JPH08109180A - Ｏ→ｎ分子内アシル転位型プロドラッグ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 ＨＩＶプロテアーゼ阻害活性を有するペプチ
ド誘導体へと生理的ｐＨにおいて変化する性質を有す
る、水溶性に富んだ化合物を提供すること。 【構成】 一般式Ｉ、 【化１】 〔式中、Ｐｈはフェニル基を、ｔ−Ｂｕは、tert−ブチ
ル基を表し、Ｒは、メチルチオメチル基、メタンスルホ
ニルメチル基、カルバモイルメチル基、若しくは分枝し
ていてもよい低級アルキル基を表すか、又は、複素環で
あってよい飽和若しくは不飽和の５〜７員環を表し、Ｘ
は、炭素又はイオウを、Ｙは、１−ナフチル基又は５−
イソキノリル基を、そしてｎは、０又は１の整数を表
す。〕で示される化合物又はその薬理学的に許容し得る
塩。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、活性ペプチド誘導体の
プロドラッグに関し、より詳しくは、Ｏ→Ｎ分子内アシ
ル転位により該活性ペプチド誘導体へと変化するペプチ
ド誘導体に関する。特に本発明は、ヒト免疫不全ウイル
ス(HIV) プロテアーゼの、水に難溶な阻害薬のプロドラ
ッグとして有用なペプチド誘導体に関する。

【０００２】

【従来の技術】例えば高血圧治療のための経口のレニン
阻害剤や、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の治療又
は感染予防のための、経口のヒト免疫不全ウイルス（Ｈ
ＩＶ）プロテアーゼ阻害剤のような、種々の経口プロテ
アーゼ阻害剤について研究が進められており、それらの
プロテアーゼに対して阻害活性を有するペプチド誘導体
が種々知られるに至っている。例えばＨＩＶプロテアー
ゼ阻害剤としては、特開平5-170722に多数の活性なペプ
チド誘導体及びその製造方法並びにＨＩＶプロテアーゼ
阻害活性が具体的に記述されており、また特開平6-1922
46、特開平6-220031にもそのような阻害薬及びその改良
された製造方法が開示されている。それらのペプチド誘
導体は、強力なＨＩＶプロテアーゼ阻害作用を有し且つ
タンパク質分解酵素に対して安定であるため、ＡＩＤＳ
の治療及び感染予防に有用であると考えられている。

【０００３】しかしながら、ＨＩＶプロテアーゼやレニ
ン等のプロテアーゼに対し阻害効果のあることが知られ
ている各種ペプチド誘導体は一般に水溶性が低く、この
ため経口投与では本来有する活性を十分に発揮させるこ
とが困難であるという問題があった。また水溶性の低さ
を補うためには特殊な製剤化技術の適用が必要となり、
製造面における負担及びコストを増大させるという不利
益もあった。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、生理的ｐＨ
において分子内アシル転位してプロテアーゼ阻害活性、
特にＨＩＶプロテアーゼ阻害活性を有するペプチド誘導
体へと変化する性質を有する、水溶性に富んだ化合物を
提供することによって、該活性ペプチド誘導体に関する
上記の問題点を解決することを目的とする。

【０００５】

【課題を解決するための手段】すなわち本発明は、一般
式Ｉ、

【化２】 〔式中、Ｐｈはフェニル基を表し、ｔＢｕは、tert−ブ
チル基を表し、Ｒは、メチルチオメチル基、メタンスル
ホニルメチル基、カルバモイルメチル基、若しくは分枝
していてもよい低級アルキル基を表すか、又は、複素環
であってよい飽和若しくは不飽和の５〜７員環を表し、
Ｘは、炭素又はイオウを表し、Ｙは、１−ナフチル基又
は５−イソキノリル基を表し、ｎは、０又は１の整数を
表す。〕で示される化合物又はその薬理学的に許容し得
る塩（該化合物及び該塩を一括して以下「本発明の化合
物」という。）を提供する。

【０００６】該分枝していてもよい低級アルキル基とし
ては、１〜５個の炭素原子よりなるものが好ましい。そ
のような基としては、メチル基、エチル基、プロピル
基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、tert−
ブチル基、１−メチルプロピル基、ペンチル基、イソペ
ンチル基、１−メチルブチル基、２−メチルブチル基そ
の他がある。これらのうちイソプロピル基は特に好まし
い。また、該複素環であってよい飽和若しくは不飽和の
５〜７員環としては、例えば２−テトラヒドロフリル基
が挙げられる。

【０００７】上記薬理学的に許容しうる塩の例として
は、塩酸、硫酸等の無機酸、並びに酢酸、トリフルオロ
酢酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、ピバル酸、コハク
酸、マレイン酸、フマル酸、マロン酸、グルタル酸、安
息香酸、サリチル酸、ケイ皮酸、酒石酸、クエン酸、メ
タンスルホン酸、トルエンスルホン酸等の有機酸との塩
が含まれる。これらの塩の形成は、例えば、対応する遊
離塩基をこれらの酸と混合し放置、冷却することによっ
て、行うことができる。

【０００８】本発明の化合物は、それ自体としてはＨＩ
Ｖプロテアーゼ阻害活性を有しないが、水溶性に富み、
且つ水溶液中において、次の一般式II、

【化３】 〔式中、各記号の定義は前記に同じである。〕で示され
るペプチド誘導体へと変化する。この変化は、一般式Ｉ
の化合物中のエステル結合を形成しているアシル基が酸
素からアミノ基の窒素へと分子内転位（本明細書におい
て「Ｏ→Ｎ分子内アシル転位」という。）することによ
り起り、速やか且つ実質的に100 ％進行する。またこの
転位は、関係するＯ及びＮの結合した炭素原子に関する
立体配置の如何にかかわりなく起こる。Ｏ→Ｎ分子内ア
シル転位により生じた一般式IIの該ペプチド誘導体は、
ＨＩＶプロテアーゼ阻害活性を有する（特開平5-17072
2、特開平6-192246、特開平6-220031及びＯ→Ｎ分子内
アシル転位反応確認試験の部参照）。

【０００９】すなわち、本発明の化合物は、経口投与し
たとき、対応する活性なペプチド誘導体とは異なって、
溶解して水溶液中に完全に均一化でき、溶解後一定時間
内にＨＩＶプロテアーゼ阻害活性を有するペプチド誘導
体へと変化することから、水溶性の低い当該活性ペプチ
ド誘導体を経口投与する場合に比してバイオアベイラビ
リティーの大幅な向上が期待できる。また、水溶性に富
むため、当該活性ペプチド誘導体に比して製剤化が容易
である。

【００１０】更に、本発明の化合物は、特定の立体異性
体として提供してもよくまた立体異性体の混合物として
提供してもよい。転位して生じるペプチド誘導体のうち
ＨＩＶプロテアーゼ阻害活性の点で一般的に一層好まし
い立体異性体については、特開平5-170722号第13欄に記
載されており、本発明の化合物についていえば、式Ｉ中
において、３−アミノ−２−ヒドロキシ−４−フェニル
ブタン酸残基（ｎ＝０のとき）の立体配置は（2S, 3S)
である。

【００１１】本発明の化合物は、例えば次の経路に従っ
て合成できる。

【化４】

【化５】 〔式中、Ｚはアミノ保護基であるベンジルオキシカルボ
ニル基を、Boc はアミノ保護基であるtert−ブトキシカ
ルボニルを、DCC はＮ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジ
イミドを、DMAPはジメチルアミノピリジンを、CDI はカ
ルボニルジイミダゾールを、iQOAは５−イソキノリニル
オキシ酢酸を、NOA は１−ナフチルオキシ酢酸を、BOP
はベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリス（Ｎ，
Ｎ−ジメチルアミノホスホニウム）ヘキサフルオロホス
ファートを、HOBtはＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール
を、NDPPは５−ノルボルネン−２，３−ジカルボキシイ
ミド−ジフェニルホスフェートを、そしてＡＨは酸を、
それぞれ表す。Ｐｈ、ｔＢｕ、Ｒ、Ｘ、Ｙ及びｎは、前
記定義に同じである。〕

【００１２】すなわち、化合物III と、Boc 基によって
アミノ基を保護したアミノ酸とを、縮合剤としてCDI 又
はDCC-DMAPを用いて縮合させて化合物IVを得、化合物IV
を常法、例えば4N-HCl／ジオキサンにより脱Boc して化
合物Ｖを得る。化合物Ｖと、iQOA又はNOA とを、縮合剤
として DCC-HOBt, EDC・HCl 、NDPP等を用いて縮合させ
ることにより、化合物VIが得られる。化合物VIからのＺ
基の除去は、例えば、トリフルオロ酢酸−アニソール系
を用いるPush-Pull 機構によって行うことができる。ま
た、化合物IVから化合物VIへの反応は、脱 Boc基及びiQ
OA (又はNOA)との縮合を１段階にまとめて行ってもよ
い。

【００１３】上記合成の各反応は、合成材料として特定
の立体異性体材料を用いてもラセミ体を用いても、同様
に進行する。化合物Ｉとして特定の立体異性体を得よう
とする場合には、合成材料として対応する特定の立体異
性体を用いることが好ましいが、合成材料としてラセミ
体を用い、得られた化合物Ｉを常法により分割してもよ
い。

【００１４】上記合成経路における出発化合物として用
いる化合物III は、特開平6-220031第６欄に記載の方法
に準じ、例えば次のようにして合成できる。

【化６】 〔式中、Z-OSu は、Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）
スクシンイミドを表す。Ｐｈ、ｔＢｕ、ＸおよびＺは、
前記定義に同じである。〕すなわち、一般式VIIで示さ
れる化合物を、Boc 基でアミノ基の保護された３−アミ
ノ−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸又は４−ア
ミノ−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンタン酸（VII
I）と縮合させ、得られた生成物IXからBoc 基を除去し
て化合物Ｘを得、次いで化合物Ｘのアミノ基をベンジル
オキシカルボニル基（Ｚ基）で保護することによって、
一般式III で示される化合物が得られる。

【００１５】〔本発明の化合物の水溶性〕本発明の化合
物は、ＨＩＶプロテアーゼ阻害活性を有する対応する活
性ペプチド誘導体に比して著しく高い水溶性を有する。
例として、それぞれ実施例１及び２に記載の化合物Ｉa
及びＩb の20℃の水に対する溶解度を、それらがＯ→Ｎ
分子内アシル転位して生ずる対応活性ペプチド誘導体と
比較すると次の表１の通りである。

【００１６】

【表１】

【００１７】〔Ｏ→Ｎ分子内アシル転位反応〕本発明の
化合物は水溶液中においてＯ→Ｎ分子内アシル転位によ
りそれぞれ対応する活性なペプチド誘導体へと変化す
る。例えば後述の実施例に記載の化合物１a 、１b 及び
Ｉc の場合、37℃のリン酸緩衝生理食塩水中（ｐＨ7.4
）において、化合物Ｉa は約15分、化合物Ｉb は約１
時間で転位反応が完了し、化合物Ｉc では10秒以内に完
了することが判明した（Ｏ→Ｎ分子内アシル転位反応確
認試験の部を参照）。

【００１８】

【実施例】以下に実施例を挙げて本発明を更に具体的に
説明する。本明細書において用いる各略号はそれぞれ次
の化合物（若しくはそれらに基づく残基）又は基を表
し、化合物中における相互の結合関係は次の通りであ
る。すなわち： (1) AHPBA は、３−アミノ−２−ヒドロキシ−４−フェ
ニルブタン酸を表し、Thz との結合は、AHPBA のカルボ
キシル基と、Thz のチアゾリジン環の−ＮＨ−との間の
アミド結合による。 (2) AHPPA は、４−アミノ−３−ヒドロキシ−５−フェ
ニルペンタン酸を表し、Thz との結合は、AHPPA のカル
ボン酸と、Thz のチアゾリジン環の窒素原子との間のア
ミド結合による。 (3) Boc は、アミノ保護基であるtert−ブトキシカルボ
ニル基を表す。 (4) BOP は、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリ
ス（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノホスホニウム）ヘキサフル
オロホスフェートを表す。 (5) CDI は、カルボニルジイミダゾールを表す。 (6) DCC は、Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド
を表す。 (7) EDC は、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプ
ロピル）カルボジイミドを表す。 (8) HOBtは、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾールを表
す。 (9) iQOAは、５−イソキノリルオキシ酢酸〔5-isoquino
lyl-O-CH₂-COOH〕を表し、Mta 又はVal との結合は、iQ
OAのカルボキシル基とMta 又はVal のアミノ基との間の
アミド結合による。 (10) Mtaは、Ｌ−β−メチルチオアラニン〔CH₃-S-CH₂-
CH(NH₂)-COOH〕を表し、AHPBA 若しくはAHPPA との結合
は、Mta のカルボキシル基と、AHPBA 若しくはAHPPA の
ヒドロキシル基との間のエステル結合（この場合O ←Mt
a と表示。すなわち←Mta は、左側にCO- が、右側に-N
H₂が位置するように配向させてある。) 又は、AHPBA 若
しくはAHPPA のアミノ基とのアミド結合による。 (11) NOAは、１−ナフチルオキシ酢酸を表す。 (12) NDPP は、５−ノルボルネン−２，３−ジカルボキ
シイミド−ジフェニルホスフェートを表す。 (13) Thzは、１，３−チアゾリジン−４−カルボン酸を
表し、-NH-tBu との結合はアミド結合による。 (14) Valは、Ｌ−バリンを表し、AHPBA 又はAHPPA との
結合は、Mta のカルボキシル基と、AHPBA 若しくはAHPP
A のヒドロキシル基との間のエステル結合（この場合O
←Val と表示。すなわち←Val は、左側にCO- が、右側
に-NH₂が位置するように配向させてある。) 又は、AHPB
A 若しくはAHPPA のアミノ基とのアミド結合による。 (15) Zは、アミノ保護基であるベンジルオキシカルボニ
ル基を表す。 (16) Z-OSuは、Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）スク
シンイミドを表す。

【００１９】〔実施例１〕 (2S, 3S)-AHPBA(O←Mta ←
iQOA)-Thz-NH-tBu・2HCl（Ｉa ）

【化７】 化合物Ｉa を、以下に示すように、化合物IIIaを出発化
合物として化合物IVa、化合物Ｖa 、化合物VIa を順次
経由して合成した。

【００２０】１． Z-(2S, 3S)-AHPBA(O←Mta ←Boc)-T
hz-NH-tBu （化合物IVa ）の合成 以下の２種類の方法で行った。 ａ）ＣＤＩ法による合成 窒素雰囲気下、Boc-Mta 2.35ｇ(10 mmol) を、蒸留した
DMF 20 ml に溶かし、−５℃にてCDI の1.62ｇ(10 mmo
l) を添加し、０〜５℃にて１時間攪拌した。TLC で活
性エステルの生成を確認した後、Z-(2S, 3S)-AHPBA-Thz
-NH-tBu ( 化合物IIIa）1.00ｇ(2 mmol)のDMF 溶液５ m
l を滴下した。０〜５℃にて２時間攪拌し、その後室温
に戻して約20時間攪拌した。酢酸エチル200 mlを反応液
に加え、有機層を以下の順で洗浄した。10％クエン酸 4
0 mlで２回、10％NaCl 40 mlで１回、３％K₂CO₃ 40 ml
で２回、10％NaCl 40 mlで２回。無水硫酸マグネシウム
で乾燥後、溶媒を溜去した。残渣を酢酸エチル10 ml に
溶かし、シリカゲル（２ｇ，メルクNo. 7734) を加えて
溶媒を溜去し、シリカゲルに吸着させた後、ｎ−ヘキサ
ン／酢酸エチル（４：１）で充填したシリカゲルカラム
（60ｇ，メルクNo.7734)上に載せて、上部不純物を同混
合溶媒で溶出除去した後、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル
（１：１）で生成物を溶出させた。溶出部分の溶媒を溜
去し標記化合物0.91ｇ（収率63.6％）を得た。¹ H-NMR(CDCl₃) δ： 1.23-1.31 (m, 9H, N-tBu), 1.44
(s, 9H, O-tBu), 2.04 (s, 3H, Mta-SCH ₃), 2.10-2.16
(m, 2H,-CH ₂-S-CH₃), 2,86-3.07 (m, 2H, Ph-CH₂ -), 3.
11および 3.43 (d, 2H, Thz S-CH ₂-CH), 4,56 および4.
91 (d, 2H, Thz N-CH₂ -S), 4.60-4.75 (m, 1H, Ph-CH₂-
CH), 5.03 (s, 1H, Thz N-CH-CO), 5.34-5.67 (m, 2H,
Ph-CH₂ -O), 7.16-7.36 (m, 10H)

【００２１】ｂ）ＤＣＣ−ジメチルアミノピリジンによ
る合成 Z-(2S, 3S)-AHPBA-Thz-NH-tBu ( 化合物IIIa）6.0 ｇ(1
2 mmol) 、ジメチルアミノピリジン 0.22 ｇ(1.8 mmo
l)、Boc-Mta 4.23ｇ(18 mmol) を塩化メチレン80ml に
溶かし、０〜５℃にてDCC 3.71ｇ(18 mmol) の塩化メチ
レン溶液10 ml を滴下した。０〜５℃にて２時間攪拌
し、その後室温に戻して約20時間攪拌した。反応終了
後、ジシクロヘキシル尿素を濾別し、塩化メチレンでよ
く洗浄した。次いで有機層を以下の順に洗浄した。10％
クエン酸 40 mlで２回、10％NaCl 40 mlで１回、３％K₂
CO₃ 40 ml で２回、10％NaCl 40 mlで２回。有機層を無
水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を溜去した。残渣を酢
酸エチル30 ml に溶かし、シリカゲル（10ｇ，メルクN
o. 7734) を加えて溶媒を溜去し、シリカゲルに吸着さ
せた後、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル（４：１）で充填し
たシリカゲルカラム（200 ｇ，メルクNo.7734)上に載せ
て、上部不純物を同混合溶媒で溶出除去した後、ｎ−ヘ
キサン／酢酸エチル（２：１）で生成物を溶出させた。
溶出部分の溶媒を溜去し、残渣をｎ−ヘキサン50 ml で
粉末化して標記化合物7.57ｇ（白色粉末、収率87.9％）
を得た。融点69〜72℃。〔α〕²¹＝−66.07 (C＝0.56 M
eOH) IR (KBr) cm ^-1： 3200-3600 (NH), 1640-1750 (CO-Oお
よびCO-N)¹ H-NMR(CDCl₃) δ： 1.27-1.34 (m, 9H, N-tBu), 1.43
(s, 9H, O-tBu), 2.11-2.17 (m, 5H, Mta CH ₂-S-CH ₃),
2.80-2.98 (m, 3H, Ph-CH₂ -CH および-CH-O-CO-), 3.12
および3.46 (d, 2H, Thz S-CH₂ -CH), 4.58および4.89
(d, 2H, Thz N-CH₂ -S), 4.73-4.78 (m, 1H, Ph-CH₂-C
H), 5.03 (s, 1H, Thz N-CH-CO), 5.30-5.56(m, 2H, Ph
-CH₂ -O), 7.16-7.31 (m, 10H, Ph-CH₂-OおよびPh-CH₂-C
H)

【００２２】２． Z-(2S, 3S)-AHPBA(O ←Mta)-Thz-NH-
tBu ・HCl （化合物Ｖa ）の合成 化合物IVa の 7.47 ｇ(10.42 mmol)をアセトニトリル1
2.5 ml に溶かし、０〜５℃にて４N-HCl/ジオキサン 2
5.5 ml(104.2 mmol)を注入した。10℃以下で２時間攪拌
し、室温で１時間攪拌した。溶媒を溜去し、残渣を塩化
メチレンに溶かして溶媒溜去を２度繰り返し、冷却下に
ｎ−ヘキサン約60 ml を注入して固化させた。１時間冷
蔵放置した後結晶を濾取し、真空乾燥して標記化合物7.
30ｇ（白色粉末、収率100.0 ％）を得た。融点116 〜11
9 ℃。〔α〕²¹＝−92.85 (C＝0.56 MeOH) IR(KBr) cm^-1： 1660 (CO-NH), 1750 (CO-O-)¹ H-NMR(CDCl₃) δ： 1.27 (s, 9H, N-tBu), 1.98-2.11
(m, 5H, Mta -CH₂ -S-CH₃ ), 2.87-3.46 (m, 5H), 4.14
(m, Mta CO-CH-NH), 4.71-5.00 (m, 4H), 5.48-5.64
(m, 2H, Ph-CH ₂-O), 7.11-7.40 (m, 10H, Ph-CH₂-O 及
びPh-CH₂-CH)

【００２３】３． Z-(2S, 3S)-AHPBA(O ←Mta ←iQOA)-
Thz-NH-tBu（化合物VIa ）の合成 次の２種類の方法で行った。 ａ）ＤＣＣ−Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾールによる
合成 化合物Ｖa の 7.2ｇ(10.26 mmol)、iQOA 2.29 ｇ(11.29
mmol)、HOBt・H₂O 1.73ｇ(11.29 mmol)をDMF 50 ml に
溶かし、0 〜5 ℃にてトリエチルアミンを滴下しｐＨが
中性であることを確認した（メルク Art. 9533）。次い
でDCC 2.33ｇ(11.29 mmol)のDMF 溶液10 ml を滴下し
た。０〜５℃にて１時間攪拌し、その後室温で終夜攪拌
した。反応の進行をチェックした後、ジシクロヘキシル
尿素を濾去し、溶媒を溜去した。残渣を酢酸エチル100
mlに溶かし、以下の順に有機層を洗浄した。10％クエン
酸 40 mlで２回、10％NaCl 40 mlで１回、３％K₂CO₃ 40
mlで２回、10％NaCl 40 mlで２回。有機層を無水硫酸
マグネシウムで乾燥後、溶媒溜去した。残渣を酢酸エチ
ル20 ml に溶かし、不溶物（ジシクロヘキシル尿素）を
ひだおり濾紙で濾去した。溶媒を溜去し、残渣を酢酸エ
チル５ ml とエーテル50 ml に溶かし、冷却下ｎ−ヘキ
サン50 ml を加えて結晶化させた。更に同様の操作によ
り再結晶し、標記化合物5.91ｇ（淡黄白色の結晶性粉
末、収率71.8％）を得た。融点92〜95℃。〔α〕²²＝−
105.36 (C＝0.56 MeOH) IR(KBr) cm ^-1 ： 1670 (CO-NH), 1750 (CO-O-)¹ H-NMR(CDCl₃) δ： 1.31 (s, 9H, N-tBu ), 2.04-2.14
(m, 5H, Mta CH₂ -S-CH₃ ), 2.90-3.49 (m, 3H), 4.10-
5.08 (m, 7H, Thz N-CH ₂-S およびThz N-CH-CO およびP
h-CH₂-CH および-CH-O-COおよびPh-CH₂ -O), 5.61 (d, 2
H, iQOA-O-CH₂ ), 7.23-7.26 (m, 11H, Ph-CH₂-OおよびP
h-CH₂-CH およびiQOA-6位), 7.51 および7.61 (dd, 2H,
iQOA-7,8位), 8.03 (d, 1H, iQOA-4位), 8.57 (d, 1H,
iQOA-3位),9.24 (s, 1H, iQOA-1位)

【００２４】ｂ）ＮＤＰＰによる合成 化合物Ｖa の 0.653ｇ(1 mmol)、iQOA 0.305ｇ(1.5 mmo
l)、NDPP 0.617ｇ(1.5mmol)を塩化メチレン15 ml に溶
かし、氷冷下トリエチルアミン 0.35 ml(2.5 mmol)を滴
下した。氷冷下に１時間攪拌し、その後室温で約20時間
攪拌した。反応液を３％K₂CO₃ 10 ml で３回、10％NaCl
15 mlで３回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。
溶媒を溜去し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製し
た後、ｎ−ヘキサンで結晶化し標記化合物0.48ｇ（淡黄
白色の結晶性粉末、収率59.9％）を得た。

【００２５】４． (2S, 3S)-AHPBA(O←Mta ←iQOA)-Th
z-NH-tBu・2HCl（Ｉa ）の合成 化合物VIa の3.21ｇ(4 mmol)をジメチルスルフィド 11.
75 ml (160 mmol)、アニソール 4.35 ml (40 mmol)に溶
かし、−５℃に冷却した。トリフルオロ酢酸154 .0 ml
(2000 mmol) を10℃以下で注入した。10℃以下にて１時
間攪拌し、その後室温にて20時間攪拌した。反応液をエ
ーテルとの共沸を利用して減圧溜去し、残渣にエーテル
50 ml を加えデカンテーションした。トルエン50 ml と
酢酸エチル20 ml に溶かし、０℃にて4N-HCl/ ジオキサ
ン 3.0 ml(12 mmol)を滴下した。30分間攪拌し、結晶を
濾取し、アセトンでよく洗浄した後、真空乾燥した。こ
の粗結晶をメタノール20 ml に溶かし、活性炭2.0 ｇを
加えて１時間攪拌した。セライト濾過を行い、次いで溶
媒を約半分量まで濃縮した。冷却下、ｎ−ヘキサン／酢
酸エチル（１：１）50 ml を注入し、結晶化した。15℃
にて１時間攪拌し結晶を濾取した。結晶をアセトンでよ
く洗浄して真空乾燥し標記化合物1.95ｇ（淡黄白色の結
晶性粉末、収率70.4％）を得た。融点166 〜170 ℃。
〔α〕²³＝−131.87 (C＝0.46 MeOH) 元素分析： C₃₃H₄₁N₅O₆S₂ ・2HClとして 理論値 (%)： C; 53.50 , H; 5.85 , N; 9.46 実測値 (%)： C; 53.41 , H; 5.95 , N; 9.67 APCI-Mass ： 668 (M+H)⁺ IR(KBr) cm^-1： 1670 (CO-NH), 1750 (CO-O-)¹ H-NMR(CDCl₃) δ： 1.27 (s, 9H, N-tBu), 2.13 (s, 5
H, Mta CH₂ -S-CH₃ ), 2.90-2.98 (m, 3H, Ph-CH ₂-CHおよ
び-CH-O-CO-), 4.72-5.05 (m, 7H, Thz N-CH ₂-SおよびT
hz N-CH-CO およびPh-CH₂-CH および-CH-O-CO及びiQOA-
CH₂ -O), 7.24-7.49 (m, 5H, Ph-CH₂-CH), 7.58-8.07
(m, 3H, iQOA-6,7,8 位), 8.65-8.75 (m, 2H, iQOA-3,4
位), 9.26 (d, 1H, iQOA-1位)

【００２６】〔実施例２〕 (2S, 3S)-AHPBA(O←Val ←
iQOA)-Thz-NH-tBu・2HCL（Ｉb ）

【化８】 化合物Ｉb を、以下に示すように、化合物IIIaを出発原
料として化合物IVb 、化合物Ｖb 、化合物VIb を順次経
由して合成した。

【００２７】１． Z-(2S, 3S)-AHPBA(O←Val ←Boc)-T
hz-NH-tBu （化合物IVb ）の合成 以下の２種類の方法で合成した。 ａ）ＣＤＩ法による合成 窒素雰囲気下に、Boc-Val 4.19ｇ(19.3 mmol) を蒸留し
たDMF 30 ml に溶かし、−５℃にてCDI 3.13 g(19.3 mm
ol) を添加し、０〜５℃にて１時間攪拌した。TLC で活
性エステルの生成を確認した後、Z-(2S, 3S)-AHPBA-Thz
-NH-tBu ( 化合物IIIa） 1.93 ｇ(3.86 mmol) のDMF 5
mlの溶液を滴下した。０〜５℃にて２時間攪拌し、その
後室温に昇温し約16時間攪拌した。酢酸エチル200 mlを
反応液に加え、有機層を以下の順で洗浄した。10％クエ
ン酸 50 mlで２回、10％NaCl 50 mlで１回、３％K₂CO₃
50 ml で２回、10％NaCl 50 mlで２回。無水硫酸マグネ
シウムで乾燥後、溶媒を溜去した。残渣を酢酸エチル10
ml に溶かし、シリカゲル（４ｇ，メルクNo. 7734) を
加えて溶媒を溜去し、シリカゲルに吸着させた後、ｎ−
ヘキサン／酢酸エチル（４：１）で充填したしたシリカ
ゲルカラム（60ｇ，メルクNo.7734)上に載せて、上部不
純物を該混合溶媒で溶出除去した後、ｎ−ヘキサン／酢
酸エチル（２：１）で生成物を溶出させた。溶媒を溜去
し残渣をｎ−ヘキサンで粉末化して標記化合物1.866 ｇ
（白色粉末、収率69.1％）を得た。

【００２８】ｂ）ＤＣＣ−４−ジメチルアミノピリジン
による合成 Z-(2S, 3S)-AHPBA-Thz-NH-tBu （化合物IIIa） 6.0ｇ(1
2 mmol) 、DMAP 0.22ｇ(1.8 mmol)、Boc-Val 3.91ｇ(18
mmol) を塩化メチレン80 ml に溶かし、０〜５℃にてD
CC 3.71ｇ(18 mmol) の塩化メチレン溶液10 ml を滴下
した。０〜５℃にて２時間攪拌し、その後室温に戻して
約20時間攪拌した。反応終了後、ジシクロヘキシル尿素
を濾別し、塩化メチレンでよく洗浄した。次いで有機層
を以下の順で洗浄した。10％クエン酸 40 mlで２回、10
％NaCl 40 mlで１回、３％K₂CO₃40 ml で２回、10％NaC
l 40 mlで２回。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥
後、溶媒を溜去した。残渣を酢酸エチル30 ml に溶か
し、シリカゲル（10ｇ，メルクNo. 7734) を加えて溶媒
を溜去し、シリカゲルに吸着させた後、ｎ−ヘキサン／
酢酸エチル（４：１）で充填したシリカゲルカラム（20
0 ｇ，メルクNo.7734)上に載せて、上部不純物を同混合
溶媒で溶出除去した後、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル
（２：１）で生成物を溶出させた。溶媒を溜去し、残渣
をｎ−ヘキサン50 ml で粉末化して標記化合物6.95ｇ
（白色粉末、収率82.7％）を得た。融点77〜80℃。
〔α〕²²＝−118.26 (C＝0.58 MeOH) IR(KBr) cm^-1： 3200-3500 (NH), 1650-1750 (CO-Oおよ
びCO-N)¹ H-NMR(CDCl₃) δ： 0.91-1.07 (dd, 6H, -CH-(CH₃)₂ ),
1.27-1.35 (m, 9H, N-tBu), 1.42 (s, 9H, O-tBu), 2.
22 (m, 1H, -CH-(CH₃)₂), 2.83-3.01 (m, 2H, Ph-CH₂ -C
H), 3.14および3.46 (d, 2H, Thz S-CH₂ -CH), 4.28 (m,
1H, Val CO-CH-NH), 4.62および4.97 (d, 2H, Thz N-C
H₂-S), 4.81-4.91 (m, 1H, Ph-CH₂-CH), 5.03 (s, 1H,
Thz N-CH-CO), 5.37-5.44 (m, 2H, Ph-CH₂-O), 7.16-7.
31 (m, 10HPh-CH₂-O およびPh-CH₂-CH)

【００２９】２． Z-(2S, 3S)-AHPBA(O ←Val)-Thz-NH-
tBu ・HCl （化合物Ｖb ）の合成 ａ）化合物IVb の6.85ｇ (9.78 mmol)をアセトニトリル
12 ml に溶かし、０〜５℃にて4N-HCl／ジオキサン 24.
5 ml (97.8 mmol)を注入した。10℃以下で２時間攪拌
し、次いで室温で１時間攪拌した。溶媒を溜去し、残渣
を塩化メチレンに溶かして溜去する操作を２回行い、冷
却下ｎ−ヘキサン約60 ml を注入して固化させた。１時
間冷蔵放置し、結晶を濾取し真空乾燥して標記化合物6.
19ｇ（白色粉末、収率99.6％）を得た。融点138 〜140
℃。〔α〕²¹＝−70.37 (C＝0.54 MeOH) IR(KBr) cm^-1 : 1660 (CO-NH), 1750 (CO-O)¹ H-NMR(CDCl₃) δ： 1.09-1.16 (m, 6H, -CH(CH₃)₂ ),
1.27 (s, 9H, N-tBu), 2.45 (m, 1H, -CH(CH₃)₂), 2.85
-2.96 (m, 2H, Ph-CH ₂-CH), 3.19-3.49 (m, 3H, Thz S-
CH₂ -CH および-CH-O-CO), 4.13-4.44 (m, 1H, Val CO-C
H-NH), 4.81-5.01(m, 4H, Thz N-CH₂-S およびThz N-CH
-CO 及びPh-CH₂-CH), 5.55 (s, 2H, Ph-CH₂-O), 7.18-
7.28 (m, 10H, Ph-CH₂-O 及びPh-CH₂-CH)

【００３０】３． Z-(2S, 3S)-AHPBA(O ←Val ←iQOA)-
Thz-NH-tBu（化合物VIb ）の合成 ＤＣＣ−ＨＯＢｔにより次の通りに行った。すなわち、
化合物Ｖb の6.09ｇ(9.57 mmol) 、iQOA 2.14 ｇ(10.53
mmol)、HOBt・H₂O 1.61ｇ(10.53 mmol)をDMF50 ml に
溶かし、０〜５℃にてトリエチルアミン1.33 ml (9.57
mmol) を滴下しｐＨが中性であることを確認した（メル
クArt. 9533)。次いでDCC 2.17ｇ(10.53mmol)のDMF 溶
液10 ml を滴下した。０〜５℃にて１時間攪拌し、その
後室温で終夜攪拌した。反応の進行をチェックした後、
ジシクロヘキシル尿素を濾去し、溶媒を溜去した。残渣
を酢酸エチル100 mlに溶かし、以下の順に有機層を洗浄
した。10％クエン酸 40 mlで２回、10％NaCl 40 mlで１
回、３％K₂CO₃ 40 ml で２回、10％NaCl 40 mlで２回。
有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を溜去し
た。残渣を酢酸エチル20 ml に溶かし、不溶物（ジシク
ロヘキシル尿素）をひだおり濾紙で濾去した。溶媒を溜
去し、残渣を酢酸エチル５ ml とエーテル50 ml に溶か
し、冷却下ｎ−ヘキサン50 ml を加えて結晶化させた。
更に同様の操作により再結晶し、標記化合物5.98ｇ（淡
黄白色の結晶性粉末、収率79.7％）を得た。融点98〜10
2 ℃。〔α〕²²＝−137.63 (C＝0.47 MeOH) IR(KBr) cm ^-1 ： 1670 (CO-NH), 1750 (CO-O)¹ H-NMR(CDCl₃) δ： 0.96-1.06 (m, 6H, -CH(CH₃)₂ ),
1.30 (s, 9H, N-tBu), 2.32-2.34 (m, 1H, -CH(CH₃)₂),
2.89-2.96 (m, 2H, Ph-CH₂ -CH), 3.14-3.48 (m,3H, Th
z S-CH ₂-CHおよび-CH-O-CO), 4.46-5.57 (m, 9H, Val C
O-CH-NH およびThz N-CH _2-S およびThz N-CH-CO および
Ph-CH₂-CH およびiQOA -CH ₂-およびPh-CH₂ -O), 7.06-7.
29 (m 11H, Ph-CH₂-O およびPh-CH₂-CH およびiQOA-6
位), 7.52 および7.63 (d, 2H, iQOA-7,8 位), 7.96
(d, 1H, iQOA-4位), 8.60 (d, 1H, iQOA-3位), 9.25
(s, 1H, iQOA-1位)

【００３１】４． (2S, 3S)-AHPBA(O←Val ←iQOA)-Th
z-NH-tBu・2HCl（Ｉb ）の合成 化合物VIb の3.14ｇ(4.0 mmol)をジメチルスルフィド1
1.75 ml (160 mmol) 、アニソール4.35 ml (40 mmol)
に溶かし、−５℃に冷却した。トリフルオロ酢酸154 .0
ml (2000 mmol) を10℃以下で注入した。10℃以下にて
１時間攪拌し、その後室温にて20時間攪拌した。反応液
をエーテルとの共沸を利用して減圧溜去し、残渣にエー
テル50 ml を加えデカンテーションした。トルエン50 m
l と酢酸エチル20 ml に溶かし、０℃にて4N-HCl／ジオ
キサン 3.0 ml(12 mmol)を滴下した。30分間攪拌し、結
晶を濾取し、アセトンでよく洗浄した後、真空乾燥し
た。この粗結晶をメタノール20 ml に溶かし、活性炭0.
5 ｇを加えて１時間攪拌した。セライト濾過を行い、次
いで溶媒を約半分量まで濃縮した。冷却下、ｎ−ヘキサ
ン／酢酸エチル（１：１）50 ml を注入し、結晶化し
た。15℃にて１時間攪拌し結晶を濾取した。結晶をアセ
トンでよく洗浄して真空乾燥し、標記化合物2.28ｇ (微
黄白色の結晶性粉末、収率82.9％) を得た。融点164 〜
170 ℃。〔α〕²¹＝−124.77（Ｃ＝0.55 MeOH) 元素分析： C₃₄H₄₃N₅O₆S₂として 理論値 (%)： C; 56.50 , H; 6.28 , N; 9.69 実測値 (%)： C; 56.44 , H; 6.24 , N; 9.84 APCI-Mass ： 650(M+H)⁺ IR(KBr) cm ^-1 ： 1670 (CO-NH), 1750 (CO-O)¹ H-NMR(CDCl₃) δ： 0.92-0.99 (m, 6H, -CH(CH₃)₂ ),
1.28 (s, 9H, N-tBu), 2.25-2.30 (m, 1H, -CH(CH₃)₂),
2.96-3.04 (m, 2H, Ph-CH₂ -CH), 3.41-3.48 (m,2H, Th
z S-CH ₂-CH), 4.03 (t, 1H, Val CO-CH-NH), 4.66-5.22
(m, 7H, N-CH₂-SおよびThz N-CH-CO およびPh-CH₂-CH
およびiQOA-CH₂ およびCH-O-CO), 7.52-7.54 (m, 6H, Ph
-CH₂-CH およびiQOA-6位), 7.82 および7.99 (d, 2H, i
QOA-7,8 位), 8.51-8.68 (dd, 2H, iQOA-3,4位), 9.14
(s, 1H, iQOA-1位)

【００３２】〔実施例３〕(3S, 4S)-AHPPA(O←Mta ←iQ
OA)-Thz-HN-tBu・2TFA（化合物Ｉc ）

【化９】 次の手順で、化合物IIIcから化合物IVc 、化合物VIc の
合成を経由して化合物Ｉc を合成した。 １． Z-(3S, 4S)-AHPPA(O ←Mta ←Boc)-Thz-NH-tBu
（化合物IVc ）の合成 Z-(3S, 4S)-AHPPA-Thz-NH-tBu （化合物IIIc) の200 mg
(0.389 mmol), Boc-Mta 138 mg(0.584 mmol) 、４−ジ
メチルアミノピリジン 5 mg (0.039 mmol)を、DMF −ジ
クロロメタン（１：１）に溶かし、氷冷下DCC 104 mg
(0.506 mmol) を加えその後室温にて14時下ン攪拌し
た。反応混合物を減圧濃縮し、残渣に酢酸エチルを加
え、この溶液を10％クエン酸水溶液、５％重炭酸ナトリ
ウム、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥
した。溶媒を溜去し、残渣をクロロホルムで充填したシ
リカゲルカラムに通し、クロロホルムメタノール（40：
0.5 ）の混合溶媒で溶出した。溶出液を減圧濃縮し、真
空乾燥して、標記化合物110 mg (収率39％) を得た 。

【００３３】２． Z-(3S, 4S)-AHPPA(O ←Mta ←iQOA)-
Thz-NH-tBu（化合物VIc ）の合成 化合物IVc の110 mg (0.151 mmol) にアニソール 33 μ
l (0.302 mmol)とトリフルオロ酢酸 2 ml を加え、氷冷
下１時間攪拌した。反応混合物を減圧濃縮し、DMF 2 ml
に溶かし、トリエチルアミンを加えて中性にした。この
溶液にiQOA 92mg (0.452 mmol) 、BOP 200 mg (0.452 m
mol) 、トリエチルアミン 84 μl を加え、その後室温
にて14時間攪拌した。反応混合物を減圧濃縮し、残渣に
酢酸エチルを加え、この溶液を10％クエン酸水溶液、５
％重炭酸ナトリウム、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナ
トリウムで乾燥した。溶媒を減圧溜去し、ｎ−ヘキサン
を加えて得られる結晶を濾取し、真空乾燥して標記化合
物110 mg（収率89％）を得た。

【００３４】３． (3S, 4S)-AHPPA(O← Mta← iQOA)-T
hz-HN-tBu ・2TFA（化合物Ｉc ）の製造 化合物VIc の110 mg (0.135 mmol) 、アニソール146 μ
l (1.35 mmol) 及びチオアニソール158 μl (1.135 mmo
l)の混合物に、トリフルオロ酢酸3 mlを加え、析出物を
濾取した。これを水に溶解しODS カラムを用いたHPLCで
0.1 ％トリフルオロ酢酸−アセトニトリルの直線濃度勾
配法で溶出し、目的物を含む画分を凍結乾燥して標記化
合物91 mg(収率74％) を得た 。

【００３５】〔実施例４〕 (2S, 3S)-AHPBA(O←Mta ←
NOA)-Thz-NH-tBu ・HCl （化合物Ｉd） 次の手順で、化合物IVd から、化合物VId の合成を経由
して化合物Ｉd を合成した。 １． Z-(2S, 3S)-AHPBA(O←Mta ←NOA)-Thz-NH-tBu
（化合物VId)の合成 Z-AHPBA(O ←Mta ←Boc)-Thz-NH-tBu （化合物IVd)の１
ｇ（1.43 mmol)に４Ｎ塩化水素ジオキサン溶液５ ml (2
0 mmol) を加え、室温にて１時間攪拌した。反応混合物
を減圧濃縮し、ｎ−ヘキサンを加えて得られる結晶を濾
取し、減圧乾燥した。この粉末をDMF ５ ml に溶解し、
NOA 318 mg (1.57 mmol)、HOBt 241 mg(1.57 mmol) 、
トリエチルアミン 240μl (1.72 mmol) 、EDC ・HCl 32
9 mg (1.72 mmol)を加え、その後室温で14時間攪拌し
た。反応混合物を減圧濃縮し、残渣に酢酸エチルを加
え、この溶液を５％炭酸水素ナトリウム、10％クエン酸
水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウム
で乾燥した。溶媒を減圧溜去し、ｎ−ヘキサンを加えて
得られる結晶を濾取し、次いでクロロホルムで充填した
シリカゲルカラムに通し、クロロホルム／メタノール
（20：１）の混合溶媒で溶出した。溶出液を減圧濃縮
し、ｎ−ヘキサンを加えて得られる結晶を濾取し、真空
乾燥して標記化合物757 mg (収率67％) を得た。

【００３６】２． (2S, 3S)-AHPBA(O←Mta ←NOA)-Thz
-NH-tBu ・HCl （化合物Ｉd)の製造 化合物VId の640 mg (0.82 mmol)、アニソール 717μl
(8.2 mmol)及びジメチルスルフィド1.9 ml (32.8 mmol)
の混合物に、トリフルオロ酢酸26 ml を加えて溶解し、
その後、室温で14時間攪拌した。この反応混合液を減圧
濃縮し、氷冷下に４Ｎ塩化水素酢酸エチル溶液 820μl
(3.28 mmol) を加え、エチルエーテルを加えて得られる
析出物を濾取し、真空乾燥して粗生成物717 mg（粗収率
72％）をえた。該粗生成物50 mg を水に溶解しODS カラ
ムを用いたHPLCで、0.1 ％トリフルオロ酢酸−アセトニ
トリルの直線濃度勾配法で溶出させ、目的物を含む画分
を凍結乾燥した。得られた粉末を酢酸エチル0.5 mlに溶
解し、氷冷下に４Ｎ塩化水素酢酸エチル溶液20μl (80
μmol)を加え、ジエチルエーテルを加えて析出する結晶
を濾取し、真空乾燥して標記化合物23 mg （収率45％）
を得た。

【００３７】〔実施例５〕 (2S, 3S)-AHPBA(O←Val ←
NOA)-Thz-NH-tBu ・HCl （化合物Ｉe） 次の手順で、化合物IVe から、化合物VIe の合成を経由
して化合物Ｉe を合成した。 １． Z-(2S, 3S)-AHPBA(O←Val ←NOA)-Thz-NH-tBu
（化合物VIe)の合成 Z-(2S, 3S)-AHPBA(O←Val ←Boc)-Thz-NH-tBu （化合物
IVe)の832 mg (1.19 mmol)に４Ｎ塩化水素ジオキサン溶
液２ml (8 mmol) を加え、室温で１時間攪拌した。反応
混合物を減圧濃縮し、ｎ−ヘキサンを加えて得られる結
晶を濾取し、減圧乾燥した。この粉末をDMF ２mlに溶解
し、NOA 265 mg (1.31 mmol)、HOBt 200mg (1.31 mmol)
、トリエチルアミン200 μl (1.43 mmol) 、EDC ・HCl
274 mg(1.43 mmol)を加え、その後室温で14時間攪拌し
た。反応混合物を減圧濃縮し残渣に酢酸エチルを加え、
この溶液を５％炭酸水素ナトリウム、10％クエン酸水溶
液、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し
た。溶媒を減圧溜去し、ｎ−ヘキサンを加えて得られる
結晶を濾取し、真空乾燥して標記化合物641 mg（収率61
％）を得た。

【００３８】２． (2S, 3S)-AHPBA(O←Val ←NOA)-Thz
-NH-tBu ・HCl （化合物Ｉe)の製造 化合物VIe の300 mg (0.5 mmol) 、アニソール525 μl
(5.0 mmol)及びジメチルスルフィド1.47 ml (2.0 mmol)
の混合物に、トリフルオロ酢酸２mlを加えて溶解し、そ
の後、室温にて14時間攪拌した。この反応混合液を減圧
濃縮し、氷冷下に４Ｎ塩化水素酢酸エチル溶液1.38 ml
(5.5 mmol)を加え、エチルエーテルを加えて得られる析
出物を濾取し、真空乾燥して粗生成物198 mg（粗収率64
％）を得た。該粗生成物50 mg を水に溶解し、ODS カラ
ムを用いたHPLCで、0.1 ％トリフルオロ酢酸−アセトニ
トリルの直線濃度勾配で溶出し、目的物を含む画分を凍
結乾燥した。得られた粉末を酢酸エチル0.5 mlに溶解
し、氷冷下に４Ｎ塩化水素酢酸エチル溶液18μl (72 μ
mol)を加え、ジエチルエーテルを加えて析出する結晶を
濾取し、真空乾燥して標記化合物27 mg （収率54％）を
得た。

【００３９】〔Ｏ→Ｎ分子内アシル転位反応確認試験〕 １． 実施例１に記載の化合物Ｉa 〔(2S, 3S)-AHPBA(O
←Mta ←iQOA)-Thz-NH-tBu・2HCl〕の1 mg (1.35μmol)
を生理食塩水1 mlに溶解した溶液（ｐＨ3.74）の50μl
を37℃のリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ7.4 ）300 μl に
加え、37℃にてインキュベートし、１、２、５、15、及
び60分後に10μl を採取しYMC AM-302 (ODS)カラムを用
い、流速1 ml／分、0.1 ％トリフルオロ酢酸中アセトニ
トリルを20分間で30％から80％まで直線的に上昇させる
溶出条件を用いたHPLCにて分析した（測定波長230 ｎ
ｍ）。この条件における化合物Ｉa の保持時間は5.7
分、Ｏ→Ｎ分子内アシル転位体であるiQOA-Mta-(2S, 3
S)-AHPBA-Thz-NH-tBu（ＨＩＶプロテアーゼ阻害活性ペ
プチド誘導体）標品の保持時間は6.7 分である。各イン
キュベーション時間につき化合物Ｉa の残存率と活性ペ
プチドの生成率を、HPLCの保持時間及びピーク面積から
測定した。また、別に、37℃において、ｐＨ4.9 、5.5
及び8.0 の各リン酸緩衝生理食塩水中における転位によ
る化合物Ｉa の半減期をそれぞれ測定した。それらの結
果を表２及び表３に示す。なお該活性ペプチドのＨＩＶ
プロテアーゼ50％阻害濃度（IC₅₀）は6.5 nMである〔Ch
em. Pharm. Bull., 40(8):2251-2253(1992) を参照（化
合物No.19)〕。

【００４０】

【表２】

【００４１】

【表３】

【００４２】２． 実施例２に記載の化合物Ｉb 〔(2S,
3S)-AHPBA(O←Val ←iQOA)-Thz-NH-tBu・2HCl〕の1 mg
(1.38μmol)を生理食塩水1 mlに溶かした溶液（ｐＨ3.
89）の10μl を、37℃のリン酸緩衝生理食塩水 (ｐＨ7.
4) 600μl に加え、37℃にてインキュベートし、10、3
0、及び60分後に100 μl を採取して上記と同様の方法
で分析した（測定波長230 ｎｍ）。この条件において化
合物Ｉb の保持時間は7.0分、Ｏ→Ｎ分子内アシル転位
体であるiQOA-Val-(2S, 3S)-AHPBA-Thz-NH-tBu〔活性ペ
プチド誘導体〕標品の保持時間は7.6 分である。各イン
キュベーション時間につき化合物Ｉb の残存率と活性ペ
プチドの生成率を、HPLCの保持時間及びピーク面積より
測定した。また別に、37℃において、各ｐＨのリン酸緩
衝生理食塩水中における活性ペプチドの生成率（ｐＨ4.
9 、5.5 ）および化合物Ｉb の半減期（ｐＨ8.0 ）を測
定した。結果は次の表４及び表５の通りである。なお該
活性ペプチドのＨＩＶプロテアーゼ50％阻害濃度（I
C₅₀）は7.8 nMである（N. Yanaihara編, Peptide Chemi
stry 1992（ESCOM Science Publishers. B.V.発行）p.4
39-441 を参照（Table 1 中第８番目の化合物）〕。

【００４３】

【表４】

【００４４】

【表５】

【００４５】３． 実施例３に記載の化合物Ｉc 〔(3S,
4S)-AHPPA(O←Mta ←iQOA)-Thz-HN-tBu・2TFA〕の1 mg
(1.10μmol)を生理食塩水1 mlに溶かした溶液10μl
を、37℃のリン酸緩衝生理食塩水 (ｐＨ7.4 ）600 μl
に加え、１分後に100 μl を採取して、YMC AM-302 (OD
S)カラムを用い、流速1 ml／分、0.1 ％トリフルオロ酢
酸中アセトニトリルを20分間で25％から60％まで直線的
に上昇させる溶出条件を用いてHPLCにて分析した（測定
波長230 ｎｍ）。この条件において化合物Ｉc の保持時
間は7.7 分、Ｏ→Ｎ分子内アシル転位体であるiQOA-Mta
-(3S, 4S)-AHPPA-Thz-NH-tBu（活性ペプチド誘導体）標
品の保持時間は9.3 分である。１分間のインキュベーシ
ョン後、活性ペプチド誘導体のみが検出された。インキ
ュベーション時間を短縮して実験を反復し、インキュベ
ーション時間を30秒間、10秒間と順次短縮して実験を繰
り返したが、何れの場合も化合物Ｉc は検出されず、活
性ペプチド誘導体のみが100 ％の生成率で検出された。
このように、化合物Ｉc は、37℃のリン酸緩衝生理食塩
水 (ｐＨ7.4 ）中において、対応する活性ペプチド誘導
体〔阻害活性：11.3％（5 μM)〕へと10秒以内に変化す
ることが判明した。

【００４６】４． 実施例４に記載の化合物Ｉd 〔(2S,
3S)-AHPBA(O←Mta ←NOA)-Thz-NH-tBu ・HCl 〕の１ m
g (1.42 μmol)をアセトニトリル１mlに溶解した溶液10
μl を、37℃のリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ7.4 ）に加
え、１，２，５及び10分後に各100 μl を採取して、YM
C AM-302 (ODS)カラムを用い、流速1 ml／分、0.1 ％ト
リフルオロ酢酸中アセトニトリルを20分間で45％から10
0 ％まで直線的に上昇させる溶出条件を用いたHPLCにて
分析した。この条件において化合物Ｉd の保持時間は7.
24分、Ｏ→Ｎ分子内アシル転位体であるNOA-Mta-(2S, 3
S)-AHPBA-Thz-NH-tBu （活性ペプチド誘導体）標品の保
持時間は10.50 分である。各インキュベーション時間に
つき化合物Ｉd の残存率と活性ペプチドの生成率を、HP
LCの保持時間及びピーク面積より測定した。結果は次の
表６の通りである。なお、該活性ペプチド誘導体のＨＩ
Ｖプロテアーゼ50％阻害濃度（IC₅₀）は3.2 nMである
〔Chem. Pharm. Bull., 40(8):2251-2253(1992) 、化合
物No.17 (KNI-217) 参照〕。

【００４７】

【表６】

【００４８】５． 実施例５に記載の化合物Ｉe 〔(2S,
3S)-AHPBA(O←Val ←NOA)-Thz-NH-tBu 〕の１mg (1.38
μmol)をアセトニトリル１ ml に溶解した溶液10μl
を、37℃のリン酸緩衝生理食塩水600 μl （ｐＨ7.4 ）
に加え、５、10、30、60及び180分後に各100 μl を採
取して、上記４．と同様の条件にて分析した。この条件
において化合物Ｉe の保持時間は7.78分、Ｏ→Ｎ分子内
アシル転位体であるNOA-Val-AHPBA-Thz-NH-tBu（活性ペ
プチド誘導体）標品の保持時間は10.87 分である。各イ
ンキュベーション時間につき化合物Ｉe の残存率と活性
ペプチドの生成率を、HPLCの保持時間及びピーク面積よ
り測定した。結果は次の表７の通りである。

【００４９】

【表７】

【００５０】〔参考例〕 出発物質の合成 １． 化合物IIIaの合成 実施例１及び２において本発明の化合物Ｉa 、Ｉb 、Ｉ
d 及びＩe の合成に使用した共通の出発物質である化合
物IIIa〔Z-(2S, 3S)-AHPBA-Thz-NH-tBu 〕は、次の通り
に工程１乃至３を経由して合成した。

【００５１】（工程１） Boc-(2S, 3S)-AHPBA-Thz-NH-
tBu の合成 Thz-NH-tBu 4.71 ｇ(25 mmol) 、Boc-(2S, 3S)-AHPBA
7.38 ｇ(25 mmol) 、及びHOBt・H₂O 3.83ｇ(25 mmol)
を、DMF 4.5 ml、塩化メチレン27 ml よりなる混合溶媒
に溶解し、氷冷下DCC 5.42ｇ(26.25 mmol)の塩化メチレ
ン溶液4.4 mlを滴下した。氷冷下に１時間攪拌し、その
後室温にて終夜攪拌した。反応終了後、塩化メチレン12
0 mlを加え、氷冷下に５％クエン酸溶液を120 ml滴下
し、0.5 時間攪拌した。析出したジシクロヘキシル尿素
を濾去し、有機層を５％NaHCO₃水溶液、３％K₂CO₃ 水溶
液、10％NaCl水溶液で洗浄した。無水硫酸ナトリウムで
乾燥し、溶媒を溜去して標記化合物14.36 ｇ（微黄白色
のオイル、収率100.0 ％）を得た。

【００５２】（工程２） (2S, 3S)-AHPBA-Thz-NH-tBu
の製造 上記工程１によって得られたBoc-(2S, 3S)-AHPBA-Thz-N
H-tBu の 14.35ｇ(25mmol) を、塩化メチレン101.5 ml
とジオキサン23.3 ml とからなる混合溶媒に溶解し、氷
冷下にメタンスルホン酸12.54 ｇ(130.5 mmol)を滴下し
た。氷冷下に１時間攪拌し、その後室温にて２時間攪拌
した。反応終了後、氷冷下にNaHCO₃水溶液（8.43ｇ／水
120 ml) を滴下し、分層した。水層にメタノール50 ml
を加え、氷冷下にNaHCO₃水溶液（4.15ｇ／水58 ml)を滴
下した。氷冷下に１時間攪拌した後、終夜室温放置し
た。析出した結晶を濾取し、真空乾燥して標記化合物7.
37ｇ（収率80.6％）を得た。

【００５３】（工程３） Z-(2S, 3S)-AHPBA-Thz-NH-tB
u （化合物IIIa）の合成 上記工程２によって得られた(2S, 3S)-AHPBA-Thz-NH-tB
u の 1.37 ｇ(5.5 mmol)をDMF に溶かし、Z-OSu 〔Ｎ−
（ベンジルオキシカルボニル）スクシンイミド〕1.82ｇ
(5 mmol)を添加した。氷冷下にトリエチルアミン0.77 m
l (5.5 mmol)を滴下し、室温にて２時間攪拌した。反応
液に酢酸エチル50 ml を加え、有機層を10％クエン酸溶
液、10％NaCl水溶液、３％K₂CO₃ 水溶液、10％NaCl水溶
液の順に洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥し溶媒を
溜去して標記化合物2.19ｇ（微黄白色のオイル、収率8
7.9％）を得た。

【００５４】２． 化合物IIIcの合成 化合物Ｉc の合成の出発物質であるZ-(3S, 4S)-AHPPA-T
hz-NH-tBu （化合物IIIc）は、次の通り工程１及び２を
経て合成した。 （工程１） Boc-(3S, 4S)-AHPPA-Thz-NH-tBu の合成 Boc-Thz-NH-tBu 89 mg (0.309 mmol) にアニソール40μ
l (0.370 mmol)と4N-HCl／ジオキサン溶液1.5 ml (6 mm
ol) を加え、室温にて１時間攪拌した。反応混合物を減
圧濃縮し、ジエチルエーテルを加え、析出物を濾取し
た。これを氷冷下DMF 2 mlに溶解し、HOBt 47 mg (0.30
9 mmol) 、Boc-(3S, 4S)-AHPPA 100 mg (0.294 mmol)、
BOP 143 mg (0.324 mmol) 、トリエチルアミン85μl
(0.618 mmol)を加え、その後室温にて14時間攪拌した。
反応混合物を減圧濃縮し、残渣に酢酸エチルを加え、こ
の溶液を５％NaHCO₃、1N塩酸水溶液、飽和食塩水で洗浄
し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧溜去
し、ｎ−ヘキサンを加えて得られる結晶を濾取し、真空
乾燥して標記化合物118 mg（収率76％）を得た。

【００５５】（工程２） Z-(3S, 4S)-AHPPA-Thz-NH-tB
u の合成 上記工程１で得られたBoc-(3S, 4S)-AHPPA-Thz-NH-tBu
の 0.250ｇ(0.521 mmol)にアニソール10μl (0.782 mmo
l)とトリフルオロ酢酸 2 ml とを加え、氷冷下１時間攪
拌した。反応混合物を減圧濃縮しDMF 2ml に溶解し、ト
リエチルアミンを加えて中性にした。この溶液にZ-OSu
172 mg (0.573 mmol) 、Ｎ−メチルモルホリン69μl
(0.521 mmol)を加え、その後室温にて14時間攪拌した。
反応混合物を減圧濃縮し残渣に酢酸エチルを加え、この
溶液を10％クエン酸水溶液、５％NaHCO₃水溶液、飽和食
塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を
減圧溜去し、残渣を真空乾燥して、標記化合物204 mg
（収率76％) を得た 。

【００５６】〔参考例〕 Ｏ→Ｎ分子内アシル転位体標
品の合成 水溶液中における本発明の化合物のＯ→Ｎ分子内アシル
転位による活性ペプチド誘導体の生成の確認に用いた各
活性ペプチド誘導体標品は、次の通りにして合成した。

【００５７】１． 化合物Ｉa のＯ→Ｎ分子内アシル転
位体〔iQOA-Mta-(2S, 3S)-AHPBA-Thz-NH-tBu：化合物II
a 〕標品の合成 該転位体は本出願人の特開平6-220031の実施例１に記載
の化合物であり、当該記載の通り次のように工程１〜３
を経て合成したものである。 〔工程１〕 Boc-Mta-AHPBA-Thz-NH-tBuの合成 AHPBA-Thz-NH-tBu 54.0 ｇ(148 mmol)をDMF 350 mlに懸
濁させ、氷冷下にメタンスルホン酸 9.62 ml (148 mmo
l) 、Boc-Mta 38.3ｇ(163 mmol)、ジフェニルホスホリ
ルアジド 38.4 ml (178 mmol) 、トリエチルアミン45.3
ml (236 mmol)を順に加え、８℃以下で終夜攪拌した。
反応液にメタノール 1.5 Lと３％炭酸水素ナトリウム水
溶液750 mLを氷冷下に加え、析出物を濾取し、メタノー
ル−水 (10:3) で洗浄、真空乾燥して標記化合物 55.7
ｇ (収率65％) を得た。

【００５８】〔工程２〕 Mta-AHPBA-Thz-NH-tBuの製造 ４Ｎ塩化水素ジオキサン溶液 79 ml (316 mmol) とアセ
トニトリル 37 mlの混液を氷冷し、Boc-Mta-AHPBA-Thz-
NH-tBu 24.5 ｇ(42 mmol) を加え、10℃以下で４時間攪
拌した。反応混合物をジクロロメタン 180 ml と５％炭
酸ナトリウム水溶液 400 ml に分配し、水層をジクロロ
メタン90 ml で抽出した。全ジクロロメタン層を飽和食
塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥、減圧乾固
して標記化合物20.3ｇ（粗収率100 ％）を得た。

【００５９】〔工程３〕 iQOA-Mta-AHPBA-Thz-NH-tBu
の合成 iQOA 0.24 ｇ(1.2 mmol)、Mta-AHPBA-Thz-NH-tBu 0.52
ｇ(HPLC 純度換算1.0mmol) 、DMF 2.5 mlの混合物を氷
冷し、ジフェニルホスホリルアジド 0.33 ｇ(1.2 mmo
l)、トリエチルアミン0.12ｇ(1.2 mmol)を順に加え、０
℃にて１時間、次いで室温にて終夜攪拌した。反応混合
物を酢酸エチルと５％炭酸水素ナトリウム水溶液で抽出
し、有機層を10％食塩水で洗浄、無水硫酸マグネシウム
で乾燥、減圧乾固して標記化合物0.71ｇを得た。

【００６０】２． 化合物Ｉb のＯ→Ｎ分子内アシル転
位体〔iQOA-Val-(2S, 3S)-AHPBA-Thz-NH-tBu :化合物II
b 〕標品の合成 該転位体は特開平6-192246の実施例１５に記載の化合物
であり、当該実施例の記載に従って次の通り工程１〜２
を経て合成した。 （工程１） Boc-Val-AHPBA-Thz-NH-tBuの合成 AHPBA-Thz-NH-tBu 1.00 ｇ(2.74 mmol) 、Boc-Val 0.60
ｇ(2.74 mmol) 、HOBt0.37 ｇ(2.74 mmol) をDMF 15 ml
に溶解させ、EDC 塩酸塩 0.58 ｇ(3.01 mmol) を氷冷
下に加え、室温にて終夜攪拌した。反応混合物に５％ク
エン酸水溶液90ml を加えて析出物を濾取し、３％炭酸
カリウム水溶液、熱メタノールで順に洗浄、真空乾燥し
て標記化合物0.92ｇ（収率60％) を得た。

【００６１】（工程２） iQOA-Val-AHPBA-Thz-NH-tBu
の合成 Boc-Val-AHPBA-Thz-NH-tBu 0.92 ｇ(1.64 mmol) を４Ｎ
塩化水素ジオキサン溶液 4.1 ml (16 mmol) に溶解さ
せ、室温にて１時間反応させた。反応液を減圧濃縮した
後にエーテルで希釈し、析出物を濾取し、真空乾燥し
た。これを DMF 10mlに溶解させ、氷冷下にトリエチル
アミン 230μL (1.64 mmol) 、iQOA 0.40 ｇ(1.97 mmo
l) 、HOBt 0.30 ｇ(1.97 mmol) 、EDC 塩酸塩 0.38 ｇ
(1.97 mmol) を順に加え、室温にて終夜攪拌した。減圧
濃縮して酢酸エチルと５％炭酸水素ナトリウム水溶液に
分配し、有機層を飽和食塩水で洗浄、無水硫酸ナトリウ
ムで乾燥、減圧濃縮した後、シリカゲルカラムクロマト
グラフィーに付し、標記化合物0.65ｇ（収率60％）を得
た。

【００６２】３． 化合物Ｉc のＯ→Ｎ分子内アシル転
位体〔iQOA-Mta-(3S, 4S)-AHPPA-Thz-NH-tBu :化合物II
c 〕標品の合成 該転位体は、次の通り工程１〜２を経て合成した （工程１） Boc-Mta-(3S, 4S)-AHPPA-Thz-NH-tBu の合
成 Boc-(3S, 4S)-AHPPA-Thz-NH-tBu 118 mg (0.246 mmol)
にアニソール54μl (0.492 mmol)とトリフルオロ酢酸２
mlを加え、氷冷下１時間攪拌した。反応混合物を減圧濃
縮しDMF ２mlに溶解し、トリエチルアミンを加えて中性
にした。この溶液にHOBt 38 mg (0.246 mmol) 、Boc-Mt
a 70 mg (0.295 mmol)、BOP 142 mg (0.320 mmol) 、ト
リエチルアミン59μl (0.418 mmol)を加え、その後室温
にて14時間攪拌した。反応混合物を減圧濃縮し残渣に酢
酸エチルを加え、この溶液を10％クエン酸水溶液、５％
炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し、
無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧溜去し、ｎ
−ヘキサンを加えて得られる結晶を濾取し、真空乾燥し
て標記化合物125 mgを得た (収率85％) 。

【００６３】（工程２） iQOA-Mta-(3S, 4S)-AHPPA-Th
z-NH-tBuの合成 Boc-Mta-(3S, 4S)-AHPPA-Thz-NH-tBu 125 mg (0.209 mm
ol) にアニソール45μl (0.314 mmol)とトリフルオロ酢
酸２ ml を加え、氷冷下１時間攪拌した。反応混合物を
減圧濃縮しDMF 2 mlに溶解し、トリエチルアミンを加え
て中性にした。この溶液にiQOA 85 mg (0.419 mmol) 、
BOP 185 mg (0.419 mmol) 、トリエチルアミン90μl
(0.628 mmol)を加え、その後室温にて14時間攪拌した。
反応混合物を減圧濃縮し残渣に酢酸エチルを加え、この
溶液を10％クエン酸水溶液、５％炭酸水素ナトリウム水
溶液、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで
乾燥した。溶媒を減圧溜去し、ｎ−ヘキサンを加えて得
られる結晶を濾取し、真空乾燥して標記化合物101 mgを
得た（収率71％) 。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｄ 405/12 ２０７ 405/14 ２０７ 417/14 ２１７ // Ａ６１Ｋ 31/40 ＡＧＢ 31/425 31/47 ＡＤＹ (Ｃ０７Ｄ 417/12 217:02 277:04） (Ｃ０７Ｄ 417/12 277:04 307:06） (Ｃ０７Ｄ 401/12 207:16 217:02） (Ｃ０７Ｄ 405/12 207:16 307:06） (Ｃ０７Ｄ 405/14 207:16 217:02 307:06） (Ｃ０７Ｄ 417/14 217:02 277:04 307:06）

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】一般式Ｉ、 【化１】 〔式中、Ｐｈはフェニル基を表し、 ｔ−Ｂｕは、tert−ブチル基を表し、 Ｒは、メチルチオメチル基、メタンスルホニルメチル
   基、カルバモイルメチル基、若しくは分枝していてもよ
   い低級アルキル基を表すか、又は、複素環であってよい
   飽和若しくは不飽和の５〜７員環を表し、 Ｘは、炭素又はイオウを表し、 Ｙは、１−ナフチル基又は５−イソキノリル基を表し、 ｎは、０又は１の整数を表す。〕で示される化合物又は
   その薬理学的に許容し得る塩。
2. 【請求項２】該分枝していてもよい低級アルキル基が１
   〜５個の炭素原子よりなるものである、請求項１に記載
   の化合物又はその薬理学的に許容しうる塩。
3. 【請求項３】該複素環であってよい飽和若しくは不飽和
   の５〜７員環が２−テトラヒドロフリル基である、請求
   項１若しくは２に記載の化合物又はその薬理学的に許容
   し得る塩。
4. 【請求項４】該薬理学的に許容し得る塩が、塩酸、硫
   酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、酪酸、吉
   草酸、ピバル酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、マ
   ロン酸、グルタル酸、安息香酸、サリチル酸、ケイ皮
   酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、及びトルエ
   ンスルホン酸よりなる群より選ばれた酸との塩である、
   請求項１乃至３のいずれかに記載の化合物又はその薬理
   学的に許容し得る塩。