JPH0780916B2 - 単クローン性抗ｃｅａ抗体１ - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、癌胎児性抗原（以下Ｃ
ＥＡという）の抗原決定基に対して特異性を有する単ク
ローン性抗体に関する。

【０００２】

【従来の技術】ＣＥＡは周知の癌関連胎児性抗原であっ
て、分子量約２０万±８万、糖と蛋白質との比約１：１
の、ある種の糖蛋白質である。癌抗原ＣＥＡがヒトの消
化器のアデノカルシノーマに存在することは、 Gold 及
び Freedman よって報告された〔 J. Exp. Med., 121,
439 (1965); ibid., 122, 467 (1965)〕。ＣＥＡはその
血中濃度をイムノアッセイによって測定し、これを癌組
織の存在及びその消長を示すマーカーとして臨床的に癌
の診断及び治療や各種の基礎医学研究に用いられてお
り、その有用性及び重要性は周知である。しかし、ある
種のＣＥＡ関連正常抗原が存在しており、これらはＣＥ
Ａと免疫学的交叉反応性を有しているので、ＣＥＡの癌
特異性が不明確になっている。

【０００３】この種のＣＥＡ関連抗原の例は、非特異的
交叉反応抗原（以下ＮＣＡという）及び正常糞便抗原
（以下ＮＦＡという）である。ＮＣＡは分子量約８万±
３万、糖含量約４０〜６０％のある種の糖蛋白質で、例
えばヒトの肺や脾に存在している〔Proc. Natl. Acad.
Sci. USA., 69, 2492 (1972) 〕。次にＮＦＡはさらに
ＮＦＡ−１、ＮＦＡ−２及び正常糞便交叉反応抗原（以
下ＮＦＣＡという）に分類される。ＮＦＡ−２は分子量
２０万±５万、糖と蛋白質との比約１：１のある種の糖
蛋白質で、その抗原性及び理化学的性状はＣＥＡと極め
て類似している。ＮＦＡ−１及びＮＦＣＡはＮＦＡ−２
の分解産物であると思われる。ＮＦＡ−１は分子量約２
〜３万、糖含量約１３％の小分子抗原であり、ＮＦＣＡ
は分子量約８万±３万の１種の糖蛋白質である。他に、
ヒトの正常糞便中に糞便非特異的交叉反応抗原（以下ｆ
−ＮＣＡという）という抗原が存在している。ｆ−ＮＣ
Ａの抗原性は前記のＮＣＡと実質的に同一で、ＣＥＡ、
ＮＦＣＡ及びＮＦＡ−２と交叉反応性を示す。従って、
ヒトの正常糞便中には、本発明の目的に関係のある４種
のＣＥＡ関連抗原が存在している。

【０００４】癌マーカーとしてのＣＥＡの有用性を改良
するために、ＣＥＡ関連抗原とＣＥＡとを正確に識別し
なければならない。このために、ＣＥＡの抗原決定基に
対して明確な特異性を有する抗ＣＥＡ抗体の提供が従来
試みられている。しかし、公知の各種の多クローン性抗
体には、反応特異性が不明確であるという共通の欠点が
ある。すなわち、これらの多クローン性ＣＥＡ抗体は、
各種の抗体混合物であって、ＣＥＡ分子上の多くの抗原
決定基のほとんど全部と反応性を有している。この欠点
をなくするために、各種の単クローン性ＣＥＡ抗体が重
要視されている。その理由は次のとおりである。

【０００５】（１） 細胞融合という常法によって得ら
れる単クローン性ＣＥＡ抗体は、唯一つの抗原決定基に
対してのみ特異性を有しているから、抗原との反応性が
均一であろう。 （２） 単クローンの増殖によって、所望の均一性をも
つ多量の抗体が得られるであろう。 （３） 多種類の単クローンを得ることができる。これ
らは全体として、公知の多クローン性抗ＣＥＡ抗体と同
様に広範囲の特異性を持つであろう。 このようにして、単クローン性抗ＣＥＡ抗体の製造が、
例えば次の文献にあるように試みられている。Accolla,
R. S. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 77, 56
3 (1980); Mitchell, K. F., Cancer Immunol, Immunot
her., 10, 1 (1980); Rogers, G.T.et al., Br. J. Can
cer, 43, 1 (1981); Kupchik, H. Z. et al., Cancer R
es ., 41, 3306 (1981)。

【０００６】これら既報の単クローン性抗体の反応特異
性は、次のとおりに要約される。 （１） Accolla ら。 ２つのハイブリドーマから得ら
れた抗体はＮＧＰ（ＮＣＡと同等であると思われる）と
微弱に反応し、ＣＥＡと強く反応した。これらの２つの
抗体とＣＥＡとの反応には競合的阻害が見られなかっ
た。各抗体はＣＥＡ分子上の別の抗原決定基と反応する
ようである。 （２） Mitchell。 １つの抗ＣＥＡ抗体が得られた。
これはＣＥＡと反応したがＮＣＡと反応しなかった。Ｃ
ＥＡとの反応を多クローン性ヤギ抗ＣＥＡ抗体で阻止で
きなかった。 （３） Rogersら。 １つの単クローン性抗ＣＥＡ抗体
が得られた。これは腫瘍組織からのＣＥＡ標品と弱く反
応したが、患者の血清中のＣＥＡと強く反応した。 （４） Kupchik 。 ９個のクローンのうちの１個の単
クローン性抗ＣＥＡ抗体検討された。その反応特異性と
多クローン性ヤギ抗ＣＥＡ抗体と比較したところ単クロ
ーン性抗ＣＥＡ抗体は、多クローン性抗ＣＥＡ抗体と反
応するＣＥＡ分子のうちの１部のＣＥＡとのみ反応し
た。 これらの公知の単クローン性抗ＣＥＡ抗体の反応の特異
性についてのより詳しい検索はなされていない。

【０００７】この間に我々は、ある種のＣＥＡ関連抗原
すなわち前記のＮＦＡ−１、ＮＦＡ−２及びＮＦＣＡが
ヒトの正常糞便に存在することを見出し、これらの分離
に成功した〔特開昭５６−４６８１９号、Cancer Res.,
41, 713-720 (1981) 〕。さらにこれらのＣＥＡ関連正
常抗原を用いてＣＥＡ分子の抗原構造を調べた結果、Ｃ
ＥＡ分子上の多くの抗原決定基を、例えば次のとおりに
分類し得ることを提案した。

【０００８】（１） 個体特異的抗原決定基 免疫抗原として用いた個々のＣＥＡ標品にのみ見出され
る特異的な抗原決定基で、他の個体から得られたＣＥＡ
標品には見出されないもの。 （２） ＣＥＡ特異決定基 癌組織から得られたＣＥＡ標品に共通して見出される抗
原決定基であるが、ＮＦＡやＮＣＡなどＣＥＡ関連正常
抗原には見出されない。最も癌特異性の高い抗原決定基
である。 （３） ＮＦＡ−１共通決定基 ＣＥＡ、ＮＦＡ−２及びＮＦＡ−１の３者に共通して見
出される抗原決定基で、ＣＥＡ分子上の主要抗原決定基
の１つである。 （４） ＮＦＣＡ共通決定基 ＣＥＡ、ＮＦＡ−２及びＮＦＣＡの３者に共通して見出
される抗原決定基で、これもＣＥＡ分子上の主要抗原決
定基の１つである。 （５） ＮＣＡ共通決定基 ＣＥＡ、ＮＦＡ−２、ＮＦＣＡ及びＮＣＡの４者に共通
して見出される抗原決定基で、ＣＥＡ及び関連抗原に最
も広く共通して認められる抗原決定基である。 本発明は、我々がヒトの正常糞便から分離した上記のＣ
ＥＡ関連抗原を用いることによって、単クローン性抗Ｃ
ＥＡ抗体産生能を有する単クローンを、抗原との反応性
の観点において選別し得るという知見に基いている。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、癌胎児性抗
原に対して特異的な単クローン性抗体を提供することを
目的としている。

【００１０】

【課題を解決するための手段】本発明は、次の方法で得
られる特異的な単クローン性抗体を提供する。本発明に
より、第１哺乳動物を最初の個体の癌胎児性抗原（以
下、第１癌胎児性抗原という）で免疫することによっ
て、前記抗原に対する抗体産生能を有する細胞を産生さ
せ、生じた細胞をこの哺乳動物から採取し、採取された
細胞を第２哺乳動物由来のミエローマの株化細胞と融合
させ、こうして得られた融合細胞をクローニングに付
し、得られた単クローン性ハイブリドーマを培養し、得
られた培養液から所望の単クローン性抗体を回収し、そ
の際（イ）前記第１癌胎児性抗原を第１マーカー抗原と
して用い、前記単クローン性ハイブリドーマを前記第１
マーカー抗原と反応する抗体の産生能を基準として選別
し、（ロ）前記回収工程において、免疫した最初の個体
以外の個体の癌胎児性抗原（以下、第２癌胎児性抗原と
いう）、正常糞便抗原１、正常糞便抗原２および非特異
的交叉反応抗原からなる群から選ばれた２種以上の抗原
を選別用マーカー抗原として用いて、前記単クローン性
ハイブリドーマを選別用マーカー抗原との反応性を基準
として選別し、かつその際（ハ）正常糞便抗原２を第２
マーカー抗原として用いて単クローン性ハイブリドーマ
を選別し、正常糞便抗原２とは反応しない抗体（抗体
Ａ）産生能をもつ単クローン性抗体を分離し、次に１種
以上の第２癌胎児性抗原を第３マーカー抗原として用い
て第２癌胎児性抗原と反応しない抗体産生能をもつ単ク
ローン性ハイブリドーマを分離し、選別された単クロー
ン性ハイブリドーマを培養して所望の抗体を得る工程か
らなる、癌胎児性抗原に対して特異性をもつ単クローン
性抗体の製法によって、癌胎児性抗原の個体特異的な部
分との反応性を有するが、癌胎児性抗原の個体非特異的
な部分、正常糞便抗原１、正常糞便抗原２および非特異
的交叉反応抗原のいずれとも反応性を有しない単クロー
ン性抗体（抗体１）が得られる。

【００１１】実用的な回収工程において、第１癌胎児性
抗原、第２癌胎児性抗原、正常糞便抗原１、正常糞便抗
原２及び非特異的交叉反応抗原からなる群から選ばれた
２種以上の抗原を選別用マーカー抗原として用いること
によって、前記ハイブリドーマによって産生された単ク
ローン性抗体を、選別用マーカー抗原との反応性に基づ
いて選別する。好ましくは、前記の選別は、各種標識物
質で標識されたマーカーを用いるイムノアッセイ法によ
って行なわれる。

【００１２】本発明による単クローンから得られる単ク
ローン性抗体は、ＣＥＡ分子上の対応する抗原決定基と
の反応が均一かつ明確であるから、例えばヒトの診断治
療のような臨床応用や各種の基礎医学研究用に有利に用
いることができる。

【００１３】本発明の単クローンを、例えば次のように
常法によって得ることができる。免疫される哺乳動物
は、例えばマウス、ラット、モルモットのような小動物
でも、ウサギ、ヤギ、牛、馬のような大動物でもよい。
動物を常法により免疫する。例えばマウスを、所与のＣ
ＥＡ標品すなわち第１ＣＥＡ２０μg を含むフロイント
の完全アジュバントを用いた乳化液０．２mlの皮下注射
によって免疫し、５週間後に食塩水０．２ml中の同量の
ＣＥＡの静脈注射によって免疫する。３日後に常法によ
り動物の脾及びリンパ節細胞を採取する。採取された抗
体産生細胞と適当な腫瘍細胞〔例えばＰ３−Ｘ６３−Ａ
ｇ８、６、５、３、（例えばＰ３−Ｘ６３−Ａｇ８−ｕ
１）、Ｓｐ２／０−Ａｇ１４，２１０，ＲＣＹ３、Ａｇ
１、２、３など〕とを１×１０⁸ 抗体産生細胞／ml対１
−２×１０⁷ 腫瘍細胞／mlの比で、すなわち５対１から
１０対１の比で混合し、常法により、例えばＨＶＪ（仙
台ウイルス）又はＰＥＧ（ポリエチレングリコール）を
用いて融合する。ＨＡＴ培地を用いて選別すると、正常
細胞は死滅し、融合細胞が残存する。第１ＣＥＡと反応
する抗体産生能の観点において、融合細胞を選別する。
選別された融合細胞は抗ＣＥＡ抗体産生能を有する融合
細胞である。これを常法によりクローニングし、獲られ
た単クローンを、単クローン由来の抗体とＣＥＡ及びＣ
ＥＡ関連抗原との反応性の観点から選別する。それ自体
公知のイムノアッセイ法によって実用的に選別すること
ができる。下記に実施例で用いた選別法はFarrの硫安沈
殿法〔Farr, R. S., J. Inf. Dis., 103, 239 (1958)〕
である。ＣＥＡ関連抗原の実用的な例は正常成人糞便由
来のＮＦＡ−１、ＮＦＡ−２及びｆ−ＮＣＡで、これら
の性状は前記のとおりである。これらのＣＥＡ関連抗原
の製造は後記参考例に記載されている。

【００１４】後記実施例１において行なわれた選別の結
果が表１に示されている。

【００１５】

【表１】

【００１６】本発明の方法によって得られる単クローン
性抗体を、表１に示すように分類することができる。抗
体１は、第１癌胎児性抗原との反応性を有するが、第１
癌胎児性抗原以外の癌胎児性抗原、正常糞便抗原１、正
常糞便抗原２及び非特異的交叉反応抗原の中のいずれの
抗原とも反応性を有しない単クローン性抗体である。抗
体２は、２つ以上の癌胎児性抗原との反応性を有する
が、正常糞便抗原１、正常糞便抗原２及び非特異的交叉
反応抗原の中のいずれの抗原との反応性も有しない単ク
ローン性抗体である。抗体３は、２つ以上の癌胎児性抗
原との反応性を有し、正常糞便抗原１及び正常糞便抗原
２との反応性を有するが、非特異的交叉反応抗原との反
応性を有しない単クローン性抗体である。抗体４は、２
つ以上の癌胎児性抗原及び正常糞便抗原２との反応性を
有するが、正常糞便抗原１及び非特異的交叉反応抗原と
の反応性を有しない単クローン性抗体である。抗体５
は、２つ以上の癌胎児性抗原、正常糞便抗原２及び非特
異的交叉反応抗原との反応性を有するが、正常糞便抗原
１との反応性を有しない単クローン性抗原である。実用
的に、これらの単クローン性抗体は、抗血清の形状であ
る。

【００１７】表１において、正常成人糞便由来のＣＥＡ
関連抗原ＮＦＡ−２は放射性ヨード標識され、次に単ク
ローン培養上清に加えられ、ラジオイムノアッセイが行
なわれる。その結果、単クローン（クローンＡ、実施例
１では約１０株）と単クローン（クローンＢ、実施例１
では約２００株）が選別される。クローンＡの産生する
抗体ＡはＮＦＡ−２と反応しない。クローンＢの産生す
る抗体ＢはＮＦＡ−２と反応する。抗体ＡはヒトのＣＥ
Ａと反応し、正常成人糞便由来のＣＥＡ関連抗原と反応
しない。

【００１８】１つ以上の第２ＣＥＡ（実施例では４種）
を用いて、同様の方法でラジオイムノアッセイを行なう
と、クローンＡからクローンＡ１（実施例１では８株）
の産生する抗体１は、第１ＣＥＡと反応するが第２ＣＥ
Ａと反応しない。クローンＡ２の産生する抗体２は第１
及び第２ＣＥＡと反応する（実施例１では２株）。

【００１９】同様の方法でＮＦＡ−１を用いて、ＮＦＡ
−２と反応する抗体を産生するクローンＢを選別する
と、クローンＢ１及びＢ２が得られる。クローンＢ１
（実施例１では約７０株）の産生する抗体３は、ＮＦＡ
−１及びＮＦＡ−２と反応する。クローンＢ２（実施例
１では約１００株）の産生する抗体はＢ２は、ＮＦＡ−
２と反応し、ＮＦＡ−１と反応しない。ＮＦＡ−１の分
子量は小さいが、抗原活性は強いので、実施例１では約
７０株のクローンＢ１が得られた。

【００２０】ｆ−ＮＣＡを用いて同様の方法でクローン
Ｂ２から、クローンＢ２−１（実施例では約６０株）と
Ｂ２−２（実施例１では約４０株）が選別される。クロ
ーンＢ２−１の産生する抗体４はｆ−ＮＣＡと反応しな
いが、クローンＢ２−２の産生する抗体５はｆ−ＮＣＡ
と反応する。

【００２１】所望により、ＮＦＡ−２以外の他の抗原を
クローニングで得られたクローンの最初の選別に用いる
ことができる。例えば、ＮＦＡ−１を最初に用いること
により、産生される抗体とのＮＦＡ−１との反応性の観
点から単クローンを選別することができる。

【００２２】本発明による単クローン性抗ＣＥＡ抗体を
各種の臨床的用途及び基礎医学研究用に有利に用いるこ
とができる。例えば、抗体２は臨床用に最も有利であ
り、抗体３は血中ＣＥＡ濃度の測定に価値があると考え
られる。なお、本発明による単クローンを常法によって
工業的規模で増殖することができる。

【００２３】本発明による単クローン性抗ＣＥＡ抗体の
用法は抗体の反応特異性及び用途によって異なるが、代
表的な用法の例を次に例示する。

【００２４】Ｉ．組織学的検索法 例えば細胞の浮遊液又は塗抹標本あるいは組織切片のよ
うな細胞標品を本発明の単クローン性抗ＣＥＡ抗体で３
７℃で３０分処理し、食塩水で充分に洗浄した後、蛍光
色素（tetra methylrhodamine isothiocyanate又はfluo
rescein isothiocyanate ）で標識した抗マウス免疫グ
ロブリン抗体溶液で３７℃で３０分処理し、蛍光顕微鏡
を用いて蛍光陽性の細胞を検索する。所望により蛍光色
素の代わりに抗マウス免疫グロブリン抗体に結合された
ペルオキシダーゼを用いる酵素抗体法による検索も可能
である。

【００２５】II．血中ＣＥＡ濃度測定法 本発明の単クローン性抗ＣＥＡ抗体による血中ＣＥＡ濃
度の正確な測定は、次に例示するように、例えば硫安沈
殿によるFarrの方法、抗マウス免疫グロブリンを用いる
二抗体法、ジルコニウムゲルを用いるＺゲル法及び固相
抗体サンドイッチ法などによって行なうことができる。

【００２６】（１） 抗マウス免疫グロブリン抗体によ
る二抗体法の例。 ヒトの血清５０μl をプラスチックチューブ（例えば、
栄研チューブNo. １：栄研化学社製；径９．８mm、長さ
８cm）に入れ、０．５％ＢＳＡを含む０．１Ｍ酢酸緩衝
液（ｐＨ６．０）２００μl を加えて希釈する。０．１
Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ６．０）で５０倍に希釈した正常マ
ウス血清を用いて、適当に希釈された本発明の単クロー
ン性抗ＣＥＡ抗体液５０μl をとり、上記チューブに入
れて３７℃で３０分反応させる。後記参考例１記載の方
法で調製され ¹²⁵Ｉで標識された適当なＣＥＡ標品
（１．５ng）の酢酸緩衝液溶液（５０μl ）をチューブ
に加え３７℃で１時間反応させる。次いで正常マウス血
清（×５０；５０μl ）中の免疫グロブリンを充分に沈
降させ得る量の抗マウス免疫グロブリン抗体を含むウサ
ギ又はヤギ抗マウス免疫グロブリン血清１００μl を反
応混合液に加え４℃で一夜反応させる。生じた沈降物を
遠心操作（３０００r.p.m.／３０分）で落し、０．９％
食塩溶液で沈降物を洗浄したのち、沈降物の放射活性を
ガンマー計測機で測定する。ＣＥＡを１ng／mlから５０
ng／mlまでの各濃度で含有する０．１Ｍ酢酸塩緩衝液
（子牛ガンマグロブリン１．２％及びＢＳＡ０．５％と
を含み、ｐＨ６．０）を検体血清と同様に処理し、標準
検量線を作製する。検体血清中のＣＥＡの測定値より血
中ＣＥＡ濃度を算出する。

【００２７】正常人血清の測定値（正常値）は用いる単
クローン性抗ＣＥＡ抗体の種類により一般に異なるの
で、簡単には特定できないが、平均正常値に標準偏差
（Ｓ．Ｄ．）の２倍の値を加えた値以上の値を病的高値
として悪性腫瘍検出の判断に用いることが実用的であ
る。

【００２８】（２） 固相抗体サンドイッチ法の例。 この方法は最も高感度である。原理は、プラスチック製
ビーズ又はチューブに本発明で得られた単クローン性抗
ＣＥＡ抗体の中の一種の抗体を固相一次抗体として吸着
結合させる。この固相一次抗体と検体中のＣＥＡとを反
応させたのち、一次抗体とは対応する抗原決定基の異な
った別の単クローン性抗ＣＥＡ抗体を ¹²⁵Ｉでヨード化
した標識二次抗体として反応させると、検体中のＣＥＡ
量に応じて標識二次抗体が結合する。既知量のＣＥＡを
同じ操作で測定して得た検量線より検体中のＣＥＡ量を
算出する。

【００２９】（ａ） 固相一次抗体の作製 一次抗体としてどのような特性をもった単クローン性抗
ＣＥＡ抗体を選ぶかは測定系の目的により変わり得る
が、最も普遍的な目的には、ＣＥＡ分子上の最も主な抗
原部位と考えられるＮＦＡ−１共通部分に向けられた抗
体３を選ぶとよいので、抗体３の例について次に説明す
る。抗体３として分類された単クローン性抗ＣＥＡ抗体
の中からＣＥＡとの反応親和性（Ｋａ）が強い（少なく
ともＫａ≧１×１０⁹ Ｍ^-1）ものを選ぶ。

【００３０】Ｋａの測定は次のように行なう。抗体３標
品の一定量（例えば１０μg ）に最高２００μg までの
いろいろな量の ¹²⁵Ｉで標識されたＣＥＡ〔０．０１Ｍ
硼酸緩衝食塩水（Ｂ．Ｂ．Ｓ．）ｐＨ８．０；正常ウサ
ギ血清（１％）及びNaN3（０．０５％）を含む〕を加え
る。各混合液を３７℃、１８時間保温した後、それぞれ
７５％飽和硫安液（４００μl ）を加え、４℃に１時間
保ち、次に遠心処理（１８００×ｇ／３０分間）により
上清を除去する。沈降物を５０％飽和硫安溶液で洗浄す
る。上清（２００μl ）及び沈降物の放射活性をガンマ
カウンターを用いて測定する。同様の方法をくり返し、
結合されたＣＥＡと遊離ＣＥＡとの比を求め、これから
常法〔Steward M. W. & Petty R. E., Immunol., 22, 7
47 (1972)〕により反応親和性（Ｋａ）を算出する。こ
うして得られた高親和性の抗体３標品をラウリル硫酸ナ
トリウム（０．０１％）、ＥＤＴＡ（０．０５％）を含
む０．００１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）で例えば５
００倍に希釈し（抗体濃度として５〜１０μg ／ml程
度）、これをプラスチックビーズ又はチューブのコーチ
ングに用いる。

【００３１】固相マトリックスとしては各種のプラスチ
ック製チューブやビーズを用い得るが、例えば直径約６
mmのポリスチレンビーズ（例えば米国、Precision Plas
ticBall社製）を充分洗浄した後、上記単クローン性抗
ＣＥＡ抗体（抗体３）溶液に浸し、室温に一夜静置す
る。ビーズを２回蒸留水で洗浄した後、０．００１Ｍグ
リシン塩酸緩衝液（ｐＨ２．３）で処理し、さらに蒸留
水で２回洗浄した後、０．５Ｍの食塩と０．５％ウシ血
清アルブミン（ＢＳＡ）とを含む０．１Ｍリン酸塩緩衝
液中に３時間浸し、最後は真空乾燥して冷所に保存す
る。

【００３２】（ｂ） 標識二次抗体の作製 標識二次抗体として何を用いるかにより、得られる結果
は著しく異なる。後記表２からわかるように、例えば抗
体２を二次抗体として用いることによって得られるＣＥ
Ａ測定系は、癌組織中のＣＥＡとのみ反応するが、ＮＦ
ＡやＮＣＡとは反応しない、最高の特異性をもつ系であ
るが、抗体５を二次抗体として用いることによって得ら
れる測定系は、ＣＥＡと共にＮＦＡ−１以外のすべての
関連抗原をも測定し得る系である。また抗体３として同
定される各種抗体の中でも、その抗体と反応する抗原決
定基が一次抗体の抗原決定基と同一のものは二次抗体に
用い得ないが、抗体３に属する抗体の中でも、一次抗体
の対応する抗原決定基以外の抗原決定基と反応するもの
であれば、二次抗体として用いることができる。次の例
は、抗体２を用いた最高の癌特異性を有する測定系であ
る。

【００３３】抗体２として同定された各種抗体の中か
ら、ＣＥＡとの反応親和恒数の最も高い（少なくともＫ
ａ≧１×１０⁹ Ｍ^-1）ものを選ぶ。ＣＥＡとセファロー
ス４Ｂを結合（１０mg／１．０ｇドライゲル）させたＣ
ＥＡ吸着剤を用いて、上記単クローン性抗ＣＥＡ抗体を
特異的に精製し（参考例２参照）、得られた抗体標品を
公知のクロラミンＴ法〔Hunter & Greenwood, 196 2, N
ature (London) 194, 495〕により ¹²⁵Ｉで標識し、放
射活性の強さ約５ nCi／ng抗体の標識抗体を得る。所望
により、 ¹²⁵Ｉの代りにペルオキシダーゼなどの酵素で
標識した二次抗体を用いることもできる。

【００３４】（ｃ） ラジオイムノアッセイ 検体として得たヒト血清（又は血漿）５０μl をプラス
チック製試験管（例えば栄研チューブ９．８×８０mm）
にとり、ＢＳＡ（０．５％）を含む０．１Ｍ酢酸緩衝液
（ｐＨ６．０）を２００μl 加え、これに上記の抗ＣＥ
Ａ抗体を結合したビーズ１個を入れ、室温で試験管を回
転させながら４時間反応させる。反応後、反応液を吸引
除去し、０．９％食塩水１mlで１回洗浄し、抗体２をヨ
ード化して得た標識二次抗体液（１％ＢＳＡを含む０．
０５Ｍトリス塩酸緩衝液で約６００ nCi／mlに希釈した
標識抗体）を２００μl 加え、室温で回転させながら２
４時間反応させる。反応終了後、０．９％食塩水で２回
洗浄した後、ビーズの放射活性をガンマーカウンターで
測定する。

【００３５】検量線作製用として、精製ＣＥＡを１ng／
ml、３ng／ml、１０ng／ml、３０ng ／ml及び１００ng
／mlの濃度に、１．２％ウシガンマグロブリン及び０．
５％ＢＳＡを含む０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ６．０）で
調製した各標準溶液を用いる。各標準溶液５０μl をと
り、上記検体の処置と同様の操作によって、抗体でコー
チングされたビーズ及び放射性ヨードで標識された二次
抗体とそれぞれ反応させる。このようにして、各種標準
溶液の放射活性（Ｂ cpm）を得る。Ｂ cpmからＣＥＡを
含まないコントロールの値Ｂ′を差し引いたＢ−Ｂ′を
算出し、対応するＣＥＡ濃度をプロットして検量線を描
き、これを用いて検体中のＣＥＡ濃度を算出する。

【００３６】抗体２を標識二次抗体と用いた本例では、
正常人血清又は血漿との反応は弱い。さらに正常人のＣ
ＥＡ濃度の平均値は用いる抗ＣＥＡ抗体標品の特性、例
えばその親和恒数Ｋａによって著しく異なり、具体的数
値を容易に特定できない。しかし実用的には正常人の平
均値に標準偏差（Ｓ．Ｄ．）の２倍の値を加えた値以上
の値を病的高値として悪性腫瘍の検出の判断に用いるこ
とができる。

【００３７】本発明による単クローン性抗ＣＥＡ抗体を
用いることによって、従来の多クローン性及び単クロー
ン性抗ＣＥＡ抗体を同じ目的に用いる場合に比較して、
所望の抗原濃度をいっそう正確に測定することができ
る。

【００３８】癌の診断治療のほかに、本発明による単ク
ローン性抗ＣＥＡ抗体を、例えば、細胞の悪性変化に伴
なう遺伝子発見の胎児期への先祖帰り現象としてのＣＥ
Ａ産生やＣＥＡの生物活性及び分子構造の解明に用いる
ことができる。

【００３９】下記の本発明の実施例において、Farrのラ
ジオイムノアッセイ法は次の通り行なわれた。¹²⁵Ｉで
標識されたＣＥＡ標品（５−１０ng；５０μl ）及び単
クローンの培養上清（５０μl ）を９６ウエルのマイク
ロタイタープレートの各ウエルに入れ、よく混合した。
３７℃で１時間静置した後、飽和硫安液（１００μl ）
を各ウエルに加え、さらに３７℃で１時間静置した。次
に反応混合物を遠心処理（２０００r.p.m.／３０分間）
して上清を分離し、その１００μl の放射活性をガンマ
カウンターで測定した。抗体とともに沈降した放射性Ｃ
ＥＡの量から、単クローン性抗ＣＥＡ抗体産生能をもつ
融合細胞が同定された。

【００４０】

【実施例１】約５週令のＢＡＬＢ／ｃマウス（ＳＰＦマ
ウス：静岡県実験動物農業協同組合より入手）２匹をＣ
ＥＡ（参考例１の方法で調製）で免疫した。すなわち各
動物について、初回２０μg のＣＥＡをフロイントの完
全アジュバント（DIFCO 社製）を用いた乳化液０．２ml
とともに腹腔内投与し、５週間後に同量のＣＥＡ（食塩
水０．２ml中ＣＥＡ２０μg ）を各マウスの静脈内に投
与した。その３日後に動物を殺し、脾及びリンパ節より
抗体産生細胞（類リンパ球）を採取した。約１×１０⁸
個の類リンパ球と１×１０⁷ 個のアザグアニン耐性マウ
ス骨髄腫由来株化細胞Ｐ３−Ｘ６３−Ａｇ８−ｕｌ〔 Y
elton, D. E. et al.,Curr. Top. Microbiol. Immuno
l., 81, 1 (1978) 〕と混合した。４５％（v/v ）ポリ
エチレングリコール４０００（米国シグマ社製）１mlを
混合物に滴下し、３７℃に７分間保ち、その後Ｄ−ＭＥ
Ｍ（日水製薬製）１５mlを混合物に滴下することによ
り、ポリエチレングリコールを希釈した。

【００４１】融合細胞をＤ−ＭＥＭ（３０ml）で洗い、
１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）（米国Gibco 製）、ペニ
シリン（１００単位／ml）とゲンタマイシン（５０μg
/ml）とを含むＤ−ＭＥＭ（１００ml）中に浮遊させ
た。細胞浮遊液（各１ml）を９６のウエルに入れ（各２
４ウエルのミクロタイター板使用）、炭酸ガス存在下で
３７℃に一夜放置した後、ＨＡＴ培地（４×１０^-7Ｍの
アミノプテリン、１．６×１０^-5Ｍのチミジン及び１×
１０^-4Ｍのヒポキサンチンを含む培地、ｐＨ７）各１ml
を各ウエルに分注し、次に培地の半分を２日おきに新し
いＨＡＴ培地と取りかえた。１１日目に培地の半分をＨ
Ｔ培地（上記ＨＡＴ培地からアミノプテリンを除いたも
の）と取りかえ、次に２日おきに培地の半分を１０％Ｆ
ＣＳを含むＤ−ＭＥＭと取りかえた。ほとんど全部（９
８％以上）の培地で融合細胞の発育が認められた。培地
の上清を各ウエルから採取し、前記の第１ＣＥＡを用い
るFarr の硫安沈殿法によって抗ＣＥＡ抗体を産生する
融合細胞（ハイブリドーマ）を選別した。次に抗ＣＥＡ
抗体産生能を有すると認められた融合細胞を次のように
限界希釈法によって単クローン化した。

【００４２】１０％のＦＣＳ（ウシ胎児血清）を含むＤ
−ＭＥＭで融合細胞を３細胞／mlになるように希釈し、
各０．２mlをミクロタイタープレートの各ウエルに入れ
た。Ｘ線照射された若いＢＡＬＢ／ｃマウスの胸腺細胞
（約５×１０⁶ 細胞／ml）を含むＤ−ＭＥＭを用いて３
７℃で２週間培養後、ウエル中で増殖する細胞を単クロ
ーン融合細胞として同定し、さらに限界希釈法をくり返
し行なうことにより、単クローン性を確実にした。こう
して培養上清中に約１０ng／ml以上の抗ＣＥＡ抗体産生
能をもつ単クローン性融合細胞が得られた。

【００４３】実施例１で用いられた第１ＣＥＡは後記参
考例１記載の方法で得られたものであるが、所望により
その他の適当なＣＥＡ標品を同じ目的に用いることもで
きる。２匹のマウスより通常２０〜３０個の単クローン
性抗ＣＥＡ抗体産生融合細胞が得られる。上記操作を十
数回繰り返して得られた約３００株の抗ＣＥＡ抗体産生
融合細胞の培養上清と放射性ヨードで標識したＣＥＡ、
ＮＦＡ−２、ＮＦＡ−１及びｆ−ＮＣＡとの反応性をFa
rrの硫安沈殿法によるラジオイムノアッセイによって検
索した。結果を前記の表１に示す。

【００４４】

【実施例２】実施例１の方法で得られた抗体１から５ま
で（表１参照）を別々に第１ＣＥＡ、第２ＣＥＡ及び正
常人糞便由来のＣＥＡ関連抗原すなわちＮＦＡ−１、Ｎ
ＦＡ−２及びｆ−ＮＣＡを用いたFarrのラジオイムノア
ッセイ法によって調べ、全抗体１から５までと、上記全
抗原との反応性を解明した。その結果を示す表２におい
て、「＋」「−」は反応性の有無を表わしている。

【００４５】

【表２】 単クローン性抗ＣＥＡ抗体とＣＥＡ及びＣＥＡ関連抗原との反応性 抗 原 抗体 １ ２ ３ ４ ５ ヒトＣＥＡ第１＊ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ 第２＊＊ − ＋ ＋ ＋ ＋ 正常関連抗原 ＮＦＡ−１ − − ＋ − − ＮＦＡ−２ − − ＋ ＋ ＋ ｆ−ＮＣＡ − − − − ＋ （注） ＊ 動物免疫用ＣＥＡ ＊＊ 第１ＣＥＡ以外のＣＥＡ

【００４６】表２から本発明の単クローン性抗ＣＥＡ抗
体が次の反応特異性を有していることがわかる。 （１） 全部の抗体１ー５は第１ＣＥＡすなわち動物の
免疫に用いられたＣＥＡと反応する。 （２） 抗体１は第１ＣＥＡのみと反応する個体特異的
抗体である。本抗体は個体ごとの癌の診断治療に有用で
あると考えられる。 （３） 抗体２は第１ＣＥＡ及び第２ＣＥＡと反応する
が、すべてのＣＥＡ関連正常糞便抗原すなわちＮＦＡ−
１、ＮＦＡ−２及びｆ−ＮＣＡと反応しない。なお、実
施例１では別々の患者から得られた４つのＣＥＡ標品を
第２ＣＥＡとして用いた。本抗体は抗ＣＥＡ特異抗体で
あって、最高の癌特異性を有するから、各種の臨床用
（例えば、癌の診断確定、放射性物質や抗癌剤を癌組織
に送るための担体など）や基礎医学研究用等普遍的な用
途に使用することができる。 （４） 抗体３は第１ＣＥＡ及び第２ＣＥＡと反応する
ほか、ＮＦＡ−１及びＮＦＡ−２とも反応するので、実
用的価値のある抗体である。また抗体３産生能をもつ単
クローンを他の抗体産生能をもつ単クローンよりも簡単
な方法で選別することができる。 （５） 他の抗体すなわち抗体４、５も、従来の多クロ
ーン性及び単クローン性抗ＣＥＡ抗体とくらべて、より
明確な反応特異性と均一性とを有している。

【００４７】

【実施例３】抗ＣＥＡ抗体産生融合細胞をＢＡＬＢ／ｃ
マウスの腹腔内に移植して単クローン性抗ＣＥＡ抗体を
生産した例。市販（静岡県実験動物農業協同組合より入
手）ＢＡＬＢ／ｃマウス（５〜６週令、雌又は雄）を試
験動物として用いた。各マウスの腹腔に０．５mlのプリ
スタンを投与し、７〜１０日後に５×１０⁶ 〜１０⁷ 個
／mlの単クローン性融合細胞（実施例１の方法で得たも
の）を含むＤ−ＭＥＭ（０．５ml）を同じく腹腔内に注
射した。７〜１０日後充分に腹水が貯留したマウスから
腹腔穿刺によって腹水を採取し、以後、２日おきに５回
腹水を採取した後、マウスを殺して全採血した。得られ
る腹水量は融合細胞の性状により異なり、約２mlから２
０mlであったが、平均約１０mlが得られた。各動物の腹
水及び血清中に含まれる単クローン性抗ＣＥＡ抗体の濃
度も融合細胞の性状により異なり、約１mg／mlから約１
０mg/mlであった。得られる抗体の量も２〜３mgから１
００mg以上とかなりの差が認められた。

【００４８】

【参考例】下記の参考例において、加圧風乾法による溶
液の濃縮は次の方法によって行なわれた（以下風乾法と
いう）。風乾されるべき溶液を数本のセロファンチュー
ブに入れた。例えば溶液（３ l）を８〜９本のチューブ
（米国ビスキング社製、１８／３２、長さ１５０cm）に
分注し、チューブの上部を適当な導管を介して、例えば
加圧機に連結した。チューブを垂直に支え、下方約１／
５を脱塩水又は適当な緩衝液を満たした容器に浸漬し、
残りの部分に扇風機からの風を当てた。

【００４９】

【参考例１】本明細書記載のＣＥＡ標品は、特記しない
限り、次の方法によって作成された〔資料。特開昭５６
−４７７６２号公報〕。ヒトの大腸癌肝転移巣１２０ｇ
に生理食塩水７００mlを加えてすりつぶし、遠心処理
（９０００r.p.m.／４０分間）により上清を得た。上清
７１０mlに６０％過塩素酸溶液８０ml（過塩素酸濃度
０．６Ｍ）を加え、生じた沈殿を遠心処理（９０００r.
p.m.／４０分間）により除去し、得られた上清を一夜流
水で透析し、過塩素酸及び透析性不純物を除去した。透
析内液をセロファンチューブ（ビスキング製、１８／３
２、長さ１５０cm）３本に分注し、前記の風乾法により
合計８mlに濃縮した。濃縮液を遠心処理（１５０００r.
p.m.／３０分間）することにより、ＣＥＡ粗抽出液を得
た。

【００５０】セファロース４Ｂ（スエーデン国、ファル
マシア・ファイン・ケミカルズ製）のカラム（２．６×
１７１cm）を０．０５Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ
５．２）で洗浄し、上記のＣＥＡ粗抽出液７．５mlを負
荷し、上記と同様の緩衝液で溶出した。カラムの溶媒容
量と同じ位置に溶出する分画４Ｂ−１のほか、それぞれ
２．１、２．５及び２．７倍の位置に溶出する分画４Ｂ
−２ないし４Ｂ−４が得られた。ＣＥＡの大部分を含む
分画４Ｂ−２を回収し、前記の風乾法により濃縮液
（３．５ml）を得た。セファロース６Ｂ（スエーデン
国、ファルマシア・ファイン・ケミカルズ製）のカラム
（１．９×１４５cm）を上記と同様の緩衝液で洗浄し、
上記の濃縮液３．５mlを負荷し、同様の緩衝液で溶出
し、カラムの溶媒容量の１．６倍の位置に非対称形のピ
ークが出現した。溶出の初期に得られる分画６Ｂ−１
（約２０ml）は高分子量の不純物を含み、終りに得られ
る分画６Ｂ−３（約１／３）はＮＣＡ（非特異的交叉反
応抗原）を含んでいた。全体の約２／３に相当する中間
部（約６０ml）を回収して集め、風乾法によって分画６
Ｂ−２（３ml）を得た。セファデックスＧ−２００（ス
エーデン国、ファルマシア・ファイン・ケミカルズ製）
のカラム（１．９×１４５cm）を上記と同様のリン酸ナ
トリウム緩衝液で洗浄した後、分画６Ｂ−２（３ml）を
負荷して、同様の緩衝液で溶出したところ、カラムの溶
媒容量の約１．２倍の位置に対称形のピークが出現し
た。このピークの中間３／４に位置する分画（約４５m
l）を回収して集め、風乾法により濃縮した。この濃縮
液から精製されたＣＥＡ（５０mg）が回収された。その
高純度であることが、例えば免疫電気泳動法（ウサギ抗
体使用）によって確認された。精製されたＣＥＡは一種
の糖蛋白質であって、分子量は約２０万±８万、糖と蛋
白質との比は約１：１、紫外線吸収スペクトルにおける
極大吸収は２７７nm、小さな肩部が２８３nmに見られ
た。

【００５１】

【参考例２】本明細書記載のＣＥＡ関連正常抗原すなわ
ちＮＦＡ−１、ＮＦＡ−２及びｆ−ＮＣＡは次の方法に
よって得られた（資料。特開昭５６−４６８１９号公
報）。成人の正常糞便２５０ｇを０．６Ｍ過塩素酸溶液
２５００mlに加え、よく撹拌し、ガーゼで濾過し、食物
残渣などの不溶解物を除いた。これを遠心処理（７００
０r.p.m.／３０分間）して得た上清を流水で一夜透析し
て、過塩素酸及び透析性不純物を除いた。透析内液を９
本のセロファンチューブ（ビスキング製、１８／３２、
長さ１５０cm）に分注し、前記の風乾法で合計３０mlま
で濃縮した。同様の操作を４回くり返すことにより、合
計１２０mlの粗抽出液を得た。このものは合計約１０mg
の所望のＣＥＡ関連正常抗原を含有していた。

【００５２】特異抗ＣＥＡ抗体と結合された抗ＣＥＡ抗
体吸着剤（１０mg、後記の方法で製造された）を上記の
粗抽出液に加え、４℃で２４時間反応させた。反応液を
除去した後、冷硼酸緩衝液（ｐＨ＝８．０；０．０１Ｍ
硼酸緩衝液；０．１５ＭのNaClを含む）で洗浄し、グリ
シン塩酸緩衝液（０．１７５Ｍ；ｐＨ２．３；２００m
l）で抽出した後、グリシンNaOH緩衝液（１．０Ｍ；ｐ
Ｈ＝９）で中和することにより、粗ＣＥＡ関連抗原（乾
燥重量９mg）を含む溶液を得た。この溶液を上記の風乾
法で１．２mlまで濃縮し、セファロース６Ｂ（スエーデ
ン国、ファルマシア・ファイン・ケミカルズ製）のカラ
ム（１．３×８０cm）に負荷した。リン酸塩緩衝液
（０．０１Ｍ；ｐＨ５．０；０．１５Ｍ NaCl を含む）
で溶出し、各１mlの分画を試験管に分取した。試験管番
号６０〜７５及び８１〜９５をそれぞれ集め分画１と分
画２とした。

【００５３】分画１を約１mlに濃縮し、セファデックス
Ｇ−２００（１００ml）カラムに負荷し、前記と同様の
リン酸塩緩衝液で溶出し、各１mlの分画を試験管に分取
した。精製ＮＦＡ−２を含む試験管番号３０〜４０を集
めて濃縮した。この濃縮液自体を精製ＮＦＡ−２の標品
としてそのまま用いることができる。こうして得られた
ＮＦＡ−２は一種の糖蛋白質であって、分子量２０万±
３万、糖と蛋白質との比約１：１、紫外線吸収スペクト
ルにおいて極大吸収は２７７nmにある。本品のアミノ酸
組成はＣＥＡのものと極めて類似し、ＮＦＡ−２のNH2
末端アミノ酸の配列は少なくとも１１位まではＣＥＡの
ものと同一である。

【００５４】ジエチルアミノエチル・セルロース・クロ
マトグラフィーによって、分画２から褐色色素を除き
〔Cancer Res., 41, 713 (1981) 参照〕、残りの溶液
に、後記の抗ＮＣＡ抗体吸着剤３．５mlを加えた。混合
物を４℃で２日間反応させた。吸着剤を回収し、よく洗
浄し、次にグリシン塩酸緩衝液（０．１７５Ｍ；ｐＨ＝
２．３；２０ml）で溶出し、次にグリシンNaOH緩衝液
（１Ｍ；ｐＨ＝９）で中和し、その後Ｂ．Ｂ．Ｓ．に対
して透析し、透析内液を風乾法で濃縮した。この濃縮液
は精製ＮＣＡ（乾燥重量１mg）を含み、それ以上精製し
なくても、本発明の目的に用いられる。こうして得られ
たｆ−ＮＣＡは一種の糖蛋白質で、分子量８万±３万、
糖含量約２０％である。本品のNH2 末端アミノ酸配列の
うち、少なくとも２０位まではＣＥＡと同一である。ｆ
−ＮＣＡの理化学的性状は、例えば肺や脾に存在するＮ
ＣＡのものと実質的に同一である。

【００５５】上記の抗ＮＣＡ抗体吸着剤に吸着されなか
った物質を含む溶液を０．５mlに濃縮し、セファデック
スＧ−１００スーパーファイン（スエーデン国、ファル
マシア・ファイン・ケ1 カルズ製）のカラム（１．３×
４３．４cm）に負荷し、前記と同様のリン酸塩緩衝液
（０．０１Ｍ；ｐＨ５．０；０．１５Ｍ NaCl を含む）
で溶出し、試験管に各１mlずつ分取した。試験管番号４
５〜５５（分画ａ）及び６５〜７５（分画ｂ）をそれぞ
れ回収して集めた。セファデックスＧ−１００スーパー
ファインの同じカラム（１．３×４３．４cm）を用い
て、分画ａ及びｂをそれぞれ再度クロマトグラフ処理し
た。このようにして、分画ａから精製ＮＦＣＡ、分画ｂ
から精製ＮＦＡ−１（各乾燥重量０．５mg）が得られ
た。これらはさらに精製することなく、本発明の目的に
用いることができた。こうして得られたＮＦＡ−１は一
種の糖蛋白質で、分子量２万ないし３万、糖含量約１３
％である。ＮＦＡ−１のアミノ酸組成はＣＥＡのものに
類似であるが、しかしフェニルアラニン、リジン及びプ
ロリンのようないくつかのアミノではわずかではあるが
有意な差異が見られた。しかし、ＮＦＡ−１のＮＨ₂末
端アミノ酸配列はＣＥＡ、ＮＦＡ−２又はＮＣＡのもの
と全く異なっている。

【００５６】前述の抗ＣＥＡ抗体吸着剤及び抗ＮＣＡ抗
体吸着剤は次の方法で得られたものである。参考例１の
方法で得られたＣＥＡ標品（乾燥重量１０mg）を常法に
よりＣＮＢｒセファロース４Ｂ（乾燥ゲル１ｇ；スエー
デン国、ファルマシア・ファイン・ケミカルズ製）と結
合させてＣＥＡ吸着剤を得た。これを抗ＣＥＡ血清（５
０ml ）と４℃で３日間反応させた。この抗血清をつく
るために、任意のＣＥＡを用いることができる。抗ＣＥ
Ａ抗体を結合したＣＥＡ吸着剤を回収し、蛋白質の出現
を認めなくなるまで冷Ｂ．Ｂ．Ｓ．で洗浄し、次にグリ
シン塩酸緩衝液（各１０ml；０．１７５Ｍ；ｐＨ＝２．
３）で５回溶出した。溶出された液を集めてグリシンNa
OH緩衝液（１Ｍ；ｐＨ＝９）で中和し、次にＢ．Ｂ．
Ｓ．に対して４℃で一夜透析した。透析内液を１０mlま
で濃縮した。この液は特異的多クローン性抗ＣＥＡ抗体
５０mgを含んでいた。上記の方法を２回くり返すことに
よって得られた濃縮液２０mlは、特異的に精製された多
クローン性抗ＣＥＡ抗体１００mgを含んでいた。こうし
て得られた多クローン性抗ＣＥＡ抗体１００mgをＣＮＢ
Ｒセファロース４Ｂ（１０ｇ；スエーデン国、ファルマ
シア・ファイン・ケミカルズ製）と常法によって結合し
た。これによって、特異的に精製された抗ＣＥＡ抗体１
００mgと結合された所望の抗ＣＥＡ抗体吸着剤が得られ
た。抗ＣＥＡ抗体の代りに抗ＮＣＡ抗体を用いて、上記
の方法をくり返すことによって、セファロース４Ｂと結
合された抗ＮＣＡ抗体吸着剤が得られる。

【００５７】

【発明の効果】本発明により得られる単クローン性抗体
は癌胎児性抗原と特異的に反応する抗体であるのみでな
く、抗体１、２、３、４、５のいずれも他の抗体とは異
なった反応性を示す。例えば抗体１は個体特異的反応性
を示し、抗体２は癌胎児性抗原特異的である。抗体３、
４、５のいずれもそれぞれ、正常糞便抗原１及び非特異
的交叉反応抗原との反応性において特徴的反応性を示す
ので、それぞれの抗体に応じた特徴的な用途がある。す
なわち特に抗体２は癌特異性の高い抗体として、腫瘍マ
ーカーとしての癌胎児性抗原の定量や検出において甚だ
有用である。抗体３、４、５についても、各抗原分子の
分子構造や組織内分布の解析に甚だ有用である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｇ０１Ｎ 33/577 Ｂ (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91）

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 第１哺乳動物を最初の個体の癌胎児性抗
   原で免疫することによって、前記抗原に対する抗体産生
   能を有する細胞を産生させ、生じた細胞をこの哺乳動物
   から採取し、採取された細胞を第２哺乳動物由来のミエ
   ローマの株化細胞と融合させ、こうして得られた融合細
   胞をクローニングに付し、得られた単クローン性ハイブ
   リドーマを培養し、得られた培養液から所望の単クロー
   ン性抗体を回収し、その際（イ）前記最初の個体の癌胎
   児性抗原を第１マーカー抗原として用い、前記単クロー
   ン性ハイブリドーマを前記第１マーカー抗原と反応する
   抗体の産生能を基準として選別し、（ロ）前記回収工程
   において、免疫した最初の個体以外の個体の癌胎児性抗
   原、正常糞便抗原１、正常糞便抗原２および非特異的交
   叉反応抗原からなる群から選ばれた２種以上の抗原を選
   別用マーカー抗原として用いて、前記単クローン性ハイ
   ブリドーマを選別用マーカー抗原との反応性を基準とし
   て選別し、かつその際（ハ）正常糞便抗原２を第２マー
   カー抗原として用いて単クローン性ハイブリドーマを選
   別し、正常糞便抗原２とは反応しない抗体（抗体Ａ）産
   生能をもつ単クローン性抗体を分離し、次に１種以上の
   免疫した最初の個体以外の個体の癌胎児性抗原を第３マ
   ーカー抗原として用いて免疫した最初の個体以外の個体
   の癌胎児性抗原と反応しない抗体産生能をもつ単クロー
   ン性ハイブリドーマを分離し、選別された単クローン性
   ハイブリドーマを培養して所望の抗体を得る工程からな
   る、癌胎児性抗原に対して特異性をもつ単クローン性抗
   体の製法によって得られた、癌胎児性抗原の個体特異的
   な部分との反応性を有するが、癌胎児性抗原の個体非特
   異的な部分、正常糞便抗原１、正常糞便抗原２および非
   特異的交叉反応抗原のいずれとも反応性を有しない単ク
   ローン性抗体（抗体１）。