JPH07505643A - 骨置換剤のためのバイオ物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 骨置換剤のためのバイオ物質 本発明は新規バイオ物質、すなわち、顆粒状の骨置換剤のだめの結合溶液および ヒアルロン酸およびヒアルロン酸誘導体からなるペースト状の骨置換剤に関する 。

ヒアルロン酸はＤ−グルクロン酸とＮ−アセチル−Ｄ−グルクロン酸との交互の 残基から構成される天然ポリサッカライドの一つである。これは入手の由来、製 造した方法および分子量を測定した方法に依存する広範囲の分子量を持つ線状ポ リマーである。天然においては、それは細胞周囲のゲル中に、を椎動物の結合組 織の基礎的物質中に主成分として、関節の滑液中に、硝子体液中に、謄帯組織中 に、および軍鶏のトサカ中に存在する。

明確な分子量を持つ特殊なヒアルロン酸であって、それが炎症作用を持たず、ま たそれ故に創傷治癒の促進または球内液の代用として使用でき、または関節濃密 の治療において本願出願人に付与された欧州特許第０１３８５７２号に記載のよ うに関節的注射により使用できるものが知られている。

また、その酸のカルボキン基の全部または一部がエステル化されているヒアルロ ン酸エステルおよびそれらの医薬、化粧品および生分解性プラスティックスの分 野における使用もこれも本願出願人に付与された米国特許第４８５１５２１号お よび４９６５３５３号に記載されているように知られている。

ヒアルロン酸が組織修復過程、特に肉芽組織形成の第一段階において、凝固マト リックス安定化および分解制御、多形核および単核白血球のような炎症細胞、線 維芽細胞および内皮細胞のような間葉細胞の漸増に向かって、および上皮細胞の 後続移動を指向して、基礎的な役割を果たすことが知られている。

床擦れ、創傷および火傷へのヒアルロン酸溶液の適用が治隋を促進することが知 られている。組織修復の種々の段階におけるヒアルロン酸の役割は、理論的モデ ルを構成することによってＷｅ　ｉ　ｇｅ　Ｉ、Ｐ、　Ｈ，などの「炎症反応お よび創傷治癒過程の早期段階におけるヒアルロン酸およびフィブリンの役割につ いてのモデル（Ａ−ｍｏｄｅｌ　壽ｆｏｒ−ｔｈｅｅｒｏｌｅ−ｏｆ　ｅｈｙａ ｌｕｒｏｎｉｃ−ａｃｉ＋Ｌａｎｄ１ｆ　１ｂｒｉｎ・ｉｎ＋ｔｈｅ・ｅａｒｌ ｙｏｅｖｅｎｔｓ−ｄｕｒｉｎｇ−ｔｈｅ−ｉｎｆ　ｌａｍｍａｔｏｒｙ・ｒｅ ｓｐｏｎｓｅ−ａｎｄ−ｗｏｕｎｄ−ｈｅａｌ　ｉｎｇ）Ｊ、Ｊ、Ｔｈｅｏｒ、 Ｂｉｏｌ、　、１１９巻　２１９頁、１９８６年に記載されている。

顆粒前置換剤 顆粒前置換剤は広範に研究され、その生適合性および骨誘導性のために、および それらが歯槽骨萎縮により生じた窩、抜歯後の窩および嚢胞性窩のような種々の 形の空洞を容易に満たすので歯科および医科で使用されている。この物質を使用 する時の主たる困難は適用中または適用後のいずれかに容易に除去されるような その結合性の欠如によって起きる。この欠陥を克服するために、骨顆粒を含むペ ーストを製造することによる種々の型の結合剤が提案されている。フィブリンは 日本特許出願６０２５４６４０号および日本特許出願６０２５４６４１号に記載 されているように既に使用されている。

フィブリンを結合剤として使用することの短所の一つは、それがヒト由来である ために肝炎ウィルスならびにＨＩＶその他のウィルスによる感染を起こしうろこ とである。それ故、欧州特許出願第０４１６３９８号に記載されているようにプ ルラン、キチン、グリコール、カルボメチレンキチンおよびペクチンのような代 用物質が提案されている。

本発明の要約 本発明の目的は全ての歯科または外科における使用のために単独または組合せに おいて使用される抗生物質とともに顆粒型の骨置換剤を結合するためのヒアルロ ン酸および／またはヒアルロン酸エステルまたはヒアルロン酸塩から構成される 粘着性の溶液を提供することである。このような溶液は素晴らしい生適合性およ び生吸収性を持ち、感染症のような問題を起こし難い。

本発明の他の目的はヒアルロン酸および／またはヒアルロン酸エステルまたはヒ アルロン酸塩を単独または組合せにおいて使用される抗生物質および骨顆粒とと もに含む粘着性の液体からなるペーストを提供することである。ペーストに添加 される顆粒は互いに強固に接着して歯科および骨外科におけるそれらの使用を容 易にする。

本発明の別の適用性の範囲は以下に提供する詳細な記載から明白になるであろう 。しかし、当業者にとってはこの詳細な記述から種々の変化および修飾が明白に なるであろうから、この詳細な記載および特定的な実施例は本発明の好適な態様 を示すものではあるが、説明のためにのみ記載されるものであることを理解す以 下の詳細な説明は本発明を実行する当業者を援助するために提供するものである 。それでも、当分野において通常の技術を有するものが本発明的発見の真意また は範囲から離れることなしに、ここに討議する態様に修飾と変化をなしうるであ ろうから、以下の詳細な記載は本発明を不当に限定するものと解釈すべきではな い。

ここに引用する参考文献は各内容全体を参考のために記載するものである。

前記目的はヒアルロン酸、ヒアルロン酸エステルまたはヒアルロン酸の塩を単独 または組合せにおいて使用される抗生物質とともに水に溶解して高度に粘着性の 溶液を形成することによって達成される。そのような溶液の粘度は２５℃の温度 および相対湿度５０％±５％で少なくとも１５Ｐａ、ｓ、好ましくは２２Ｐａ。

Ｓ以上である。粘度が下限に近づくほど、溶液は流動性となり一粘度が大きいほ ど、溶液は粘くなる。理想的な作業条件のための正しい粘度は個人に依存するパ ラメータであり、その個人が溶液濃度を変えることでその粘度を変更できる。こ の溶液に含まれる物質の分子量のようｔ−性質は必要とされる粘着性の程度に従 って選択できる。

本発明による溶液はあらかじめガンマ線で滅菌したヒアルロン酸、ヒアルロン酸 の部分エステルまたはそれらの混合物、またはヒアルロン酸の塩を抗生物質まる 。

本発明において使用できるヒアルロン酸のエステルは米国特許第４８５１５２１ 号および第４９６５３５３号およびＰＣＴ公開ＷＯ９２−１３５７９号に記載さ れている。本発明において抗生物質とともに使用できるヒアルロン酸の塩は米国 特許第５１６６３３１号に記載されている。これらは単独または相互の種々の組 合せまたはヒアルロン酸とともに使用できる。

粉末を無菌蓋下、２５℃±２℃の温度および湿度５０％±５％の溶解槽に入れる 。溶解は逆の方向に回転する２個の螺旋エレメントからなる混合機中で達成でき る。

操作条件は所望の粘度に依存し、以下の通りであることができる。

１Ｍ終粘度　１　溶解温度　１　混合機回転数　１　溶解時間　１＋−← ｌ　１５Ｐａ、ｓ　１　３０℃±５℃　１　毎分６０回転　１　４時間　Ｉｌ　 ２２Ｐａ、ｓ　！　４５℃±５℃　１　毎分４０回転　１　８時間　１使用前に ２時間真空（最低０．０１ミリバール）に放置することによって溶液か−らすべ ての空気を除去する。無菌物質で製造した溶液をポアサイズ０６２２μｍの濾板 を通して濾過することによって除菌することもできる。この場合、濾過を促進す るために、溶液をまずその使用のために必要とするであろうよりも低粘度に調製 することができる。次にこれを濾過し、続いて所期の粘度に対応する濃度に達す るまで真空下に蒸留する。このようにして製造した溶液を骨顆粒と混合して前高 および欠損を満たすために使用されるペーストを形成できる。溶液の量と顆粒の 量の間の比率はｌ：３ｗ／ｗまたはそれ以上である。もし溶液量が少な過ぎたら 、顆粒は相互に結合しないので、さらに溶液を加えなければならない。もしペー ストが容易な適用のために流動性であり過ぎたら、それを約２分間高真空下に置 き、正しい粘りが得られるまでこの操作を反復することができる。

本発明で使用できる骨顆粒は特別には制限されない。一般に、既に通常に使用中 のものを使用することができる。これらのものの例は米国特許第４６９３９８６ 胃および第４６２９４６４号に見出すことができる。顆粒の直径は５０μｍと５ ｍｍの間であることができ、また、それらは多孔質または非孔質であることがで きる。生適合性について好適な物質の中にはヒドロキシアパタイト、燐酸トリカ ル／ラムおよび炭酸カルシウムの顆粒がある。

純粋に説明的目的のために、以下に本発明の溶液およびベース］・製造の数例を 記載する。

ヒアルロン酸エステル 本発明において有用なヒアルロン酸のエステルはヒアルロン酸の脂肪族、芳香脂 肪族、脂環またはへテロ環アルコールとのエステルであって、その中にはヒアル ロン酸のカルボキシル基全部（所謂「全エステル」）または部分的にのみ（所謂 「部分エステル」）がエステル化されているもの、および部分エステルと薬理学 的観点から生適合性または許容性のある金属または有機塩基との塩である。

有用なエステルは注目すべき薬理学的作用を持つアルコールから誘導されるエス テルを含む。脂肪族系の飽和アルコールまたは脂環系の単純なアルコールは本発 明において有用である。

前記エステルにおいてカルボキシル基のいくつかが遊離であるもの（すなわち部 分エステル）では、アルカリまたはアルカリ土類金属またはアンモニアまたは窒 素性有機塩基のような金属または有機塩基で塩形成しうる。

ヒアルロン酸（ｒＨ’ｌｌ　）のエステルは殆どがＨＹ自身とは異なり、有機溶 媒にある程度の溶解性を示す。この溶解度はエステル化されたカルボキシル基の 百分率およびカルボキシル基に結合したアルキル基のタイプに依存する。故に、 そのカルボキシル基が全部エステル化されたＨＹ化合物は、室温では、例えばジ メ＋ルスルホキシドに良い溶解度を示す（ＨＹのベンジルエステルはＤＭＳＯ中 で２００ｍｇ／ｍＬ程溶解する）。ＨＹの全エステルは殆どＨ）′および特にそ の塩とは異なり水には溶解度が乏しく、水には実質的に不溶性である。溶解特性 は、特殊なそして注目すべき粘塑性とともにＨＹエステルを複合膜における使用 に対して殊に好適にする。

複合膜における使用に対して本発明のヒアルロン酸のカルボキシル基のエステル 化成分として使用される脂肪族系アルコールは、例えば最大３４炭素原子を持ち 、飽和または不飽和であり、アミン、ヒドロキシル、アルデヒド、ケトン、メル カプタンまたはカルボキシル基またはヒドロカルビルまたはジヒドロカルビルア ミン基（以下においては用語「ヒドロカルビル」は炭化水素のＣ６Ｈ２＃　４１ 型のような一価残基のみならず、「アルキレンＪ　Ｃ，Ｈ，Ｊたは「アルキリデ ンＪＣ。

Ｈ２カのような二価または三価残基を示すためにも用いる）、エーテルまたはエ ステル基、アセタールまたはケタール基、チオエーテルまたはチオエステル基お よびエステル化カルボキシルまたはカルバミド基および１個またはそれ以上のヒ ドロカルビル基、ニトリル基またはハロゲンで置換されたカルバミド、のような これらから誘導された基のような他の遊離の官能基または修飾された官能基で置 換されていてもよい。

ヒドロカルビル残基を含む前記基において、それらは好ましくは最大６炭素原子 を持つアルキルのような低級脂肪族残基である。このようなアルコールは炭素原 子鎖中に酸素、窒素および硫黄原子のようなヘテロ原子を含みうる。好適なのは 前記官能基１個または２個で置換されているアルコールである。

好ましく使用される前記群のアルコールは炭素原子最大１２個、特に６個を持ち 、前記アミン、エーテル、エステル、チオエーテル、チオエステル、アセタール 、ケタール基におけるヒドロカルビル原子が最大４個の炭素原子を持つアルキル 基を表し、また、エステル他カルボキシルまたは置換カルバミド基においてはヒ ドロカルビル基が同数の炭素原子を持つアルキルであり、そしてアミンまたはカ ルバミド基において最大８個の炭素原子を持つアルキレンアミンまたはアルキレ ンカルバミド基でありうる。これらアルコールについて、特に好適なのはメチル 、エチル、プロピルおよびイソプロピルアルコール、ノルマルブチルアルコール 、イソブチルアルコール、第３級ブチルアルコール、アミル、ペンチル、ヘキシ ル、オクチル、ノニルおよびドブノルアルコールのような飽和および非置換アル コールであり、そして、とりわけ、ノルマルオクチルおよびドブノルアルコール のように線状鎖を持つものである。この群の置換アルコールのうちで、エチレン グリコールおよびブチレングリコールのような２らアルコールは有用であり、グ リセリンのような３価アルコール、タートロンアルコールのようなアルデヒドア ルコール、例えばグリコール酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸など乳酸類のよう なカルボキシルアルコール、ノルマルアミノエタノール、アミツブＣＩ／（ノー ル、ノルマルアミノブタノールおよびこれらのアミン官能におけるジメチル化お よびノエチル化誘導体、コリン、ピロリノニルエタノール、ピペリノニルエタノ ール、ピペリノニルエタノールおよびノルマルプロピルまたはノルマルブチルア ルコールの対応する誘導体、モノチオエチレングリコールまたはそのメルカプタ ン官能におけるエチル誘導体のようなアルキル化誘導体のようなアミノアルコー ルである。

高級飽和脂肪族アルコールのうちで、好適なのはセチルアルコールおよびミリノ ルアルコールであるが、本発明の目的のためにはシトロネロール、ゲラニオール 、ネロール、不ロリドール、リナロール、ファルネソール、フィトールのように 特に多数の精油に含まれ、テルペンに親和性を持つような二重結合１個または２ 個を持つ高級不飽和アルコールは特に重要である。不飽和低級アルコールのうち で、アリルアルコールおよびプロパルギルアルコールは考慮する必要がある。

芳香脂肪族アルコールのうちで、ベンゼン環１個のみを持ち、脂肪族鎖が最大４ 個の炭素原子を持ち、ベンゼン残基は１個と３個との間のメチルまたはヒドロキ シル基またはハロゲン原子、特に塩素、臭素およびヨード、で置換されることが でき、脂肪族鎖は遊離アミン基またはモノ−またはジメチル化されたものを含む 基またはピロリノンまたはピペリジン基から選ばれる官能基１個またはそれ以上 で置換されうるものが好適である。これらのアルコールのうちで、最も好適なの はベンノルアルコールおよびフェネチルアルコールである。

指環または脂肪族指環系列のアルコールはモノ−またはポリ環状炭化水素から誘 導されうるし、好ましくは最大３４個の炭素原子を持ちうるし、非置換および脂 肪族アルコールについて前記したような置換基１個またはそれ以上を含みつる。

の炭素原子を持ちうるし、例えば１個と３個との間のメチル、エチル、プロピル またはイソプロピル基のような低級アルキル基で置換されつる好ましくは５個と ７個との間の炭素原子を持つ環を持つものが好適である。この群の特定的なアル コールとして、次のものは最も好適であるニジクロヘキサノール、シクロヘキサ ンジオール、１．２．３−＞クロヘキサントリオールおよび１．　３．　５−シ クロヘキサントリオール（フロログルチトール）、イノントールおよびカルボメ ントール、メントール、α〜γ−テルピネオール、１−テルピネオール、４−テ ルピネオールおよびピペリトールまたは「テルピネオール」として知られている これらのアルコールの混合物、１，４−および１，８−テルピンのようなｐ−メ タンから誘導されるアルコール。チュヤン、ピナンまたはコツアンのような縮合 環を持つ炭化水素から誘導したアルコールのうちで、次のものは好適である；チ ュヤノール、サビノール、ピノール水和物、Ｄ−およびＬ−ボルネオールおよび Ｄ二およびＬ−イソボルネオール。

本発明のエステルのために使用されるべき脂肪族−脂環多環アルコールはステロ ール、コール酸および性ホルモンおよびそれらの合成類縁体のようなステロイド 、特にフルチコステロイドおよびその誘導体である。それ故、コレステロール、 ノドドロコレステロール、エビジヒドロコレステロール、コブロスタノール、エ ビコブロスタノール、ノドステロール、スチグマステロール、エルゴステロール 、胆汁酸、チオキシコール酸、リトコール酸、エストリオール、エストラジオー ル、エキレニン、エキリンおよびそれらのアルキル化誘導体ならびに１７α−エ チニルニストランオール、７α−メチル−１７α−エストラジオールのようなそ れらの１７位におけるエチニルまたはプロピニル誘導体、プレグネノロン、プレ グナンジオール、テストステロンおよび１７α−メチルテストステロン、１，２ −デヒドロテストステロンおよび１７α−メチル−１，２−デヒドロテストステ ロンのようなその誘導体、１７α−エチニルテストステロン、１７α−プロピニ ルテストステロンのようなテストステロンおよび１．２−デヒドロテストステロ ンの１７位におけるアルキニル化誘導体、ノルゲスチロール、ヒドロキシプロゲ ステロ／、コルチコステロン、デオキシコルチコステロン、１９−ノルテストス テロ７．１９−ツルー１７α−メチルテストステロンおよび１９−ツルー１７α −エチニルテストステロン、ンブロテロンのような抗ホルモン、コルチゾン、ヒ ドロキノコルチゾン、プレドニソン、プレドニソロン、フルオロコルチゾン、デ キサメタシン、ベタメタシン、パラメタシン、フルメタシン、フルオンノロン、 フルプレトニリデン、クロベタゾール、ベタメタシン、アルドステロン、デオキ シコルチコステロン、アフラキソロン、アルファドロンおよびボラステロン　を 用いることが可能である。本発明のエステルのためのエステル化成分としては次 のものが有用である　ノキトキンゲニン、ギトキノゲニン、ノゴキ／ゲニン、ス トロファンチ／ン、チゴゲニンおよびサポニンのような強心配糖体のゲニン（ア グリコン）。

本発明に従って使用される池のアルコールはアクセロフトール、ビタミンＤ。

とＤ３、アネウリン、ラクトフラビン、アスコルビン酸、リボフラビン、チアミ ンおよびパントテン酸のようなビタミンの類である。

ヘテロ環状酸のうちで、次のものはもし、それらの線状または環状鎖が１個また はそれ以上、例えば１個と３個との間のへテロ原子、例えば−〇−１−Ｓ−１− Ｎおよび−ＮＨ−から形成される群から選ばれるものを含んでおり、これらの中 で１個またはそれ以上の不飽和結合、例えば２重結合、殊に１個と３個との間の ものがありうるので、芳香性構造を持つヘテロ環化合物を含むものを前記脂環ま たは脂肪族脂環アルコールの誘導体として考慮することができる。例えば、以下 のものに言及すべきである。フルフリルアルコール、アトロピン、スコポラミン 、ノンコニン、１ａンンコニノン、キニン、モノレフイン、コディン、ナロルフ ィン、臭化Ｎ−プチルスコポランモニウム、アジマリンのようなアルカロイドお よび誘導体、エフェドリン、イソプロテレノール、エピネフリンのようなフェニ ルエチルアミン、ベルツェナノン、ビボチアジン、カルフェナシン、ホモフエナ シン、アセトツェナノン、フルオフエチレンおよび塩化Ｎ−ヒドロキシエチルプ ロメタシンのようなフエノチアジり薬剤、フルペンチキソルおよびクロベンチキ ソルのようなチオキサンチン薬剤；メブロフェンジオールのような抗痙章剤；オ ビグラモールのような抗精神病剤、オキシベンノルのような抗嘔吐剤；カルベチ ジンおよびフェノベリジンおよびメタドールのような鎮痛剤、エトドロキシジン のような催眠剤：ベンジドロールおよびジフエメトキンジンのような食欲抑制剤 。

ヒドロキシシンのようなマイナートランキライザー：シンナメドリン、ジフィリ ン、メフエ不ノン、メトカルバモール、クロルフェネシン、２．２−ジエチル− １，３−プロパンツオール、グアイフェネシン、ヒドロンラミドのような筋肉弛 緩剤、ジビリダモールおよびオキシフェトリンのような冠動脈血管拡張剤；プロ パノロール、チモロール、ピンドロール、ブプラノロール、アテノロール、メト ロブロール、プラクトロールのようなアドレナリン阻害剤、６−アザウリジン、 ノタラビン、フェノベリジンのような抗新生物剤：クロラムフェニコール、チア ムフエニコール、エリスロマイノン、オレアンドマイシン、リンコマイシンのよ うな抗生物質、イドクスウリジンのような抗ウィルス剤、イソニコチニルアルコ ールのような抹消血管拡張剤、スロカルビレートのような炭酸アンヒトレース阻 害剤、チアラミドのような抗喘息および抗炎症剤：２−ｐ−スルファニロノエタ ノールのようなスルファミド剤。

エステル基が治療上活性なヒドロキシル性物質２個またはそれ以上から誘導され 、当然全ての可能な変種が得られるような場合にはヒアルロン酸エステルは注目 されうる。特に興味深いものはヒドロキシル性薬剤から誘導される２種の異なる エステル基が存在し、残りのカルボキシル基は遊離であるか、金属または塩基で 塩を形成し、塩基もそれ自身が、例えばエステル化成分のと同一または類似の活 性を持つ治療的に活性でありうる物質である。殊に、一方は前記したものの一つ のような抗炎症ステロイド、他方は前記したものの一つのようなビタミンから、 アルカロイドからまたは抗生物質からヒアルロン酸エステルを誘導することもで きる。

ヒアルロン酸のエステルはカルボン酸のエステル化のためにそれ自体公知の方法 、例えば強無機酸または酸型イオン交換剤のような触媒する物質の存在下の遊離 ヒアルロン酸の所期アルコールでの処理、または無機または有機塩基の存在下の 所期アルコール性残基を導入することのできるエーテル化剤での処理によって製 造しうる。エステル化剤としては特に種々の無機酸のまたは有機スルホン酸のエ ステルのような、ヨウ化メチルまたはエチルのようなハロゲン化炭化水素である 水素酸のエステル、または中性スルフェートまたは炭化水素酸、アルファイト、 カーボネート、ノリケート、ホスファイトまたはメチルベンゼンまたはり−トル エンスルホネートまたはクロロスルホン酸メチルまたはエチルのような炭化水素 化スルホイ、−トのような文献公知のものを使用することができる。反応は、例 えばカルボキサミ基に導入すべきアルキル基に対応するもののようなアルコール のような適当な溶媒中で起こしうる。しかし、反応はケトン、ンオキサンのよう なエーテルのような非極性溶媒中またはジメヂルスルホキ／ドのような非プロト ン性溶媒中でも起こしうる。塩基としては、例えば、アルカリまたはアルカリ土 類金属のヒトレートまたはマグネ／ラムまたは銀の酸化物または炭酸塩のような これらの金属の塩基性塩および有機塩基のもの、ピリジンまたはコリノンのよう な３級窒素塩基を使用することが可能である。塩基の代わりに塩基型のイオン交 換剤を使用することも可能である。

別のエステル化法では金属塩または、例えばアンモニウムまたはアンモニウム置 換塩のような、有機窒素塩基との塩を採用する。好ましくは、アルカリまたはア ルカリ土類金属の塩が用いられるが、他のどのような金属塩も用いうる。この場 合エステル化剤も前記のものであるが、溶媒についても同様である。例えば、ノ メチルスルホキシドおよびツメチルホルムアミドのような、非プロトン溶媒を用 いるのが好ましい。

この操作に従ってまたは以下に記載する池の操作に従って得られたエステルにお いて、部分エステルの遊離力ルポキノル基は、所望であれば、それ自体公知の方 法で塩形成（ｓａｌｉｆｙ’）Ｌうる。

方法Ｂ ヒアルロン酸エステルはヒアルロン酸の４級アンモニウム塩を、好ましくは非プ ロトン性有機溶媒中で、エステル化剤で処理することがら構成される方法によっ ても製造しつる。

有機溶桿としては、ノアルキルスルホキシド、ジアルキルカルボキサミド、特に ノメチルスルホキシドである殊に低級アルキルジアルキルスルポキンド、および ジメチルまたはジエチルホルムアミドまたはジメチルまたはジエチルアセトアミ ドのような低級脂肪族酸の低級アルキルジアルキルアミドのような非プロトン溶 媒を使用することが好ましい。

しかし、アルコール、エーテル、ケトン、エステル、特にヘキサフルオロイソプ ロパツール、トリフルオロエタノールおよびＮ−メチルピロリドンのような低沸 つ、を持つ脂肪族またはへテロ環アルコールおよびケトンのように必ずしも非プ ロトン性でない他の溶媒も考慮すべきである。

反応は、好ましくは約０℃と１００℃との間、特に約２５℃と７５℃との間の範 囲、例えば約３０℃の温度で行う。

エステル化は、好ましくは徐々にエステル化剤を前記アンモニウム塩に前記麹稈 の一つで添加することによって、実施する。

アルキル化剤としては、例えばアルキルハロゲンのような、特に炭化水素化ハロ ゲンである、前記のものを用いることが可能である。出発４級アンモニウム塩と して、低級アンモニウムテトラアルキレート、好ましくはアルキル基が炭素原子 １個と６個との間を持つもの、を用いることが好ましい。多くはヒアルロン酸テ トラブチルアンモニウムを用いる。ヒアルロン酸の金属塩、好ましくは前記の− ものの一つ、特にナトリウムまたはカリウム塩を水溶液中で、４級アンモニウム 塩基で塩形成させたスルホン酸樹脂とを反応させてこれら４級アンモニウム塩を 製造することが可能である。

前記操作の変種の一つはジメチルスルホキノドのような適当な溶媒中に懸濁した ヒアルロン酸のカリウムまたはナトリウム塩を適当なアルキル化剤と触媒量のヨ ウ化テトラブチルアンモニウムのような４級アンモニウム塩の存在下に反応させ ることから構成される。

ヒアルロン酸エステルの製造のためには、例えば前記天然出発物質、例えば家鴨 のトサカ、から抽出された酸のようにどの由来のヒアルロン酸も用いることが可 能である。その酸の製造は文献に記載されており　好ましくは精製ヒアルロン酸 を用いる。特に用いられるのは広範囲に分布する分子量、例えば１３百万の分子 量を持つ全酸の分子量の約９０％〜８０％（ＭＷ＝１１．７〜１０．４百万）か ら０２％（Ｍ〜Ｖ＝３００００）まで、好ましくは５％と０２％との間、を持つ 有機物質の抽出によって直接に得られた全酸の分子画分からなるヒアルロン酸で ある。この両分は加水分解、酸化、酵素的または機械的または拡散操作のような 物理的操作のような文献記載の種々の操作により得られうる。それ故、プリモデ ィアル抽出物がしばしばこれらの同じ文献操作の間に形成される（例えば、前記 引用Ｂａ１ａｚｓなどの文献「化粧品とトイレトリー（Ｃｏｓｍｅｔｉｃｓ・＆ ・Ｔｏｉｌｅｔｒｉｅｓ）Ｊ参照）。得られる分子画分の分離と精製は、例えば 分子濾過によるような公知技術て行う。

加えるに有用なのは、例えば欧州特許公開第０１３８５７２号に記載されている もののようなヒアルロン酸から得られる精製画分である。

前記特定エステル化操作のための出発塩の製造のための前記金属によるＨ）′の 塩形成は、それ自体公知の方法、例えばＨ）′と計算量の塩基、例えばアルカリ ノ＼イトルートまたはその金属の炭酸塩または重炭酸塩のような塩基性塩、とを 反応させるもの、で行う。

部分エステルでは塩基量を所期の程度の塩形成が得られるようにして処方して咳 余のカルボキシル基全部または一部のみを塩形成させることが可能である。正し い塩形成の程度により、広範囲の種々の分離恒数を持ち、それ故溶液中でまたは 治療的投与の時の「インノチュ」において所期のｐＨを与えるエステルを得るこ とが可能である。

製造例 以下は本発明の複合膜に有用なヒアルロン酸エステルの製造を例示する。

実施例１　ヒアルロン酸（）（’ｌ’　）の（部分）プロピルエステルの製造− エステル化カルボキシル基５０％ −塩形成カルボキシル基（Ｎａ）５０％分子ｆｆ１１７００００を持ち、モノマ ー単位で２０ｍ、Ｅｑ、に対応するＨＹテトラブチルアンモニウム塩１２．４ｇ をジメチルスルホキシドロ２０ｍＬに２５゛Ｃで溶解し、ヨウ化プロピル１．　 ８ｇ　（１０，６ｍ、Ｅｑ、　）を加え、得られる溶液を３０℃の温度に１２時 間維持する。

水６２ｍＬおよび塩化ナトリウム９ｇを含む溶液を加え、得られる混合物を撹拌 し続けているアセトン３５００ｍＬ中に徐々に注入する。沈殿が生じ、これを濾 過し、５００ｍＬのアセトン／水５・１で３回およびアセトンで３回洗浄し、最 後に３０℃で８時間真空乾燥する。

次に生成物を１％の塩化ナトリウムを含む水５５０ｍＬに溶解し、撹拌し続けて いるアセトン３０００ｍＬ中に溶液を徐々に注入する。沈殿が生じ、これを濾過 し、５００ｍＬのアセトン／水（５１）で２回およびアセトン５００ｍＬで３回 洗浄し、最後に３０℃で２４時間真空乾燥する。標記の部分プロピルエステル化 合物７９ｇが得られる。エステル基の定量をＲ，Ｈ，Ｃｕｎｄ　ｉ　ｆ　ｆとＰ 。

Ｃ，Ｍａｒｋｕｎａｓ　［Ａｎａ　１．Ｃｈｅｍ、　、３３巻、１０２８〜１０ ３０頁、（１９６１年）］の方法を用いて実施する。

実施例２　ヒアルロンｉｆ！（ＨＹ）の（部分）イソプロピルエステルの製造− エステル化カルボキシル基５０％−塊形成カルボキシル基（Ｎａ）５０％分子量 １６００００を持ち、モノマー単位で２０ｍ、Ｅｑ、に対応するＨＹテトラブチ ルアンモニウム塩１２４ｇをジメチルスルホキシドロ２０ｍＬに２５℃で溶解し 、ヨウ化イソプロピル１．　８ｇ　（１０，６ｍ、Ｅｑ、　）を加え、得られる 溶液を３０℃に１２時間維持する。

水６２ｍＬおよび塩化ナトリウム９ｇを含む溶液を加え、得られる混合物を撹拌 し続けているアセトン３５００ｍＬ中に徐々に注入する。沈殿が生じ、これを濾 過し、５００ｍＬのアセトン／水５：１で３回およびアセトンで３回洗浄し、最 後に３０℃で８時間真空乾燥する。

次に生成物を１％の塩化ナトリウムを含む水５５０ｍＬに溶解し、撹拌し続けて いるアセトン３０００ｍＬ中に溶液を徐々に注入する。沈殿が生じ、これを濾過 し、５００ｍＬのアセトン／水５・１で２回およびアセトンｓｏＯｍＬで３回洗 浄し、最後に３０℃で２４時間真空乾燥する。標記の部分イソプロピルエステル 化合物７８ｇが得られる。エステル基の定量をＲ，Ｈ，Ｃｕｎｄ　ｉ　ｆ　ｆと Ｐ。

Ｃ，Ｍａｒｋｕｎａｓ　［Ａｎａ　Ｉ、Ｃｈｅｍ、　、３３巻、１０２８〜１０ ３０頁、（１９６１年）コの方法を用いて実施する。

分子量２５００００を持ち、モノマー単位で２０ｍ、Ｅｑ、に対応するＨＹテト ラブチルアンモニウム塩１２４ｇをジメチルスルホキッド６２０ｍＬに２５℃で 溶解し、ヨウ化エチル２．　５ｇ　（１５，９ｍ、Ｅｑ、　）を加え、得られる 溶液を３０℃に１２時間維持する。

水６２ｍＬおよび塩化ナトリウム９ｇを含む溶液を加え、得られる混合物を撹拌 し続けているアセトン３５００ｍＬ中に徐々に注入する。沈殿が生じ、これを濾 過し、５００ｍＬのアセトン／水５１で３回およびアセトンで３回洗浄し、最後 に３０℃で８時間真空乾燥する。

次に生成物を１％の塩化ナトリウムを含む水５５０ｍＬに溶解し、撹拌し続けて いるアセトン３０００ｍＬ中に溶液を徐々に注入する。沈殿が生じ、これを濾過 し、５００ｍＬのアセトン／水５１で２回およびアセトン５００ｍＬで３回洗浄 し、最後に３０℃で２４時間真空乾燥する。標記の部分エチルエステル化合物７ ．９ｇが得られる。エステル基の定量をＲ，Ｈ，Ｃｕｎｄ　ｉ　ｆ　ｆとＰ、　 Ｃ。

％１ａｒｋｕｎａｓ　［Ａｎａｌ、Ｃｈｅｍ、、３３巻、１０２８〜１０３０頁 、（１９６１年）］の方法を用いて実施する。

分子量５ｏｏｏｏを持ち、モノマー単位で２Ｑｍ、Ｅｑ、に対応するＨＹテトラ ブチルアンモニウム塩１２．４ｇをツメチルスルホキシド６２０ｍＬに２５℃で 溶解し、ヨウ化メチル２．　２６．ｇ　（１５，９ｍ、Ｅｑ、　）を加え、得ら れる溶液を３０℃に１２時間維持する。

水６２ｍＬおよび塩化ナトリウム９ｇを含む溶液を加え、得られる混合物を撹拌 し続けているアセト〉３５００ｍＬ中に徐々に注入する。沈殿が生じ、これを濾 過し、５００ｍＬのアセトン／水５１で３回およびアセトンで３回洗浄し、最後 に３０℃で８時間真空乾燥する。

次に生成物を１％の塩化ナトリウムを含む水５５０ｍＬに溶解し、撹拌し続けて いるアセトン３０００ｍＬ中に溶液を徐々に注入する。沈殿が生じ、これを濾過 し、５００ｍＬのアセトン／水（５：　１）で２回およびアセトン５００ｍＬで ３回洗浄し、最後に３０℃で２４時間真空乾燥する。標記の部分メチルエステル 化合物７８ｇが得られる。エステル基の定量をＲ，Ｈ，Ｃｕｎｄ　ｉ　ｆ　ｆと Ｐ。

Ｃ，Ｍａｒｋｕｎａｓ　［Ａｎａｌ、Ｃｈｅｍ、、３３巻、１０２８〜１０３０ 頁、（１９６１年）］の方法を用いて実施する。

実施例５　ヒアルロン酸（ＨＹ）のメチルエステルの製造分子量１２００００を 持ち、モノマー単位で２０ｍ、Ｅｑ、に対応するＨＹテトラブチルアンモニウム 塩１２．４ｇをジメチルスルホキシド６２０ｍＬに２５℃で溶解し、ヨウ化メチ ル３ｇ　（２１，２ｍ、Ｅｑ、　）を加え、溶液を３０℃−に１２時間維持する 。

撹拌し続けている酢酸エチル３５００ｍＬ中に得られる混合物を徐々に注入する 。沈殿が生じ、これを濾過し、酢酸エチル５００ｍＬで４回洗浄し、最後に３０ ℃で２４時間真空乾燥する。

標記のエチルエステル生成物８ｇが得られる。エステル基の定量をＲ０比　Ｃｕ ｎｄ　ｉ　ｆ　ｆとＰ、Ｃ，Ｍａｒｋ、ｕｎａｓ　［Ａｎａｌ、Ｃｈｅｍ、　、 ３３巻、１０２８〜１０３０頁、（１９６１年）］の方法を用いて実施する。

実施例６　ヒアルロン酸（ＨＹ）のエチルエステルの製造分子量８５０００を持 ち、モノマー単位で２Ｑｍ、Ｅｑ、に対応するＨＹテトラブチルアンモニウム塩 １２．４ｇをジメチルスルホキシド６２０ｍＬに２５℃で溶解し、ヨウ化エチル ３．　３ｇ　（２１，２ｍ、　Ｅｑ、　）を加え、溶液を３０℃に１２時間維持 する。

撹拌し続けている酢酸エチル３５００ｍＬ中に得られる混合物を徐々に注入する 。沈殿が生じ、これを濾過し、酢酸エチル５００ｍＬで４回洗浄し、最後に３０ ℃で２４時間真空乾燥する。

標記のエチルエステル生成物８ｇが得られる。エステル基の定量をＲ，Ｈ，Ｃｕ ｎｄ　ｉ　ｆ　ｆとＰ、Ｃ，Ｍａｒｋｕｎａｓ　［Ａｎａ　１．Ｃｈｅｍ、　、 ３３巻、１０２８〜１０３０頁、（１９６１年）］の方法を用いて実施する。

実施例７　ヒアルロン酸（ＨＹ）のプロピルエステルの製造分子量１７００００ を持ち、モノマー単位で２０ｍ、Ｅｑ　に対応するＨＹテトラブチルアンモニウ ム塩１２．４ｇをジメチルスルホキッド６２０ｍＬに２５℃で溶解し、ヨウ化プ ロピル３．　６ｇ　（２１，２ｍ、Ｅｑ、　）を加え、溶液を３０℃に１２時間 維持する。

攪拌し続けている酢酸エチル３５００ｍＬ中に得られる混合物を徐々に注入する 。沈殿が生じ、これを濾過し、酢酸エチル５００ｍＬで４回洗浄し、最後に３０ ℃で２４時間真空乾燥する。

標記のプロピルエステル生成物８．３ｇが得られる。エステル基の定量をＲ８Ｈ ，Ｃｕｎｄ　ｉ　ｆ　ｆとＰ、Ｃ，Ｍａｒｋｕｎａｓ　［Ａｎａｌ、Ｃｈｅｍ、 　、３３巻、１０２８〜１０３０頁、（１９６１年）］の方法を用いて実施する 。

分子量６２００００を持ち、モノマー単位で２０ｍ、Ｅｑ　に対応するＨＹテト ラブチルアンモニウム塩１２．４ｇをジメチルスルホキシドロ２０ｍＬＣ２５℃ で溶解し、ヨウ化ｎ−ブチル１．　９５ｇ　（１０，６ｍ、ＥＱ、　）を加え、 得られる溶液を３０℃に１２時間維持する。

水６２ｍＬおよび塩化ナトリウム９ｇを含む溶液を加え、得られる混合物を撹拌 し続けているアセトン３５００ｍＬ中に徐々に注入する。沈殿が生じ、これを濾 過し、５００ｍＬのアセトン／水５．１で３回およびアセトンで３回洗浄し、最 後に３０℃で８時間真空乾燥する。

次に生成物を１％の塩化ナトリウムを含む水５５０ｍＬに溶解し、撹拌し続けて いるアセトン３０００ｍＬ中に溶液を徐々に注入する。沈殿が生じ、これを濾過 し、５００ｍＬのアセトン／水５１で２回およびアセトン５００ｍＬで３回洗浄 し、最後に３０℃で２４時間真空乾燥する。標記の部分ブチルエステル化合物８ ｇが得られる。エステル基の定量をＲ，Ｈ，ＣｕｎｄｉｆｆとＰ、Ｃ，Ｍａｒｋ ｕｎａｓ　［Ａｎａｌ、Ｃｈｅｍ、　、３３巻、１０２８〜１０３０頁、（１９ ６１年）］の方法を用いて実施する。

実施例９　ヒアルロン酸（ＨＹ）の（部分）エトキシカルボニルメチルエステル の製造−エステル化カルボキシル基７５％−塩形成カルボキシル基（Ｎａ）２５ 旭 分子１１１８００００を持ち、モノマー単位で２０ｍ、Ｅｑ、に対応するＨＹテ トラブチルアンモニウム塩１２．４ｇをツメチルスルホキッド６２０ｍＬに２５ °Ｃで溶解し、ヨウ化テトラブチルアンモニウム２ｇとりフロ酢酸エチル１．８ ４ｇ　（１５ｍ、Ｅｑ、　）とを加え、得られる溶液を３０℃に２４時間維持す る。

水６２ｍＬおよび塩化ナトリウム９ｇを含む溶液を加え、得られる混合物を撹拌 し続けているアセトン３５００ｍＬ中に徐々に注入する。沈殿が生じ、これを濾 過し、５００ｍＬのアセトン／水５１で３回およびアセトンで３回洗浄し、最後 に３０℃で８時間真空乾燥する。

次に生成物を１％の塩化ナトリウムを含む水５５０ｍＬに溶解し、撹拌し続けて いるアセトン３０００ｍＬ中に溶液を徐々に注入する。沈殿が生じ、これを濾過 し、５００ｍＬのアセトン／水５・１で２回およびアセトン５００ｍＬで３回洗 浄し、最後に３０℃で２４時間真空乾燥する。標記の部分エトキシカルボニルメ チルエステル化合物１０ｇが得られる。

エトキノ性エステル基の定量をＲ，Ｈ，Ｃｕｎｄ　ｉ　ｆ　ｆとＰ、Ｃ，Ｍａｒ ｋｕｎａｓ　［Ａｎａ　１．Ｃｈｅｍ　、３３巻、１０２８−１０３０頁、（１ ９６１年）］の方法を用いて実施する。

大奥ｆｔ’１ｌｌＯヒアルロン酸（ＨＹ）のｎ−ペンチルエステルの製造分子量 ６２００００を持ち、モノマー単位で２０ｍ、Ｅｑ、に対応するＨＹテトラブチ ルアンモニウム塩１２．４ｇをツメチルスルホキシド６２０ｍＬに２５℃で溶解 し、臭化ｎ−ペンチル３．　８ｇ　（２５ｍ、Ｅｑ、　）とヨウ化テトラブチル アンモニウム０．２ｇとを加え、溶液を３０℃に１２時間維持する。

攪拌し続けている酢酸エチル３５００ｍＬ中に得られる混合物を徐々に注入する 。沈殿が生じ、これを濾過し、酢酸エチル５００ｍＬで４回洗浄し、最後に３０ ℃で２４時間真空乾燥する。

標記のｎ−ペンチルエステル生成物８．７ｇが得られる。エステル基の定量を５ １ｇｇ１ａ、Ｓ、　とＨａｎｎ、Ｊ、Ｇ、ｒ官能基による有機定量分析（Ｑｕａ ｎｔｉｔａｔｉｖｅ壷ｏｒｇａｎｉｃΦａｎａｌｙｓｉｓｅｖｉａ脅ｆｕｎｃｔ ｉｏｎａｌ−ｇｒｏｕｐｓ）Ｊ、第４版、Ｊｏｈｎ−Ｗｉ　Ｉｅｙ−ａｎｄ−Ｓ 。

ｎｓ、１６９〜１７２頁に記載の方法を用いて実施する。

害施例】１　ヒアルロン酸（Ｈ’ｌ’）のイソペンチルエステルの製造分子量１ ７００００を持ち、モノマー単位で２０ｍ、Ｅｑ　に対応するＨＹテトラブチル アンモニウム塩１２４ｇをジメチルスルホキシドロ２０ｍＬに２５℃で溶解し、 臭化イソペンチル３．　８ｇ　（２５ｍ、Ｅｑ、　）とヨウ化テトラブチルアン モニウム０２ｇとを加え、溶液を３０℃に１２時間維持する。

撹拌し続けている酢酸エチル３５００ｍＬ中に得られる混合物を徐々に注入する 。沈殿が生じ、これを濾過し、酢酸エチル５００ｍＬで４回洗浄し、最後に３０ ℃で２４時間真空乾燥する。

標題に示したイソペンチルエステル生成物８．６ｇが得られる。エステル基の定 量を５１ｇｇ１ａ、Ｓ　とＨａｎｎ、Ｊ、　Ｇ、「官能基による有機定量分析」 、第４版、Ｊｏｈｎ−Ｗｉ　ｌｅｙ・ａｎｄ−３ｏｎｓ、１６９〜１７２頁に記 載の方法を用いて実施する。

実施例１２　ヒアルロン酸（ＨＹ）のベンジルエステルの製造分子量１７０００ ０を持ち、七ツマ一単位で２０ｍ、Ｅｑ、に対応するＨＹテトラブチルアンモニ ウム塩１２．４ｇをツメチルスルホキシド６２０ｍＬに２５℃で溶解し、臭化ベ ンジル４．　５ｇ　（２５ｍ、Ｅｑ、　）とヨウ化テトラブチルする。沈殿が生 じ、これを濾過し、酢酸エチル５００ｍＬで４回洗浄し、最後に３０℃で２４時 間真空乾燥する。

標記のベンジルエステル生成物９ｇが得られる。エステル基の定量を５１ｇｇ１ ａ、Ｓ、とＨａｎｎ、Ｊ、Ｇ、ｒ官能基による有機定量分析」、第４版、Ｊ。

ｈｎ　−Ｗｉ　Ｉ　ｅｙ−ａｎｄ−Ｓｏｎｓ、１６９〜１７２頁に記載の方法を 用いて実施する。

実施例１３　ヒアルロン酸（ＨＹ）のβ−フェニルエチルエステルの製造分子量 １２５０００を持ち、モノマー単位で２０ｍ、Ｅｑ、に対応するＨＹテトラブチ ルアンモニウム塩１２．４ｇをジメチルスルホキシドロ２０ｍＬに２５℃で溶解 し、２−ブロモエチルベンゼン４．　６ｇ　（２５ｍ、Ｅｑ、　）　トヨウ化ｙ トラブチルアンモニウム１８５ｍｇを加え、溶液を３０℃に１２時間維持する： 撹拌し続けている酢酸エチル３５００ｍＬ中に得られる混合物を徐々に注入する 。沈殿が生じ、これを濾過し、酢酸エチル５００ｍＬで４回洗浄し、最後に３０ ℃で２４時間真空乾燥する。

標記のβ−フェニルエチルエステル９．１ｇが得られる。エステル基の定量を５ １ｇｇ１ａ、Ｓ、　とＨａｎｎ、Ｊ、Ｇ、ｒ官能基による有機定量分析」、第４ 版、Ｊｏｈｎ　−Ｗｉ　］　ｅｙ−ａｎｄ−３ｏｎｓ、１６８〜１７２頁に記載 の方法−を用いて実施する。

実施例１４　ヒアルロン酸（ＨＹ）のベンジルエチルエステルの製造分子量１６ ２０００を持つＨＹカリウム塩３ｇをジメチルスルホキシド２００ｍＬに懸濁し 、ヨウ化テトラブチルアンモニウム１２０ｍｇおよび臭化ベンジル２．４ｇを添 加する。

懸濁液を３０℃で４８時間撹拌し続ける。撹拌し続けている酢酸エチル１０１０ ０Ｏ中に得られる混合物を徐々に注入する。沈殿が生じ、これを濾過し、１５０ ｍＬの酢酸エチルで４回洗浄し、最後に３０℃で２４時間減圧乾燥する。

標題のベンノルエステル３．１ｇが得られる。エステル基の定量は５１ｇｇ１ａ 、Ｓ、とＨａｎｎ、Ｊ、　Ｇ。の方法「官能基による有機定量分析」、第４版、 Ｊｏｈｎ−Ｗｉ　１ｅｙ−ａｎｄ−３ｏｎｓの１６９〜１７２頁を使用して実施 する。

実施例１５　ヒアルロン酸（ＨＹ）の（部分プロピル）エステルの製造−エステ ル化力ルボキ／ル基８５％−塩形成カルボキシル基（Ｎａ）１５に分子量１６５ １０００を持ち、モノマー単位２Ｑｍ、Ｅｑ、に対応するＨＹテトラブチルアン モニウム塩１２４ｇをジメチルスルホキシドロ２０ｍＬに２５℃で溶解し、ヨウ 化プロピル２．　９ｇ　（１７ｍ、Ｅｑ、　）を添加し、得られる溶液を３０℃ に２４時間維持する。

溶液に水６２ｍＬおよび塩化ナトリウム９ｇを添加し、撹拌し続けているアセト ン３５００ｍＬ中に得られる混合物を徐々に注入する。沈殿が生じ、これを濾過 し、５００ｍＬのアセトン／水５１で３回およびアセトンで３回洗浄し、最後に ３０℃で８時間減圧乾燥する。

次に生成物を塩化ナトリウム１％を含む水５５０ｍＬに溶解し、撹拌し続けてい るアセトン３０００ｍＬ中に溶液を徐々に注入する。沈殿が生じ、これを濾過し 、５００ｍＬのアセトン／水５１で２回およびアセトン５００ｍＬで３回洗浄し 、最後に３０℃で２４時間真空乾燥する。標題の部分プロピルエステル化合物８ ｇが得られる。エステル基の定量はＲ，Ｈ，Ｃｕｎｄｉ　ｆ　ｆとＰ、Ｃ，Ｍａ ｒ　ｋ　ＩＪ　ｎ　ａ　ｓの方法［Ａｎａｌ、Ｃｈｅｍ、、３３巻、１０２８〜 １０３０頁（１９６１年）］を使用して実施する。

実施例１６　ヒアルロン酸（ＨＹ）のｎ−オクチルエステルの製造分子量１７０ ０００を持ち、モノマー単位２０ｍ、Ｅｑ、に対応するＨＹテトラブチルアンモ ニウム塩１２．４ｇをジメチルスルホキッド２００ｍＬに２５℃で溶解し、１− ブロモオクタン４．　１ｇ　（２１，２ｍ、　Ｅｑ、　）を添加し、溶液を３０ ℃に１２時間維持する。

撹拌し続けている酢酸エチル３５００ｍＬ中に得られる混合物を徐々に注入する 。、ｆｌ殿が生じ、これを濾過し、酢酸エチル５００ｍＬで４回洗浄し、最後に ３０℃で２４時間減圧乾燥する。標題のオクチルエステル生成物９．３ｇが得ら れる。エステル基の定量は５１ｇｇ１ａ、Ｓ、とＨａｎｎ、Ｊ、　Ｇ、の方法「 官能基による有機定量分析」、第４版、Ｊｏｈｎ−Ｗｔ　Ｉｅｙ−ａｎｄ−３ｏ ｎｓの１６９〜１７２頁を使用して実施する。

実施例１７　ヒアルロン酸（ＨＹ）のイソプロピルエステルの製造分子量１７０ ０００を持ち、モノマー単位２Ｑｍ、Ｅｑ、に対応するＨＹテトラブチルアンモ ニウム塩１２．４ｇをジメチルスルホキシド６２０ｍＬに２５℃で溶解し、臭化 イソプロピル２．６ｇ　（２１，２ｍ、Ｅｑ、　）を添加し、溶液を３０℃に１ ２時間維持する。

撹拌し続けている酢酸エチル３５００ｍＬ中に得られる混合物を徐々に注入する 。沈殿が生じ、これを濾過し、酢酸エチル５００ｍＬで４回洗浄し、最後に３０ ℃で２４時間減圧乾燥する。標題のイソプロピルエステル生成物８．３ｇが得ら れる。エステル基の定量はＲ，Ｈ，Ｃｕｎｄ　ｉ　ｆ　ｆとＰ、Ｃ，Ｍａｒｋｕ ｎａＳの方法［、へｎａ　１．Ｃｈｅｍ、、３３巻、１０２８〜１０３０頁（１ ９６１年）コを使用して実施する。

実施例１８　ヒアルロン酸（ＨＹ）の２．６−ジクロロベンジルエステルの製造 分子量１７００００を持ち、モノマー単位２Ｑｍ、Ｅｑ　に対応するＨＹテトラ ブチルアンモニウム塩１２．４ｇをジメチルスルホキシド２００ｍＬに２５℃で 溶解し、臭化２．６−ジクロロベンジル５．　０８ｇ　（２１，２ｍ、Ｅｑ、　 ）を添加し、溶液を３０℃に１２時間維持する。

撹拌し続けている酢酸エチル３５００ｍＬ中に得られる混合物を徐々に注入する 。沈殿が生じ、これを濾過し、酢酸エチル５００ｍＬで４回洗浄し、最後に３０ ℃で２４時間減圧乾燥する。標題の２．６−ジクロロベンジルエステル生成物９ ．７ｇが得られる。エステル基の定量は５１ｇｇ１ａ、Ｓ、とＨａｎｎ、Ｊ。

Ｇ　の方法「官能基による有機定量分析」、第４版、Ｊｏｈｎ−Ｗｉｌｅ）ｚａ ｎｄ−５ｏｎｓの１６９〜１７２頁を使用して実施する。

実施例１９　ヒアルロン酸（ＨＹ）の４−チルブチルベンジルエステルの製造分 子量１７００００を持ち、モノマー単位２０ｍ、Ｅｑ、に対応するＨＹテトラブ チルアンモニウム塩１２４ｇをジメチルスルホキシド２００ｍＬに２５℃で溶解 し、臭化４−チルブチルベンノル４．　８１ｇ　（２１，２ｍ、　Ｅｑ、　）を 添加し、溶液を３０℃に１２時間維持する。

撹拌し続けている酢酸エチル３５００ｍＬ中に得られる混合物を徐々に注入する 。沈殿が生じ、これを濾過し、酢酸エチル５００ｍＬで４回洗浄し、最後に３０ ℃で２４時間減圧乾燥する。標題の４−チルブチルベンノルエステル生成物９゜ ８ｇが得られる。エステル基の定員は５１ｇｇ１ａ、Ｓ　とＨａｎｎ、Ｊ、Ｇ。

の方法「官能基による有機定量分析」、第４版、Ｊｏｈｎ−Ｗｉ　１ｅｙ−ａｎ ｄ−３ｏｎ　ｓの１６９〜１７２頁を使用して実施する。

Ｘ−ｍ１＠＋２０　ヒアルロン酸（Ｈ’）’　）のヘブタデツルエステルの製造 分子量１７００００を持ち、モノマー単位２０ｍ、Ｅｑ　に対応するＨ　Ｙテト ラブチルアンモニウム塩１２４ｇをジメチルスルホキッド２００ｍＬに２５℃で 溶解し、臭化へブタデノル６．　８ｇ　（２１，２ｍ、Ｅｑ、　）を添加し、溶 液を３０℃に１２時間維持する。

撹拌し続けている酢酸エチル３５００ｍＬ中に得られる混合物を徐々に注入する 。沈殿が生じ、これを１１！過し、酢酸エチル５００ｍＬで４回洗浄し、最後に ３０℃で２４時間減圧乾燥する。標題のへブタデノルエステル生成物１１ｇが得 られる。エステル基の定量は５１ｇｇ１ａ、Ｓ　とＨａｎｎ、Ｊ、Ｇ、の方法「 官能基による有機定量分析」、第４版、Ｊｏｈｎ−Ｗｉ　１ｅｙ−ａｎｄ−３ｏ ｎｓの１６９〜１７２頁を使用して実施する。

実施例２１　ヒアルロン酸（Ｈ’ｙ’）のオフタデノルエステルの製造分子量１ ７００００を持ち、モノマー単位２０１Ｔ１．　Ｅｑ、に対応するＨＹテトラブ チルアンモニウム塩１２４ｇをジメチルスルホキシド２００ｍＬに２５℃で溶解 し、臭化オフタデ／ルア、Ｉｇ　（２１，２ｍ、Ｅｑ、　）を添加し、溶液を３ ０℃に１２時間維持する。

撹拌し続けている酢酸エチル３５００ｍＬ中に得られる混合物を徐々に注入する 。沈殿が生じ、これをａ過し、酢酸エチル５００ｍＬで４回洗浄し、最後に３０ ℃で２４時間減圧乾燥する。標題のオクタデツルエステル生成物１１ｇが得られ る。エステル基の定量は５１ｇｇ１ａ、Ｓ　とＨａｎｎ、Ｊ、Ｇ、の方法「官能 基による有機定量分析」、第、１版、Ｊｏｈｎ−Ｗｉ　１ｅｙ−ａｎｄ−３ｏｎ ｓの１６９〜１７２頁を使用して実施する。

大應皿λス　ヒアルロン酸（ｌｌＹ”１（７）−旺２□匠ジと！ロビルエ冬元次 ９歿對分子量１７０．０００のＩＩＹテトラブチルアシモニウム塩を１２．４ｇ 、即ち単量体単位で２０ｗ、　Ｅｑ、相当量を６２０ｍ１のジメチルスルホキシ ドに２５℃で溶解し、４．２２ｇの３−フェニルプロピルプロミド（２１，２ｍ 、　Ｅｑ、　）を加えて、溶液を３０℃で１２時間保持する。

得られた混合液を一定の割合で撹はんしながら徐々に３．５００ｉ１の酢酸エチ ルに注ぐ。生成した沈澱物を濾取し、５００ｍ１の酢酸エチルで４回洗浄して最 終に３０℃で２４時間真空乾燥する。表題の３−フェニルプロピルエステル生成 物が９ｇ得られる。

５１ｇｇ１ａ　Ｓ及びｌ１ａｎｎａ　Ｊ、Ｇの方法（”Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖ ｅ　ｏｒｇａｎｉｃ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｖｉａ　ｆｕｎｃ狽堰B ｎａｌ　ｇｒｏｕｐｓ”、　４ｔｈ　Ｅｄｄｉｔｉｏｎ、　Ｊｏｈｎ　ｆｉｌｅ ｙ　ａｎｄ　５ｏｎｓ、　ｐａｇｅｓ　＋６９−１７２）をpいてエ ステル基を定量する。

実施例２３　見二先日？酸（ＨＹ）の３．４．５−トリｚｈ千ンベンジノにエス テルの調製−分子量１７０．０００のＩＩＹテトラブチルアンモニウム塩を１２ ．４ｇ、即ち単量体単位で２０ｍＥｑ相当量を６２ｈｌのジメチルスルホキシド に２５℃で溶解し、４６ｇの３．４．５−トリメトキノベンジルクロリド（２１ ，２ｍ、　Ｅｑ、　）を加えて、溶液を３０℃で１２時間保持する。

得られた混合液を一定の割合で撹はんしながら徐々に３．５００＋＋１の酢酸エ チルに注ぐ。生成した沈澱物を濾取し、５００ｍ１の酢酸エチルで４回洗浄して 最終に３０℃で２４時間真空乾燥する。表題の３．４．５−　トリメトキノベン ジルエステル生成物が１０ｇ得られる。５１ｇｇ１ａ　Ｓ、及びＨａｎｎａ　Ｊ 、Ｇの方法（”Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｏｒｇａｎｉｃ　ａｎａｌｙｓｉｓ 　Ｖｉａ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｇｒｏｕｐｓ＋、　４ｔｈ　Ｅｄｄｉｔｉｏ ｎ、　Ｊｏｈｎ　１ｉｌｅｙ　ａｎｄ　５ｏｎｓ、　ｐａｇｅｓ@１６９−１７ ２） を用いてエステル基を定量する。

実施例２４　ヒアルロン酸（ＢＹ）のノンナミルエステルの調製分子量１７０． ０００のＢＹテトラブチルアンモニウム塩を１２．４ｇ、即ち単量体単位で２０ ＩＮ、Ｅｑ相当量を６２０ｍ１のジメチルスルホキシドに２５℃で溶解し、４２ ｇのシンナミルプロミド（２１，２ｍ、　Ｅｑ、　）を加えて、溶液を３０℃で １２時間保持する。

得られた混合液を一定の割合で撹はんしながら徐々に３．５００ｍ１の酢酸エチ ルに注ぐ。生成した沈澱物を濾取し、５０ｈｌの酢酸エチルで４回洗浄して最終 に３０℃で２４時間真空乾燥する。表題の／ンナミルエステル生成物が９．３ｇ 得られる。５１ｇｇ１ａＳ及びＢａｎｎａ　Ｊ、Ｇの方法（”Ｑｕａｎｔｉｔａ ｔｉｖｅ　ｏｒｇａｎｉｃ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｖｉａ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ 　ｇ■ ｏｕｐｓ”、　４ｔｈ　Ｅｄｄｉｔｉｏｎ、　Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　ａｎｄ　 ５ｏｎｓ、　ｐａｇｅｓ　１６９−１７２）を用いてエステ■ 基を定員する。

実施例２５　ヒアルロン酸（ｌ＋）’）のデツルエステルの調製分子量１７０． ０００のＨＹテトラブチルアンモニウム塩を１２．４ｇ、即ち単量体単位で２０ ｍＥｑ相当員を６２０ｍ１のジメチルスルホキシドに２５℃で溶解し、４７ｇの １−ブロモデカ／（２］、　２ｍ、　ＥＱ、　）を加えて、溶液を３０℃で１２ 時間保持する。

得られた混合液を一定の割合て撹はんしながら徐々に３．５０ｈｌの酢酸エチル に注ぐ。生成した沈澱物を濾取し、５００ｍ１の酢酸エチルで４回洗浄して最終 に３０℃で２４時間真空乾燥する。表題のノンナミルエステル生成物が９．５ｇ 得られる。５１ｇｇ１ａＳ及びＨａｎｎａ　Ｊ、Ｇの方法（−Ｑｕａｎｔｉｔａ ｔｉｖｅ　ｏｒｇａｎｉｃ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｖｉａ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ 　ｇ■ ｏｕｐｓ−、４ｔｈ　Ｅｄｄｉｔｉｏｎ、　Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　ａｎｄ　５ ｏｎｓ、　ｐａｇｅｓ　１６９−１７２）を用いてエステル基を定Ｉする。

実施例２６　ヒアルロン酸（ＨＹ）のノニルエステルの調製分子量１７０．００ ０のＩＩＹテトラブチルアンモニウム塩を１２．４ｇ、即ち単量体単位で２０ｍ 、　Ｅｑ相当量を６２０ｍ１のジメチルスルホキッドに２５℃で溶解し、４．４ ｇの１−ブロモノナン（２１，２ｍ、　ＥＱ、　）を加えて、溶液を３０℃で１ ２時間保持する。

得られた混合液を一定の割合て撹はんしながら徐々に３．５００１１１の酢酸エ チルに注ぐ。生成した沈澱物を濾取し、５００ＩＩｌの酢酸エチルで４回洗浄し て最終に３０℃で２４時間真空乾燥する。表題のノナンエステル生成物が９ｇ得 られる。５１ｇｇ１ａ　Ｓ、及びＨａｎｎａ　Ｊ、Ｇの方法（”Ｑｕａｎｔｉｔ ａｔｉｖｅ　ｏｒｇａｎｉｃ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｖｉａ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａ ｌ　ｇｒｏ浮垂刀h ４ｔｈ　Ｅｄｄｉｔ、ｉｏｎ、　Ｊｏｈｎ　ｆｉｌｅｙ　ａｎｄ　５ｏｎｓ、　 ｐａｇｅｓ　１６９−１７２）を用いてエステル基を定量する。

塩基性薬物有効成分によるヒアルロン酸の部分塩を用い、金属または塩基により ヒアルロン酸の酸性残基を除去または中和したヒアルロン酸及び抗生物質薬の複 合体。これらの複合体は次の様に示される・塩基性薬物成分によるＨＹの化学量 論的中性塩を用い、さらに多量の薬物成分を添加したヒアルロン酸及び抗生物質 薬の複合体。これらは次の様に示される：（ｂ）　以下の混合物 （Ｃ）　以下の；見合物 （ｄ）　以下の混合物。

塩基性薬物成分によるＨＹの化学量論的中性塩を用い、さらに多量の薬物成分を 添加したヒアルロン酸及び抗生物質薬の複合体。これらは次の様に示される二種 々の薬物成分の任意の混合物によるＨＹの化学量論的中性塩を用いたヒアルロン 酸及び抗生物質薬の複合体。これらは次の様に示される上に示した可能な薬剤の いずれの混合物も本発明で使用できる。

有効成分の例 本発明で使用可能な薬物には様々な種類が考え得るが、本質的に塩基性であり、 第一、第二、第三もしくは第四級アミンが存在し、薬物の塩基性アミン部位はヒ アルロン酸分子酸性部位と結合する。本発明による薬剤で使用される薬理活性物 質の例としては、塩基性及び非塩基性抗生物質、例えばアミノ糖系藁剤、マクロ ライド系薬剤、テトラサイクリン系薬剤及びペプチド系薬剤、その具体例として ゲンタマイシン、ネオマイノン、ストレプトマイシン、ジヒドロストレプトマイ シン、カナマイシン、アミカシン、トブラマイシン、スペクチノマイシン、エリ スロマイシン、ロリテトラサイクリン、バシトラシン、ポリミキノンＢ、グラミ ／／ン、コリスチン、クロラムフェニコール、リンコマイノン、パンコマイシン 、ノボビオノン、リストセチン、クリンダマイノン、アムホテリシンＢ１グリセ オフルヒン、ナイスクチン、もしくは以下に示す様な同一有効成分間または他の 有効成分との結合物がある。

本発明により有利に使用されるその他の薬剤としては、ノエチルカルバマジン、 メベンダゾル、などのその他の抗感染薬、スルフアセタミド、スルファシアノン 、スルフイソキサゾールなどのサルファ剤；ヨードチオキシウリジン、アデニン アラビノンド、アンクロビル、エチルデオキシウリジン、ブロモビニルチオキシ ウリシン及び５−ヨード−５゛−アミノ−２゛、５−チオキシウリジンがある。

これらの薬物の同−成分及び考え得る他の成分との結合物または混合物もまた本 発明に従い抗生物質として使用される。単一の有効物質ではな（複数の有効物質 、例えば上述の物質についての結合物または混合物を使用する場合、塩基性有基 のうち一定量とこの種の物質との混合塩を意味する。

抗生物質のうち、次のものは特に重要である。エリスロマイシン、バシトラシン 、ゲンタマイシン、ネオマイノン、オーレオマイシン、グラミシジン及びそれら の結合物、ニトロフラゾン、マフエジド、クロルヘキシジン及び８−ヒドロキシ キノリンの誘導体及びそれらの塩。このリストはもちろんほんの一例であり、既 知または文献に記載されているその他のあらゆる抗生物質が用いられる。

本発明における抗生物質のヒアルロン酸塩の調製方法本発明による抗生物質塩の 調製は、自体既知の方法で行われる。即ち、計算上求められたＩを添加した成分 の溶液または懸濁液（水中または有機溶媒中）を組合せ、自体既知の方法に従い 無定形無水物として塩を単離する。塩基またはアルカリまたはアルカリ土類金属 、マグネシウム、アルミニウムまたはアンモニウム退の塩基性塩を利用すること も可能である。例えば、（ａ）最初に二成分の水溶液を調製し、（ｂ）イオン交 換体で処理するために各々の金属塩（例えば硫酸塩及びナトリウム塩）の酸によ りこれら成分塩の水溶液から成分を凝固させ、（ｃ）低温、例えば０°Ｃ−２０ ℃て２溶液を合わせる。こうして得られた塩が水に溶は易い場合、凍結乾燥をし なければならないが、水に容易に溶けない塩は、遠心分離、濾過またはデカンテ ーション、次にできるだけ乾燥させることにより分離される。

実施例２７　ストレプトマイノンとヒアルロン酸（ＨＹ）の塩の調製２４３ｇの ストレプトマイシン硫駿塩（１０ｍＥｑ）を２５ｍ１の蒸留水に溶解する。この 溶液を１５ｍ１のＯＨ−型四級アンモニウム樹脂（Ｄｏｗｅｘ　ｌＸ８）を含む サーモスタットカラムより５℃で溶出させる。脱流溶出物をサーモスタット容器 内に５℃で回収する。

分子量２＋５．０００のヒアルロン酸ナトリウム塩４．０ｇ（単量体単位ＩＱ＠ Ｅｑに相当）を４００ｍ１の蒸留水に溶解する。次にこの溶液を１５ｍ１のＨ十 型スルホン基樹脂（Ｄｏｗｅｘ　５Ｑｘ８）を含むサーモスタットカラムより５ ℃で溶出させる。脱流溶出物をストレプトマイノン塩基溶液を撹はんしながら回 収する。得られた溶液を凍結し、直ちに凍結乾燥する。このようにして得られた 塩は、ヒアルロン酸の全ての酸性基がストレプトマイノンの塩基性官能基と塩を 形成する。収量＋５．５ｇストレプトマイノン標準物を対照としてＢ、　５ｕｂ ｔｉｌｉｓ　ＡＴＣＣ上で微生物学的定量を行ったところ、ストレプトマイシン 塩基の重量として３３８％の含有量が認められ、理論計算上の重量と一致した。

Ｂｉｔｔｅｒらの方法（Ａｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　４．３３０．１９６２ ）に従って多糖内に結合しているグルクロン酸の比色定量を行うと、重量でヒア ルロン酸６６２％の含有量が認められる（理論％−６６０％）。

実施例２８　玉１ノスロマイ／ンとヒアルロン酸（ＨＹ）の塩の調製分子＠７７ 、０００のヒアルロン酸ナトリウム塩４０ｇ（単量体単位１（１ｍＥｑに相当） を４００ｍ１の蒸留水に溶解する。次にこの溶液を１５ｍ１のＩＩ十型スルホン 基樹脂（Ｄｏｖｅｘ　５０ｘ８）を含むサーモスタットカラムより５℃で溶出さ せる。ナトｌ功ムを除いた溶出物を５℃に保つ。

７３４ｇのエリスロマイシン塩基（１０ｍＥｑ）を５℃で撹はんしながら完全に 可溶化するまで）■）′溶液に加える。得られた溶液を凍結し、凍結乾燥する。

このようにして得られた塩は、ヒアルロン酸の全ての酸性基がエリスロマイシン と塩を形成する。

収量　１０８ｇ エリスロマイシン挿準物を対照としてＳｔ、ａｕｒｅｕｓ　ＡＴＣＣ６５３８Ｐ 上で微生物学的定量を行ったところ、エリスロマイシン塩基の重量として６６０ ％の含有量が認められ、理論値と一致した。Ｂｉｔｔｅｒらの方法（Ａｎａｌ、 　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　４．３３０．１９６２）に従って多糖内に結合しているグ ルクロン酸の比色定量を行うと、３４０％のヒアルロン酸含量が認められ、理論 計算でめた％と一致する。

に寒豊スλ　カナマイシンとヒアルロン酸（）ＩＹ）の塩の調製１、４６ｇのカ ナマイノン硫酸塩（１０ｍＥｑ）を２５ｍ１の蒸留水に溶解する。この溶液を１ ５ｍ１のＯＨ−型四級アンモニウム樹脂（Ｄｏｖｅｘ　１ｘ８）を含むサーモス フ・ソトカラムより５℃で溶出させる。硫酸塩を除いた溶出物をサーモスフ・ソ ト容器内に５℃で回収する。

分子量２５５．０００のヒアルロン酸ナトリウム塩４．０ｇ（単量体単位ＩＱｍ Ｅｑに相当）を４００ｍ１の蒸留水に溶解する。次にこの溶液を１５ｍ１のＨ十 型スルホン基樹脂（Ｄｏｗｅｘ　５０Ｘ８）を含むサーモスタットカラムより５ ℃で溶出させる。ナトリウムを除いた溶出物をカナマイシン塩基溶液内で、ポル テックスミキサーで撹はんしながら回収する。得られた溶液を直ちに凍結し、凍 結乾燥する。収量＋４．８ｇｏ得られた塩は、ヒアルロン酸の全ての酸性基がカ ナマイシンと塩を形成する。

カナマイシン標準物を対照としてＢ、　５ｕｂｔｉｌｉｓ　ＡＴＣＣ６６３３上 で微生物学的定量を行ったところ、カナマイノン塩基の重Ｉとして２４．２％の 含有量が認められ、理論計算でめた％と一致する。Ｂｉｔｔｅｒらの方法（＾ｎ ａｐ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　４．３３０．１９６２）に従って多糖内に結合してい るグルクロン酸の比色定量を行うと、重量でヒアルロン酸７５８％の含有量が認 められ、理論含有量と一致する。

実施例３０　ネオマイノンとヒアルロン酸（ＨＹ）の塩の調製１５２ｇのネオマ イノン硫酸塩（１０＋＋Ｅｑ）を２ｈｌの蒸留水に溶解し、１５ｍ１の０１１− 型四級アンモニウム樹脂（Ｄｏｗｅｘ　１ｘ８）を含むサーモスタットカラムよ り５℃で溶出させる。硫酸塩を除いた溶出物をサーモスタット容器内に５℃で回 収する。

分子量１７０．０００のヒアルロン酸ナトリウム塩４０ｇ（単量体単位１０ｍＥ ｑに相当）を４００ｍ１の蒸留水に溶解し、］、５５ｍのＨ十型スルホン基樹脂 （Ｄｏｗｅｘ　５０ｘ８）を含むサーモスタットカラムより５℃で溶出させる。

ナトリウムを除いた溶出物をネオマイノン塩基溶液内で撹はんしながら回収する 。生成した粘弾性沈澱物をデカンテーションにより分離し、凍結乾燥する。収量 　４．７６ｇ、塩は、ヒアルロン酸の全ての酸性基がネオマイノンと塩を形成す る。

ネオマイノン標準物を対照としてＳｔ、　ａｕｒｅｕｓ　ＡＴＣＣ６５３８ｐ上 で微生物学的定量を行うと、ネオマイノン塩基の重量として２１．２％の含有量 が認められ、理論計算でめた％と一致する。Ｂｉｔｔｅｒらの方法（Ａｎａｌ、 　Ｂｉｏｃｈｅｔ　４．３３（１，１９６２）ニ従って多糖内に結合しているグ ルクロン酸の比色定量を行うと、７８．８％のヒアルロン酸含有量が認めらる。

実施例３１　ゲンタマイシンとヒアルロン酸（ＩＩＹ）の塩の調製１４５ｇのゲ ンタマイシン硫酸塩（１０ｍＥｑ）を２５ｍ１の蒸留水に溶解する。この溶液を １５ｍ１の０ト型四級アンモニウム樹脂（Ｄｏｗｅｘ　ｌＸ８）を含むサーモス タットカラムより５℃で溶出させる。硫酸塩を除いた溶出物をサーモスタット容 器内に５℃で回収する。

分子量１７０．０００のヒアルロン酸ナトリウム塩４．０ｇ（単量体単位ＩＱｍ Ｅｑに相当）を４０ｈｌの蒸留水に溶解する。次にこの溶液を１５■１の旧型ス ルボン基樹脂（Ｄｏｗｅｘ　５０Ｘ８）を含むづ−モスタソト力ラムより５℃で 溶出させる。ナトリウムを除いた溶出物をネオマイノン塩基溶液内で、ポルテッ クスミキサーで撹はんしながら回収する。生成した厚くて粘性の高い沈澱物をデ カンテーションにより分離し、凍結乾燥する。収量：　４．６５ｇ０ここで得ら れた塩は、ヒアルロン酸の全ての酸性基がゲンタマイ／ンと塩を形成する。

ゲンタマイシン標準物を対照としてＳ、　ｅｐｉｄｅｒｌｌＩｉｄｕｓ　ＡＴＣ Ｃ１２２２８上で微生物学的定量を行うと、ネオマイノン塩基の重量として２０ ．０％の含有量が認められ、理論含有量と一致する。Ｂｉｔｔｅｒらの方法（Ａ ｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅ（４，３３０，１９６２）に従って多糖内に結合してい るグルクロン酸の比色定量を行うと、８０．０％のヒアルロン酸含有量が認めら る。

実施例３２　アミカシンとヒアルロン酸（ＨＹ）の塩の調製１４７ｇのアミカノ ン硫酸塩（］０ｃａＥｑ）を１０軸ｌの蒸留水に５℃で溶解する。

分子１１７０．０００のヒアルロン酸ナトリウム塩４．０ｇ（単量体単位１０ｍ Ｅｑに相当）を４゜Ｏｗｌの蒸留水に溶解する。次にこの溶液をＩＥｎｌのＨ生 型スルホン基樹脂（Ｄｏｗｅｘ　５０Ｘ８）を含むサーモスタットカラムより５ ℃て溶出させる。

ナトリウムを除いた溶出物をアミカンン塩基溶液内で、ポルテックスミキサーて 撹はんしながら回収する。生成した厚くて極めて粘性の高い沈澱物をデカンチー ／ヨ／により分離し、凍結乾燥する。収１１：　５．１６ｇ０ここで得られた塩 は、ヒアルロン酸の全ての酸性基がアミヵ７ンと塩を形成する。

アミカシン標準物を対照としてＳｔ、　ａｕｒｅｕｓ　ＡＴＣＣ２９７３７上で 微生物学約定Ｉを行うと、アミ力７ノ塩基の重量として２７７％の含有量が認め られ、理論含有量と一致する。Ｂｉｔｔｅｒらの方法（Ａｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈ ｅｍ、　４．３３０．１９６２）に従って多糖内に結合しているグルクロン酸の 比色定量を行うと、７２．３％のヒアルロン酸含有量が認め実施例３３　ロリテ トラサイクリンとヒアルロン′ｕ（ＩＩＹ）の塩の調製Ｏｍｌの蒸留水に溶解す る。次にこの溶液を１５ｍ１のＩＩ÷型スルホン基樹脂（Ｄｏｗｅｘ　５Ｑｘ８ ）を含むサーモスタットカラムより５℃で溶出させる。ナトリウムを除いた溶出 物は５℃で保存する。

５３ｇのロリテトラサイクリン塩基を完全に可溶化するまで、遮光下で攬はんし ながら５℃でヒアルロン酸溶液に添加する。ここで得られた溶液を直ちに凍結し 、凍結乾燥する。収量：８．９ｇ０ここで得られた塩は、ヒアルロン酸の全ての 酸性基がロリテトラサイクリンと塩を形成する。

ロリテトラサイクリン標準物を対照としてＢ、　ｐｕｍｉｌｕｓ　ＡＴＣＣ１４ ８８４上で微生物学的定量を行うと、ロリテトラサイクリン塩基の重量として５ ８．２％の含有量が認められ、理論値と一致する。Ｂｉｔｔｅｒらの方法（Ａｎ ａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　４．３３０．１９６２）に従って多糖内に結合して いるグルクロン酸の比色定量を行うと、４１８％のヒアルロン酸含有量が認めら る。

実施例３４　ポリミキシンＢとヒアルロン酸（ＩＩＹ）の塩の調製２．４ｇのポ リミキシンＢ塩基（１０ｍＥｑ）を１Ｏｈｌの蒸留水に５℃で懸濁する。

分子量１７０．０００のヒアルロン酸ナトリウム塩４．０ｇ（単量体単位ＩＱｍ Ｅｑに相当）を４゜Ｏｗｌの蒸留水に溶解する。次にこの溶液を１５ｍ１のＨ生 型スルホン基樹脂（Ｄｏｗｅｘ　５０Ｘ８）を含むサーモスタットカラムより５ ℃で溶出させる。ナトリウムを除いた溶出物を５℃でロリテトラサイクリン塩基 懸濁液をポルテックスミキサーで攬はんしながら回収する。最初の段階で溶液は 透明になり、その後難溶性であるが５ｍｌのアセトンには完全に溶ける形成物が 認められる。沈澱物を濾過し、アセトンで洗浄してから真空乾燥する。収量：　 ６．０５ｇ０ここで得られた塩は、ヒアルロン酸の全ての酸性基がポリミキシン Ｂと塩を形成する。

ポリミキノンＢ標準物を対照としてＢ、　ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ　ＡＴ ＣＣ４６１７上で微生物学的定量を行うと、ポリミキシンＢ塩基の含有量として ３８．７％が認められ、理論含有量と一致する。Ｂｉｔｔｅｒらの方法（Ａｎａ ｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　４．３３０．１９６２）に従って多糖内に結合してい るグルクロン酸の比色定量を行うと、６１．３％のヒアルロン酸含有量が認めら る。

実施例３５　グラミンジンＳとヒアルロン酸（ＩＩＹ）の塩の調製６、７ｇの塩 酸グラミンノンＳ（１０ｍＥｑ）を２００ｍ１のエタノール／＋１２０．８０： ２０、Ｖ／Ｖに懸濁する。次にこの溶液を１５１１１のＯＨ−型四級アンモニウ ム樹脂（Ｄｏｗｅｘ　ｌＸ８）を含むサーモスタットカラムより５℃で溶出させ る。

分子１１６５．０００のヒアルロン酸ナトリウム塩４０ｇ（単量体単位１０ｏＥ ｑに相当）を４０ｋｌの蒸留水に溶解する。次にこの溶液を１５ｍ１のＨ十型ス ルホン基引脂（Ｄｏｗｅｘ　５０Ｘ８）を含むサーモスタットカラムより５℃て 溶出させる。２０ｈｌのＤＭＳＯをナトリウムを除いた溶出物に加え、この混合 物を撹はんしながら５℃に保つ。グラミンジンＳ塩基の溶液を徐々に加える。得 られた溶液に１０容積のアセトンを加えて沈澱を得る。この沈澱物を濾過し、ア セトンて洗浄して真空乾燥する。収量＋９．５５ｇｏここで得られた塩は、ヒア ルロン酸の全ての酸性基がグラミンジンＳと塩を形成する。

グラミノノンＳ標準物を対照としてＳ、　ｆａｅｃｉｕｍ　ＡＴＣＣ１０５４１ 上で微生物学的定量を行うと、ポリミキシンＢ塩基の含有量として６０．０％が 認められ、理論含有量と一致する。Ｂｉｔｔｅｒらの方法（＾ｎａｌ、　Ｂｊｏ ｃｈｅｉ、　４．３３０．１９６２）に従って多糖内に結合しているグルクロン 酸の比色定量を行うと、４０．０％のヒアルロン酸含有量が認分子ｆｆ１１７０ ．０００のヒアルロン酸ナトリウム塩４．０ｇ（単量体単位ＩＱｍＥｑに相当） を４００ｍ１の蒸留水に溶解する。この溶液を１５ＩＮｌのＨ生型スルホン基樹 脂（Ｄｏｗｅｘ　５０Ｘ８）を含むサーモスタットカラムより５℃で溶出させる 。ナトリウムを除いた溶出物はサーモスタット容器内に５℃で回収する。０．１ ５０ｇのポリミキシンＢ塩基（０，６３ｍＥｑ）を激しく攬はんしながら加える 。１．４２５ｇのネオマイノン流酸塩（９，３７ｍＥｑ）を蒸留水に溶解する。

この溶液を１５１１１のＯＨ−型四級アンモニウム樹脂（Ｄｏｗｅｘ　ｌＸ８） を含むサーモスタットカラムより５℃で溶出させる。

硫酸塩を除いた溶出物をヒアルロン酸とポリミキシンＢ溶液を激しく撹はんしな がら加える。生成する沈澱物を遠心分離により分離し、真空乾燥する。収量。

４、８５８０この生成物１７．２５ｇは、５、０ｍｇネオマイノン硫酸塩等飛の ネオマイシン０、６３１ｇポリミキシンＢ（およそ５０００１１１）等量のポリ ミキシンＢを含む。

注！ 定量は、２つの有効成分をＨＰＬＣで分離後実施した。

実施例３７　ストレプトマイノン及びナトリウムとヒアルロン酸（ＨＹ）の塩の 調分子量２５５．０００のヒアルロン酸ナトリウム塩４０ｇ（単量体単位２４６ ｍＥｑに相当）を８゜５１の蒸留水に溶解する。次にこの溶液を３００ｍ１のＨ 十型スルホン基権脂（Ｄｏｖｅｘ　５０Ｘ８）を含むサーモスタットカラムより ５℃で溶出させる。ナトリウムを除いた溶出物はサーモスタット容器内に５℃で 回収する。

１、８８ｇのストレプトマイノン硫酸塩（７，７４ａＥｑ）を２抛１の蒸留水に 溶解する。この溶液を１２ｍ１の０■−型四級アンモニウム樹脂（Ｄｏｗｅｘ　 ｌＸ８）を含むサーモスタットカラムより５℃で溶出させる。硫酸塩を除いた溶 出物をヒアルロン酸溶液を攬はんしながら回収する。２３８．３＊１のＩＭ　Ｎ ａＯＨを撹はんしながら徐々に加え、得られた溶液を直ちに凍結し、凍結乾燥す る。収量・５．５ｇ０１００ｇの生成物は塩基として１．５ｇのストレプトマイ ノンを含む。

実施例３８ 分子量１６０．０ＤＤ−２３０，０００ダルトン、見かけの直径４２０−１．０ ００μ−のハイドロキンアパタイトの顆粒を有するヒアルロン酸の２５％ベンジ ルエステル、Ｉ’１ＹＡＦＦ１１ｐ２５を含む粘状物を次の方法で得た。

強度１．２５１１ｒａｄのγ線で滅菌した５ｇの）ＩＹ＾ＦＦ１１ｐ２５を５０ ｇの滅菌水に添加した。この系をダブルスパイラルミキサーで４Ｑｒｐｍで処理 した。温度を３０℃±２℃に保ち、８時間で可溶化した。次にこの溶液を０．　 Ｏｌｍｂａｒの高真空下に２時間置き、溶解している空気を除去した。得られた 粘性は２３Ｐａ、　ｓ、であった。

次に、１ｇの溶液に０５ｇの市販のハイドロキンアパタイト（”Ｉ　ＮＴＥＲＰ ＯＲＦ、２θ０”）を加え、この混合物を均一な粘状物が得られるまでへらでか き混ぜた。顆粒が互いに結合し、術中または術後時に顆粒状骨代替物が脱落する 危険性なく空洞内に容易に挿入される材料が形成された。

実施例３９ 分子量１４０．０００−２１０．０００ダルトン、見かけの直径４２０−１．０ ００μｌのハイドロキノアパタイトの顆粒を有するヒアルロン酸の５０％エチル エステル、ＨＹＡＦＦ　７ｐ５０を含む粘状物を次の方法で得た。

強度１．２５Ｍｒａｄのγ線で滅菌した７ｇのｔｌＹＡＦＦ　７ｐ５０を５０ｇ の滅菌水に添加した。こ解している空気を除去した。得られた粘性は２５Ｐａ、 　ｓ、であった。

次に、１ｇのこの溶液に０４ｇの市販のハイドロキシアパタイト（”　ＩＮＴＥ ＲＰＯＲＥ２（１［１”）を加え、この混合物を均一な粘状物が得られるまでへ らでかき混ぜた。顆粒が互いに結合し、術中または術後時に顆粒状骨代替物が脱 落する危険性なく空洞内に容易に挿入される材料が形成された。

実施例４０ 分子量１４０．０００−２５０．０００ダルトン、ポアサイズ６３０−１．００ ０μ−の多孔性炭酸カルシウムの顆粒を有するヒアルロン酸の５０％ベンジルエ ステル、ＨＹＡＦＦ１１ｐ５０を含む粘状物を次の方法で得た。

強度１．２５Ｍｒａｄのγ線で滅菌した６ｇのＨＹＡＦＦＩ　］ｐ５０を５０ｇ の滅菌水に添加した。この系をダブルスパイラルミキサーで４０ｒｐｍで処理し た。温度を４０℃±２℃に保ち一６時間で可溶化した。可溶化後、この溶液をＱ 、　Ｑｌ＋＋ｂａｒの高真空下に２時間置き、溶解している空気を除去した。得 られた粘性は２１Ｐａ、　ｓ、であった。

次に、１ｇのこの溶液に０．６ｇの市販の炭酸カルシウム（”ＢＩＯＣＯＲＡＬ ｌｏｏＯ”）を加え、この混合物を均一な粘状物が得られるまでへらでかき混ぜ た。顆粒が互いに結合し、術中または術後時に顆粒状骨代替物が脱落する危険性 なく空洞内に容易に挿入される材料が形成された。

実施例４１ 分子量１４０．０００−１８０．０００ダルトン、見かけの直径４２０−１．０ ００μ−のハイドロキンアパタイトの顆粒を有するヒアルロン酸を含む粘状物を 次の方法で得た。

フィルター滅菌した７ｇのヒアルロン酸をを５０ｇの滅菌水に添加した。この系 をダブルスパイラルミキサーで４Ｏｒｐｍで処理した。温度を２５℃に保ち、１ ６時間で可溶化した。次にこの溶液を高真空下に２時間置き、溶解している空気 を除去した。

得られた粘性は２４．７Ｐａ、　ｓ、であった。

次に、１ｇのこの溶液に０．４ｇの市販のハイドロキノアパタイト（”　Ｉｎｔ ｅｒｐｏｒｅ２ＱＧ”　）を加え、この混合物を均一な粘状物が得られるまでへ らでかき混ぜた。顆粒が互いに結合し、術中または術後時に顆粒状骨代替物が脱 落する危険性なく空洞内に容易に挿入される材料が形成された。

実験動物及び処理法 ハイドロキノアパタイトの保持期間を促進し取扱易（するために、上記の調製法 を用いて空洞に新鮮歯の抽出部位を充填した。実験動物としてピーグル犬を使用 した。上顎及び下顎切歯を除去し、各動物に上顎６本、下顎６本、１２の欠損を 授受させた。次に、根間中隔を除去して欠損部の容積を増大させた。抽出部位を 上述の調製法でインブラントし、またはコントロールとして空洞のまま残すか／ −イドロキンアバタイト顆粒を充填した。動物を術後１．２及び３ケ月後に屠殺 した。層膜時に、上顎動脈からカニユーレを挿入してＫａｒｎｏｗｓｋｙ固定液 を注入する潅流法を用いて組織固定を行った。

本試験の結果、ヒアルロン酸−）＼イドロキンアパタイト結合物は容易に使用し て新鮮歯の充填を行えることが示された。この混合物は骨欠損部位にｉｎ　５ｉ ｔｕで手法による挿入または圧力下で注入することができる。粒子の保持が成さ れて時間が確保され、結合溶液が再吸収されて骨の内成長が更新した。

ここで説明した本発明はついては、多方面にわたり同方法に変更が加えられるこ とは明かである。これらの変更事項は、本発明の趣旨及び範囲から逸脱して０る とは認められず、この様なあらゆる改良で技術的に明らかに向上したと思われる ものは、次に示す請求の範囲に含まれるものとする。

フロントページの続き （８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＥ、ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、ＰＴ、ＳＥ） 、０Ａ（ＢＦ、ＢＪ、ＣＦ、ＣＧ、ＣＩ、ＣＭ、ＧＡ、ＧＮ、ＭＬ、ＭＲ，ＮＥ 、ＳＮ。

ＴＤ、　ＴＧ）、　ＡＵ、　ＢＢ、　ＢＧ、　ＢＲ，ＣＡ、　ＣＺ。

Ｆ　Ｉ、　ＨＵ、Ｊ　Ｐ、　ＫＰ、　ＫＲ，ＬＫ、　ＭＧ、　ＭＮ、　ＭＷ、Ｎ ｏ、ＮＺ、ＰＬ、ＲＯ，ＲＵ、ＳＤ、ＳＫ、ＵＡ、ＵＳ、ＶＮ （７２）発明者　ロメオ、アウレリオ イタリア国００１６１０−マ、ビアーレ・イッポクラーテ９３番

Claims (15)

【特許請求の範囲】
1. １．ヒアルロン酸およびヒアルロン酸誘導体から構成される群から選択されるも の少なくとも１個からなる顆粒骨置換剤のための結合溶液。
2. ２．該ヒアルロン酸誘導体がヒアルロン酸エステルである請求項１の結合溶液。
3. ３．該ヒアルロン酸誘導体が抗生物質を配したヒアルロン酸塩である請求項１の 結合溶液。
4. ４．該溶液が２５℃の温度、相対湿度約５０％で約１５Ｐａ．ｓから約３０Ｐａ ．ｓまでの範囲の粘度を持つ請求項１の結合溶液。
5. ５．該溶液が２５℃の温度、相対湿度約５０％で約２２Ｐａ．ｓから約２５Ｐａ ．ｓまでの範囲の粘度を持つ請求項１の結合溶液。
6. ６．該ヒアルロン酸エステルがヒアルロン酸の２５％ベンジルエステル、ヒアル ロン酸の５０％ベンジルエステルおよびヒアルロン酸の５０％エチルエステルか ら構成される群から選択されるもの少なくとも１個である請求項２の結合溶液。
7. ７．請求項１の結合溶液および天然または人工骨顆粒を含む顆粒骨置換剤のため のペースト。
8. ８．該結合溶液および骸骨顆粒が約１：３ｗ／ｗの比率で存在する請求項７のペ ースト。
9. ９．該骨顆粒の直径が約５０μｍから約５ｍｍまでの範囲内にある請求項７のペ ースト。
10. １０．該骨顆粒が多孔質であるかまたは非孔質である請求項７のペースト。
11. １１．該骨顆粒がヒドロキシアパタイト、燐酸トリカルシウムおよび炭酸カルシ ウムから構成される群から選択される請求項７のペースト。
12. １２．約１６万ダルトンと約２３万ダルトンとの間の分子量を持つヒアルロン酸 の２５％ベンジルエステルの溶液および約４２０μｍから約１０００μｍまでの 直径を持つヒドロキシアパタイトの顆粒を含む請求項７のペースト。
13. １３．約１４万ダルトンと約２１万ダルトンとの間の分子量を持つヒアルロン酸 の５０％エチルエステル溶液および約４２０μｍから約１０００μｍまでの直径 を持つヒドロキシアパタイトの顆粒を含む請求項７のペースト。
14. １４．約１４万ダルトンと約２５万ダルトンとの間の分子量を持つヒアルロン酸 の５０％ベンジルエステルの溶液および約６３０μｍから約１０００μｍまでの 直径を持つ多孔性炭酸カルシウムの顆粒を含む請求項７のペースト。
15. １５．請求項７のペーストの有効量と損傷したまたは欠陥のある骨とを接触させ ることからなるヒトまたは動物の歯科または外科において損傷したまたは欠陥の ある骨の修復または成長の促進方法。