JPH0794418B2 - 新規な製造方法 - Google Patents
新規な製造方法Info
- Publication number
- JPH0794418B2 JPH0794418B2 JP62194134A JP19413487A JPH0794418B2 JP H0794418 B2 JPH0794418 B2 JP H0794418B2 JP 62194134 A JP62194134 A JP 62194134A JP 19413487 A JP19413487 A JP 19413487A JP H0794418 B2 JPH0794418 B2 JP H0794418B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- group
- peptide
- amino
- lys
- residue
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 ［発明の利用分野］ 本発明は、消化、凝固線溶、受精或は蚕の繭の分解等の
重要な生理活性を有する各種リシン特異性酵素の阻害剤
として、或はこれらリシン特異性酵素をアフィニティク
ロマトグラフィにより精製する際の吸着体として等の用
途に用いられる、リシナールペプチド誘導体の新規な製
造方法に関する。
重要な生理活性を有する各種リシン特異性酵素の阻害剤
として、或はこれらリシン特異性酵素をアフィニティク
ロマトグラフィにより精製する際の吸着体として等の用
途に用いられる、リシナールペプチド誘導体の新規な製
造方法に関する。
［発明の背景］ 蛋白質或はペプチド鎖内部の結合を加水分解するエンド
ペプチダーゼは、動物、植物、微生物等に広く分布し、
その種類は極めて多い。中でも、ペプチド鎖中のリシン
残基のＣ−末端側のペプチド結合を選択的に加水分解す
る酵素であるリシン特異性酵素として知られる、例えば
動物起源のトリブシン，プラスミン，アクロシン、コク
ナーゼ等や、微生物起源のリシルエンドペプチターゼ
等、或いは植物起源のフィシン，ブロメライン，ネペン
テスアスペルティックプロティナーゼ等は、消化、凝固
線溶、受精或は蚕の繭の分解等の重要な生理活性を有し
ており、例えばリシルエンドペプチダーセが豚インシュ
リンのからの人インシュリンの半合成に用いられるのを
初めとして、夫々医薬品、生化学用試薬などの分野に於
いて一般に広く用いられている。
ペプチダーゼは、動物、植物、微生物等に広く分布し、
その種類は極めて多い。中でも、ペプチド鎖中のリシン
残基のＣ−末端側のペプチド結合を選択的に加水分解す
る酵素であるリシン特異性酵素として知られる、例えば
動物起源のトリブシン，プラスミン，アクロシン、コク
ナーゼ等や、微生物起源のリシルエンドペプチターゼ
等、或いは植物起源のフィシン，ブロメライン，ネペン
テスアスペルティックプロティナーゼ等は、消化、凝固
線溶、受精或は蚕の繭の分解等の重要な生理活性を有し
ており、例えばリシルエンドペプチダーセが豚インシュ
リンのからの人インシュリンの半合成に用いられるのを
初めとして、夫々医薬品、生化学用試薬などの分野に於
いて一般に広く用いられている。
これらリシン特異性酵素の阻害剤として、或はこれらリ
シン特異性をアフィニティクロマトグラフィにより精製
する際の吸着体としての用途に用いられるリシナールペ
プチド誘導体の製法としては、例えば特開昭47−30618
号公報に記載されている如く、先ず、アジド法，酸クロ
ライド法，酸無水物法，混合酸無水物法,DCC法，活性エ
ステル法（ｐ−ニトロフェニルエステル法,N−ヒドロキ
シコハク酸イミドエステル法等）,DCC−アディティブ
（HONB,HOBt,HOSn等）法等［The Peptides,Vol.1,Acade
mic Press,New York,1966;ペプチド合成，泉屋ら著，丸
善株式会社,1975等］のペプチド合成法の常法に従っ
て、リシンのα位のアミノ基に所望のアミノ酸若しくは
ペプチドが結合したペプチド（即ち、Ｃ−末端側のアミ
ノ酸がリシンであるペプチド）を合成し、次いで、リシ
ン残基のカルボキシル基を還元してアルコール（リシノ
ール誘導体）とし、更にこれを酸化することによりアル
デヒド基とした後、ε位のアミノ保護基を外して目的の
リシナールペプチド誘導体とする方法が挙げられる。
シン特異性をアフィニティクロマトグラフィにより精製
する際の吸着体としての用途に用いられるリシナールペ
プチド誘導体の製法としては、例えば特開昭47−30618
号公報に記載されている如く、先ず、アジド法，酸クロ
ライド法，酸無水物法，混合酸無水物法,DCC法，活性エ
ステル法（ｐ−ニトロフェニルエステル法,N−ヒドロキ
シコハク酸イミドエステル法等）,DCC−アディティブ
（HONB,HOBt,HOSn等）法等［The Peptides,Vol.1,Acade
mic Press,New York,1966;ペプチド合成，泉屋ら著，丸
善株式会社,1975等］のペプチド合成法の常法に従っ
て、リシンのα位のアミノ基に所望のアミノ酸若しくは
ペプチドが結合したペプチド（即ち、Ｃ−末端側のアミ
ノ酸がリシンであるペプチド）を合成し、次いで、リシ
ン残基のカルボキシル基を還元してアルコール（リシノ
ール誘導体）とし、更にこれを酸化することによりアル
デヒド基とした後、ε位のアミノ保護基を外して目的の
リシナールペプチド誘導体とする方法が挙げられる。
しかしながら、このような方法は、副反応が生じ易く、
最終反応液中には副生成物が多種共存する。その為、ペ
プチド合成後、目的のリシナールペプチド誘導体の精製
を行うに当たって、晶析法で収率よく行うのは極めて難
しく、また、ペプチド精製によく利用されるシリカゲル
カラム法により精製を行おうとした場合には、精製中に
リシナールのアルデヒド基が分解するので、いずれにし
ても目的の精製品を効率よく得ることができない等、工
業的に利用するには解決すべき様々な問題点を数多く有
していた。
最終反応液中には副生成物が多種共存する。その為、ペ
プチド合成後、目的のリシナールペプチド誘導体の精製
を行うに当たって、晶析法で収率よく行うのは極めて難
しく、また、ペプチド精製によく利用されるシリカゲル
カラム法により精製を行おうとした場合には、精製中に
リシナールのアルデヒド基が分解するので、いずれにし
ても目的の精製品を効率よく得ることができない等、工
業的に利用するには解決すべき様々な問題点を数多く有
していた。
一方、実験室スケール程度の規模であれば従来から知ら
れているペプチドアルデヒド類の製造方法、例えばアミ
ノ酸やペプチドの3,5−ジメチルピラゾリド誘導体やジ
イミダゾール誘導体を水素化アルミニウムリチウムで還
元する方法や、アミノ酸やペプチドのアルコール誘導体
を三酸化イオウ−ピリジン錯体−ジメチルスルホキシド
−トリエチルアミンの系で酸化する方法等によっても、
目的のリシナールペプチド誘導体を製造することができ
る。しかしながら、非常に発火性の強い水素化アルミニ
ウムリチウムによる還元を−20℃以下の低温で実施する
際の安全性及び装置的な問題、或は三酸化イオウの如き
毒性が強く、危険性も高い試薬を使用する際の安全衛生
上の問題等を考えるとき、工業的規模でこれらを行うに
は、あまりにもリスクが大きく、安易にこの方法を採用
するという訳にはいかなかった。
れているペプチドアルデヒド類の製造方法、例えばアミ
ノ酸やペプチドの3,5−ジメチルピラゾリド誘導体やジ
イミダゾール誘導体を水素化アルミニウムリチウムで還
元する方法や、アミノ酸やペプチドのアルコール誘導体
を三酸化イオウ−ピリジン錯体−ジメチルスルホキシド
−トリエチルアミンの系で酸化する方法等によっても、
目的のリシナールペプチド誘導体を製造することができ
る。しかしながら、非常に発火性の強い水素化アルミニ
ウムリチウムによる還元を−20℃以下の低温で実施する
際の安全性及び装置的な問題、或は三酸化イオウの如き
毒性が強く、危険性も高い試薬を使用する際の安全衛生
上の問題等を考えるとき、工業的規模でこれらを行うに
は、あまりにもリスクが大きく、安易にこの方法を採用
するという訳にはいかなかった。
［発明の目的］ 本発明は上記した如き状況に鑑みなされたもので、各種
リシン特異性酵素の阻害剤として、或はこれらリシン特
異性酵素をアフィニティクロマトグラフィにより精製す
る際の吸着体として等の用途に用いられるリシナールペ
プチド誘導体の、新規で効率的、且つ工業的に利用可能
な製造方法を提供することを目的とする。
リシン特異性酵素の阻害剤として、或はこれらリシン特
異性酵素をアフィニティクロマトグラフィにより精製す
る際の吸着体として等の用途に用いられるリシナールペ
プチド誘導体の、新規で効率的、且つ工業的に利用可能
な製造方法を提供することを目的とする。
［発明の構成］ 上記した如き目的を達成するために、本発明は次の構成
よりなる。
よりなる。
「一般式［Ｉ］ （式中、R1はアミノ保護基若しくは水素原子を示し、R2
はアミノ保護基を示し、R3及びR4は炭素数１〜４のアル
キル基を示す。また、R3とR4とが結合して環を成してい
てもよい。） で表わされるリシナール誘導体（保護リシナール）にア
ミノ酸若しくはペプチドを反応させて、そのα位のアミ
ノ基にアミノ酸若しくはペプチドを導入し、然る後アミ
ノ保護基及びアルデヒド保護基を同時に又は別々の手段
により取り除くことを特徴とする一般式［II］ （式中、Ａはアミノ酸残基若しくはペプチド残基を示
し、Ｒはアミノ保護基又は水素原子を示す。）で表わさ
れるリシナールペプチド誘導体の製造方法。」 即ち、本発明者らは一般式［II］ （式中、Ａ及びＲは前記に同じ。）で表わされるリシナ
ールペプチド誘導体の効率的で且つ作業性に優れた製造
方法を求めて鋭意研究を重ねた結果、一般式［Ｉ］ （式中、R1、R2、R3及びR4は前記に同じ。）で表わされ
る保護リシナールを出発原料として用い、これにアミノ
酸又はペプチドを反応させて目的のリシナールペプチド
誘導体のアセタール体を製造し、アセタール体の状態で
精製を行った後、脱アセタール化及び脱アミノ保護すれ
ば、副反応生成物を容易に分離することができ、目的の
リシナールペプチド誘導体を効率よく製造し得ることを
見出し、本発明を完成するに至った。
はアミノ保護基を示し、R3及びR4は炭素数１〜４のアル
キル基を示す。また、R3とR4とが結合して環を成してい
てもよい。） で表わされるリシナール誘導体（保護リシナール）にア
ミノ酸若しくはペプチドを反応させて、そのα位のアミ
ノ基にアミノ酸若しくはペプチドを導入し、然る後アミ
ノ保護基及びアルデヒド保護基を同時に又は別々の手段
により取り除くことを特徴とする一般式［II］ （式中、Ａはアミノ酸残基若しくはペプチド残基を示
し、Ｒはアミノ保護基又は水素原子を示す。）で表わさ
れるリシナールペプチド誘導体の製造方法。」 即ち、本発明者らは一般式［II］ （式中、Ａ及びＲは前記に同じ。）で表わされるリシナ
ールペプチド誘導体の効率的で且つ作業性に優れた製造
方法を求めて鋭意研究を重ねた結果、一般式［Ｉ］ （式中、R1、R2、R3及びR4は前記に同じ。）で表わされ
る保護リシナールを出発原料として用い、これにアミノ
酸又はペプチドを反応させて目的のリシナールペプチド
誘導体のアセタール体を製造し、アセタール体の状態で
精製を行った後、脱アセタール化及び脱アミノ保護すれ
ば、副反応生成物を容易に分離することができ、目的の
リシナールペプチド誘導体を効率よく製造し得ることを
見出し、本発明を完成するに至った。
本発明の方法によりリシナール誘導体を製造するには、
一般式［Ｉ］ （式中、R1、R2、R3及びR4は前記に同じ。）で表わされ
る保護リシナールを出発原料とし、このα位のアミノ基
に所望のアミノ酸若しくはペプチドをアジド法，酸クロ
ライド法，酸無水物法，混合酸無水物法,DCC法，活性エ
ステル法（ｐ−ニトロフェニルエステル法,N−ヒドロキ
シコハク酸イミドエステル法等）,DCC−アディティブ
（HONB,HOBt,HOSn等）法等［The Peptides,Vol.1,Acade
mic Press,New York,1966;ペプチド合成，泉屋ら著，丸
善株式会社,1975等］のペプチド合成法の常法に従って
結合させた後、晶析法等の常法により精製を行い、更に
アミノ保護基及びアセタール型アルデヒド保護基を同時
に又は別々の手段により取り除くことによって合成する
ことができる。α位のアミノ基に結合させるアミノ酸の
種類或いはα位のアミノ基に結合させるペプチドを構成
するアミノ酸の種類及び数については特に制限はない
が、アミノ酸の種類としては、例えば、バリン、ロイシ
ン、プロリン、フェニルアラニン、イソロイシン、メチ
オニン、トリプトファン等疎水性のアミノ酸が通常好ま
しく用いられる。またペプチド残基を構成するアミノ酸
の数としては合成的な面から２〜４が好ましい。
一般式［Ｉ］ （式中、R1、R2、R3及びR4は前記に同じ。）で表わされ
る保護リシナールを出発原料とし、このα位のアミノ基
に所望のアミノ酸若しくはペプチドをアジド法，酸クロ
ライド法，酸無水物法，混合酸無水物法,DCC法，活性エ
ステル法（ｐ−ニトロフェニルエステル法,N−ヒドロキ
シコハク酸イミドエステル法等）,DCC−アディティブ
（HONB,HOBt,HOSn等）法等［The Peptides,Vol.1,Acade
mic Press,New York,1966;ペプチド合成，泉屋ら著，丸
善株式会社,1975等］のペプチド合成法の常法に従って
結合させた後、晶析法等の常法により精製を行い、更に
アミノ保護基及びアセタール型アルデヒド保護基を同時
に又は別々の手段により取り除くことによって合成する
ことができる。α位のアミノ基に結合させるアミノ酸の
種類或いはα位のアミノ基に結合させるペプチドを構成
するアミノ酸の種類及び数については特に制限はない
が、アミノ酸の種類としては、例えば、バリン、ロイシ
ン、プロリン、フェニルアラニン、イソロイシン、メチ
オニン、トリプトファン等疎水性のアミノ酸が通常好ま
しく用いられる。またペプチド残基を構成するアミノ酸
の数としては合成的な面から２〜４が好ましい。
一般式［Ｉ］で表わされる保護リシナールのR1,R2で示
されるアミノ保護基としては、例えばカルボベンゾキシ
基,t−ブチルオキシカルボニル基,p−ニトロベンジルオ
キシカルボニル基,9−フルオレニルメチルオキシカルボ
ニル基等が挙げられるが、これらに限定されるものでは
なく通常のペプチド合成に用いられるものはいずれも用
いることができる。但し、R1及びR2が共にアミノ保護基
である場合には、互いに異なるアミノ保護基であること
が望ましく、更には互いに異なる手段でなければ脱保護
されない保護基であることが好ましい。即ち、一般式
［II］で示されるリシナールペプチド誘導体を合成する
際には、一般式［Ｉ］のα位のアミノ基は遊離型となら
なければならないが、ε位のアミノ基は反応にあずから
ないように保護する必要がある。その為、R1のアミノ保
護基としてはペプチド合成時の反応条件下で脱離するも
のを選択し、R2のアミノ保護基としては同条件下では脱
離しないものを選択することが好ましい。またR3及びR4
としては例えばメチル基，エチル基，プロピル基，ブチ
ル基等の炭素数１〜４のアルキル基が挙げられるが、ま
た、R3とR4とが結合して環状アセタールを形成していて
もよい。
されるアミノ保護基としては、例えばカルボベンゾキシ
基,t−ブチルオキシカルボニル基,p−ニトロベンジルオ
キシカルボニル基,9−フルオレニルメチルオキシカルボ
ニル基等が挙げられるが、これらに限定されるものでは
なく通常のペプチド合成に用いられるものはいずれも用
いることができる。但し、R1及びR2が共にアミノ保護基
である場合には、互いに異なるアミノ保護基であること
が望ましく、更には互いに異なる手段でなければ脱保護
されない保護基であることが好ましい。即ち、一般式
［II］で示されるリシナールペプチド誘導体を合成する
際には、一般式［Ｉ］のα位のアミノ基は遊離型となら
なければならないが、ε位のアミノ基は反応にあずから
ないように保護する必要がある。その為、R1のアミノ保
護基としてはペプチド合成時の反応条件下で脱離するも
のを選択し、R2のアミノ保護基としては同条件下では脱
離しないものを選択することが好ましい。またR3及びR4
としては例えばメチル基，エチル基，プロピル基，ブチ
ル基等の炭素数１〜４のアルキル基が挙げられるが、ま
た、R3とR4とが結合して環状アセタールを形成していて
もよい。
アミノ保護基及び／又はアセタール型アルデヒド保護基
の脱保護は、希塩酸、酢酸、トリフルオロ酢酸などの鉱
酸、有機酸を用いる常法に従ってこれを行えば足りる。
の脱保護は、希塩酸、酢酸、トリフルオロ酢酸などの鉱
酸、有機酸を用いる常法に従ってこれを行えば足りる。
一般式［Ｉ］で表わされる保護リシナールは、例えば、
下記の方法により容易に得ることができる。即ち、アミ
ノ基を保護したリシン（保護リシン）を原料とし、M.Ku
botaらの方法［Chem.Pharm.Bull.,29,1169,1981］に従
ってアミノ基を保護したままこれをアルコール体である
リシノール（保護リシノール）に還元した後、J.G.Moff
attらの方法［J.Org.Chem.,43,4178,1978］或はR.Ratcl
iffeらの方法［J.Org.Chem.,35,4000,1970］に従って、
アミノ基を保護したまま酸化反応を行うことにより一般
式［III］ （式中、R11,R12はアミノ保護基を表わす。）で表わさ
れるアミノ保護リシナールを得る。次いで、これを、例
えばｐ−トルエンスルホン酸等の酸触媒の存在下、オル
トギ酸メチル、オルトギ酸エチル等のアセタール化剤と
適当な溶媒（例えばメタノール、エタノール等）中で反
応させれば一般式［Ｉ］で表わされる保護リシナールと
なる。
下記の方法により容易に得ることができる。即ち、アミ
ノ基を保護したリシン（保護リシン）を原料とし、M.Ku
botaらの方法［Chem.Pharm.Bull.,29,1169,1981］に従
ってアミノ基を保護したままこれをアルコール体である
リシノール（保護リシノール）に還元した後、J.G.Moff
attらの方法［J.Org.Chem.,43,4178,1978］或はR.Ratcl
iffeらの方法［J.Org.Chem.,35,4000,1970］に従って、
アミノ基を保護したまま酸化反応を行うことにより一般
式［III］ （式中、R11,R12はアミノ保護基を表わす。）で表わさ
れるアミノ保護リシナールを得る。次いで、これを、例
えばｐ−トルエンスルホン酸等の酸触媒の存在下、オル
トギ酸メチル、オルトギ酸エチル等のアセタール化剤と
適当な溶媒（例えばメタノール、エタノール等）中で反
応させれば一般式［Ｉ］で表わされる保護リシナールと
なる。
本発明の方法によれば、高純度なリシナールペプチド誘
導体を高収率で合成することができるが、また、本発明
の方法は、一般式［Ｉ］で表わされる保護リシナールを
ペプチド合成の基幹物質として大量に合成しておいて、
それを出発物質とすることにより種々のリシナールペプ
チド誘導体を効率的に製造することができるので、目的
とするリシナールペプチド誘導体の製造コストを従来の
方法よりも安くすることができることも有利な点として
挙げられる。
導体を高収率で合成することができるが、また、本発明
の方法は、一般式［Ｉ］で表わされる保護リシナールを
ペプチド合成の基幹物質として大量に合成しておいて、
それを出発物質とすることにより種々のリシナールペプ
チド誘導体を効率的に製造することができるので、目的
とするリシナールペプチド誘導体の製造コストを従来の
方法よりも安くすることができることも有利な点として
挙げられる。
以下に実施例、参考例を挙げて本発明をさらに詳細に説
明するが、本発明はこれらにより何ら限定されるもので
はない。
明するが、本発明はこれらにより何ら限定されるもので
はない。
尚、以下の文中で使用される略号は、各々次の意味を表
わすものとする。
わすものとする。
Lys:リシン残基。
Z:カルボベンゾキシ基（アミノ酸のアミノ基の保護基） Boc:第三ブチルオキシカルボニル基（アミノ酸のアミノ
基の保護基） Lys−ol:リシン残基の−CO基がアルコールの形に変わっ
たもの（リシノール残基） Lys−al:リシン残基の−CO基がアルデヒド基の形に変わ
ったもの（リシナール残基） Lys−SC:リシン残基の−COがセミカルバゾンの形に変わ
ったもの。
基の保護基） Lys−ol:リシン残基の−CO基がアルコールの形に変わっ
たもの（リシノール残基） Lys−al:リシン残基の−CO基がアルデヒド基の形に変わ
ったもの（リシナール残基） Lys−SC:リシン残基の−COがセミカルバゾンの形に変わ
ったもの。
Lys（OMe）2:リシン残基の−CO基がジメチルアセタール
に変わったもの DCC:N,N′−ジシクロヘキシルカルボジイミド HOSu:N−ヒドロキシコハク酸イミド Val:バリン残基 Pro:プロリン残基 Leu:ロイシン残基 Bz:ベンゾイル基 Tos:p−トルエンスルホニル基 Ac:アセチル基 pNA:p−ニトロアニリド基 ［実施例］ 参考例1.Z−Lys（Boc）−olの合成 水酸化ホウ素ナトリウム7.57g（0.2モル）を、ドライア
イス−メタノールで−20℃に冷却した80％メタノール10
0mlに溶解し、この溶液にH.Otsukaら（Bull.Chem.Soc.J
pn.,39,882,1966）の方法に準じて合成したＺ−Lys（Bo
c）−OSu 19.0g（0.04モル）を含むテトラヒドロフラン
−メタノール混液（1:1v/v）200mlを撹拌下でゆっくり
滴下した。同温度で15分間撹拌した後、1N−塩酸を加え
てpHを７に調整し、減圧下で溶媒を留去した。残留物か
ら目的物を酢酸エチルで抽出し、酢酸エチル層を1N−塩
酸、５％重曹水、水の順に洗浄した。酢酸エチル層を無
水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下で溶媒を留去し、残
留物をシリカゲルカラムに付し、酢酸エチル−クロロホ
ルム混液（1:1v/v）で溶出した。目的物の分画を集め減
圧濃縮しｎ−ヘキサンで固化させてＺ−Lys（Boc）−ol
12.1g（収率82.6％）を得た。
に変わったもの DCC:N,N′−ジシクロヘキシルカルボジイミド HOSu:N−ヒドロキシコハク酸イミド Val:バリン残基 Pro:プロリン残基 Leu:ロイシン残基 Bz:ベンゾイル基 Tos:p−トルエンスルホニル基 Ac:アセチル基 pNA:p−ニトロアニリド基 ［実施例］ 参考例1.Z−Lys（Boc）−olの合成 水酸化ホウ素ナトリウム7.57g（0.2モル）を、ドライア
イス−メタノールで−20℃に冷却した80％メタノール10
0mlに溶解し、この溶液にH.Otsukaら（Bull.Chem.Soc.J
pn.,39,882,1966）の方法に準じて合成したＺ−Lys（Bo
c）−OSu 19.0g（0.04モル）を含むテトラヒドロフラン
−メタノール混液（1:1v/v）200mlを撹拌下でゆっくり
滴下した。同温度で15分間撹拌した後、1N−塩酸を加え
てpHを７に調整し、減圧下で溶媒を留去した。残留物か
ら目的物を酢酸エチルで抽出し、酢酸エチル層を1N−塩
酸、５％重曹水、水の順に洗浄した。酢酸エチル層を無
水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下で溶媒を留去し、残
留物をシリカゲルカラムに付し、酢酸エチル−クロロホ
ルム混液（1:1v/v）で溶出した。目的物の分画を集め減
圧濃縮しｎ−ヘキサンで固化させてＺ−Lys（Boc）−ol
12.1g（収率82.6％）を得た。
融点:49〜51℃。
▲［α］20゜ D▼：−12.4゜（Ｃ＝1.2,CH3OH）。
元素分析値:C19H30N2O5として 実測値（％）;C 62.27,H 8.25,N 7.64 計算値（％）;C 62.05,H 8.23,N 7.86。
参考例2,Z−Lys（Boc）（OMe）２の合成 参考例１で得たＺ−Lys（Boc）−ol 9.0g（24.6ミリモ
ル）をDMSO 100mlに溶解して調製した溶液に、室温で
１−エチル−３−（３′−ジメチルアミノプロピル）−
カルボジイミド塩酸塩15.5g（81.1ミリモル）とジクロ
ロ酢酸1.22mlを加え30時間撹拌した。反応液に酢酸エチ
ル200mlを加え、飽和食塩水で洗浄後、酢酸エチル層を
分取し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧下で溶
媒を留去した。残留物をメタノール100mlに溶解し、オ
ルトギ酸メチル5.8g（54.6ミリモル）とｐ−トルエンス
ルホン酸100mgを加え、室温で３時間撹拌反応させた。
反応液を減圧濃縮し、残留物を酢酸エチルに溶解した後
これを飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥
後、減圧下で溶媒を留去した。残留物をシリカゲルカラ
ムに付し、酢酸エチル−クロロホルム混液（1:1v/v）で
溶出後、目的物の分画を集めて減圧濃縮し、ｎ−ヘキサ
ンで固化させてＺ−Lys（Boc）（OMe）27.08g（収率70.
2％）を得た。
ル）をDMSO 100mlに溶解して調製した溶液に、室温で
１−エチル−３−（３′−ジメチルアミノプロピル）−
カルボジイミド塩酸塩15.5g（81.1ミリモル）とジクロ
ロ酢酸1.22mlを加え30時間撹拌した。反応液に酢酸エチ
ル200mlを加え、飽和食塩水で洗浄後、酢酸エチル層を
分取し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧下で溶
媒を留去した。残留物をメタノール100mlに溶解し、オ
ルトギ酸メチル5.8g（54.6ミリモル）とｐ−トルエンス
ルホン酸100mgを加え、室温で３時間撹拌反応させた。
反応液を減圧濃縮し、残留物を酢酸エチルに溶解した後
これを飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥
後、減圧下で溶媒を留去した。残留物をシリカゲルカラ
ムに付し、酢酸エチル−クロロホルム混液（1:1v/v）で
溶出後、目的物の分画を集めて減圧濃縮し、ｎ−ヘキサ
ンで固化させてＺ−Lys（Boc）（OMe）27.08g（収率70.
2％）を得た。
融点:54〜56℃。
▲［α］20゜ D▼：−17.3゜（Ｃ＝1.0,CH3OH）。
元素分析値:C21H34N2O6として 実測値（％）;C 61.44,H 8.35,N 6.82 計算値（％）;C 60.83,H 8.68,N 6.93。
実施例1.Z−Val−Lys−al・HClの合成 （１）Ｚ−Val−Lys（Boc）（OMe）２の合成 参考例２で得たＺ−Lys（Boc）（OMe）2 821mg（２ミリ
モル）をメタノール30mlに溶解し、pd−黒を触媒として
水素ガスを６時間導入し接触還元した。メタノールを留
去後、得られた残留物とＺ−Val−OH 503mg（２ミリモ
ル）をジクロロメタン30mlに溶解し、これにDCC 412mg
（２ミリモル）を加えて20時間室温で撹拌反応させた。
析出した沈殿物を濾去後、溶媒を留去し、残留物に酢酸
エチルを加えて目的物を抽出し、酢酸エチル層を５％重
曹水、水の順に洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し
た。減圧下で溶媒を留去し、残留物を酢酸エチル−ヘキ
サン混液で溶解して、目的物を再結晶させて、Ｚ−Val
−Lys（Boc）（OMe）2 621mg（収率60.0％）を得た。
モル）をメタノール30mlに溶解し、pd−黒を触媒として
水素ガスを６時間導入し接触還元した。メタノールを留
去後、得られた残留物とＺ−Val−OH 503mg（２ミリモ
ル）をジクロロメタン30mlに溶解し、これにDCC 412mg
（２ミリモル）を加えて20時間室温で撹拌反応させた。
析出した沈殿物を濾去後、溶媒を留去し、残留物に酢酸
エチルを加えて目的物を抽出し、酢酸エチル層を５％重
曹水、水の順に洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し
た。減圧下で溶媒を留去し、残留物を酢酸エチル−ヘキ
サン混液で溶解して、目的物を再結晶させて、Ｚ−Val
−Lys（Boc）（OMe）2 621mg（収率60.0％）を得た。
融点:104〜106℃。
▲［α］20゜ D▼：−21.7゜（Ｃ＝1.1,CH3OH）。
元素分析値:C26H43N3O7・1/2H2Oとして 実測値（％）;C 60.20,H 8.55,N 8.10 計算値（％）;C 60.90,H 8.47,N 8.15。
（２）Ｚ−Val−Lys−al・HClの合成 （１）で得たＺ−Val−Lys（Boc）（OMe）2 473mg（0.9
3ミリモル）をトリフルオロ酢酸5mlに溶解し、１時間室
温で撹拌反応させた。溶媒を減圧下で留去後、得られた
残留物を6N−塩酸を加えて溶解したのち、減圧下で濃縮
し、残留物をエーテルで沈殿させ、濾取してＺ−Val−L
ys・−alHCl 161mg（（収率43.3％）を得た。
3ミリモル）をトリフルオロ酢酸5mlに溶解し、１時間室
温で撹拌反応させた。溶媒を減圧下で留去後、得られた
残留物を6N−塩酸を加えて溶解したのち、減圧下で濃縮
し、残留物をエーテルで沈殿させ、濾取してＺ−Val−L
ys・−alHCl 161mg（（収率43.3％）を得た。
融点:180〜182℃。
元素分析値:C19H29N3O4・HClとして 実測値（％）;C 57.06,H 7.56,N 10.51 計算値（％）;C 57.16,H 7.41,N 10.89。
実施例2.Z−Pro−Lys−al・HClの合成 （１）Ｚ−Pro−Lys（Boc）（OMe）２の合成 参考例２で得たＺ−Lys（Boc）（OMe）2 821mg（２ミリ
モル）を実施例１の（１）と同様の方法で接触還元し、
得られた残留物とＺ−Pro−OH 499mg（２ミリモル）を
ジクロロメタン30mlに溶解し、これにDCC 412mg（２ミ
リモル）を加えて室温で20時間撹拌反応させた。実施例
１の（１）と同様の方法で後処理を行った後、酢酸エチ
ル−ヘキサン混液で目的物を再結晶させて、Ｚ−Pro−L
ys（Boc）（OMe）2 576mg（収率57.6％）を得た。
モル）を実施例１の（１）と同様の方法で接触還元し、
得られた残留物とＺ−Pro−OH 499mg（２ミリモル）を
ジクロロメタン30mlに溶解し、これにDCC 412mg（２ミ
リモル）を加えて室温で20時間撹拌反応させた。実施例
１の（１）と同様の方法で後処理を行った後、酢酸エチ
ル−ヘキサン混液で目的物を再結晶させて、Ｚ−Pro−L
ys（Boc）（OMe）2 576mg（収率57.6％）を得た。
融点:86〜88℃。
▲［α］20゜ D▼：−41.2゜（Ｃ＝1.02,CH3OH）。
元素分析値:C26H41N3O7として 実測値（％）;C 61.52,H 8.14,N 8.28 計算値（％）;C 61.38,H 8.06,N 8.36。
（２）Ｚ−Pro−Lys−al・HClの合成 （１）で得たＺ−Pro−Lys（Boc）（OMe）2 574mg（1.1
ミリモル）を実施例１の（２）と同様に処理してＺ−Pr
o−Lys−al・HClの非晶性粉末371mg（収率84.7％）を得
た。
ミリモル）を実施例１の（２）と同様に処理してＺ−Pr
o−Lys−al・HClの非晶性粉末371mg（収率84.7％）を得
た。
▲［α］20゜ D▼：−47.9゜（Ｃ＝1.12,CH3OH）。
元素分析値:C19H27N3O4・HCl・H2Oとして 実測値（％）;C 54.87,H 7.27,N 10.10 計算値（％）;C 54.73,H 7.08,N 9.88。
実施例3.Z−Leu−Lys（Boc）（OMe）２の合成 参考例２で得たＺ−Lys（Boc）（OMe）2 2.05g（５ミリ
モル）を実施例１の（１）と同様の方法で接触還元し、
得られた残留物とＺ−Leu−OH 1.33g（５ミリモル）を
ジクロロメタン50mlに溶解し、これにDCC 1.24g（６ミ
リモル）を加えて室温で20時間撹拌反応させた。実施例
１の（１）と同様の方法で後処理を行った後、残留物を
ｎ−ヘキサンで固化させて、Ｚ−Leu−Lys（Boc）（OM
e）2 1.53g（収率58.4％）を得た。
モル）を実施例１の（１）と同様の方法で接触還元し、
得られた残留物とＺ−Leu−OH 1.33g（５ミリモル）を
ジクロロメタン50mlに溶解し、これにDCC 1.24g（６ミ
リモル）を加えて室温で20時間撹拌反応させた。実施例
１の（１）と同様の方法で後処理を行った後、残留物を
ｎ−ヘキサンで固化させて、Ｚ−Leu−Lys（Boc）（OM
e）2 1.53g（収率58.4％）を得た。
融点:77〜79℃。
▲［α］20゜ D▼：−23.04゜（Ｃ＝1.20,CH3OH）。
元素分析値:C27H45N3O7として 実測値（％）;C 61.92,H 8.66,N 8.02 計算値（％）;C 61.99,H 8.59,N 8.26。
実施例4.Z−Leu−Leu−Lys−al・HClの合成 （１）Ｚ−Leu−Leu−Lys（Boc）（OMe）２の合成 実施例３で得たＺ−Leu−Lys（Boc）（OMe）2 1.05g
（２ミリモル）を実施例１の（１）と同様の方法で接触
還元し、得られた残留物とＺ−Leu−OH 531mg（２ミリ
モル）をジクロロメタン30mlに溶解し、これにDCC 412m
g（２ミリモル）を加えて室温で20時間撹拌反応させ
た。実施例１の（１）と同様の方法で後処理を行った
後、残留物を酢酸エチルで再結晶して、Ｚ−Leu−Leu−
Lys（Boc）（OMe）2 777mg（収率61.0％）を得た。
（２ミリモル）を実施例１の（１）と同様の方法で接触
還元し、得られた残留物とＺ−Leu−OH 531mg（２ミリ
モル）をジクロロメタン30mlに溶解し、これにDCC 412m
g（２ミリモル）を加えて室温で20時間撹拌反応させ
た。実施例１の（１）と同様の方法で後処理を行った
後、残留物を酢酸エチルで再結晶して、Ｚ−Leu−Leu−
Lys（Boc）（OMe）2 777mg（収率61.0％）を得た。
融点:150〜152。
▲［α］20゜ D▼：−42.8゜（Ｃ＝1.04,CH3OH）。
元素分析値:C33H56N4O8として 実測値（％）;C 62.24,H 8.86,N 8.90 計算値（％）;C 62.35,H 8.86,N 8.93。
（２）Ｚ−Leu−Leu−Lys−al・HClの合成 （１）で得たＺ−Leu−Leu−Lys（Boc）（OMe）2 480mg
（0.8ミリモル）を実施例１の（２）と同様に処理して
Ｚ−Leu−Leu−Lys−al・HCl 316mg（収率74.9％）を得
た。
（0.8ミリモル）を実施例１の（２）と同様に処理して
Ｚ−Leu−Leu−Lys−al・HCl 316mg（収率74.9％）を得
た。
融点:141〜143。
▲［α］20゜ D▼：−47.0゜（Ｃ＝1.03,CH3OH）。
元素分析値:C26H42N4O5・HCl・H2Oとして 実測値（％）;C 57.28,H 8.32,N 10.28 計算値（％）;C 54.35,H 8.13,N 10.65。
参考例3.抗リシルエンドペプチダーゼ活性の測定 （基質溶液） Tos−Lys−OMe又はAc−Lys−pNAを80mM Tris−HCl緩衝
液（pH8.0）に所定濃度となるように溶解して基質溶液
とした。
液（pH8.0）に所定濃度となるように溶解して基質溶液
とした。
（阻害剤溶液） 本発明の方法により得られたリシナール、リシナールペ
プチド誘導体、これらの類似既知物質又は既知のリシン
特異性酵素阻害剤を所定濃度水溶液としたものを阻害剤
溶液とした。
プチド誘導体、これらの類似既知物質又は既知のリシン
特異性酵素阻害剤を所定濃度水溶液としたものを阻害剤
溶液とした。
（操作法） 30℃保温下で、基質溶液1.9mlと阻害剤溶液1.0mlをよく
混合した後、0.1mlのリシルエンドペプチダーゼ溶液
（0.25μg/ml）を加えよく混合し、Rate法により生成す
るメタノール量を吸光度（247nm）により測定し、Dixon
−plotによりKi値（μＭ）を求めた。
混合した後、0.1mlのリシルエンドペプチダーゼ溶液
（0.25μg/ml）を加えよく混合し、Rate法により生成す
るメタノール量を吸光度（247nm）により測定し、Dixon
−plotによりKi値（μＭ）を求めた。
（結果） 結果を表１に示す。
参考例4.抗トリプシン活性の測定 （基質溶液） Tos−Lys−OMeを80mM Tris−HCl緩衝液（pH8.0、2.0mM
CaCl2含有）に所定濃度となるように溶解して基質溶液
とした。
CaCl2含有）に所定濃度となるように溶解して基質溶液
とした。
（阻害剤溶液） 本発明の方法により得られたリシナール、リシナールペ
プチド誘導体、これらの類似既知物質又は既知のリシン
特異性酵素阻害剤を所定濃度水溶液としたものを阻害剤
溶液とした。
プチド誘導体、これらの類似既知物質又は既知のリシン
特異性酵素阻害剤を所定濃度水溶液としたものを阻害剤
溶液とした。
（操作法） 30℃保温下で、基質溶液1.9mlと阻害剤溶液1.0mlをよく
混合した後、0.1mlのトリプシン溶液（1.4μg/ml）を加
えよく混合し、Rate法により生成するメタノール量を吸
光度（247nm）により測定し、Dixon−plotによりKi値
（μＭ）を求めた。
混合した後、0.1mlのトリプシン溶液（1.4μg/ml）を加
えよく混合し、Rate法により生成するメタノール量を吸
光度（247nm）により測定し、Dixon−plotによりKi値
（μＭ）を求めた。
（結果） 結果を表２に示す。
表１及び２の結果から明らかな如く、リシナール及びリ
シナールペプチド誘導体は、これらの類似既知物質又は
既知のリシン特異性酵素阻害剤に比べて、リシン特異性
酵素に対して高い阻害作用を示すことがわかる。
シナールペプチド誘導体は、これらの類似既知物質又は
既知のリシン特異性酵素阻害剤に比べて、リシン特異性
酵素に対して高い阻害作用を示すことがわかる。
［発明の効果］ 以上述べた如く、本発明は、各種リシン特異性酵素の阻
害剤として、或はこれらリシン特異性酵素をアフィニテ
ィクロマトグラフィにより精製する際の吸着体として等
の用途に用いられるリシナールペプチド誘導体の、新規
で効率的な製造方法を提供するものであり、該誘導体の
工業的規模での製造を可能ならしめた点に顕著な効果を
奏する。
害剤として、或はこれらリシン特異性酵素をアフィニテ
ィクロマトグラフィにより精製する際の吸着体として等
の用途に用いられるリシナールペプチド誘導体の、新規
で効率的な製造方法を提供するものであり、該誘導体の
工業的規模での製造を可能ならしめた点に顕著な効果を
奏する。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｋ 14/435 (72)発明者 杉山 晴彦 兵庫県尼崎市高田町６−１ 和光純薬工業 株式会社大阪研究所内
Claims (1)
- 【請求項１】一般式［Ｉ］ （式中、R1はアミノ保護基若しくは水素原子を示し、R2
はアミノ保護基を示し、R3及びR4は炭素数１〜４のアル
キル基を示す。また、R3とR4とが結合して環を成してい
てもよい。） で表わされるリシナール誘導体（保護リシナール）にア
ミノ酸若しくはペプチドを反応させて、そのα位のアミ
ノ基にアミノ酸若しくはペプチドを導入し、然る後アミ
ノ保護基及びアルデヒド保護基を同時に又は別々の手段
により取り除くことを特徴とする一般式［II］ （式中、Ａはアミノ酸残基若しくはペプチド残基を示
し、Ｒはアミノ保護基又は水素原子を示す。）で表わさ
れるリシナールペプチド誘導体の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62194134A JPH0794418B2 (ja) | 1987-08-03 | 1987-08-03 | 新規な製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62194134A JPH0794418B2 (ja) | 1987-08-03 | 1987-08-03 | 新規な製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6438050A JPS6438050A (en) | 1989-02-08 |
| JPH0794418B2 true JPH0794418B2 (ja) | 1995-10-11 |
Family
ID=16319473
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62194134A Expired - Lifetime JPH0794418B2 (ja) | 1987-08-03 | 1987-08-03 | 新規な製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0794418B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0572547A1 (en) * | 1991-02-22 | 1993-12-08 | The Du Pont Merck Pharmaceutical Company | SUBSTITUTED $g(a)-AMINOALDEHYDES AND DERIVATIVES |
| CA2071621C (en) * | 1991-06-19 | 1996-08-06 | Ahihiko Hosoda | Aldehyde derivatives |
| EP0519748B1 (en) * | 1991-06-21 | 1998-09-02 | Merck & Co. Inc. | Peptidyl derivatives as inhibitors of interleukin-1B converting enzyme |
-
1987
- 1987-08-03 JP JP62194134A patent/JPH0794418B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6438050A (en) | 1989-02-08 |
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