長さ：５ｃｍ、内径：４．６ｍｍ 分離カラム（長いカラム）２：Superiorex ODS 長さ：２５ｃｍ、内径：４．６ｍｍ 溶離液：アセトニトリル：メタノール：イソプロピールアルコール ＝６０：１０：３０（過塩素酸ナトリウム０．７ｇ／１００mlを含む） 流速： １．５ml／min 検出器：Coulochem Model 5100Ａ（ｅｓａ） 酸化電位：＋０．７Ｖ
【００２０】第１段階の操作 図１の状態で常法によりβ−カロチンのみが含有する溶
液を試料注入部８より導入し、モニター用検出器６を用
い目的物質の流出時間帯（ｔ1 ：２分、ｔ2 ：４．５
分：分画）を予め決定する（この間、分析用の長い分離
カラム２は溶離液の液送ポンプ４及び溶離液９により安
定化される。）。
液を試料注入部８より導入し、モニター用検出器６を用
い目的物質の流出時間帯（ｔ1 ：２分、ｔ2 ：４．５
分：分画）を予め決定する（この間、分析用の長い分離
カラム２は溶離液の液送ポンプ４及び溶離液９により安
定化される。）。
【００２１】第２段階の操作 図１の状態で血清より抽出した試料溶液を試料注入部８
より導入し、予め決定第１段階の操作によりもとめた目
的物質の流出時間帯（ｔ1 〜ｔ2 ：分画）の時間：
ｔ1 ：２分の少し前になったら溶離液の流路切り替えバ
ルブ７の操作により、図２の状態とし、目的物質を分析
用の長い分離カラム２に導入する（この間溶離液の液送
ポンプ３は液送を継続している。）。
より導入し、予め決定第１段階の操作によりもとめた目
的物質の流出時間帯（ｔ1 〜ｔ2 ：分画）の時間：
ｔ1 ：２分の少し前になったら溶離液の流路切り替えバ
ルブ７の操作により、図２の状態とし、目的物質を分析
用の長い分離カラム２に導入する（この間溶離液の液送
ポンプ３は液送を継続している。）。
【００２２】第３段階の操作 先の第１段階の操作により求めたβ−カロチンの流出時
間帯（ｔ1 〜ｔ2 ：分画）の時間：ｔ2 ：４．５分の少
し後になったら溶離液の流路切り替えバルブ７の操作に
より、再度図１の常態に戻し、β−カロチンを分析用の
長い分離カラム２で時間を十分にかけて分離・精製を行
う。この状態でβ−カロチンを分析用検出器５により目
的物質の流出を検出する（この時、分取用の短い分離カ
ラム１及び分析用の長い分離カラム２には、同一組成の
溶離液９が常時流れるため安定した分離・精製条件下で
実施できる。）。
間帯（ｔ1 〜ｔ2 ：分画）の時間：ｔ2 ：４．５分の少
し後になったら溶離液の流路切り替えバルブ７の操作に
より、再度図１の常態に戻し、β−カロチンを分析用の
長い分離カラム２で時間を十分にかけて分離・精製を行
う。この状態でβ−カロチンを分析用検出器５により目
的物質の流出を検出する（この時、分取用の短い分離カ
ラム１及び分析用の長い分離カラム２には、同一組成の
溶離液９が常時流れるため安定した分離・精製条件下で
実施できる。）。
【００２３】この間、分取用の短い分離カラム１は溶離
液の液送ポンプ３及び溶離液９により洗浄される（この
時、分取用の短い分離カラム１は分析用の長い分離カラ
ム２に比べ長さが短いために、短時間に洗浄されること
になる。）。
液の液送ポンプ３及び溶離液９により洗浄される（この
時、分取用の短い分離カラム１は分析用の長い分離カラ
ム２に比べ長さが短いために、短時間に洗浄されること
になる。）。
【００２４】通常行われている電気化学的酸化検出−液
体クロマトグラフィによる血清中のβ−カロチンの定量
にこの発明の方法を適用した時の液体クロマトグラムの
１例を図４に示す。
体クロマトグラフィによる血清中のβ−カロチンの定量
にこの発明の方法を適用した時の液体クロマトグラムの
１例を図４に示す。
【００２５】このクロマトグラムは、抽出した試料を液
体クロマトグラフィに注入した後、第１回目のクロマト
グラムである。試料注入後、約１８分後にβ−カロチン
が他の成分と分離され記録されているので定量が可能で
ある。しかも常法で問題となった他の成分の流出は試料
注入後、約２０分後頃にはなくなり、第２回目の測定が
可能となった。
体クロマトグラフィに注入した後、第１回目のクロマト
グラムである。試料注入後、約１８分後にβ−カロチン
が他の成分と分離され記録されているので定量が可能で
ある。しかも常法で問題となった他の成分の流出は試料
注入後、約２０分後頃にはなくなり、第２回目の測定が
可能となった。
【００２６】
【実施例２】経腸栄養剤など混合物系のビタミンＫは、
その生理活性及び生体必要性からその含有量およそ０．
１μｇ／ml濃度であり極めて低い濃度であるため吸光度
法では測定が困難である。そこでビタミンＫが還元−酸
化されやすいことに注目して、電気化学的酸化検出法で
行われる。
その生理活性及び生体必要性からその含有量およそ０．
１μｇ／ml濃度であり極めて低い濃度であるため吸光度
法では測定が困難である。そこでビタミンＫが還元−酸
化されやすいことに注目して、電気化学的酸化検出法で
行われる。
【００２７】経腸栄養剤は一般に脂質を含有しているた
めビタミンＫの定量時には、通常あらかじめ経腸栄養剤
をリパーゼで処理した後、ｎ−ベンタンで抽出した試料
について電気化学検出器を使用した液体クロマトグラフ
ィで行われる。通常行われる電気化学的還元−酸化検出
−液体クロマトグラフィによる経腸栄養剤中のビタミン
Ｋの定量時の測定条件及びその時の液体クロマトグラム
の１例を図５に示す。
めビタミンＫの定量時には、通常あらかじめ経腸栄養剤
をリパーゼで処理した後、ｎ−ベンタンで抽出した試料
について電気化学検出器を使用した液体クロマトグラフ
ィで行われる。通常行われる電気化学的還元−酸化検出
−液体クロマトグラフィによる経腸栄養剤中のビタミン
Ｋの定量時の測定条件及びその時の液体クロマトグラム
の１例を図５に示す。
【００２８】 電気化学的還元−酸化検出−液体クロマトグラフィ測定条件 分離カラム（１本）：Hitachi Gel 3056 長さ：２５ｃｍ、内径：４．６ｍｍ 溶離液：メタノール：エタノール：過塩素酸 ＝６００：４００：１．５ （過塩素酸ナトリウム０．７ｇ／１００mlを含む） 流速： １．０ml／min 検出器：Coulochem Model 5100Ａ（ｅｓａ） 還元電位：−０．６Ｖ、酸化電位：＋０．１Ｖ
【００２９】このクロマトグラムは、抽出した試料を液
体クロマトグラフィに注入した後、第１回目のクロマト
グラムである。試料注入後、約９分後にビタミンＫが他
の成分と分離され記録されているので定量が可能であ
る。しかしここで問題となるのは、試料注入後、継続し
てその他の成分が流出し、およそ１時間測定不能状態が
継続する。すなわち高い検出感度で観測すればするほど
目的物質以外の成分も検出される結果となった。
体クロマトグラフィに注入した後、第１回目のクロマト
グラムである。試料注入後、約９分後にビタミンＫが他
の成分と分離され記録されているので定量が可能であ
る。しかしここで問題となるのは、試料注入後、継続し
てその他の成分が流出し、およそ１時間測定不能状態が
継続する。すなわち高い検出感度で観測すればするほど
目的物質以外の成分も検出される結果となった。
【００３０】そこでこの発明の、同一特性を有する長さ
の異なる２本の分離カラム及び１種類の溶離液をそれぞ
れの分離カラムに供給可能な２台の液送ポンプからなる
液体クロマトグラフィによる分離方法及び装置により、
前記経腸栄養剤から抽出した試料について経腸栄養剤中
のビタミンＫを定量した。
の異なる２本の分離カラム及び１種類の溶離液をそれぞ
れの分離カラムに供給可能な２台の液送ポンプからなる
液体クロマトグラフィによる分離方法及び装置により、
前記経腸栄養剤から抽出した試料について経腸栄養剤中
のビタミンＫを定量した。
【００３１】 電気化学的酸化検出−液体クロマトグラフィ測定条件 分離カラム（短いカラム）１：Hitachi Gel 3056 長さ：５ｃｍ、内径：４．６ｍｍ 分離カラム（長いカラム）２：Superiorex ODS 長さ：２０ｃｍ、内径：４．６ｍｍ 溶離液：メタノール：エタノール：過塩素酸 ＝６００：４００：１．５ （過塩素酸ナトリウム０．７ｇ／１００mlを含む） 流速： １．０ml／min 検出器：Coulochem Model 5100Ａ（ｅｓａ） 還元電位：−０．６Ｖ、酸化電位：＋０．１Ｖ
【００３２】第１段階の操作 図１の状態で常法によりビタミンＫのみが含有する溶液
を試料注入部８より導入し、モニター用検出器６を用い
目的物質の流出時間帯（ｔ1 ：２分、ｔ2 ：６分：分
画）を予め決定する。
を試料注入部８より導入し、モニター用検出器６を用い
目的物質の流出時間帯（ｔ1 ：２分、ｔ2 ：６分：分
画）を予め決定する。
【００３３】第２段階の操作 図１の状態で経腸栄養剤より抽出した試料溶液を試料注
入部８より導入し、予め決定した第１段階の操作により
もとめた目的物質の流出時間帯（ｔ1 〜ｔ2 ：分画）の
時間：ｔ1 ：２分の少し前になったら溶離液の流路切り
替えバルブの操作により、図２の状態とし、目的物質を
分析用の長い分離カラム２に導入する。
入部８より導入し、予め決定した第１段階の操作により
もとめた目的物質の流出時間帯（ｔ1 〜ｔ2 ：分画）の
時間：ｔ1 ：２分の少し前になったら溶離液の流路切り
替えバルブの操作により、図２の状態とし、目的物質を
分析用の長い分離カラム２に導入する。
【００３４】第３段階の操作 先の第１段階の操作により求めたビタミンＫの流出時間
帯（ｔ1 〜ｔ2 ：分画）の時間：ｔ2 ：６分の少し後に
なったら溶離液の流路切り替えバルブ７の操作により、
再度図１の常態に戻し、ビタミンＫを分析用の長い分離
カラム２で時間を十分にかけて分離・精製を行う。この
状態でビタミンＫを分析用検出器５により目的物質の流
出を検出する。
帯（ｔ1 〜ｔ2 ：分画）の時間：ｔ2 ：６分の少し後に
なったら溶離液の流路切り替えバルブ７の操作により、
再度図１の常態に戻し、ビタミンＫを分析用の長い分離
カラム２で時間を十分にかけて分離・精製を行う。この
状態でビタミンＫを分析用検出器５により目的物質の流
出を検出する。
【００３５】この間、分取用の短い分離カラム１は溶離
液の液送ポンプ３及び溶離液９により洗浄される（この
時、分取用の短い分離カラム１は分析用の長い分離カラ
ム２に比べ長さが短いために、短時間に洗浄されること
になる。）。
液の液送ポンプ３及び溶離液９により洗浄される（この
時、分取用の短い分離カラム１は分析用の長い分離カラ
ム２に比べ長さが短いために、短時間に洗浄されること
になる。）。
【００３６】通常行われている電気化学的酸化検出−液
体クロマトグラフィによる経腸栄養剤中のビタミンＫの
定量にこの発明の方法を適用した時の液体クロマトグラ
ムの１例を図６に示す。
体クロマトグラフィによる経腸栄養剤中のビタミンＫの
定量にこの発明の方法を適用した時の液体クロマトグラ
ムの１例を図６に示す。
【００３７】このクロマトグラムは、抽出した試料を液
体クロマトグラフィに注入した後、第１回目のクロマト
グラムである。試料注入後、約９分後にビタミンＫが他
の成分と分離され記録されているので定量が可能であ
る。しかも常法で問題となった他の成分の流出は試料注
入後、約１８分頃にはなくなり、第２回目の測定が可能
となった。
体クロマトグラフィに注入した後、第１回目のクロマト
グラムである。試料注入後、約９分後にビタミンＫが他
の成分と分離され記録されているので定量が可能であ
る。しかも常法で問題となった他の成分の流出は試料注
入後、約１８分頃にはなくなり、第２回目の測定が可能
となった。
【００３８】
【実施例３】この発明の実施例を図１、２について説明
する。図１において、２つの液送ポンプ３、４の吸入パ
イプ１１、１２の端部を溶離液槽９ａ内に挿入し、液送
ポンプ３、４、の吐出パイプ１３、１４の端部を夫々流
路切り替えバルブ７の供給口１５、１６に連結する。
する。図１において、２つの液送ポンプ３、４の吸入パ
イプ１１、１２の端部を溶離液槽９ａ内に挿入し、液送
ポンプ３、４、の吐出パイプ１３、１４の端部を夫々流
路切り替えバルブ７の供給口１５、１６に連結する。
【００３９】また前記流路切り替えバルブ７には、短か
い分離カラム１を介装した連結パイプ１７の両端を連結
する供給口１８と、排出口１９が設けられると共に、排
出口２０、２１が設けられており、、前記各供給口と各
排出口とは、同一円上へ、等間隔に配列され、前記流路
切り替えバルブ７の連通路２２、２３、２４により隣接
口相互に断接できるようにしてある。前記排出口２０に
は、モニター用検出器６を介装した排出パイプ２５の一
端が連結され、排出パイプ２５の他端は廃液槽１０に挿
入されている。また排出口２１には、長い分離カラム２
と分析用検出器５を介装した排出パイプ２６の一端が連
結され他端は廃液槽１０に挿入されている。また前記吐
出パイプ１３には試料注入部８が連設されている。
い分離カラム１を介装した連結パイプ１７の両端を連結
する供給口１８と、排出口１９が設けられると共に、排
出口２０、２１が設けられており、、前記各供給口と各
排出口とは、同一円上へ、等間隔に配列され、前記流路
切り替えバルブ７の連通路２２、２３、２４により隣接
口相互に断接できるようにしてある。前記排出口２０に
は、モニター用検出器６を介装した排出パイプ２５の一
端が連結され、排出パイプ２５の他端は廃液槽１０に挿
入されている。また排出口２１には、長い分離カラム２
と分析用検出器５を介装した排出パイプ２６の一端が連
結され他端は廃液槽１０に挿入されている。また前記吐
出パイプ１３には試料注入部８が連設されている。
【００４０】前記実施例において、既知の成分（標準物
質）のみを含有する溶液を試料注入部８から矢示２７の
ように導入すると、吐出パイプ１３を矢示２８のように
移動するので、モニター用検出器６を用いて目的物質の
流出時間帶（ｔ1 〜ｔ2 ：分画）を予め決定する。この
間における分析用の長い分離カラム２は、液送ポンプ４
及び溶離液９により安定化される。
質）のみを含有する溶液を試料注入部８から矢示２７の
ように導入すると、吐出パイプ１３を矢示２８のように
移動するので、モニター用検出器６を用いて目的物質の
流出時間帶（ｔ1 〜ｔ2 ：分画）を予め決定する。この
間における分析用の長い分離カラム２は、液送ポンプ４
及び溶離液９により安定化される。
【００４１】図１の状態で分離・精製しようとする溶液
を試料注入部より導入し、予め求めた時間により目的物
質の流出時間帶の時間の少し前になつたならば流路切り
替えバルブ７を操作して（図１中矢示２９のように回転
して）図２の配管関係にし、目的物質を矢示３０のよう
に長い分離カラム２に導入する。この場合に液送ポンプ
３は液送を継続している。
を試料注入部より導入し、予め求めた時間により目的物
質の流出時間帶の時間の少し前になつたならば流路切り
替えバルブ７を操作して（図１中矢示２９のように回転
して）図２の配管関係にし、目的物質を矢示３０のよう
に長い分離カラム２に導入する。この場合に液送ポンプ
３は液送を継続している。
【００４２】前記のようにして最初に求めた目的物質の
流出時間帶ｔ2 の少し後になったならば流路切り替えバ
ルブ７を再び切り替えて、図１の状態に戻し長い分離カ
ラム２で十分の時間をかけて分離・精製を行なう。この
状態で目的物質を分析用検出器により検出するが、短か
い分離カラム１及び長い分離カラム２には同一組成の溶
離液９が常時流れるため安定した分離・精製の条件下で
実施できる。
流出時間帶ｔ2 の少し後になったならば流路切り替えバ
ルブ７を再び切り替えて、図１の状態に戻し長い分離カ
ラム２で十分の時間をかけて分離・精製を行なう。この
状態で目的物質を分析用検出器により検出するが、短か
い分離カラム１及び長い分離カラム２には同一組成の溶
離液９が常時流れるため安定した分離・精製の条件下で
実施できる。
【００４３】この間に短かい分離カラム１は、液送ポン
プ３により運ばれる溶離液により洗浄される。この分離
カラム１は短い為に比較的短時間に洗浄される。
プ３により運ばれる溶離液により洗浄される。この分離
カラム１は短い為に比較的短時間に洗浄される。
【００４４】
【発明の効果】この発明は、通常のすべての液体クロマ
トグラフィによる分離・精製に適用できる極めて汎用性
の高い方法であり、しかも短い間隔で連続分離・精製で
き所要時間が短縮される。また、短い分離カラムが分離
・精製用の長い分離カラムの保護的作用をもたらし極め
て経済的となる。
トグラフィによる分離・精製に適用できる極めて汎用性
の高い方法であり、しかも短い間隔で連続分離・精製で
き所要時間が短縮される。また、短い分離カラムが分離
・精製用の長い分離カラムの保護的作用をもたらし極め
て経済的となる。
【図１】この発明の実施例の配管概畧図。
【図２】同じく図１の流路を切り替えた場合の配管概畧
図。
図。
【図３】β−カロチンの分析の一例を示す電流−保持時
間グラフ。
間グラフ。
【図４】この発明を用いたβ−カロチンの分析の一例を
示す電流−保持時間グラフ。
示す電流−保持時間グラフ。
【図５】ビタミンＫの分析の一例を示す電流−保持時間
グラフ。
グラフ。
【図６】この発明を用いたビタミンＫの分析の一例を示
す電流−保持時間グラフ。
す電流−保持時間グラフ。
１ 短い分離カラム ２ 長い分離カラム ３、４ 送液ポンプ ５ 分析用検出器 ６ モニター用検出器 ７ 流路切り替えバルブ ８ 試料注入部 ９ 溶離液 ９ａ 溶離液槽 １０ 廃液槽 １１、１２ 吸入パイプ １３、１４ 吐出パイプ １５、１６、１８ 供給口 １７ 連結パイプ １９、２０、２１ 排出口 ２２、２３、２４ 連通路 ２５、２６ 排出パイプ
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成７年６月８日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正内容】
【００２１】第２段階の操作 図１の状態で血清より抽出した試料溶液を試料注入部８
より導入し、予め決定した第１段階の操作によりもとめ
た目的物質の流出時間帯（ｔ1 〜ｔ2 ：分画）の時間：
ｔ1 ：２分の少し前になったら溶離液の流路切り替えバ
ルブ７の操作により、図２の状態とし、目的物質を分析
用の長い分離カラム２に導入する（この間溶離液の液送
ポンプ３は液送を継続している。）。
より導入し、予め決定した第１段階の操作によりもとめ
た目的物質の流出時間帯（ｔ1 〜ｔ2 ：分画）の時間：
ｔ1 ：２分の少し前になったら溶離液の流路切り替えバ
ルブ７の操作により、図２の状態とし、目的物質を分析
用の長い分離カラム２に導入する（この間溶離液の液送
ポンプ３は液送を継続している。）。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３１
【補正方法】変更
【補正内容】
【００３１】電気化学的酸化検出−液体クロマトグラフ
ィ測定条件 分離カラム（短いカラム）１：Hitachi Gel 3056 長さ：５ｃｍ、内径：４．６ｍｍ 分離カラム（長いカラム）２：Hitachi Gel 3056 長さ：２０ｃｍ、内径：４．６ｍｍ 溶離液：メタノール：エタノール：過塩素酸 ＝６００：４００：１．５ （過塩素酸ナトリウム０．７ｇ／１００mlを含む） 流速： １．０ml／min 検出器：Coulochem Model 5100Ａ（ｅｓａ） 還元電位：−０．６Ｖ、酸化電位：＋０．１Ｖ
ィ測定条件 分離カラム（短いカラム）１：Hitachi Gel 3056 長さ：５ｃｍ、内径：４．６ｍｍ 分離カラム（長いカラム）２：Hitachi Gel 3056 長さ：２０ｃｍ、内径：４．６ｍｍ 溶離液：メタノール：エタノール：過塩素酸 ＝６００：４００：１．５ （過塩素酸ナトリウム０．７ｇ／１００mlを含む） 流速： １．０ml／min 検出器：Coulochem Model 5100Ａ（ｅｓａ） 還元電位：−０．６Ｖ、酸化電位：＋０．１Ｖ
Claims (4)
- 【請求項１】 同一特性を有する長さの異なる２本の分
離カラムの、先づ短かい分離カラムに目的物質を短時間
分取し、ついで長い分離カラムへ目的物質を送り、長い
時間をかけて分離・精製することを特徴とした液体クロ
マトグラフィ連続分離・精製方法。 - 【請求項２】 同一特性を有する長、短２本の分離カラ
ムと、２台の送液ポンプとにより、溶離液槽と廃液槽と
の間に並列処理系を構成すると共に、前記並列処理系
へ、切り替え手段を介装して、長、短２本の分離カラム
を直列処理系又は並列処理系に切替え可能としたことを
特徴とする液体クロマトグラフィ連続分離・精製装置。 - 【請求項３】 短かい分離カラムの並列処理系へ、試料
注入部及びモニター用検出器を介装したことを特徴とす
る請求項２記載の液体クロマトグラフィ連続分離・精製
装置。 - 【請求項４】 長い分離カラムの直列処理系へ、分析用
検出器を介装したことを特徴とする請求項２記載の液体
クロマトグラフィ連続分離・精製装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6157419A JPH0821830A (ja) | 1994-07-08 | 1994-07-08 | 液体クロマトグラフィ連続分離・精製方法及び装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6157419A JPH0821830A (ja) | 1994-07-08 | 1994-07-08 | 液体クロマトグラフィ連続分離・精製方法及び装置 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0821830A true JPH0821830A (ja) | 1996-01-23 |
Family
ID=15649227
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6157419A Pending JPH0821830A (ja) | 1994-07-08 | 1994-07-08 | 液体クロマトグラフィ連続分離・精製方法及び装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0821830A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4610111B2 (ja) * | 2001-03-19 | 2011-01-12 | 明治乳業株式会社 | 食品中のｌ−カルニチン類の測定法 |
| CN103995079A (zh) * | 2014-05-29 | 2014-08-20 | 中国计量学院 | β-胡萝卜素提取物中β-胡萝卜素含量的定量检测方法 |
-
1994
- 1994-07-08 JP JP6157419A patent/JPH0821830A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4610111B2 (ja) * | 2001-03-19 | 2011-01-12 | 明治乳業株式会社 | 食品中のｌ−カルニチン類の測定法 |
| CN103995079A (zh) * | 2014-05-29 | 2014-08-20 | 中国计量学院 | β-胡萝卜素提取物中β-胡萝卜素含量的定量检测方法 |
| CN103995079B (zh) * | 2014-05-29 | 2016-01-20 | 中国计量学院 | β-胡萝卜素提取物中β-胡萝卜素含量的定量检测方法 |
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