JPH0819145B2 - 燐酸チアミン溶液からチアミン一燐酸を分離する方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、陽イオン交換体を使用し、酸を用いてチア
ミン一燐酸を溶離する方法で、有益な生成物としてのチ
アミン一燐酸及びコカルボキシラーゼを含有する燐酸チ
アミン溶液からチアミン一燐酸を分離する方法に関す
る。

〔従来の技術〕

チアミンのフォスフォリル化の際には、一般に次の組
成物：チアミン一燐酸約70％、コカルボキシラーゼ（チ
アミン二燐酸）約20％並びにチアミン三燐酸及びチアミ
ン四燐酸約５％の混合物が得られる。ドイツ国特許（DE
-A）第1085527号明細書中に記載のように、この混合物
は、通例、先づ燐酸を除去し、次いでこの混合物を弱塩
基性のイオン交換体に通すことにより分離される。この
際、燐酸の残量は、除去される。引き続き、この脱酸さ
れた混合物を強酸性イオン交換体、例えばアンバーライ
ト（Amberlite ）IR-120に通し、その際、チアミン一
燐酸は固着し、コカルボキシラーゼ及びより高級の燐酸
塩、主にチアミン三−及びチアミン四燐酸が溶離され
る。この方法では、コカルボキシラーゼは非常に希溶液
の形で生じ、このことは、かなりの蒸発費用がかかるこ
ととなる。更に、コカルボキシラーゼの一部が強酸性イ
オン交換体により加水分解されてチアミン一燐酸にな
り、従つてコカルボキシラーゼの総収量は少なくなる。
強酸性イオン交換樹脂の代わりに、弱酸性イオン交換樹
脂、例えばアンバーライト（Amberlite ）IRC-50も使
用される。これは同様に選択的イオン交換プロセスであ
り、その際溶離されるコカルボキシラーゼは、再び強く
希釈された溶液で生じる。

〔発明が解決しようとする課題〕

本発明は、前記種類の方法を、チアミン一燐酸の分離
が非常に良好に進行するように実施することを課題とし
ている。生じるコカルボキシラーゼ溶液を著るしく希釈
することも避けるべきである。

〔課題を解決するための手段〕

この課題は、チアミン一燐酸及びコカルボキシラーゼ
を含有する溶液がpH2〜７を有し、pKa1.0〜4.5を有する
陽イオン交換体を使用する前記種類の方法により解決さ
れる。

陽イオン交換体のpKa−値とは、F.ヘルフエリヒ、イ
オネンアウスタウシヤー（F.Helfferich,Ionenaustausc
her）、第１巻、84頁（1959）、ヘミーGmbH出版、バイ
ンハイム、ベルグストラーセ（Verlag Chemie GmbH,Wei
nheim,Bergstraβｅ）により測定することができるみか
けのpK−値である。

本発明の有利な実施形によれば、官能基として、イミ
ノジ酢酸基又はアミノアルキレン−及び／又はイミノジ
アルキレン−ホスホン酸基を有する陽イオン交換樹脂を
使用する。官能基としてアミノメチレン−及び／又はイ
ミノジメチレンホスホン酸基を有する陽イオン交換樹脂
を使用するのが特に有利である。pH4.5〜5.5を有する溶
液を使用するのは特に有利である。溶離のために、１〜
30％塩酸水溶液が特に好適であると判明した。

アミノ−及び／又はイミノアルキレンホスホン酸基を
有する陽イオン交換樹脂とは、官能基として有利にアミ
ノ−及び／又はイミノメチレンホスホン酸基を含有する
ポリスチロール／ジビニル重合体である。アミノ−及び
／又はイミノアルキレン−、特にアミノ−及び／又はイ
ミノメチレン−ホスホン酸基を有する陽イオン交換樹脂
は公知であり（例えば、J.Appl.Chem.8、（1958）、45
8;米国特許（US-A）第4002564号;CA93、168909X参照）
かつ市販されている。バイエル（Bayer）AG社からレワ
チット（Lewatit ）OC 1060の商標で提供されるアミノ
−及び／又はイミノアルキレンホスホン酸−基を有する
陽イオン交換樹脂が特に有効である。

アミノ−及び／又はイミノアルキレンホスホン酸−基
を有する陽イオン交換樹脂は特に高い選択性、及びチア
ミン一燐酸に関する極めて高い容量により優れている。
前記組成物を有し、pH2〜７、有利に4.5〜5.5を有する
溶液をこの樹脂に通すと、このチアミン一燐酸は選択的
に吸着される。コカルボキシラーゼ及びより高級の燐酸
塩が溶離され、その際驚くべきことには、溶離液の濃度
は溶離が進むとともに一定に増えていく。ここでは又、
典型的な交換過程ではなく、驚くべきことには、置換ク
ロマトグラフイーが問題となる。溶離液中のコカルボキ
シラーゼの濃度は、適用溶液中のその濃度に等しいとい
う結果になる。コカルボキシラーゼは慣用の方法で、例
えば蒸発濃縮により、溶離液から取得することができ
る。コカルボキシラーゼからのチアミン三−及びチアミ
ン四燐酸の分離は、技術水準の方法により行なわれる。

イオン交換体の容量が使い尽されたら、水で中間洗浄
し、次いで１〜30％のHCl水溶液、有利に7.5％のHClで
溶離させる：このチアミン一燐酸は塩酸塩の形で飽和溶
液として溶離される。このイオン交換体は、水での中性
洗浄後再び作業準備のできた状態となる。これは、工業
的方法における、迅速な連続的分離サイクルを可能にす
る。レワチット（Lewatit ）OC-1060の容量は、チアミ
ン一燐酸分によつてのみ限定される。最適の分離のため
には、これを超してはいけない。その容量は、チアミン
一燐酸/l樹脂約140gであることが判つた。本発明によ
り、チアミン、チアミン一燐酸、コカルボキシラーゼ及
びより高級の燐酸塩をそれぞれ任意の組成でもつ溶液を
前記のようにして、分離することも可能であり、その際
コカルボキシラーゼは、希釈されず、チアミン一燐酸は
レワチット（Lewatit ）OC-1060 140g/lの量まで選択
的に除去される。コカルボキシラーゼが、すでに約37％
迄濃縮された混合物が分離された（後の例参照）。

本発明の方法は種々の方法において有利である。たと
えば、洗浄工程では生成物濃度は同じであるか、増加す
らする。更に、置換剤として使用された塩酸は、イオン
交換樹脂を再び開始状態にもどし、分離した再生工程を
排除する。本発明の方法は、更に、工業的に、とりわけ
重要な迅速な連続した分離サイクルを可能にする。樹脂
容量が高く、例えばレワチット（Lewatit ）OC-1060で
は、チアミン一燐酸140g/樹脂ｌまでである事実は、特
に有利である。

〔実施例〕

本発明を、次の例によりさらに説明する。

次の組成の溶液2000gをpH6で330×65mmの大きさの分
離カラムに通す。

次の量を装入した： 次のフラクシヨンが得られた： この得られた結果を第１図にグラフで示した。この実
験はチアミン一燐酸に対するレワチット（Lewatit ）O
C-1060の容量約100％で実施された。第１図は、分離の
溶離曲線を表わす。溶離液中のコカルボキシラーゼ濃度
は、混合物の装入時間に応じて絶えず増加することがみ
てとれる。一燐酸エステルはコカルボキシラーゼの溶離
ピークの終わりあたりで貫流し始める。短かい中間洗浄
時間後にHClを導入することにより一燐酸エステルが高
純度及び高濃度で溶離する。この溶離ピークはシヤープ
であり、テーリング（Tailing）は起こらない。水での
洗浄相の後に次の生成混合物を装入することができる。

第２図に、同じく分離の溶離曲線を示す。ここでは、
同じ樹脂レワチット（Lewatit ）OC-1060を用いて操作
した。これに、チアミン一燐酸に対する容量の50％及び
コカルボキシラーゼ約20％及びチアミン一燐酸75％の溶
液を装入した。適用溶液の装入とHClでの溶離の間に、
大量の水で中間洗浄した。ここで、長い洗浄工程にもか
かわらず、一燐酸エステルは樹脂上に安定してとどまつ
ていることが確認された。塩酸での引き続いての溶離は
衝撃的におこる。水による中間洗浄により、チアミン一
燐酸は良好に精製でき、純粋な溶離物が得られる。

【図面の簡単な説明】

第１図はコカルボキシラーゼ分離サイクルの標準溶離曲
線を示す図、第２図はコカルボキシラーゼ−チアミン一
燐酸分離の標準溶離曲線を示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 アルフレート・ミツチユケル ドイツ連邦共和国オーデンタールーホル・ アム・ガルテンフエルト 50 (56)参考文献 米国特許4002564（ＵＳ，Ａ) Ｂｏｌｌｅｔｔｉｎｏ Ｃｈｉｍｉｃｏ Ｆａｒｍａｃｅｕｔｉｃｏ（1970年）第 109巻第４号第271〜274頁

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】陽イオン交換樹脂の使用及び酸によるチア
   ミン一燐酸の溶離下に、チアミン一燐酸及びコカルボキ
   シラーゼを含有する燐酸チアミン溶液からチアミン一燐
   酸を分離する方法において、この燐酸チアミン溶液は、
   pH2〜７を有し、pKa1.0〜4.5を有する陽イオン交換樹脂
   を使用することを特徴とする、燐酸チアミン溶液からチ
   アミン一燐酸を分離する方法。