JPH07508025A - インスリン様増殖因子（ｉｇｆ−１）類似体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 インスリン様増殖因子（ＩＧＦ−１）類似体関連する出願 本出願は米国特許第０７／８８１．５２４号（１９９３年５月８日出願、審査中 ）の一部継続出願であり、ここに参照として取り入れる．発明の背景 インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）とそのレセプタ−（ＩＧＦ−ＩＲまた は１型レセプターとも呼ばれる）どの相互作用は、正常な発生ならびに正常およ び異常の両方の細胞増殖の制御に主要な役割を演じている事が証明されている． 例えば、先端巨大症および成長ホルモン欠乏患者のように成長ホルモンのかかわ る成長妨害では、病的活性の臨床評価は成長ホルモン濃度よりむしろＩＧＦ−１ の血液レベルにはるかによく相間する（Ｖａｎ　Ｗｙｋら、「ヒトの正常な発達 の生物学」　”Ｔｈｅ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｈｕｍａｎ　Ｇ ｒｏｗｔｈ”２２３−２３９頁、Ｒａｖｅｎ　Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，１９８１）． Ｗｅｒｎｅｒら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，旦６．　７ ４５１−７４５５．１９８９）は、ＩＧＦ−ＩＲのｍＲＮＡレベルが周産期に最 大に達し、生後の発生段階ではすべての組織で徐々に減少することを示した，Ｉ ＧＦ−１のｍＲＮＡはＩＧＦ−１ＲのｍＲＮＡほど厳密には発生段階による調節 を受けないが、実際にはＩＧＦ−１の主な生産部位である大人の肝臓内で発現が 最大に達する． この様な一般的考察とは別に、ＩＧＦ−１とそのレセプターとの相互作用が細胞 の増殖に主な役割を演じていることを示す報告が数多くある．例えば、ＩＧＦ− ＩＲｓはフィトヘマグルチニン活性化Ｔリンバ球内（Ｋｏｚａｋら、ＣｅｌｌＩ ｍｍｕｎｏｌ．．１００９．３１８−３３１．１９８７＞．およびヒト赤白血病 細胞系であるＫ５６２細胞内（Ｈｉｚｕｋａら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｊ且且 旦旦，旦，８１−８８．１９８７）に存在している．実際、Ｋ５６２細胞はＩＧ Ｆ−１のみ、または生理学的濃度以上のインスリンのみを含む無血清培地（ＳＦ Ｍ）内で活発に増殖する。多量のＩＧＦ−ＩＲｓは、ヒトＴ細胞白血病の請求内 （Ｌｅｅら、Ｊ、ＣＩ　ｉｎ、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、＆　Ｍｅｔａｂｏｌ、６ ２．２８−３５．１９８６＞　、およびＨＬ６０＋ｔ［［ｌ胎内（Ｐｅｐｅら、 Ｊ、Ｃｅ１ｌ　Ｐｈ　５ｉｏ１．．１旦３，２１９−２２７．１９８７）でも報 告されている０本発明者の研究室では、ＩＧＦ−ＩＲのｍＲＮＡが）（Ｌ６０細 胞内でｍｌに発現していることを明らかにすることができた。ＨＬ６０細胞は、 他増加する（Ｈａｒｔｍａｎら、Ｌｅｕｋｅｍｉａ、２，２４１−２４４，１９ ８８）、幹細胞および始原細胞もまた増殖にＩＦＧ−１を必要とするようである 。

ＧｏｌｄｒｉｎｇおよびＧｏｌｄｒｉｎｇ（旦ｕｃａｒ−Ｇｅｎｅ　Ｅｘ　ｒｅ 旦Σ、１．３０１−３２６．１９９１＞は、ＩＧＦ−１がケラチン細胞、平滑筋 細胞、骨芽細胞、軟骨細胞およびニューロン細胞の増殖を９蛛りる（第４表を参 照されたい）ことを示す数多くの参考文献を列挙している。ＩＧＦ−１，Ｒは乳 癌綱ＢＦｊＡ内でエストロゲンによって」ル厚され（Ｓｔｅｗａｒｔら、Ｊ、Ｂ ｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、２６旦、２１１７２−２１１７８．１９９０ＨＰｅｋｏｎ ｅｎら、ｇａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、、４旦、１３４３−１３４７，１９８８；Ｐｅ ｙｒａｔら、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５−．４８．６４２９−６４３３．１９８８； ＦｏｅｋｅｎＳら、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、、４９．５８２３−５８２８．１９ ８９）　、且つ、ＩＧＦ−ＩＲｓの発現は、少なくともエストロゲンレセプター またはＥＧＦレセプターと同様に、乳癌の増殖と相関するようである。ＩＧＦ− ＩＲまたは少なくともＩＧＦ−１結合部位の発現増加が報告されているその他の 腫瘍には、／１８肺癌（Ｋｉｅｆｅｒら、Ｅｘ　、Ｃｅ１ｌ　Ｒｅｓ、、１８４ ，３９６−４０６゜１９８９：Ｍｉｎｕｔｏら、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、、４８ ．３７１６−３７１９．１９８８；Ｎａｋａｎｉｓｈｉら、Ｊ、Ｃｌ１ｎ、Ｉｎ ｖｅｓｔ、、旦λ。

３５４−３５９．１９８８＞、絨毛癌細胞（Ｒｉｔｖｏｓら、Ｅｎｄｏｃ　ｒ　 ｉ　ｎ旦上立ＫＹ、１２２，３９５−４０１．１９８８＞、悪性グリオーム（Ｇ ａｍｍｅｌｔｏｆｔら、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、、４８．１２３３−１２３７． １９８８）、腎臓癌（Ｐｅｋｏｎｅｎら、Ｉｎｔ、Ｊ、Ｃａｎｃｅｒ、旦、１０ ２９−１０３３．１９８８＞、およびヒト子宮内股腫瘍（Ｔａｌａｖｅｒａら、 Ｊ。

Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、、旦０．３０１９−３０２４．１９９０）が含まれる。

増殖におけるＩＧＦ−ＩＨの役割もまた、ヒトのメラノーマ細胞（Ｓｔｒａｃｋ ｅら、Ｊ−Ｂｉｏ　ｌ−Ｃｈｅｍ−，２６４，２１５４４−２１５４９，１９８ ９）、および神経芽腫または　’　（Ｏｔａら、Ｍｏ１ｅｃ、Ｂｒａｉｎ　Ｒｅ ｓ、、６．６９−７６．１９８９、およびＯｔａら、Ｃｕｒ、Ｊ。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、、上ヱ４，５２１−５３０．１９８８＞で報告されている。し かしなかも、ＩＧＦ−ＩＲが細胞増殖の制御に主な役割を演じていることの最も 適切な証拠は、細胞培養液中の繊維芽細胞の研究から得られる。

ＩＧＦ−１がＩＧＦ−ＩＲと結合すると、ＩＧＦ−ＩＲは自己リン酸化される。

自己リン酸化は細胞の成長および増殖における重要な出来事であると考えられて いる。この様に、ＩＧＦ−１が誘導するＩＧＦ−ＩＨの自己リン酸佃よ、例えば 癌、再狭窄、および瑞唐５のような病気ならびに疾弘と関連する病因に力φ）わ る望ましくなｌ］胞の成長および増殖を伴うと考えられている。

ＩＧＦ−ＩＲがＩＧＦ−１と結合すると通常起こるＩＧＦ−ＩＨの自己リン酸化 によってもたらされる細胞の増殖を効果的に阻害することの出来る薬剤組成物が 必要である。ＩＧＦ−ＩＲがＩＧＦ−１と結合すると通常起こるＩＧＦ−１誘導 のＩＧＦ−ＩＲ自己リン酸化をｍｓ：ｆｆｌ害することの出来る薬斉庸和隨社が 必要とされる。ＩＧＦ−ＩＲがＩＧＦ−１ど結合すると通常起こるＩＧＦ−ＩＲ の自己リン酸化によってもたらされる細胞の増殖を阻害する方法が必要である。

ＩＧＦ−ＩＲがＩＧＦ−１と結合すると通常起こるＩＧＦ−１誘導のＩＧＦ−Ｉ Ｒ自己リす酬ヒを阻害する方法が必要である。望ましくない細胞の増殖と関連す る病気および疾患にカリ）っている疑いのある人、また（よかめ１つやすい人を 治療する方法が必要である。

発明Ｑ概要 本介４用よ、 ａ）　１）２５より少ないアミノ酸、 ｉｉ）ヒトのインスリン様増殖因子１のＣドメインまたはＤドメインの少なくと も一部分に相当する配列： からなる合成ペプチドであって、ＩＧＦ−１誘導のＩＧＦ−ＩＲの自己リン酸化 を阻害するペプチド：および ｂ）薬学的に許容しうる担体または希釈剤：からなる、薬剤組成物に関する。

本発明は、選択された細胞を、２５より少ないアミノ酸力）らなり且つヒトのイ ンスリン様増殖因子１のＣまたはＤドメインの少なくとも一部分に相当するｆｉ ｌｌを持つペプチドと接触させることからなる、細胞の増殖を阻害する方法に関 する。

本発明は、 ａ）　１）２５より少ないアミノ酸、 １１）ヒトのインスリン様増殖因子１のＣドメインまたはＤドメインの少なくと も一部分に相当する配列； からなる合成ペプチドであって、ＩＧＦ−１誘導のＩＧＦ−ＩＨの自己リン酸化 を阻害するペプチド：および ｂ）Ｍ勺に許容しうる担体または希釈剤：からなる薬剤組成物を有効な量投与す る：ことからなる、望ましくない細胞の増殖に１９Ｍする病気にかかっている疑 いのある人、またはカリ１りやすい人を治療する方法に１万１゛る。

図面の簡単な説明 第１図はペプチド配列を示し、ＩＧＦ−１分子の分子モデルのＣおよびＤフラッ プ（ｆｌａｐ）を示している。

第２図はｐ６細胞の増殖おけるＩＧＦ−１類似体の効果を示している。ｐ６細胞 はＳＦＭ中で４８時間培養し、次いで異なる濃度のＪＢ−ＩＧＦ−１のみ（棒グ ラフ６．７）、または濃度Ｌｏｎｇ／ｍｌのＩＧＦ−１＜棒グラフ８．１１）で 処理した。処理後４８時帰航細胞数を数えた。

第３図はペプチドＪＢ−１の処理効果を示している。第一のバンドは無刺激細胞 を示す、第二および第三のバンドはそれぞれインスリンおよびＩＧＦ−１の刺激 効果を示している。第四および第五のバンドはそれぞれ５００ｎｇ／ｍｌおよび １１０００ｎ／ｍｌのＪＢＩでの処理効果を示している。

第４図はｐ６細胞の増殖におけるＩＧＦ−１類似体の効果を示している。ｐ６細 胞はＪＢ２およびＪＢ３で処理しな、２０ｎｇ／ｍｌのＩＧＦ−１で刺激した後 、ＳＦＭ中で４８時間培養した場合の細胞の増殖に関する効果を示している。

第５図はＳＦＭ中で４８時間培養した場合のｐ６細胞の増殖に関するＪＢ４の効 果を示している。これらの細胞はＳＦＭ培地中で４８時帰航餓状態においた。

ペプチドは条件培地に直接加えた。

第６図は血清添加培地（ＳＳＭ）中で４８時閘培養した場合のＷＩ−３８細胞の 増殖に関するペプチドＪＢ３の効果を示している。ペプチドで処理する前、細胞 はＳＦＭ中で４８時帰航餓状態においた。処理後、細胞は１０％ＦＢＳで刺激し た。

第７図は、ＪＢ３を添加した５３Ｍ培地中またはＩＧＦもしくはインスリンを添 加したＳＦＭ培地中で、ＪＢ３またはＪＢＩおよびＪＢ２を加えて４８時間培養 した場合のｐ６細胞の増殖に関するペプチドＪＢ３の処理効果を示す。

第８図は血清添加培養液中で４８時間培養した場合のＤＵ１４５およびＰＣ３細 胞の増殖に関するペプチドＪＢ３の処理効果を示している。細胞は５３Ｍ培地中 に接種され、２４時帰航、ＪＢ３を加え４８時時間−た。

発明の詳細な説明 ヒトＩＧＦ−１は４つの主なドメインからなる７０アミノ酸残基のタンパク質で ちる。ＩＧＦ−１の最初の２９残基はインスリンのＢ鎖に非常によく似ており、 それ故、Ｂドメインと呼ばれている。ＩＧＦ−１残基４２−６２はインスリンの Ａｇと相同であり、よって、Ａドメインと呼ばれている。ＢおよびＡドメインの 間の介在！ｉ＆１１　（残基３０−４１＞はＣドメインである。結局、最後の７ アミノ酸（残基６３−７０）がＤドメインと呼ばれている。ＩＧＦ−１の配列は 既知である（配列番号：　１）、Ｒｏｔｗｅｉｎ、Ｐ、、Ｐｏｌ　１ｏｃｋ、に 、Ｍ、、Ｄｉｄｉｅｒ、Ｄ−Ｋ−、およびＫｒ１ｖｉ、Ｃ，Ｃ，、Ｊ、Ｂｉｏｌ 、Ｃｈｅｍ、。

２旦１．４８２８−４８３２．１９８６　（ＤＮＡ配列より翻訳された配列）　 ；Ｊａｎｓｅｎ、Ｍ、、ｖａｎ　５ｃｈａｉｋ、Ｆ、　Ｍ、Ａ、、Ｒｉｃｋｅｒ 、Ａ。

Ｔ、、Ｂｕｌ　１ｏｃｋ、Ｂ、、Ｗｏｏｄｓ、Ｄ、Ｅ、、Ｇａｂｂａｙ、に、Ｈ ，。

Ｎｕｓｓｂａｕｍ、Ａ、Ｌ、、５ｕｓｓｅｎｂａｃｈ、Ｊ、Ｓ、およびＶａｎｄ ｅｎ　Ｂｒａｎｄｅ、Ｊ、Ｌ、、Ｎａｔｕｒｅ、３０６，６０９−６１１．１９ ８３　（ｍＲＮＡ配列より翻訳された配列）；Ｍｅｔ−２４はイニシェーターで あろうと考えられている。Ｒｉｎｄｅｒｋｎｅｃｈｔ、Ｅ、、およびＨｕｍｂｅ ｌ、Ｒ，Ｅ、、Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、２５旦、２７６９−２７７６．１９ ７８（残基４９−１１８の配列）。

最近になって、ＮＭＲによるヒトｒＧＦ−１のコア構造の詳細な分析が、Ｃ。

ｏｋｅ、Ｒ，Ｍ、、Ｈａｒｖｅｙ、Ｔ、Ｓ、、Ｃａｍｐｂｅｌ　１，１．Ｄ、、 Ｂｉｏｃｈｅｍｌ、旦０．５４８４−５４９１．１９９１によって報告された。

ＩＧＦ−１の疎水性コアはインスリンと著しく相似している。この点、Ｉ　ＧＦ −１は、ＩＧＦ−ＩＲとの結合に加えて、親和性は低いが、インスリンのレセプ ターとも結合すると記載されていることは興味深い（Ｍａｓｓａｇｕｅ、Ｊ、お よびＣｚｅｃｈ、Ｍ、’Ｐ、、Ｊ、Ｂｉｏ１．Ｃｈｅｍ、、２５ヱ、５０３８− ５０４５．１９８２）、ＩＧＦ−１とインスリンダイマーとの間の最も著しい構 造上の相違点は、ＩＧＦ−１２１造中４．ｊよＣおよびＤドメインが含まれるこ とを原因として生ずる。ＣドメインおよびＤドメインは両方とも、それら本来の 可動性のために、構造解析が不完全であった。

ＩＧＦ−１がＩＧＦ−ＩＲと結合すると、ＩＧＦ−ＩＲを活性化するＩＧＦ−Ｉ Ｒの自己リン酸化が誘導される。活性化されたＩＧＦ−ＩＲは細胞の成長および 増殖に関連する９例えば、癌、再狭窄、および喘〜つような望誌しくない細胞の 成長および増殖を特徴とする病気ならびに疾患において、ＩＧＦ−ＩＲ自己す４ 化を阻害することはＩＧＦ−ＩＨの活性化を妨害するという意味て１ましい。

従って、細胞の成長および増殖を特徴とする病気の治療に有効な薬剤組成物が望 まれ、その様な組成物はレセプターがＩＧＦ−１に結合するときに起こるＩＧＦ −ＩＨの活性化を阻害する化合物を含んで良い、そのような化合物は結合を妨害 する、または結合を許してもＩＧＦ−１によるＩＧＦ−ＩＨの自己す４化の誘導 を阻害するであろう。

Ｃｏｏｋｅら（１９９１，上記）によって得られたＮＭＲデータと−’ｉ！ｃす るヒトＩＧＦ−１シ移トドモデル［分子モデノｕハ隋築番４苛ｒる一娼歴バ’ｃ ｍ取（Ｊａｍｅｓｏｎ、Ｂ、Ａ、、Ｎａｔｕｒｅ、３４１，４６５−４６６．１ ９８９＞を参照されたい、また、その内容はここに参照として取り入れる］が明 らかにされた。

このモデルでは、ＣドメインおよびＤドメインはインスリンでも保持されている レセプターＷ位シ瑣田を目（残基２１−２４、Ｃａ５ｃｉｅｒｉ、Ｍ、Ａ、。

Ｃｈｉｃｃｈｉ、Ｇ−Ｇ、、Ａｐｐｌｅｂａｕｍ、Ｊ、、Ｈａｙｅｓ、Ｎ、、Ｇ ｒｅｅｎ、Ｂ、Ｃ−、Ｂａｙｎｅ、Ｍ、Ｌ、、Ｂｉｏｃｈｅｍ、、２ヱ、３２２ ９−３２３３，１９８８：Ｂａｙｎｅ、Ｍ、Ｌ、、’Ａｐｐｌｅｂａｕｍ、Ｊ、 。

Ｕｎｄｅｒｗｏｏｄ、Ｉｌ　、Ｃｈｉｃｃｈｉ、Ｇ−Ｇ、、Ｇｒｅｅｎ、Ｂ、Ｃ ，。

Ｈａｙｅｓ、Ｎ−、Ｃａ５ｃｉｅｒｉ、Ｍ−Ａ−、Ｊ−Ｂｉｏｌ−Ｃｈｅｍ、。

２６４．１１００４−１１００８．１９８９）の側面に立つフラップ（ｆｌａｐ ）として示されている。これらのフラップがＩＧＦ−ＩＲとの特異的結合に直接 間わる証拠が示されている。ＩＧＦ−１のＤドメインの欠損はＩＧＦ−１変異体 とインスリンレセプターとの紀イｍを増加させるが、ＩＧＦ−ＩＲとの親和性を 減少させることが明らかになった（Ｃａｓｃｉｅｒｉら、１９８８、上記）。

さらに、インスリンにはなく、ＩＧＦ−１に保持されている結合部位の割れ目の 側面に立つＣドメインの残基のいくらかまたはすべてが、ＩＧＦ−ＩＲとインス リンレセプターとを識別するために必要であると考えられている（Ｂａｙｎｅら 、１９８９、上記；Ｃａ５ｃｉｅｒｉ、Ｍ、Ａ、およびＢａｙｎｅ、Ｍ−Ｌ、ｒ ＴＧＦｓおよびそのレセプターの分子生物学および細胞生物学」、“Ｍｏ１ｅｃ ｕｌａｒ　ａｎｄ　Ｃｅ１ｌｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ＩＧＦｓ　ａｎ ｄ　Ｔｈｅｉｒ　Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ”　、ＬｅＲｏｔｈ、Ｄ、およびＲａ１ｚ ａｄａ、　Ｍ、　Ｋ、編、Ｐｌｅｎｕｍ　Ｐｒｅｓｓ、Ｌｏｎｄｏｎ、１９９０ ）。

ＩＧＦ−１のＣおよびＤフラップがＩＧＦ−ＩＲへのＩＧＦ−１タンパク質の特 異性の高い結合４．Ｊｌわっていることを示す証拠がここに提供される。どちら か一方のフラップの少なくとも一部分からなるペプチドは、ＩＧＦ−１が誘導す るＩＧＦ−ＩＨの自己リン酸化を阻害するために用いてもよい、ＩＧＦ−１のＣ およびＤドメインを合成類似体デザインの標的とすると、ＩＧＦ−ＩＲとの結合 に高い特異性を持つ競合阻害剤が得られた。とくに、単独のまたは非ＩＧＦ−１ 配列と結合させた、Ｃドメイン（残基３Ｏ−４１）およびＤドメイン（残基６３ −７０）ならびにそのフラグメントが、模造ペプチドとして選ばれた。さらに、 ＩＧＦ−１／ＩＧＦ−ＩＲ結合を完全には阻害しない類似体でも、ＩＧＦ−ＩＨ の自己リン酩ヒを阻害するかもしれない。

本発明の方法は、細胞の増殖を特徴とする病気および疾患にカリ）ったまたはか かりやすい個人を治療する方法であって、ＩＧＦ−１の誘導するＩＧＦ−ＩＲの 自己リン酊ｕヒを阻害する有効量のペプチドを個人に投与する段階からなる方法 を含む、この様な病きおよび疾患には、これらに限定されるわけではないが、血 管者によってなされてよい、同様に、そのような病気および疾患にかかりやすい 個人を見つけ出すこともまた、当業者の日常の仕事として行われうる０例えば、 癌および晴、恨の診断方法は良く知られている。再狭窄を防ぐ方法では、血管形 成を行う予定の個人を治療して良い１本発明の方法に有効な薬剤組成物を以下に 定義する。

ヒトのインスリン様増殖因子１のＣドメインまたはＤドメインの少なくとも一部 と一致するアミノ酸配列からなる２５より少ないアミノ酸のペプチドが提供され る。このようなペプチドは限定されたコンホメーシゴンを持ち、天然のＩＧＦ− １によるＩＧＦ−ＩＨの自己リン酸化の誘導を阻害する動を持ち、それによって ＩＧＦ−ＩＨの活性を阻害する。ＩＧＦ−ＩＨの自己リン酸化の阻害は、望本発 明は、ＩＧＦ−１のＣドメインまたはＤドメインの少くとも−ｗ））らなり、カ リ、天然のＩＧＦ−１によるＩＧＦ−ＩＨの自己リン酸化の誘導およびそれによ る細胞の増殖を阻害するする能力を持つ、２５より少ないアミノ酸の合成ペプチ ドからなる薬剤組成物を提供する。このような合成ペプチドを、ここではＩＧＦ −ＩＭ似体、合成類似体、または類似体と呼び変えることもできる。

ＩＧＦ−１のアミノ酸釈が１およびｌｊ＃子モデモデルいて、ＩＧＦ−１類似体 として機能する短いペプチドを合成した。このようなペプチドでの処理効果を第 ２図−第８図に示す、ＩＧＦ−１配列の最後の１２アミノ酸からなる合成ペプチ ドをナノグラムの濃度で用いた場合、様々な細胞の増殖が完全に阻止された。

ベプチＦ４１毒である、すなわち、このペプチドにさらしｔ灘は長期間生存する 能力を残していた。この阻害効果は可逆的でもある、即ち、ペプチドを取り除き 、増殖因子を再び加えた場合、細胞は再び増殖を始める。阻害はほとんど１００ ％に近く、増殖にＩＧＦ−１／ＩＧＦ−ルセブターの相互作用を必要とするすべ ての細胞に適用すべきである。このような細胞には以下のもの二線維芽細胞。

平滑筋細胞、軟骨細胞および骨芽細胞、様々な系統の造血細胞ならびにケラナノ 細胞：が含まれる。このような細胞の幾つかの型を用いて実際に試験した結果、 ＩＧＦ−１類似体による阻害は有効（（！ｆｆ１ｏｏ％）で、力つ再生可能であ った。

例えば、ＩＧＦ−１類似体を用いた場合、線維芽細胞、線維芽細胞様細胞Ｔリン ノ立りおよび前立腺癌に由来する上皮細胞の増殖を阻害した。

最初に合成した類似体はＩＧＦ−１のＣドメインおよびＤドメインのアミノ酸画 故１１の少なくとも一部を組み込んでデザインした。この様なペプチドではタン パ論上の計算より、これらのドメイン番邸処）立体配座の可動性を持つことが示 された。天然のタンパク質の立体配座に関して貯えられている知識と合成類似体 の立体配座に関する知識とを出来うる限り一致させるために、類似体は、人為的 に誘パターンをとるであろう。

本発明は２５より少ないアミノ酸のペプチドからなる薬剤組成物を提供する。

ペプチドは可能なかぎり小さいことが望ましい、ある実施態様では、ペプチドは おおよそ４−２０のアミノ酊カ１らなる。ある実施態様では、ペプチドはおおよ そ４−１２のアミノ動）らなる０本発明のペプチドのアミノ［１１は、ＩＧＦ− １のＣドメインまたはＤドメインの一部、即ち、Ｃドメインの少なくとも２−７ のアミノ酸、またはＤドメインの少くとも２−１２のアミン＃）１らなる。

本発明はＩＧＦ−１のＣドメインまたはＤドメインの少なくとも一部分を含むペ プチドからなる赫即成物を提供する。ＩＧＦ−１のＣドメインまたはＤドメイン の一部分とは２アミノ酸から完全なドメイン（完全なＣドメインは１２アミノ酸 力）らなり；完全なりドメインは７アミノ動）らなる）であって良い、非ＩＧＦ −１アミノ酸九ソ１４」ヒ肋ψ頌訪１謹様に提供されている。他の実施態様では 、ペプチドはＩＧＦ−１のアミノＷｉ？Ｊｌｌのみを含む０本発明の実施態様で は、本発明乃ペプチドのアミノ酸配列の少なくとも５０％が、ＩＧＦ−１のＣド メインまたはＤドメインの一部分力）ら誘導されることが望ましい、ＩＧＦ−１ より誘導されたアミノ酸残基の配列を２つより多く含む実施態様では、本発明の ペプチドのアミノ酊洒故１のおおよそ２０−２５％より多くがＩＧＦ−１のＣド メインまたはＤドメインの部分力）ら誘導されることが望ましく、３０−４０％ がより望ましく、５０％より多いことがさらにより望ましい、ある実施態様では 、ＩＧＦ−１のＣドメインまたはＤドメインの部分から誘導された本発明のペプ チドのアミノ酸配列（％）は、約６０％または約７５％またはそれ以上に達する 。

本発明は、天然のＩＧＦ−１によるＩＧＦ−ＩＨの自己リン酸化の誘導およびに 当業者が用いうる細胞増殖アラサイが含まれている。ＩＧＦ−ＩＲ自己リン酸化 の誘導および１ル拳１但書は、ＩＧＦ−ＩＨのモノクローナル抗体（Ｏｎｃｏｇ ｅｎｅ　５ｃｉｅｎｃｅｓ、Ｕｎｉｏｎｄａｌｅ、ＮＹ）、抗ホスホチロシン抗 体（ＵＢＩ、５ａｒａｎａｃ　Ｌａｋｅ、ＮＹ）および化学発光検出システム（ ｔｈｅ　ａｄｖａｎｃｅｄ　ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ　ｄｅｔｅｃ ｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ）（Ａｍｅｒｓｈａｍ、ＡｒｌｉＡｒｌｌｎ　Ｈｅｉｇ ｈｔｓ、ＩＬ）を用いて、本質的にはＬａｍｍｅｒｓら（ＥＭＢＯＪ、、旦。

１３６９−１３７５．１９８９）の方法に従って行ってもよく、この方法はここ に参照として取り入れる。

Ｓｏｃ、、１旦、２１４９−２１５４．１９６３、に記載されている固相合成技 術を用いて調製されてよい、その他のペプチド合成技術は、例えば、Ｍ、Ｂｏｄ ａｎｓｚｋｙら、［ペプチドの合成Ｊ　（”Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉ ｓ”）、Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｌｅｙ　＆　５ｏｎｓ、第二版、１９７６；Ｋｅｎｔ およびＣ１ａｒｋ−Ｌｅｗｉｓ、ｒ生物学と医学のための合成ペプチド」　（” ５ｙｎｔｈｅｔｉｃ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ　ｉｎ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｍｅ ｄｉｃｉｎｅ”　）、２９５−３５８．Ａｌ　１ｔａｌｏ、に、、Ｐａｒｔａｎ ｅｎ、Ｐ。

およびＶａｋｅｒｉ、Ａ、編、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ　５ｃｉｅｎｃｅ　Ｐｕｂｌｉ ｓｈｅｒｓ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ、１９８５：ならびに当業者４”既知Ｗ瑣飲す ９博・文献に見出だされるであろう、ペプチド合成技術の要約は、Ｊ、５ｔｕａ ｒｔおよびＪ、Ｄ、Ｙｏｕｎｇ、ｒ固相ペプチド合成Ｊ　（”５ｏｌｉｄ　Ｐｈ ａｓｅＰｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｌｉａ”）、Ｐｉｅｒｃｅ　Ｃｈｅｍｉｃ ａｌＣｏｍｐａｎｙ、Ｒｏｃｈｆｏｒｄ、ＩＬ、１９８４に見出だされるであろ う。

液相法によるペプチド合成もまた、「タンパク質」　（“Ｔｈｅ　Ｐｒｏｔｅｉ ｎｓ”）、第二巻、第三版、１０５−２３７、Ｎｅｕｒａｔｈ、Ｈ−ら編、Ａｃ ａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、ＮＹ、１９７６、に記載の方法 に従って用いられてよい、そのような合成で用いるのに適切な保護基は、上記の 参考書、ならびにＪ、Ｆ、Ｗ、ＭｃＯｍｉｅ、ｒ保護基の有機化学」　（Ｐｒｏ ｔｅｃｔｉｖｅ　Ｇｒｏｕｐｓ　ｉｎ　Ｏｒｇａｎｔｃ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ” ）。

Ｐｌｅｎｕｍ　Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、ＮＹ、１９７３、にｊｌだされ るであろう。

−ａ的には、このような合成方法は、長くしようとするペプチド鎖に一つもしく はそれ以上のアミノ酸残基または適当に保護されたアミノ酸残基を順々につなげ ていく事を含む、標準的には、最初のアミノ酸残基のアミノ基またはカルボキシ ル基が、選択的に除去可能な適すにｆμｉ！で保護される。リジンのような反応 性側基を含むアミノ酸には、これとは異なる選択的に除去可能な保護基が用いら れる。

実施例のように固相合成を用いる場合、保護されたまたは誘導体のアミノ酸は、 そのアミノ酸の保護されていないカルボキシルまたはアミノ基を使って不活性固 体担体に結合する０次いで、アミノ基またはカルボキシル基の保護基を選択的に 除去し、適切に保護された相補基（アミン基またはカルボキシル基）をもつ配列 の次のアミノ酸を混合し５、すでに固体担体に結合している残基と反応させる。

次いで、アミノ基またはカルボキシル１し［をこの新しく追加したアミノ酸残基 より除去し、次いで（適当に保護された）次のアミノ酸を加え、前述の方法を繰 り返す０合成しようとするペプチドのすべてのアミノ酸が適切な配列で結合した 後、取り残されているｆ玉章の末端基および側基の保護基（ならびに固体担体） を順々にまたは同時に除去すると、目的とするペプチドが得られる１本発明のペ プチドは、ベンジル化またはメチルベンジル化されたアミノ酸がまったく含まれ ないことが望ましい、そのような保護基の一部は合成過程に使われても良いが、 それらの基はペプチドを用いる前に除去される。別に記載するように、高次構造 を抑制するための分子内結合を形成するために、さらなる反応が必要とされるで あろう。

本発明のペプチドは組換えＤＮＡ（支）イ・ｉによって調製されても良いが、そ のような方法は精製、およびその次にペプチドの高次構造を抑制するためのイど ｒ修飾が必要であるため、好ましくない。

Ｌアミノ動・らなるペプチドに加えて、本発明の薬剤組成物はＤアミノ酸で作ら れたペプチドからなっても良い０分解に関わるほとんどの酵素は四面体のα炭素 を認識するため、酵素による認識およびそれに続いて起こる切断を避けるために Ｄアミノ酸が用いられた。コンピューターを用いた研究では、アミノ酸配列を逆 にし、Ｄアミノ酸を用いることによって、同じ折りたたみ構造をもつペプチド合 成られる事が示されている。このように、Ｄアミノ酸からなるペプチドは分解さ れにくい。

アミノｆ！ｔｅｌを保存的に置換しても良い、当業者は、アミノ酸を保存的に置 換したＩＧＦ−１類似体を容易にデザインすることができる０例えば、アミノ酸 の置換に耐るＤａｙｈｏｆのル−ル（Ｄａｙｈｏｆ、Ｄ、Ｃ−、Ｎａｔ、Ｂｉ。

ｍｅｄ、Ｒｅｓ、Ｆｏｕｎｄ、、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、Ｄ、Ｃ，第５巻、第３ 補）のような参考文献に従って、ペプチド配列中のアミノ酸残基を同等のアミノ 酸残基と置換しても良い、そのような置換は熟知されており、それぞれのアミノ 酸の電荷および構造上の特徴に基づいている。

本発明の薬剤組成物として有効なペプチドは、ＩＧＦ−１配列傾びり番号：１） の情報、特にＣドメイン（３０−４１）およびＤドメイン（６３−７０）を作っ ているＷｃＷｌを用いてデザインされる。ＣおよびＤドメインより誘導される少 なくとも２つのアミノ酸残基からなる、全体で２５より少ない数のアミノ酸のペ プチドが合成される。ＣまたはＤドメインの部分のわずか２−３のアミノ酸残基 からなる配列を持つペプチドでは、ペプチドは全体で４−８のアミノ酸からなる ことが望ましい、ＣまたはＤドメインの部分である４またはそれ以上のアミノ酸 残基からなる配列をもつペプチドでは、ペプチドは、全体で望ましくは４−１５ 、より望ましくは４−１２のアミノ酸力）らなる、ＬまたはＤアミノ酸カイ団も ご用いられて良い、ペプチドはＩＧＦ−１のアミノ酸配列と同じ順序で合成され ても良く、逆のＪ町合成されても良い、すべてがＬ型アミノ酸からなるペプチド では、アミノ耐洒ＪりはＩＧＦ−１と同ヒ」０宇で組み立てるように合成される ことが望ましい、すべてがＤ型アミノ動）らなるペプチドでは、アミノ酸配列は ＩＧＦ−１と逆の７１１’で組み立てるように合成されることが望ましい。

ＣまたはＤドメインの部分からなる合成ペプチドはＩＧＦ−１のそれらの部分の 幾何学的配列に近づけるなめに環状化されて良い、環状化はシスティン残基間の ジスルフィド架橋によって容易に成されて良い、システィン残基はＩ　ＧＦ−１ のＣまたはＤドメインより誘導されるペプチド部分に接するペプチド上の位置に 含まれて良い、ＩＧＦ−１のＣまたはＤドメインより誘導されるペプチドの部分 として、ペプチドは、例えばアミノ末端およびカルボキシ末端またはその近くに あるペプチドのアミノ酸残基の間で、アミド結合のような共有結合法によって環 状化されても良い。

あるｉｍにおけるペプチドは配列番号：３からなる。ある実施態様におけるペプ チドは配列番号＝３を含む、ある実施態様におけるペプチドは配列番号：３のフ ラグメントからなる。ある実施態様におけるペプチドは配列番号＝３のフラグメ ントを含む。

ある実施態様におけるペプチドは以下に記載するＤアミノ酸ペプチドＪＢ３から なる。ある実施態様におけるペプチドはＪＢ３を含む、ある実施態様におけるペ プチドはＪＢ３のフラグメントからなる。ある実６ｍ様におけるペプチドはＪＢ ３のフラグメントを含む。

ある実施態様におけるペプチド↓８１番号：４からなる。ある実施態様における ペプチド番詰０り番号＝４を含む、ある実施態様におけるペプチドは配列番号： ４のフラグメントからなる。ある実施態様におけるペプチドは配列番号：４のフ ラグメントを含む。

ある実施態様におけるペプチドは以下に記載するＤアミノ酸を含むペプチドＪＢ ２からなる。ある実施態様におけるペプチドはＪＢ２を含む、ある実施態様にお けるペプチドはＪＢ２のフラグメントからなる。ある実施態様におけるペプチド はＪＢ２のフラグメントを含む。

ある実施態様におけるペプチド４２１１番号＝６からなる。ある実施態様におけ るベブチ田＃？Ｊ１番号＝６を含む、ある実施態様におけるペプチドは配列番号 ：６のフラグメントからなる。ある実施態様におけるペプチド（諸びり番号：６ のフラグメントを含む。

ある実施態様におけるペプチドはＤアミノ酸ペプチドＣｙｓＬｙｓＳｅｒＣｙＳ からなる。ある実施態様におけるペプチドはＤアミノ酸ペプチドＣｙｓＬｙｓＳ ｅｒＣｙｓを含む、ある実施態様におけるペプチドはＤアミノ酸ペプチドｃｙｓ ＬｙｓＳｅｒＣｙｓのフラグメントからなる。ある実施１様におけるペプチドは Ｄアミノ酸ペプチドＣｙｓＬｙｓＳｅｒＣｙｓのフラグメントを含む。

特に、あるｉｍペプチドはＤアミノペプチドＬｙｓＳｅｒを含み、望ましくは適 正な空間幾何学的配列を提供するためにさらなる構成成分を含む。

本発獣４闘馴川出関翔として用いるペプチドは、ここに詳細を記載するガイドラ インに従って、さらに熟知されたプロセスを用いてデザインされて良い、ペプチ ドの合成方法およびそれらの環状化方法は、操車的な技術および容易に入手可能 な出発物質を用いることによって日常の仕事として行われてよい。

ここに示した構造特性を持つペプチドが薬剤組成物および本発明の方法に有効か 否かを決定するために、その様なペプチドを用いて、ペプチドが必要な活性を持 っているかどうか；即ち、ペプチドがＩＧＦ−１の誘導するＩＧＦ−ＩＲの自己 リン酸化を阻害することができるかどうか：についてルーチンアッセイを遂行し ても良い、細胞増殖を阻害するペプチドの能力はその活性を細胞増殖アッセイで 観察することによって決定しても良い、上述のように、ＩＧＦ−ＩＲの自己りΔ 俊化の誘導および誘導の阻害は、ＩＧＦ−ＩＨのモノクローナル抗体（○ｎｃｏ ｇｅｎｅ　５ｃｉｅｎｃｅｓ、Ｕｎｉｏｎｄａｌｅ、ＮＹ）、抗ホスホチロシン 抗体（ＵＢＩ、５ａｒａｎａｃ　Ｌａｋｅ、ＮＹ）および化学発光検出システム （ｔｈｅ　ａｄｂａｎｃｅｄ　ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ　ｄｅｔｅ ｃｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ）（Ａｍｅｒｓｈａｍ、ＡｒｌｉＡｒｌｌｎ　Ｈｅｉ ｇｈｔｓ、ＩＬ＞を用いて、本質的にはＬａｍｍｅｒｓらの方法（ＥＭＢＯ止工 、旦、１３６９−１３７５．１９８９）に従って行って良く、ここに参照として 取り入れる。実施例１は、ペプチドが細胞増殖阻害活性を持つか否かを試験する ために当業者が用いうる細胞増殖アッセイを含んでいる。

従って、上述の構造特徴を持つペプチドは日常の仕事として合成できる。その様 なペプチドは操車アッセイを用いて試験し、本発明の薬剤組成物および方法に用 いることができるか否かを決定されるであろう。

本発明り４済１化合物は、当業者によって、選択された投与法に適切な組成物と 調合されても良い、適切は薬剤担体はこの分野で１虞＄４考書である“Ｒｅｍｉ ｎｇｔｏｎ−ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅｓ″、Ａ。

０ｓｏｌ、に記載されている。

非経口投与では、ＩＧＦ−１類似体は、例えば、医薬として適当な非経口ベヒク ルを用いた溶液、懸濁液、？１ＭＬまたは凍結乾燥粉末として調合する事ができ る。そのようなベヒクルの例としては、水、塩類溶液、リンゲル溶液、ブドウ糖 溶液、および５％のヒト血清アルブミンがある。また、リボソームおよび不揮発 性油のような非水溶性ベヒクルも用いられてよい、ベヒクルまたは凍結乾燥粉末 は、等張性（例えば、塩化ナトリウム、マンニトール）および化学的安定性（例 えば、緩衝液および防腐剤）を維持するための添加剤を含んでもよい、調合は一 般に用いられている技術によって殺菌消毒される１例えば、注射による投与に適 切な非経口組成物は０．９％の塩化ナトリウム溶液中に１．５重量％の活性成分 を溶解することによって調製される。

本発明の薬剤組成物は一回に、または何回にも分けて投与してよい９本発明のし てもよい０本発明の治療法は、）雲こ用いられている治療法と組み合わせていら れる。静脈内投与は輸液ポンプを補助器具として用いて行われて良い０本発明の 薬剤組成物は、乳濁液として調合されて良い、卯臥として、鼻孔内または吸入投 与するためのエアロゾルＭ１として調合されても良い０局所的投与が望ましい場 合もある。

投与量は、薬力学的な特徴；その投与方法及び投与経路；投与される人の年齢、 健康状態、および体重；症状の種類および範囲：併慣π栖匙）を順；油気Ｃ３句 友：と言ったような要素によって変わる１通常、ペプチドの服用量は体重５０ｋ ｇ当′たり約１−３０００ｍｇ；望ましくは体重５０ｋｇ当たり１０−１０−１ Ｏ００より望ましくは体重５０ｋｇ当たり２５−８００ｍｇである０通常、−個 人−日当たり８−８００ｍｇが一日１−６回に分けてまたは実質上遊離した形で 投与されると望ましい結果を得るのに効果的である。

治療する病気および疾患に基づいて、本発明の薬剤組成物は望ましくない細胞増 殖を最も効果的に阻害するために調合および投与されて良い。

再侠哨↓〜レーン血管形成術をおこなった場合に時々起こる副作用である。血管 形成術によって血管が綺麗に洗浄され内皮表面がなくなると下にある平滑筋細胞 が表面にさらされる。内皮表面が存在するときにはこれと接触していることによ って平滑筋細胞の増殖は阻害されているが、表面に晒されるようになった平滑筋 細胞はこの接触阻害がなくなり増殖を始め、この時、望ましくない平滑筋細胞の 増殖か起こる。増殖した細胞よ血管を欝血させ、結果として再狭窄が起こる。

望ましくない増殖の多くは、血管形成術が行われた後、Ｒ初の２４時間以内に起 こる。このように、血管形成術による血管の連結が行われた場合、薬剤組成物は 血管形成術後最初の２４時間以内に一回またはそれより多い回数投与される０本 発明の薬剤組成物クベルーンカテーテルで血管形成術の行われる場所に送り届け ることの出来る乳濁液として調合されて良い。

咀叡に力φ）った患者では、肺の細胞が慢性的に増殖し、肺を欝血させる０本発 明の薬剤組成物は、エアロゾロとして調合されて良い、そのようなエアロゾル薬 臭い。

本発明は以下の実施例によってさらに具体的に説明されるが、実施例によって制 限されるものではない。

寒弛泗 大池泗１ 第一の合成ペプチドは、残基６１−６９のＤドメインの飛び出したル−プ領域を 象徴している。６１−７０の天測で刈り１４詰＆１番号：２に示されている。

九ツ１１番号：　２　：　Ｍｅｔ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　Ｐｒｏ　 Ａｌａ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　Ａｌａ合成ペプチド、配列番号二３、はＪＢＩとも呼 ばれ、残基６１−６９に加えて、ペプチドの幾何学的構造を保持するためのジス ルフィド結合を形成するために用いられるシスティンを含む非ＩＧＦ−１残基を 含む。

１１ｉｔＶ＋１番号：３　（ＪＢＩ）　：　ＣｙｓＴｙｒＡｌａＡＩａＰｒｏＬ ｅｕ　ＬｙｓＰｒｏＡｌａＬｙｓ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ Ｍｅｔ−６０からＡｌａ−７０までの距離は、我々の分子モデルで計測したとこ ろ、約６．０オングストロームである。この距離および幾何学的構造はジスルフ ィド架橋を用いることによって保持されうる。６２の位置のシスティンは不適切 なジスルフィド結合を排除するためにアラニンで置換した。ペプチドはＬアミノ 酸を用いて操車的な固相ペプチド合成法で合成した。ＪＢＩＭ似体は、ＩＧＦ− ルセブター活性の有力な競争相手ではあるが、血清中で急速に分解される事を注 記しておかねばならない。

丸峠す 他ｍｗでは、ＪＩ３−１　（配列番号＝３）のしアミノ酸をＤアミノ酸で置換し た０分解に関わるほとんどの酵素は四面体のα炭素を認識するため、酵素の認識 およびそ氾」完いて起こる分解を排除するためにＤ−アミノ酸が用いられた。

本発明者のコンピューターを用いた研究では、Ｄアミノ酸を用いてアミノ［１を 逆にすることによって、同じ折りたたみ構造を示すペプチドができることを指摘 している。以下に示すＤアミノ酸ペプチドは、ＪＢＢとも呼ばれ、標準的固相技 術を用い、出発物質としてＤアミノ酸残基を用いて合成した。

Ｄアミノ酸ペプチドＪＢ３　： Ｃｙｓ　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　 Ａｌａ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ人沌例旦 他の実施態様では、Ａｌａ−６２からＡｌａ−７０までの距離は約７．５オング ストロームである。この距離および幾何学的構造は、ペプチドのアミン末端およ びカルボキシ末端間のアミド結合の形成にを仲介するｔＢｏｃ／ｆＭｏｃの保護 戦略を用いることによって維持することができる。ペプチドは、アミド結合を作 り出すリジンの側鎖（ε−アミノ基）およびアスパラギΔ唆側鎖のカルボン酸の 機能を通して分子内架橋されるであろう、結果として、Ａｌａ−６２およびＡｌ ａ−７０がそれぞれＡｓｐおよびＬｙｓに置き換えられるであろう、ペプチドは 、標準的方法に従って、低置換（樹脂１μ当たり０．２ｍＭまたはそれ未満）バ ラメチルベンズヒドリルアミン樹脂上で合成した。樹脂に最初に加えられた残基 は、Ｎ−α−ｔＢＯＣ１ε−ｆＭＯＣリシンである。残りのペプチド合成は、常 法に従って、ｊＭρ復隻隻が加えられるまでｔＢＯｃでアミノ基を保護しながら 続けられる。加えられる＠に７）！！ＥＭよＺ基で保護されたグルタミン酸であ り、このグルタミン酸の中の片方のカルボン酸は第三級ブチル基で保護される。

ピペリジン／ＤＭＦて′樹脂に結合したペプチドを処理すると、その他の任意の 保護基には影響を与えること無く、最初のりシンのεアミノ基がらｆＭＯＣ基が 除去され、次いでＴＦＡで処理するとアスパラギ４のカルボキシル基の保護が除 去される。

中和した後、ペプチドは標準的なジイミド仲介共役反応を用いて共有結合で開環 される。この方法は合成したペプチドを共有結合て−させることの出来る方法の 一つであることを弓Ｔｈ−べきであるが、この方調よ、ＡｓｐのαＨ−ｈ）らＬ ｙＳのα炭素までの距離を約７．５オングストロームに保つようなペプチド末端 での可変結合を供与するであろう。

この誘導ペプチドのアミノｆｌａｉ１は、ＡｓｐとＬｙｓとの間のアミド結合に よって共有結合しており、配列番号：４と名付けられる。

Ａｓｐ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ人 絶区生 その他のペプチドは、Ｃドメインの／Ｌ、−プ状の飛び出した領域、残基２９− ３８、を象徴している： Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ａｒｇ＾ｒｏ　（ 配列番号：５）。

可変性、ねじれ特性および距離を維持するために、Ｃｙｓ−Ｇｌｙをペプチドの アミン末端に配置し、Ｃｙｓ　（Ｄ）をカルボキシ末端に配置した。この様に、 配列番号＝５のＤアミノ酸を含むペプチド誘導体はＪＢ２と呼ばれる。

Ｃｙｓ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　 Ａｒｏ　Ａｒｇ　Ｃｙｓ（Ｄ）大池例旦 他の実施態様では、適正な幾何学的配列を保つために、インスリン様コアの小切 片がこの配列に加えられた。距離は約１０オングストロームであった。このペプ チドは固定化された平面的幾何学かｌｆｉ＆１であるため、天然のタンパク質の 空間特性に似せるためにトルエン誘導体が用いられるであろう、ｆＭｏｃ／１Ｂ ｏｃの戦略を用い、トルエン−２，４−ジイソシアン酸塩（ＴＤＩ）をヘテロニ 債性架橋剤として用いると、ペプチドの末端に位置する遊離アミノ基間でペプチ ドの平面的な共有結合による閉１１ＪＥ６詐り出されるであろう、ＴＤＩＣ勿を 紬短琳乃メチル基は、ｐＨ７，５またはそれ以下では２の位置のイソシアン酸塩 が反応することを妨げるが、バラの位置のインチオシアン酸塩は高い反応性を持 つ、ｐＨが９゜０より大きくなると、２の位置のイソチオシアン酸塩との反応が 開始されるであろう、この事により、特異性および制御性の高い条件下でのペプ チドの１０オングストロームａ会による開環が可能になる。

大他例旦 他の実施態様では、ＣｙｓＬｙｓＳｅｒＣｙｓを含む配列番号＝６が構築された 。この４残基からなるペプチドは環状化された。

Ｄアミノ動１らなる環状ペプチドがこの配９１を用いて構築された。

Ｄアミノ酸ペプチド　ＣｙｓＬｙｓＳｅｒＣｙｓ大弛例ヱ 丙＆１１ｆｔ序がペプチド活性に重要か否かを決定するために、ＪＢｌの逆ｆｉ ｔ！Ｊ１１であるＬアミノｆｌａｔツ１１が横築され、ＪＢ４と名付けられた。

このＪＢ４は配列番号＝７である。

ｈＪり番号：　７　（Ｊ　Ｂ４　）　Ｃｙｓ　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　Ａｌａ　Ｐｒｏ 　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｔｙｒ　Ｃｙ■ 火鮒徂　６　の　に・番るＩ　ＧＦ−１ｐ６細胞はＢＡＬＢ／ｃ３Ｔ３より得ら れ、ＩＧＦ−ルセブターを恒常的に過剰に発現する。このような細胞はＩＧＦ− １のレセプターを恒常的に過少１に発現しているため、無血清培地内では増殖で きないが、ＩＧＦ−１が培地に加えられた場合、非常に巧妙に増殖することがで きる。第２図では、ＩＧＦ−１によって東鐵されたｐ６４Ｈ１２Ｊの増殖に及ぼ すペプチドの効果を示している。最初の棒グラフは再塗布した３Ｔ３細胞の数を 示している。第２の棒グラフ、実際にはＮ。

３、は塗布４ｓ呵紺り乃３Ｔ３細Ｊｔｄの数を示している。４．５および６はそ れぞれ５ｎｇ／ｍｌ、Ｌｏｎｇ／ｍｌ、２０ｎｇ／ｍｌのＩＧＦ−１で刺激した 後、４８時間後の３７３の細胞数を示している。棒グラフ８および９はそれぞれ １１０００ｎ／ｍｌまたは１１００ｎ／ｍｌの濃度のペプチド類似体にさらした 後、４８時間ｆｋ７）　３７３の細胞数を示している　Ｑ性がないことに注目さ れたい、棒グラフ１１．１２．１３および１４はそれぞれ５０．１００．５００ および１１０００ｎ／ｍｌ濃度のＩＧＦ−１類似体存在下、Ｌｏｎｇ／ｍｌのＩ ＧＦ−１で刺激した３Ｔ３の細胞数を示している。

第３図は類似体がＩＧＦ−ルセブターの自己リン酸化を完璧に阻害することを示 している。

迭カシ斗Ｖ 実施、Ｍ８の実験では、Ｄドメインペプチドを競合類似体として用いた。第４図 は、ＩＧＦ−１で刺激したｐ６細胞をＪＢ２　（Ｃドメインペプチド）およびＪ ＢＢ（Ｄアミノ動）らなるＤドメインペプチド）にさらした他＄１を示している 。ＪＢ２は１μｇ／ｍｌでおおよそ８０％を阻害するが、ＪＢＢは５００ｎｇ／ ｍｌで完壁に阻害する。スクランブルペプチド（ＪＢ４、ＪＢＩと同じアミノ酸 組成を持つが順序が逆）の効果を第５図に示す、ＪＢ４はＩＧＦ−１”に刺激さ れたｐ６細胞の増殖に効果を示さず、この事は、ＪＢｌの効果は配列に特異的で あることを示している。

塞弛例よ旦 本実施例魅卓倶虻Ｇよ、ＪＢＢ　（Ｄアミノ酸）９府作お九県を血漬奮功−剖也 で試験した。第６図は、ＷＩ−３８ヒト複相体繊維芽細胞でのペプチドの効果を 示して・いる：ＪＢＢはこのような細胞の増殖を５００ｎｇ／ｍｌで完璧に抑制 した。同様の結果が、ｐ６細胞（第７図）ならびに二系統の前立腺癌細胞（ＤＵ ４８およびＰＣ３、第８図）でも得られた。

要約すると、以下のペプチド：ＪＢｌ（Ｄドメインペプチド）、ＪＢ２（Ｃドメ インペプチド）およびＪＢＢ　（Ｄアミノ動）らなるＤドメインペプチド）　： が培養中の細胞の成長に十分なｉｗｉを及ぼすことが明らかになった。これらの ペプチドは、使用濃度（最大で５μｇ／ｍｌ）では毒性を示さず、その効果は可 逆的である。ＩＧＦ−ルセブターの活性化が多くの正常細胞および形質転換細胞 の増殖に必要であるという認−力）ら予想できるように、これらのペプチドは様 々な型の細胞を阻害する。

阻書咬加円山背ｙすに特異的であり、また、ＪＢ田迫清存在下でも活性である。

Ｘ弛例上よ リン酸緩衝液中４．ｌＪ＆＋１番号二３からなるペプチドを含む薬剤組成物を調 合する。

この組成物中のペプチド投与量８００ｍｇが、バルーン血管形成術を行った後２ ４時間以内に患者に輸液ポンプで投与される。

人裡泗上λ リン酸緩衝液中にＤアミノ酸ペプチドＪＢ３を含む薬剤組成物を調合する。二実 弛例上旦 リンｍ夜中４．Ｊ＆１番号・４からなるペプチドを含む薬剤組成物を調合する。

この組成物中のペプチド投与量８００ｍｇが、バルーン血管形成術を行った後２ ４時間以内（口髭昔に輸液ポンプで投与される。

寒總泗よ生 リン酸緩衝液中にＤアミノ酸を含むペプチドＪＢ２を含む薬剤組成物を調合する 。この組成物中のペプチド投与量８００ｍｇが、均レーン血管形成術を行ったｆ ＆２４時間以内に患者に輸液ポンプで投与される。

人徳例上旦 リン酸ｍ液中４′ＪｉＪ１１番号・６からなるペプチドを含む薬剤組成物を調合 する。

この組成物中のペプチド投与量８００ｍｇが、バルーン血管形成術を行ったｆ＆ ２４時間以内に患者に輸液ポンプで投与される。

人徳例上旦 リン酊園田脣夜中にＤアミノ酸ペプチドＣｙｓＬｙｓＳｅｒＣｙｓを含む薬剤組 成物を調合する。この組成物中のペプチド投与量８００ｍｇが、バルーン血管形 成１（・ｉを行った後２４時間以内に患者に輸液ポンプで投与される。

／’）Ｘｉｔコ石１１釆８．９ 配烈ム （２）配列番号＝１ （ｉ＞配列の特性 （Ａ）配列の長さ＝１５３アミノ酸残基（Ｂ）配列の型二アミノ酸 （Ｃ）トポロジー：直鎖状 （ｘｉ）紛り：　紛り翻＝１ Ｐｈｅ　Ｃｙｓ　Ａｓｐ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｈｅｔ　 ＨｉＳ　Ｔｈｒ　）ｋｔ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　５ｅｒＨｉｓ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　Ｔ ｙｒ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　ＣＶＳ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｔｈｒ　ＰｔＭｌ！ 　Ｔｈｒ　ｓｅｒ　Ｓｅｒお　４０４５ Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｃｙｓ　 Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　ＡｓｐＡｌａ　Ｌｅｕ　Ｇｌｎ　Ｐ ｈｅ　Ｖａｔ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｐｈｅ　Ｔｙｒ　Ｐ ｈｅ　Ａｓｎ　Ｌｙｓ凸　１０７５ Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ａｒｇ　 Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｇｌｎ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙａｏ　＆５　９０ Ｔｙｒ　ＡｒＯＭｅｔ １Δ）勇ツ万ＩしＴ１臣５＼　・　０７≧　ｌｈや五仁ｊｔ（２１０Ｃり′すｔ Ｗニー４ （ｉ）配列の特性 （Ａ）翫ツリの長さ：１０アミノ酸残基（Ｂ）蔽ツリの型二アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （Ｂ）配列の型二アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｘｉ　）配列：　Ｉ’１１番号：５ Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ａｒｇ　Ａｒｇ

Claims (22)

【特許請求の範囲】
1. １．ａ）ｉ）２５より少ない数のアミノ酸、およびｉｉ）ヒトのインスリン様増 殖因子１のＣドメインまたはＤドメインの少なくとも一部分に相当する配列； からなる合成ペプチドであって、ＩＧＦ−１の誘導するＩＧＦ−１Ｒの自己リン 酸化を阻害するペプチド：ならびにｂ）薬学的に許容しうる担体または希釈剤： からなる薬剤組成物。
2. ２．該ペプチドがヒトのインスリン様増殖因子１のＣドメインまたはＤドメイン の少なくとも一部分に相当した少くとも４アミノ酸残基の配列からなる、請求項 １記載の薬剤組成物。
3. ３．該ペプチドがヒトのインスリン様増殖因子１のＣドメインまたはＤドメイン の少なくとも一部分に相当した少くとも７アミノ酸残基の配列からなる、請求項 １記載の薬剤組成物。
4. ４．該ペプチドがヒトのインスリン様増殖因子１のＣドメインの少なくとも一部 分に相当した配列からなる、請求項１記載の薬剤組成物。
5. ５．該ペプチドがヒトのインスリン様増殖因子１のＤドメインの少なくとも一部 分に相当した配列からなる、請求項１記載の薬剤組成物。
6. ６．該ペプチドのアミノ酸残基の少くとも５０％がヒトのインスリン様増殖因子 １のＣドメインまたはＤドメインの少なくとも一部分に相当した配列からなる、 請求項１記載の薬剤組成物。
7. ７．該ペプチドが少くとも一つのＤアミノ酸残基を含む、請求項１記載の薬剤組 成物。
8. ８．該ペプチド配列番号：３からなる，請求項１記載の薬剤組成物。
9. ９．該ペプチドがＤアミノ酸ペプチドＪＢ３：【配列があります】からなる、請 求項１記載Ｄ薬剤組 成物。
10. １０．該ペプチドが配列番号：４からなる、請求項１記載の薬剤組成物。
11. １１．該ペプチドがＤアミノ酸を含むペプチドＪＢ２：【配列があります】から なる、請求項 １記載の薬剤組成物。
12. １２．該ペプチドが配列番号：６からなる、請求項１記載の薬剤組成物。
13. １３．該ペプチドがＤアミノ酸ペプチド：【配列があります】からなる、請求項 １記載の薬剤組成物。
14. １４．選択された細胞を、２５より少ない数のアミノ酸からなり且つヒトのイン スリン様増殖因子１のＣドメインまたはＤドメインの少くとも一部分に関連する 配列を持つペプチドと接触させることからなる、細胞の増殖を阻害する方法。
15. １５．ａ）ｉ）２５より少ないアミノ酸、ｉｉ）ヒトのインスリン様増殖因子１ のＤドメインまたはＤドメインの少くとも一部分： からなる合成ペプチドであって、ＩＧＦ−１の誘導するＩＧＦ−１Ｒの自己リン 酸化を阻害するペプチド：およびｂ）薬学的に許容しうる担体または希釈剤：か らなる薬剤組成物を有効な量投与する：ことからなる、望ましくない細胞増殖に 関連する病気にかかっている疑いのある、またはその様な病気にかかりやすい個 人を治療する方法。
16. １６．該病気が癌、再狭窄、または喘息である、請求項１５記載の方法。
17. １７．該ペプチドが配列番号：３からなる、請求項１５記載の方法。
18. １８．該ペプチドがＤアミノ酸ペプチドＪＢ３：【配列があります】からなる、 請求項１５記載の方 法。
19. １９．該ペプチドが配列番号：４からなる、請求項１５記載の方法。
20. ２０．該ペプチドがＤアミノ酸を含むペプチドＪＢ２：【配列があります】から なる、請求項 １５記載の方法。
21. ２１．該ペプチドが配列番号：６からなる、請求項１５記載の方法。
22. ２２．該ペプチドがＤアミノ酸ペアチド：【配列があります】からなる、請求項 １５記載の方法。