JPH07509469A - Ｌｄｖ配列の非ペプチド性代替物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ＬＤＶ配列の非ペプチド性代替物 ならびにそれらの炎症、自己免疫疾患および腫瘍の進行の処置における使用元日 の　および 本発明は、新規なＬｅｕ−Ａｓｐ−Ｖａ　ｌ　（ＬＤＶ）代替物、それらの製造 およびそれらからなる数種の疾患の処置のための組成物に関する。

血液細胞が他の細胞または細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の成分と接着し、また 相互作用する能力は、連絡した細胞との間およびその細胞内で送達されるシグナ ルを介する細胞機能および組織統合性の維持の基盤となっている。細胞−細胞お よび細胞−ＥＣＭの接着による相互作用は、リンパ球、腫瘍細胞および血小板を 含む大部分の種類の細胞上に広く分布する細胞接着受容体スーパーファミリー。

インテグリン類によって主として調節されている。

インテグリノは、アルファ（α）およびベータ（β）サブユニットが非共有結合 で連結されて構成されるヘテロダイマー分子である。これまでに１ｌｆｉのαサ ブユニットおよび６種のβサブユニ１トが同定されている。αおよびβサブユニ ットの対合は細胞種に特異的で、それがリガンド特異性を決定するものと考えら れる、 インテグリノはＥＣＭを細胞間アクチン−含有細胞骨格と連結させるのに重要な 役割を果たしている。すなわち、細胞外部分は接着蛋白質の結合を仲介し、細胞 内部分は細胞骨格の要素と相互作用する。

血管からの細胞の浸潤およびそれに続くそれらの組織局在は、内皮細胞、それら の基底膜およびＥＣＭの、受容体を介した認識に基づくものである。したがって 、各種細胞種がＥＣＭの成分をｄｍしそれに接着する能力は、ホメオスタシスの 必須な生理学的特徴と考えられている。

フィブロネクチン（ＦＮ）は、特性がよく解明されているＥＣＭ由来の細胞種む 性糖蛋白質であり、各種マトリックス中に存在し、ａＦＩｉ顛の内部リピート■ 。

■および■から構成される２３０〜２５０ｋＤａの架橋ダイマーとして様々な細 胞により合成され分泌される。ＦＮは、創傷治癒、胚細胞の移動および分化、細 胞活性化、増殖ならびに接着を包含する過程に関与している。固定化されたＦＮ への細胞結合は主として、β、（ＣＤ２９　；超後期抗原（ＶＬＡ）］−受容体 サブファミリーの表面インテグリン、たとえばＶＬＡ−３，−４および−５によ って媒介される。ＦＮとこれらのインテグリンの相互作用は、その中心の細胞結 合ドメインに依存し、また細胞接着モチーフＡ　ｒ　ｇ−Ｇ　ｌ　ｙ−Ａ　ｓ　 ｐ　（ＲＧＤ）に依存して。

それは−次的にα、β、（ＶＬＡ−５）インテグリンによって認識される。しか しながら、ＦＮのｍ型連結セグメント（ｍｃｓ）のＣＳＩ領域の別のスプライス 配列上に存在するさらに他の接着エピトープの特性が最近明らかにされた。この ドメインの細胞接着機能に必須の最小トリペプチドは、Ｌ　ｅ　ｕ−Ａ　ｓ　ｐ −Ｖ　ａ　ｌ　配列（ＬＤＶ；以下の図式１参照；　Ｈｕｍｐｈｒｉｅｓら、１ ９９０）であり、その結合は主として。

α、β、インテグリン（Ｖ　Ｌ　Ａ−４；　Ｎｏｊｉｍａら、１９９０）により 媒介される。このドメインは様々な細胞種のインテグリン受容体たとえば腫瘍細 胞およびリンパ球上の受容体によって認識されることが見出された（　Ｇｕａｎ ら、１９９０　；　Ｓｈ＋園ｉｚｕら、１９９０；ＰｏｓＬｉｇｏら、１９９１ 　；　Ｒｏｌｄａｎら、１９９２）　、興味あることに、ＶＬＡ−４インテグリ ンは内皮細胞上の血管細胞接着分子−１（ＶＣＡＭ−１）の認識にも関連すると されたが、この結合部位はＦＮ上での認識部位とは異なっていた（Ｅｌｌｃｅｓ ら、１９９０）　。

したがって、ＦＮのＶ　Ｌ　Ａ−４認議の阻害剤は、循環から炎症部位への細胞 の遁走を妨害することが考えられる。実際、ＶＬＡ−４活性の特異的な妨害は実 験的自己免疫性脳を髄炎ならびにマウスにおいて免疫細胞によって媒介される接 触過敏症反応の誘発を阻害することが見出された。

最近１本発明者らは、グアニジウムとカルボン酸基を連結するスペーサー鎖から 作成したＲＧＤ−配列の数種の非ペプチド性構造的模倣体を設計し、製造した（ 国際ＰＣＴ出願、　ＰＣＴ／ＵＳ９２１００９９５１）　、　、：れらの化合物 ［たとえば、５−Ｎ−（６−ゲアニジノヘキサンアミド）−ペンタン酸］はＲＧ Ｄ−依存性血小板インテグリンα□、β、にかなりの観相性を示して血小板凝集 を阻害し、固定化されたＦＮおよびビトロネクチンに対するＣＤ４２Ｔリンパ球 および腫瘍細胞のＲＧＤ−依存性接芒を妨害する。マウス、インビボにおいて、 ＲＧＤ代替物がＣＤ４８Ｔ細胞によって媒介される炎症反応の誘発を効果的に阻 害したことは蛋白分解に安定なＲＧＤ−模倣体がＲＧＤ認識に依存する多様な病 原性過程にを用な治療剤として働く可能性を指示している。

＾里二１刀 本発明によれば、今回、ある橿のＬＤＶ類縁体が、ＬＤＶ−配列認識に依存する 細胞または分子相互作用の効果的な阻害剤であることが発見された。これらのＬ ＤＶ類縁体は本明細書においてはｒＬＩ）Ｖ代替物」と呼ぶ。

すなわち０本発明は、一般式１ （式中、ｘ、〜Ｘ、は互いに同種または異種であって、Ｃ，Ｎ、ＯまたはＳ原子 であり、これらの少な（きも２個はＣであり、ｘ、〜Ｘ、鎖はハロゲン、ヒドロ カルピル、オ牛ソ、チオキソ、アミンおよびカルホキフルから選ばれる基によっ て任意に置換されていてもよく、またＸ１〜Ｘ、鎖もしくはその一部は異項環の 部分を形成してもよい）の化合物およびそれらの医薬的に許容される塩に関する 。

一つの好ましい実施態様においては、Ｘ、、Ｘ、およびｘ４は炭素原子を表し。

Ｘ、はＮＨであり、ｘ、はＮＨまたｉｔ　Ｓ　”Ｃ’あり、Ｘ、〜Ｘ、鎖は１個 またハコ１ｉ！］ノオキソ基でＷｌ換されている。他の好ましい実施態様におい ては、Ｘ、、Ｘ、、およびｘ４は炭素原子であり、ｘＩはＳであり、Ｘ、はＮＨ である。

本発明はさらに１本発明のＬＤＶ代替物の製造方法に関する。

本発明のＬＤＶ代替物には、インテグリン媒介細胞機能のようなＬＤＶ−配列認 まに依存する生物学的相互作用のそれらによる阻害に関連する様々な適用がある 。すなわち１本発明はまた。数種の疾患たとえば炎症性疾患、細胞−マトリ１ク スまたは細胞−細胞依存性免疫過程との干渉が関与する障害たとえば自己免疫疾 患、アレルギー、移植片対宿主病および関連反応、ならびに転移およびＩＩ１瘍 の進行の処置用のＬＤＶ代替物からなる医薬組成物に関する。

区１旦皿工工封凹 図１には、フィブロネクチン（ＦＮ）およびラミニン（ＬＮ）に対するＴ細胞接 着の、以下の阻害性化合物：ペプチドＧＲＧＤＳ　ＰおよびＥ　Ｉ　ＬＤＶＰＳ Ｔ。

ＬＤｖ代替物ＡＣ−１６およびＥＧ−４５ならびに比較化合物としてのＡＣ−２ ２およびＢＬ−３４による阻害の特異性を示す。

図２には、ＦＮに対するＴ細胞接着の１図１における阻害化合物の濃度８００゜ ４００および２００μｇ／ｍｌにおける阻害の解析結果を示す。

図３には、ＦＮに対するＴ細胞接着の、ＥＩＬＤＶＰＳＴペプチド（白四角）お よび相当するＥＧ−４５代替物（黒四角）による用量依存的阻害を示す。

ｘ皿重圧■亙基囚 本発明のＬＤＶ代替物の設計においては、ペプチドのアミノおよびカルボキシル 末端基は、ＲＧＤの場合と同様に、その各インテグリンによる認識には関与しな いこと、したがってその阻害活性には影響しないことが考慮された。またさらに 、ＬＤＶ−含有ペプチドのイ／テグリン上のそれらのインテグリン認識候補部位 への結合に対する主たる寄与は、Ａｓｐ（アスパラギン酸）のカルボキシレート 残基の、ＬｅｕおよびＶａｌの側鎖が結合する疎水性ポケット内部での相互作用 に依存することが考慮された。このトリペプチドの好ましいフンフォメーシ璽ン は、２つのペプチド結合のＳ−トランスフンライギル−シ璽ンによって支配され ている可能性が高り、シたがって２本発明によって製造される化合物は、２つの 疎水性側鎖とカルボキシレート残基をＬＤＶペプチドの場合と同じ相対的オリエ ンテーシ璽ンで有することが好ましい。

本明細書で用いられるｒＬＤＶ代替物」の語は上記式夏の新規化合物およびそれ らの医薬的に許容される塩を意味する。

本明細書で用いられる「ヒドロカルビル」の語は、直鎖状または分岐状のＣ２〜 Ｃ１＋アルキルおよびＣ１〜Ｃ＋＋アルケニルまたはアルキニル、たとえばメチ ル。

エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、　５ｅｔ−ブチル、ペ ンチル。

ビニル、アリルおよびエチニル；Ｃ，〜Ｃｌシクロアルキルおよびシクロアルケ ニル基、たとえばシクロプロピル、ンクロペンチル、シクロへ牛シルおよびシク ロヘキセニル；ならびにＣ６〜Ｃ＋ａアリール基、たとえばフェニルおよびナフ チルを包含する。

Ｘ、〜Ｘ、鎖またはその部分を構成する異項環には、さらにＯｌＳおよび／また はＮ原子を含有していてもよく、またノ〜ロゲン、ヒドロカルピル、オキシ、チ オ二Ｇ−４５、ｅ、（、ユ キソ、アミノまたはカルホキフルによって置換されていてもよい飽和または不飽 和環が包含される１例としては本明細書ではＮＧ−９３と呼ばれる化合物があり 。

これは１３員の環を含有する。

本発明の化合物の好ましい群においては、Ｘ＋〜ｘＩの１個もしくは２個以上が ＮＨ’？’ｌ、１（ＩＩもしくは２個以上がオキソ基によって置換されたＣ原子 であり。

たとえば本明細書においてＡＣ−１６と呼ばれる１図式ｌにその構造式を示した 化合物があり、この場合ＸｓおよびはＸ、が−ＮＨ，島は−ＣＨｌ−，Ｘｓおよ びＸ。

はカルボニル基である。

他の好ましい群の化合物は、Ｘ１〜Ｘ、０１個もしくは２個以上が−ＮＨであり 。

１個がＯもしくはＳであり、１＠もしくは２個以上がオキソ基によって置換され たＣ原子であり、たとえば本明細書においてＬＢ−１と呼ばれ、ｘ、はＳであり 。

Ｘ、は−ＮＨであり、ＸＩおよびＸｊは−ＣＨ１−であり、ｘ、はカルボニルで ある化合物、ならびに本明細書においてＥＧ−４５と呼ばれ、島はＳであり、Ｘ ｓは−ＮＨであり、Ｘｌおよび島は−ＣＨｓ−であって、ｘ４はカルボニルであ る化合物がある（図式１）、 他の好ましい実施態様においては、Ｘ＋〜Ｘ、鎖の原子はＸ、に隣接するＣ原子 とともに異項環の部分を形成し、たとえば本明細書においてＮＧ−９３と呼ばれ 。

ｘＩおよびＸ、は−ＮＨであり、Ｘ、およびＸ４はカルボニルであり、それらが １３員の異項環の部分を形成する化合物がある（図式ｌ）。

本発明の化合物はい（つかの操作によって製造することができる。

Ｘ４がカルボニルであり、ＸＳが窒素であるＬＤＶＫｌ［縁体、たとえば化合物 ＡＣ−１６は、保護されたし−Ａｓｐ、たとえばｔ−ブチルオキシカルボニルＡ Ｓｐ（０−ベンノル）から製造され、この場合、アミド結合（すなわち、ｘ、は −ＮＨであり。

Ｘ、はカルボニルである）は図式２に示すようにカルボジイミドでのカップリン グによって製造される。エステル結合（Ｘ、は酸素である）およびチオエステル もまたカルボジイミドカップリングによって製造される。対照としては、ＬＥＶ 類縁体たとえば化合物ＡＣ−２２が同じ合成様式に従い、出発原料として保護さ れたり、−Ｑ　ｌ　ｕ、たとえばｔ−ブチルオキシカルボニルＧｌｕ−（０−ベ ンジル）用いて製造される。

環状ペプチド、たとえばＮＧ−９３は、オキシム樹脂上一段階毎の合成により。

Ｖａｔが結合した樹脂に出発してＡｓｐついでＬｅｕをカップリングさせて製造 される。ペプチドはついで過剰のｔ−ＢｏｃΩ−アミノ酸によって樹脂から切断 する。ｔ−ブチル保護基を除去し１次に環化（ＤＤＣ，１−ヒドロキシベンゾト リアノール）するとＯ−ベンジル保護された環状ペプチドが得られ、これをＨＰ ＬＣにより精製する。０−ベンジル基を大気圧の！（、下に加水素分解（Ｐｄ／ Ｃ，１０％）すると、ＩＩＩ状化金化合物られる。

Ｘ、が硫黄であり、ｘ、が窒素、酸素または硫黄であるＬＤＶ類縁体、たとえば ＬＢ−１は、４−メチル−１−ペンタンチオールのマレイン酸ベンジルエステル へのミカエル付加によって製造される。付加はエステル基に対してβに優先して 起こる。遊離のカルボキシル基のイソブチルアミンまたはアルコールもしくはチ オールとの力、ブリング（ジ／クロヘキ／ルカルボジイミド、ｌ−ヒドロキシ− ベンゾトリアゾール）はベンジル保護類縁体を与える。ベンジル基を接触水素化 によって除去し、生成物たとえば化合物Ｌ［ｌ−１をたとえば再結晶によって精 製する。

化合物ＥＣ−４５（図式ｌ）は、２つの末端基の欠如に加えて、ペプチド結合が ペプチド結合代替結合によってｉ！！換されているＬＤＶペプチド代替物である 。

偽−５−ＣＩ、はその効率的な合成がＮ−末端の次にＡｓｐ残基を含有するペプ チドの新規なペプチド結合置換への容易な方法を提供することから選択された。

それはプロテアーゼに対して抵抗性であることが期待され、またその親油性特徴 は利点を提供することができる。ＥＧ−４５の合成は、以下の図式３に概略が示 す合εＧ−）５ 図式３ 成経路により、イタコン酸のビスエステルへのチオールのミカエル付加に基づ（ １で行われた。

阻害に無関係な機構を除外するために、化合物ＢＬ−３４（図式１）＋１．化合 物ＥＧ−４５について用いたのと同様の方法で製造し１合成の最終工程で５ｅｃ −ブチルアミンを用いてアミドを形成させ、これを細胞接着試験の対照として用 （曳た。

島およびｘ４はカルボニルであり、ｘｌおよびＸ、は酸素であるＬＤＶ類縁体（ よ。

マレイン酸ジイソブチルエステルへのマロン酸のミカエル付加、つ（亀で脱カル ボキシル化によって製造される。ＸｌおよびＸ、が窒素である場合ζこは、マレ イン酸ノイソブチルアミドへのマロン酸のミカエル付加で所望の化合物が製造さ れる。

本発明のＬＤＶ代替物の医薬的に許容される塩には、それらに限定されるもので はないが、無機塩たとえばナトリウム、カリウム、カルシウム塩等、およびアミ ンまたは有機塩基との有機塩たとえばピペリジン、モルホリン等の塩が包含され る。

本発明のＬＤＶ代替物は、ＬＤＶの認識に依存する生物学的相互作用を阻害する ことができる０本発明に包含されるＬＤＶパターンによって媒介される可転性Ｄ ！過程の例には、ＬＤＶ配列が関与する５インテグリンＶ　Ｌ　Ａ−４による細 胞および分子相互作用が包含される。すなわち、それらはまた、転移を防止する ことができる。さらに、これらの代替物はリンパ球のある種の抗原提示細胞との 相互作用を阻害し、したがってＴ細胞の活性化および遁走を阻害して自己免疫疾 患を防止する。

本発明の化合物は、経口および非経口経路たとえば静脈内、皮下または筋肉内注 射を含む適当な経路によって患者に投与することができる。化合物の有効量ただ し実質的に非毒性の量が処置に使用される。有効量は、１回または２回以上に分 割した１日用皿の基準で、００１〜１　ｍ　ｇ／ｋ　Ｈの範囲内、好ましくは０ ５ｍｇ／ｋｇである。

本発明はさらに、活性成分としての本発明の代替物と医薬的に許容される担体か らなる医薬組成物を提供する。この組成物は９本発明の活性化合物またはそれら の混合物を剤形単位あたり約０７〜７０ｍｇ含有する錠剤、カプセル剤、溶液剤 またはす層剤の肩山とすることができる。化合物は慣用方法で、生理学的に許容 されるビヒクルまたは担体、賦形剤、結合剤、防腐剤、安定剤等と混合すること ができる。たとえば、静脈内投与用の注射液は食塩水中に、ｐＨレベルをたとえ ば７４として調製することができる。

以下の実施例は１本発明の原理を実例を用いて例示しようとするものであり。

本発明を限定するものではない。

去星旦 以下の実施例中１合成された代替物の化学分析は、　Ｂｒｕｋｅｒ　ＡＭＸ　４ ００分光光度計を１００．７５Ｍ！ｌｚで操作して’ｌ！−および”Ｃ−１ｔ４ Ｒスペクトルを測定することにより実施した。化学／フトは内部１ｆｆｉとして のＴＭＳに対して測定した。

出発原料は、　Ｓｉｇｍａから量大したＢｏｃ−アミノ酸を除いてすべてＡｌｄ ｒｌｅｈから購入し、さらに精製することなくそのまま使用した。

化合物ＡＣ−１６は１図式２に概略を示した合成に従い、ＤＣＣによる力１ブリ ングで製造した。

ｔ−ブトキノカルボニルＡｓｐ（０−ベンジル）（３０９ｍｇ、１．０ミリモル ）およびｌ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１４８ｍｇ、１．１ミリモル）を 含有するＣＨｉＣ＋　＋／ＴＨＦ　ｌ　：　１　（ｖ／ｖ）　（７ｍ　ｌ）中溶 液にＮ、Ｎ’−ジシクロへキ／ル力ルポジイミド（ＤＣＣ）（２２６ｍｇ、１． １ミリモル）を加えた０反応混合物を一夜室温に放置した。溶液をろ過して反応 中に生成したジシクロヘキシル尿素（ＤＣＵ）を除去し、乾燥ＣＨＩＣＩ　ｘで 洗浄した。これにイソブチルアミン（８７ｍｇ、１．２ミ’Ｊモル）を加え、溶 液を室温で５時間攪拌した。溶液を０．１　ＭＣＩ水溶液（ｔｏｍｌ）中に注ぎ 、生成物をりｏｏホルム（５０ｍｌ）で２回抽出した。クロロホルムをＮａ、Ｓ Ｏａ上で乾燥して減圧下に除去した。粗製のカップリング生成物をＣＨｘ　ＣＩ 　＋　（４ｍ　ｌ　）に溶解し、０℃に冷却し、トリフルオロ酢酸（４ミリ）を 加え２反応混合物をＯ′Ｃに３０分、室温に１時間放置した。溶媒および酸を減 圧下に除去すると、　Ｎ−１ｅｒｔ−プチルオ牛ンカルボニルー４−ベンジルオ キシ−１−アスパラギン酸インブチルアミドが得られた。粗生成物はそのまま次 工程に使用するのに十分純粋であった。

インカプロン酸（１３５ｍｇ、１．０ミリモル）および１−ヒドロキシベンゾト リアゾール（１４８ｍｇ、１．１ミリモル）を含有するＣＨＩＣＩＩ／ＴＨＦＩ 　：　１（ｖ／ｖ）（７ミリ）中溶液にＮ、Ｎ’−ジ／クロヘキシルカルボンイ ミド（ＤＣＣ）（２２６ｍｇ、１．１　’、リモル）を加えた１反応混合物を一 夜室温に放置した。

ジノクロへ牛ンル尿素（ＤＣｔＪ）をろ過し、乾燥した（Ｈ＋Ｃ１ｔで洗浄した 。この溶液に前工程からの粗生成物をジイソプロエチルビルアミン（２６０ｍｇ 、２ミリモル）とともに添加した１反応混合物を室温で５時間攪拌した。溶液を ５％ＮａＨＣｏＩ水溶液（ＬＯｍｌ）中に注ぎ、生成物をりｏｏホルム（５０ｍ ｌ）で２回抽出した。クロロホルムをＮ　ａ　ＩＳ　Ｏを上で乾燥して、減圧下 に除去した。

生成物をフラｌ／ユクロマトグラフィ−（酢酸エチル二へ牛サン、比ｌ；３）に よって精製し、ベンノル保護基を常圧で水素化して（酢酸エチル、１０％パラジ ウム−炭、Ｈ３）除去した。標記化合物ＡＣ−１６はエタノールから再結晶した 。

ＮＭＲ（ＣＤＣＩｍ）ニア、０Ｂ　（ＬＨ，（１，３−７）、７．０１　（ＩＨ ，ｄ、Ｊ−３）、４．７５　（ＬＨ，ｄｔｌｄ、）、４．３）、３．００　（２ Ｍ、ｔ、Ｊ−６）、２．８０（ＩＨ，ｄｃｌ、Ｊ冨１６，４）、２．６４　（Ｉ Ｈ，ｄｄ、１６．７）、２．１８　（２Ｈ。

ｔ、Ｊ＝７）、１．７　（ＩＨｌｍ）、１．５１　（ＩＨ，ｍ）、１．４９　（ ２Ｈ，ｍ）。

０．８３　（６Ｈ，ｄ、Ｊ＝６）、０．８２　（６Ｈ，ｄ、Ｊ＝７）　。

ＦＡＢ　ＭＳ　：［Ｍ＋Ｈドｘ２８７．３．［Ｍ−ＨＥ″″＝２８５．３伊２． ２．Ｉ＋−ツメチル−６，９−ノアザー５８−ジオキソ−７−カルポキシエチル ードデカノ（化ム　Ａ　Ｃ−２２の製６ ＬＥＶ代替物ＡＣ−２２は、Ａｓｐの誘導体に代えて、【−ブトキンカルボニル Ｇｌｕ（０−ベンジル）を用いるほかは化合物ＡＣ−１６の場合と同様に操作し て製造し、ＬＤＶ代替化合物ＡＣ−１６との比較に用いた。

ＮＭＲ（ＣＤＣＩ、）：　７．３９　（）ｔｌ、ｔ、Ｊ−５，０）、６．９８　 （Ｈｌ、ｄ、ｊ＝８．５）、４．７２　（Ｌ　Ｈ，ｄｄｄ、Ｊ　＝ｌ　１．ｏ、 ８．５．６）、３．０８　（２Ｈ，ｍ）。

２．４８　（ＩＨ，（１（１（１，Ｊ＝１６．５．８．６．５．３）、２．３３ 　（ＩＨ，ｄｄｄ、Ｊ＝１６．５，７．２，５．０）、２．２３　（２８，ｔ、 Ｊ−７，６）、２．０６　（Ｉ　Ｈ，ｍ）。

１．９４　（ｌＨ，ｍ）、１．７８　（ＩＨ，ｈｅｐ、Ｊ＝６．７）、１．５５ 　（ＩＨ，ｍ）。

１．５１　（２Ｈ，ｍ）、０．８９　（６１−１，ｄ、Ｊ−６，７）、０．８６ 　（６Ｈ，ｄ、Ｊ−６，８）。

ＦＡＢ　〜ＩＳ　：　［Ｍ＋Ｈ］”＝３０１．３．［Ｍ−Ｈｌ”−２９９，３伊 ３．２．１１−ツメチル−６−チア−９−アザ−８−オキソ−７−カルポキンメ チルードデカノ　イ合　Ｌ　［１−１のｌＩ造 ＴＨＦ（５ｍｌ）中マレイン酸ベンジルエステル（２０６ｍｇ、１ミリモル）を 含有するｒ８液に、４−メチルートペンタンチオール（１２０ｍｇ、１　ミリモ ル）を加えた。この溶液を室温で１２時間攪拌したのち、溶媒を減圧下に除去し た。

粗製の混合物をフラノノコクロマトグラフィー（溶出液として酢酸エチル：へキ サンｌ：１）によって精製した。純粋なｌ−ベンジル−２−（４−メチル−ペン チルチオ）スクシネートをメチレノクロリド（３ｍｌ）に溶解し、１−ヒドロ牛 ／ぺ１．１ミリモル）を加えた。この溶液を室温で５時間攪拌し、沈殿したＤＣ υを６去し、イソブチルアミン（８７ｍｇ、１．２ミリモル）を加えた。この溶 液を室温で５時間攪拌し、０．１　ＩＣ＋水溶液（１０ｍｌ）中に注ぎ、生成物 をクロロホルム（５０ｍｌ）で２回抽出した。クロロホルムをＮ　ａ　ｍ　Ｓ　 Ｏａ上で乾燥して減圧下に除去した。粗生成物を溶出液として酢酸エチル：ヘキ サン１：４を用いてフラソ／、クロマトグラフィーによって精製した。ベンジル 基を水素化（酢酸エチル中ｌＯ％パラジウムー炭、Ｈ□　ｌ気圧）によって除去 し、最終生成物をエタノール−水混合物から再結晶した。

化合物ＥＧ−４５の合成は図式３の記載のように実施した。イタフン酸１；こ出 発し、酸性条件下にβ−位におけるモノアリルエステル２を形成させる。これは 。

”Ｃ−ＮＭＲによって確証された。すなわち、それぞれ不飽和および飽和カルボ ニルに相当する１６６．８９およびｌフ１．４７　ｐ　ｐｍにイタフン酸の２つ のカルボニルングナルが認められ、エステル化によって１７１．４７ｐｐｍの共 鳴のみが１６９．５８に上方シフトした。同様のシフトが、比較のために製造し た既知のイタフン酸β−メチルエステルでも観察された。アリル保護基は、それ が緩和な中性条件で容易に除去されることから選択された０合成の最終工程にお ける苛酷な条件下での保護基の除去は、環状イミドの形成を伴う可能性が予想さ れたからである。ｐ−ニトロフェニルエステル３は、カップリング剤としてＤＣ Ｃを用いて製造された。ＤＭＦ中室温で、塩基としてノイソプロピルエチルアミ ンを用いて４−メチルペンクンチオールのｐ−二）　Ｃｊ　７　ｚニルエステル ３へのミカエル付加を行い、ついでミカエル付加物を単離することな（イソブチ ルアミンを添加すると、アリルエステル４が得られ、これをクロマトグラフィー によって精製した。

Ｐｄ　（ＰＰｈ、）、と水素化ホウ素ナトリウムを用いてＴＨＦ中で脱保護する と所望の生成物である化合物ＥＣ−が得られた。

４ｎ　イタフン　−アリルエステル２のＡ＋＝アリルアルコール（６，ｌ１１ｇ 。

１２０ｍ１）　中イタコンＭｌ　（５ｇ、３８．５ミリモル）の懸濁液にア七チ ルクロリド（ｏ　１ｍ１）を加え、この溶液を３０分間還流した。過剰のアルコ ールを減圧下に除去し，得られた油状物をエーテルに溶解し，５％ｌ’Ｊ　ａ　 Ｈ　Ｃ　Ｏ　ｓ溶液中に抽出した．ついで水層を酸性にして．エーテルで４回抽 出した，エーテル層をＮａ＊ＳＯ＋で乾燥して．エーテルを減圧下に除去した． 得られた油状物（２）はそのまま次工程に使用するのに十分純粋であった。

１、４　１　（２Ｈ．ｑ．Ｊ−７．７）、０．８９　（６Ｈｌ，ｊ±６．７）、 ０．８７　（６Ｈ．ｃｌ．Ｊ＝６．６）。

ＦＡＢ　Ｍｓ　：［Ｍ＋Ｈド＝２９０．２．［Ｍ−Ｈド鱗２　８　８．２元素分 析二Ｃ１４Ｈ．，ＮＯ．Ｓとして計算値：Ｃ，５８．１３，Ｈ，９．３４，Ｎ。

４、８４，Ｓ，１１．０６，分析値：Ｃ，５７．８５，Ｈ，９．Ｑ６，Ｎ，４． ７４。

ＥＧ−４５との比較に使用した化合物ＢＬ−３４は，イソブチルアミンに代えて Ｓｅｅ−ブチルアミンを用いたほかは例４の化合物ＥＧ−４５の場合と同様に操 作して製造した．得られたジアステレオ−マー混合物を分離することなくそのま ま使用した。

ＮＭＲ　（ＣＤＣ１．）：５．９７　（ｌＨ．ｄ．Ｊ−８．４）、３．８９　（ ＩＨ．ｍ）。

２、８０　（２Ｈ．ｍ）、２．７９−２．５９　（３Ｈ．ｍ）、２．５３　（２ Ｈ，ｔ．Ｊ−７、７）、１．４６　（ＩＨ．ｍ）、１．１３　（ＩＨ．ｑ．Ｊ＝ ６．６）、０．９３　（６Ｈ。

ｍ）、０．８９　（６Ｈ．ｄ．Ｊ＝６．６）。

ＦＡＢ　ＭＳ　：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２９０．１，［Ｍ−Ｈビー２　８　８．３１化 合物ＮＧ−９３の製造 Ｎ−α−ｔＢｏｃ−バリンをカップリング剤としてＤＣＣを用いてオキシム樹脂 （ＤｅＧｒａｄｏ．　Ｗ．　Ｆ．　＆　Ｋａｉｓｅｒ．　Ｅ．　Ｔ．　、　１９ ８０，　Ｊ．　Ｏｒｇ．　Ｃｈｅｔ　４５　：　１２９５）■牛■■■■Dすな わち、Ｎ−α−ｔＢｏｃ−バリン（１ミリモル）およびＤＣＣ　（１　ミリモル ）をメチレンクロリドＨｏｍｌ）中に含有する溶液にオキシム樹脂（２．０　０ 　ｇ）を加えた．この混合物を１５時間振盪し，メチレンクロリド、ＤＭＦ，イ ンプロパノールおよびメチレンクロリドで洗浄し，真空中で乾燥した．以後の合 成は手動で行い，カップリングは３当量の適当なｔｏｏｃ−アミノ酸対称無水物 （八ｓｐついでＬｃｕ）で実施した．ペプチドは，　ＤＭＦ／ｃｌｌ＊ｃ　１． ；　１　：　ｌ中３倍過剰のβ−アラニン−〇−１−ブチルアセテートにより４ 時間処理して樹脂から切断し。

樹脂からＤＭＦで洗い落とした．【−ブチルエステルおよびｔ−プチルオキシカ ルボニル基の脱保護は、ＴＦＡ：ＣＨ，ＣＩＩ中、室温で３０分および１時間処 理することによって達成された。溶媒おおび酸は減圧下に除去し、ｍ化はＣＨ＋ Ｃ１ｘ中、ＤＣＣおよび１−ヒドロキシベンゾトリアゾールによって達成された 。ベンジル保護基の加水素分解は、酢酸エチル、１０％パラジウム−炭および大 気圧のＨｌを用いて行った。最終生成物は逆相クロマトグラフィ一ついで製造Ｈ ＰＬＣ精製によって精製した。

この方法で製造された化合物はすべて提案された構造と一致するＮＭＲおよびＦ ＡＢ−ＭＳスペクトルを示した。

ｆ１１７．ＥＣＭ　へのＴ　の ＥＣＭおよびそのＦＮ−糖蛋白質成分への接着を介する細胞認識は、多重細胞− リガント相互作用が関与する複雑な過程である。ＥＣＭ−由来ＦＮにおける■− セグメントの１度が血ｆｉＦＮの場合に比較して高いことは、固定化されたＦＮ との細胞性相互作用においてはＶ　Ｌ　Ａ−４インテグリンが大きな役割を果た していることを示唆するものである。実際、このインテグリンは、リンパ造成お よび造血。

骨髄細胞分化、ＶＣＡＭ−認識、細胞活性化、ならびにＩｌｌ瘍細胞およびリン パ球を含めて数種の細胞型へのＦＮの結合のような様々な過程に関係することが 明らかにされた（Ｅｌｉｃｅｓら、１９９０；　Ｓｈｉｍｉ２１＋ら、１９９０ ；　Ｒｏｌｄａｎら、１９９２）　、ＶＬＡ−４インテグリンに対するＦＮ上の 最小認識部位は１選択的にスプライスされたＶ領域に限定されているものと考え られ、ＬＤＶ−含有ペプチドによって特異的に遮断される（Ｉ（ｕｍｐｈｒｉｅ ｓら、１９８６）　。

７ａ、ＣＤ４”Ｔ細胞の・製 ＣＤ４″″Ｔ細胞は健常人ドナーの末梢血液から精製した。　Ｆｉｅｏｌｌ勾配 を用いて単核リンパ球を単離し、洗浄し、３７℃の加湿ＣＯｓイン牛１ベーター を用い。

ペトリ皿中１０％ＦＣＳおよび抗体を補充したＲＰＭＩ内でインキュベートした 。

２時間後、非接着細胞を単離し、ナイロン−ウールカラム上に適用した（１．５ 時間）、ｃｏ４９Ｔ細胞はついで、磁性ビーズ（＾ｄｖａｎｅｅｄ　Ｍａｇｎｅ ｔｌｃ、Ｍ＾）に接合させた抗−ＣＤ８．ＣＤ１９およびＣＤＩ４モノクローナ ル抗体（ｍＡｂ）の混合物にこれらの細胞をＩＡｎすることによってネガティブ に選択した。ビーズに結合しなかった細胞を２回目のネガティブ選択に付した。

ＦＡＣＳｃａｎ解析で測定して（示していない）９０％以上のＣＤ３’″ＣＤ４ ”細胞からなる得られた細胞集団をヒトＣＤ４０丁細胞原として使用した。

フｂ、　ＥＣＭ　白　へのＴ細　の ヒ）ＣＤ４”Ｔ細胞のＥＣＭ成分に対する接着性を調べるために、ＥＣＭ成分を マスポリスチレンウェルに結合させた。ＦＮまたはラミニン（Ｌ　Ｎ）　（Ｓｉ ｇｍａ；１ｍｇ１５０ｍｌ培地／ウェル）を９６−ウェルの平底マイクロタイタ ープレート（Ｃｏｓｔａｒ）に添加し、２時間インキュベートした。結合しなか った蛋白質を洗浄して除去し、プレート上に残った結合部位はＰＢＳ中１％ＢＳ Ａ（Ｓ１ｇ簡ａ）で遮断した。Ｔ細胞は”［Ｃｒ］　（Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ 　Ｎｕｃｌｅａｒ）で放射標識し、ホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ 　；Ｓｉｇｍａ；　１０　ｎ　ｇ／ｍ　＋　）で活性化した。指示された場合に は、これらのＴ細胞は抗−ＣＤ２９（抗−ＶＬＡインテグリンβ、鎖：１／２０ ０に希釈、　５ｅｒｏｔｅｅ、０ｘｆｏｒｄ、ＵＫ）　＋抗−Ｖ　Ｌ　Ａ−５、 抗−ＶＬＡ−４，あるいは抗−ＶＬＡ−６（１／４００に希釈；　Ｔｅ１ｉｏｉ 　ＰｈａｒｍａｃｅｕＬｌｃａｌｓ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　ｌｎｅ、＞ｍＡｂによ って前処置した（３７℃で３０分）、ＲＧＤペプチドＧＲＧＤＳＰＫはＳｉｇｍ ａから購入した。ＬＤＶペプチドＥ　Ｉ　ＬＤＶＰＳＴの場合はＴｈｅ　Ｗｅｉ ｚｍａｎｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　５ｃｉｅｎｃｅ、　Ｒｅｈｏｖｏｔ、　 ｌ５ｒａｅｌのペプチド合成部門においてＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓＬｅ禦Ｓ ／ンセサイザーにより合成した。ついで、コーティングしたマイクロタイタープ レートに”［Ｃｒ］−４ｊｉ識ＣＤ４”″Ｔ細胞（２Ｘ１０’／ウエル）を添加 し。

ｌＯ％ＣＯ１加ＩＩ　ＣＯｓインキ誹ベーター中、３７℃で３０分間インキュベ ートした。非接着細胞をついで静かに除去し、接着細胞を溶解し収集した。接着 した細胞の百分率は５式〔ウェル中の残存ＣＰＭ／（ウェルへの添加細胞の総Ｃ ＰＭ−”Ｃｒ自然放出）Ｘ１００］によって計算した。結果は、各実験群ごとに ４個のウェルで重複して測定されたＴ細胞結合の平均百分率として表す。

７ｃ、ＥＣＭ　白　へのＴｌｌＩ着のＬＤＶおよびＲＧＤペプチドによるＦＮお よびＬＮに対するＴ細胞接着にはインテグリンのβ１−サブファミリーによる媒 介が本当に必要なことを確証し証明するために、ＦＮへのヒトＣＤ４０Ｔ細胞− 接ａ性の受容体要求を検討した。精製されたヒトＣＤ　４　”Ｔ細胞を”［Ｃｒ ］で放射１ｍし、様々な分子またはｍＡｂで処置し、ついでＦＮでコーティング したウェル中に接種した。ＥＣＭの主要成分であるＬＮは対照ＥＣＭ−接着糖蛋 白質として使用された。ついで、１９７８球をＰＭＡで活性化し、インキュベー ジ１ン後、蛋白質基板に結合した標ＥＩＣＤ４″″Ｔ細胞の百分率を測定した１ 表１に示した結果は、Ｔ細胞が主要な接着性ＥＣＭＩ！蛋白質、ＦＮおよびＬＮ に、主としてそれらのβ１−インテグリンサブファミリー受容体を介して接着す ることを示している。ＦＮへのＣＤ４”Ｔ細胞接着はＶＬＡ−４（（Ｅ、β＋） およびＶ　Ｌ　Ａ−５（α、β１）インテグリンに依存し、一方、ＬＮに対する Ｔ細胞の接着は主としてＶＬＡ−６（α、βｌ）によって媒介されることが確証 された１期待されたように。

ＶＬＡの共通のβ１−鎖に４！異的な抗−ＣＤ２９ｍＡｂは１両接着性糖蛋白質 へのＴ細胞の接着を消失させた。

ＦＮに対するＴ細胞の接着のＬＤＶおよびＲＧＤペプチドによる特異的阻害を解 析するため、６００μｇ／ｍ＋の固定濃度でのこれらのペプチドの阻害能を解析 した１両試剤ともＣＤ４′″Ｔ細胞−ＦＮ接着性相互作用を阻害することは明ら かであったが、ＲＧＤ−ペプチドの阻害はＬＤＶ−含有ペプチドの場合より強力 であった（それぞれ、８０および４６％阻害）、この阻害様式は特異的で、いず れのペプチドもＴ細胞とＬＮのインテグリン媒介相互作用を妨害しなかった（表 １）。

表１．ヒトＣＤ４”Ｔ細胞のＦＮおよびＬＮへの接着における一インテグリンの Ｔ細胞接着％ 細　着阻　斉　ＦＮ　ＬＮ なし　６０±６　５０±５ 対ＣＤ−２９（β、）　ｌｌ上３　１０±４対ＶＬＡ−４（α４）　２５±３　 ４７±５対ＶＬＡ−５（α、）　！８±４　５３±３対ＶＬＡ−６（ｆｆｓ）　 ５７＋４　１４＋３ペプチド ＥＩＬＤＶＰＳＴ　３４＋３　４６±４７ｄ、ＦＮへ（７）Ｔ細　（７）ＬＤＶ 　１．：よる阻Ｔ細胞−ＦＮ接着を妨害するＬＤＶペプチドの能力から１本発明 者らは１本発明のＬＤＶ代替物がＥＣＭ−リガンドへのＣＤ４”ｌ：）Ｔリンパ 球結合を競合的に阻害する能力を調べた。

ＦＮへの細胞接着に対するＬＤＶ代替物の阻害作用は、ペプチド阻害について記 載したのと同じ方法で測定した。新たに単離し精製したヒトＣＤ４”Ｔ細胞を。

固定された６００μｇ／ｍｌの濃度での阻害化合物（ペプチドＧＲＧＤＳＰおよ びＥＩＬＤＶＰＳＴ、ＬＤＶ代替物ＡＣ−１６およびＥＧ−４５，ならびに比較 化合物Ａ　Ｃ−２２およびＢ　Ｌ−３４）によって前処置した。細胞をついでＦ ＮまたはＬＮで前もってコーティングしたウェル中に接種した。その後、細胞接 着百分率を計算した１図１に測定値士ＳＤを示す（３つの実験の代表値）。

図１示した結果は１代替物ＡＣ−１６およびＥＧ−４５がＦＮへのＴ細胞の接着 を阻害したことを指示している。ＡＣ−１６模倣物質はＬＤＶ−含有ペプチドと ほぼ同程度の活性を示したが、ＡＣ−２２は不活性で、トリペプチドＬＤＶのア ミノおよびカルボキシル末端基はその活性に必要ではないことを示している。Ｅ Ｇ−４５は、ＡＣ−１６およびＬＤＶ−含有ペプチドのいずれよりも、良好なＴ 細胞接着の阻害剤であった（それぞれ、５４．３４および４６％）　、　化合物 ＡＣ−２２およびＢＬ−３４は、いずれのＥＣＭＭ蛋白質に対するＴ細胞の接着 も阻害しなかった。グルタミン酸から誘導されたＡ　Ｃ−２２はＬＥＶ代替物と 考えることができて、細胞接着を阻害できないその性質は、ＬＥＶ−Ｎ８ｍペプ チドに認められた境遇（Ｉｌｕｍｐｈｒｉｅｓら、１９８６）を反映するもので ある。化合物ＢＬ−３４では、「アミド側」からの末端メチル基が窒素にさらに 接近した位置に「シフト」されて。

多分これが立体障害を導入することになり、その受容体ポケットへの疎水基の結 合を妨害したものと思われる。これが多分、ＦＮへのＣＤ４ゴ細胞の接着に対す るこの化合物の弱い阻害能を説明するものであろう。

これらの代替物がいずれもＬＮに対するＴ細胞の接口を妨害しながったことは。

ＬＤＶ類縁体の阻害作用はこれらの分子にょうて生じる毒性作用に寄与できない ことを指示している。同様に、指定の代替物のいずれもがレクチン（ＰＨＡ）− 誘導Ｔ　ｌ１ｌｌ１３＋１！ｌ殖応答およびＴＮＦ−α分泌を阻害しなかった（ データは示してぃない）。

ＦＮへの（：　ｐ　４　”Ｔ細胞接着に対するＬＤＶ類縁体の阻害作用の動力学 を比較するために、細胞を、２００，４００および８００μｇ／ｍｌの各８ｉ阻 害物質で処置し、その後に起こるＦＮ−接着性を調べた。測定値±ＳＤを因２に 示す（４回の実験の代表値）０図２に示した結果は、以下のことを示して（兎る 。すなわち（ａ）化合物ＡＣ−１６およびＢＬ−３４には作用カシなｌ！＋１ツ た。（ｂ）ＥＧ−４５は、４００および８００　ｕ　ｇ／ｍ　Ｉで、ＡＣ−１６ およびＬＤＶ−含有ペプチドよりも良好な阻害物質であった。（Ｃ）ここ１こ特 定された阻害物質の２００ｕｇ／ｍＩ量は固定化されたＦＮへの接着阻害１こ１ ｉ限界的な作用を示すのみであった。

８００μｇ／ｍｌの濃度では、ＬＤＶペプチドおよびＡＣ−１６代替物の両者力 （同程度の阻害作用を示したことに注目すべきである。

１、ＤＶ−ペプチドおよびＥＧ−４５代＠物の、ＦＮへの細胞イ寸着艦こ対する 阻害能を各種濃度において比較した。結果は、この２つの化合物の有効用量（Ｅ Ｄ＠Ｉ）はきわめて類似し、すなわち、それぞれ２７５および３１０μｇ／ｍｌ であった（図３）が、化合物ＥＧ−４５の最大阻害作用Ｉｔ　Ｌ　Ｄ　Ｖペプチ ドの場合より著しく高かった（それぞれ、１μｇ／ｍｌにお（Ｘて５３女寸３６ ％）ことを示して（Ｘる。

すなわち、化合物ＥＧ−４５は、ＦＮのインテグＩＪン認識およびそれ：こ続（ 接着相互作用の強力なアンタゴニストであると考えられ、ＬＤＶｔｌ倣体力Ｃイ ンビボでもＴ細胞媒介免疫応答を阻害できることを指示して（嵐る９合成Ｅ　Ｉ 　ＬＤＶＰＳＴペプチドによるマウスの処置は、マウスの皮膚微細環境１こおＩ するＴ細胞媒介免疫反応である接触感受性の誘導を阻害することを示して１箋る （　Ｆｅｒｇｕｓｏｎら、１９９１）　。

本発明者の結果は、ＬＤＶ代替物力Ｃ実際（こ炎症反応の阻害斉１として働くこ とを強く示唆するものである。

これらの実験から、ＬＤＶ代替物のインテグ１ノン結合部位１！Ａｓｐ−カルボ キシレート基に対する結合部位を囲む２つの疎水性ボケ、）ｌ’＋１ら４眞成さ れて（Ａるものと思われる。Ｒ味あることに、Ａｓｐ残基（！、多くのインテグ ＩＪンー結合１ノガンドに包含されることが暗示されてきた１本発明者らの結果 （±、ペプチドのＣおよびＮ＊端におけるカルボキシルおよびアミノＷｉｉＬＤ Ｖ含有ペプチドの阻害作用にはわずかな寄与しかしな（−ことを示唆して（Ｘる 。した／）（つて、少なくとも１個のペプチド結合の置換は受容体に対する親和 性を低下させない、これは、ペプチド骨格も同様にＬＤＶリガンドに対するイン テグリンの親和性には直接寄与しないことを意味する。しかしながら、骨格は、 インテグリンー認識および結合に適当なオリエンチー７ｇンで親水性および疎水 性基を配置するのに役立つものと考えられる０本明細書に記載の研究結果（およ び本発明者らのＲＧＤ代替物に関する以前の研究結果）に基いて、比較的融通性 のある化合物がインテグリン受容体への実質的な結合親和性を取得できるとの結 論が可能と思われる。しかしながう、モつとフンフ肯−メーシ１ンの限定された ＬＤＶ細胞接着モチーフの模倣体が、インテグリン上におけるその相当する機能 性部位に対するかなり高い結合親和性を取得できる可能性を悲定することも合理 的である。

これらの実験および本発明者らの以前のＲＧＤ−非ペプチド性模倣体のインビト ロおよびインビボにおける検討の結果は１本発明の化合物が、ＦＮのインテグリ ン媒介細胞認識を特異的に阻害し、それによって、たとえば浸潤細胞による血管 壁成分の認識を要する病理学的疾患における治療手段への新たなアプローチを提 供する可能性を指示するものである。

８　マウスのＬＤＶ　処　でのＯＸによるインビボ免疫応答Ｔ細胞媒介性のイン ビボ免疫応答のＬＤＶ代替物による阻害を試験した。遅延型過敏症（ＤＴＨ）反 応実験を、ＢＡＬＢ／ｃマウス群（１群５匹）を用いて行った。マウスの刺毛腹 部を皮膚アレルゲン、４−エトキンメチレン−２−フェニル−オキサシロン（Ｏ Ｘ）（アセトン／オリーブ油中３％ＯＸ、１０μＩ）で感作し。

５日後に耳にＯｘを適用してチャレンジした。２４時間後にＤＴＩ（の指標とし て耳の腫張の増大を記録した。ＯＸによる感作後、マウスに２５μｇのＬＤＶ− 含有ペプチドもしくはＬＤＶ−模倣体ＡＣ−１６，またはＰＢＳを静脈内に投与 した。

結果は表２に示す。

この実験の目的は、Ｔ−細胞媒介免疫応答に対するＬＤＶ−類縁体のインビボに おける利用の可能性を調べることであった。ここに示す結果は、ＡＣ−１６が実 際にＴ−細胞免疫の強力な阻害剤として動き、これにより、自己免疫疾患、アレ ルギー、およびＥＣＭを介するＴ−細胞の遁走が関与する他の過程の阻害が可能 であることを強く指示するものである。

マウスの化合物ＡＣ−４６処置による Ｏｘに対するインビボＤＴＨ反応の特異的阻害マウスのル　Ｏｘ媒　ＤＴＨ反応 の　１化合　耳　張　Ｘｌ０−２ｍｍ±ＳＤ　率％ＰＢＳ　２２±３０ ＡＣ−１に こに示した結果は、ＬＤＶ−模倣体の１日ＩＱ与（家、インビボ（こお１するＤ ＴＨ反応を箸明に阻害したが、、ＬＤＶ−ペプチドまたｌｉＰ［ｌｓＩこ（ま阻 害作用（よ認められないことを指示している。

髪ニス連 −Ｅｌｔｃｅｓ、Ｍ、Ｊ　ら（１９９０）　Ｃｅ１１．６０＋５７７−５８４− Ｆｃｒｇｕｓｏｎ、　Ｔ、　Ａ　ら（１９９＋）　Ｐｒｏｅ　Ｎａ１ｌ　Ａｃａ ｄ　Ｓｅｉ　Ｕ、Ｓ＾、、８Ｂ＋８０４２−［１０７６゜−Ｇｕａｎ、Ｊ、Ｌ、 　＆　Ｒ，Ｏ，１Ｉｙｎｅｓ　（１９９０）　Ｃｅ１１．６０＋５３−６１−　 ）Ｉｕｍｐｈｒｉｅｓ、　Ｍ、　Ｊ　ら（１９８６）　Ｊ、Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏｌ ｏｇｙ、１０３：２６３７−２６４７−Ｎａ３ｌｍａ、Ｙら（１９９（１）　１ Ｅｘｐ、１Ａａｄ、、１７２：１１８５−１１９２゜−Ｐｏｓｔ　ｉｇｏ、Ａ　 ら（１９９＋）　Ｅｕｒ　Ｊ　Ｉｍｍｕｎｏｌ、２１：２４３７−２４４５−　 Ｒｏｌｄａｎ、　Ｅら（１９９２）　Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、、１７５＋１７３９ −１７４７゜−Ｓｈｉｍｉｚｕ、Ｙ　ら（１９９０）　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、、 Ｉ４Ｓ：５９−６７゜０　′２５０　５００　．７５０　１α℃阻害剤濃度（μ ｇ／ｍｌ） Ｆｉｇ、コ フロントページの続き （５１）Ｉｎｔ、Ｃ１，６識別記号　庁内整理番号Ａ６１Ｋ　３１／１９５　Ａ ＤＯ ３８１００Ａ　Ｂ　Ｆ Ｃ０７Ｃ３２３１５２７４１９−４Ｈ ３２３／６０　７４１９−４Ｈ ＣＯ７Ｋ　５１０２３　ＺＮＡ　８３１８−４Ｈ（８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、 ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＥ、ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、　ＰＴ、　Ｓ Ｅ）、０Ａ（ＢＦ、ＢＪ、ＣＦ、ＣＧ、　ＣＩ、　ＣＭ、　ＧＡ、　ＧＮ、　Ｍ Ｌ、　ＭＲ，ＮＥ、　ＳＮ。

ＴＤ、ＴＧ）、ＡＴ、ＡＵ、ＢＢ、ＢＧ、ＢＲ，ＢＹ。

ＣＡ、ＣＨ，ＣＺ、ＤＥ、ＤＫ、ＥＳ、ＦＩ、ＧＢ、ＨＵ、ＪＰ、ＫＰ、ＫＲ， ＫＺ、ＬＫ、ＬＵ、ＭＧ、ＭＮ、ＭＷ、ＮＬ、ＮＯ，ＮＺ、　ＰＬ、　ＰＴ、　 ＲＯ，ＲＵ。

ＳＤ、ＳＥ、ＳＫ、ＵＡ、ＵＳ、ＶＮ Ｉ （７２）発明者　グリーンスプーン、ノアムイスラエル国　５１　９０５　ギバ ット　シュムエル、デビット　エラザー　ストリート（７２）発明者　ハーシュ コビズ、ラミイスラエル国へルズリャ、イガル　アロンストリート　２ （７２）発明者　アロン、ロネン イスラエル国　５３　３１７　ギバダイム、ヤポティンスキー　ストリート　３ ９

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．一般式Ｉ ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中，Ｘ１〜Ｘ６は互いに同種または異種であって，Ｃ，Ｎ，０またはＳ原子 であり，これらの少なくとも２個はＣであり，Ｘ１〜Ｘ６鎖はハロゲン，ヒドロ カルピル，オキソ，チオキソ，アミノおよびカルボキシルから選ばれる基によっ て任意に置換されていてもよく，またＸ１〜Ｘ６鎖もしくはその一部は異項環の 部分を形成してもよい）の化合物およびそれらの医薬的に許容される塩２．Ｘ１ ，Ｘ■およびＸ４はＣであり，Ｘ■およびＸ■はＮある「請求項１」に記載の化 合物 ３．式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表される「請求項２」に記載の化合物４．Ｘ１，Ｘ■，およびＸ４はＣであり ，Ｘ■はＳであり，Ｘ■はＮである「請求項１」に記載の化合物 ５．式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表される「請求項４」に記載の化合物６．Ｘ１，Ｘ■，およびＸ４はＣであり ，Ｘ■およびＸ■はＮであってＸ■に隣接するＣとともに１３員の異項環を形成 する，式▲数式、化学式、表等があります▼ で表される「請求項１」に記載の化合物７．ＬＤＶ配列の認識に依存する細胞ま たは分子相互作用を阻害する「請求項１〜６」のいずれかに記載の化合物 ８．「請求項１」における式Ｉの化合物またはその医薬的に許容される塩および 医薬的に許容される担体からなる医薬組製物