JPH0796031A - インターロイキン１の産生誘導方法 - Google Patents
インターロイキン１の産生誘導方法Info
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- JPH0796031A JPH0796031A JP5242737A JP24273793A JPH0796031A JP H0796031 A JPH0796031 A JP H0796031A JP 5242737 A JP5242737 A JP 5242737A JP 24273793 A JP24273793 A JP 24273793A JP H0796031 A JPH0796031 A JP H0796031A
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 血液から抗腫瘍免疫機能を賦活するサイトカ
インであるインターロイキン１を、より簡便に、かつよ
り安全に産生誘導し得る方法を提供する。 【構成】 アガロースゲルまたはアガロース誘導体ゲル
からなる材料と血液とを温度１５〜４２℃で接触させる
ことにより、インターロイキン１の産生を誘導する。
インであるインターロイキン１を、より簡便に、かつよ
り安全に産生誘導し得る方法を提供する。 【構成】 アガロースゲルまたはアガロース誘導体ゲル
からなる材料と血液とを温度１５〜４２℃で接触させる
ことにより、インターロイキン１の産生を誘導する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、特定の材料と血液とを
接触させることによりインターロイキン１の産生を効果
的に誘導し得るインターロイキン１の産生誘導方法に関
する。
接触させることによりインターロイキン１の産生を効果
的に誘導し得るインターロイキン１の産生誘導方法に関
する。
【０００２】
【従来の技術】周知のごとく、生体の悪性腫瘍に対する
免疫監視機構を担う抗腫瘍性細胞としては、キラー細
胞、ＮＫ細胞、ＬＡＫ細胞及び、活性化マクロファージ
等が重要な役割を果たしている。また、これらの細胞か
ら分泌されるインターロイキン、インターフェロン、Ｔ
ＮＦ等のサイトカインは、生体の持つ抗腫瘍性に大きく
関与している因子である。近年、外科手術、放射線療
法、化学療法と併用して、生体の持つ免疫監視機構を賦
活することを目的とした免疫療法が、悪性腫瘍の治療法
として盛んに行われてきている。このような、免疫療法
剤として、例えば、レンチナンやシゾフィランの様な薬
剤があるが、癌患者は免疫抑制状態にあり、かかる状態
の中で抗腫瘍免疫に関係する上記の細胞や因子を誘導す
ることはなかなか困難である。
免疫監視機構を担う抗腫瘍性細胞としては、キラー細
胞、ＮＫ細胞、ＬＡＫ細胞及び、活性化マクロファージ
等が重要な役割を果たしている。また、これらの細胞か
ら分泌されるインターロイキン、インターフェロン、Ｔ
ＮＦ等のサイトカインは、生体の持つ抗腫瘍性に大きく
関与している因子である。近年、外科手術、放射線療
法、化学療法と併用して、生体の持つ免疫監視機構を賦
活することを目的とした免疫療法が、悪性腫瘍の治療法
として盛んに行われてきている。このような、免疫療法
剤として、例えば、レンチナンやシゾフィランの様な薬
剤があるが、癌患者は免疫抑制状態にあり、かかる状態
の中で抗腫瘍免疫に関係する上記の細胞や因子を誘導す
ることはなかなか困難である。
【０００３】このような困難を克服するために、最近、
抗腫瘍免疫に関係する上記の細胞や因子を体外で誘導し
たり、直接体外から投与しようという試みがある。例え
ば、癌患者からリンパ球と腫瘍細胞とを体外に取りだ
し、遺伝子組み替えヒト・インターロイキンを加えて培
養し、腫瘍を特異的に攻撃するリンパ球（ＬＡＫ細胞）
を誘導した後に、癌患者体内に戻して、抗腫瘍効果を発
揮する養子免疫療法が行われている。（Rosenberg,S.
A.,Lotze,M.T.,Muul,L.M.et al.:A Progress report o
n the treatment of 157 patients with advanced can
cer using lymphokine-activated killer cells and in
terleukin 2 or high-dose interleukin 2 alone. N.En
gl.J.Med.316:889-897,1987)。
抗腫瘍免疫に関係する上記の細胞や因子を体外で誘導し
たり、直接体外から投与しようという試みがある。例え
ば、癌患者からリンパ球と腫瘍細胞とを体外に取りだ
し、遺伝子組み替えヒト・インターロイキンを加えて培
養し、腫瘍を特異的に攻撃するリンパ球（ＬＡＫ細胞）
を誘導した後に、癌患者体内に戻して、抗腫瘍効果を発
揮する養子免疫療法が行われている。（Rosenberg,S.
A.,Lotze,M.T.,Muul,L.M.et al.:A Progress report o
n the treatment of 157 patients with advanced can
cer using lymphokine-activated killer cells and in
terleukin 2 or high-dose interleukin 2 alone. N.En
gl.J.Med.316:889-897,1987)。
【０００４】しかしながら、癌患者から大量のリンパ球
を取り出し、無菌的に長期間、インターロイキンの存在
下で培養した後に、癌患者に注入するという操作を行う
ため、非常に手間がかかること並びに、培養に長時間を
要すること及び高価なインターロイキンが必要であるこ
となどの多くの問題があった。
を取り出し、無菌的に長期間、インターロイキンの存在
下で培養した後に、癌患者に注入するという操作を行う
ため、非常に手間がかかること並びに、培養に長時間を
要すること及び高価なインターロイキンが必要であるこ
となどの多くの問題があった。
【０００５】また、遺伝子組み替え技術により、抗腫瘍
免疫に関係する上記の種々のサイトカインを大量に得る
ことができるようになり、これらのサイトカインの直接
投与（高久史麿 編集、南江堂、サイトカイン療法、１
９９２）が行われている。しかしながら、遺伝子組み替
え技術により得られたサイトカインは、その蛋白質分子
内に糖鎖を持たなかったり、翻訳後修飾を受けていない
ものであり、本来患者体内で作られるサイトカインと異
なっている。そのため、患者に直接投与しても血液中で
の寿命が短く、本来の効果が発揮できなかったり、様々
な副作用が伴うという欠点を有している。
免疫に関係する上記の種々のサイトカインを大量に得る
ことができるようになり、これらのサイトカインの直接
投与（高久史麿 編集、南江堂、サイトカイン療法、１
９９２）が行われている。しかしながら、遺伝子組み替
え技術により得られたサイトカインは、その蛋白質分子
内に糖鎖を持たなかったり、翻訳後修飾を受けていない
ものであり、本来患者体内で作られるサイトカインと異
なっている。そのため、患者に直接投与しても血液中で
の寿命が短く、本来の効果が発揮できなかったり、様々
な副作用が伴うという欠点を有している。
【０００６】近年、上記欠点を克服するために、癌患者
が本来持っている抗腫瘍免疫機能を体外循環システム等
を利用して、体外で産生を誘導しようという試みがあ
る。例えば、グラム陰性菌細胞壁由来のリポ多糖（特開
昭５９−２１１４５号公報）やレクチン（特開昭６３−
３３３３９号公報）の様な生理活性物質を不溶性担体に
固定化し、体外に取り出した血液および血液成分と接触
させることによって抗腫瘍免疫機能を誘導することが開
示されている。しかしながら、これらの生理活性物質
は、体内にはいった場合に、強い毒性を示す物質であ
り、不溶性担体からの脱離の可能性が皆無である保証が
ない。また、特開平３−２３６７９０号公報、特開平３
−２４０４８５号公報には、それぞれグルクロン酸やＮ
−アセチルノイラミン酸のような酸性糖を不溶性材料に
固定化し、サイトカインを誘導する血液処理剤が開示さ
れている。これらは不溶性担体から脱離しても生体に対
する毒性はないが、このようなリガンドであっても、不
溶性担体に固定化するための反応を行わねばならず、煩
雑な過程が必要である。
が本来持っている抗腫瘍免疫機能を体外循環システム等
を利用して、体外で産生を誘導しようという試みがあ
る。例えば、グラム陰性菌細胞壁由来のリポ多糖（特開
昭５９−２１１４５号公報）やレクチン（特開昭６３−
３３３３９号公報）の様な生理活性物質を不溶性担体に
固定化し、体外に取り出した血液および血液成分と接触
させることによって抗腫瘍免疫機能を誘導することが開
示されている。しかしながら、これらの生理活性物質
は、体内にはいった場合に、強い毒性を示す物質であ
り、不溶性担体からの脱離の可能性が皆無である保証が
ない。また、特開平３−２３６７９０号公報、特開平３
−２４０４８５号公報には、それぞれグルクロン酸やＮ
−アセチルノイラミン酸のような酸性糖を不溶性材料に
固定化し、サイトカインを誘導する血液処理剤が開示さ
れている。これらは不溶性担体から脱離しても生体に対
する毒性はないが、このようなリガンドであっても、不
溶性担体に固定化するための反応を行わねばならず、煩
雑な過程が必要である。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、上述
した従来技術の諸欠点を解消し、抗腫瘍免疫機能を賦活
するサイトカインであるインターロイキン１を、血液か
らより簡便に、かつより安全に産生誘導し得る方法を提
供することにある。
した従来技術の諸欠点を解消し、抗腫瘍免疫機能を賦活
するサイトカインであるインターロイキン１を、血液か
らより簡便に、かつより安全に産生誘導し得る方法を提
供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】血液中の単球や好中球な
どの白血球は微生物のような異物と反応すると、種々の
酵素、メディエーターを放出し、炎症反応を引き起こ
す。これらの反応は、材料と接触するときにも同様に引
き起こされる。これは、材料が異物とみなされて起こる
ものであるが、この反応は材料の性質によって大きく変
わってくる。一方、インターロイキン１は１９４０年代
に白血球が産生する発熱物質として古くから知られてい
る物質であるが、種々の生理活性を持ち、炎症反応にお
いても産生される。そこで、本発明者らは、材料の性質
を制御することによって、インターロイキン１の白血球
からの産生を制御できるのではないかと考え、種々の材
料と血液との接触によるインターロイキン１の産生誘導
について、鋭意研究をおこなった。その結果、汎用の高
分子材料である、ナイロン−６６、ポリエチレンテレフ
タレート、ポリスチレン等の材料と血液との接触によっ
て、インターロイキン１は、ほとんど産生誘導されなか
ったのに比較して、アガロースゲルまたはそれを修飾し
たアガロース誘導体ゲルと血液との接触によって、イン
ターロイキン１が効率的に誘導されることを発見し、本
発明を完成するに至った。
どの白血球は微生物のような異物と反応すると、種々の
酵素、メディエーターを放出し、炎症反応を引き起こ
す。これらの反応は、材料と接触するときにも同様に引
き起こされる。これは、材料が異物とみなされて起こる
ものであるが、この反応は材料の性質によって大きく変
わってくる。一方、インターロイキン１は１９４０年代
に白血球が産生する発熱物質として古くから知られてい
る物質であるが、種々の生理活性を持ち、炎症反応にお
いても産生される。そこで、本発明者らは、材料の性質
を制御することによって、インターロイキン１の白血球
からの産生を制御できるのではないかと考え、種々の材
料と血液との接触によるインターロイキン１の産生誘導
について、鋭意研究をおこなった。その結果、汎用の高
分子材料である、ナイロン−６６、ポリエチレンテレフ
タレート、ポリスチレン等の材料と血液との接触によっ
て、インターロイキン１は、ほとんど産生誘導されなか
ったのに比較して、アガロースゲルまたはそれを修飾し
たアガロース誘導体ゲルと血液との接触によって、イン
ターロイキン１が効率的に誘導されることを発見し、本
発明を完成するに至った。
【０００９】すなわち、本発明によるインターロイキン
１の産生誘導方法は、アガロースゲルまたはアガロース
誘導体ゲルからなる材料と血液とを温度１５〜４２℃で
接触させることを特徴とするものである。
１の産生誘導方法は、アガロースゲルまたはアガロース
誘導体ゲルからなる材料と血液とを温度１５〜４２℃で
接触させることを特徴とするものである。
【００１０】本発明で使用されるアガロースは、紅藻類
から抽出される天然多糖類である。アガロースはゲル化
能を持ち、加熱したアガロース溶液を冷却すると、自然
にゲル形成が起こる。それぞれの糖鎖は２本鎖となり、
ついで凝集して束になり安定なゲルを形成する。このア
ガロースゲルのビーズは、血液と接触させると、著しく
多くのインターロイキン１の産生を誘導した。
から抽出される天然多糖類である。アガロースはゲル化
能を持ち、加熱したアガロース溶液を冷却すると、自然
にゲル形成が起こる。それぞれの糖鎖は２本鎖となり、
ついで凝集して束になり安定なゲルを形成する。このア
ガロースゲルのビーズは、血液と接触させると、著しく
多くのインターロイキン１の産生を誘導した。
【００１１】本発明で使用されるアガロース誘導体とし
ては、アガロースに２，３−ジブロモプロパノールを強
アルカリ条件下で作用させて架橋させ強度を高めた架橋
型アガロースや、それにジエチルアミノエチル基等のイ
オン交換基をエーテル結合させたもの、４級アミン等で
修飾したものなどが挙げられる。このアガロース誘導体
からなるゲルのビーズは、血液と接触させると、著しく
多くのインターロイキン１の産生を誘導した。
ては、アガロースに２，３−ジブロモプロパノールを強
アルカリ条件下で作用させて架橋させ強度を高めた架橋
型アガロースや、それにジエチルアミノエチル基等のイ
オン交換基をエーテル結合させたもの、４級アミン等で
修飾したものなどが挙げられる。このアガロース誘導体
からなるゲルのビーズは、血液と接触させると、著しく
多くのインターロイキン１の産生を誘導した。
【００１２】本発明において、アガロースゲルまたはア
ガロース誘導体ゲルからなる材料と血液とを接触させる
方法については、血液と上記材料とが十分に接触され得
る限り、任意の方法を用いることができる。例えば、繊
維状の上記材料をカラムに充填し、該カラムに血液を循
環させる方法や、粒径５０μｍ〜５ｍｍのビーズ状の上
記材料をカラムに充填し、血液を循環させる方法を用い
ることができる。さらに、血液中に種々の形状の上記材
料を浮遊させることにより、血液と上記材料を接触させ
てもよい。
ガロース誘導体ゲルからなる材料と血液とを接触させる
方法については、血液と上記材料とが十分に接触され得
る限り、任意の方法を用いることができる。例えば、繊
維状の上記材料をカラムに充填し、該カラムに血液を循
環させる方法や、粒径５０μｍ〜５ｍｍのビーズ状の上
記材料をカラムに充填し、血液を循環させる方法を用い
ることができる。さらに、血液中に種々の形状の上記材
料を浮遊させることにより、血液と上記材料を接触させ
てもよい。
【００１３】上記材料と血液とを接触させる際の温度
は、１５℃〜４２℃の範囲であり、好ましくは、３０℃
〜４０℃の範囲である。接触温度が１５℃よりも低い場
合、４２℃よりも高い場合には、インターロイキン１の
産生誘導は低下する。
は、１５℃〜４２℃の範囲であり、好ましくは、３０℃
〜４０℃の範囲である。接触温度が１５℃よりも低い場
合、４２℃よりも高い場合には、インターロイキン１の
産生誘導は低下する。
【００１４】本発明では、上記材料と血液とを接触させ
ることにより、上記材料と細胞との相互作用により、イ
ンターロイキン１の産生誘導が行われる。このインター
ロイキン１産生細胞とは、抹消血中の細胞に限らず、リ
ンパ管、リンパ節または脾臓等から得られる細胞も含ま
れる。血液中には、インターロイキン１を産生するこれ
らの細胞が多く含まれている。血液中のこれらの細胞
が、上記材料と作用し、インターロイキン１が産生誘導
されるが、直接作用せずとも、上記材料と血液中の何ら
かの因子とが作用して誘導された別の因子を介して上記
細胞により、インターロイキン１の産生が誘導されても
よい。
ることにより、上記材料と細胞との相互作用により、イ
ンターロイキン１の産生誘導が行われる。このインター
ロイキン１産生細胞とは、抹消血中の細胞に限らず、リ
ンパ管、リンパ節または脾臓等から得られる細胞も含ま
れる。血液中には、インターロイキン１を産生するこれ
らの細胞が多く含まれている。血液中のこれらの細胞
が、上記材料と作用し、インターロイキン１が産生誘導
されるが、直接作用せずとも、上記材料と血液中の何ら
かの因子とが作用して誘導された別の因子を介して上記
細胞により、インターロイキン１の産生が誘導されても
よい。
【００１５】本発明では、アガロースゲルまたはアガロ
ース誘導体ゲルからなる材料が、血液と接触されてイン
ターロイキン１の産生誘導が行われるため、癌患者等の
血液からインターロイキン１を産生誘導することができ
るため、本発明は癌などの治療に好適に用いることがで
きる。また、本発明の方法によってインターロイキン１
が産生誘導された血液を癌患者に戻すことにより、癌患
者内因性のインターロイキン１を患者に与えることがで
きるため、患者の体内において優れた抗腫瘍効果を発揮
させることができる。
ース誘導体ゲルからなる材料が、血液と接触されてイン
ターロイキン１の産生誘導が行われるため、癌患者等の
血液からインターロイキン１を産生誘導することができ
るため、本発明は癌などの治療に好適に用いることがで
きる。また、本発明の方法によってインターロイキン１
が産生誘導された血液を癌患者に戻すことにより、癌患
者内因性のインターロイキン１を患者に与えることがで
きるため、患者の体内において優れた抗腫瘍効果を発揮
させることができる。
【００１６】本発明を用いた癌治療法について以下に例
示する。癌患者の血液を血液回路等を用いて連続的に体
外に導き、繊維状またはビーズ状の上記インターロイキ
ン１誘導材料を充填したカラム部にて、好ましくは体温
付近の温度にて血液を上記材料と接触させ、血液内にイ
ンターロイキン１を産生誘導する。しかる後、この癌患
者内因性のインターロイキン１を多量に含む血液および
血液成分を癌患者体内に連続的に返血する。上記治療方
法に用いられる装置としては、市販の体外循環システム
等の上記操作過程を可能にする装置であれば任意のもの
を用いることができる。
示する。癌患者の血液を血液回路等を用いて連続的に体
外に導き、繊維状またはビーズ状の上記インターロイキ
ン１誘導材料を充填したカラム部にて、好ましくは体温
付近の温度にて血液を上記材料と接触させ、血液内にイ
ンターロイキン１を産生誘導する。しかる後、この癌患
者内因性のインターロイキン１を多量に含む血液および
血液成分を癌患者体内に連続的に返血する。上記治療方
法に用いられる装置としては、市販の体外循環システム
等の上記操作過程を可能にする装置であれば任意のもの
を用いることができる。
【００１７】また、本発明を用いた別の癌治療法として
は、あらかじめ癌患者の血液を採血し、上記材料を内部
に含有する血液バッグ内で上記材料と癌患者血液とを接
触させ、インターロイキン１を産生誘導し、遠心分離等
の手段を用いて血漿等を分離後、患者に投与する方法が
挙げられる。また、上記方法によって得た癌患者内因性
のインターロイキン１を多量に含む癌患者自身の血漿等
を冷凍保存し、しかる後に、必要に応じて患者に投与す
ることも可能である。
は、あらかじめ癌患者の血液を採血し、上記材料を内部
に含有する血液バッグ内で上記材料と癌患者血液とを接
触させ、インターロイキン１を産生誘導し、遠心分離等
の手段を用いて血漿等を分離後、患者に投与する方法が
挙げられる。また、上記方法によって得た癌患者内因性
のインターロイキン１を多量に含む癌患者自身の血漿等
を冷凍保存し、しかる後に、必要に応じて患者に投与す
ることも可能である。
【００１８】また、アガロースゲルまたはアガロース誘
導体ゲルからなる材料を用いて簡便にインターロイキン
１を誘導することができるため、その誘導活性を測定す
ることにより、患者のインターロイキン１産生能力を調
べることが可能である。即ち、患者の病態を反映する免
疫学的パラメーターとして、このインターロイキン１産
生能を利用することが可能である。
導体ゲルからなる材料を用いて簡便にインターロイキン
１を誘導することができるため、その誘導活性を測定す
ることにより、患者のインターロイキン１産生能力を調
べることが可能である。即ち、患者の病態を反映する免
疫学的パラメーターとして、このインターロイキン１産
生能を利用することが可能である。
【００１９】また、本発明によれば血液から内因性の天
然型インターロイキン１を含有する血清または血漿を簡
便に入手することが可能となり、これらの血清または血
漿は、天然型インターロイキン１を得るための原材料と
して種々の用途に利用できる。
然型インターロイキン１を含有する血清または血漿を簡
便に入手することが可能となり、これらの血清または血
漿は、天然型インターロイキン１を得るための原材料と
して種々の用途に利用できる。
【００２０】
【作用】本発明では、アガロースゲルまたはアガロース
誘導体ゲルからなる材料が血液と接触されるため、血液
中のインターロイキン１を産生する細胞と該材料との相
互作用が促進されることにより、あるいは上記材料と何
らかの因子とが相互作用し、それによって誘導された別
の因子により、インターロイキン１の産生が効率よく誘
導され得る。
誘導体ゲルからなる材料が血液と接触されるため、血液
中のインターロイキン１を産生する細胞と該材料との相
互作用が促進されることにより、あるいは上記材料と何
らかの因子とが相互作用し、それによって誘導された別
の因子により、インターロイキン１の産生が効率よく誘
導され得る。
【００２１】
【実施例】以下、本発明の実施例及び比較例を挙げるこ
とにより、本発明を詳細に説明する。まず、下記の実施
例１〜６及び比較例１〜６に記載する方法にて、アガロ
ースゲルまたはアガロース誘導体ゲルからなる材料、お
よび各種比較材料を作製し、次いで得られた材料を用い
て、インターロイキン１の産生誘導実験を行った。
とにより、本発明を詳細に説明する。まず、下記の実施
例１〜６及び比較例１〜６に記載する方法にて、アガロ
ースゲルまたはアガロース誘導体ゲルからなる材料、お
よび各種比較材料を作製し、次いで得られた材料を用い
て、インターロイキン１の産生誘導実験を行った。
【００２２】実施例１ アガロース（ナカライ化学社製、電気泳動用特製試薬
ＧＰ−３６）を５重量％濃度で蒸留水に溶解させ、１２
１℃で２０分間オートクレーブ処理を行った。この溶液
を６０℃に保温しておき、冷蒸留水中にマイクロシリン
ジを用いて滴下して、アガロースゲルビーズ（粒径５ｍ
ｍ）を作製した。このビーズを注射用生理食塩水（大塚
製薬社製）で洗浄後、同じく注射用生理食塩水で洗浄し
た２ｍｌ用ポリプロピレンチューブ（eppendorf 社製）
に充填した。充填量はアガロースビーズ２０個とした。
ＧＰ−３６）を５重量％濃度で蒸留水に溶解させ、１２
１℃で２０分間オートクレーブ処理を行った。この溶液
を６０℃に保温しておき、冷蒸留水中にマイクロシリン
ジを用いて滴下して、アガロースゲルビーズ（粒径５ｍ
ｍ）を作製した。このビーズを注射用生理食塩水（大塚
製薬社製）で洗浄後、同じく注射用生理食塩水で洗浄し
た２ｍｌ用ポリプロピレンチューブ（eppendorf 社製）
に充填した。充填量はアガロースビーズ２０個とした。
【００２３】実施例２ 約２重量％濃度のアガロースよりなる、Sepharose 2B
（Pharmacia LKB Biotechnology 社製）の懸濁液３ｍｌ
を１５ｍｌ用ポリプロピレンチューブ（岩城硝子社製）
に入れた。これを１０００ｒｐｍで５分間遠心分離し
て、上澄みを吸引して捨てた。この洗浄操作を３回行
い、一晩４℃にて放置した。このゲル担体５００μｌ
（かさ体積）を実施例１と同様に、注射用生理食塩水
（大塚製薬社製）で洗浄後、同じく注射用生理食塩水で
洗浄した２ｍｌ用ポリプロピレンチューブ（eppendorf
社製）に充填した。
（Pharmacia LKB Biotechnology 社製）の懸濁液３ｍｌ
を１５ｍｌ用ポリプロピレンチューブ（岩城硝子社製）
に入れた。これを１０００ｒｐｍで５分間遠心分離し
て、上澄みを吸引して捨てた。この洗浄操作を３回行
い、一晩４℃にて放置した。このゲル担体５００μｌ
（かさ体積）を実施例１と同様に、注射用生理食塩水
（大塚製薬社製）で洗浄後、同じく注射用生理食塩水で
洗浄した２ｍｌ用ポリプロピレンチューブ（eppendorf
社製）に充填した。
【００２４】実施例３ 実施例２において、約２重量％濃度のアガロースよりな
る、Sepharose 2Bの代わりに、約６重量％濃度の架橋型
アガロースよりなる、Sepharose CL-6B （Pharmacia LK
B Biotechnology 社製）を用いたことの他は、実施例２
と同様に操作した。
る、Sepharose 2Bの代わりに、約６重量％濃度の架橋型
アガロースよりなる、Sepharose CL-6B （Pharmacia LK
B Biotechnology 社製）を用いたことの他は、実施例２
と同様に操作した。
【００２５】実施例４ 実施例２において、約２重量％濃度のアガロースよりな
る、Sepharose 2Bの代わりに、約６重量％濃度の、架橋
型アガロースにジエチルアミノエチル基をエーテル結合
で導入したDEAE Sepharose CL-6B（Pharmacia LKB Biot
echnology 社製）を用いたことの他は、実施例２と同様
に操作した。
る、Sepharose 2Bの代わりに、約６重量％濃度の、架橋
型アガロースにジエチルアミノエチル基をエーテル結合
で導入したDEAE Sepharose CL-6B（Pharmacia LKB Biot
echnology 社製）を用いたことの他は、実施例２と同様
に操作した。
【００２６】実施例５ 実施例２において、約２重量％濃度のアガロースよりな
る、Sepharose 2Bの代わりに、約４重量％濃度の、架橋
型アガロースにエーテル結合を介してフェニル基を導入
したPhenyl Sepharose CL-4B（Pharmacia LKB Biotechn
ology 社製）を用いたことの他は、実施例２と同様に操
作した。
る、Sepharose 2Bの代わりに、約４重量％濃度の、架橋
型アガロースにエーテル結合を介してフェニル基を導入
したPhenyl Sepharose CL-4B（Pharmacia LKB Biotechn
ology 社製）を用いたことの他は、実施例２と同様に操
作した。
【００２７】実施例６ 実施例２において、約２重量％濃度のアガロースよりな
る、Sepharose 2Bの代わりに、約６重量％濃度の、架橋
型アガロースに４級アミンをQ Sepharose FF（Pharmaci
a LKB Biotechnology 社製）を用いたことの他は、実施
例２と同様に操作した。
る、Sepharose 2Bの代わりに、約６重量％濃度の、架橋
型アガロースに４級アミンをQ Sepharose FF（Pharmaci
a LKB Biotechnology 社製）を用いたことの他は、実施
例２と同様に操作した。
【００２８】比較例１ 注射用生理食塩水（大塚製薬社製）で洗浄した２ｍｌ用
ポリプロピレンチューブ（eppendorf 社製）。比較例２ ナイロン６６のビーズ（粒径２．５ｍｍ）を射出成形に
より作製した。これらをメタノールで洗浄後乾燥した。
このビーズを注射用生理食塩水（大塚製薬社製）で洗浄
後、同じく注射用生理食塩水で洗浄した２ｍｌ用ポリプ
ロピレンチューブ（eppendorf 社製）に充填した。充填
量はビーズ７０個とした。
ポリプロピレンチューブ（eppendorf 社製）。比較例２ ナイロン６６のビーズ（粒径２．５ｍｍ）を射出成形に
より作製した。これらをメタノールで洗浄後乾燥した。
このビーズを注射用生理食塩水（大塚製薬社製）で洗浄
後、同じく注射用生理食塩水で洗浄した２ｍｌ用ポリプ
ロピレンチューブ（eppendorf 社製）に充填した。充填
量はビーズ７０個とした。
【００２９】比較例３ 比較例２におけるナイロン６６のかわりに、ポリスチレ
ンを使用したことの他は、比較例２と同様に操作した。比較例４ 比較例２におけるナイロン６６のかわりに、ポリメチル
メタクリレートを使用したことの他は、比較例２と同様
に操作した。比較例５ 比較例２におけるナイロン６６のかわりに、ポリエチレ
ンテレフタレートを使用したことの他は、比較例２と同
様に操作した。比較例６ 比較例２におけるナイロン６６のかわりに、ポリテトラ
フルオロエチレンプロピレン共重合体を使用したことの
他は、比較例２と同様に操作した。
ンを使用したことの他は、比較例２と同様に操作した。比較例４ 比較例２におけるナイロン６６のかわりに、ポリメチル
メタクリレートを使用したことの他は、比較例２と同様
に操作した。比較例５ 比較例２におけるナイロン６６のかわりに、ポリエチレ
ンテレフタレートを使用したことの他は、比較例２と同
様に操作した。比較例６ 比較例２におけるナイロン６６のかわりに、ポリテトラ
フルオロエチレンプロピレン共重合体を使用したことの
他は、比較例２と同様に操作した。
【００３０】インターロイキン１の産生誘導試験 実施例１〜６及び比較例１〜６で得られた材料を用い
て、インターロイキン１の産生誘導実験を行った。イン
ターロイキン１の産生誘導実験とその測定方法は以下の
ように行った。 （１）ビーズによるインターロイキン１産生誘導実験 各ゲルビーズを充填したポリプロピレンチューブにヘパ
リン採血した健常人新鮮血１．６ｍ１を加えて回転円盤
に取り付けて、３７℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで
転倒混和した。しかる後、血液を回収し、以下の方法で
血漿中のインターロイキン１の濃度を測定した。
て、インターロイキン１の産生誘導実験を行った。イン
ターロイキン１の産生誘導実験とその測定方法は以下の
ように行った。 （１）ビーズによるインターロイキン１産生誘導実験 各ゲルビーズを充填したポリプロピレンチューブにヘパ
リン採血した健常人新鮮血１．６ｍ１を加えて回転円盤
に取り付けて、３７℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで
転倒混和した。しかる後、血液を回収し、以下の方法で
血漿中のインターロイキン１の濃度を測定した。
【００３１】（２）血漿中インターロイキン１濃度測定
方法 インターロイキン１産生誘導試験後の血液を遠心分離し
て血漿を採取し、血漿中のインターロイキン１−βの濃
度をインターロイキン１−βモノクローナル抗体を用い
て、免疫酵素抗体法（Ｍａｄｇｅｎｉｘ社製、商品名；
ＩＬ１−β−ＥＡＳＩＡR ）にて測定した。この測定方
法の検出限界濃度は１０ｐｇ／ｍｌであった。
方法 インターロイキン１産生誘導試験後の血液を遠心分離し
て血漿を採取し、血漿中のインターロイキン１−βの濃
度をインターロイキン１−βモノクローナル抗体を用い
て、免疫酵素抗体法（Ｍａｄｇｅｎｉｘ社製、商品名；
ＩＬ１−β−ＥＡＳＩＡR ）にて測定した。この測定方
法の検出限界濃度は１０ｐｇ／ｍｌであった。
【００３２】また、採血直後の血液を遠心分離して血漿
を採取して、血漿中のインターロイキン１−βの濃度を
同様にして測定した。採血直後の血液の血漿中インター
ロイキン１−β濃度は何れも検出限界以下であった。イ
ンターロイキン１の産生誘導実験の結果を表１に示す。
なお、表１および後述の表２において、ＩＬ１−βは、
インターロイキン１−βを示す。
を採取して、血漿中のインターロイキン１−βの濃度を
同様にして測定した。採血直後の血液の血漿中インター
ロイキン１−β濃度は何れも検出限界以下であった。イ
ンターロイキン１の産生誘導実験の結果を表１に示す。
なお、表１および後述の表２において、ＩＬ１−βは、
インターロイキン１−βを示す。
【００３３】
【表１】
【００３４】実施例７ 実施例２と同様に調製したSepharose 2Bゲル担体を充填
したポリプロピレンチューブにヘパリン採血した健常人
新鮮血１．６ｍ１を加えて回転円盤に取り付けて、１５
℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混和した。実施例８ 実施例２と同様に調製したSepharose 2Bゲル担体を充填
したポリプロピレンチューブにヘパリン採血した健常人
新鮮血１．６ｍ１を加えて回転円盤に取り付けて、３０
℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混和した。実施例９ 実施例２と同様に調製したSepharose 2Bゲル担体を充填
したポリプロピレンチューブにヘパリン採血した健常人
新鮮血１．６ｍ１を加えて回転円盤に取り付けて、４０
℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混和した。実施例１０ 実施例２と同様に調製したSepharose 2Bゲル担体を充填
したポリプロピレンチューブにヘパリン採血した健常人
新鮮血１．６ｍ１を加えて回転円盤に取り付けて、４２
℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混和した。
したポリプロピレンチューブにヘパリン採血した健常人
新鮮血１．６ｍ１を加えて回転円盤に取り付けて、１５
℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混和した。実施例８ 実施例２と同様に調製したSepharose 2Bゲル担体を充填
したポリプロピレンチューブにヘパリン採血した健常人
新鮮血１．６ｍ１を加えて回転円盤に取り付けて、３０
℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混和した。実施例９ 実施例２と同様に調製したSepharose 2Bゲル担体を充填
したポリプロピレンチューブにヘパリン採血した健常人
新鮮血１．６ｍ１を加えて回転円盤に取り付けて、４０
℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混和した。実施例１０ 実施例２と同様に調製したSepharose 2Bゲル担体を充填
したポリプロピレンチューブにヘパリン採血した健常人
新鮮血１．６ｍ１を加えて回転円盤に取り付けて、４２
℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混和した。
【００３５】比較例７ 実施例２と同様に調製したSepharose 2Bゲル担体を充填
したポリプロピレンチューブにヘパリン採血した健常人
新鮮血１．６ｍ１を加えて回転円盤に取り付けて、１０
℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混和した。比較例８ 実施例２と同様に調製したSepharose 2Bゲル担体を充填
したポリプロピレンチューブにヘパリン採血した健常人
新鮮血１．６ｍ１を加えて回転円盤に取り付けて、４５
℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混和した。
したポリプロピレンチューブにヘパリン採血した健常人
新鮮血１．６ｍ１を加えて回転円盤に取り付けて、１０
℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混和した。比較例８ 実施例２と同様に調製したSepharose 2Bゲル担体を充填
したポリプロピレンチューブにヘパリン採血した健常人
新鮮血１．６ｍ１を加えて回転円盤に取り付けて、４５
℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混和した。
【００３６】インターロイキン１の産生量の測定 実施例７〜１０及び比較例７、８のインターロイキン１
の産生誘導実験で得られた血液を回収し、前述の方法と
同様にして血漿中のインターロイキン１の濃度を測定し
た。結果を表２に示す。
の産生誘導実験で得られた血液を回収し、前述の方法と
同様にして血漿中のインターロイキン１の濃度を測定し
た。結果を表２に示す。
【００３７】
【表２】
【００３８】
【発明の効果】以上のように、本発明によれば、アガロ
ースゲルまたはアガロース誘導体ゲルからなる材料と血
液とが接触されるため、インターロイキン１の産生が効
果的に誘導される。従って、癌患者の血液を用いること
により、癌患者由来の内因性インターロイキン１を患者
に与えることが出来、新規な癌治療方法を提供すること
が可能となる。
ースゲルまたはアガロース誘導体ゲルからなる材料と血
液とが接触されるため、インターロイキン１の産生が効
果的に誘導される。従って、癌患者の血液を用いること
により、癌患者由来の内因性インターロイキン１を患者
に与えることが出来、新規な癌治療方法を提供すること
が可能となる。
【００３９】また、アガロースゲルまたはアガロース誘
導体ゲルからなる材料を用いて簡便にインターロイキン
１を誘導することができるため、その誘導活性を測定す
ることにより、患者のインターロイキン１産生能力を調
べることが可能であるから、患者の病態を反映する免疫
学的パラメーターとして、このインターロイキン１産生
能を利用することが可能である。
導体ゲルからなる材料を用いて簡便にインターロイキン
１を誘導することができるため、その誘導活性を測定す
ることにより、患者のインターロイキン１産生能力を調
べることが可能であるから、患者の病態を反映する免疫
学的パラメーターとして、このインターロイキン１産生
能を利用することが可能である。
【００４０】また、本発明によれば血液から内因性の天
然型インターロイキン１を含有する血清または血漿を簡
便に入手することが可能となり、これらの血清または血
漿は、天然型インターロイキン１を得るための原材料と
して種々の用途に利用できる。
然型インターロイキン１を含有する血清または血漿を簡
便に入手することが可能となり、これらの血清または血
漿は、天然型インターロイキン１を得るための原材料と
して種々の用途に利用できる。
【００４１】また、本発明では、従来の生理活性物質固
定化材料のように、固定化された生理活性物質等の脱離
が発生しないため、安全性の点においても優れており、
かつ特定の固定化リガンドも必要ないため効率的であ
る。
定化材料のように、固定化された生理活性物質等の脱離
が発生しないため、安全性の点においても優れており、
かつ特定の固定化リガンドも必要ないため効率的であ
る。
Claims (1)
- 【請求項１】 アガロースゲルまたはアガロース誘導体
ゲルからなる材料と血液とを温度１５〜４２℃で接触さ
せることにより、インターロイキン１の産生を誘導する
ことを特徴とするインターロイキン１の産生誘導方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24273793A JP3620863B2 (ja) | 1993-09-29 | 1993-09-29 | インターロイキン１の産生誘導方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24273793A JP3620863B2 (ja) | 1993-09-29 | 1993-09-29 | インターロイキン１の産生誘導方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0796031A true JPH0796031A (ja) | 1995-04-11 |
| JP3620863B2 JP3620863B2 (ja) | 2005-02-16 |
Family
ID=17093505
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP24273793A Expired - Lifetime JP3620863B2 (ja) | 1993-09-29 | 1993-09-29 | インターロイキン１の産生誘導方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3620863B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003037375A1 (fr) * | 2001-11-02 | 2003-05-08 | Sekisui Chemical Co., Ltd. | Substance d'induction de cytokine et instrument d'induction de cytokine |
-
1993
- 1993-09-29 JP JP24273793A patent/JP3620863B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003037375A1 (fr) * | 2001-11-02 | 2003-05-08 | Sekisui Chemical Co., Ltd. | Substance d'induction de cytokine et instrument d'induction de cytokine |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3620863B2 (ja) | 2005-02-16 |
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