JPH0770189A

JPH0770189A - アンチカプロン

Info

Publication number: JPH0770189A
Application number: JP5069234A
Authority: JP
Inventors: Ikuo Nishimoto; 育夫西本
Original assignee: Yamanouchi Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Yamanouchi Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1993-03-03
Filing date: 1993-03-03
Publication date: 1995-03-14

Abstract

(57)【要約】【構成】ＧＴＰ結合蛋白のα−サブユニットの（末端
から４番目のアミノ酸から１８番目アミノ酸迄の１５個
のアミノ酸を含むオリゴポリペプチド（アンチカプロ
ン）【効果】アンチカプロンは、細胞外から細胞内へのシ
グナル伝達制御の他、その他の受容体欠損等が原因で起
こる情報伝達の異常の制御にも適応できる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、Ｇ−タンパク（ＧＴＰ
−結合タンパク）共役型受容体を介して発現するシグナ
ル伝達を修飾し、生体のホルモン等生理活性物質に対す
る感受性を変化させることにより疾患を治療する手段を
提供することに関わるものである。この目的を達成する
ために、Ｇ−タンパクの構成成分であるα−サブユニッ
トの部分配列であるオリゴプペチドを用いるが、このオ
リゴペプチドは、現在知られているだけで十数種類存在
するα−サブユニットにそれぞれ特異的に対応する分子
として同定されるものである。

【０００２】Ｇ−タンパクに共役する受容体を介して作
用する生理活性物質としては、アセチルコリンやノルア
ドレナリンなどの神経伝達物質（神経伝達物質）、イン
シュリン様増殖因子（ＩＧＦ−II）などの増殖因子、バ
ゾプレッシン・ソマトスタチンをはじめとするペプチド
ホルモン、プロスタグランジンをはじめとするオータコ
イドなどが挙げられる。Ｇ−タンパクは、α、β、γの
３量体から成り、生理活性物質の種類によりいくつかの
サブタイプに分類される。三つのサブユニットのうちで
もっとも種類の多く、かつシグナル（情報）の伝達に重
要な役割を果たしているのがα−サブユニットであり、
α_s，α_i1，α_i2，α_i3，α_o1，α_o2，α_q，α_t，α
_x，α₁₁，α₁₂，α₁₃，α₁₄，α₁₅，α₁₆，α_Zなどが
知られている。

【０００３】生理活性物質（以下リガンドと呼ぶ）が受
容体に結合すると、その情報はＧ−タンパクのα−サブ
ユニット分子に結合しているＧＤＰと細胞内のＧＴＰと
の交換を介してＧ−タンパクに伝達され、Ｇ−タンパク
はＧＴＰ結合型のα−サブユニットとβγサブユニット
とに解離する（Ｇ−タンパクの活性化）。ＧＴＰ結合型
α−サブユニットは、アデニル酸シクラーゼやフォスフ
ォジエステラーゼ、カリウムチャネルといった効果器
（以下エフェクターという）に情報を伝えその活性を刺
激あるいは抑制する。エフェクターに伝えられた情報
は、エフェクターの作用の結果生じたセカンドメッセン
ジャーを介して各種リン酸化酵素やイオンの動きを通じ
て最終的な効果発現に至るが、その詳細の解明は今後の
問題として残されている。

【０００４】

【課題を解決するための手段】受容体に結合したリガン
ドの情報がＧ−タンパクに伝えられる機構の詳細につい
ては不明であるが、リガンドの結合による受容体の立体
構造の変化がＧ−タンパクのα−およびβγ−サブユニ
ットへの解離およびＧＤＰ／ＧＴＰ交換反応を促進する
ものと考えられている。我々は、Ｇ−タンパク共役型受
容体に関する一連の研究から、受容体の一部にＧ−タン
パクを認識しリガンドの情報を伝達する機能を有するこ
とを明らかにしてきた。すなわち、７回膜貫通型受容体
の第三細胞内ドメインと呼ばれる部位また１回膜貫通型
受容体の細胞内ドメインには、対応するＧ−タンパクの
αサブユニットを認識する１４−２０アミノ酸残基から
なる配列（カプロン）が存在する。カプロンは、実施例
にもあるようにリガンドの作用をリガンドと同様に発現
することが可能である。ただし、カプロンそのものは、
生理的条件下では細胞外から細胞内には取り込まれない
ため、細胞内に注入した場合や再構成系等人工的な実験
条件下でのみその作用を発揮できるに過ぎない。

【０００５】さて、リガンドと受容体との結合は、両者
が相互に認識部位を持つことにより可能になっている。
同様なことは受容体とＧ−タンパクとの間にも成り立つ
ことが予想される。実際我々は、Ｇ−タンパクのα−サ
ブユニット側には、カプロンのＧ−タンパクへの作用を
相殺する部位が存在することを明らかにして、これをア
ンチカプロンと呼ぶことにした。アンチカプロンは、通
常α−サブユニットＣ末端から４番目のアミノ酸からは
じまって１５アミノ酸残基あるいは２２，２４アミノ酸
残基で規定される。アンチカプロンは各α−サブユニッ
トに特異的であり、従って特定のリガンドによって刺激
された受容体の作用を抑制する。特定のリガンド−受容
体−エフェクター系に寄与するα−サブユニットに含ま
れるアンチカプロンを当該リガンド−受容体−エフェク
ター系に添加すると受容体をめぐってα−サブユニット
と拮抗するため、あるいは、α−サブユニットを直接抑
制するため当該リガンドの作用を抑制することになる。

【０００６】また、ある種のリガンドについては、リガ
ンド−受容体系と二種あるいはそれ以上のＧ−タンパク
−エフェクター系が共役する場合があるが、この場合に
は、異なるアンチカプロンが独立に異なる共役系を修飾
し得ることになる。このように、アンチカプロンによっ
てリガンドの作用を制御することにより、リガンドと受
容体との結合のプロセスに作用することによってリガン
ドの作用を修飾する、という従来の医薬に比べてさらに
特異性の高い治療効果が期待される。また、以外なこと
に本発明のアンチカプロンは、細胞外から細胞内にとり
こまれる。アンチカプロンは、ここに我々が初めて提唱
する概念であり、細胞内のシグナル伝達系の制御機構の
解明に極めて強力な武器となるばかりでなく、実施例に
示すごとく医薬品としても極めてユニークな効果が予想
されるものである。

【０００７】１）細胞の増殖阻害最近Ｇ_i2タンパクは、ガン遺伝子産物の一員であること
が判明した（Ｓｃｉｅｎｃｅ２４９：６５５−６５９，
１９９０）。このことは、Ｇ_i2が増殖のシグナルを担う
構成員のひとつであることを意味する。アンチカプロン
Ｇ_i2（ＡＣＧ_i2）は、この増殖のシグナルを、Ｇ_i2へ流
入する受容体刺激を遮断することで制御する可能性を持
つ。そこで我々は、Ｇ_i2の関与が証明されている細胞増
殖系を用いてこの点につき検討した。尚、アンチカプロ
ンＧ_i2（ＡＣＧ_i2）は、ＡＣＧ_i1と同一配列である。Ｃ
ＨＯ細胞を無血清で４ｈｒ処理した後細胞増殖因子であ
る１０％ウシ胎児血清で刺激し、以後２４ｈｒのＤＮＡ
合成を測定した。アンチカプロンの添加により、用量依
存的な阻害効果が認められた（図１）。

【０００８】細胞増殖因子であるインシュリン様増殖因
子II（ＩＧＦ−II）の作用は、Ｇ−タンパクと共役して
いるとは考えられていなかったが、最近の我々の研究に
より、ＩＧＦ−IIＲ（ＩＧＦ−II受容体）のはＧ_i2と共
役していることが示された。そしてＩＧＦ−IIの作用
は、ＩＧＦ−IIＲの細胞内ドメインＡｒｇ２４１０−Ｌ
ｙｓ２４２３（Arg Val Gly Leu Val Arg Gly Glu Lys
Ala Arg Lys Gly Lys)（ペプチド１４と呼ぶ）を介し
て、Ｇ_i2に伝えられることも明らかにされた。ペプチド
１４は、精製したＧ_i2を活性化しＧＴＰγＳの結合を促
進する。これに対してアンチカプロンＧ_i2（ＡＣＧ_i2）
を共存させると、加えたＡＣＧ_i2の用量に依存してペプ
チド１４の効果が抑制された（図４及び図５）。これに
対して、Ｇ_i2αのＣ端領域 Lys Asn Asn Leu Lys Asp C
ys Gly Leu Phe (ｒｅｓｉｄｕｅ３４６−３５５）や G
lu Ala Ala Ser Tyr Ile Gln Ser Lys Phe Glu Lys Leu
Asn(Ｇ_i2αのｒｅｓｉｄｕｅ２９７−３１０）は無効
であった。また、アンチカプロンＧ_s（ＡＣＧ_s) は、
ペプチド１４によるＧ_i2活性化を抑制しない（図８）。

【０００９】以上の結果から、ＡＣＧ_i2は、細胞の増殖
抑制のための薬剤として有用なばかりでなく、抗ガン剤
となる可能性がある。また、ＣＨＯ細胞に対する効果か
ら、ＡＣＧ_i2は細胞内に取り込まれ得ることが明らかで
あり、この点からもアンチカプロンの治療薬としての有
用性が示唆される。

【００１０】２）腎硬化症、肝硬変症、肺繊維症の制御腎臓、肝臓、肺などの主要機器の繊維化は、細胞間マト
リックスの増加、とりわけフィブロネクチン（ｆｉｂｒ
ｏｎｅｃｔｉｎ）の増加が原因とされる。とくに、腎臓
の場合、繊維化のメカニズムの解明は進んでおり、フィ
ブロネクチンの産生はβ型トランスフォーミング増殖因
子（ＴＧＦβ）により惹起されることが判明している。
一方、ＴＧＦβはＧ−タンパクを活性化することが報告
されているが、そのサブタイプについては不明である。

【００１１】腎臓繊維芽細胞由来のＮＲＫ細胞をＴＧＦ
β₁で２４時間刺激すると培養液中にｆｉｂｒｏｎｅｃ
ｔｉｎが分泌される。このＴＧＦβ₁の効果はアンチカ
プロンＧ_O2（ＡＣＧ₀₂）により完全に消失したが、同量
のアンチカプロンＧ_i2（ＡＣＧ_i2）、ＡＣＧ_s、アンチ
カプロンＧ_q（ＡＣＧ_q）では影響されなかった（図
２）。このことから、１）ＡＣＧ_o2は、ＴＧＦβの特異的な阻害剤になり得る
こと２）ＡＣＧ_O2は、腎硬化症の治療薬になり得ること３）ＴＧＦβ受容体は、Ｇ_o2をそのシグナル伝達経路の
下流に持ち得ること、すなわち、Ｇ_o2と共役し得るこ
と、が示されるといえる。また、各臓器の繊維化が、腎臓で
みられる繊維化と同じメカニズムで惹起されるとすれ
ば、ＡＣＧ_o2は、肝硬変症および肺繊維症の治療薬にも
なり得ることが示されたと考える。

【００１２】３）ムスカリン受容体を介する刺激伝達系
の制御ムスカリン受容体は、Ｇ−タンパクとの共役機構が明ら
かにされている、代表的Ｇ_i共役受容体であり、神経伝
達物質として作用し、心拍調律も制御するなど、生体に
おいてきわめて重要な役割を果たす。生命維持にとって
必須とされるこれらの機能は、Ｇ_iを介し遂行されてい
る。そこで、ＡＣＧ_i1は、この作用を抑制することが期
待される。

【００１３】ブタ脳より精製したムスカリン受容体６．
９ｎＭをウシ脳から精製したＧ_i2２９．２ｎＭとｐｈｏ
ｓｐｈｏｌｉｐｉｄｖｅｓｉｃｌｅに再構成すると、
ムスカリン受容体のアゴニスト（前述のリガンド）アセ
チルコリンによる刺激により、非刺激時の２倍程度にま
で活性化される。このｖｅｓｉｃｌｅにあらかじめＡＣ
_i2を封入しておくと、アゴニスト刺激による活性化が７
０％抑制された（図３）。この事実から、ＡＣＧ_i2は、
ムスカリン受容体の上記の機能を抑制する作用を期待す
ることが出来る。すなわち、ＡＣＧ_i2は、不整脈の治療
薬および脳機能の改善薬としての効果が期待される。

【００１４】４）β−アドレナリン受容体を介する刺激
伝達系の制御 β−アドレナリン受容体を介する刺激伝達系は、心臓血
管系や脂質代謝において多彩な機能を担っている。この
刺激伝達系は、我々によって特定された、βアドレナリ
ン受容体の活性ドメイン（Arg Arg Ser Ser Lys Phe Cy
s Leu Lys GluHis Lys Ala Leu Lys)がＧ_sを活性化す
ることにより伝達される。従って、この効果は、ＡＣＧ
_sにより抑制されることが期待される。そこで、再構成
系を用いてこれを検討してみると、活性ドメインによる
活性化は、予想通りＡＣＧ_sによって抑制された。同様
にＡＣＧ_i2もこの効果を抑制した。この場合、用いたβ
−アドレナリン受容体刺激伝達系は、Ｇ_s、Ｇ_i2いずれ
にも共役し得るため、ｉｎｖｉｔｒｏではこのような事
態が起こり得るが、ｉｎｖｉｖｏ実験系では各アゴニ
スト（リガンド）に特異的なＡＣによってのみ活性化の
抑制が起こる。以上の結果から、ＡＣＧ_sやＡＣＧ_i2は
不整脈や心筋症の治療薬として有用となる可能性があ
る。

【００１５】５）心筋症の制御心筋症を発症することが知られているハムスターＢ１０
５３．５８（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ８１：１３４１
−１３５２，１９９０）では、健常なハムスターに比し
て、心筋のＧ_i2発現量が著しく増加していることが判明
した。そこで、同ハムスターの心筋症の原因のひとつと
して、Ｇ_i2を含むシグナル伝達系のなんらかの異常が考
えられるようになった。この仮説が正しいとするなら、
同ハムスターの心筋においてＧ_i2へ流入する受容体刺激
を遮断することで、心筋症の発症を抑制し得ることが考
えられる。実際心筋症ハムスターにＡＣＧ_i2を週１回６
回にわたって腹腔内投与し、病理所見を調べたところ、
含有コラーゲン部位（繊維化）等病変の発現が著明に減
少していた（図９）。一方、ＡＣＧ_q投与群は無投与群
と変わらなかった。以上のことから、ＡＣＧ_i2は心筋症
の治療薬となり得ることが示唆される。

【００１６】６）ソマトスタチン受容体機能の解明とそ
の制御ソマトスタチン受容体は、成長ホルモン分泌型ヒト下垂
体腫瘍細胞において、百日咳毒素感受性カリウムチャネ
ルを活性化することが知られている。この腫瘍細胞にお
いて細胞単位の電流変化をホールセルパッチクランプ法
（ｗｈｏｌｅｃｅｌｌｐａｔｃｈｃｌａｍｐ）を用
いて計測すると、ソマトスタチンは、用量依存的に、外
向きのカリウム電流を増大する。ＡＣＧ_i2をマイクロピ
ペット内に共存させると、この外向きカリウム電流は全
く観測されなくなる（図１０）。他のアンチカプロンで
あるＡＣＧ_i3，ＡＣＧ_s，ＡＣＧ_o1にはこのような抑制
作用は認められなかった。

【００１７】この結果から、ソマトスタチン受容体はＧ
_i2を介してカリウムチャネルを活性化していることがは
じめて明らかになった。このように、アンチカプロンを
用いる方法は、細胞膜受容体が介在する刺激伝達系でい
ずれのサブタイプのＧ−タンパクが関与しているかを特
定する方法としてのアンチセンス法や抗体法に比べて、
きわめて迅速、強力かつ優れた方法と思われる。

【００１８】ソマトスタチンは、多彩な生物作用を有す
る、生体にとってきわめて重要なホルモンである。上記
のごとく、我々によって、ソマトスタチンは、Ｇ_i2を介
してカリウムチャネルを活性化することが判明した。ま
た、ソマトスタチンは、カルシウムチャネルを抑制する
ことも知られているが、この作用はＧ_o2を介しているこ
とが最近明らかにされた。従って、ソマトスタチンが生
体内で実際に惹起する作用、すなち、インシュリン、グ
ルカゴン、セクレチンなどのホルモン分泌抑制作用、胃
や膵などの外分泌線の分泌抑制作用、中枢神経系での神
経伝達物質としての作用が、二種のアンチカプロンによ
り特異的に抑制できる可能性がある。

【００１９】７）Ｔ細胞受容体のシグナル伝達系の制御Ｔ細胞の免疫応答にとってもっとも重要なシグナル伝達
経路とされているのは、Ｔ細胞受容体による、イノシト
ールリン脂質回転増大作用である。近年、イノシトール
リン脂質の代謝回転を惹起する酵素フォスリパーゼを活
性化するＧ−タンパクの遺伝子構造が明らかにされ、Ｇ
_qと命名された。実際、Ｔ細胞由来のジャーカット細胞
（ＪａｒｋａｔＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ）から調製
した細胞膜を、Ｔ細胞受容体のサブユニットのひとつで
あるＣＤ３に対する抗体ＯＫＴ３で刺激するとイノシト
ールリン脂質の代謝回転が亢進し、イノシトール１，
４，５−三リン酸（ＩＰ₃）の産生増大が観察される。
ここにアンチカプロンＧ_q（ＡＣＧ_q）を共存させたと
きＩＰ₃の産生はほぼ完全に抑制された（図１１）。こ
の結果から、１）Ｔ細胞を受容体は、Ｇ_qを介してイノシトールリン
脂質の代謝回転を亢進していること２）Ｔ細胞受容体の機能をＡＣＧ_qは抑制し得ること３）ＡＣＧ_qは免疫抑制剤となり得ることが示された。

【００２０】８）アルツハイマー病の治療薬の可能性アルツハイマー病の原因物質とされているβ−アミロイ
ドタンパク（β／Ａ４ｐｒｏｔｅｉｎ）として注目を集
めているものにＡＰＰ（ＡｌｔｚｈｅｉｍｅｒＡｍｙ
ｌｏｉｄＰｒｏｔｅｉｎＰｒｅｃｕｒｓｏｒ）があ
る。ＡＰＰ遺伝子の解析の結果、このものは細胞表面存
在するに受容体に似た構造を持ち、また、細胞内ドメイ
ンも種々の動物間で保存されているところから、我々
は、ＡＰＰが細胞内へのシグナル伝達に係わる受容体と
して働いているのではないか、という仮説を提唱した。
実際、我々は、ＡＰＰを構成するアミノ酸配列の細胞内
ドメインに、２０アミノ酸からなる配列、Ｈｉｓ６５７
−Ｌｙｓ６７６（His HisGly Val Val Glu Val Asp Ala
Ala Val Thr Pro Glu Glu Arg His Leu Ser Lys)が、
Ｇ_oを特異的に活性化することを見いだした。

【００２１】この事実は、従来支配的であったアルツハ
イマー病病因論、すなわち、β−アミロイドの蓄積が神
経の変性や死をきたす、という考え方以外に、新しい可
能性を開くものとして注目される。ＡＰＰからβ−アミ
ロイドが切り出された後に残る、ＡＰＰのＣ−末端が疾
患の原因を担う可能性が考えられるからである。すなわ
ち、β−アミロイドが切り出されたために、リガンド
（これについては現在のところ不明）が結合できなくな
ったＡＰＰのＣ末端によるシグナルが、Ｇ_oを介して構
成的に流れを続けるために、ニューロンの変性や死が起
こり、これが原因でアルツハイマー病が発症・進行す
る、と考えるのである。このような仮説は、ＡＰＰのＣ
末端の１０５残基（上記のＨｉｓ６５７−Ｌｙｓ６７６
はこの中に含まれる）を細胞に発現させると、その細胞
は死に至る、という最近の知見（Ｓｃｉｅｎｃｅ２４
５：４１７−４２９，１９８９）によっても支持され
る。尚、実際に生体内で、ＡＰＰのＣ末端が細胞内に残
存していることは抗体を用いたいくつかの研究により確
認されている。

【００２２】受容体のリガンド結合部位が欠損している
ためにシグナル伝達系に異常を来たし、そのために生体
に異常が起こる例としては、トリにおけるガン遺伝子ｖ
−ｅｒｂＢによる発ガンが知られている。この場合の発
ガンの原因は、ｖ−ｅｒｂＢ遺伝子産物が、ＥＧＦ受容
体のうち、ＥＧＦ結合部位を欠いているために、リガン
ド非依存性に増殖刺激を促すシグナル伝達が進行するた
めと考えられている。上記のＨｉｓ６５７−Ｌｙｓ６７
６によるＧ_oの活性化は、ＡＣＧ_oによって抑制される
可能性があるところから、ＡＣＧ_oのアルツハイマー病
治療への応用が考えられる。

【００２３】

【発明の効果】以上述べたように、アンチカプロンは、
細胞内に取り込まれ、受容体を介する刺激伝達を選択的
に抑制する。アンチカプロンによる抑制が、細胞表面の
受容体−Ｇ−タンパク結合の場における抑制という、従
来の方法に比べて優れているのは、選択性がより高いと
いう点にある。上述のソマトスタチンによる刺激伝達系
を考えれば自明であろう。従来のソマトスタチンアンタ
ゴニストでは、カリウムチャネルおよびカルシウムチャ
ネルに対する効果を別々に制御することは出来ないが、
アンチカプロンを使えば、独立に制御することが可能に
なるからである。

【００２４】ひとつの受容体を介する情報伝達系が単一
細胞で二種類存在する例としては、ドーパミンＤ₂受容
体に共役するカリウムチャネルとカルシウムチャネル
が、それぞれ異なるＧ−タンパクを介して制御されてい
る、という最近の知見がある（Ｃｅｌｌ８：４５５−
４６３，１９９２）。ひとつの細胞外からのシグナル
が、細胞内でいくつかに分岐する可能性を示唆する生体
反応や実験事実は、これ以外にも多く知られており、近
い将来さらに多くの例が明らかにされるであろう。それ
らを明らかにするための手段として、またその後各系を
制御する試薬として、アンチカプロンの有用性は測り知
れないものがある。

【００２５】アンチカプロンは、細胞外から細胞内への
シグナル伝達制御にとどまらず、既に述べたアルツハイ
マーやガンなどの疾患のように、突然変異その他の理由
による受容体欠損等が原因で起こる情報伝達の異常の制
御にも適用し得る。

【００２６】このように、アンチカプロンの概念および
これを用いる薬物治療の概念は、従来のそれとは比較に
ならない、全く新しいものであり、これにより、生物学
ならびに医学の学問におよび治療の発展が期待される。

【００２７】

【実施例】以下に実施例を掲記し、本発明を更に詳細に
説明する。

【００２８】実施例１ＡＣＧ_q−２の合成 Asp Thr Glu Asn Ile Arg Phe Val Phe Ala Ala Val Lys Asp Thr Ile Leu Gln Leu Asn Leu Lys Glu Tyr ペプチド合成機（ＡＢＩ社製、４３０−Ａ）を用い、Ｂ
ＯＣＳｔｒａｔｅｇｙにより目的のペプチドを合成し
た後、フッ化水素処理（フッ化水素とアニソールを９：
１に混合した溶液中−２℃で１時間）により保護基を除
去した。フッ化水素を蒸発させて除いた後、ペプチドを
水で抽出し、凍結乾燥後逆相ＨＰＬＣにより精製した。精製に用いたＨＰＬＣの条件：カラム：ＹＭＣ−ＰａｃｋＡ−３０２，４．６ｍｍ
Ｉ．Ｄ．×１５０ｍｍ溶出液：０．１％ＴＦＡグラジエント：ＣＨ₃ＣＮ２０％−３０％（２５ｍｉ
ｎ）流速：１ｍｌ／ｍｉｎ検出：２２０ｎｍの吸光度精製したペプチドのアミノ酸分析値：Asp(4)3.95, Thr
(2)1.87, Glu(3)3.06, Ala(2)2.12, Val(2)1.99,Ile(2)
1.92,Leu(3)3.04, Tyr(1)0.96, Phe(2)1.97, Lys(2)2.0
0, Arg(1)0.95, NH₃(3)3.31 純度：９７．３％（ＨＰＬＣ）外観：白色粉末合成時に用いた原料アミノ酸の量：固相のアミノコンポ
ーネント０．５ｍｍｏｌｅに対し、２ｍｍｏｌｅのカル
ボニルコンポーネントを加え、室温で１時間反応させ、
これを順次繰り返すことにより目的のアミノ酸を合成し
た。最終収量は、７０〜８０％であった。精製品のＨＰ
ＬＣプロフィールについては、図１４を参照。

【００２９】実施例２実施例１と同様にして、以下のペプチドを合成し、保護
基を除去し、精製した。

【００３０】アンチカプロンＧ_i2−１（ＡＣＧ_i2−１）：Asp Ala Val Thr Asp Val Ile Ile Lys Asn Asn Leu Lys Asp Cys （配列番号１）アンチカプロンＧ_i3−１（ＡＣＧ_i3−１）：Asp Ala Val Thr Asp Val Ile Ile Lys Asn Asn Leu Lys Glu Cys （配列番号２）アンチカプロンＧ_o1−１（ＡＣＧ_o1−１）：Asn Asn Ile Gln Val Val Phe Asp Ala Val Thr Asp Ile Ile Ile Ala Asn Asn Leu Arg Gly Cys （配列番号３）アンチカプロンＧ_o2−１（ＡＣＧ_o2−１）：Asn Asn Ile Gln Phe Val Phe Asp Ala Val Thr Asp Ile Ile Ile Ala Lys Asn Leu Arg Gly Cys （配列番号４）アンチカプロンＧ_s−１（ＡＣＧ_s−１）：Asn Asp Cys Arg Asp Ile Ile Gln Arg Mat His Leu Arg Gln Tyr （配列番号５）アンチカプロンＧ_q−１（ＡＣＧ_q−１）：Ala Ala Val Lys Asp Thr Ile Leu Gln Leu Asn Leu Lys Glu Tyr （配列番号６）アンチカプロンＧ_i2−２（ＡＣＧ_i2−２）：Asp Thr Lys Asn Val Gln Phe Val Phe Asp Ala Val Thr Asp Val Ile Ile Lys Asn Asn Leu Lys Asp Cys （配列番号７）アンチカプロンＧ_i3−２（ＡＣＧ_i3−２）：Asp Thr Lys Asn Val Gln Phe Val Phe Asp Ala Val Thr Asp Val Ile Ile Lys Asn Asn Leu Lys Glu Gys （配列番号８）アンチカプロンＧ_o1−２（ＡＣＧ_o1−２）：Asp Ala Val Thr Asp Ile Ile Ile Ala Asn Asn Leu Arg Gly Cys （配列番号９）アンチカプロンＧ_o2−２（ＡＣＧ_o2−２）：Asp Ala Val Thr Asp Ile Ile Ile Ala Lys Asn Leu Arg Gly Cys （配列番号１０）アンチカプロンＧ_s−２（ＡＣＧ_s−２）：Asp Thr Glu Asn Ile Arg Arg Val Phe Asn Asp Cys Arg Asp Ile Ile Gln Arg Met His Leu Arg Gln Tyr （配列番号１１）

【００３１】実施例３：ＤＮＡ合成阻害ＣＨＯ細胞を無血清のＨａｍＦ１２中で、３７℃ ４
ｈｒ９５％Ｏ₂−９５％Ａｉｒ雰囲気下で培養した
後、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含むＨａｍＦ１２
中、９５％Ｏ₂−９５％Ａｉｒ雰囲気下、３７℃で２
４ｈｒ培養し、この間のＤＮＡ合成を測定した。ＡＣＧ
_i1−１１０，１００μＭの添加により、用量依存的な
阻害効果が認められた（図１）。アンチカプロンは、Ｆ
ＢＳと同時に添加した。

【００３２】実施例４：ＴＧＦβによるフィブロネクチ
ン分泌に対する抑制効果−腎硬化症治療薬としての可能
性腎臓繊維芽細胞由来のＮＲＫ細胞を六穴の組織培養用プ
レートにまき、５％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地
中、５％ＣＯ₂雰囲気下３７℃でコンフルエント（ｃｏ
ｎｆｌｕｅｎｔ）になるまで培養する。コンフルエント
に達した細胞を、０．５％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６
４０培地で１２時間培養した後、ＴＧＦβ₁（Ｒ＆
ＤＳｙｓｔｅｍ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）
５０ｐＭで１２ｈｒ刺激し、培養液中に分泌されるフィ
ブロネクチンを抗フィブロネクチン抗体によるウエスタ
ンブロッティングにより測定した。

【００３３】すなわち、集めた培養液を、これを二倍濃
度のＬａｍｍｅｌｉｂｕｆｆｅｒを等量加えて希釈し
て煮沸した後、７．５％ＳＤＳを含むポリアクリルアミ
ドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）を行った。泳動されたタン
パクを、定圧７５Ｖ，０−４℃，６ｈｒの条件で、Ｉｍ
ｍｏｂｉｌｏｎ−Ｐ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｕ．Ｓ．
Ａ．）上に移し取った後、２．５％スキムミルクを添加
したリン酸緩衝液を含む生理食塩水（ＰＢＳ）中、室
温、４ｈｒの条件でブロッキングを行った。

【００３４】さらに、抗フィブロネクチンウサギ抗血清
（ＣｈｅｍｉｃｏｎＩｎｔｅｅｍａｔｉｏｎａｌ，Ｃ
Ａ，Ｕ．Ｓ．Ａ．）と４℃で一夜インキュベートした
後、ｈｏｒｓｅｒａｄｄｉｓｈｐｅｒｏｘｉｄａｓ
ｅとコンジュゲートしたヤギ抗ウサギＩｇＧ（Ｃａｐｐ
ｅｌ，Ｕ．Ｓ．Ａ．）を二次抗体として、室温で４ｈｒ
インキュベートし、ＥｎｈａｎｃｅｄＣｈｅｍｉｌｕ
ｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ（ＥＣＬ）（Ａｍｅｒｓｈａｍ，
Ｕ．Ｓ．Ａ．）で抗原性を検出した。ＴＧＦβ₁はＮＲ
Ｋ細胞によるフィブロネクチンの分泌を著明に増加させ
たが、このＴＧＦβ₁の効果は、１００μＭＡＣＧ_o2
−１（Asn Asn Ile Gln Phe Val Phe AspAla Val Thr A
sp Ile His Ala Lys Asn Leu Arg Gly Gys)を同時に添
加することにより、完全に消失した。一方、同量のＡＣ
Ｇ_i1−１，ＡＣＧ_s−１，ＡＣＧ_q−１では影響されな
かった（図２）。図中、左から、対照、ＴＧＦ
β₁、ＴＧＦβ₁＋ＡＣＧ_i1−１、ＴＧＦβ₁＋Ａ
ＣＧ_o2−１、ＴＧＦβ₁＋ＡＣＧ_s−１、ＴＧＦβ
₁＋ＡＣＧ_q−１、フィブロネクチン。

【００３５】実施例５：ムスカリン受容体を介する刺激
伝達系の制御ブタ脳より精製した（ＨａｇａＫｅｔａｌ．，
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６１，１０１３３−１０１
４０，１９８６）ムスカリン受容体６．９ｎＭをウシ脳
から精製した（ＫａｔａｄａＴｅｔａｌ．，ＦＥ
ＢＳＬｅｔｔ．２１３，３５３−３５８，１９８７）
Ｇ_i2 ２９．２ｎＭとｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｖｅ
ｓｉｃｌｅに再構成する（ＯｋａｍｏｔｏＴａｎｄ
ＮｉｓｈｉｍｏｔｏＩ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．，２６７，８３４２−８３４６，１９９２）と、ム
スカリン受容体のアゴニスト（前述のリガンド）アセチ
ルコリン１０ｍＭによる刺激により、非刺激時の２倍程
度にまで活性化される（ＧＴＰγＳの結合能で測定）。

【００３６】このｖｅｓｉｃｌｅにあらかじめ３０μＭ
のＡＣＧ_i2−１を封入しておくとアゴニスト刺激による
活性化が７０％抑制された。（図３、図の縦軸はＧＴＰ
γＳ結合の速度定数を表わす）。ＧＴＰγＳのＧ−タン
パクへの結合は、２０μＭＭｇ²⁺および６０ｎＭ
［³⁵Ｓ］ＧＴＰγＳ（ＤｕＰｏｎｔ−ＮｅｗＥｎｇｌ
ａｎｄＮｅｕｃｌｅａｒ）存在下３７℃測定した（Ｏ
ｋａｍｏｔｏＴａｎｄＮｉｓｈｉｍｏｔｏＩ，
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６７，８３４２−８３４
６，１９９２）。Ｇ−タンパクの総量は、室温における
ＧＴＰγＳ結合の最大値より求めた。Ｇ−タンパクに対
するＧＴＰγＳの結合は、以下の一次式で表される。す
なわち、

【００３７】

【式１】１Ｎ（（Ｂ_T−Ｂ）／Ｂ_T）＝−ｋ_appｔ

【００３８】ここにＢは、時間ｔにおける結合量を、ま
たＢ_Tは総結合量を表す。ただし、ｋ_appは、ＧＴＰγ
Ｓ結合のみかけの定数である。ＧＴＰγＳ結合のみかけ
の定数ｋ_appは、ｔ＝０における結合曲線の接線の傾と
して求めることが出きる。

【００３９】実施例６：受容体側の活性ドメインペプチ
ドに対する効果（１）インシュリン様増殖因子II（ＩＧＦ−II）の作用
は、Ｇ−タンパクと共役しているとは考えられていなか
ったが、最近の我々の研究により、ＩＧＦ−IIＲ（ＩＧ
Ｆ−II受容体）はＧ_i2と共役していることが示された。
そして、ＩＧＦ−IIの作用は、ＩＧＦ−IIＲの細胞内ド
メインＡｒｇ２４１０−Ｌｙｓ２４２３（Arg Val Gly
Leu Val Arg Gly Glu Lys Ala Arg Lys Gly Lys)（ｐｅ
ｐｔｉｄｅ１４と呼ぶ）を介してＧ_i2に伝えられること
も明らかにされた。ｐｅｐｔｉｄｅ１４は、精製したＧ
_i2を活性化しＧＴＰγＳの結合を促進する（図５）。

【００４０】これに対してＡＣＧ_i2−１を共存させる
と、加えたＡＣＧ_i2−１の用量に依存してｐｅｐｔｉｄ
ｅ１４の効果が抑制された（図４および５）。これに対
して、Ｇ_i2αのＣ端領域（ｒｅｓｉｄｕｅ３４６−３５
５、図のｅｘｔｒｅｍｅＣ−ｔｅｒｍｉｎａｌｐｅ
ｐｔｉｄｅ）や Glu Ala Ala Ser Tyr Ile Gln Ser Lys
Phe Glu Lys Leu Asn （Ｇ_i2αのｒｅｓｉｄｕｅ２９７
−３１０）は無効であった（図４）。ＡＣＧ_s−１はｐ
ｅｐｔｉｄｅ１４の作用に対して無効であった（図８、
図中ｐｅｐｔｉｄｅと）記述されているのはＡＣＧ_sを
表わす（実験方法は、上記例３と同様だが、詳細につい
てはＯｋａｍｏｔｏＴｅｔａｌ．，Ｃｅｌｌ，６
２，７０９−７１７，１９９０参照）。

【００４１】（２）Ｍ４サブタイプムスカリン受容体の
活性化ドメイン（Arg Asn Gln ValArg Lys Lys Arg Gln
Met Ala Ala Arg Glu Arg Lys Val Thr Arg ；第三細
胞内ループのＣ端領域）はＧ_i2を活性化しＧＴＰγＳ結
合を増加する（ＯｋａｍｏｔｏＴａｎｄＮｉｓｈ
ｉｍｏｔｏＩ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７，８
３４２−８３４６，１９９２）が、この系にＡＣＧ_i2−
１を共存させると、活性化ドメインの効果を抑制した
（図６）。活性ペプチド添加量は１μＭ。（３）βアドレナリン受容体の活性ドメイン（Arg Arg
Ser Ser Lys Phe CysLeu Lys Glu His Lys Ala Leu Ly
s)はＧ_sを活性化してＧＴＰγＳ結合を増加する（Ｏｋ
ａｍｏｔｏＴｅｔａｌ．，Ｃｅｌｌ，６７，７２
３−７３０，１９９１）が、ＡＣＧ_i2−１はこの効果を
抑制した。活性ドメイン添加量は１μＭ（図７）。この
時、ＡＣＧ_s−１も同様な抑制効果を示した（図１
２）。この場合、用いたβ−アドレナリン受容体は、Ｇ
_s，Ｇ_i2いずれにも共役し得るためこのような事態が起
こり得る（ｉｎｖｉｔｒｏでは）。

【００４２】実施例７：心筋症ハムスターに対する効果心筋症を発症することが知られているハムスターＢ１０
５３．５８（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ８１：１３４１
−１３５２，１９９０）では、健常なハムスターに比し
て、心筋のＧ_i2発現量が著しく増加している。そこで、
心筋症ハムスターにＡＣＧ_i2−１１μｌ（１０ｍＭ）
を週１回６回にわたって腹腔内投与し、病理所見を調べ
たところ、含有コラーゲン部位（繊維化）等病変の発現
が著明に減少していた（図９）。一方、ＡＣＧ_q−１投
与群は無投与群と変わらなかった。

【００４３】実施例８：ヒト下垂体腺腫におけるソマト
スタチンのＫ⁺チャネル活性化に対する効果ソマトスタチン受容体が刺激されると、成長ホルモン分
泌型ヒト下垂体腫瘍細胞において、百日咳毒素感受性カ
リウムチャネルを活性化することが知られている。この
ソマトスチタンの効果がどのタイプのＧ−タンパクを介
する作用に基づくものかを調べるために以下の実験を行
った。成長ホルモン分泌型の下垂体アデノーマを手術に
より摘出し、１ｍｍ以下の細片にきざんだ後、Ｄｉｓｐ
ａｓｅ（１０００ｕｎｉｔｓ／ｍｌ）処理により、細胞
を得た。このようにして得た腫瘍細胞を、１×１０⁵／
ｍｌとなるように３５−ｍｍプレートにまき、１０％の
ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）を含むＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ
ｍｏｄｉｆｉｅｄＥａｇｌｅ’ｓｍｅｄｉｕｍ（Ｄ
ＭＥＭ）中、５％ＣＯ₂９５％ａｉｒ雰囲気下、３
７℃で培養した。

【００４４】この培養細胞の電気生理学的性質は、細胞
の調整後４週間以内に、ホールセルパッチクランプ法
（ｗｈｏｌｅｃｅｌｌｐａｔｃｈｃｌａｍｐ）を
用いて検討した。パッチ電極溶液は、９５ｍＭｐｏｔ
ａｓｓｉｕｍａｓｐａｒｔａｔｅ（アスパラギン酸カ
リウム）、４７．５ｍＭＫＣｌ（塩化カリウム）、１
ｍＭＭｇＣｌ₂（塩化マグネシウム）、５ｍＭＥＧ
ＴＡｐｏｔａｓｓｉｕｍｓａｌｔ（ＥＧＴＡカリ
ウム塩）、１０ｍＭＨＥＰＥＳ／ＫＯＨ（ｐＨ７．
２），２ｍＭＡＴＰおよび０．１ｍＭＧＴＰから成
る。ＡＣＧ_i1−１（１００μＭ）およびＡＣＧ_i3−１
（１００μＭ）は、パッチ電極溶液に溶解して細胞内に
添加した。細胞外溶液は、１２５ｍＭＮａＣｌ（塩化
ナトリウム）、５ｍＭＫＣｌ、１ｍＭＭｇＣｌ₂、
２．５ｍＭＣａＣｌ₂（塩化カルシウム）、１０ｍＭ
ＨＥＰＥＳ／ＮａＯＨ、ｐＨ７．４から成り、電流を
記録している間は持続的に、細胞外溶液を還流した。た
だし、ソマトスタチンで刺激するときは、１００ｎＭの
ソマトスタチンを含む細胞外溶液で置換した。細胞外液
と細胞内液との間に存在する溶液境界電圧は、３ＭＫ
Ｃｌ電極を対照に直接測定し、各実験毎に補正した。ｗ
ｈｏｌｅｃｅｌｌｃｌａｍｐ用の電極は、フィラメ
ントを通した直径１５ｍｍの細いガラス管を用いて作成
し、Ｓｉｌｇａｒｄで被覆し、加熱により滑らかにし
た。

【００４５】実験に用いたパッチ電極の絶縁抵抗は、数
十ギガオーム（ＧΩ）であった。電圧負荷、電流負荷、
データの取り込み、解析は、ｐＣＬＡＭＰプログム（ソ
フト）を搭載したコンピューター（Ｇａｔｅｗａｙ２
０００ｃｏｍｐｕｔｅｒ）を用いて行った。膜電位お
よび電流は、ＬｉｓｔＥＰＣ−７ａｍｐｌｉｆｉｅ
ｒにより増幅して測定した。また、実験は全て室温（２
２〜２５℃）で行った。さて、細胞をソマトスタチンで
刺激すると、用量依存的に、外向きのカリウム電流が増
大する（図１０、図中ＳＲＩＦはソマトスタチンを表わ
す）。１００マイクロモラー（１００μＭ）のＡＣＧ_i2
−１をマイクロピペット内に共存させると、この外向き
カリウム電流は全く観測されなくなる（図１０のＢ）。
他のアンチカプロンであるＡＣＧ_i3−１、ＡＣＧ_s−
１、ＡＣＧ_o1−１にはこのような抑制作用は認められな
かった。また、図には示していないが、細胞外にＡＣＧ
_i2−１を添加した場合にも、同様な抑制作用が認められ
た。

【００４６】実施例９：Ｔ細胞受容体のシグナル伝達系
の制御Ｔ細胞由来のジャーカット細胞（ＪａｒｋａｔＴｌ
ｙｍｐｈｏｃｙｔｅ）を、１０％ＦＣＳを含むＲＰＭＩ
１６４０培地中３７℃でコンフルエントになるまで培養
した後、［³Ｈ］−ｉｎｏｓｉｉｔｏｌ１０μＣ_i／
ｍｌを含むＲＰＭＩ１６４０培地（ＦＣＳは含まない）
中３７℃で２４ｈｒ培養して膜のイノシトールを標識す
る。標識のための最後の１２ｈｒに１０μＭａｎｔｉ
ｃｏｕｐｌｏｎｅを添加した。このように標識された細
胞から調製した細胞膜を、Ｔ細胞受容体のサブユニット
のひとつであるＣＤ３に対する抗体ＯＫＴ３で刺激する
とイノシトールリン脂質の代謝回転が亢進し、イノシト
ール１，４，５−三リン酸（ＩＰ₃）の産生増大が観
察される。アンチカプロンＧ_q（ＡＣＧ_q−１)(Ala Al
a Val Lys Asp Thr Ile Leu Gln Leu Asn Leu Lys Glu
Tyr）を添加した細胞から調整した細胞膜分画では、Ｉ
Ｐ₃の産生はほぼ完全に抑制された（図１１）。

【配列表】

【００４７】配列番号：１配列の長さ：１５配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Asp Ala Val Thr Asp Val Ile Ile Lys Asn Asn
Leu Lys Asp Cys

【００４８】配列番号：２配列の長さ：１５配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Asp Ala Val Thr Asp Val Ile Ile Lys Asn Asn
Leu Lys Glu Cys

【００４９】配列番号：３配列の長さ：２２配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Asn Asn Ile Gln Val Val Phe Asp Ala Val Thr Asp Ile Ile Ile Ala Asn Asn Leu Arg Gly Cys

【００５０】配列番号：４配列の長さ：２２配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Asn Asn Ile Gln Phe Val Phe Asp Ala Val Thr Asp Ile Ile Ile Ala Lys Asn Leu Arg Gly Cys

【００５１】配列番号：５配列の長さ：１５配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Asn Asp Cys Arg Asp Ile Ile Gln Arg Met His
Leu Arg Gln Tyr

【００５２】配列番号：６配列の長さ：１５配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Ala Ala Val Lys Asp Thr Ile Leu Gln Leu Asn
Leu Lys Glu Tyr

【００５３】配列番号：７配列の長さ：２４配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Asp Thr Lys Asn Val Gln Phe Val Phe Asp Ala Val Thr Asp Val Ile Ile Lys Asn Asn Leu Lys Asp Cys

【００５４】配列番号：８配列の長さ：２４配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Asp Thr Lys Asn Val Gln Phe Val Phe Asp Ala Val Thr Asp Val Ile Ile Lys Asn Asn Leu Lys Glu Cys

【００５５】配列番号：９配列の長さ：１５配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Asp Ala Val Thr Asp Ile Ile Ile Ala Asn Asn
Leu Arg Gly Cys

【００５６】配列番号：１０配列の長さ：１５配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Asp Ala Val Thr Asp Ile Ile Ile Ala Lys Asn
Leu Arg Gly Cys

【００５７】配列番号：１１配列の長さ：２４配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Asp Thr Glu Asn Ile Arg Arg Val Phe Asn Asp Cys Arg Asp Ile Ile Gln Arg Met His Leu Arg Gln Tyr

【００５８】配列番号：１２配列の長さ：２４配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Asp Thr Glu Asn Ile Arg Phe Val Phe Ala Ala Val Lys Asp Thr Ile Leu Gln Leu Asn Leu Lys Glu Tyr

【図面の簡単な説明】

【図１】ＡＣＧ_i2によるＣＨＯ細胞の用量依存的な阻害
効果を示す図面代用写真である。

【図２】ＡＣＧ_i，ＡＣＧ_s，ＡＣＧ_qによるＴＧＦβ
₁抑制効果を示す図面代用写真である。

【図３】ＡＣＧ_i2によるムスカリン受容体のアゴニスト
刺激による活性化の抑制効果を示す図である。

【図４】ＡＣＧ_i2による用量依存的なペプチド１４の抑
制効果を示す図である。

【図５】ＡＣＧ_i2による用量依存的なペプチド１４に対
する効果を示す図である。

【図６】ＡＣＧ_i2−１によるＭ４サブタイプムスカリン
受容体の活性化ドメインの抑制効果を示す図である。

【図７】ＡＣＧ_i2−１によるβアドレナリン受容体の活
性ドメインの抑制効果を示す図である。

【図８】アンチカプロンＧ_sは、ペプチド１４によるＧ
_i2活性化を抑制しないことを示す図である。

【図９】ＡＣＧ_i2による含有コラーゲン部位の病変発現
の抑制効果を示す図面代用写真である。

【図１０】ＡＣＧ_i2による外向きカリウム電流の抑制効
果を示す図ある。

【図１１】ＡＣＧ_qによるＩＰ₃産生の抑制効果を示す
図である。

【図１２】ＡＣＧ_s−１によるβアドレナリン受容体の
活性ドメインの抑制効果を示す図である。

【図１３】ＡＣＧ_oによるＮＧＦの抑制効果を示す図で
ある。

【図１４】精製ＡＣＧ_q2のＨＰＬＣ溶出パターンを示す
図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＣＶＡＤＵＡ６１Ｋ 37/02 ＡＤＵ

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ＧＴＰ結合蛋白のα−サブユニットのＣ
末端から４番目のアミノ酸から１８番目アミノ酸迄の１
５個のアミノ酸を含むオリゴポリペプチド。
【請求項２】ＧＴＰ結合蛋白のα−サブユニットのＣ
末端から４番目のアミノ酸から２５番目アミノ酸迄の２
２個のアミノ酸を含む請求項１記載のオリゴポリペプチ
ド。
【請求項３】ＧＴＰ結合蛋白のα−サブユニットのＣ
末端から４番目のアミノ酸から２７番目アミノ酸迄の２
４個のアミノ酸を含む請求項２記載のオリゴポリペプチ
ド。
【請求項４】 Asp Ala Val Thr Asp Val Ile Ile Lys
Asn Asn Leu LysAsp Cys を含む請求項１記載のペプチ
ド。
【請求項５】 Asp Ala Val Thr Asp Val Ile Ile Lys
Asn Asn Leu LysGlu Cys を含む請求項１記載のペプチ
ド。
【請求項６】 Asn Asn Ile Gln Val Val Phe Asp Ala
Val Thr Asp IleIle Ile Ala Asn Asn Leu Arg Gly Cys
を含む請求項２記載のペプチド。
【請求項７】 Asn Asn Ile Gln Phe Val Phe Asp Ala
Val Thr Asp IleIle Ile Ala Lys Asn Leu Arg Gly Cys
を含む請求項２記載のペプチド。
【請求項８】 Asn Asp Cys Arg Asp Ile Ile Gln Arg
Met His Leu ArgGln Tyr を含む請求項１記載のペプチ
ド。
【請求項９】 Ala Ala Val Lys Asp Thr Ile Leu Gln
Leu Asn Leu LysGlu Tyr を含む請求項１記載のペプチ
ド。
【請求項１０】 Asp Thr Lys Asn Val Gln Phe Val Ph
e Asp Ala Val ThrAsp Val Ile Ile Lys Asn Asn Leu L
ys Asp Cys を含む請求項３記載のオリゴペプチド。
【請求項１１】 Asp Thr Lys Asn Val Gln Phe Val Ph
e Asp Ala Val ThrAsp Val Ile Ile Lys Asn Asn Leu L
ys Glu Cys を含む請求項３記載のオリゴペプチド。
【請求項１２】 Asp Ala Val Thr Asp Ile Ile Ile Al
a Asn Asn Leu ArgGly Cys を含む請求項１記載のオリ
ゴペプチド。
【請求項１３】 Asp Ala Val Thr Asp Ile Ile Ile Al
a Lys Asn Leu ArgGly Cys を含む請求項１記載のオリ
ゴペプチド。
【請求項１４】 Asp Thr Glu Asn Ile Arg Arg Val Ph
e Asn Asp Cys ArgAsp Ile Ile Gln Arg Met His Leu A
rg Gln Tyr を含む請求項３記載のオリゴペプチド。
【請求項１５】 Asp Thr Glu Asn Ile Arg Phe Val Ph
e Ala Ala Val LysAsp Thr Ile Leu Gln Leu Asn Leu L
ys Glu Tyr を含む請求項３記載のオリゴペプチド。