JPH07508643A

JPH07508643A - 哺乳動物メラニン細胞刺激ホルモン受容体およびその使用

Info

Publication number: JPH07508643A
Application number: JP5518441A
Authority: JP
Inventors: コン，ロジャー・ディー; マウントジョイ，キャスリーン・ジー
Original assignee: オレゴン州
Priority date: 1992-04-10
Filing date: 1993-04-07
Publication date: 1995-09-28
Anticipated expiration: 2019-03-31
Also published as: JP3512797B2; FI944735A; ATE255164T1; DE69333315D1; DE69333315T2; AU4047793A; CA2133843C; AU686099B2; WO1993021316A1; US6268221B1; EP0635054B1; CA2133843A1; EP0635054A1; FI944735A0; NO943775D0; US5849871A; NO316448B1; NO943775L; US5532347A

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】哺乳動物メラニン細胞刺激ホルモン受容体およびその使用発明の背景本発明は、ＩＲＱ１ＤＫ４１９２１−０３、ＩＲＱ１ＤＫ４３８５９−０１、およびＩＰ０１ＤＫ４４２３９−１０ＡＩのもと政府の支援を受けてナショナル・インスティチュート・オブ・ヘルスによって為されたものである。政府は本発明に一部の権利を有している。

１、発明の分野本発明は、哺乳動物種に由来するメラニン細胞刺激ホルモン受容体および該受容体に対応する遺伝子に関する。特に本発明は、ヒトメラニン細胞刺激ホルモン受容体遺伝子の単離、クローニングおよび配列決定に関する。さらに、本発明は、マウスメラニン細胞刺激ホルモン受容体遺伝子の単離、クローニングおよび配列決定に関する。本発明は、形質転換された真核細胞の培養物中でこれらメラニン細胞刺激ホルモン受容体を発現することができる真核性組換え発現構築物の構築、および該培養物中でのメラニン細胞刺激ホルモン受容体の製造に関する。本発明は、このような形質転換された真核細胞の培養物を用いて該メラニン細胞刺激ホルモン受容体の均質な組成物を製造することに関する。また、本発明は、新規かつ有用な薬物の特徴付けのために、メラニン細胞刺激ホルモン受容体を産生ずる細胞の培養物を提供するものである。さらに、本発明は、これらメラニン細胞刺激ホルモン受容体タンパク質に対する抗体および該タンパク質のエピトープに対する抗体を提供するものである。

２、発明の背景プロオピオメラノコルチン（ＰＯＭＣ）遺伝子産物はプロセシングされて多数の生物学的に活性なペプチドを与える。これらペプチドの２つであるα−メラニン細胞刺激ホルモン（ａＭｓＨ）および副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）は、それぞれメラニン細胞および副腎皮質の機能の制御によく理解された役割を有している。

しかし、これら両ホルモンは未知の機能を有する種々の形態で見い出されている。

また、メラノコルチンペプチドは他の組織（脳を含む）および免疫系において別系列の生物学的活性を有しており、そこで別個の薬理学を有する特異的な受容体に結合する［Ｂａｎｎｅｌａｎら、「プロホルモンとしてのペプチドホルモン」中、　Ｇ、１ｌａｒｔｉｎｅｓｉｉ（Ｅｌｌｉｓ　Ｉｌｏｒｗｏｏｄ　Ｌｔｄ、　：　Ｃｈｉｃｈｅｓｔｅｒ、　ＵＫ）、　５３−８２頁：総説については、Ｄｅｖ■ ｅｄ　＆　Ｊｏｌｌｅｓ、　１９８２．　Ｐｈｙｓｉｏｌ、Ｒｅｖ、　６２：　９７６−１０５９を参照コ。

これらペプチドおよびこれらペプチドの異なる生物学的活性の完全な理解には、これの対応する受容体の単離および特徴付けが必要である。いくつかの生化学的研究がこれまで当分野で報告されている。

Ｓｈｉｍｕｚｅ［１９８５，Ｙａｌｅ　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｍｅｄ、　５８：　５６１−５７０］は、メラニン細胞刺激ホルモンの生理学を議論している。

Ｔａｔｒｏ　＆　Ｒｅ１ｃｈｌｉｎ［１９８７，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ　１２１：　１９００−１９０７］は、ＭＳＨ受容体が鰯歯類の組織に広く分布していることを開示している。

５ｏｌｃａら０９８９．　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、　２６４二１４２７７−１４２８０ｊは、放射活性ラベルおよび光親和性ラベルしたＭＳＨ類似体に結合したマウスおよびヒトＭＳＨ受容体の分子量特性化を開示している。

Ｓｉｅｇｒｉｓｔら［１９９１，Ｊ、Ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ｒｅｓ、　１１：　３２３−３３１］は、受容体オートラジオグラフィーによるマウスメラノーマ組織上の受容体の定量を開示している。

本発明は、ヒトメラニン細胞刺激ホルモン受容体の遺伝子、この遺伝子のヌクレオチド配列およびその同族タンパク質の推定アミノ酸配列、メラニン細胞刺激ホルモン受容体の均質組成物、遺伝子発現の組織分布を測定するための核酸ハイブリダイゼーションプローブおよび方法、形質転換された真核細胞の培養物中で物の特徴付けに有用な該形質転換された真核細胞の培養物を包含する。また、本発明は、マウスに由来するヒトメラニン細胞刺激ホルモン受容体遺伝子の同族体を包含する。

図面の説明図１は、マウス（配列番号３）およびヒト（配列番号５）のメラニン細胞刺激ホルモン受容体のヌクレオチド配列を示す。

図２は、マウスおよびヒトのメラニン細胞刺激ホルモン受容体タンノ々り質のアミノ酸配列を比較するものである。

図３は、ヒト２９３細胞において発現されたマウスメラニン細胞束１ｌｌ１１ホルモン受容体への、メラニン細胞刺激ホルモン受容体アゴニストの結合を示す。

図４は、ノーザンブロソト・／’Ｌイブリダイゼーションによる、ヒト（）ぐネルＡ）およびマウス（パネルＢ）メラニン細胞刺激ホルモン受容体遺伝子発現の組織分布を示す。

発明の概要本発明は哺乳動物メラニン細胞刺激ホルモン受容体（ＭＳＨ″）遺伝子のクローニング、発現および機能の特性化に関する。本発明は、これら哺乳動物ＭＳＨ” をコードしている遺伝子のヌクレオチド配列およびこれら同族タンｌ々り質の推定アミノ酸配列、ならびにこれら遺伝子の発現の組織分布ノ（ターンを包含する。

さらに具体的には、本発明は、ヒトＭＳＨ’の単離、特性化および薬理学的使用、この受容体に対応する遺伝子、ヒ）ＭＳＨ”のＤＮＡ配列を含有する核酸ノーイブリダイゼーションプローブ、形質転換された真核細胞の培養初審こお０てヒトＭＳＨｑ＋発現することができる組換え真核発現構築物、ヒトＭＳＨｌｌＧ合成する該形質転換された真核細胞の培養物、ヒトＭＳＨ１１の均質な組成物、ならびにヒトＭＳＨ’およびそのエピトープに対する抗体に関する。

また本発明は、マウスＭＳＨ’の単離、特性化および薬理学的使用、この受容体に対応する遺伝子、マウスＭＳＨ物ＤＮＡ配列を含有する核酸ノ１イブ「ノダイゼーノヨンブローブ、形質転換された真核細胞の培養物においてマウスＭＳＨ’ を発現することができる組換え真核発現構築物、マウスＭＳＨ’を合成する該形質転換された真核細胞の培養物、マウスＭＳＨ’Ｏ均質な組成物、ブ；らびにマウスＭＳ）Ｉ″によびそのエピトープに対する抗体に関する。

本発明の目的は、哺乳動物ＭＳＨ’をコードしているヌクレオチド配列を含有する核酸を提供することである。本発明の好ましＬ）態様ｌこおＬＸで（ま、このヌクレオチド配列はヒトＭＳＨ″″＠コードする。別の好ましＬＩ様１こお（旭て１ま、このヌクレオチド配列はマウスＭＳＨ”をコードする。

本発明は、ヒトゲノムライブラリーから単離したＤＮＡ分子から導ＬλたヒトＭＳＨ’！容体をコードしているヌクレオチド配列（配列番号５）を含有する核酸を包含する。本発明のこの態様において、このヌクレオチド配列は、９５３ヌクレオチドの暗号配列、４６２ヌクレオチドの５°非非翻訳化列および２２０ヌクレオチドの３゛非非翻訳化列からなる１６３５ヌクレオチドのヒトＭＳＨ’ｍ伝子を含有する。

また本発明は、マウスＣｌｏｕｄｍａｎメラノーマ細胞からのＲＮＡを用いて作成したｃＤＮＡライブラリーから単離したｃＤＮＡ分子から導いたマウスＭＳ）（’をコードしているヌクレオチド配列（配列番号３）を含有する核酸を包含する。本発明のこの態様において、このヌクレオチド配列は、９４７ヌクレオチドの暗号配列、１５ヌクレオチドの５°非非翻訳化列および２９８ヌクレオチドの３°非非翻訳化列からなる１２６０ヌクレオチドのマウスＭＳＨ”ｌｌｌ壬子含有する。

本発明は、哺乳動物ＭＳＨ’、最も好ましくはマウスおよびヒトＭＳＨ”のヌクレオチド配列（配列番号３および５）を含有する核酸を包含し、これらヌクレオチド配列のアレル変異体およびそれらの対応するＭＳＨ’分子を包含する（これらは天然産物またはインビトロの化学的または遺伝子的修飾の産物のどちらであってもよ（、このような変異体のそれぞれは本明細書中に開示する対応ＭＳＨ’ （７）ヌクレオチド配列と実質的に同じヌクレオチド配列を有し、得られるＭＳＨ’分子は本明細書中に開示するヌクレオチド配列に対応するＭＳＨ’分子と実質的に同じ生物学的性質を宵する）。本発明において用いる「実質的に相同」なる用語は、このバラグラフに記載したようなアレル変異を包含する。

また本発明は、本明細書中に記載したマウス（配列番号３）およびヒト（配列番号５）ＭＳ）Ｔ’ａ伝子の完全暗号配列を含有するヌクレオチド配列から推定したマウス（配列番号４）およびヒト（配列番号６）ＭＳＨ’の予想アミノ酸配列からなるタンパク質を包含する。

別の態様において、本発明は３５．３キロダルトンのマウスＭＳＨ”ｔたはその誘導体の均質な組成物を包含するにこて、このＭＳＨ−たはその誘導体のアミノ駿配列は図２に示すマウスＭＳＨ−Ｒ配列を含有する（配列番号４）］。

別の態様において、本発明は３４．７キロダルトンのヒトＭＳＨ’ｌたはその誘導体の均質な組成物を包含する［ここで、このＭＳＨ’＊たはその誘導体のアミノ酸配列は図２に示すヒトＭＳＨ−Ｒ配列を含有する（配列番号６）］。

本発明は、これら配列から導かれるヌクレオチドおよびアミノ酸の両プローブを提供するものである。本発明は、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡクローンから単離したプローブ、ならびにそれから導かれる配列情報を用いて合成によって調製されたプローブを包含する。特に、本発明は、本発明の態様の１つであるｃＤＮＡまたはゲノムクローンを用いて調製されるオリゴヌクレオチド、二・ツク・トランスムーンヨンされたプローブ、ランダム・プライムされたプローブまたはインビトロで増幅されたプローブ、ならびに本発明のｃＤＮＡまたはゲノムクローン態様のヌクレオチド配列情報を用いて化学的に合成されたオリゴヌクレオチドおよび他の合成プローブを包含するが、これらに限定はされない。

本発明のさらに別の目的は、ヒトを含む哺乳動物の種々組織におけるＭＳＨ″″ 受容体の発現のパターン、量および程度を測定するための核酸／翫イブリダイゼ −７ヨンブローブとして用いるための哺乳動物ＭＳＨ’、好ましくはマウスまたはヒトＭＳＨ’の配列を提供することである。さらに、本発明の目的は、遺伝病の検出および診断に用いるためのマウスまたはヒトＭＳＨ’の配列から導かれる核酸ハイブリダイゼーシヨンプローブを提供することである。また、本発明の目的は、新規な関連受容体遺伝子の検出に用いるためのマウスまたはヒ）ＭＳＨ″ のＤＮＡ配列から導かれる核酸ハイブリダイゼーシヨンプローブを提供することである。

さらに本発明は、本発明のｃＤＮＡまたはゲノムクローン態様を構成するヌクレオチド配列情報を用いて調製された合成ペプチドを包含する。本発明は、ＭＳＨ ′特異的な抗体を製造するための抗原として用いることができるか、または薬物結合に対するＭＳＨ’分子の競合物質として用いることができるか、またはＭＳＨ”分子へのアゴニストもしくはアンタゴニストもしくはその類似体の結合の阻害物質の製造のために用いる天然または合成のペプチドを包含する。

本発明はまた、哺乳動物のＭＳＨ”、好ましくは、マウス又はヒトＭＳＨリンバク質に対する抗体及び哺乳動物のＭＳＨ”のエピトープに関する。本発明の目的は、哺乳動物のＭＳＨ’タンパク質に免疫的に活性な抗体を提供することである。哺乳動物のＭＳＮ”９ンパク質、最も好ましくはマウス又はヒトＭＳＮ’９ンバク質に対するモノクローナル抗体を提供することは、本発明の一部の目的である。

そのような抗体を生産するハイブリドーマセルラインを提供することもまた、本発明の目的である。非イムノグロブリン産生マウスミエローマセルライン及びＭＳＨ’抗体を発現するヒトセルラインを用いて免疫したマウス由来の膵臓細胞の開の融合の結果であるハイブリドーマセルラインを提供することは本発明の目的の一部である。本発明はまた、そのような抗体を生産するハイブリドーマセルラインを提供し、そのような抗体を生きているマウスに注射することにより、マウスからそのような抗体を含む腹水溶液を提供することに関する。

本発明はまた、哺乳動物のＭＳＨ’、好ましくは、マウス又はヒトＭＳＨ’に免疫的活性なモノクローナル抗体の治療的効果量及び医薬上許容される担体を含む医薬組成物を提供する。

本発明のさらなる目的は、哺乳動物のＭＳＨ’のエピトープを提供することであり、ここでエピトープは哺乳動物のＭＳＨ”に対し特異的な抗体に対して免疫的に活性である。好ましい具体例においては、エピトープはマウス又はヒトＭＳＨ ″′タンパク質から誘導される。

本発明の他の目的は、哺乳動物のＭＳＨリンバク質に対して免疫的に活性なキメラ抗体を提供することにある。好ましい具体例では、キメラ抗体はモノクローナル抗体である。好ましい具体例では、ＭＳＨ’はマウス又はヒトＭＳＨ”である。

本発明は哺乳動物のＭＳＨ″、好ましくはマウス又はヒトＭＳＨ”のヌクレオチド配列及び形質転換された真核細胞の培養内で、マウス又はヒトＭＳＨ’の合成を指示するのに十分な配列を含む組換発現構築物を提供する。好ましい具体例では、組換発現構築物は、プラスミドｐｃＤＮＡＩ／ｎｅｏ由来のプラスミド配列及びマウス又はヒトＭＳＨ”遺伝子のｃＤＮＡ、又はゲノムＤＮＡを含む。この発明は、具体例において、マウス又はヒトＭＳＨ”のゲノム又はｃＤＮＡクローンのヌクレオチド配列を本質的に含む組換え発現構築物を含み、これは形質転換された真核細胞の培養におけるそれらの発現を提供する。

本発明の目的はまた、そのような組換え発現構築物を用いて形質転換された形質転換真核細胞の培養を提供し、それは、哺乳動物の、好ましくはマウス又はヒトＭＳＨ’タンパク質を合成する。好ましい具体例では、本発明はマウスＭＳＨ５を合成するヒト２９３細胞を提供する。さらには好ましい具体例では、本発明はヒトＭＳＨＲタンパク質を合成するヒト２９３細胞を提供する。

本発明はまた、哺乳動物の、好ましくはマウス又はヒトＭＳＨ’のタンパク質合成を含み、形質転換された真核細胞の培養由来の哺乳動物のＭＳＨ”を含む膜の合成を含む。好ましい具体例では、マウスＭＳＨ’タンパク質を含む細胞膜は、マウスＭＳＨ″′の合成を指示する組換え発現構築物を用いて形質転換された２９３細胞培養から単離される。もう一つの好ましい具体例では、ヒトＭＳＨ”を含む細胞膜は、ヒトＭＳＨ’の合成を指示する組換え発現構築物を用いて形質転換された２９３細胞培養から単離される。本発明の目的はまた、哺乳動物の、好ましくはマウス又はヒトＭＳＨ’を、新規なアデノノンアゴニスト及びアンタゴニスト化合物のインビトロ系におｊプるスクリーニングに使用するために提供することである。好ましい具体例では、マウスＭ　Ｓ　Ｈ’を含む膜生成物は、形質転換された真核細胞の培養由来であり、種々の新規なアデノノンアゴニスト及びアンタゴニスト化合物のインビトロ系における薬物解離特性を測定するために使用される。もう一つの好ましい具体例では、ヒトＭＳＨ”を含む膜調製物は、形質転換された真核細胞の培養由来であり、種々の新規なアデノノンアゴニスト及びアンタゴニスト化合物のインビトロ系における薬物解離特性を測定するために使用される。これらの特性は次に、既知のマウス又はヒトＭＳＨＲアゴニスト及びアンタゴニストの結合特性を比較することにより、そのような新規な化合物を特徴づけるために使用される。

本発明はまた、ＭＳＨＰアゴニスト及びアンタゴニストの類似物のインビトロ系における検出にとって有用であり、類似物は既知のまたは不知のものでも、天然に存在するか又は薬物という具体例としてのどちらでもよい。

本発明の目的は、ＭＳＨ’アゴニスト及びアンタゴニストまたはそれらの類似物、類似物は既知のまたは不知のものでも、天然に存在するか又は薬物という具体例としてのどちらでも、を定量する方法を提供することである。さらに本発明の目的は、血液、唾液、精液、脳を髄液、血漿、リンパ又はその他の体液中の、そのようなアゴニスト及びアンタゴニストまたはそれらの類似物を検出する方法を提供することである。

本発明の特に好ましい具体例は、以下の好ましい具体例のさらなる詳しい説明及び請求の範囲から明らかになる。

好ましい態様の詳しい説明本明細書中、「メラニン細胞（メラノサイト）刺激ホルモン受容体」とは、第１図（ＳＥＱ　１０　Ｎｏ・３）に示されたヌクレオチド配列によってコードされるタンパク質と実質的にホモローガスなタンパク質及び実質的に同じ生化学活性を有するタンパク質を意味する。この定義はメラニン細胞刺激ホルモン受容体配列における天然のアリル変異体を含むことを意図している。本発明のクローン遺伝子はいろいろな起源種の、例えば、マウス、ラット、うさぎ、猫及びヒト起源のＭＳＨ１＋をコードしてもよいが、好ましくは、哺乳動物の、最も好ましくはマウス又はヒト起源の受容体をコードする。

本発明により提供される核酸ハイブリダイゼーシヨンプローブは第１Ａ図（配列番号３）及びＩＢ（配列番号５）のＤＮＡ配列と実質的にホモローガス（相同的）なりＮＡ配列からなる。核酸プローブは本分野において周知の技術、例えば逆転写酵素−ポリメラーゼ鎖反応産物ＤＮＡに対するノーザンブロットハイプリダイゼーノヨン、インジツ系（ｉｎ　５ｉｔｕ）ハイブリダイゼーション及びサザーンハイブリダイゼーションなど（これらに限定されない）を使用する、細胞及び組織におけるＭＳＨ’遺伝子発現の検出に有用である。本発明により提供されるプローブは、それらから誘導されるオリゴヌクレオチドプローブを含み、これらは有用であり、また、哺乳動物の、特にヒト、ゲノムＤＮＡのサザーンハイブリダイゼーションにとって有用であり、ある遺伝子障害と関係する制限断片長の多形性（ＲＦＬＰ）のスクリーニングに有用である。

クローンされた遺伝子から遺伝子工学によりＭＳＨ’のようなタンパク質を生産することは周知である。例えば、Ｂｅ１ｌらの米国特許第４．７６１．３７１号のカラム６ライン３からカラム９ライン６５を参照（本明細書中、引用された全てのＵ、Ｓ。

特許引例は本明細書中引例により挿入されている）。以下の討論は、従って、本分野の概観を意図し、本分野の全貌をあられすことを意図してはいない。

本発明の開示の視野においては、ＭＳＨ’をコードするＤＮＡは化学合成によって、適切な細胞又はセルライン培養からのｍＲＮＡの反対の転写物のスクリーニングによって、適切な細胞からのゲノムライブラリーのスクリーニングによって又はこれらの方法の混合によって、以下例示するように得られる。ｍＲＮＡ又はゲノムＤＮＡのスクリーニングは、本明細書にて提供されるＭＳＨ’遺伝子配列の情報から生産されたオリゴヌクレオチドプローブを用いて実行できる。プローブは蛍光基、放射能原子又は化学発光基のような検出できる基を用いて既知の方法に従ってラベルしても良く、通常のハイブリダイゼー７：Ｉン分析において以下の実施例にてさらに詳しく記載するように使用される。その他、ＭＳＨ’遺伝子配列は、本明細書にて提供されるＭＳＨ”遺伝子配列から生産されるＰＣＲオリゴヌクレオチドブライマーを用いるポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）を用いて得ても良い。Ｍｕｌｌｉ５らの米国特許第４．６８３．１９５号及びＭｕｌｌｉｓの米国特許第４．６８３．２０２号参照。

ＭＳＨ’をコードするＤＮＡ配列を含む組換え発現構築物を用いて形質転換された宿主細胞において、ＭＳＨＲは合成することができる。このような組換え発現構築物はまた、複製可能なりＮＡ構築物であるベクターを含んでも良い。ベクターは本明細書中、ＭＳＨ’をコードするＤＮＡを増幅すること及び／又はＭＳＨ３をコードするＤＮＡを発現することのいずれかのために使用される。この発明の目的のために、組換え発現構築物は、複製可能なりＮＡ構築物であり、そこでは、適切な宿主においてＭＳＨ’の発現を効果的にさせ得る適切な制御配列とＭＳＨ’をコードするＤＮＡ配列が作動可能に連結している。そのような制御配列の必要性は選択された宿主及び選択された形質転換方法に依存して変化するであろう。一般に制御配列には転写プロモーター、転写を制御する任意のオペレーター配列、適切なｍＲＮＡリボゾーム結合部位をコードする配列、並びに転写及び翻訳の終止を制御する配列が含まれる。増幅ベクターは発現制御ドメインを必要としない。必要なのは、宿主での複製能力のみであり、通常は複製起点及び形質転換体の認識を容易にするための選択遺伝子が付与される。

本発明を実施するうえで有用なベクターにはプラスミド、ウィルス（ファージなど）、レトロウィルス、及び組込み可能なりＮＡ断片（即ち、相同組換えによって宿主のゲノムに組込むことのできる断片）などがある。ベクターは複製し、宿主のゲノムとは独立して機能し、あるいはある場合にはそのゲノム自身に組込むことができる。適当なベクターは、目的の発現宿主と適合する種由来のレプリコン及び制御配列を含有する。好ましいベクターはプラスミドｐｃＤＮＡＩ／ｎｅＯである。形質転換宿主細胞は、組換えＤＮＡ手法を使用して作成され、哺乳動物ＭＳＨ’を含有する組換え発現構築物によって既に形質転換又はトランスフェクトされた細胞である。形質転換宿主細胞は元から哺乳動物ＭＳＨ’を発現できてもよいが、核酸ハイブリダイゼーションプローブＤＮＡをクローニングし又は増幅する目的で形質転換される宿主細胞はそのレセプターを発現する必要はない。

哺乳動物ＭＳＨ’は発現されれば、通常、宿主細胞の膜内に局在化する。

ＤＮＡ領域は互いに機能的に関連する場合、作動可能に連結する。例えば、プロモーターはコード化配列の転写を制御するなら、その配列と作動可能に連結しており、リボゾーム結合部位は翻訳が起こるような位置にあるなら、コード化配列と作動可能に連結している。一般には、作動可能に連結とは隣接を意味し、リーダー配列の場合は、隣接しかつ同じ翻訳解読枠にあることを意味する。

組換えＭＳＨ”合成には、多細胞生物由来の細胞の培養物が望ましい宿主である。原理的には、を推動物又は無を推動物の由来を問わず、高等真核生物細胞培養物を利用できる。しかし、実施例にて例示しているように哺乳動物細胞が好ましい。このような細胞の細胞培養物中における増殖はルーチン作業となっている。

Ｔｉ５ｓｕｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ、アカデミツク・プレス、　Ｋｒｕｓｅ　＆　Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ、編者（１９７３）を参照のこと。有用な宿生セルラインを例示すれば、ヒト２９３細胞、ＶＥＲ○及びＨｅＬａ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）セルライン、及びＷ１１３８、ＢＨＫ、ＣＯ３−７、ＣＶ、及びＭＤＣＫセルラインなどが挙げられる。ヒト２９３細胞が好ましい。このような細胞のための発現ベクターは、（要すれば）複製起点、発現させようとする遺伝子の上流に位置するプロモーター、並びにリボゾーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位（イントロン含有ゲノムＤＮＡを使用する場合）、ポリアデニル化部位及び転写終止配列を含有するのが普通である。

複製起点はＳＶ４０または他のウィルス起源（例、ポリ−オーマ、アデノウィルス、ＶＳｖまたはＭＰＶ）からの外因性複製起点を含むようにベクターを構築するか、あるいは宿主細胞の染色体複製機構から供給される。ベクターが宿生細胞の染色体に組み込まれれば、後者で十分である。

本発明は形質転換された真核性細胞によって生産された哺乳動物ＭＳＨＲ９ンパク質の均質な組成物に関する。そのような均質な組成物は、そのような均質な組成物の９０％を占める哺乳動物ＭＳＨＲタンパク質からなるものと意図されている。

本発明に従い、クローン化遺伝子から生産される哺乳動物ＭＳＨ’タンパク質はＭＳＩＰ活性のアゴニスト化合物のスクリーニング、または溶液（例、血漿または血ｆｆ４）中のＭＳＨ”ゴニストまたはアンタゴニスト薬物の量の定量に用いることができる。例えば、宿主細胞を本発明の組換え発現構築物で形質転換し、該宿主細胞にＭＳＨ”を発現させ、細胞を溶解し、これらの細胞から得た膜（メンプラン）を用い、ＭＳＨ’結合活性に関して化合物をスクリーニングする。そのような工程を実施し得る競合的結合アンセイは当業者に周知である。通常はＭＳＨ２を発現しない宿主細胞を選択することで、ＭＳＨＲを含有する純粋な膜標品を得ることができる。さらに、本発明のベクターで宿主細胞を形質転換することにより、ＭＳＨ”アゴニストおよびアンタゴニストを同定することができる。

そのような細胞から得た膜は、薬物の解離定数が監視される結合研究に用いることができる。

本発明の組換え発現構築物は通常はＭＳＨＲを発現しない形質転換体に以後は該受容体を発現させるための、分子生物学において有用である。そのような細胞は受容体結合アッセイに有用な細胞膜標品の製造中間体として有用であり、従って、薬物のスクリーニングに有用である。さらに、本発明の組換え構築物を含有する遺伝子およびベクターは遺伝子治療に有用である。そのような目的のためには、米国特許第４，６５０．７６４号（Ｔｅｍｉｎ　＆　Ｖａｔａｎａｂｅ）または米国特許第４゜８６１．７１９号（Ｍｉｌｌｅｒ）に記載のレトロウィルスベクターを用い得る。本発明のクローン化遺伝子、またはそのフラグメントは相同的組換えまたは部位特異的突然変異誘発などを行う遺伝子治療にも有用である。

一般的な記述は、Ｔｈｏｍａｓ＆　Ｃａｐｅｃｃｈｉ、　１９８７．　Ｃｅ１ｌ　５１：　５０３−５１２；　Ｂｅｒｔｌｉｎｇ、　１９ｇ？、　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ　qｅｐｏｒｔｓ　７：　１０７−１１２；　Ｓｍ１ｔｈｉｅｓ　ｅｔ　ａｌ、、　１９８５．　Ｎａｔｕｒｅ　３１７：　２３０−２３４を参照。

本発明のオリゴヌクレトチドは組織内でのＭＳＨ受容体遺伝子発現をプローブするための診断道具として有用である。例えば、組織を検出可能な基を有するオリゴヌクレオチドプローブを用い、下記の実施例により詳細に説明するように、該受容体の固有の発現またはそれに関連する病理学的な状態を検査するために、通常のオートラジオグラフィー技術により系中でプローブすることができる。さらに、これも下記実施例に記載のごとく、ＭＳＨ”遺伝子の存在または不在、およびそれに関連した病理学的状態の可能性を調べるために染色体をプローブすることができる。

本発明はまた、免疫学的に哺乳動物ＭＳＨ″″と反応性の抗体をも提供する。本発明の抗体は哺乳動物ＭＳＨ”または哺乳動物ＭＳＨＲのエピトープを発現する細に用いることができる動物には、牛、羊、豚、マウス、ラット、兎、ハムスター、山羊および霊長類からなる種の個体が含まれる。接種に好ましい動物は１歯類（マウス、ラット、ハムスターを含む）および兎である。最も好ましい動物はマウスである。

そのような接種、またはなんらかの本発明で用いる他の方法に用いることができる細胞には、天然状態で哺乳動物ＭＳＨゝを発現する任意の細胞系、あるいは分子または遺伝子工学の結果として哺乳動物ＭＳＨ”ｔたはそのエピトープを発現するか、物理的、生化学的または遺伝子的な方法で哺乳動物ＭＳＨ”（７）発現を増大するよう処理された任意の細胞または細胞系が含まれる。好ましい細胞はヒト細胞であり、最も好ましい細胞は、哺乳動物ＭＳＨ’−）コードする組換え発現ベクターで形質転換され、哺乳動物ＭＳＨ’ｌｌ伝子産物を発子産物ヒト２９３細胞である。

本発明は哺乳動物細胞、好ましくはヒトまたはマウス細胞の表面に存在する哺乳動物ＭＳＨ”であるエピトープと免疫学的に反応性の、モノクローナル抗体を提供する。これらの抗体は当業者周知の方法と技術を用いて作成される。　゛本発明のモノクローナル抗体は、これもまた本発明が提供する、当業者既知の方法で作成されるハイブリドーマ細胞系によって産生される。ハイブリドーマ細胞系はミエローマ細胞系の個々の細胞を哺乳動物ＭＳＨＲを発現する上記の哺乳動物細胞（ヒト細胞を含む）で免疫された動物の胛細胞と融合させることにより調製される。本発明に用いられるミエローマ細胞系には、マウス、ラット、ハムスター、霊長類およびヒトのミエローマから誘導された細胞系が含まれる。好ましいミエローマ細胞系はマウスから得られたものであり、最も好ましいマウスミエローマ細胞系はＰ３Ｘ６３−Ａｇ８．６５３である。免疫後、膵臓を摘出するに好適な動物は、ラット、マウスおよびハムスターであり、好ましくはマウスであり、最も好ましくはＢａ１ｂ／ｃマウスである。牌細胞とミエローマ細胞を、当業者周知の多くの方法を用いて融合させる。そのような方法は、これらに限定されないが、不活化センダイウィルスとのインキュベーションおよびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の存在下でのインキュベーションを含む。最も好ましい細胞融る。インビトロ増殖した細胞培養の上清液からハイブリドーマ細胞系によって産生されたモノクローナル抗体を収穫するか、あるいはハイブリドーマ細胞を動物好ましくはマウスに、皮下および／または腹腔内注射し、血液および／または腹水からモノクローナル抗体を得る。

本発明のモノクローナル抗体は当業者に周知の遺伝子組換え技術によっても生産することができ、本発明はそのような方法で製造され、哺乳動物ＭＳＨ’のエピトープと免疫学的に反応性の抗体を包含するものである。

本発明は哺乳動物ＭＳＨ’のエピトープと免疫学的に反応性の抗体のフラグメントを包含するものである。そのようなフラグメントは多くの方法で製造することができ、例えばタンパク質加水分解的な開裂、そのようなフラグメントの化学合成または遺伝子工学的な方法によるそのようなフラグメントの調製などがあるが、これらに限定されない。本発明はまた、当業者周知の方法で製造された哺乳動物ＭＳＨ″′のエピトープと免疫学的に反応性の１本鎖抗体をも包含する。

本発明はまた、哺乳動物ＭＳＨ’分子中に存在する配列および／または配列の立体配座からなる哺乳動物ＭＳＨＲのエピトープをも包含する。このエピトープは天然に存在しているか、哺乳動物ＭＳＨ１１分子のタンパク質加水分解的開裂およびエピトープ含有ペプチドの単離によるものであるが、あるいは当業者周知の方法によるエピトープ含有ペプチドの合成によって得られたものであってよい。

本発明は又、遺伝子工学の技術の結果として産生されたエピトープペプチドおよび遺伝子工学的に操作された原核性または真核性細胞によって産生されたエピトープペプチドを包含する。

本発明はまた、哺乳動物ＭＳＨ”であるエピトープに対する免疫学的に活性な軽鎖と重鎮ペプチドからなるキメラ抗体を包含する。この本発明のキメラ抗体は天然に存在する抗体から導かれるもの、並びに当業者周知の遺伝子工学の方法で製造されるキメラ抗体とを含む。

以下の実施例は本発明およびその様々な使用の具体的な態様を例示するものである。それらは説明の目的のためにのみ記載されており、本発明を制限するものと考えられるべきでない。

実施例１縮重オリゴヌクレオチドブライマーを用いるヒトメラノーマｃＤＮＡライブラリーのランダムＰＣＲ増幅による、αＭＳＨ受容体プローブの単離新規なＧ−タンパク質とカップリング（結合）した受容体をクローンするために、ヒトメラノーマｃＤＮＡをポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）によるランダムクローニング実験のテンプレートとして用いた。ＰＣＲは、Ｇ−タンパク質と結合した受容体の、推定の第３および第６トランスメンプラン領域に対応する１対の縮重オリゴヌクレオチドブライマーを用いて行った（Ｌｉｂｅｒｔ　ｅｔ　ａｌ、、　１９８９．５ｃｉｅｎｃｅ、　２４４：　５６９−７２：　Ｚｈｏｕ　ｅｔ　ａｌ、’、　１９９０．　Ｎａｔｕｒｅ　３４７：７６−８０）　。この実験で■■ ＰＣＲ産物をヌクレオチド配列決定で特性化した。新規なＧ−タンパク質結合受容体を表す２つの新規な配列が得られた。

ＰＣＲ増幅は以下のようにして行った。全ＲＮＡをヒトメラノーマ腫瘍試料からグアニジウムチオノアナート法（Ｃｈｉｒｇｖｉｎ　ｅｔ　ａｌ、、　１９７９．　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　１８５２９４−５２９９）で得た。全ＲＮＡから不ズミ逆転写酵素（ＢＲＬ、　Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、１ｌＤ）を用い、オリゴ−ｄＴプライミング［Ｍａｎｉａｔｉｓ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｍｏ１ｅｃｕｒａｌ　Ｃｌｏｎｉｎｇ；＾Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ　（Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ、　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐ窒奄獅■@［Ｉａｒｂｏｒ、　ＮＹ）、１９９０］により２重鎮ｃＤＮＡを合成した。次いで、メラノー７ＣＤＮＡ混合物を以下の配列を有する縮重オリゴヌクレオチドブライマー５００ピコモルを用い、５０ｗＭ　Ｔｒｉｓ−Ｈｄ、ｐＨ８，３，２，５ｍＭ　ＭｇＣｈ、０．０１％ゼラチン、各２００μＭの５ＮＴＰ、および２．５単位のＴａｑポリメラーゼ（Ｓａｉｋｉ　ｅｔ　ａｌ、、　１９８８．５ｃｉｅｎｃｅ　２３９：　４８７−４９１）中で４５サイクルのＰＣＲ増幅に付した。

プライマーＩＩＩ（センス）ＧＡＧＴＣＧＡＣＣＴＧＴＧ（Ｃ／Ｔ）Ｇ（Ｃ／Ｔ）　（Ｃ／Ｇ）ＡＴ（Ｃ／Ｔ）　（＾／Ｇ）ＣＩＩＴ（Ｇ／Ｔ）ＧＡＣ（Ｃ／＾）Ｇ（Ｃ^Ｇ）ＴＡＣ配列番号１およびプライマーＶｌ（アンチセンス）ＣＡＧＡＡＴＴＣＡＧ（Ｔ／＾）ＡＧＧＧＣＡＩＣＣＡＧＣＡＧ＾Ｉ（Ｇ／ＣＸＧ／＾ＸＴ／Ｃ）ＧＡ人配列番号２これらのプライマーはＲｅ５ｅａｃｈ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　Ｉｎｃ、　（Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌ、　ＡＬ）によって商業的に合成されていた。各ＰＣＲ増幅サイクルは９４℃で１分間のインキュベーション（変性）、４５℃で２分間のインキュベーション（アニーリング）および７２℃で２分間のインキュベーション（伸長）からなる。

ＰＣＲ反応の増幅産物をフェノール／クロロホルムで抽出しエタノール沈殿した。ＥｃｏＲＩおよび５ａｌＩで消化した後、１．２％アガロ−ゲル上でＰＣＲ産物を分離した。このゲルの３００塩基対（ｂ　ｐ）の大きさのＰＣＲ産物に対応する切片を切り出しガラスピーズとヨウ化ナトリウムで精製し、次いで、挿入物をｐＢＫＳクローニングベクター（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、　ＬａＪｏｌｌａ、　Ｃ＾）にクローンした。

合計１７２の挿入物を含有するそのようなｐＢＫＳクローンを５ｅｑｕｅｎａｓｅ（Ｕ、　Ｓ。

Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｒｐ、、　Ｃ１ｅｖｅｌａｎｄ、　Ｏ１＋）を用い、ジデオキシヌクレオチド鎖終結法（Ｓａｎｇｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、　１９７７、　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、　ＵＳ＾７４：　５４６３− ５４６７）で配列■■ した。他のＧ−タンパク質と結合した受容体にホモローガスな２つのタイプの配列が同定された。

実施例２マウスのα−ＭＳＨ受容体ｃＤＮＡの分離および配列分析クローン化されたプローブに対応する完全な長さのｃＤＮＡを単離するためのクロードマンメラノーマのｃＤＮＡライブラリーをスクリーンニングするのに、実施例１において分離されたプローブを使用した。以下のようにスクリーンニングした５Ｘ１０’クローンのライブラリーから、１つのクローンを分離した。このクローンは、２．６キロベース（ｋｂ）のインサートを含有していた。完全なローＰＣＲプローブをランダム−ブライミング法［ストラタジエーン・プライメルト（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ　Ｐｒｉｍｅｌｔ）、＃　３００３８７．　ラジョーラ（Ｌ　ａ　Ｊ　ｏｌＬａ）、カリフォルニア］によりラベルし、これを使って、λＺＡＰベクター（ストラタジエーン）中に構築したクロードマンメラノーマセルラインのｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングした。ライブラリースクリーニングを中程度のストリンジエンンー（４０％ホルムアミド、ＬＭ　ＮａＣ１，５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ −ＨＣｌ、ｐＨ７，５，０，１％ピロリン酸ナトリウム、０．２％ドデシル硫酸ナトリウム、１１００ｊ／■１サケ精子ＤＮＡ、ＩＯＸデルハルト溶液）で、Ｂ　ｕｎｚｏｖらのＮａｔｕｒｅ旦旦旦（１９８８゜７８３〜７８７）に記載されているような、文献公知の技法を用いて行った。１つのｃＤＮＡクローンを同定（ｕ＋ｅｌＡと命名した）し、その２．６ｋｂ　ｃＤＮＡインサートを分離し、ｐＢＫＳ（ストラタジェーン）中にサブクローンした。その結果得られたプラスミドをｐｗｅｌＡと呼んだ。ヌクレオチド配列分析とホモロノー比較を、Ｉ　ｎｔｅｌｌｉｇｅｎｅｔｉｃｓ　Ｉ　ｎｃ、　（Ｍｏｕｎｔａｉｎ　Ｖｉｅｗ、カリフォルニア）により提供されたソフトウェアを有する０Ｈ３Ｕコンピユーターシステムで行った。

ｐ關ｅｌＡのヌクレオチド配列（上記のように分離されたｃＤＮＡクローン）を図ＩＡ（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ＋３）に示す。このｃＤＮＡの最も長いオープンリーディングフレームは、計算上の分子量が３５．３キロダルトン（ｋＤ）である３１５個のアミノ酸の予想されたタンパク生成物をコードする。推定したアミノ酸配列をマウスのＭＳＨ−Ｒとして図２（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：４）に示す。１文字表示のアミノ酸コードを使用した［Ｇ、　Ｚｕｂａｙ、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　（２ｄ版）　、１９８８（ＭａｃＭｉｌｌｅｎ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ：ニューヨーク）３３頁を参照］。大文字は、示したりセブタータンパクに共通のアミノ酸残基を示す。小文字は、分枝残基を示す。

推定されたアミノ酸配列の疎水性分析（Ｋｙｔｅ　＆　Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ、１９８２．　Ｊ。

Ｍｏ１．　Ｂｉｏｌ、１５７　：　１０５〜１３２）を行った結果、プロティンが２０〜２６個のアミノ酸アビース（ａｐｉｅｃｅ）からなる７つの疎水鎖を含むことが分かった。推定上の膜透過性領域の上に線を引き、ローマ数字で表記した。

実施例２のようにして分離した推定上のマウスのα−ＭＳＨ’のｃＤＮＡを生化学的に特徴付けるため、またこれがα−ＭＳＨリセブターをコードすることを確かめるため、ｍｅｌＡを哺乳動物の発現ベクター中にクローンし、このベクターをヒト２９３細胞にトランスフェクトすると、推定されるα−ＭＳＨ”リセプターを細胞表面に発現するセルラインが生成した。このような細胞および該細胞から分離した膜を使って以下に述べる特性化を行った。

２、ｌｋｂのフラグメント中に含まれる關ｅｌＡに由来するα−ＭＳＨ”のｃＤＮＡの全コード領域をｐＢＳＫから切り取り、ｐｃＤ　Ｎ　Ａ　Ｉ　／ｎｅｏ発現ベクターのＢａｍＨｌ　／　Ｘｈｏ　Ｉ　（Ｉ　ｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、サンディエゴ、カリフォルニア）内へサブクローンした。その結果得られたプラスミドをｐｃＤＮＡ−ｍｍｅｌＡと呼んだ。ｐｃＤＮＡ−關ｅｌＡプラスミドＤＮＡをＣｓＣ１グラジェント超遠心の１サイクルで大規模に製造し、リン酸カルシウム法を用いて、２０μｇｐｃＤＮＡ−龍ｅｌＡ　ＤＮＡを各々２９３細胞＋７１１００　＋ｎ皿ｃＤ中へトランスフェクトした［Ｃｈｅｎ　＆　Ｏｋａｙａｍａ、１９８７゜Ｍｏ１．Ｃｅ１１．Ｂｉｂ１．７　：　２７４５〜２７５２を参照〕。トランスフェクション後、１０％牛血清を追加したＣＭＥＭ培地中、３％ＣＣｈ雰囲気下に３７℃で細胞を培養した。１００　ｊｇ／ｍｌの濃度でネオマイシン（Ｇ４１８　；ＧＩＢＣＯ）を使用して選択を行った。トランスフェクション後、７２時間で選択を開始し、３週間続けた。

α−ＭＳＨ”は、Ｇ−プロティンをカップリングし、アデニルシクラーゼを活性化し、細胞内ｃＡＭＰレベルを上げることで知られている［Ｂｕｃｋｌｅｙ　＆　Ｒａｍ５〜５５４１　；Ｍｅｒｔｚ　＆　Ｃａｔｔ、１９９１．　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、　ＵＳた特性を、以下に記載した発現ベクターでトランスフェクトされた細胞コロニーにおけるα−ＭＳＨリセプターの発現分析に使用した。細胞（〜１×１０６）を６穴皿に入れ、１％牛血清アルブミン（ＢＳＡ）と０．５ｓＭ　ＩＢＭＸ（ホスホジェステラーゼ阻害剤）を含有するＤＭＥＭで１回洗浄した後、いろいろな濃度のメラニン親和性ペプチド、α−ＭＳＨ，β−ＭＳＨ，γ−ＭＳＨ５Ｎｌｅ’と類似のＭＳＨペプチド、Ｄ−Ｐｈｅ ’−ａ−ＭＳＨ（ＮＤＰ−ＭＳＨ）、およびＡＣＴＨと共に、３７℃で４５分間インキュベートした。ホルモン処理に続いて、細胞をリン酸緩衝食塩水で２回洗浄し、６０％エタノール１■１で細胞を分解することにより、細胞内ｃＡＭＰを抽出した。高親和性ｃＡＭＰ結合タンパクから［８−３Ｈ］　ｃＡＭＰを追い出すｃＡＭＰの能力を測定するアッセイ（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を利用し、細胞内ｃＡＭＰａ度を測定した［Ｇｉｌ＋＋＋ａｎ、１９７０．　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ。

Ｓｃｉ、ＵＳＡ旦ユニ３０５〜３１２を参照］。

これら実験の結果を図３に示す。横軸は各々のホルモンの濃度を示し、縦軸は各々を処理することにより得られる基本的分子内ｃＡＭＰ濃度に対する％を示す。

点は２回のインキョベーション平均を示す。標準偏差はどのデータの点においても１５％を超えなかった。試験したペプチドはいずれも、ベクターのみを含む細胞中では細胞内ｃＡＭＰに何ら変化を与えなかった。ネズミのα−ＭＳＨリセプターを発現する細胞は、メラニン親和性ペプチドに応答し、分子内ｃＡＭＰの濃度を２ないし３倍上昇させた。これは、これらのペプチドをタラウドマンセルライン中で惹起されたｃＡＭＰのレベルに類似していた［Ｐａｖａｌｅｋ、１９８５．　Ｙａｌｅ　Ｊ、Ｂｉｏｌ、　Ｍｅｄ、５８　：　５７１〜５７８を参照］　。ａ−ＭＳＨ（２，ＯＸ　１０−”Ｍ）、ＡＣＴＨ（８，０Ｘ１０−’）および解強力ＭＳＨアナローグ、ＮＤＰ−ＭＳ　Ｈ（２，８×１０−目Ｍ）に関して測定したＥＣ，。値は、報告されている値に近似している［Ｔａｔｒｏら、１９９０．Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、５０　：　１２３７〜１２４２を参照］。予測したように、γ−ＭＳＨはほとんど、あるいは全く活性ではなかったのに対し、β −ＭＳＨペプチドは、α−ＭＳＨ”に比敵するＥ　Ｃｓ　ｅ値を有しており［Ｓ　ｌｏｍｉｎｓｋｉら、１９９２．Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ、５０　：１１０３〜１１０８を参照］、これにより、メラニン細胞のα−ＭＳＨレセプターであることを確認した。

ネズミのメラニン細胞α−ＭＳＨレセプター遺伝子に対するヒトの相当物を分離するために、実施例１に記載したように分離したヒトのＰＣＲフラグメントを使って、ヒトのケノムライブラリーを高いストリンジエンンー（５０％ホルムアミド、４２℃）でスクリーニングした。２つのＰＣＲフラグメントに相当する２つの異なる配列を分離した。これらは、非常に関連の深いＧタンパクとカップリングするレセプターをコードしていることが分かった。これらのゲノムクローンの配列を実施例２と同様に配列決定した。これらのゲノムクローンの１つは、ヒトＭＳＨレセプターをコードしていることが分かった（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５）。

このヒトＭＳＨレセプターは、予想されたアミノ酸配列（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６）をもっており、マウスα−ＭＳＨレセプターｃＤＮＡ配列と７５％が等しく、コリニア−である（図２）。これは、ヒトＭＳＨ−Ｒと名付けた。ヒトＭＳＨ ”の予測される分子量は、３４．７ｋＤである。

マウスα−ＭＳＨ”の予測されるアミノ酸配列（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：４）およびヒトＭＳＨゝ（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６）を図２に示した。これらの配列が多くの特殊な特性をもつＧタンパクとカップリングするレセプターの新規なサブファミリーとしてのメラニンコルチンレセプターを決めている。このメラニンコルチンレセプターは、今日までに同定されたもののうち、最も小さいＧタンパクカップリングレセプターであり（２９７−３１７アミノ酸）、短いアミノ末端細胞外ドメイン、短いカルボキシ末端細胞内ドメイン、および非常に小さい第三の分子内ループから成る。メラノコルチンレセブターは、大抵のＧタンパクのカップリングレセプターに存在する数個のアミノ酸残基を欠失しており［Ｐｒｏｂｓｔら、１９９２．ＤＮＡ　＆　Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏｌ、１１　：　１〜２０を参照］、これには、４番目および５番目のトランスメンブレンドメイン中のプロリン残基が含まれており、トランスメンブレンドメインのαヘリツク構造中にベンドを導入しているようであり、結合ポケット［Ａｐｐｐｌｅｂｕｒｙ　＆　Ｈａｒｇｒａｖｅ、１９８６．　Ｖｉｓｓｉｏｎ　Ｒｅｓ、２６　：１８８１〜１８９５を参照］の形成に関与しており、１個または両方のシスティン残基が第１番目および第２番目の細胞外ループ間のジスルフィド結合を形成してい８４５９〜９４６３を参照］。注目すべきは、メラノコルチンレセブターはペプチドリガンドを認識するその他のＧタンパクカブソリングレセブター、例えば、ポンベンン（ｂｏｍｂｅｓｉｎ）　［Ｓ　ｐｉｎｄｅｌら、ｌ　９９　Ｑ、Ｍｏ１．　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、４　：１９５６〜１９６３を参照コまたはサブスタンスＫ　［Ｍａｓｕら、１９８７．　Ｎａｔｕｒｅろ、Δ９−テトラヒドロカンナビノールのレセプター［Ｍａｔｓｕｄａら、１９９９０゜Ｎａｔｕｒｅ　３４６　：　５６１〜５６４を参照コにより深く関係している。このカンナピノイドレセプターもまた、トランスメンブレン５中の保存的プロリンおよびジスルフィド結合形成に必要な第１番目の細胞外ループ中のシスティンを欠失している。図２に示すレセプター配列のリーストバーンモニー（Ｌｅａｓｔ　ｐａｒｓｊ＋ｏｏｎｙ）分析の結果、カンナピノイドおよびメラノコルチンレセブターは、進化的に関係しており、ペプチドレセプターおよびアミンレセプターとは区別されるサブファミリーを形成している可能性があることが分かった。この類似性が進化的保存であるか、収れんの結果であれ、メラノコルチンとカンナピノイドレセプター間の配列および推定構造の類似性は、内因性カンナピノイド様リガンドの研究に有用な情報となろう。

これらのレセプターをさらに調べるために、種々の組織から分離したＲＮＡにノーザンハイブリダイゼーションを行うことにより、種々の組織からの相当するｍＲＮＡの組織内分布を調べた［Ｍａｎｉａｔｉｓら、同上を参照］。この実験の結果を図４に示す。

組織標本のパネルは、高いストリンジエンノー条件下で行ったノーザンハイブリダイゼーション分析によって試験した。同じニトロセルロースフィルターをヒトＭＳＨレセプタープローブおよびマウスＭＳＨレセプタープローブと連続的にハイブリダイズさせ、各レセプターｍＲＮＡの分布を調べた。ネズミＭＳＨレセプターは、もっばら３．９ｋｂの１個のｒａＲＮＡでコードされており、一方、ヒトＭＳＨレセプターは、２つのメラノーマ標本において、もっばら３．ＱｋｂのｍＲＮＡによってコードされている。基本的なマウスメラニン細胞とマウスメラノーマセルラインの両者で高レベルのレセプターａＲＮＡが観察される。これに対し、極端に低いレベルのレセプターｍＲＮＡは、基本的なヒトメラニン細胞および多くのヒトメラノーマ標本において検出された（図４のメラノーマ１参照）。試験した１１標本のうち、３標本において、メラノーマ標本Ｎｏ、２（図４）に見られるようなこれまでにないＭＳＨ−Ｒ■ＲＮＡの極端な上昇が見られたことは、最も興味深いことである。

さらに、他の組織と同様、ＭＳＨ結合サイトが広範に記載されているにもがかわらず、本明細書に記載したレセプターの脳における発現は検出することができなかった。この発見は、脳組織において特異的に発現されるこれらのあるいは関連するレセプターの別異の形が存在することを示唆している。

本明細書は、本発明のある特定の態様について記載したものであって、これに相当する全ての修飾体または変異体は全て、添付の請求の範囲に記載した発明の範囲内に入るものである。

配列表（１）　一般的情報（ｉ）　特許出願人：コン、ロジャー・ディーマウントジョイ、キャスリーン・ジー（ｉｉ）　発明の名称・哺乳動物メラニン細胞刺激ホルモン受容体およびその使用（ｉｉｉ）　配列の数＝６（ｉｖ）　連絡先：（Ａ）　名宛人・アレブレラティ・アンド・ウイットコフ、リミテッド（Ｂ）　通りニスイード３０００．サウス・ウォーカー・ドライブ１０番（Ｃ）　市ニジカゴ（Ｄ）　州：イリノイ（Ｅ）　国：アメリカ合衆国（Ｆ）　ＺＩＰ・６０６０６（Ｖ）　コンピューター解読書式（Ａ）　媒体型：フロッピーディスク（Ｂ）　コンピューター：ＩＢＭＰＣ適合（Ｃ）　オペレーティング・システム：ＰＣ−ＤｏＳ／ＭＳ−ＤＯ８（Ｄ）　ソフトウェア：パテントイン・リリース＃１．０．バージョン＃１．２５（ｖｉ）　本出願のデータ：（Ａ）　出願番号　ＰＣＴ／ＵＳ　９３１０３２４７（Ｂ）　出願日・１９９３年４月７日（Ｃ）　分類・（ｖｉｉｉ）　弁理士／代理人情報（Ａ）　氏名　ヌーナン、ケビン・イー（Ｂ）　登録番号＋３５．３０３（Ｃ）　参照／整理番号・９２．１５４−Ａ（ｉｘ）　電話連絡先情報（Ａ）　電話番号：　３１２−７１５−１０００（Ｂ）　ファックス番号：　３１２−７１５−１２３４（Ｃ）　テレックス：９１０−２２１−５３１７（２）　配列番号１の情報：（ｉ）　配列の特徴（Ａ）　長さ＝３３塩基対（Ｂ）　型：核酸（Ｃ）　鎖の数ニー重鎮（Ｄ）　トポロジー：直鎖状（ｉｆ）　配列の種類：　Ｄ　Ｎ　Ａ　（ｇｅｎｏｍｉｃ）（ｉｘ）　配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：　ｍ１ｓｃ−ｆｅａｔｕｒｅ（Ｂ）　存在位１１：１．．３３（Ｄ）他の情報・／機能＝“変成オリゴヌクレオチドブライマー（センス）“（ｘｉ）　配列　配列番号１：ＧｋＣＴＣＭｋＣＣＴ　ＧＴＯＴＯＹＳＬ’ｒＹ　＊ＣＭｍ＞ＧＭ　ＴｋＣコ３（２）　配列番号２の情報：（１）　配列の特徴（Ａ）　長さ：３１塩基対（Ｂ）　型：核酸（Ｃ）　鎖の数　−重鎮（Ｄ）　トポロジー・直鎖状（ｉｉ）　配列の種類：　Ｄ　Ｎ　Ａ　（ｇｅｎｏ＠１ｃ）（ｉｘ）　配列の特徴。

（Ａ）特徴を表す記号：　＋＊１ｓｃ−ｆｅａｔｕｒｅ（Ｂ）存在位置＋　１．、３１（Ｄ）池の情報：／機能＝“変成オリゴヌクレオチドプライマー（ｘｌ）　配列：配列番号２：ｅＡＩＪＡフ１ｒＣりＵ賢７μ；Ｃ（子工丸Ｃ×；＾Ｇ＜シ１；＾ｍｒａ＾＾３夏（２）　配列番号３の情報：（１）　配列の特徴（Ａ）　長さ：１２６０塩基対（Ｂ）　型　核酸（Ｃ）　鎖の数ニ一本鎖（Ｄ）　トポロジー：直鎖状（１１）　配列の種類：　ｃＤＮＡ（ｉｘ）　配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：ＣＤ５（Ｂ）存在位置：１５．．９５９（１ｘ）　配列の特徴・（Ａ）特徴を表す記号：５’ＵＴＲ（Ｂ）存在位置：１．．１４（１ｘ）　配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：３°ＵＴＲ（Ｂ）存在位置：９６０．．１２６０（ｘｌ）　配列・配列番号３：入−ｎＡｌ畠　丁ｈｒ　Ｓｓｒ　ＨＬｍ　Ｌａｕ　Ｇｌｙ　Ｌ・Ｕ　＾１畠　丁ｈｔ　Ａｓｎ　ＯＬｎ　Ｓｉｒ　Ｇｌｕ　Ｐｒｏ　丁ｒｐＳａｔ　Ｌａｕ　Ｃｙ＃　Ｐｈ＊　ｔＪｕ　ＧＬｙ　１１＊工１−Ａｌａ　Ｘ１ｍ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　Ｔｙｒ　！ｌ＠　ｊａｒ　Ｘ１ｍＰＭ　Ｔｙｒ　Ａｌａ　Ｌａｕ　入ｒ９　丁ｙｒ　ｌ１ｌｓ　Ｂａｒ　工ｌ＠Ｉ　’Ｖａｌ　テｈｒ　ｔａｕ　ｐｒｏ　＾ｒ９　人工直　入■X ＰＭ　Ｘ１會　Ｔｈｒ　Ｔｙｒ　Ｔｙｒ　Ｌｙｓ　ＨＬｇ　Ｔｈｒ　Ａｌ蟲　Ｖａｌ　ＬＪｕ　Ｌａｕ　Ｃｙ−レーＬＩ　ＶａＬ　τｈｒ１１１０　１１！ｊ　１９０ＰＭ　Ｐｈ＠　Ｌｓｕ　Ａｌａ　Ｍａｔ　Ｌｓｕ　Ａｌａ　Ｌａｕ　Ｍｅｔ　入１息　工Ｌｍ　Ｌａｕ　Ｑｒ　Ａｌａ　Ｈｌｓ　Ｍａｔ＋９５　２００　２０５ｐｈ−丁ｈｒ　入ｔｑ　Ａ１ａ　Ｃｙ＠　ＧＬ＋ｘ　ＩＩＬ＠　ＶａＬ　（ｉｎ　ｃｔｙ　ＸＬｅ　Ａｌａ　Ｇｌｎ　１．＊ｕ　Ｍ支ｓ　Ｌ凾■ ２１Ｑ　２１５　２２０人ｒｑ　ｋＸｑ　ｋｔｑ　ｓｉｒ　Ｘｌ・　Ａｒｇ　Ｇｉｎ　Ｇｌｙ　Ｐｈ曽　ｅｙｅ　Ｗｕ　Ｌｙｓ　ＧＬｙ　＾↓ａ　入１龜　τｈｘχｌｊ　２３０　２３５　２４０Ｓｅｅ　Ｔｈｒ　ＶａＬ　Ａｓｐ　ｉ＋ｒｏ　Ｌ＠ｕ　ＸＬｅ　Ｔｙｒ　＾１ｍ　ｌ’Ｍ　入ｔｑ　５ｅｒ　Ｇｉｎ　Ｇｌｕ　Ｌａｕ　入ｒ■ （２）　配列番号５の情報：（ｉ）　配列の特徴（Ａ）　長さ：１６３３塩基対（Ｂ）　型：核酸（Ｃ）　鎖の数・−末鎖（Ｄ）　トポロジー、直鎖状（ｉｉ）　配列の種類：ｃＤＮＡ（ｉｘ）　配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：ＣＤ５（Ｂ）存在位置：　４６２．、１４１５（ｉｘ）　配列の特徴・（Ａ）特徴を表す記号＋５’ＵＴＲ（Ｂ）存在位１ｉ！：１．．４６１（ｉｘ）　配列の特徴：（Ａ）特徴を表す記号：３°ＵＴＲ（Ｂ）存在位置　１４１６．、１６３３（Ｘｌ）　配列　配列番号５：ｃｃｃｃ口ππＧ口に寞Ｑ＾惇寓票ｑロＷ−弱λロー紘貼Ｃ―蟲…＆　ωＣ７’ ＣＡＣＣＡＧ（Ｊ　ＧＴＣＧＴＧＧＧＡＡ　Ｃ（２）　配列番号６の情報：（ｉ）　配列の特徴（Ａ）　長さ、３１７アミノ酸（Ｂ）　型、アミノ酸（Ｃ）　トポロジー、直鎖状（ｉｉ）　配列の種類、タンパク質（ｘｉ）　配列：配列番号６：Ａｌａ　Ａｒｇ　Ｃｙｓ　Ｌ＃ｌＪ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　５＠ｒ　１１＠　！ｏｒ＾ｍｐ　ＧＬｙ　Ｌｓｕ　Ｐｈ＊　−ｕ　ｍａｒ　Ｌａｕにｌｙ　Ｌ＠ｕ　Ｖａｌ　Ｓａｔ　Ｌ＠ｕ　Ｖａｌ　にｌｕ　Ａｓｎ　ＡＬａ　Ｌ４１Ｊ　ＶａＬ　Ｖａｌ　入１ａ　Ｔｈｒ　Ｉｌ＊　＾１P ＡＬａ　！Ａｕ　ｊａｒ　Ｊｖ＋＋ｐ　Ｌｓｕ　Ｌｓｕ　Ｖａｉ　Ｓｍｒ　ａｌｙ　Ｔｈｒ　ｐｖｎ　ＶａＬ　ｕｕ　ＧＬｕ　丁ｈｒ　Ａｈ■ ｕ　９０　９５ａ瘍邸」Ａｂ具ｌ」旦后５出１℃ −−ト　８　ロ　（へ）　ｗ　＝　−−さｑ〜　へ　＋　！′？　へ　、　１　１　。

（へ）　、ロ　−　Ｍ　ｌ／ｌ　−寸　寸　第　ワ　り閃　ａｏｒ−’３　二　二　〇　＝　ニ　コ　−　０−　さ　−１℃　φ　寸　さ　さ　Ｇ　η　ψ寸　寸　門　へ　１　リ　リ　寸　叩　ψ　さ　℃舌　ｏ−８＝　＆　；　二　冒　Ｓ　シ　；　＄Ｎ　（へ）　−Ｎ　Ｎ　ヘ　へ　Ｉ＋１　へ　へ　〜　ｉ−Ｉ＋Ｉ　Ｎ　ｏ　（へ）　＋ｔ　（−１−１’ａ　さ　門よ　自　ｎ　富　＆　ミ　 ξ　♀　諾　；　ミ　零Ｂ斜＆」対数［ホルモン］　（Ｍ）５シ」７．４６− ４・’０−、、ｗ２．３７− １．３５− 功閑Ｉｔ！ｉｌ１審報失＋＋　□＋−＋−ＰＣＴ／ＵＳ　９３１０３２４７フロントページの続き（５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，ら　識別記号　庁内整理番号Ｃ０７Ｈ２１１０４Ｂ　８６１５−４ＣＣＯ７Ｋ　１４／７２　８３１８−４ＨＣ１２Ｎ　５／１０Ｃ１２Ｐ　２１１０２　Ｃ９２８２−４Ｂ２１１０８　９１６１−４ＢＣ１２Ｑ　１１０２　６８０７−４Ｂ１／６８　Ａ　９４５３−４ＢＧＯＩＮ　３３１５３　Ｄ　７０５５−２Ｊ／／（ＣＩ２Ｎ　１５１０９　ＺＮＡＣ１２Ｒ１：９１）（Ｃ１２Ｎ　５／１０Ｃ１２Ｒ１：９１）（Ｃ１２Ｐ　２１１０８Ｃ１２Ｒ１：９１）９２８１−４ＢＩＣ１２Ｎ　１５１００　Ｃ（Ｃ１２Ｎ　１５１００　ＺＮＡ　ＡＣ１２Ｒ１：９１）（Ｃ１２Ｎ　５１００　ＢＣ１２Ｒ１：９１）

Claims

【特許請求の範囲】

１．哺乳動物メラニン細胞刺激ホルモン受容体をコードするヌクレオチド配列を含有する核酸。
２．哺乳動物メラニン細胞刺激ホルモン受容体がマウスメラニン細胞刺激ホルモン受容体である請求項１に記載の核酸。
３．ヌクレオチド配列が第１Ａ図の配列（配列番号３）と実質的に相同的である請求項１に記載の核酸。
４．哺乳動物メラニン細胞刺激ホルモン受容体がヒトメラニン細胞刺激ホルモン受容体である請求項１に記載の核酸。
５．ヌクレオチド配列が第１Ｂ図の配列（配列番号５）と実質的に相同的である請求項１に記載の核酸。
６．コードする哺乳動物メラニン細胞刺激ホルモン受容体が第３図に示すメラニン親和性ペプチド応答特性を有している、請求項１に記載のＤＮＡ配列。
７．第２図に示すマウスＭＳＨ−Ｒ配列（配列番号４）を含有するアミノ酸配列を有している３５．３キロダルトンのメラニン細胞刺激ホルモン受容体又はその誘導体の均質な組成物。
８．第２図に示すヒトＭＳＨ−Ｒ配列（配列番号６）を含有するアミノ酸配列を有している３４．６キロダルトンのメラニン細胞刺激ホルモン受容体又はその誘導体の均質な組成物。
９．哺乳動物メラニン細胞刺激ホルモン受容体の発現を検出するための、請求項３に記載のヌクレオチド配列を含有する核酸ハイブリダイゼーションプローブ。
１０．ヒトの遺伝病の発見及び診断用に改作されている請求項９に記載の核酸ハイブリダイゼーションプローブ。
１１．新規な哺乳動物受容体遺伝子の検出、単離及び特性化用に改作されている請求項９に記載の核酸ハイブリダイゼーションプローブ。
１２．哺乳動物メラニン細胞刺激ホルモン受容体の発現を検出するための、請求項５に記載のヌクレオチド配列を含有する核酸ハイブリダイゼーションプローブ。
１３．ヒトの遺伝病の発見及び診断用に改作されている請求項１２に記載の核酸ハイブリダイゼーションプローブ。
１４．新規な哺乳動物受容体遺伝子の検出、単離及び特性化用に改作されている請求項１２に記載の核酸ハイブリダイゼーションプローブ。
１５．哺乳動物メラニン細胞刺激ホルモン受容体をコードするヌクレオチド配列を含有する組換え発現構築物。
１６．形質転換された真核生物細胞培養物においてマウスメラニン細胞刺激ホルモン受容体を発現できる、請求項３に記載のＤＮＡ配列を含有する組換え発現構築物。
１７．形質転換された真核生物細胞培養物においてヒトメラニン細胞刺激ホルモン受容体を発現できる、請求項５に記載のＤＮＡ配列を含有する組換え発現構築物。
１８．ｐｃＤＮＡＩ／ｎｅｏ配列を含有する請求項１５に記載の組換え発現構築物。
１９．マウスメラニン細胞刺激ホルモン受容体を発現できる、請求項１６に記載の発現構築物によって形質転換された真核生物細胞培養物。
２０．ヒトメラニン細胞刺激ホルモン受容体を発現できる、請求項１７に記載の発現構築物によって形質転換された真核生物細胞培養物。
２１．哺乳動物メラニン細胞刺激ホルモン受容体とのアゴニスト結合のインヒビターをスクリーニングするための、ある化合物を調べる方法であって、（ａ）メラニン細胞刺激ホルモン受容体を真核生物細胞において発現できる請求項１５に記載の発現構築物によって真核生物細胞培養物を形質転換し、（ｂ）メラニン細胞刺激ホルモン受容体の検出可能なアゴニストの結合を阻害する該化合物の能力を検定すること、を特徴とする方法。
２２．哺乳動物メラニン細胞刺激ホルモン受容体がマウスメラニン細胞刺激ホルモン受容体である請求項２１に記載の方法。
２３．哺乳動物メラニン細胞刺激ホルモン受容体がヒトメラニン細胞刺激ホルモン受容体である請求項２１に記載の方法。
２４．哺乳動物メラニン細胞刺激ホルモン受容体とのアゴニスト結合のインヒビターとして、ある化合物を定量的に検出するための方法であって、（３）哺乳動物メラニン細胞刺激ホルモン受容体を真核生物細胞において発現できる請求項１５に記載の発現構築物によって真核生物細胞培養物を形質転換し、（ｂ）検出可能な受容体アゴニストの結合の阻害程度を測定することによって、該化合物の量を検定すること、を特徴とする方法。
２５．哺乳動物メラニン細胞刺激ホルモン受容体がマウスメラニン細胞刺激ホルモン受容体である請求項２４に記載の方法。
２６．哺乳動物メラニン細胞刺激ホルモン受容体がヒトメラニン細胞刺激ホルモン受容体である請求項２４に記載の方法。
２７．試験する化合物がヒト内に存在している請求項２４に記載の方法。
２８．該化合物がヒトの血中に存在している請求項２４に記載の方法。
２９．該化合物がヒト脳脊髄液中に存在している請求項２４に記載の方法。
３０．該化合物が未知である請求項２４に記載の方法。
３１．哺乳動物メラニン細胞刺激ホルモン受容体と免疫学的に反応する抗体又はその断片。
３２．抗体がモノクローナル抗体である請求項３１に記載の抗体。
３３．哺乳動物メラニン細胞刺激ホルモン受容体がマウスメラニン細胞刺激ホルモン受容体である、請求項３１に記載の抗体。
３４．哺乳動物メラニン細胞刺激ホルモン受容体がヒトメラニン細胞刺激ホルモン受容体である、請求項３１に記載の抗体。
３５．哺乳動物メラニン細胞刺激ホルモン受容体と免疫学的に反応する抗体又はその断片を産生するセルライン。
３６．抗体がモノクローナル抗体である請求項３５に記載のセルライン。
３７．哺乳動物メラニン細胞刺激ホルモン受容体がマウスメラニン細胞刺激ホルモン受容体である、請求項３５に記載のセルライン。
３８．哺乳動物メラニン細胞刺激ホルモン受容体がヒトメラニン細胞刺激ホルモン受容体である、請求項３５に記載のセルライン。
３９．請求項３１に記載の抗体又はその断片の治療学的有効量を製薬的に許容できる担体中に含有する医薬組成物。
４０．請求項３１に記載の抗体又はその断片と免疫学的に反応する、哺乳動物メラニン細胞刺激ホルモン受容体のエピトープ。
４１．哺乳動物メラニン細胞刺激ホルモン受容体がマウスメラニン細胞刺激ホルモン受容体である、請求項４０に記載のエピトープ。
４２．哺乳動物メラニン細胞刺激ホルモン受容体がヒトメラニン細胞刺激ホルモン受容体である、請求項４０に記載のエピトープ。
４３．哺乳動物メラニン細胞刺激ホルモン受容体と免疫学的に反応するキメラ抗体。
４４．哺乳動物メラニン細胞刺激ホルモン受容体がマウスメラニン細胞刺激ホルモン受容体である、請求項４３に記載のキメラ抗体。
４５．哺乳動物メラニン細胞刺激ホルモン受容体がヒトメラニン細胞刺激ホルモン受容体である、請求項４３に記載のキメラ抗体。