JPH08112090A - キブデロスポランギウム・アリダムｓｋ＆ｆ−ａａｄ−６０９ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 糖ペプチド抗生物質を産生するキブデロスポ
ランギウム・アリダム株の提供。 【構成】 ＡＴＣＣ３９９２２およびその突然変異体お
よび誘導体の同定特性を有し、該微生物および突然変異
体および誘導体は同化可能な炭素および窒素源を含有す
る水性栄養培地中での培養に際して回収可能な量のＡＡ
Ｄ−６０９抗生物質を産生できるキブデロスポランギウ
ム・アリダム・ラルガム（Kibdelosporangium aridum l
argum）の生物学的に純粋な培養物。 【効果】 ＡＡＤ−２１６抗生物質ならびにＡＡＤ−６
０９抗生物質が効果的に産生される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は糖ペプチド抗生物質を産
生するキブデロスポランギウム・アリダム（Kibdelospo
rangium aridum）株に関する。

【０００２】

【従来の技術】キブデロスポランギウム・アリダム・シ
エアレル（Ｓhearer gen−nov.sp.nov.）ＳＫ＆Ｆ−Ａ
ＡＤ−２１６が米国特許出願第５１３５１３号に開示さ
れている。ＡＡＤ−２１６と命名された糖ペプチド抗生
物質の複合体および、特に該複合体の３種の主要成分、
ＡＡＤ−２１６Ａ、ＡＡＤ−２１６ＢおよびＡＡＤ−２
１６Ｃもそこに開示されている。ＡＡＤ−２１６アグリ
コン、ＡＡＤ−２１６の共通なプソイドアグリコンおよ
び主要なファクターアグリコンが米国特許第４５２１３
３５号に開示されている。

【０００３】

【発明の要約】１つの態様において、本発明はキブデロ
スポランギウム・アリダムの新規な亜種、すなわち、Ｓ
Ｋ＆Ｆ−ＡＡＤ−６０９と命名された亜種ラルガム（la
rgum）を提供するものである。この亜種はＡＴＣＣ３９
９２２の同定特性を有する。もう１つの態様において、
本発明は構造的におよび生物学的にＡＡＤ−２１６抗生
物質に関連する新規な糖ペプチド抗生物質を提供するも
のである。この態様において、本発明は糖脂質基内の糖
部位がアミノグルクロン酸よりもむしろグルコサミンで
ある点でＡＡＤ−２１６抗生物質と異なる変種ＡＡＤ−
２１６抗生物質を提供するものである。従ってさらに詳
しくは、本発明は式(Ｉ)：

【０００４】

【化１】

【０００５】［式中、Ｒ₁はマンノシルまたは水素、Ｒ₂
はＲ₃が所望によりヒドロキシルで置換されていてよい
分枝状または直鎖状の炭素原子数８〜１２のアルキルま
たはアルケニルである

【０００６】

【化２】

【０００７】を意味する］で示される化合物およびその
デスオキシ同族体である。キブデロスポランギウム・ア
リダム亜種ラルガム（ＳＫ＆Ｆ−ＡＡＤ−６０９）はＡ
ＡＤ−２１６抗生物質並びに本明細書中でＡＡＤ−６０
９抗生物質として言及するその変種を産生する。ＳＫ＆
Ｆ−ＡＡＤ−６０９株はアリゾナ州ピマ・カウンティー
で採集した砂漠の土壌から単離された。

【０００８】ＳＫ＆Ｆ−ＡＡＤ−６０９の保存培養を薄
いジャガイモ−ニンジン寒天またはオートミール寒天上
で維持した。薄いジャガイモ−ニンジン寒天、オートミ
ール寒天、水寒天または土壌抽出物寒天上で形態学的観
察を行った。生理学的および生化学的テスト用の接種物
は冷凍したバイアルの内容物を２８℃、２５０ＲＰＭで
３〜５日間回転振盪器上に置いたフラスコ１個分のグル
コース−酵母エキス・ブロスに加えることによって調製
した。培養物を遠心分離によって収穫し、滅菌蒸留水で
３回洗浄した。生化学的および生理学的テスト用のイン
キュベーション温度は２８℃であった。結果の読み取り
は平板培地について２１日に至るまで何回も行った。試
験管培地のほとんどは２８日に至るまで何回も読み取っ
た。しかしながら、尿素、アラントインおよび馬尿酸塩
の分解についてのテスト並びに硝酸塩の還元についての
テストは６週間読み取った。

【０００９】ＳＫ＆Ｆ−ＡＡＤ−６０９の抗生物質に対
する感受性はＢＢＬ感受性ディスクを寒天重層としてＳ
Ｋ＆Ｆ−ＡＡＤ−６０９で接種した栄養寒天平板上に置
くことによって調べた。平板を４℃で１時間放置して抗
生物質を拡散させ、ひき続いて２８℃でインキュベート
した。インキュベーションの後、１週間阻止帯の直径を
測定した。

【００１０】形態 ＳＫ＆Ｆ−ＡＡＤ−６０９株は（１）寒天を貫通しかつ
寒天の頂部上に密な層を形成する基質菌糸体、および
（２）分生子の鎖および／または胞子嚢状構造を有する
空中菌糸体に分化する菌糸体を形成する糸状の生物体で
ある。空中もしくは基質菌糸体のいずれにおいても運動
性要素は観察されなかった。

【００１１】基質菌糸体 ＳＫ＆Ｆ−ＡＡＤ−６０９は置換無しで分裂を受け得る
十分に成長した基質菌糸体を生成する。長い、中程度に
分枝した菌糸は隔膜があり、直径は約０.５μ〜１.０μ
である。共通の柄から放射状に伸びる叉状分枝し、隔膜
のある菌糸より成る特殊な構造が基質菌糸上に存在す
る。これらの特殊な構造は寒天中の深部または寒天の表
面直下のいずれかに生成され、コク（Ｃouch）（コク、
ジェイ・エヌ（Ｃouch，Ｊ.Ｎ.）、ジャーナル・オブ・
エリシャ・ミットシェル・サイエンティフィック・ソサ
イエティ（Ｊ.Ｅlisha Ｍitchell Ｓcient.Ｓoc.）、
７９、５３〜７０、１９６３）がアクチノプラーネス
（Ａctinoplanaceae）の基質菌糸について記載している
分生子構造に類似した「裸の」胞子嚢状構造のように見
える。多くの培地上でＳＫ＆Ｆ−ＡＡＤ−６０９は寒天
中に特徴的な結晶を産生する。

【００１２】空中菌糸体 ＳＫ＆Ｆ−ＡＡＤ−６０９の空中菌糸体は長さが不規則
（０.５μ×０.８〜３.２μ）な棒状で、壁がなめらか
な胞子の真直ぐなまたは不規則に曲った鎖を生成する。
これらの胞子鎖は鎖当たり５０個以上の胞子を有して通
常非常に長いが、１０個の胞子またはそれ以下の胞子の
数本の短い鎖も通常存在する。胞子鎖は主たる糸または
格子状枝上の頂部に生じる。寒天上に置くと、これらの
胞子は１個またはそれ以上の発芽管が生じて発芽する。

【００１３】ほとんどの培地上で、ＳＫ＆Ｆ−ＡＡＤ−
６０９の空中菌糸体は胞子嚢状構造も生成する。これら
は分枝したまたは非分枝の胞子上の頂部に生じる；それ
らは主たる胞子糸の格子状分枝上の端部にも生じる。胞
子嚢状構造および胞子鎖はしばしば同一の空中胞子上に
生じる。成熟した胞子嚢状構造は通常丸く、直径が約１
２μ〜３２μである。一軸方向でわずかに平坦化したま
たは非常に不規則な形状の胞子嚢状構造も観察される。
これらの胞子嚢状構造ははっきりとした輪郭の壁に囲ま
れており、成熟期には、アモルファス状のマトリックス
中に埋れた、隔膜がある分枝状胞子を含有する。寒天上
に置くと、これらの胞子嚢状構造は１個またはそれ以上
の発芽管を生じ、直接発芽する。

【００１４】化学的分類 ベッカー（Ｂecker）（ベッカー、ビーら（Ｂecker，
Ｂ.et al.）、アプライド・マイクロバイオロジー（Ａp
pl.Ｍicrobiol.）、１３、２３６〜４３、１９６５）の
方法によって分析したＳＫ＆Ｆ−ＡＡＤ−６０９の精製
した細胞壁調製物は２,６−ジアミノピメリン酸、アラ
ニン、グルタミン酸、グルコサミン、ムラミン酸、ガラ
クトースおよび極少量のアラビノースのメソ異性体を含
有していた。レケバリエ（Ｌechevalier）（レケバリ
エ、エム・ピー（Ｌechevalier，Ｍ.Ｐ.）、ジャーナル
・オブ・ラボラトリー・アンド・クリニカル・メディス
ン（Ｊ.Ｌab.Ｃlin.Ｍed.）、７１、９３４〜４４、１
９６８）の方法で分析した全細胞加水分解物はガラクト
ース、グルコース、マンノース、リボース、ラムノー
ス、多量のアラビノースおよび痕跡量のマドゥロースを
含有していた。レケバリエ（Ｌechevalier）（レケバリ
エ、エム・ピーら（Ｌechevalier，Ｍ.Ｐ.et al.）、カ
ナディアン・ジャーナル・オブ・マイクロバイオロジー
（Ｃan.Ｊ.Ｍicrobiol.）、１９、９６５〜７２、１９
７３）の方法により脂質パターンについて分析した細胞
抽出物中にはいずれのタイプのムコリン酸も存在しなか
った。存在するリン脂質はホスファチジルエタノールア
ミン、ホスファチジルインノシトールマンノシド、ホス
ファチジルインノシトールおよびジホスファチジルグリ
セロールであった。かくして、ＳＫ＆Ｆ−ＡＡＤ−６０
９は独特の全細胞糖パターン、タイプＡと痕跡量のマド
ゥロース（レケバリエ、エム・ピーら（Ｌechevalier、
Ｍ.Ｐ.et al.）、インターナショナル・ジャーナル・オ
ブ・システマティック・バクテリオロジー（Ｉnt.Ｊ.Ｓ
yst.Ｂacteriol.）、２０、４３５〜４３、１９７０）
およびタイプＰＩＩのリン脂質パターン（レケバリエ、
エム・ピーら（Ｌechevalier，Ｍ.Ｐ.et al.）、バイオ
ケミカル・システマティックス・アンド・イーコロジー
（Ｂiochem.Ｓystem.Ｅcol.）、５、２４９〜６０、１
９７７）を持つタイプＩＶの細胞壁を有する。

【００１５】生化学的および生理学的特性 ＳＫ＆Ｆ−ＡＡＤ−６０９はグラム陽性であり、抗酸性
ではない。嫌気性条件下では増殖は起こらない。増殖用
の温度範囲は１５℃〜４２℃であり、４５℃では極くわ
ずかの増殖であり；１０℃での増殖は一定しない。５０
℃では増殖は起こらない。硫化水素が生成する。ミルク
はペプトン化される。ゼラチンは加水分解されかつ液化
される。硝酸塩の亜硝酸塩への還元は疑わしい。メラニ
ン色素が生成する。カゼイン、Ｌ−チロシン、ヒポキサ
ンチン、グアニンおよびエラスチンは加水分解される
が、スターチ、アデニン、キサンチンおよびセルロース
（アビセル）は加水分解されない。ホスファターゼおよ
びカタラーゼが生成する。尿素、エスクリンおよび馬尿
酸塩は分解され；アラントイン分解についてのテストは
わずかに陽性である。ＳＫ＆Ｆ−ＡＡＤ−６０９は２％
ＮaＣl上で増殖する。８％ＮaＣlにおいては増殖がな
く；３〜７％ＮaＣlにおける増殖は一定しない。リゾチ
ームブロス中では増殖は起こらない。酸はＬ−アラビノ
ース、Ｄ−セロビオース、デキストリン、デキストロー
ス、Ｄ−フルクトース、グリセロール、グリコーゲン、
Ｄ−ガラクトース、i−イノシトール、ラクトース、Ｄ
−マンニトール、Ｄ−マンノース、マルトース、α−メ
チル−Ｄ−ゲルコシド、α−メチル−Ｄ−マンノシド、
メリビオース、Ｄ−メレジトース、ラフィノース、ラム
ノース、Ｄ−リボース、スクロース、トレハロースおよ
びＤ−キシロースから生じる。ズルチトール、i−エリ
トリトール、イヌリンまたはＬ−ソルボースから酸は生
成しない。クエン酸塩、リンゴ酸塩、コハク酸塩、シュ
ウ酸塩、乳酸塩、酢酸塩、ピルビン酸塩、ギ酸塩および
プロピオン酸塩は利用され：安息香酸塩および酒石酸塩
は利用されない。

【００１６】抗生物質に対する感受性 拡散法によると、ＳＫ＆Ｆ−ＡＡＤ−６０９はゲンタマ
イシン（１０μg）、トブラマイシン（１０μg）、アン
ピシリン（１０μg）、ペニシリン（１０単位）、リン
コマイシン（２μg）、ストレプトマイシン（１０μ
g）、バンコマイシン（３０μg）、クリンダマイシン
（２μg）、クロラムフェニコール（５μg）およびセフ
ァロチン（３０μg）をしみ込ませたディスクに対して
耐性であった。クロルテトラサイクリン（５μg）によ
り１７〜１８mmの阻止帯が生じ；テトラサイクリン（５
μg）では９〜１２mmの阻止帯；リファンピン（５μg）
では１０〜１２mmの阻止帯；ノボビオシン（５μg）で
は３０〜３５mmの阻止帯が生じた。全ての阻止帯は少な
くとも数個の耐性コロニーを含んでいた。

【００１７】各種培地上のＳＫ＆Ｆ−ＡＡＤ−６０９に
ついての記載 全ての培養物は密閉したペトリ皿缶中、２８℃にてイン
キュベートし、２１日に至るまで時々観察した。培養物
の色彩はＩＳＣＣ−ＮＢＳセントロイド・カラー・チャ
ーツ（Ｃentroid Ｃolor Ｃharts）またはディクショ
ナリ・オブ・カラー（Ｄictionary of Ｃolor）（マ
エルツ、エイおよびエム・アール・パウル（Ｍaerz，
Ａ.およびＭ.Ｒ.Ｐaul）、第２版、ニューヨーク：マグ
ローヒル出版社、１９５０）のいずれかからの色標と比
較することにより選択した。

【００１８】酵母抽出物−麦芽抽出物寒天 増殖は良好ないし優秀；増殖型菌糸体はイエロー〜ブラ
ウン；空中菌糸体は「見えず」ないし非常に「まば
ら」、ホワイト；胞子鎖および胞子嚢状構造は「まば
ら」；イエロー〜ブラウンの可溶性色素；寒天中の特徴
的な結晶が存在。

【００１９】オートミール寒天 増殖は「かなり」ないし良好；増殖型菌糸体はオフ−ホ
ワイトないしペイル・イエロー〜ブラウン；空中菌糸体
は普通、ホワイト；胞子鎖および胞子嚢状構造が存在；
ペイル・イエロー〜ブラウンの可溶性色素が種々に存
在；寒天中に特徴的な結晶が存在。

【００２０】グリセロール−アスパラギン寒天 増殖は「かなり」ないし良好；増殖型菌糸体はオフ−ホ
ワイトないしペイル・イエロー〜ブラウン；空中菌糸体
は「無し」ないし「まばら」、ホワイト；胞子鎖および
胞子嚢状構造は「無し」ないし豊富；ペイル・イエロー
〜ブラウンの可溶性色素；寒天中に特徴的な結晶が存
在。

【００２１】無機塩−スターチ寒天 増殖は「かなり」ないし良好；増殖型菌糸体はオフ−ホ
ワイトないしペイル・イエロー〜ブラウン；空中菌糸体
は「見えず」ないし「まばら」、ホワイト；胞子鎖およ
び胞子嚢状構造が存在；ペイル・イエロー〜ブラウンの
可溶性色素が種々に存在；寒天中に特徴的な結晶が存
在。

【００２２】ツアペック−スクロース寒天 増殖は良好；増殖型菌糸体はオフ−ホワイトないしペイ
ル・イエロー〜ブラウン；空中菌糸体は普通ないし豊
富、ホワイト；胞子鎖および胞子嚢状構造が存在；ペイ
ル・イエロー〜ブラウンの可溶性色素；寒天中に特徴的
な結晶が存在。

【００２３】ベネットの寒天 増殖は「かなり」ないし良好；増殖型菌糸体はオフ−ホ
ワイトないしグレイッシュ・イエロー〜ブラウン；空中
菌糸体は「無し」ないし「まばら」、ホワイト；胞子鎖
および胞子嚢状構造は「無し」ないし普通；グレイッシ
ュ・イエロー〜ブラウンの可溶性色素；寒天中に特徴的
な結晶が種々に存在。

【００２４】栄養物寒天 増殖は「かなり」；増殖型菌糸体はグレイッシュ・イエ
ロー・ブラウン；空中菌糸体は「まばら」、ホワイト、
不毛；胞子鎖または胞子嚢状構造は観察されず；イエロ
ー〜ブラウンの可溶性色素；寒天中で結晶は検出され
ず。

【００２５】薄いジャガイモ−ニンジン寒天 増殖は「かなり」；増殖型菌糸体はオフ−ホワイトない
しペイル・イエロー〜ブラウン；空中菌糸体は「まば
ら」ないし普通、ホワイトないしライト・グレイ；多数
の胞子鎖および胞子嚢状構造が存在；ペイル・イエロー
〜ブラウンの可溶性色素が種々に存在；寒天中に特徴的
な結晶が種々に存在。

【００２６】スターチ−カゼイン硝酸塩寒天 増殖は良好；増殖型菌糸体はオフ−ホワイトないしペイ
ル・イエロー〜ブラウン；空中菌糸体は「無し」ないし
「まばら」、ホワイト；胞子鎖および胞子嚢状構造が存
在；ペイル・イエロー〜ブラウンの可溶性色素が種々に
存在；寒天中に特徴的な結晶が存在。

【００２７】水寒天 増殖は不十分；増殖型菌糸体は半透明ないしオフ−ホワ
イト；空中菌糸体は「まばら」ないし普通、ホワイトな
いしライト・グレイ；胞子鎖および胞子嚢状構造が存
在；可溶性色素は無し；寒天中で結晶は検出されず。

【００２８】酵母抽出物−グルコース寒天 増殖は「かなり」ないし良好；増殖型菌糸体はグレイッ
シュ・イエロー〜ブラウン；空中菌糸体は見えず；４０
０倍の倍率下で数個の胞子鎖、しかし胞子嚢状構造は存
在せず；イエロー〜ブラウンの可溶性色素；寒天中に特
徴的な結晶が種々に存在。

【００２９】土壌抽出物寒天 増殖は「かなり」；増殖型菌糸体はオフ−ホワイトない
しペイル・イエロー〜ブラウン；空中菌糸体は「まば
ら」ないし普通、ホワイトないしライト・グレイ；胞子
鎖および胞子嚢状構造が存在；可溶性色素は無し；寒天
中で結晶は検出されず。

【００３０】ペプトン−酵母抽出物−鉄寒天 増殖は良好；増殖型菌糸体はグレイッシュ・ブラウン
（マエルツおよびパウル（Ｍaerz ＆ Ｐaul）１６Ｈ
８）；空中菌糸体は「見えず」；胞子鎖および胞子嚢状
構造は存在せず；可溶性色素はブラウニッシュ〜ブラッ
ク；寒天中で結晶は検出されず。

【００３１】ＳＫ＆Ｆ−ＡＡＤ−６０９の記載をベルゲ
イ（Ｂergey）のマニュアル・オブ・ディターミナティ
ブ・バクテリオロジー（Ｍanual of Ｄeterminative Ｂ
acteriology）、ジ・アプルーブド・リスト・オブ・バ
クテリアル・ネイムズ（ＴheＡpproved Ｌist of Ｂact
erial Ｎames）および他の最近の分類学文献にリストさ
れている放線菌の記載と比較することによりＳＫ＆Ｆ−
ＡＡＤ−６０９はそこに記載されている属には属さない
ことが示される。ＳＫ＆Ｆ−ＡＡＤ−６０９株は最初に
米国特許出願第５１３５１３号に記載されたキブデロス
ポランギウム（Ｋibdelosporangium）属に属する。それ
をこれまでにこの属中に入れられている１つの種、ケイ
・アリダム（Ｋ.aridum）と直接に比較した。ＳＫ＆Ｆ
−ＡＡＤ−６０９株は数個の劣った形態学的および化学
分類学的特性、並びに抗生物質産生においてケイ・アリ
ダムと異なる。ＳＫ＆Ｆ−ＡＡＤ−６０９とケイ・アリ
ダム間で見られる差異のいくつかは成長力に帰し得る。
すなわちＳＫ＆Ｆ−ＡＡＤ−６０９の空中菌糸体はより
濃く、かつ胞子嚢状構造は通常ケイ・アリダムのものよ
りも大きい。暗所で増殖する場合、ＳＫ＆Ｆ−ＡＡＤ−
６０９はしばしば薄いジャガイモ−ニンジン寒天、水寒
天および土壌抽出物寒天上にペイル・グレイの空中菌糸
体を生成する。これは決してケイ・アリダムにおいては
観察されず、明るい所で増殖する場合、両培養の空中菌
糸体はホワイトである。２種の生物体のリン脂質パター
ンも少し異なっており；ホスファチジルメチルエタノー
ルアミンはケイ・アリダム中に存在するが、ＳＫ＆Ｆ−
ＡＡＤ−６０９中では検出されなかった。ＳＫ＆Ｆ−Ａ
ＡＤ−６０９株はケイ・アリダムによって産生される抗
生物質複合体の主要成分、ＡＡＤ−２１６−Ａ、ＡＡＤ
−２１６−Ｂ、ＡＡＤ−２１６−ＣおよびＡＡＤ−２１
６−Ｃ₂を産生する。加えて、ＳＫ＆Ｆ−ＡＡＤ−６０
９はケイ・アリダムからの発酵ブロス中では見い出され
なかったこれらの化合物のＮ−アセチルグルコサミン同
族体を産生する。

【００３２】ＳＫ＆Ｆ−ＡＡＤ−６０９とケイ・アリダ
ム間の差異は新種の創設を是認するには不十分だと判断
される。従って、ＳＫ＆Ｆ−ＡＡＤ−６０９株は発明者
らが名称を提案したケイ・アリダムの新亜種、キブデロ
スポランギウム・アリダム亜種ラルガム（largum）新亜
種である（ラルガス（largus）、ラテン語の形容詞、豊
富な、十分な、数多い）。ケイ・アリダム亜種ラルガム
（ＳＫ＆Ｆ−ＡＡＤ−６０９）は寄託番号ＡＴＣＣ３９
９２２の下にアメリカン・タイプ・カルチャー・コレク
ション（Ａmerican Ｔype Ｃulture Ｃollectio
n）、ロックビル（Ｒockville）、メリーランド州に寄
託した。

【００３３】ケイ・アリダムＡＡＤ−６０９によって産
生される新規なＡＡＤ−６０９抗生物質は、ＡＡＤ−２
１６抗生物質の糖脂質部位におけるアミノグルクロン酸
の代わりにＡＡＤ−６０９抗生物質はグルコサミンを有
する以外はＡＡＤ−２１６抗生物質と同一である。さら
に詳しくは、ＡＡＤ−６０９抗生物質は式(Ｉ)（前掲）
を有する。

【００３４】ＡＡＤ−２１６複合体およびファクター
Ａ、ＢおよびＣは米国特許出願第５１３５１３号に開示
されている。主要成分、ファクターＡ、ＢおよびＣに加
え、約３５種の他の抗生物質ファクターがＡＡＤ−２１
６複合体中で同定されてきた。全てのＡＡＤ−２１６フ
ァクターは式(Ｉ)（前掲）に示した核となるアグリコ
ン、またはＣ環にベンジリックヒドロキシルを欠くその
デスオキシ同族体を共通して持つ。今日までに同定され
ている全てのＡＡＤ−２１６ファクターにおいて、Ｒ₃
は分枝状または直鎖状で、所望によりヒドロキシルで置
換されていてよい炭素原子数８〜１２のアルキルまたは
アルケニルである。ファクターＡでＲ₃は−(ＣＨ₂)₈Ｃ
Ｈ₃である。ファクターＢでＲ₃は−(ＣＨ₂)₇ＣＨ(Ｃ
Ｈ₃)₂である。ファクターＣでＲ₃は−(ＣＨ₂)₈ＣＨ(Ｃ
Ｈ₃)₂である。

【００３５】ＡＡＤ−６０９複合体から単離されない
が、ＡＡＤ−６０９複合体は全てのＡＡＤ−２１６ファ
クターに類似するファクターより成り、ＡＡＤ−２１６
ファクターではＲ₂はアミノグルクロン酸だがＡＡＤ−
６０９ファクターではＲ₂はグルコサミンであるという
点のみ異なるように見える。従って、ＡＡＤ−６０９抗
生物質において、Ｒ₃はＡＡＤ−２１６抗生物質におけ
ると同一である。

【００３６】以下の表ではＡ、ＢおよびＣ以外のＡＡＤ
−２１６ファクターのある種の特性をまとめる。示した
特性は脂肪酸のメチルエステル（Ｒ₃ＣＯ₂ＣＨ₃）のＨ
ＰＬＣ保持時間、ガスクロマトグラフィーの保持時間
（ＧＣ−ＲＴ）および該メチルエステルのＧＣマススペ
クトル分析による分子量である。推定によるとＡＡＤ−
６０９ファクターにおけるＲ₃は同一の特性を有する。

【００３７】

【表１】 ＡＡＤ−２１６ ＨＰＬＣ ファクター 保持時間 ＧＣ保持時間 分子量 Ｆ１ ５.９ １１.８ ２１６ ２ １１.９ ２１４ ３ １２.１ ２１６ Ｇ１ ７.７ １０.８ ２１２ ２ １２.９ ２３０ ３ １３.０ ２３０ Ｈ ８.４ １３.８ ２３０ Ｊ ８.７ １３.３ ２３０ Ｋ ９.１ １３.８ ２３０ Ｌ１ ９.２ １３.３ ２３０ ２ １３.６ ２３０ ３ １３.８ ２２８ Ｍ１ １０.１ １４.１ ２４４ ２ １４.１ ２４４ ３ １３.３ ２３０ Ｎ １０.６ １４.１ ２４４ Ｏ １０.７ １４.６ ２４４ Ｐ１ １１.４ １４.５ ２４４ ２ ９.７ ２０２ ３ ６.５ １７２ Ｑ １１.７ ９.７ ２０２ Ｄ １２.８ ７.９ １８４ Ｒ １３.６ ８.２ １８４ Ｓ １４.０ ７.４ １８６ Ｂ１ １６.３ ７.９ １８６ Ｂ２ １６.７ ８.９ ２００ Ｂ３ １７.８ ９.３ (１) Ｂ３−４ １７.９ ９.３ (１) １０.０ (１) １０.５ (１) Ｂ５ １８.８ ８.７ (１) Ｃ１ １９.６ １０.２ ２１４ Ｃ２ ２０.１ １０.６ ２１４ Ｃ３ ２０.７ １０.０ ２１４ Ｃ４ ２０.８ １０.６ ２１４ Ｃ５ ２１.０ １１.４ ２２６ Ｃ５−６ ２１.３ １１.３ ２２６ １１.４ ２２６

【００３８】（１）ＧＣマススペクトル分析は行ってい
ない。ＧＣ保持時間に基づいて、分子量は２００である
と推定される。もとろん、絶対ＧＣ保持時間は与えられ
た実験の条件で変わるであろう。同一のＧＣ検定におい
て、炭素原子数８〜１２の脂肪酸（スペルコ（Ｓupelc
o）のメチルエステルの商業的に入手可能な標準混合物
は次のＧＣ保持時間を有していた。

【００３９】 Ｃ₇Ｈ₁₅ＣＯ₂ＣＨ₃ ５.２ Ｃ₈Ｈ₁₇ＣＯ₂ＣＨ₃ ６.６ Ｃ₉Ｈ₁₉ＣＯ₂ＣＨ₃ ７.９ Ｃ₁₀Ｈ₂₁ＣＯ₂ＣＨ₃ ９.３ Ｃ₁₁Ｈ₂₃ＣＯ₂ＣＨ₃ １０.６

【００４０】以下の表は前記ＡＡＤ−２１６ファクター
の各々の脂肪酸（Ｒ₃ＣＯＯＨ）の予想される構造（炭
素原子数、（もしあれば）ヒドロキシル、（もしあれ
ば）不飽和および（もしあれば）鎖の分枝の存在）を示
すものである。

【００４１】

【表２】

【００４２】速原子衝突マススペクトロスコピー（ＦＡ
Ｂ−ＭＳ）によってＡＡＤ−２１６抗生物質を分析し
た。各ファクターのクラスターの分子量（Ｍ＋Ｈ）を以
下の表に示す。

【００４３】

【表３】

【００４４】ファクターＭ２、Ｍ３、Ｂ１、Ｂ５、Ｃ３
およびＣ４の分子量が１４４１である以外はＡＡＤ−２
１６抗生物質のマンノシルプソイドアグリコン（Ｒ₂＝
Ｈ）は１４５７の分子量を持つ。何故なら、これらはデ
スオキシ同族体であるからである。複合体の加水分解に
よって調製した全てのファクターのマンノシルプソイド
アグリコンは、勿論デスオキシ同族体のマンノシルプソ
イドアグリコンを除けば、ＨＰＬＣにおいてＡＡＤ−２
１６Ａ、ＢおよびＣのマンノシルプソイドアグリコンと
共に移動する。比較の目的で以下の表にＧＣ保持時間、
原子質量（Ｍ＋Ｈ）およびＡＡＤ−２１６Ａ、Ｂおよび
Ｃの脂肪酸（Ｒ₃ＣＯＯＨ）の予想される実験式および
ＡＡＤ−２１６Ａ、ＢおよびＣのＦＡＢ−ＭＳによる原
子質量をまとめる。

【００４５】

【表４】 ファクター 分子量 ＧＣ保持 分子量 式 （Ｍ＋Ｈ） 時間 （Ｒ₃ＣＯＯＨ） Ａ １７８７ ７.９ １８６ Ｃ₁₀ Ｂ １８０１ ８.７ ２００ Ｃ₁₁、分枝 Ｃ １８１５ １０.０ ２１４ Ｃ₁₂、分枝

【００４６】液中好気性条件下、同化可能な窒素および
炭素源を含有する水性栄養物培地におけるケイ・アリダ
ム・ラルガム（ＳＫ＆Ｆ−ＡＡＤ−６０９）またはその
活性な突然変異体もしくは誘導体の発酵に際しＡＡＤ−
６０９複合体が産生される。該複合体は新規なＡＡＤ−
６０９抗生物質、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｃ₂およびＤと命名され
た主要ファクター、並びにある種のＡＡＤ−２１６抗生
物質（ＡＡＤ２１６Ａ、ＢおよびＣはすでに回収されて
いる）の混合物より成る。典型的には、発酵は２０〜３
７℃で、通気しながら１０〜１００時間行う。「その活
性な突然変異体もしくは誘導体」は１種またはそれ以上
のＡＡＤ−２１６またはＡＡＤ−６０９抗生物質を回収
可能な量で産生できるＳＫ＆Ｆ−ＡＡＤ−６０９の突然
変異体もしくは誘導体を意味する。かかる突然変異体も
しくは誘導体は照射、選択および化学的突然変異誘発を
包含する標準法によって調製できる。ＡＡＤ−６０９産
生者はここに例示した方法によって容易に選択できる。

【００４７】ＡＡＤ−６０９抗生物質の産生は３０〜７
０時間の間で最大であり、その間ＡＡＤ−２１６産生の
増加へ徐々に移行する。時間が経つとＡＡＤ−６０９抗
生物質はＡＡＤ−２１６抗生物質へ生物学的に変換され
るようである。この結論はＡＡＤ−６０９化合物がケイ
・アリダム・シェアレル（Ｋ.aridum shearer）（ＳＫ
＆Ｆ−ＡＡＤ−２１６）の培養物中に一体化され、次い
でＡＡＤ−２１６抗生物質に変換されたという実験によ
って支持される。

【００４８】濾過または遠心分離の如き全発酵ブロスの
清澄化によりＡＡＤ−６０９複合体は発酵ブロスから回
収できる。清澄化した発酵ブロス（pＨ７）を非機能性
樹脂に直接適用することによって複合体は単離できる。
複合体は５.２の等電点を有する。次いでＨＰＬＣ（例
えば、逆相）またはアフィゲル・１０−ディー−アラ−
ディー−アラ（Ａffiger（登録商標）１０−Ｄ−ala−
Ｄ−ala）支持体（中性の１０個の炭素原子スペーサー
を有する架橋アガロースゲルビーズ支持体のＮ−ヒドロ
キシサクシンアミドエステル）もしくは他の固体マトリ
ックス上の如きアフィニティークロマトグラフィーによ
ってＸＡＤ−７メタノール溶出物を精製してＡＡＤ−６
０９複合体が得られる。別法として、粗製の清澄化した
発酵ブロスをアファニティー支持体に直接適用できる。

【００４９】清澄化したブロスおよび細胞抽出物のＨＰ
ＬＣ分析（以下の実施例３および４参照）により両源が
糖ペプチド抗生物質を含有することが示された。標品Ａ
ＡＤ−２１６と同時に注入することによる同定によっ
て、ブロスは新規なＡＡＤ−６０９成分およびＡＡＤ−
２１６複合体の双方の源であるが、細胞抽出物は主とし
て新規なＡＡＤ−６０９成分を含有することが確認され
た。これらの結果はキブデロスポランギウム・アリダム
（ＡＡＤ−２１６）からの清澄化したブロスがＡＡＤ−
２１６複合体の主要源であることを示す以前の観察と合
致する。小規模の実験によりＡＡＤ−６０９抗生物質の
純粋な調製物は清澄化したブロスから一工程のアフィニ
ティー単離手順で調製できることが明らかにされたが、
ＸＡＤ−７についての予備的なクロマトグラフィーをつ
け加えてアフィニティー工程に先立ち貯蔵の際に濃厚な
ブロス中で沈澱し易い不純物を除去することによってア
フィニティー支持体の寿命を保持した。

【００５０】以前の研究によりアフィニティー結合糖ペ
プチドの溶出はその物理的特性、主として疎水性および
等電点に大いに依存することが明らかにされている。各
々８.２および８.４の等電点を有するバンコマイシンお
よびリストセチンは良好な産生物回収のために高pＨお
よび有機調節剤を共に必要とするが、その異常に低い等
電点（３.８）のために、ＡＡＤ−２１６抗生物質はア
セトニトリルとＨ₂Ｏの組合せと共に溶出する。これら
の観察に基づき、独特の差動溶出法を用いてアフィゲル
・１０−ディー−アラ−ディー−アラ（Ａffigel １０
−Ｄ−ala−Ｄ−ala）支持体からのＡＡＤ−６０９によ
って産生された２つのタイプのアフィニティー結合複合
体を分離する。予備実験によりＡＡＤ−２１６抗生物質
はＡＡＤ−６０９成分の結合を維持しつつアセトニトリ
ル／水混合物と共に溶出することが示された。これらは
バンコマイシンで用いた条件下で溶出された。発明者ら
の研究所における予備実験により各複合体中の全成分の
挙動および回収は同様であることが示された。従って、
ＡＡＤ−２１６ＡおよびＡＡＤ−６０９Ａの収率はそれ
らの各々の複合体の収率を代表する。

【００５１】所望するならば、ＡＡＤ−６０９複合体の
個々のファクターはＨＰＬＣによって分割できる。ＡＡ
Ｄ−６０９抗生物質類はＡＡＤ−２１６抗生物質類に対
応する。これらのうち４つは単離されて特徴づけされて
いる。Ｄ環の遊離ヒドロキシルの所でマンノースによ
り、およびＢ環の遊離ヒドロキシルの所で糖脂質（Ｎ−
アシルグリコサミン）によって、全ては置換されること
が示されている。ファクターＡ、Ｂ、Ｃ、Ｃ₂およびＤ
は異なる条件（Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩ）＊下で分析ＨＰ
ＬＣにおいて以下の保持時間（ＲＴ）を示した。

【００５２】 ＨＰＬＣ−ＲＴ ファクター Ｉ ＩＩ ＩＩＩ Ａ １５.０ １４.６ ６.７５ Ｂ １５.８ １５.６ ９.１８ Ｃ １６.７ １６.４ １１.７５ Ｃ₂ １２.１４ Ｄ １５.０ １４.６ ４.９４ ＊ ＨＰＬＣ条件

【００５３】すべての場合において、カラムはウルトラ
スフィア（Ｕltrasphere）ＯＤＳ、５ミクロン（４.６
×１５０mm）（ベックマン・インストルメンツ（Ｂeckm
anＩnstruments）、フルレルトン（Ｆullerton）、カリ
フォルニア州）であり、液速は１.５ml／分であり、検
出は２２０nmでのＵＶ吸光度によった。グラジエントは
次の通りであった。

【００５４】Ｉ.緩衝液（０.１Ｍリン酸カリウム（pＨ
３.２））中に７〜３４％アセトニリトル（１分間は７
％、１３分間にわたって３４％まで上昇させて３４％に
保持） ＩＩ.緩衝液（０.０２５Ｍリン酸カリウム（pＨ６.
０））中に５.３５％アセトニトリル（１分間は５％、
１３分間にわたって３５％まで上昇させて３５％に保
持） ＩＩＩ.緩衝液中に３０〜４０％アセトニトリル（１分
間は３０％、１０分間にわたって４０％まで上昇させて
４０％に保持）

【００５５】ＨＰＬＣ保持時間から明らかな如く、成分
Ａ、ＢおよびＣはＡＡＤ−２１６抗生物質およびテイコ
プラニンに類似する。ＡＡＤ−６０９Ａ、ＢおよびＣの
溶出の順序はpＨ３.２では対応するＡＡＤ−２１６Ａ、
ＢおよびＣの前であり、pＨ６.０ではＡＡＤ−２１６抗
生物質の後であることに注目すると興味深い。精製中に
以前観察した如く、成分ＡＡＤ−６０９Ｃは２つの種よ
り成る。条件ＩＩＩ下で、該２つの種は逆相カラム上で
再度クロマトグラフィーに付して分類できる。ＡＡＤ−
６０９Ａ、Ｂ、Ｃ−Ｃ₂およびＤの他の物理特性を以下
の表にまとめる。

【００５６】

【表５】 Ａ Ｂ Ｃ−Ｃ₂ Ｄ 実験式 Ｃ₈₁Ｈ₈₄− Ｃ₈₂Ｈ₈₆− Ｃ₈₃Ｈ₈₈− Ｃ₈₁Ｈ₈₂− Ｎ₈Ｏ₂₉Ｃl₄ Ｎ₈Ｏ₂₉Ｃl₄ Ｎ₈Ｏ₂₉Ｃl₄ Ｎ₈Ｏ₂₉Ｃl₄ 分子量 １７７２ １７８６ １８００ １７７０ （ＦＡＢ−ＭＳ） α²⁰ _D −５８ −５５ −４９ −６５ （１％,Ｈ₂Ｏ） Ｅ（1％，1ｃｍ）値 λmax＝280nm, ５３ ５３ ４７ ５２ ０.１Ｎ ＨＣl λmax＝300nm, ９７ ８５ ７８ ８４ ０.１Ｎ ＮaＯＨ 強熱残渣（％） ０.０５ ０ ０.０５ ０.２０ ＴＧＡ（％） ８.２ ６.７ ８.１ ７.９

【００５７】全ての４成分は同一のＵＶスペクトルを有
し、中性または酸性条件下の２８０nmから塩基における
３００nmまでの深色シフトを示す。ＡＡＤ−６０９Ａの
該１Ｒスペクトルは３４００、２９４０、１６６０、１
５９５、１５００、１４６０、１４２０、１３９０、１
３１０、１２９０、１２３０、１１４０、１０６０、１
０１０、８１０および７３０cm^-1で観察した有意な吸収
振動数を有する基を表わしている。全ての成分は光学的
に活性である。

【００５８】前記で示したＡＡＤ−６０９糖ペプチドの
分子量はＦＡＢ−マススペクトル分析により測定した。
分子イオンは別として、全ての４つのスペクトルにおけ
る最も注目に値するフラグメントは１４５８質量単位に
生じる。これはＡＡＤ−２１６抗生物質のプソイドアグ
リコンの分子量と同一である。さらに、穏やかな酸加水
分解により複合体はＡＡＤ−２１６プソイドアグリコン
（Ｒ₂＝−Ｈ）の標品基準物質と同一の保持時間（同時
注入）を有する単一のＨＰＬＣ成分に変換される。各純
粋な糖ペプチドが個々に加水分解された場合、同じ観察
がなされた。

【００５９】炭水化物含有率は全てのＡＡＤ−６０９成
分について同一であり、これにより抗生物質はマンノー
スおよびＮ−アシル−グルコサミンの両部位を含有する
ことが明らかになった。ＡＡＤ−６０９−Ｄは不飽和脂
肪酸置換基を有する最初に報告された糖ペプチド抗生物
質複合体の主成分である。

【００６０】ＡＡＤ−６０９成分Ａ、Ｂ、ＣＣ₂および
Ｄについて得られたpka値を以下の表に示す。ＡＡＤ−
２１６Ａについての以前の結果を比較のために示す。Ａ
ＡＤ−２１６Ａの場合における如く、これらの試料は３
０：７０（アセトニトリル：水）中で滴定した；かくし
て、結果は見掛けの値である。

【００６１】

【表６】 ＡＡＤ− ＡＡＤ− ＡＡＤ− ＡＡＤ− ＡＡＤ− ２１６Ａ ６０９Ａ ６０９Ｂ ６０９ＣＣ₂ ６０９Ｄ 帰属 （平均値） ３.０ ３.４ ３.５ ３.６ ３.４ （Ａ） ４.９ −−− −−− −−− −−− （Ｂ） ７.４ ７.１ ７.１ ７.２ ７.０ （Ｃ） ８.４ ８.２ ８.１ ８.４ ８.０ （Ｄ） １０.０ ９.７ ９.７ ９.９ ９.３ （Ｄ） １０.３ １０.４ １０.６ １０.６ １０.２ （Ｄ） （１） １１.７ （２） １１.６ １１.６ （Ｄ） （Ａ）アグリコン上のカルボキシル （Ｂ）側鎖上のカルボキシル （Ｃ）アグリコン上のアミノ基 （Ｄ）フェノール性ＯＨ （１）６pＫ値に限定した計算 （２）プログラムで６番目のpＫにデータを適合させることは不可能であった。

【００６２】電位差滴定により７個の滴定可能な基が同
定された。ＡＡＤ−２１６と異なり、ＡＡＤ−６０９種
は４.９にpＫa値を有するカルボキシル基を含有しな
い。このカルボキシル基の不存在はＡＡＤ−２１６ファ
クターについての３.８に対し５.２の測定された等電点
によっても示される。この値によりアフィニティーカラ
ムの溶出条件によってなされるより高い等電点の予想が
確実となる。それは移動相のpＨが３.２から６に増大し
た場合、ＨＰＬＣ保持時間において観測されるシフトに
ついての基礎ともなる。

【００６３】ＡＡＤ−６０９Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｃ₂およびＤ
におけるＲ₃はＡＡＤ−２１６Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｃ₂およびＤ
におけるＲ₃に対応する。かくして、ＡＡＤ−６０９Ａ
において、Ａ₃は（ＣＨ₂)₈ＣＨ₃であり；ＡＡＤ−６０
９Ｂにおいて、Ｒ₃は（ＣＨ₂)₇ＣＨ(ＣＨ₃)₂であり；Ａ
ＡＤ−６０９Ｄにおいて、Ｒ₃は炭素原子数９の不飽和
アルキルであり；およびＡＡＤ−６０９Ｃ₂において、
Ｒ₃は（ＣＨ₂)₁₁ＣＨ₃である。

【００６４】ＡＡＤ−６０９抗生物質のアグリコン、マ
ンノシルプソイドアグリコン（Ｒ₂＝−Ｈ）および個々
のもしくはファクターのプソイドアグリコン（Ｒ₁＝−
Ｈ）は米国特許第４５２１３３５号に記載されている如
く調製される。ファクターＡ、Ｂ、ＣおよびＤのマンノ
シルプソイドアグリコン（Ｒ₂＝−Ｈ）およびアグリコ
ン（Ｒ₁およびＲ₂＝−Ｈ）は、各々、ＡＡＤ−２１６
Ａ、ＢおよびＣのマンノシルプソイドアグリコンおよび
アグリコンと同一である。

【００６５】ＡＡＤ−６０９ファクターの各々、並びに
ＡＡＤ−２１６ファクターの各々、および全ＡＡＤ−６
０９複合体は抗菌活性を有し、反芻動物のこぶ胃におい
ておよび非反芻動物の盲腸においてプロピオン酸塩の産
生を塩大させる。かくして、複合体、そのファクターの
いずれもまたそのファクターのいずれの混合物も抗菌剤
としてまたは飼料利用効率増強剤として使用できる。

【００６６】多数の微生物に対し、標準ミクロ滴定アッ
セイ法を用いたＡＡＤ−６０９複合体およびファクター
Ａ、Ｂ、ＣＣ₂およびＤのin vitro最小抑制濃度（ＭＩ
Ｃ）を表７に示す。

【００６７】

【表７】 ＡＡＤ６０９抗生物質および比較用糖ペプチ
ドの抗菌活性 化合物、ＭＩＣ（μg／ml） バンコマ AAD216 ＡＡＤ609 テスト株 イシン Ａ Ａ Ｂ Ｃ Ｄ スタフィロコッカス 1.6 3.1 1.6 1.6 1.6 1.6 ・アウレウス （Staphylococcus aureus） ＨＨ１２７ エス・アウレウス 1.6 3.1 1.6 1.6 1.6 1.6 （Ｓ.aureus）９１０＊ エス・アウレウス 0.8 0.8 0.4 0.8 0.8 0.8 （Ｓ.aureus）２０９Ｐ エス・アウレウス 1.6 3.1 0.8 0.8 1.6 1.6 （Ｓ.aureus）６７４ エス・アウレウス 3.1 12.5 6.3 6.3 6.3 6.3 （Ｓ.aureus）６７５ エス・エピデルミディス 3.1 25 12.5 12.5 12.5 12.5 (S.epidermidis） ２４７９ エス・エピデルミディス 3.1 50 24 25 25 25 （Ｓ.epidermidis） ２６８３ エス・エピデルミディス 3.1 100 50 50 25 50 （Ｓ.epidermidis） ６５１＊ エス・エピデルミディス 1.6 50 25 25 25 50 （Ｓ.epidermidis） ２２６５ ストレプトコッカス 3.1 0.8 0.4 0.2 0.2 0.8 ・フェカリス （Streptococcus faecalis） ６５７ エス・フェカリス 3.1 0.4 0.4 0.2 0.2 0.8 （Ｓ.faecalis）３４３５８ エシェリヒア・コリ >100 >100 >100 >100 >100 >100 （Escherichia coli） １２１４０ サルモネラ・ガリナラム 100 >100 >100 >100 >100 >100 （Salmonella gallinarum） ＢＣ−５９５ クロストリジウム 2 0.25 0.5 0.5 1 0.5 ・ディフィシレ （Clostridium difficile） ＊メチシリン耐性株 代表的なＥＤ₅₀データを表８に示す。

【００６８】

【表８】

【００６９】以下の表９はＡＡＤ−６０９Ａについての
代表的な血清半減期および最大血清濃度のデータを示
す。

【表９】 Ｃ.マウスにおけるＡＡＤ−６０９Ａの薬物
速度論

【００７０】これらのデータはグラム陽性病原性細菌に
対するＡＡＤ−６０９抗生物質の抗菌活性およびＡＡＤ
−６０９抗生物質がバンコマイシンよりも長い血清半減
期および高い最大血清濃度を有することを証明する。

【００７１】前記で示した如きデータに基づき、および
少量成分およびＡＡＤ−２１６のマンノシルプソイドア
グリコン、アグリコンおよびファクタープソイドアグリ
コンについての抗菌活性を示すデータに基づき、ＡＡＤ
−６０９の残存ファクター、並びにＡＡＤ−６０９のマ
ンノシルプソイドアグリコン、アグリコンおよびファク
タープソイドアグリコンは同様に抗菌活性を有すること
が結論される。勿論、アグリコンおよびマンノシルプソ
イドアグリコンはＡＡＤ−２１６抗生物質から由来する
ものと同一である。

【００７２】本発明はその範囲内に本発明のＡＡＤ−６
０９ファクターの少なくとも１つおよび医薬上許容され
る担体を含有する医薬組成物を包含する。該組成物は他
の活性な抗菌剤を含有してもよい。該組成物は問題とす
る投与経路に適したいずれの医薬形態で製造してもよ
い。かかる組成物の例には、錠剤、カプセル、丸剤、粉
末および顆粒剤の如き経口投与用固体組成物；溶液、懸
濁液、シロップおよびエリキシル剤の如き経口投与用液
体組成物；滅菌溶液、懸濁液またはエマルジョンの如き
非経口投与用調製物；およびゲル、クリーム、軟膏また
は膏薬の如き局所投与用調製物がある。

【００７３】抗菌剤として用いるには、組成物は活性成
分の濃度が治療する特定の生物体についての最小抑制濃
度より大きくなるように投与する。ＡＡＤ−６０９抗生
物質をこぶ胃in vitroモデルにて特徴づけして反芻動
物についての飼料添加物としてのその能力を評価した。
（ＡＡＤ−２１６抗生物質の有意でない量、＜５％、の
みを含有する）選択した濃度のＡＡＤ−６０９複合体の
こぶ胃発酵についての効果を評価し、ＡＡＤ−２１６複
合体、ＡＡＤ−２１６Ａ、ＡＡＤ−２１６Ｂ、ＡＡＤ−
２１６Ｃ、モネンシン、サリノマイシンおよびアボパル
シンと比較した。さらに詳しくは、栄養価の少ない食料
を摂取したフィステルをつけた食用ウシから得た緊張し
たこぶ胃分泌液（１０ml）を栄養物ブロス（カゼイン加
水分解物２０mg、マルトース１００mg、尿素１５mg、ソ
ルカフロック（solka floc）（セルロース）４００m
g、セロビオース１００mgおよびスターチ１００mg）１
０mlおよび選択した発育促進剤と混合し、振動させなが
ら３９℃で２４時間インキュベートした。結果、すなわ
ち対照こぶ胃分泌液のパーセントで表わした消化生成物
量を酢酸塩（ＡＣＥ）、プロピオン酸塩（ＰＲＯ）、イ
ソ酪酸塩（ＩＢＵ）、酪酸塩（ＢＵＴ）、イソ吉草酸塩
（ＩＶＡ）、全揮発性脂肪酸（ＴＯＴＡＬ）、アンモニ
ア性窒素（ＡＭＯ）、リジン（ＬＹＳ）、パーセントプ
ロピオン酸塩（％ＰＲ）およびアルファアミノ性窒素
（ＡＡＮ）について報告する。ＡＭＯ、ＬＹＳおよびＡ
ＡＮの測定は６時間後のインキュベーションフラスコか
ら採取した試料について行った。

【００７４】

【表１０】

【００７５】

【表１１】

【００７６】これらの結果は、ＡＡＤ−６０９抗生物質
がこぶ胃においてプロピオン酸塩の生成を増大させ、従
って飼料利用の効率を改善し、発育を促進しかつケトン
症を予防するのに使用できることを示す。これらの結果
はＡＡＤ−６０９抗生物質が酢酸塩および酪酸塩の生成
をひどく減少させることなくプロピオン酸塩の生成を増
大させることも示す。従って、これらの化合物は乳を分
泌する反芻動物においてミルクの生産（増大した脂肪修
正ミルクの収率）を改善するのに使用できる。

【００７７】ブタin vitroモデルを用いてブタおよび
家禽においてＡＡＤ−６０９抗生物質を優秀な飼料添加
剤として特徴づけた。混合した腸管微生物叢を回腸にカ
ニューレを入れたブタから得た。バアージニアマイシ
ン、カルバドックス、ＡＡＤ−２１６およびその成分、
および（５％以下のＡＡＤ−２１６抗生物質を含有す
る）ＡＡＤ−６０９複合体を１つの濃度でテストした。
ＡＡＤ−６０９に対する応答はＡＡＤ−２１６に対する
のと質的にも量的にも類似していた。グルコース（ＧＬ
Ｕ）は微生物分解を受けなかった。乳酸の生成は減少し
たが、揮発性脂肪酸（ＴＯＴＡＬ）は微生物代謝の主た
る最終生成物であった。ＡＡＤ−２１６はニワトリにお
いた有効な発育促進剤であることは公知である。ＡＡＤ
−６０９およびＡＡＤ−２１６は同様のin vitro結果
を与えるので、ＡＡＤ−６０９は単胃動物において同様
の発育促進活性を有すると予想される。また、ＡＡＤ−
６０９のin vitro活性はこのモデルにおいてバシトラシ
ンで以前観察された活性に類似する。バシトラシンはブ
タにおける公知の発育促進剤であり、ブタの発育促進剤
としてのＡＡＤ−６０９の概念を支持する。

【００７８】栄養物ブロス（カゼイン加水分解物３mg、
マルトース３０mg、尿素１.２５mg、リジン０.５mg、お
よびセロビオース３０mg）１.５mlおよび選択した発育
促進剤の百万分の１６６.６７部までと混合した通常の
量で飼育したブタからの盲腸分泌液１.５mlを振動させ
ながら３９℃で約４〜５時間インキュベートすることに
よってブタin vitroモデルを行った。結果、すなわち
対照のパーセントを以下の表で報告するが、ＬＬＡがＬ
−乳酸塩を意味し、ＥＴＯＨがエタノールを意味する以
外は全ての略語は前記と同じである。

【００７９】

【表１２】

【００８０】ニワトリの発育についてのバージニアマイ
シン、（５％以下のＡＡＤ−２１６抗生物質を含有す
る）ＡＡＤ−６０９複合体およびＡＡＤ−２１６複合体
の効果を以下の如くに評価した。ハブバード（hubbar
d）交雑デイ−オゥルド（day−old）ニワトリを床が針
金の家禽かごに収容した。各（おり／くり返し）に８匹
のニワトリを入れた。第１０日および１７日に体重およ
び飼料摂取量を記録した。動物の体重を通常のライ麦ベ
ースの飼料を与えた対照のパーセントとして、および単
位体重増加当たりの動物の飼料摂取量を対照の単位体重
増加（g）当たりの動物の飼料摂取量（g）のパーセント
として示す結果を以下の表に示す。

【００８１】

【表１３】

【００８２】処理動物における増大した体重増加によっ
て証明されるように、前記の結果はＡＡＤ−６０９抗生
物質が飼料利用効率を改善するのに効果的であることを
示す。

【００８３】本発明の飼料組成物は動物の飼料効率を改
善するのに効果的であるが毒性でない量あるいは動物が
１回分の飼料の摂取を減らす程度にしか害にならない量
の本発明のＡＡＤ−６０９ファクターの１種またはそれ
以上から選択した活性成分を補給した肉およびミルクを
生産する動物の通常の１回分量の飼料より成る。当業者
にとって公知の如く活性成分の量は成分のコスト、動物
の種およびサイズ、式Ｉの化合物の相対的活性およびベ
ース飼料として用いる一回分の飼料のタイプの如き要因
で変化する。プロピオン酸塩を増加させ、飼料利用効率
を改善し、発育を促進し、およびケトン症を治療するか
または予防する活性成分の量はこぶ胃または盲腸内でプ
ロピオン酸塩濃度を増加させてミルク生産を改善する量
であるべきであり、該量はこぶ胃中でプロピオン酸塩濃
度を増加させるが酢酸塩および酪酸塩の濃度をひどくは
減少させない量であるべきである。かかる量は標準法に
よって容易に決定される。例えば、ミルク生産に関する
シェイフィンガー（Ｓcheifinger）、米国特許第４４３
０３２８号およびスミスら（Ｓmith et al.）、英国特
許第２１３７０８７−Ａ号参照。

【００８４】ブタおよび家禽についての代表的な飼料配
合は以下のようになる： コーン、粉砕物 ７８.１５％ 大豆油ミール、４４％ １７.０ ％ 肉片、５０％ ３.０ ％ オイスター・シェルフレーバー ０.４ ％ ボーン・ミール ０.５ ％ 酸化亜鉛 ０.０１％ ビタミンＡ、Ｂ、Ｂ₁₂およびＤ 随意に

【００８５】補給物 ブロイラー用のニワトリ配合物は以下の処方を用いて調
製する。 イエロー・コーンミール ６７.３５％ 大豆油ミール ２４.００％ メンハーデン魚粉 ６.００％ 水蒸気処理したボーン・ミール １.００％ 粉砕した石灰石 １.００％ ヨード処理した塩 ０.３４％ ２５％塩化コリン ０.１３％ ビタミンＢ₁₂ ０.１０％ 硫酸マンガン ０.０２％ ビタミン混合物 ０.０６％

【００８６】離乳期から肥育して仕上げる時期に至るブ
タの飼料は補給されたものであってよい。ブタは（２５
ポンドのブタに対し）１日当たり約２ポンド量から（１
５０ポンドのブタに対し）１日当たり９ポンド量を食す
る。ほとんどの１回分飼料は豆科貯蔵生牧草、小麦のも
みがら、オート麦、大麦、糖蜜または蛋白質補給物で補
給したコーンベースより成る。

【００８７】家禽の飼料はスターター飼料分、ブロイラ
ー用飼料分および産卵用飼料分より成る。該飼料は通
常、粉砕コーン、コーンミールまたは大豆ミールをベー
スとする。ブロイラーの飼料は、しばしば添加脂肪、蛋
白質およびビタミンの如き高エネルギー補給物を含有す
る。シチメンチョウの飼料は同様であるが発育開始用飼
料分と発育用飼料分のみより成る。ニワトリまたはキジ
は１日当たり０.０３〜０.３ポンドの飼料を食し、シチ
メンチョウは該飼料を２回多量に食する。飼料の見積っ
た摂取量は肉を生産する動物の体重および年令に依存す
る。

【００８８】ＡＡＤ−６０９抗生物質またはその混合物
から選択した活性成分をかかる飼料と均一に混合して補
給飼料を得、次いで最もしばしば慣例に従い自由に摂食
させる。これを行うのに都合よくは、所望により駆虫
薬、窒素源または抗生物質、例えばバージニアマイシン
またはオキシテトラサイクリンの如き当業者に公知の他
の補給物と組合せたまたは組合せない本発明の補給発育
促進剤のプレミックスを処方者または飼料を毎回与える
者に販売する製造業者によって調製する。プレミックス
における活性成分の濃度は通常、重量で５〜７５％であ
るかまたは完成した１回分飼料における濃度の１００〜
２０００倍の濃度である。プレミックスの形態は液体ま
たは固体であってよい。プレミックスビヒクルは液体の
プレミックス調製物を形成するコーン油、綿実油、糖蜜
またはデイステイラーズ・ソリュブルである。固体プレ
ミックス調製物のベースとしてスクロース、ラクトー
ス、コーンミール、粉砕コーン、小麦粉、炭酸カルシウ
ムまたは大豆ミールをしばしば用いる。次いでプレミッ
クス組成物を目的の動物に与える全１回分飼料と均一に
混合する。かかるプレミックス組成物は本明細書で用い
る「飼料組成物」なる語に包含される。

【００８９】完成した１回分試料における活性成分の濃
度は、例えば全飼料百万部当たり重量で１〜１０００部
（ppm）の活性成分またはトン当たり約２〜１１５gの範
囲から選択した非毒性だが活性な量である。有利には、
活性成分の非毒性量が１０〜５０ppmの範囲から選択さ
れる。

【００９０】本発明のこの方法はＡＡＤ−６０９抗生物
質の効果的に発育を促進するが非毒性の量を単胃または
反芻の、肉またはミルクを生産する動物、特に肉牛およ
び乳牛、ヒツジ、ブタおよび家禽に与えることより成
る。消化管が盲腸または盲腸状チャンバーにおける発酵
も特徴とする他の単胃動物は発酵を特徴とする。

【００９１】前記の補給飼料１回分は当業者にとって公
知の方法によって動物に与えられる。牧場、囲いまたは
生育小屋において自由に摂食させるのは、動物の発育お
よびミルク生産速度を増大させるのにおよび飼育の飼料
効率を増大させるのに最も都合よい。以下に実施例を挙
げて本発明の抗生物質の生産、単離および精製をさらに
詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるもので
はない。

【００９２】

【実施例】

実施例１ ケイ・アリダム・ラルガム、ＳＫ＆Ｆ−ＡＡＤ−６０９
の発酵 ＳＫ＆Ｆ−ＡＡＤ−６０９の寒天斜面培養物を８℃で１
４日間増殖させた。該斜面内容物を分注し、滅菌蒸留水
１０ml中に懸濁し、４リットルのアスピレーターびん中
に含有されるシード培地１３Ｈ５００ml中に接種した。
このシード培養物を２５０rpmで動程５cmの往復振盪器
上で２８℃にて４日間インキュベートした。全シードを
１４リットルのニュー・ブルンスウイック（Ｎew Ｂru
nswick）ファーメンター（Ｍ−１９）中の培地１３Ｈ
９.５リットルに移した。４００rpmで撹拌し、４リット
ル／分で通気しながら該ファーメンターを３日間２６℃
に制御した。培養物１０リットルを７５リットルのシェ
マパック（Ｃhemapac）ファーメンター中の培地１３Ｈ
５０リットルに移すことにより最終シードを調製した。
これを２５０rpmで撹拌し、２５リットル／分で通気し
ながら３日間２６℃に制御した。これを用いて７５０リ
ットルのＡＢＥＣファーメンター中の産生培地Ｖ−２５
００リットルを接種した。産生ステージを１５０rpmで
撹拌し、２００リットル／分で通気しながら２８℃に維
持した。ＡＡＤ−６０９複合体の産生を分析ＨＰＬＣで
注意深くモニターし、それまでにＡＡＤ−６０９抗生物
質が支配的な成分となる４５時間目に産生物を収穫し
た。この時点にひき続き、ＡＡＤ−２１６抗生物質の産
生は４０：１の比でＡＡＤ−６０９抗生物質を顕著に超
えた。早く収穫すると新規化合物の公知成分からの単離
が容易となる。培地１３Ｈは次の成分より成る：蒸留水
（１リットル）、スターチ（１５g）、スクロース（５
g）、デキストロース（５g）、ソイペプトン（７.５
g）、コーン浸出液（５g）、Ｋ₂ＨＰＯ₄（１.５g）、Ｎ
aＣl（０.５g）、ＣaＣＯ₃（１.５g）、ＺnＳＯ₄・７Ｈ
₂Ｏ（２.８g／リットル）のミネラル補給物（５ml）、
フェリクエン酸アンモニウム（２.７g／リットル）、Ｃ
uＳＯ₄・５Ｈ₂Ｏ（ ０.１２５g／リットル）、ＭnＳＯ
₄・Ｈ₂Ｏ（１g／リットル）、ＣoＣl₂・６Ｈ₂Ｏ（０.１
g／リットル）、Ｎa₂Ｂ₄Ｏ₇・１０Ｈ₂Ｏ（０.１g／リッ
トル）、Ｎa₂ＭoＯ₄・２Ｈ₂Ｏ（０.０５g／リット
ル）。

【００９３】培地Ｖ−２は次の成分より成る：蒸留水
（１リットル）、大豆ミール（１５g）、ビート糖蜜
（１０g）、エストランサン（Ｅstransan）−４（１０
g）、グルコースまたはグリセロール（１０g）およびＮ
aＣl（０.３g）。

【００９４】実施例２ 新規成分の識別 実質的に前記実施例１に記載した如く調製したＳＫ＆Ｆ
−ＡＡＤ−６０９の発酵培養物２５０mlを遠心分離によ
って清澄化し、濾液１００mlを凍結乾燥して２.０gを
得、それを４℃で保存した。次いで乾燥した物質を０.
０２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（pＨ７）で復元して２
０mlとした。２０００×Ｇ、４℃における１０分間の遠
心分離によって不溶性物質を除去した。上澄み液中の抗
生物質の濃度は低過ぎてＨＰＬＣ分析によっては正確に
同定および測定できなかった。

【００９５】上澄み液をバッチ式にてアフィゲル・１０
−ディー−アラ−ディー−アラ（Ａffigel １０−Ｄ−
ala−Ｄ−ala）（処理能力＝３mg／ml）（バイオ−ラド
（Ｂio−Ｒad）研究所、リッチモンド、カリフォルニア
州）２mlに３０分間付し、次いで直径１５mmのカラムに
移した。該ゲルを０.０２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（p
Ｈ７）、３０％アセトニトリルを含有する０.５Ｍ炭酸
水素トリエチルアンモニウム（pＨ９）、および最後に
７０％アセトニトリルを含有する０.１Ｍ水酸化アンモ
ニウムの各々２０mlで連続的に洗浄した。吸光度および
バシラス・スブティリス（Ｂacillus subtilis）に対
する活性によってフラクションをモニターした。ビイ・
スブティリス活性物質の大部分を７０％アセトニトリル
溶液で溶出した。活性フラクションを貯め、凍結乾燥
し、０.０２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（pＨ７）１.５m
l中に入れて復元し、ベックマン・ウルトラスフィア
（Ｂeckman Ｕltrasphere）ＯＤＳ、４.６×１５０mm
（０.１Ｍリン酸ナトリウム（pＨ３.２）中の２５〜４
０％アセトニトリルで溶出；液速は２ml／分；２５４nm
における吸光度によりモニター）を用いてＨＰＬＣによ
り検定した。

【００９６】ＨＰＬＣ分析によりＡＡＤ−２１６Ａ、Ｂ
およびＣ標品並びに他の新規成分と共に溶出する３成分
の存在が示され、該成分は主成分であり以下の表、実施
例２に掲げた保持時間を有するＡＡＤ−６０９Ａ、Ｂお
よびＣを包含していた。糖ペプチド抗生物質の合計収量
は約０.３mgであり、最終濃度は出発ブロスから６５倍
となった。

【００９７】

【表１４】（実施例２） 糖ペプチド ＡＡＤ-216標品 ＡＡＤ-609単離物 １：１混合物 の同時注入 ＲＴ エリア ＲＴ エリア ＲＴ エリア ＡＡＤ-609Ａ 6.46 184680 6.45 71213 ＡＡＤ-216Ａ 6.86 113680 6.84 84327 6.84 116500 ＡＡＤ-609Ｂ 7.21 338820 7.21 153780 ＡＡＤ-216Ｂ 7.59 169970 7.53 39718 7.53 142780 ＡＡＤ-609Ｃ 8.07 342500 8.07 115430 ＡＡＤ-216Ｃ 8.45 130120 8.38 76637

【００９８】これらの結果により、ＨＰＬＣと組合せた
アフィニティー単離は新規な糖ペプチド抗生物質につい
ての急速で効果的なスクリーニング法であることが証明
された。この方法はブロス培養物の初期濃度、広範囲の
精製、または大規模な発酵の必要がない糖ペプチド抗生
物質の簡単な識別を可能とする。

【００９９】実施例３ ＡＡＤ−６０９複合体のブロスからの単離 実質的に前記実施例１に記載した如く調製した発酵ブロ
ス６００リットルを回転ドラム濾過によって清澄化し
た。清澄化にひき続き、ブロス試料４３０リットルを以
下の方法で前処理した：新しいＣ₁₈セプ−パク（Ｓep−
Ｐak）カートリッジ（ウォターズ（Ｗaters）社）をま
ずＣＨ₃ＣＮ、Ｈ₂Ｏ、および０.１Ｍ、pＨ３.２のリン
酸塩の各４mlで連続的に洗浄した。予め希Ｈ₃ＰＯ₄でp
Ｈ６.０〜６.５に調整したブロスの一部を該カートリッ
ジに通した。次いで該カートリッジを０.１Ｍ、pＨ３.
２のリン酸塩、２０％ＣＨ₃ＣＮ／０.１Ｍ、pＨ３.２の
リン酸塩、および５０％ＣＨ₃ＣＮ／０.１Ｍ、pＨ３.２
のリン酸塩の各２.０mlで連続的に溶出した。５０％溶
出物をバイアル中に収集し、２５μl分をＨＰＬＣ検出
用に採取した。用いたアセトニトリルはガラス蒸留ＨＰ
ＬＣグレード（ブルディック・アンド・ジャクソン（Ｂ
urdick and Ｊackson）研究所、ムスケゴン（Ｍuskeg
on）、ミシガン州）であり、用いた水はイン−ハウス・
ミリーＱ（in−house Ｍilli−Ｑ）システムから生成
したＨＰＬＣグレードであった。固体ＫＯＨを０.１Ｍ
Ｈ₃ＰＯ₄に加えることにより（共にＡＣＳ試薬グレード
である）、リン酸塩溶液を調製した。

【０１００】（前処理なしの）清澄化したブロスを２Ｎ
ＨＣlでpＨ７に調整し、アンバーライト（Ａmberlit
e）ＸＡＤ−７（ローム・アンド・ハス（Ｒohm and
Ｈass）、フィラデルフィア、ペンシルバニア州）に直
接付した。水で洗浄した後、水中の６０％（容量／容
量）アセトニトリルでの溶出によってＡＡＤ−６０９複
合体を回収した。得られた溶出物６４リットルをライジ
ングフィルムエバポレーター中で濃縮して４.５リット
ルとし、分析ＨＰＬＣによって定量した。

【０１０１】濃縮したＸＡＤ−７溶出物４.５リットル
を２Ｎ ＨＣlでpＨ７に調整し、プレコートフィルター
の補助を用いてホワットマン１番の濾紙を通して濾過し
た。濾液をバッチ型法で３０分間アフィゲル・１０−デ
ィー−アラ−ディー−アラ（Ａffigel １０−Ｄ−Ａla
−Ｄ−Ａla）（処理能力＝１２mg／分）６００mlと合し
た。スラリーをフィルター・ディスクとストップコック
付きの４.５×６０cmガラスカラム中に注入し、消費物
を収集した。アフィニティーゲルをpＨ７の０.０２Ｍリ
ン酸ナトリウム６リットル、ひき続いてpＨ７.８の０.
５Ｍ ＮＨ₄ＯＡc３リットルで洗浄した。３、５および
１０％アセトニトリル／Ｈ₂Ｏ洗液（３、２、１リット
ル）の段階的系列を用いてＡＡＤ−２１６複合体を特異
的に溶出し、ひき続いて０.１Ｍ ＮＨ₄ＯＨ中の５０％
アセトニトリルでＡＡＤ−６０９成分を溶出した。フラ
クションを２００〜１０００mlの採液容量で収集し、Ｈ
ＰＬＣにより検定した。ＡＡＤ−６０９抗生物質を含有
するフラクションを貯め、凍結乾燥した。０.４Ｍ Ｎa
ＨＣＯ₃（pＨ９.５）中の３０％アセトニトリル２リッ
トルでのカラム再生に続き、消費物をリサイクルした。

【０１０２】リン酸塩および酢酸塩緩衝液で初期洗浄し
て非特異的に結合した汚染物を除去した後、アセトニト
リルを３、５および１０％と段階的に増加させてＡＡＤ
−６０９抗生物質の１０％以下の損失を伴って、結合し
ていたＡＡＤ−２１６抗生物質を効率よく溶出した。Ａ
ＡＤ−２１６のフラクションは捨てた。０.１Ｍ ＮＨ₄
ＯＨ中の５０％アセトニトリルを用い、高回収率でかつ
ＡＡＤ−２１６成分による検出可能な汚染なくして、Ａ
ＡＤ−６０９フラクションを２カラム分の体積以下で溶
出した。

【０１０３】２つのモデル１１０Ａポンプおよびモデル
４２０グラジエントコントローラーより成る基礎高速液
体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて分析ＨＰＬ
Ｃによってブロスの糖ペプチド成分を定量した。ＵＶデ
ィテクターは波長を２２０nmに設定し、０.０４ＡＵＦ
Ｓの感度としたクラトス（Ｋratos）製ＳＦ７７０スペ
クトロフローモニター（Ｓpectroflow Ｍonitor）であ
った。該システムは、また、ヒューレット−パッカード
（Ｈewlett−Ｐackard）製３３９０Ａインテグレーター
およびパーキン−エルマー（Ｐerkin−Ｅlmer）製ＩＳ
Ｓ−１００オートサンプラーも包含するものであった。
カラム（ベックマン・ウルトラスフィア（Ｂeckman Ｕ
ltrasphere）５×１０^-6ＭＯＤＳ４.６mm×１５cm）を
２０００psig（１３.８ＭＰa）の逆圧をかけ１.５ml／
分の一定液速で作動させた。３０：７０のＣＨ₃ＣＮ−
０.１Ｍリン酸カリウム（pＨ３.２）で平等に開始する
移動相グラジエントを用いた。１分後、グラジエントを
開始し、有機相により１０分間にわたって４０：６０の
ＣＨ₃ＣＮ−リン酸塩の最終組成まで直線的に増加させ
た。各実験の最後に、カラムを再平衡化して初期状態に
戻した。各新規糖ペプチドのピーク高さを５μg／mlに
おける対応するＡＡＤ−２１６同族体について得られた
ピーク高さと比較することによって定量を行った。

【０１０４】以下の表実施例３は清澄化したブロス４３
０リットル、ＸＡＤ−７濃縮溶出物４.５リットルおよ
び貯めた５０％アセトニトリルフラクション中に存在す
る（分析ＨＰＬＣによる）糖ペプチド抗生物質の量を示
す。

【０１０５】

【表１５】（実施例３） 清澄化した ＸＡＤ−７溶出 アフィーゲル10− 抽出物430リットル 物 4.5リットル D-Ala-D-Ala 成 分 (mg) (mg) (mg) ＡＡＤ−６０９Ｄ ９０３ １６９１ １８７９ Ａ １４６２ １６１０ １８８５ Ｂ ４７３ ７７８ １１５５ Ｃ ５１６ １０１３ ８８７ ＡＡＤ−２１６Ａ ４７３ − − Ｂ ３４４ − − Ｃ ４３０ − − より純粋でない抽出物のセプ−パク（Ｓep−pak）での
前処理が必要なためアフィニティークロマトグラフィー
前の抗生物質の収量はいくらか変動を示す。

【０１０６】実施例４ ＡＡＤ−６０９ファクターの細胞抽出物からの単離 前記実施例２におけるブロスの清澄化から得た細胞を室
温にてメタノール８０リットルで抽出した。実施例３に
記載した如く試料を前処理し、分析ＨＰＬＣによって検
定した。（前処理なしの）抽出物をライジングフィルム
エバポレーター中、３２℃で濃縮して２０リットルと
し、さらにロータリエバポレーターにより濃縮して８.
２５リットルとした。濃縮した細胞抽出物を３０００×
Ｇ、４℃にて６０分間遠心分離した。４℃で２週間貯蔵
した後、上澄み液７リットルをホワットマン１番の濾紙
に通して濾過した。沈澱物を蒸留水１リットル、次いで
５０％アセトニトリル／水の２.５リットルで洗浄し
た。各洗浄で脱着した後、プレコートフィルターの補助
（ヒフロ・スーパー・セル（Ｈyflo Ｓuper cel）、
ジョンズ−マンビル・プロダクツ（Ｊohns−Ｍanville
Ｐroducts）社）を用い、ホワットマン１番の濾紙を
通す濾過によって抗生物質を回収した。

【０１０７】０.１Ｍ ＮＨ₄ＯＨ中の５０％アセトニト
リルでの産生物溶出に先立ちアフィニティーゲルを１０
％メタノール／水の６リットルで洗浄した以外は前記実
施例３に記載した如く、糖ペプチド産生物をメタノール
細胞抽出物７リットルから精製した。以下の表（表実施
例４）は実質的に前記実施例３に記載した如く行った分
析ＨＰＬＣによるＡＡＤ−６０９Ａ、Ｂ、ＣＣ₂および
Ｄの保持時間およびおよその回収量を示す。

【０１０８】

【表１６】（実施例４） メタノール メタノール アフィニ 細胞抽出物² 濃縮物8.25リットル ティー 成 分 80リットル（mg） (mg) (mg) ＡＡＤ−６０９Ｄ ５９２ ４７３ ４４７ Ａ １４６４ ７８８ ７７３ Ｂ １４９６ ５７６ ６０３ Ｃ ２９３６ １７３９ ９８４ ＡＡＤ−２１６Ａ ２１６ − − Ｂ ８０ − − Ｃ ２６４ − −

【０１０９】実施例５ 調製用ＨＰＬＣ ＳＫＦ−ＡＡＤ−６０９によって産生されたＡＡＤ−２
１６成分の構造的同一性を確認するために、ＡＡＤ−６
０９の産生用に最適化したのではない発酵ブロスを用い
た。ベックマン（Ｂeckman）１１２予備ポンプおよびＩ
ＳＣＯＶ₄波長可変型ディテクター付きの２２mm×３０
０mmに予め充填してあるホワットマン・マグナム（Ｗha
tman Ｍagnum）−２０の１０μのパルティシル（Ｐart
isil）ＯＤＳ−３カラムを用いて、ＡＡＤ−２１６複合
体の個々の成分を分割した。クロマトグラフィーは液速
１０〜１５ml／分で行い、約３００nmにて溶出物をモニ
ターし、２５mlずつのフラクションを集めた。流した試
料は１５％アセトニトリル／０.１Ｍリン酸塩（pＨ６）
に溶解した約２００mgであった。アセトニトリル段階グ
ラジエント（２８−３０−３２％）で成分を溶出した。

【０１１０】実質的に実施例３に記載した如く精製した
ＡＡＤ−６０９成分を、調製用逆相カラムに流した試料
を注入当たり１.０〜１.５gに増加し、段階グラジエン
トを２６−２８−３０−３２％と広げ、および分割した
成分の各中央部分のみを物理化学的および構造的解明の
分析用に収集した以外は前記の如くにして精製した。脱
塩し次いで凍結乾燥した後、アフィニティーにより精製
した複合体４.３８gからの精製した成分の収量はＤ：５
６０mg；Ａ：５５０mg；Ｂ：３１７mg；およびＣ：３１
５mgであった。全て３２０℃を超えると分解する綿毛状
の白色粉末である。両サイドのフラクションは更なる量
のＡＡＤ−６０９抗生物質を含有していたが、リサイク
ルに付さなかった。

【０１１１】実施例６ マンノシルプソイドアグリコン ＡＡＤ−２１６Ａ、ＡＡＤ−６０９複合体または個々の
ＡＡＤ−６０９ファクターの固体試料を０.２mg／mlの
濃度でpＨ３.２の０.１Ｍリン酸ナトリウム中に溶解
し、次いで密閉した真空加水分解管中、１５時間で１０
０℃まで加熱する穏やかな酸加水分解により、糖脂質フ
ラグメントを除去してマンノシルプソイドアグリコン
（Ｒ₂＝−Ｈ）を調製した。基準物質としてＡＡＤ−２
１６の標品プソイドアグリコンとの同時注入を用い、前
記のＨＰＬＣ検定によってＡＡＤ−６０９加水分解生成
物を同定した。

【０１１２】実施例７ ファクタープソイドアグリコン 実質的にシャンら（Ｃhan et al.）、米国特許第４５
２１３３５号によって記載されている如く、ジメチルス
ルホキシド中、１００℃で１５分間各々ファクターを処
理し、次いで逆相ＨＰＬＣによってプソイドアグリコン
を単離することにより、ＡＡＤ−６０９Ａ、ＢおよびＣ
のファクタープソイドアグリコン（Ｒ₁＝Ｈ）を調製す
る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 35/74 Ｆ 7431−4Ｃ 38/00 ＡＤＺ (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:01） (72)発明者 ランジャニカント・メータ アメリカ合衆国ペンシルベニア州19046、 キング・オブ・プルシア、ゼネラル・スコ ット・ロード684番 (72)発明者 ルイス・ジョセフ・ニスベット イギリス国バッキンガムシャー・エスエル ７・１デイビー、マーロウ、クロムウエ ル・ガーデンズ、リトル・コート（番地の 表示なし) (72)発明者 マーシア・キャスリン・シーラー アメリカ合衆国ペンシルベニア州19428、 コンショホッケン、アーデン・ロード380 番 (72)発明者 ゲイル・フォレナ・ウォッシャーマン アメリカ合衆国ペンシルベニア州18966、 ホーランド、ブレントウッド・プレイス９ 番

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ＡＴＣＣ３９９２２およびその突然変異
   体および誘導体の同定特性を有し、該微生物および突然
   変異体および誘導体は同化可能な炭素および窒素源を含
   有する水性栄養培地中での培養に際して回収可能な量の
   ＡＡＤ−６０９抗生物質を産生できるキブデロスポラン
   ギウム・アリダム・ラルガム（Kibdelosporangium arid
   um largum）の生物学的に純粋な培養物。