JPH07505283A - Ｄｎａトランスポーター系および使用方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ＤＮＡ）ランスポーター系および使用方法発明の技術分野 本発明は一般に、細胞核中にＤＮＡを挿入するためのトランスポーター系（ｔｒ ａｎｓｐｏｒｔｅｒ　ｓｙｓｔｅｍｓ）に関する。さらに詳しくは、本発明は、 インビボおよびインビトロの両方において、特定の細胞の核中にＤＮＡをターゲ テイングする（ｔａｒｇｅｔｉｎｇ）ことに関する。加えて、本発明は、細胞内 部にＤＮＡを放出させるための溶解性ペプチドの使用方法に関する。さらに、本 発明は、細胞中にＤＮＡを挿入するためのトランスポーター系の使用方法に関す る。

発明の背景 一般に、ヒト疾患の治療のため、特定の！類の細胞中に遺伝子を導入するのが望 ましいと認識されている。非ウィルス形態のＤＮＡおよびＲＮＡの標的遺伝子送 達系には、４つの成員を必要とする：　（ａ）目的とする遺伝情報を含有する一 次配列の知られたＤＮＡまたはＲＮＡ分子、（ｂ）細胞表面レセプターまた：ま 抗原を認識し結合する残基、（Ｃ）ＤＮＡ結合性残基、および（ｄ）細胞表面か ら細胞質中へ直接全複合体を輸送することを可能とする溶解性残基。現在の遺伝 子送達系は、アミノ酸リシンのポリマーかまたはエチジウムホモダイマーのシ旭 ずれかに共有結合し、ついでＤＮＡと複合体を形成したアシアロオロソムコイド またはトランスフェリンである。ポリリシンまたはエチジウム残基は、陰性（こ 荷電した核酸発現ベクターの非共有結合のための陽性に荷電した鋳型を提供する 。これら複合体が細胞に取り込まれた後、検出可能だが定量的に有意でなし＼量 のレポーター遺伝子が認められている。

この方法の主要な限界は、遺伝子送達のために一貫した仕方で再生産可能なタン パク質性複合体を調製することができないことである。実際のライゲーション部 位はわかっていない。ポリリシンまたは該染料とタンＩ（り質との共有結合は非 特異的であり、そのため結合体のランダムな混合物が得られる。陽性６二荷電し た表面のコンホメーションは偶然に形成されるので、該荷電した鋳型へのＤＮＡ の結合もまた変化し得る。該複合体の成員の高分子量および変化する化学量論力 （、インビボ送達のために一貫して充分にまたは満足のいく量で該複合体を調製 することを困難にしている。化合物の混合物は生物学的に活性な試薬の分子的定 義を許さず、この理由のため現在の調合物は適当でない。

本発明は、化学的に定められた鋳型分子を用いた改良された送達系である。本発 明は、遺伝子送達を特定の細胞にターゲティングするための有効で効率的な方法 を提供する。本発明はさらに、酸感受性のリンカ−により鋳型分子に共有結合し た溶解性ペプチドを使用することにより、ＤＮＡがインターナリゼーションされ た後に該ＤＮＡを細胞内部に放出するための有効で効率的な方法を提供する。

本発明はまた、細胞を特定の細胞の核にターゲティングするのに用いることもで きる。

発明の要約 本発明の目的は、細胞の核中にＤＮＡを効率的に挿入することのできるトランス ポーター系である。

本発明の他の目的は、ＤＮＡトランスポーター系として有用な化合物である。

本発明の別の目的は、ＤＮＡ）ランスポーター系を用いた細胞中への遺伝子の挿 入方法である。

本発明の別の目的は、酸感受性のリンカ−により鋳型分子に共有結合した溶解性 ペプチドを使用することにより、ＤＮＡがインターナリゼーションされた後に遺 伝子を細胞内部に放出するための方法である。

それゆえ、上記目的を達成するため、本発明の一態様に従い、複数の第−ＤＮＡ 結合性複合体（該複合体は、非共有結合によりＤＮＡに結合することのできる第 一結合性分子を含み、該第−結合性分子は表面リガンドに共有結合しており、該 リガンドは細胞表面レセプターに結合することができる）；複数の第二ＤＮＡ結 合性複合体（該複合体は、非共有結合によりＤＮＡに結合することのできる第二 結合性分子を含み、該第二結合性分子は核リガンドに共有結合しており、該核リ ガンドは該トランスポーター系を認識し核膜を通して輸送することができる）か らなる、細胞中へ特定のＤＮＡを挿入するためのＤＮＡ）ランスポーター系が提 供され、その際、複数の該第−および第二のＤＮＡ結合性複合体は該特定ＤＮＡ に同時かつ非共有結合により結合することができる。

本発明の特定の態様のＤＮＡ）ランスポーター系はさらに、複数の第三ＤＮＡ結 合性複合体（該複合体はＤＮＡに非共有結合により結合するこのできる第三結合 性分子を含み、該第三結合性分子はウィルスまたは溶解性ペプチドに非共有結合 により結合している）を含み、その際、複数の該第三ＤＮＡ結合性複合体は該特 定のＤＮＡに同時かつ非共有結合により結合することができる。

本発明の別の態様において、該結合性分子は、スペルミン、スペルミン誘導体、 ヒストンおよびポリリシンよりなる群から選択することができる。

好ましい態様においては、スペルミン誘導体を使用する。

本発明の特定の態様において、表面リガンドは、葉酸レセプター、ビオチンレセ プター、リポ酸レセプター、低密度リポタンパク賀レセプター、アシアログリコ プロティンレセプター、ＩｇＧのＦａｂ’断片、インシュリン様増殖因子■型／ カチオン非依存性マンノース６−リン酸レセプター、カルシトニン遺伝子関連ペ プチドレセプター、インシュリン様増殖因子Ｉレセプター、ニコチン性アセチル コリンレセプター、肝細胞増殖因子レセプター、エンドセリンレセプターまたは 胆汁酸レセプターよりなる群から選ばれたレセプターに結合する分子である。

これらレセプターは、すべてではないにしても殆どの種類の細胞で機能するが、 その豊富さは細胞の種類によりかなり変化する。器官特異性は、所定の器官中に 直接注射するか、または動脈内投与して静脈流出により該組織によって取り込ま れなかった物質を除去することによって達成することができる。好ましい態様に おいては、アシアログリコプロティンレセプターを使用する。

好ましい態様において、結合性複合体を表面リガンドに結合させるため、結合性 複合体を核リガンドに結合させるため、および結合性複合体をウィルスに結合さ せるため、スペーサー分子をも用いる。スペーサー分子は通常親水性であり、６ 〜３０炭素原子である。好ましい態様において、６〜１６炭素原子の化合物を用 いる。別の態様は、［（ｇｌｙ）＋　（ｓｅｔ）＋）　ｈ　（式中、ｉは１〜６ 、ｊは１〜６、ｋは３〜２０である）のポリマーであるスペーサー分子である。

第一、第二および第三ＤＮＡ結合性複合体は、同じ共通のＤＮＡ結合性複合体で あってよく、細胞表面リガンド、核リガンド、ウィルスまたは溶解性ペプチドの いかなる組み合わせが同じ結合性分子に結合したものであってもよい。

本発明の別の態様には、トランスポーター系においてリガンドとして用いること のできる特定の化合物が含まれる。

本発明の別の態様としては、細胞中にＤＮＡを導入するための該トランスポータ ー系の使用方法；特定の細胞中へＤＮＡを挿入するためのインビボおよびインビ トロターゲツティング；疾患の予防および治療：および動物の修飾が挙げられる 。

図面の簡単な記載 図１〜３は、レセプターリガンドの合成を模式的に示す。

図５〜１３は、ＤＮＡトランスポーター系の合成のフローチャートを模式的に示 す。

図１４は、リガンドの付着による二本鎖形成性オリゴヌクレオチドまたはペプチ ジル核酸の挿入の模式図である。

図１５Ａは、二本鎖形成性オリゴヌクレオチドを二本鎖ＤＮＡヘターゲティング するためのリガンドの使用を示す模式図である。図１５Ａは、三本輪形成性ペプ チジルオリゴヌクレオチドを二本ＩＪｉＤＮＡヘターゲティングするためのリガ ンドの使用を示す模式図である。図１５Ｂは、筋肉ヘターゲティングするための 特別のリガンドである。図１５Ｃは、１５Ａの化合物に有用な類似体を示す。図 １５Ｄは、１５Ａの類似体である。

図１６は、ＳＶ４０配列へのリガンドの特異的ターゲツティングを示す。

図１７は、配列のりガントを用いたＣ−ｍ７Ｃプロモーター領域へのターゲツテ ィングを示す。

図１８は、ペプチドリガンドおよび他のリガンドの模式図であり、リガンドにつ いて本明細書で使用する略語を示す。

図１９は、レセプターリガンドの合成を模式的に示す。

図２０は、筋肉にターゲティングするための特異的リガンドを示す。

図２１は、葉酸−スペルミン誘導体を示す。

図２２は、筋肉にターゲティングするための特異的リガンドを示す。

図２３は、ペプチドリガンドおよび他のりガントの模式図であり、リガンドに、 ついて本明細書で使用する略語を示す。

図２４は、２官能性酸感受性リンカ−の合成法の模式図である。

図２５は、３量体フソゲン（ｆｕｓｏｇｅｎｉｃ）ペプチドの模式図である。

図２６は、３量体フソゲンペプチドの合成法の模式図である。

図２７は、単量体フンゲンペプチドの合成法の模式図である。

図２８は、３量体フソゲンペプチドの合成法の模式図である。

図２９は、３量体フソゲンペプチドの合成法の模式図である。

図面は必ずしも一定の割合で作成していない。本発明のある特徴を縮尺を誇張し てもよいし、明瞭かつ簡明にするために模式的に示すこともできる。

発明の詳細な記載 本発明の範囲から逸脱することな（、本明細書に開示した本発明に種々の置換お よび修飾を施し得ることが当業者には容易に明らかとなるであろう。

ｒＤＮＡ　トランスポーター」とは、ＤＮＡに非共有結合により結合することが でき、細胞膜を通してＤＮＡを効率的に輸送することのできる分子複合体をいう 。

必要ではないが、トランスポーターはまたＤＮＡを核膜を通して輸送することが 好ましい。

本明細書において使用する「スペーサー」とは、２つの分子を互いに連結させる 化学構造をいう。スペーサーは、通常、各分子を該スペーサー分子の異なる部分 上で結合させる。本発明において、スペーサーは約６〜３０炭素原子からなる親 水性分子である。好ましい態様において、スペーサーは通常６〜１６の炭素原子 を含有する。第二の態様において、スペーサーは、親水性ペプチド、［（ｇｌｙ ）　ｌ　（ｓｅｒ）　１．］　ｋ　（式中、ｉは１〜６、ｊは１〜６、ｋは３〜 ２０である）のポリマーである。

レセプターは、リガンドが特異的かつ比較的高親和性で結合する分子である。

レセプターは、通常、タンパク質または糖タンパク質であるが、糖脂質、リボ多 糖、グリコサミノグリカンまたはグリコカリックスであってもよい。本発明にお いては、抗体またはその断片が結合するエピトープもレセプターとして考えられ る。というのは、抗原：抗体複合体はエンドサイト−シスを受けるからである。

本明細書において使用する「細胞表面レセプター」とは、リガンドが結合するこ とのできる細胞の表面上の特定の化学基をいう。レセプターは、リガンドおよび 付着分子のインターナリゼーションを容易にする。本発明において有用であるこ とがわかっている細胞表面レセプターとしては、葉酸レセプター、ビオチンレセ プター、リポ酸レセプター、低密度リポタンパク質レセプター、アシアログリコ プロティンレセプター、ＩｇＧの抗原部位、インシュリン様増殖因子■型／カチ オン非依存性マンノース６−リン酸レセプター、カルシトニン遺伝子関連ペプチ ドレセプター、インシュリン様増殖因子■レセプター、ニコチン酸アセチルコリ ンレセプター、肝細胞増殖因子レセプター、エンドセリンレセプター、胆汁酸レ セプターが挙げられる。

「溶解性ペプチド」とは、膜の構造的構成および完全さが失われるように膜に付 着する化学基をいう。溶解性ペプチドが存在する結果、膜は溶解、融合またはそ の両方を受けることになる。本発明において有用であることがわかっている溶解 性ペプチドとしては、オルトミクソウィルス、アルファウィルス（Ａｌｐｈａｖ ｉｒｉｄａｅ）　、およびアレナウイルスの溶解性ペプチドが挙げられる。

「核レセプター」とは、核層上の化学基であって、特定のリガンドと結合し、該 リガンドが核層をａ−ｙて輸送されるのを助けるものをいう。本発明において有 用であることがわかっている核レセプターとしては、核局在化配列（ｎｕｃｌｅ ａｒｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ　５ｅｑｕｅｎｃｅｓ）に結合するレセプターが 挙げられる。

本明細書において使用する「リガンド」とは、レセプターに結合する化合物また は構造をいう。本発明において有用な細胞表面リガンドとしては、葉酸（Ａ図１ ）、リポ酸（Ｇ図３）、ビオチン（Ｂ図２）、アポリポタンパクＥ配列（Ｐｅｐ ２図１８）、ＤＣ図１８）、Ａｓｐ（ｂｉｓ−ＬａｃＡＨＴ）Ｅ（図１８）　、 Ｆａｂ’　（図１８）、化合物ＰＬ−チロシル−し一アスバルトイルービスーＩ Ｎ−［６−Ｃ［６−０−ホスホリル−α−Ｄ−マンノピラノシル〕オキシ］ヘキ シル］−Ｌ−アラニンアミド］　（図１９）、化合物Ｊ３−（Ｎ−−［３，４， ５−１−リス−（２−トリエチルアンモニウムエトキシ）安息香酸が挙ケられる 。ペプチドＰａｐ１２〜１９に関しては、Ｘは３（２−ピリジルジチオ）プロピ オニル残基（図２０）　、Ｐｅｐ１２゜［Ｇ］ｎ’、Ｌｅｕ”フ、ε−Ｘ−Ｌｙ 　Ｂ　＠　？コーインシュリン様増殖因子■、Ｐｅｐ１３゜　［Ｇ］ｎ’、１− Ｘ−Ｌｙｓ’５Ｌｅｕ”、Ａｒｇ”］−インシュリン様増殖因子Ｕ、Ｐｅｐ１４ ゜Ｙ６−ε−Ｘ−Ｌｙｇ”−力ルシトニン遺伝子関連ペプチド、Ｐｅｐ１５゜［ Ａ　ｓ　ｕ　”。

Ｙ−ε−Ｘ　［！４］−カルシトニン遺伝子関連ペプチド、Ｐｅｐ１６゜（Ｇｌ ｎ−−Ｌｅｕ”）、ε−Ｘ−Ｌｙｓ”、Ａ　ｒｇ　ＳＳ、Ａｒｇ・フ）−インシ ュリン様増殖因子■、Ｐｅｐ１７゜Ｎ−Ｘ−ｄｅｓ−（１−３）−［Ａｒｇｓｓ ＳＡｒｇ”］−インシュリン様増殖因子１．Ｐｅｐ１８゜ε−Ｘ−界０−チモボ イエチン、Ｐｅｐ１９゜ε−Ｘ−に４−チモポイエチン、７α、１２α−ジヒド ロキシ−３β−（ω−アミノアルコキシ）−５−β−コラン−２４−酸、Ｐｅｐ ２０肝細胞増殖因子、Ｐｅｐ２１エンドセリン−１、Ｐｅｐ２２　Ｎ−スクシニ ル−［ｇｌｕ’、ａｌａ＋１°　”］　−］エンドセリンー１（８−１１）　、 Ｐｅｐ２３　ｒ−７トリアル（ｒ−ａｔｒｉａｌ）ナトリウム排泄増加因子（９ ９−１２６）。好ましい態様において、Ｅは肝臓に用い、Ｐは筋肉に用いる。当 業者であれば、選択するりガントはどのレセプターに結合するかに依存すること を容易に理解するであろう。異なる種類の細胞は異なるレセプターを有するので 、これにより、どの細胞表面リガンドを使用するかに依存して特定の種類の細胞 にＤＮＡをターゲツティングする方法が提供される。それゆえ、好ましい細胞表 面リガンドはターゲティングする細胞の種類に依存する。本発明において有用な 溶解性ペプチドは、Ｐｅｐ２４インフルエンｆ’　ＧＬＦＥＡＩＡＧＦ　ＩＥＤ ＧＷＥＧＭＩＤＧＧＧＣ，Ｐｅｐ２５　５ＦＶＥＩ　ＫＶＹＴＧＶＹＰＦＭＷＧ ＧＡＹＣＦＣＤ、およびＰｅｐ２６　Ｌａｓｓａｇｐ２　ＧＧＹＣＬＴＲＷＭＬ ＩＥＡＥＬＫＣＦＧＮＴＡＶである。本発明ｒニオいて有用な核リガンドを図１ ８に示してあり、Ｐｅｐ３、Ｐｅｐ４、Ｐｅｐ５、Ｐｅｐ６、Ｐｅｐ７、Ｐｅｐ ｇ、Ｐｅｐ９およびＰｅｐｌＯが含まれる。

本発明の一つの態様は、複数の第−ＤＮＡ結合性複合体（該複合体は、非共有結 合によりＤＮＡに結合することのできる第一結合性分子を含み、該第−結合性分 子は表面リガンドに共有結合しており、該表面リガンドは細胞表面レセプターに 結合することができる）；複数の第二ＤＮＡ結合性複合体（該複合体は、非共有 結合によりＤＮＡに結合することのできる第二結合性分子を含み、該第二結合性 分子は核リガンドに共有結合しており、該核リガンドは該トランスポーター系を 認識し核層を通して輸送することができる）からなる、細胞中へ特定のＤＮＡを 挿入するためのＤＮＡトランスポーター系であり、その際、複数の該第−および 第二のＤＮＡ結合性複合体は該特定ＤＮＡに同時かつ非共有結合により結合する ことができる。

本発明の他の態様はさらに、複数の第三ＤＮＡ結合性複合体（該複合体はＤＮＡ に非共有結合により結合するこのできる第三結合性分子を含み、該第三結合性分 子はウィルスまたは溶解性ペプチドに非共有結合により結合している）を含み、 その際、複数の該第三ＤＮＡ結合性複合体は該特定のＤＮＡに同時かつ非共有結 合により結合することができる。

第一結合性分子、第二結合性分子および第三結合性分子は、それぞれスペルミン 、スペルミン誘導体、ヒストン、カチオン性ペプチドおよびポリリシンよりなる 群から選択することができる。スペルミン誘導体とはスペルミンの類似体および 誘導体であり、化合物ＩＶ、ｌＩ、ＸＸＩ、ＸＸＸＩ　Ｉ　Ｉ、ＸＸＸＶｌｌＬ ＩＶ、ＬＶＴ、ＬＸＸＸＩ　Ｉ、ＬＸＸＸＴＶおよびＣＸが含まれる。ＤＮＡ　 トランスポーター系において、第一、第二および第三結合性分子は異なっていて も同じであってもよい。好ましい態様において、第一、第二および第三結合性分 子は同じ分子であり、好ましくはスペルミン誘導体、最も好ましくはＤである。

トランスポーターが細胞内に侵入すると、トランスポーターはエンドサイトによ り取り囲まれる。エンドソーム膜を破壊するためにウィルスまたは溶解性ペプチ ドを用いることができ、トランスポーターを細胞質中に放出させる。ウィルスは 通常、アデノウィルス、バラインフルエンザウィルス、ヘルペスウィルス、レト ロウィルスおよび肝炎ウィルスよりなる群から選ばれる。一つの態様において、 構造Ｆのアデノウィルス（図４）が用いられる。溶解性ペプチドは、オルトミク ソウィルス、アルファウィルスおよびアレナウイルスのタンパク質からのペプチ ドから選ばれる。一つの好ましい態様において、構造Ｐｅｐ２４のペプチドを用 いる。

表面リガンド、核リガンドおよびウィルスまたは溶解性ペプチドは、それぞれ、 第一、第二および第三結合性分子に直接結合させることができる；しかしながら 、好ましい態様においては、これら結合性分子とりガントまたはウィルスどの間 にスペーサーが存在する。本発明において有用なスペーサーを含有する結合性分 子の幾ツカノ例トシテハ、化合物ＸＩ、ＸＩ　Ｌ　ＸＬ、ＸＬＩ、ＬＸ、ＬＸＩ 。

ＬＸＸＸＶＩ　Ｉ　Ｉ、ＸＣ５ＣＸＶＩＶ、ＣＸＶＩ、ＸＶＳＸＶＩ、ＸＶＩ　 １１゜ＸＸＩ、ＸＬＶ、ＬＸＶＩ　Ｌ　ＸＬＶＩ　Ｉ、Ｌ、ＬＸＶ、ＬＸＸ、Ｘ ＣｒＶ。

ＸＣＶＩ、ＸＣＩＸ、ＸＸＩＶＳＸＸＶ、ＬＸＸＩ　Ｉ　Ｌ　ＬＸＸＩＶ、ＣＩ 　Ｉ。

Ｃｖが挙げられる。

細胞中に特定のＤＮＡを挿入するためのＤＮＡトランスポーター系の他の態様は 、複数の共通のＤＮＡ結合性複合体を含む。該複合体は、それぞれ、ＤＮＡに非 共有結合により結合することのできる結合性分子を含み、該結合性分子は、細胞 表面レセプターに結合することのできる表面リガンドおよびトランスポーター系 を認識し核層を通して輸送することのできる核レセプターの両方に結合している 。好ましい態様において、このＤＮＡトランスポーターはまた、表面リガンドお よび核リガンドを結合性分子に連結する少なくとも一つのスペーサーをも含む。

このＤＮＡ）ランスポーター系の他の態様は、共通の結合性分子に結合したウィ ルス、溶解性ペプチドまたはＦａｂ’を含む。この場合も、ウィルスまたは溶解 性ペプチドのいずれも同じまたは異なるスペーサーにより結合していてよい。

本発明のＤＮＡトランスポーターは、細胞中にＤＮＡを導入するための種々の方 法において用いることができる。一つの方法は、トランスポーターの要素がＤＮ Ａに非共有結合により結合するように該ＤＮＡをトランスポーターの要素と接触 させることを含む。このＤＮＡ）ランスポーター系を挿入のために細胞と接触さ せる。他の方法は、細胞中へのＤＮＡの挿入のインビトロターゲツティングであ る。

この方法において、ＤＮＡトランスポーター系を細胞と接触させるが、トランス ポ−ターは細胞の種類に特異的な細胞表面ＩＪ−ガントを有している。本発明は また、治療しようとする細胞にＤＮＡ）ランスポークー系を接触させることによ って該細胞中に治療学的投与量のＤＮＡを導入することにより、疾患の予防およ び治療に用いることができる。この治療、療法および予防は、ヒトおよび動物の 両方に用いることができる。

本発明の他の態様は、動物の細胞中にＤＮＡを導入することにより該動物の遺伝 的構成を修飾する方法である。これは、家畜動物の産生を修飾するために用いる ことができる。

ＤＮＡ結合性アシアログリコプロティンレセプター（Ａ　Ｓ　Ｇ　Ｐ　Ｒ）リガ ンドを調製するため、天然に存在するＤＮＡ結合性リガンドであるスペルミンの 誘導体を合成する。このスペルミン誘導体は、種々の細胞特異的リガンドに共有 結合により結合させることができる。スペルミン類似体の化学構造はＩＶである 。スペルミン類似体を、ＡＳＧＰＨの高親和性リガンドに結合させる。ＡＳＧＰ Ｈに対する最高の親和性は、アスパラギン酸骨格によって隔てられた３ガラクト ース基の２つの群れにより達成することができる。この構造Ａｓ　ｐ　（ｂ　ｉ 　５−Ｌａ　ｃＡＨＴ）はＥである。スペルミン誘導体およびＡｓ　ｐ　（ｂ　 ｉ　５−Ｌａ　ｃＡＨＴ）は、結合してトランスポーターを提供する２つの成員 分子である。

この化合物は、発現ベクターの高効率インビボ送達に必要な構造的特性を定める のに用いる。当業者であれば、これが、第二または第三世代生成物が得られる多 くの化合物のわずかに一つにすぎないことを認識するであろう。このＤＮＡ結合 性スペルミン誘導体は、ターゲツティングのための特定の細胞表面レセプターが 存在する限り種々の種類の目的細胞（たとえば、肝臓、筋肉、内皮および皮膚） に対する遺伝子送達系として広範な応用性を有する。

インビボでの発現ベクターの細胞特異的ターゲティングのため、本発明の系は、 ＤＮＡ発現ベクター、該ＤＮＡに結合して細胞特異的ターゲツティングを達成す るスペルミン誘導体、および該ベクターを細胞の細胞質中に放出するための細胞 特異的リガンドを有するｐＨ感受性リポソームまたは溶解性ペプチドからなる３ つの成員を含む。これら３つの成員の組み合わせは、高親和性リガンドの両者に 対するレセプターを含有する細胞に取り込まれる。−ベクターリガンド複合体お よび溶解剤が細胞の細胞膜上の同じ被覆されたくぼみを通じて一緒にインターナ リゼーションされた後、エンドソームの形成後直ちに起こるｐＨの減少によりエ ンドソームの自発的な溶解が引き起こされる。ベクターは細胞質中に放出されて 核へ輸送され、そこでターゲティング遺伝子が発現される。

ｐＨ感受性リポソームは、ＤＮＡ結合性リガンドと同じ細胞の種類に対して特異 的な第二のリガンドを有する。肝細胞の場合、アポリポタンパク質ｒＥＪ配列（ ｒＡＰＯＪ）Ｐｅｐ２の２つのコピーを含有するリガンドを用いる。インビボで は、このリガンドは肝細胞の細胞膜上の低密度リポタンパク質レセプター関連タ ンパク質に対する高親和性を有する。

以下の実施例は本発明を説明するためのものであり、本発明を限定するものでは 決してない。

実施例ル レセプターリガンドの成員の合成 レセプターリガンドの特定成員の例を図１８および図１〜４に示す。

Ａ、　図１〜３にＡ、Ｂ、Ｇ、Ｐ、ＪおよびＭの合成の模式図を示す。ＡＳＢ。

Ｇ、ＰＳＪおよびＭの実際の合成は非常に簡単である。たとえば、Ａを調製する には、乾燥ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（２ｍＬ）中に葉酸（１ミリモル） を溶解し、１−エチル−３−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］カルボジイミ ド（１，３ミリモル）を加え、暗所、Ｎ２下、４＠にて一夜撹拌し、ついでＮ− ヒドロキシスクシンイミド（１，３ミリモル）を加えて撹拌を４″にてさらに６ 時間続ける。ビス（２−アミノエタン）ジスルフィド（乾燥ジメチルホルムアミ ド（０，５ｍＬ）中に１ミリモル）を反応混合物に滴下し、さらに４時間撹拌す る。水（１５ｍＬ）を加えて生成物を沈殿させる。遠心分離後、沈殿を洗浄し、 ついで酸素不含０．ＩＭ　ＮＨａＯＨ中に溶解させる。この溶液をアニオン交換 樹脂に適用し、２０％アセトニトリルを含有する脱気した０、０５Ｍ　ＮＨ，Ｃ Ｏ１中で平衡化する。２０％アセトニトリルを含有するＯ、ＩＭ　ＮＨ４Ｃ０＄ 中のクロマトグラフィーによりγ−異性体を未反応出発物質およびα−異性体か ら分離する。

適当なフラクションをプールし、凍結乾燥させて生成物を得る。

ニコチン酸アセチルコリンレセプターリガンド、成員Ｊ、　３−　（Ｎ　−［３ ，４゜５−トリス−（２−トリエチルアンモニウムエトキシ）安息香酸の合成： ま、乾燥ＤＭＦ　（２ｍＬ）中の葉酸（１ミリモル）の代わりに乾燥ＤＭＦ　（ ２ｍＬ）中の３−　ｆＮ−［３，４，５−トリス−（２−トリエチルアンモニウ ムエトキシ）安息香酸（１ミリモル）を用いる他は葉酸、成員Ａと同じである。

この化合物はさらに反応させてＡｏを得ることができる。ジチオエ１ノド１ノト ール。

（２ミリモル）を含有する酸素不含０．ＯＬＭ　ＮＨ４ＣＯ３（１０ｍＬ）中＋ ：Ａ（２ミリモル）を溶解し、２時間撹拌する。この溶液を、２０％アセトニド １ノルを含有する脱気した０、１．Ｍ　ＮＨ４ＣＯ３中で平衡化したアニオン交 換樹舅旨１こ適用する。

２０％アセトニトリルを含有するＯ、ＩＭ　ＮＨ４ＣＯ５中のクロマトグラフィ ーにより、還元した葉酸誘導体を未反応の出発物質から分離する。適当なフラク ションをプールし、凍結乾燥し、ついで乾燥ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ） 中ζ二溶解し、氷酢酸（０，４ｍＬ）を含有するエタノール（１０ｍＬ）中１＝ 溶解した２、２゛−ジビリジンンスルフイド（４ミリモル）の激しく撹拌した溶 液に滴下する。室温にて一夜、光から遮断した後、溶媒を真空除去する。脱気０ ．１ＭＮ８４ＣＯｓを加えて溶液とし、ついで上記と同様１こしてクロマトグラ フィーにカへけ、所望の生成物を得る。もともとのＡ、ＢおよびＧおよびさら； 二反応させたＡ５Ｂ°およびＧｏの両方を使用した。ニコチン酸アセチルコＩＪ ンレセブター１ノガンド、成員Ｊ、３−　（Ｎ−［３，４，５−トリス−（２− トリエチルアンモニウムエトキン）安息香酸の合成は、乾燥ＤＭＦ　（２ｍＬ） 中の葉酸（１ミＩＪモル）の代わりに乾燥ＤＭＦ　（２ｍＬ）中の３−　（Ｎ− ［３，４，５−ト１ノスー（２−トリエチルアンモニウムエトキシ）安息香酸（ １ミリモル）を用ＬＸる他１ま葉酸、成員Ａと同じである。

当業者であれば、他のビタミンおよびこれらビタミンの類似体を用ＬＸること力 （できることを認識するであろう。種々のビタミンおよび類似体１ま膜レセプタ ーに対して異なる親和性、取り込みおよび選択性を有するであろう力）ら、特異 性および取り込みを最適にするように特定のビタミンまた：ま類似体を選択する こと力くできる。

Ｂ、ＰｅｐｌからＰｅｐＨおよびＰｅｐ２１から２６を含むペプチドは、種々の 方法により合成することができる。本発明においては、ペプチド１２．１３．１ ６．１７および２０（細菌、酵母、バクロウィルスまたは哺乳動物系において発 現ベクターにより製造された組換えタンパク質である）を除いて、支持体上の固 相合成が好ましい。

ＰｅｐｌからＰｅｐ６およびＰｅｐｌ２から２３のペプチドは、ペプチドおよび ペプチド類似体の例である。これらペプチドは膜レセプターをターゲティングし 結合する。当業者であれば、他の膜レセプターに対する他のペプチドまたは類似 体を用いることができること、トランスポーターの特性を保持している限り、ア ミノ酸配列の順序を逆にし、転位し、お半び／または繰り返すことができること が認識できる。特定のペプチドの選択は、ターゲティングする組織および膜のレ セプターに依存するであろう。特定のペプチドを選択することにより、当業者は 結合効率、取り込みおよび特異性を制御できることを認識できる。

Ｐｅｐ２４からＰｅｐ２６のペプチドは、ペプチドまたはペプチド類似体の例で ある。これらペプチドは膜を溶解させる。当業者であれば、他のペプチドまたは 他の溶解性ペプチドに対する類似体を用いることができること、アミノ酸配列の 順序を逆にし、転位し、および／または繰り返すことができ、溶解特性を保持で きることが認識できる。特定のペプチドの選択は、ターゲティングする組織およ び膜のレセプターに依存するであろう。

■、スペルミン鋳型 ａ、酸感受性の還元性スペーサーによりポリカチオンに共有結合したモノマー性 フソゲンペプチド 水中、　Ｒｗ　Ｐ＊ｐ２４−５５−Ｃ）ｌ、ＣＨ２Ｏ−ａ−Ｃｏ−了ｚｚケＩＬ ／−Ｙ　−ＣＱ−１＋　リＣＨ，Ｃリ− １“　イン７−レエン゛ワ゛融舎ベプ千ドＧＬＦＥｋＸＰＪ３ＦＸＥＮＧＷｔＧ Ｈ１ＤＧＧＧＣ−５Ｈ（Ｐａｐ２４）式中、　Ｒ−ＧＬｒＥ八ＸＡへＦＩｔｓｃ ｗｔｃｐｘｏｃｃｃｃ−ｓｓ−ｃｓ、ｃｑｓ−ａ−ｃｏ−７２＝十１　レーＹ− ＣＯ−詳細な調製手順 無水ベンゼン（４０ｍＬ）中で（Ｓ）−ヒドロキシスペルミン（ＬＶ）（２ミリ モル）、４−ピロリジノピリジン（４ミリモル）および９−フルオレニルメチル クロロホルメー）（４，１ミリモル）を混合し、Ｎ、下、室温で一夜撹拌する。

フェニル−シリカ上の固相抽出およびヘキサン中の５０九までの酢酸エチルの線 状勾配溶出することにより、所望の生成物（１）を分離する。適当なフラクショ ンをプールし、溶媒を蒸発させて生成物をアモルファスな固体として得る。

ＫｘＣＯｘ　（１ミリモル）および１８−クラウン−６（２ミリモル）に乾燥ベ ンゼンＣ４ｍ　Ｌ　）を加え、２０分間撹拌する。乾燥ベンゼン（４ｍＬ）中の 化合物１（２ミリモル）を加え、ついでベンゼン（２ｍＬ）中のメチルブロモア セテート（２ミリモル）を加える。４時間後、水（２５ｍＬ）を加え、ベンゼン （２５ｍＬｘ３）で抽出する。溶媒を真空除去し、水酸化カリウム（２ミリモル ）を含有するエタノール（１０ｍＬ）中に残渣を溶解する。室温にて一夜後、こ の溶液を分別漏斗に移し、これにＨＣＩ（２ミリモル）、水（５ｍＬ）およびベ ンゼン（２５ｍＬ）を加える。ベンゼンでさらに３回抽出した後、コンバインし た有機相を取り、真空乾燥させ、最小量の酢酸エチル中に再溶解し、充分な石油 エーテルで希釈してわずかな濁りを生じさせ、４ａにて冷却して化合物３の結晶 化を促進させる。

乾燥ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）中に化合物３（１ミリモル）を溶解し、１ −エチル−３−［３−（ジメチルアミノ）プロピル）カルボンイミド（３，０ミ リモル）を加え、２時間撹拌し、ついでＮ−ヒドロキシスクシンイミド（１，１ ミリモル）を加え、室温にて撹拌をさらに６時間続ける。この溶液を乾燥ジメチ ルホルムアミド（０，５ｍＬ）中の１，２−ジアミノエタン（１０ミリモル）に 滴下し、撹拌をさらに４時間続けると、この時点で薄層クロマトグラフィーによ りモニターされるように反応が完了する。この溶液を、脱気した水中で平衡化し たカチオン交換樹脂に適用する。この生成物を０．０００５から２．０ＭＨＣ＋ の勾配により未反応の出発物質から分離する。適当なフラクションをプールし、 凍結乾燥して生成物（４）を得る。

２官能性の酸感受性リンカ−（６）の合成法は図２４に示しである。

無水シスーアコニチル（１０ミリモル）を、光から遮断したＮ！下、室温にて１ ８時間、乾燥ＤＭＦ　（２０ｍＬ）中で２−（２″−アミノエチルジチオ）−− ピリジン（１０ミリモル）と混合する。真空下で溶媒を除去し、残渣を最小量の ３ＭＮＨＪＣＯ１中に溶解し、１０倍に希釈し、脱気した０、０５Ｍ　ＮＨ４Ｃ Ｏ３中で平衡化したアニオン交換樹脂へ適用し、１．０Ｍ　ＮＨ，ＣＯ５までの 勾配で溶出する。

適当なフラクションをプールし、凍結乾燥し、得られた残漬（５）を２−プロパ ツール中に溶解し、ジエチルエーテルを加えて溶液を濁らせた後、４″にて結晶 化させる。生成物（５）を＃過により回収する。

乾燥ＤＭＦ　（２ｍＬ）中に化合物５（１ミリモル）を溶解し、Ｎ−ヒドロキシ スクシンイミド（１，１ミリモル）およびジシクロへキシルカルボジイミド（１ ，１ミリモル）を加え、撹拌を４６にてさらに２４時間続ける。溶媒を真空除去 し、残渣を最小量の２−プロパツール中に溶解し、ジエチルエーテルを加えて溶 液を澗らせた後、４６にて結晶化させる。生成物（６）を濾過により回収する。

乾燥ＤＭＦ　（２ｍＬ）中に化合物６（１ミリモル）を溶解し、Ｎ−ヒドロキシ スクシンイミド（１，１ミリモル）およびジシクロへキシルカルボジイミド（１ ，１ミリモル）を加え、撹拌を４″にてさらに６時間続ける。上記反応混合物に 乾燥ジメチルホルムアミド（０，５ｍＬ）中の化合物４（１ミリモル）を滴下し 、撹拌をさらに４時間続ける。溶媒を真空除去し、得られた残渣をＤＭＦ中の５ ０％ピペリジン（ｖ／ｖ）（１０ｍＬ）中に溶解する。再び溶媒を真空除去し、 残渣（７）をＯ，ＬＭ　ＮＨ４ＯＨ中に可溶化し、２０％アセトニトリルを含有 する脱気した０、０５Ｍ　ＮＨ４ＣＯ５中に平衡化したアニオン交換樹脂に適用 し、０．ＩＭ　ＮＨｚＣＯｓ中の０〜０．２５Ｍアセトニトリルの勾配で溶出す る。適当なフラクションをプールし、凍結乾燥して生成物（８）を得る。

ＰＢＳ　（ｐＨ７，４，５ｍＬ）中の溶解性ペプチド（Ｐ　ｅ　ｐ　２４）　（ ０，５ミリモル）の撹拌溶液に、４６にてＰＢＳ中の化合物８（０，１ミリモル ）を滴下する。１８時間後、モレキュラーシーブ上のクロマトグラフィーにより 生成物（９）を未反応の出発物質から分離する。

ｂ、酸感受性の還元性スペーサーによりポリカチオンに共有結合したトリマー性 フソゲンペプチド ｐｒｕ、−＜ｃ仙−５Ｈ−ｃ４−ｔ、Ｈ−（ｃＨ−ｒｋ−”−（ＣＳＩｓ−”” ｒｏｃｙｔ、ｃｏＮｓ−ｃ！（１ｃｍ、−ｘＨ−＊　ｉ　１ｉ　）系列ｎの合成 法（新規化合物１０〜１６）は図２５に示しである。

詳細な手順 に、ＣＯ３（１ミリモル）および１８−クラウン−６（２ミリモル）に乾燥ベン ゼン（４ｍＬ）を加え、２０分間撹拌する。乾燥ベンゼン（４ｍＬ）中のＮ−ｔ −ＢＯＣ−）リス−（ヒドロキシメチル）メタン（２ミリモル）を加え、ついで ベンゼン（２ｍＬ）中の１−ブロモ−２−（Ｎ−５〜ＦＭＯＣ−アミンヘキサノ イル）−アミノエタン（２０ミリモル）を加える。４時間後、水（２５ｍＬ）を 加え、ベンゼン（２５ｍＬＸ３）で抽出する。溶媒を真空除去し、残渣（１０） をＤＭＦ中の５０％ピペリジン（ｖ／ｖ）（１０ｍＬ）中に溶解する。６時間後 、溶媒を真空除去し、残渣を酢酸エチル（２０ｍＬ）中に可溶化し、中性になる まで水洗し、固相抽出および１００％までのアセトニトリルの勾配を用いたオク タデシル−シリカ上のクロマトグラフィーにかける前にモレキュラーシーブ上で 乾燥させる。適当なフラクションをプールして化合物１１を得る。

アセトニトリル（２０ｍＬ）中の化合物１１（２ミリモル）をエタノール中のス クシンイミジル３（２−ピリジルジチオ）−プロピオネート（７ミリモル）と混 合する。６０分後、充分な水で希釈してわずかな濁りを生成させ、再び０から１ ００％のアセトニトリルの勾配を用いてオクタデシル−シリカに適用する。適当 なフラクションをプールして化合物１２を得る。

化合物１２（１ミリモル）を４°にて３Ｎ　ＨＣＩ　（２０ｍＬ）中に溶解し、 二の溶液を真空乾燥させる前に６０分間静置する。残渣を水中に再懸濁し、最小 量のアセトニトリルで可溶化し、再び０から１００％のアセトニトリルの勾配を 用いてオクタデシル−シリカ上のクロマトグラフィーにかける。適当なフラクシ ョンをプールして化合物１３を得る。

化合物１３（１ミリモル）を乾燥ＤＭＦ　（２ｍＬ）中に溶解し、無水シスーア コニチル（３ミリモル）を加え、Ｎ、下、４″にて一夜撹拌する。溶媒を真空除 去し、残渣をＯ，ＩＭ　ＮＨ４ＯＨ中に可溶化し、２０％アセトニトリルを含有 する脱気した０、０５Ｍ　ＮＨ，Ｃｏ３中で平衡化したアニオン交換樹脂に適用 し、０、ＩＭ　ＮＨ４ＣＯ３中の０から０．２５Ｍアセトニトリルの勾配で溶出 する。適当なフラクションをプールし、凍結乾燥して生成物（１４）を得る。

化合物１４（１ミリモル）を乾燥ＤＭＦ　（２ｍＬ）中に溶解し、Ｎ−ヒドロキ シスクシンイミド（１，１ミリモル）およびジシクロへキシルカルボジイミド（ １，１ミリモル）を加え、４″にて撹拌をさらに６時間続ける。乾燥ジメチルホ ルムアミド（０，５ｍＬ）中の化合物４（１ミリモル）を上記反応混合物に加え 、撹拌をさらに４時間続ける。溶媒を真空除去し、残渣をＤＭＦ中の５０％ピペ リジン（ｖ／ｖ）（１０ｍＬ）中に溶解する。溶媒を再び真空除去し、残渣を０ ．１Ｍ　ＮＨ４ＯＨ中に可溶化し、２０％アセトニトリルを含有する脱気した０ 、０５Ｍ　ＮＨｉＣＯｓ中に平衡化したアニオン交換樹脂に適用し、Ｏ，ＩＭ　 ＮＨ４ＣＯ５中の０から０．２５Ｍアセトニトリルの勾配で溶出する。適当フラ クションをプールし、凍結乾燥して生成物（１５）を得る。

ＰＢＳ　（ｐＨ７，４）（５ｍＬ）中の溶解性ペプチド（Ｐ　ｅ　ｐ　２４）　 （０，５ミリモル）の撹拌溶液に、ＰＢＳ中の化合物１５（０，１ミリモル）を 滴下する。

１８時間後、モレキュラーシーブ上のクロマトグラフィーにより生成物（１６） を未反応の出発物質から分離する。

Ｃ６酸感受性の還元性スペーサーによりポリカチオンに共有結合したトリマー性 フソゲンペプチド ベ中、　λ“　・ ｇｌｕ’のγ−カルボキシルとα、γ−ジアミノ酪酸１０のγ−アミノとがアミ ド結合 Ｒ’＝Ｐｅｐ２４−８Ｓ　ＣＨ＊ＣＨｔＣＯ−系列■の合成法（系列化合物１７ 〜２０）は図２６に示しである。

詳細な実験手順 通常の試薬および手順を用いた固相ペプチド合成により化合物１７が得られる。

この残基の代わりにオルニチンやリシンなどの２，４−ジアミノ酪酸の同族体で 置換することができるし、グリシンの代わりにセリン、アラニン、およびアスパ ラギン酸などの他のアミノ酸で置換することもできることは当業者には明らかで ある。

化合物１７（１ミリモル）を乾燥ＤＭＦ　（２ｍＬ）中に溶解し、無水シスーア コニチル（３ミリモル）を加え、Ｎ！下、４″にて一夜撹拌する。溶媒を真空除 去し、残渣を０．１Ｍ　ＮＨ，ＣｏＳ中に可溶化し、２０％アセトニトリルを含 有す−る脱気した０、０５Ｍ　ＮＨ４ＧＯ，中で平衡化したアニオン交換樹脂に 適用し、０、ＩＭ　ＮＨ＜ＣＯｓ中の０〜０．２５Ｍアセトニトリルの勾配で溶 出する。適当なフラクションをプールし、凍結乾燥して生成物（１８）を得る。

乾燥ＤＭＦ　（２ｍＬ）中に化合物１８（１ミリモル）を溶解し、Ｎ−ヒドロキ シスクシンイミド（１，１ミリモル）およびジシクロへキシルカルボジイミド（ １，１ミリモル）を加え、撹拌を４°にてさらに６時間続ける。乾燥ジメチルホ ルムアミド（０，５ｍＬ）中の化合物４（１ミリモル）を上記反応混合物に滴下 し、撹拌をさらに４時間続ける。溶媒を真空除去し、残渣をＤＭＦ中の５０％ピ ペリジン（ｖ／ｖ）（１０ｍＬ）中に溶解する。再び溶媒を真空除去し、残渣を Ｏ，ＩＭ　ＮＨ４ＯＨ中に可溶化し、２０％アセトニトリルを含有する脱気した ０、０５Ｍ　ＮＨ４Ｃ０１中で平衡化したアニオン交換樹脂に適用し、Ｏ，ＩＭ 　ＮＨ。

ＣｏＳ中の０〜０．２５Ｍアセトニトリルの勾配で溶出する。適当なフラクショ ンをプールし、凍結乾燥して生成物（１９）−を得る。

ＰＢＳ　（ｐＨ７，４，５ｍＬ）中の溶解性ペプチド（Ｐ　ｅ　ｐ　２４）　（ ０，５ミＩＪモル）の撹拌溶液に、４°にてＰＢＳ中の化合物１９（０，１ミリ モル）を滴下する。１８時間後、モレキュラーシーブ上のクロマトグラフィーに より生成物（２０）を未反応の出発物質から分離する。

ａ、酸感受性の還元性スペーサーによりポリカチオンに共有結合したモノマー性 フソゲンペプチド 系列ＩＶの合成法（新規化合物２１〜２４）は図２７に示しである。

詳細な実験手順 通常の試薬および手順を用いた固相ペプチド合成により化合物２１力（得られる 。

乾燥ＤＭＦ　（２ｍＬ）中に化合物２１（１ミリモル）を溶解し、化合物６（３ ）を加え、Ｎ２下、４６にて一夜撹拌する。溶媒を真空除去し、残渣をアセトニ トリル中に可溶化し、２０％アセトニトリルを含有する脱気した０、０５Ｍ　Ｎ Ｈ４ＣＯ３中で平衡化したアニオン交換樹脂に適用し、Ｏ，ＬＭ　ＮＨ，ＣＯ３ 中の０〜１．０Ｍアセトニトリルの勾配で溶出する。適当なフラクションをプー ルし、凍結乾燥して生成物（２２）を得る。

化合物２２（１ミリモル）をＤＭＦ中の５０％ピペリジン（ｖ／ｖ）（１０ｍＬ ）中に溶解する。溶媒を真空除去し、残渣をＯ，ＬＭ　ＮＨ４ＯＨ中↓こ可溶イ ヒし、脱気した０、０５Ｍ　ＮＨ４ＣＯ５中で平衡化したアニオン交換樹脂：こ 適用し、ＩＭ　ＮＨ，ＣｏＳまでの勾配で溶出する。適当なフラクションをプー ルし、凍結乾燥して生成物（２３）を得る。

ＰＢＳ　（ｐＨ７，４，５ｍＬ）中の溶解性ペプチド（Ｐ　ｅ　ｐ２４）　（０ ，５ミ１ノモル）の撹拌溶液に、４″にてＰＢＳ中の化合物２３（０，１ミ１ノ モル）を滴下する。１８時間後、モレキュラーサイジングカラム上のクロマトグ ラフィーにより生成物（２４）を未反応の出発物質から分離する。

ｂ、酸感受性の還元性スペーサーによりポリカチオンに共有結合したトリマー性 −フソゲンペプチド 系列Ｖの合成法（新規化合物２５〜２７）は図２８に示しである。

シスクシンイミド（１，１ミリモル）およびジシクロへキシルカルボジイミド（ １，１ミリモル）を加え、撹拌を４″にてさらに６時間続ける。乾燥ジメチルホ ルムアミド（０，５ｍＬ）中の化合物２１（１ミリモル）を上記反応混合物に滴 下し、撹拌をＮ２下、４°にて一夜続ける。溶媒を真空除去し、残渣をアセトニ トリル中に溶解し、２０％アセトニトリルを含有する脱気した０、０５Ｍ　ＮＨ 。

ＣＯ３中で平衡化したアニオン交換樹脂に適用し、Ｏ，ＩＭ　ＮＨ，ＣｏＳ中の ０〜１．０Ｍアセトニトリルの勾配で溶出する。適当なフラクションをプールし 、凍結乾燥して生成物（２５）を得る。

化合物２５（１ミリモル）をＤＭＦ中の５０％ピペリジン（ｖ／ｖ）（１０ｍＬ ）中に溶解する。溶媒を真空除去し、残渣を０．１Ｍ　ＮＨ４ＯＨ中に可溶化し 、脱気した０、０５Ｍ　ＮＨ４Ｃ０ｊ中で平衡化したアニオン交換樹脂に適用し 、ＩＭＮ　Ｈｓ　ＣＯ＊までの勾配で溶出する。適当なフラクションをプールし 、凍結乾燥して生成物（２６）を得る。

ＰＢＳ　（ｐＨ７，４，５ｍＬ）中の溶解性ペプチド（Ｐｅｐ２４）（０，５ミ リモル）の撹拌溶液に、４″′にてＰＢＳ中の化合物２３（０，１ミリモル）を 滴下する。１８時間後、モレキュラーサイジングカラム上のクロマトグラフィー により生成物（２７）を未反応の出発物質から分離する。

Ｃ１酸感受性の還元性スペーサーによりポリカチオンに共有結合したトリマー性 フソゲンペプチド ｇｌｕ’のγ−カルボキシルとα、γ−ジアミノ酪酸ｌＯの７−アミノとがアミ ド結合 Ｒ’＝Ｐｅｐ２４−８Ｓ−ＣＨＩＣＨ，ＣＯ−系列ｖ■の合成法（新規化合物２ ８〜３０）は図２９に示しである。

詳細な実験手順 乾燥ＤＭＦ　（２ｍＬ）中に化合物１８（１ミリモル）を溶解し、Ｎ−ヒドロキ シスクシンイミド（１，１ミリモル）およびジシクロへキシルカルボジイミド（ １，１ミリモル）を加え、撹拌を４６にてさらに６時間続ける。乾燥ジメチルホ ルムアミド（０，５ｍＬ）中の化合物２１（１ミリモル）を上記反応混合物に滴 下し、撹拌をＮｚ下、４６にて一夜続ける。溶媒を真空除去し、残渣をアセトニ トリル中に溶解し、２０％アセトニトリルを含有する脱気した０、０５ＭＮＨ４ ＣＯ３中で平衡化したアニオン交換樹脂に適用し、Ｏ，ＬＭ　ＮＨ，ＣＯ８中の ０〜１．０Ｍアセトニトリルの勾配で溶出する。適当なフラクションをプールし 、凍結乾燥して生成物（２８）を得る。

化合物２８（１ミリモル）をＤＭＦ中の５０％ピペリジン（ｖ／ｖ）（１０ｍＬ ）中に溶解する。溶媒を真空除去し、残渣を０．１Ｍ　ＮＨ４ＯＨ中に可溶化し 、脱気した０、０５Ｍ　ＮＨ４ＣＯ３中で平衡化したアニオン交換樹脂に適用し 、ＩＭＮ　Ｈ４ＣＯｓまでの勾配で溶出する。適当なフラクションをプールし、 凍結乾燥して生成物（２９）を得る。

ＰＢＳ　（ｐＨ７，４，５ｍＬ）中の溶解性ペプチド（Ｐｅｐ２４）（０，５ミ リモル）の撹拌溶液に、４′′にてＰＢＳ中の化合物２９（０，１ミリモル）を 滴下する。１８時間後、モレキュラーサイジスグ力うム上のクロマトグラフィー により生成物（３０）を未反応の出発物質から分離する。

Ｐｅｐ７〜ＰｅｐｌＯなどのペプチドは核局在化配列であり、挿入ＤＮＡを核に ターゲティングするのに用いる。当業者であれば、図１８に示すペプチドがこの クラスのペプチドのほんの例示にすぎず、使用可能な他の広範囲の核局在化配列 ペプチドが存在することを認識できる。

Ｈ，Ｎ−Ｔｙ　ｒ−ｔ　−Ｎ−１ｙ　ｓ−Ｐ　ｅ　ｐ　１ｌ−ＣＯＮＨおよび７ −Ｎ−［Ｎ−１２−メトキシ−６−りｏｏジリジニルーＨＮ−ｔｙｒ−ｅ−Ｎ− １ｙｓ−ＰｅｐＨ−Ｃｏ１−２−Ｎ−（２−メトキシ−６−クロロアクリジニル ）ジアミノブタノイル−ＣＯＨＮ！を標準固相ペプチド合成により調製した。当 業者であれば、Ｉｙｓ−ａｌａＨ型の代わりにＨ！Ｎ−（ｌｙｓ）、−ＣＯＯＨ ，Ｈ，Ｎ−（ａ　ｒ　ｇ−ａ　１　ａ）　＠−ＣＯＯＨ，ヒストンおよび他のＤ ＮＡ結合性カチオンポリペプチドおよびα−へリックスを形成するタンパク質な どのいかなるアミノ酸ポリマーをも用いることができることを認識できる。−Ｎ Ｈ−（Ｉｙｓ−ａｌａ）、−ＣＯ単位は伸長させることができる。有用な範囲は 、挿入するＤＮＡ。

標的、取り込みおよび特異性に依存して２から１００以上である。ε−Ｎ−置換 されたｌｙｓ残基の配列位置は、アミノ末端またはカルボキシル末端のいずれか であってよい。置換は、いかなるアミノ反応性ＤＮＡ結合性染料並びにアクリジ ン残基であってよい。ＤＮＡ結合性染料の例としては、チアキサンテノン、ルヵ ントン、ヒカントン、フェナントレンメタノール、メタロインターカレーション 試薬、チロロン、ナプチオフエン、フエナントリジニウム、ジミジウム、エチジ ウム、プロピジウム、キナクリンが挙げられる。

他の態様において、リガンドに対する免疫応答を減少させるためにリジンのε− アミノ基ではなく、Ｎ−末端アミノ酸のα−アミノ基および／またはＣ−末端ア ミノ酸のカルボキシル基にスペーサーを結合させることができる。

Ｃ１上記成員に加えて、融合コンピテントウィルス（ｆｕｓｉｏｎ　ｃｏｍｐｅ ｔｅｎｔ　ｖｉｒｕｓ）を挿入ＤＮＡをターゲティングするのに用いることがで きることもわかっている。

図４は、本発明において使用するための融合コンピテントウィルスの調製法を模 式的に示す。種々の融合コンビチンドウにルスを用いることができる。−例とし て、アデノウィルスを２つの別々の仕方で調製することができる。ＰＢＳ　（ｐ Ｈ７，４，５ｍＬ）中の融合コンピテントアデノウィルス（１０ｍｇ）の撹拌溶 液に、４°にてエタノール中の２０ｍＭスクシンイミジル３（２−ピリジルジチ オ）プロピオネート（０，３ｍＬ）を滴下する。６０分後、ＰＢＳ　（ｐＨ７， ４，０，５Ｌ）を３回変えたものに対して４″にて各２時間透析する。別法とし て、ＰＢＳ　（ｐＨ７，４，５ｍＬ）中の融合コンピテントアデノウィルス（１ ０ｍｇ）の撹拌溶液に、４°にてエタノール中の２０ｍＭ２−イミノチオランＨ ＣＩ（０，３ｍＬ）を滴下する。６０分後、ＰＢＳ　ＣｐＨ７，４，０，５Ｌ） を３回変えたものに対して４６にて各２時間透析する。

Ｄ、刊行された方法（ペイン（Ｂ　ａｙｎｅ）ら、Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｗ 、　２６４　：　１１００４〜１１００８．１９８８）により調製および精製し た組換えペプチド１２．１３および１６　（１０ｍｇ）を５０ｍＭ　ＮＨ４ＯＨ （＋）Ｈ８，５，１０ｍＬ）中に溶解する。アリコートを２時間間隔で取ってＮ −末端グルタミンのピログルタミン酸への環化の程度を決定する。この反応が完 了したとき、溶液を凍結乾燥し、ついでＰＢＳ　（ｐＨ７，４，５ｍＬ）中に溶 解する。アデノウィルスについて記載したようにして（実施例ＩＣ）、ペプチド １２．１３．１６および１７をさらにスクシンイミジル３（２−ピリジルジチオ ）プロピオネートかまたは２−（イミノチオラン）のいずれかと反応させる。

Ｅ、さらに、モノクローナルかまたはポリクローナルのいずれがのＩｇＧを挿入 ＤＮＡをターゲティングするのに用いることができることがわがった。一般に、 ＩｇＧは固定化ペプシンで開裂されて（Ｆａｂ’−８Ｌを生成し、これはＦａｂ ’−ＳＨに選択的に還元される。詳しくは、これには、固定化ペプシンを用いて 標準法により調製したＩｇＧ　（Ｆａｂ’）ｔ（１ナノモル）の撹拌溶液（５ｍ Ｌ）に、４６にて１１ｍＭジチオトレイトール（０，５ｍＬ）を滴下することが 含まれる。６０分後、ＰＢＳ　（ｐＨ７，４，０，５Ｌ）　ヲ３回変工ｔ：もノ １．：Ｎシテ４″にて各２時間透析する。

ａｒｇ−ａｒｇ−１ｅｕ−ａｒｇ−ａｒｚ−ａｒｇ−１ｅｕ−１ｅｕ−ａｒｇ− Ｆｍｏｃ−ｈｉｓ、Ｎ’−４−メトキシ−２，３，６−トリメチルフェニルスル ホニル−ａｒｇおよびｇｌｕ−γ−Ｆｍｏｃエステルを含有する保護ペプチドと して放出する。この保護ペプチドをＤＣＣＩを用いて適当な保護ペプチドと固体 支（ＪＬ、−ＣＯＮＨ［Ｃ！４，１．Ｃ０１ｆｆｌ−Ｐｅｐｌ−（Ｊ）Ｎ）Ｌ。

ａｓｐ−アミノ基の脱保護、スクシンイミジル３（２−ピリジルジチオ）プロピ る。

Ｇ、アシアログリコプロティンレセプターリガンド、成員Ｅの合成　ＰＢＳ　（ ｐＨ７，４，２０ｍＬ）中にＮ’、Ｎ’−ビス（ヘキ？　ン７　ミＦ　Ｅ　ト’ Ｊ　７．−　（β−ラクトシルヒドロキシメチル）メタン］）アスパルチルジア ミド（Ｍｅｔｈ、ＥｎｚｙＩＩＯｌ。

１３８：４２４〜４２９．１９８７）（１ミリモル）を溶解し、リン酸緩衝食塩 水（ｐＨ７，４，２ｍ１）中のスクシンイミジル３（２−ピリジルジチオ）プロ ピオネート（１ミリモル）と混合する。反応混合物を水で２０倍に希釈し、水と ２．０ＭＭＣｌとの等容量から生成した線状勾配を用いたカチオン交換カラムに 適用して所望の生成物を未反応の出発物質および他の生成物から分離する。適当 なフラクションをプールし、凍結乾燥して生成物（Ｅ）を得る。

Ｈ，Ｎ−アセチル−し−チロシンの代わりにＮ−ｔ−ＢＯＣ−Ｌ−チロシンを用 いた他は記載の方法（Ｃａｒｂ、Ｒｅｓ、１９８　：　２３５〜２４６　（１９ ９０））に従い、化合物１．Ｌ−チロシル−し−アスバルトイルービス−＋Ｎ− ［６−［［６−０−ホスホリル−α−Ｄ−マンノピラノシル］オキシ〕ヘキシル ］−Ｌ−アラニンアミド］を調製する。化合物Ｉを化合物Ｅについて記載したの と同様にしてさらに反応させる（実施例ＩＧ）。

実施例２ テトラカチオンＤＮＡ結合性鋳型の合成これら化合物の合成のための全体の模式 フローチャートを図５に示す。合成の化学工程は以下に示す。特定化合物を表示 するのにローマ数字を用いである。

遊離塩基の１．４−ジアミノブタン−２−オール（Ｉｒ）　（Ｍｅｔｈ、　Ｅｎ ｚｙ＋ｓｏ１．９４　：４３１〜４３３．１９８３）（２ミリモル）をエタノー ル（５ｍＬ）中に溶解し、アクリロニトリル（４，１ミリモル）を加え、室温に て一夜放置する。水浴中で冷却し、０″にて該溶液を無水ＮＨｓで飽和する。ス ポンジニッケル水素化触媒（約５ｍＬ）を加え、理論量のＨｌが消費されるまで パール低圧ハイドロゲネーター上、Ｈ！下で震盪させる。触媒を濾去し、触媒を エタノールで洗浄する。濾液および洗浄液をコンバインし、ついでエタノールを 真空除去する。水と２．０ＭＨＣｌとの等容量から生成した線状勾配を用いたカ チオン交換カラム上のクロマトグラフィーにより所望の生成物（Ｒおよび５ＩＶ ）を未反応の出発物質および他の生成物から分離する。ヘキサン中の０〜２０％ の２−プロパツールの勾配により（Ｒ）−Ｎ−３，５−ジニトロベンゾイルロイ シン−シリカ（ベーカー）などのキラルカラム上で化合物ＩＶのエナンシオマー を分割する。

つぎに、（Ｓ）−ヒドロキシスペルミン（ＴＶ）（２ミリモル）、４−ピロリジ ノビリジン（８ミリモル）および無水ベンジルオキシカルボニル（Ｚ！０）（８ ，２ミリモル）を無水ベンゼン（４０ｍＬ）中で混合し、Ｎ！下、室温にて一夜 撹拌する。所望の生成物（Ｖ）を、フェニルシリカ上の固相抽出およびヘキサン 中の０〜５０％の酢酸エチルの線状勾配での溶出により分離する。適当なフラク ションをプールし、溶媒を蒸発させて生成物をアモルファスな固体として得る。

ＫｔＣＯｓ　（１ミリモル）および１８−クラウン−６（２ミリモル）に乾燥ベ ンゼン（４ｍＬ）を加え、２０分撹拌する。乾燥ベンゼン（４ｍＬ）中の化合物 Ｖ（２ミリモル）を加え、ついでベンゼン（２ｍＬ）中のブロモ酢酸メチル（２ ミリモル）を加える。４時間後、水（２５ｍＬ）を加え、ベンゼン（２５ｍＬｘ ３）で抽出する。溶媒を真空除去し、残渣（ＩＶ）を水酸化カリウム（２ミリモ ル）を含有するエタノール（１０ｍＬ）中に溶解する。室温で一夜後、この溶液 を分別漏斗に移し、これにＨＣＩ（２ミリモル）、水（５ｍＬ）およびベンゼン （２５ｍＬ）を加える。ベンゼンでさらに３回抽出した後、コンバインした有機 相を真空乾燥し、最小量の酢酸エチル中に再溶解し、１０％Ｗ／Ｖ無水Ｎ　ａ　 ２　Ｓ　Ｏａで一夜乾燥させる。有機相をデカントし、充分な量の石油エーテル で希釈してわずかに濁らせ、４″に冷却して化合物ＶＩ　Ｉ　（１，４，９，１ ２−テトラベンジルオキシカルボニル−１，１２−ジアミノ−６−カルポキシメ トキシー４．９−ジアザ乾燥ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）中に化合物ＶＩＩ （１ミリモル）を溶解し、１−エチル−３−［３−（ジメチルアミノ）プロピル ）］カルボジイミド（３，０ミリモル）を加え、２時間撹拌し、ついでＮ−ヒド ロキシスクシンイミド（１，１ミリモル）を加え、室温でさらに６時間撹拌する 。この溶液を、乾燥ジメチルホルムアミド（０，５ｍＬ）中のＡ（１ミリモル） に滴下する。撹拌をＮ！下、暗所にてさらに４時間続ける。薄層クロマトグラフ ィーによるモニターにより反応が完了したとき、酸素不含の水（１５ｍＬ）を加 えて生成物を沈殿させる。この生成物を遠心分離により回収し、洗浄し、酸素不 含のＯ，ＩＭ　ＮＨ４０８中に溶解する。この溶液を、２０％アセトニトリルを 含有する脱気した０、１Ｍ　ＮＨ４Ｃ○、中で平衡化したアニオン交換樹脂に適 用する。Ｏ，ＩＭ　ＮＨ４ＣＯ３中の２０％〜５０％アセトニトリルの勾配によ り、γ−異性体を未反応の出発物質およびα−異性体から分離する。適当なフラ クションをプールし、凍結乾燥して生成物を得る。この系列における他の化合物 、たとえばＶＩ　Ｉ　ｌｂおよびＶｌｌｌｃは、ビオチン、リポ酸または他の置 換基を含有する適当な出発物質に代えることにより調製する。

ｖｎ　＊　ｙ−ｃｔｔ、ｃｏ、−５−ｓ−ｃｔｔ、ｃ４−ｎｏ−＊人中、λぼ＾ 、　！ｌ、　Ｏ，Ｐ、　Ｊ、　Ｐ＠Ｐ　１２が１３　Ｐ＠Ｐ　２１またＩＪＮ化 合物ＶＴ１１ａまたは１ＴＴｂまたはＶＴＩＩｃ（１ミリモル）を３０％ＨＢｒ を含有する氷酢酸（２０ｍＬ）中に溶解し、Ｎ２下、暗所にて室温で一夜撹拌す る。ジエチルエーテル（３０ｍＬ）を加えて生成物を沈殿させる。酢酸の匂いが 消えるまで生成物を洗浄する。この固体を酸素不含のＯ，ＩＭ　ＮＨ４ＯＨ中に 溶解し、２０％アセトニトリルを含有する脱気した０、１Ｍ　ＮＨ４Ｃ０ａ中で 平衡化したアニオン交換樹脂に適用する。Ｏ，ＬＭ　ＮＨ４ＣＯ３中の０〜９０ ％アセトニトリルの勾配により、生成物ＸａｔたはｘｂまたはＸｃまたはＸＩを 未反応の出発物質から分離する。適当なフラクションをプールし、凍結乾燥して 生成物を得る。

ｔｐ、＊　ｌ）ｉ　（ｘａ）、　！１　（ｒｂ　、　ｏ　ｔｘａ＞１ｆ４ｐ４　 ｔｘｘ）化合物ＩＶについて行ったと同様にしてクロマトグラフィーにより精製 した化合物ＸＩ（２ミリモル）を、ジチオトレイトール（２ミリモル）を含有す る酸素不含のＯ，ＯＩＭ　ＮＩＬＣＯｓ　（１０ｍＬ）中に溶解し、２時６間撹 拌する。ｌＮＨＣｌで溶液のｐＨを５とし、脱気した水で平衡化したカチオン交 換樹脂に適用する。０．０００５Ｍ〜２．０ＭＨＣｌの勾配により生成物ＸＩＩ を単離する。

適当なフラクションをプールし、凍結乾燥して生成物を得る。ついで、上記反応 を行っ”Ｃ化合物Ｘ１１１ｄ、ＸＩＩＩｅおよびＸ１ｌｌｆを得ル。

ＸＩ　・　シロｒイトレイ計−ＩＶ ａ　ｃ、！４１ｎ−ｓ−ｓ−ｔ４ｃｓ（−ｃｘｒｗｕ−ａｔ　Ａ中、’　ｌ’　 ”ｌ　！＃ｒｆｆｌＦ人中、Ｒｌ？　Ｄ　ｌ！に！！ｄｌ、　ＩＩ　（！！工Ｘ ＠１ｉｑｐ　ｌ！Ｚ！Ｘｆｌリン酸緩衝食塩水ＣｐＨ７，４）（２ｍＬ）中に化 合物ＸＩＩ（１ミリモル）を溶解し、リン酸緩衝食塩水（ｐＨ７，４）（２ｍＬ ）中のさらに反応させた（上記参照）ＡＳＢまたはＧ（１ミリモル）と混合する 。この反応混合物を水で２０倍に希釈し、２０％アセトニトリルを含有する脱気 した０、１Ｍ　ＮＨ４ＣＯ５中で平衡化したアニオン交換樹脂に適用する。２０ ％アセトニトリルを含有する０、ＬＭ　ＮＨ４ＣＯ３中のクロマトグラフィーに はり、生成物ＸＩａ、ＸｌｂまたはＸＩｃを未反応の出発物質から分離する。適 当なフラクションをプールし、凍結乾燥して生成物を得る。

ｘｘｘ　＊　Ｃ３Ｍ、トＳ−５−ｅ％Ｃ４−曲−Ｒ九中、Ｒ１）＾・１粁訝Ｑ 表中−１７＾（！ｉｓ）＋　ｓｔ　ｉ！ｉｂｌ矛〜’＠Ｏ（！ｉｃｌ乾燥ジメチ ルホルムアミド（２ｍＬ）中に化合物Ｖｌｌ（１ミリモル）を溶解し、１−エチ ル−ｅ−［３−（ジメチルアミノ）プロピル）カルボジイミド（３，０ミリモル ）を加え、２時間撹拌し、ついでＮ−ヒドロキシスクシンイミド（１，１ミリモ ル）を加え、室温にて撹拌をさらに６時間続ける。この溶液を乾燥ジメチルホル ムアミド（２０ｍＬ）中の１．６−ジアミツヘキサン（５ミリモル）に滴下し、 さらに２４時間撹拌を続ける。溶媒を真空除去する。フェニル−シリカ上の固相 抽出およびヘキサン中の０から５０％の酢酸エチルの線状勾配を用いた溶出によ り所望の生成物を分離する。適当なフラクションをプールし、溶媒を蒸発させて 生成物をアモルファスな固体（ＸＩＶ）として得る。つぎむ＝、乾燥ベンゼン（ １０ｍＬ）中の化合物ＸＩＶ（１ミリモル）をスクシンイミジル３（２−ピリジ ルチオ）プロピオネート（１，１ミリモル）と混合し、室温にて２時間撹拌し、 ついで溶媒Ｉを真空除去する。得られた生成物はＸｖである。

Ｖｆ！　＊　ＨＪＩ−（ＣＭ、ｌ、−Ｎ）Ｉ。

↓　メ２クシンイミジルコ（２−ピフジ１しｆｆイ　クフｂピ林二ヒ３０％Ｈｂ ｒを含有する氷酢酸（２０ｍＬ）中に化合物ＸＶ　（１ミリモル）を溶解し、Ｎ ！下、暗所にて室温で一夜撹拌する。ジエチルエーテル（３０ｍＬ）を加えて生 成物を沈殿させる。酢酸の匂ｌが消えるまで生成物を洗浄する。この固体を酸素 不含のＯ，ＬＭ　ＮＨ４ＯＨ中に溶解する。この溶液を、２０％アセトニトリル を含有する脱気した０、ＩＭ　ＮＨａＣＯｓ中で平衡化したアニオン交換樹脂に 適用する。Ｏ，ＩＭ　ＮＨ４ＣＯ５中の２０〜８０％アセトニトリルの勾配によ り生成物を未反応の出発物質から分離する。適当なフラクションをプールし、凍 結乾燥して生成物： を得る。

ＰＢＳ　（ｐＨ７，４）（５ｍＬ）中のＦａｂ’　−８Ｈ（１０ｍｇ）の撹拌溶 液に、４＠にてエタノール中の化合物ＸＶＩ　（１０Ｍｍ、０．３ｍＬ）を滴下 する。６０分後、ＰＢＳ　（ｐＨ７，４）（０，５Ｌｘ３）に対して４″にて各 ２時間透析する。

当−（ｃ４）、−５Ｈ−ｃ＋＋、−Ｃｓ−（Ｃ）１．１．−冊−ＩＣ＋４１．− ｓ４― 公−■Ｎ１１−１ｃ％ｌ、−ＮＯα）−ｅｌｌ、Ｃ１４，−５−５−Ｆａｂ’　 ｌｒＶ！Ｘ９１　−化合物ＩＸ（２ミリモル）、４−ピロリジノピリジン（２ミ リモル）および無水コハク酸（３ミリモル）を無水ベンゼン（４０ｍＬ）中で混 合し、Ｎ、下、室温にて一夜撹拌する。フェニル−シリカ上の固相抽出およびヘ キサン中の５０％までの酢酸エチルの線状勾配を用いた溶出により所望の生成物 を分離する。適当なフラクションをプールし、溶媒を蒸発させて生成物をアモル ファスな固体として得る。このつぎに、標準的な固相合成法を用い、樹脂結合し 保護したペプチド（Ｐ　ｅ　ｐ　２−ＣＯｏＨ）とのインシチュカップリングを ＤＣＣＩを用いて行い、ついで脱保護し、樹脂から放出させて化合物ＸＩＸｈを 生成させる。

ＸＸ　＋　乳木つへ７招東 乾燥ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）中に化合物Ｖｌｌ（１ミリモル）を溶解し 、１−エチル−３−［３−（ジメチルアミノ）プロピル）カルボジイミド（３， ０ミリモル）を加え、２時間撹拌し、ついでＮ−ヒドロキシスクシンイミド（１ ，１ミリモル）を加え、室温にて撹拌をさらに６時間続ける。この溶液を乾燥ジ メチルホルムアミド（２０ｍＬ）中の６−アミノヘキサン酸メチル（５ミリモル ）に滴下し、さらに２４時間撹拌を続ける。溶媒を真空除去する。フェニル−シ リカ上の固相抽出およびヘキサン中の０から５０％の酢酸エチルの線状勾配を用 いた溶出により所望の生成物を分離する。適当なフラクションをプールし、溶媒 を蒸発させて生成物（ＸＸ）をアモルファスな固体として得る。

ＶＸＸ＋ｉｔ／ｌ−１ｃコ％ｌ、−０）０１５１゜水酸化カリウム（２ミリモル ）を含有するエタノール（１０ｍＬ）中に化合物ＸＸ（２ミリモル）を溶解する 。室温で一夜後、この溶液を分別漏斗に移し、これにＭＣＩ（２ミリモル）、水 （５ｍ　Ｌ’）およびベンゼン（２５ｍＬ）を加える。

ベンゼンでさらに３回抽出した後、コンバインした有機相を真空乾燥させる。フ ェニル−シリカ上の固相抽出およびヘキサン中の０から５０％の酢酸エチルの線 状勾配を用いた溶出により所望の生成物を分離する。適当なフラクションをプー ルし、溶媒を蒸発させて生成物（ＸＸＩ）をアモルファスな固体として得る。つ ぎに、標準的な固相ペプチド合成法を用い、−支持体上のペプチドのアミノ末端 に化合物ＸＸＩをカップリングさせる。

他のテトラカチオンＤＮＡ結合性鋳型 これら化合物の合成の全体の模式フローチャートを図６に示す。合成の化学的工 程は以下に示す。

Ａ、ε−Ｎ−１ｙ　ｓを無水コノ＼り酸で誘導体化した後、これを下記に示すリ ガンドとカップリングする： ＨＩＮ　ＣＨｔＣＨ！　Ｓ−８−ＣＨｔＣＨ２ＮＨ−Ｒ（式中、ＲはＡ、Ｂ、Ｇ またはＨ） 脱保護し、樹脂から放出させると以下の化合物が得られる。

に中、１１７　Ａ　ｌＸＸＸＸ１ｙ、　！ｔ　１！！！！！ｂ）、　０１！！Ｘ ＺｆｅｌｉＪｑ７Ｍ　＋！！！Ｖｌ化合物ＸＩの代わりに化合物ＸＸＩＶを用い て化合物Ｘｌｌの合成について記載した手順に従い、化合物ｘＸｖおよびＸＸＶ Ｉを得る。

ＸＫＸＶ　゛　ジ十イトレイト−Ｉし ↓　Ｃ，Ｈ，Ｎ−ト５−ｅｕ、馬く叩ト幻式中−１１Ｄ、り即成中、ｌｌ　１７ 　ｉｌ　ｌ！ｎｌ！ｄｌ、　Ｅ　ＩＸｎＸｍ）ｆ馳１！ｎ１ｆｆ）ｔ−Ｎ−ス’ ｙシニル−１ｙｓをＨ２Ｎ−ＣＨｔＣＨ＊−５−８ＣＨＩＣＨｌ−ＮＨ−ｔ−Ｂ ＯＣで誘導体化し脱ブロッキングした後、標準固相合成法を用いテ樹脂上にリガ ンドＰｅｐ２を合成する。脱ブロッキングおよび樹脂からの開裂により化合物Ｘ ＸＶＩＩｈを得る。

樹脂に結合したＪｙｓ−ε−ＮＨ−Ｃｏ　（Ｃ）１１）＠ＮＨ，中間体をスクシ ンイミジル３（２−ピリジルジチオ）プロピオネートとカップリングし、ついで 脱保護し、開裂して化合物ＸＸＶＩＩＩを得る。

ＰＢＳ　（ｐＨ７，４）（５ｍＬ）中のＦａｂ’−５Ｈ（１０ｍｇ）の撹拌溶液 に、４”　ｌ：でｐｎｓ　（ｐＨ７，４）中の化合物ＸＶＩ　（１０ｍＭ、０． ３ｍＬ）　をＭ下する。６０分後、ＰＢＳ　（ｐＨ７，４）　（０，５Ｌｘ３） １：対し、て４’　ｌ：：て各２時間透析する。

標準固相合成法により、核局在化配列を、カルボキシル→アミノ方向のためには 樹脂に結合した保護ペプチドの１ｙｓ−ε−ＮＨ−Ｃｏ　（ＣＨｔ）ｓＮＨｓ中 間体に、アミノ→カルボキシル方向のためにはε−Ｎ−１ｙｓのＮ−スクシニル 誘導体に付加した。脱保護および樹脂から放出させて以下の化合物を得る：すξ 中、　Ｒ１７Ｐ＠Ｐフ　ｌ””ｉｌ、　ｐｓ％　ｌ”！！ｊｂ　Ｐｅｐ９　（！ ！！ｋ）ｉＪ（（）ＰｌｌｐｌＯ（ｍｘｌ）ｔシｌ Ｅ中、　＊　（７Ｐ＊ｐ３　（ｘｘｘｕ）、Ｐ＠ｐ４　（ｘｘｘＢ）、Ｐ＊ｐＳ 　（ｘｘｘｎ＋９１３ｐ＊ｐ６（Ｘχ！！１１ Ｂ、親代合物：標準固相ペプチド合成により調製したＮ−（リガンド部分）−Ｈ Ｎ−ｔｙｒ−１ｙｓ−１ｙｓ−ａｌａ−１ｙｓ−ａｌａ−１ｙｓ−ａｈａ−１７ ８−ＣＯＮＨ，。１ｙｓ−ａｌａ鋳型の代わりに、Ｈ，Ｎ−（ｌｙｓ）、−ＣＯ ＯＨ，ＨｚＮ−（ａｒｇ−ａｌｍ）、−ＣＯＯＨ，ヒストン、および他のＤＮＡ 結合性カチオン性ポリペプチドなどのあらゆるアミノ酸ポリマーおよびα−ヘリ ックスを形成し得るタンパク質を用いることができることは明らかである。−Ｈ Ｎ−（Ｉｙｓ−ａｌａ）、　−Ｃｏ単位は４から１００以上伸長させることがで きる。スペーサー−リガンド部分を有する残基の配列位置は、アミノ末端であっ てもカルボキシル末端であってもよい。他の態様において、リガンド−スペーサ 一部分は、Ｎ−末端残基かまたはＣ−末端残基としてシスティンにジスルフィド 結合を介して結合している。

脱ブロックしたα−アミノ−ｔｙｒ残基を含有する樹脂に結合した保護ペプチド は、細胞膜レセプターリガンドの還元り放出のための鋳型を調製するための合成 中間体である。α−アミノ−ｔｙｒを無水コハク酸で誘導体化した後、樹脂に結 合した保護ペプチドに以下のリガンドをカップリングさせる。

Ｈ蓄ＣＨ！　ＣＨｚ　Ｓ　−Ｓ　−ＣＨｔ　ＣＨ＊　−Ｎ　ＨＲ（式中、２２葉 酸のグルタミル残基のγ−アミド　（Ａ）＝ビオチン　（Ｂ） ＝リポ酸　（Ｃ） ＝Ｈ） 脱保護および樹脂からの放出により以下の化合物が得られる。

（式中、２２葉酸のグルタミル残基のγ−アミド　（ＸＸＩ　Ｉ　Ｉ　ａ）＝ビ オチン　（ＸＸＩＩｌｂ） ＝リポ酸　（ＸＸＩＩＩｃ） ＝Ｈ） 実施例４ ヘキサカチオンＤＮＡ結合性鋳型の合成これら化合物の合成のための全体の模式 フローチャートを図７に示す。合成の化学的工程は以下に示す。

コハク酸モノアミド（２ミリモル）を乾燥ＤＭＦ　（２ｍＬ）中に溶解し、１〜 エチル−３−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］カルボジイミド（４，０ミリ モル）を加え、２時間撹拌する。ついで、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２， １ミリモル）を加え、撹拌を室温にてさらに６時間続ける。これを乾燥ＤＭＦ　 （２ｍＬ）中の（Ｓ）−ヒドロキシスペルミン（ＩＶ）（１ミリモル）に滴下し て混合する。室温にて一夜撹拌した後、溶媒を真空除去し、水中に溶解し、この 溶液をカチオン交換樹脂に適用する。生成物を２．０ＭまでのＨＣＩ勾配により 単離する。適当なフラクションをプールし、凍結乾燥して化合物ＸＸＸＩＩを得 る。

化合物ＸＸＸＩ　Ｉ　（２ミリモル）を乾燥トルエン（５ｍＬ）中に溶解し、ト ルエン中のナトリウムビス（２−メトキシエトキシ）アルミニウムハイドライド （１０ミリモル）を小アリコートにて３０分かけて加える。２時間後、酢酸エチ ル（１０ｍＬ）を加え、ついで溶媒を真空除去する。得られた固体を水中に溶解 し、ＨＣＩを用いてｐＨを３に調節し、カチオン交換樹脂に適用する。生成物を ２．０ＭまでのＨＣＩ勾配により単離する。適当なフラクションをプールし、凍 結乾燥して生成物を得る。

ＣＯＣＨＩ　ＣＨｔ　ＣＯＯＨまたＩｔＣＨｔ＝ＣＨＣＮとノ反応を繰り返ｔ、 ：、！＝１：：ヨ１ｌ）−（ＣＨり４−ＮＨ，または−（ＣＨｔ）ｓ　ＮＨｔ単 位をさらに有する同族体を調製することができることが明らかである。

化合物ＩＶが化合物ＶＩＩに変換される上記反応と同様の反応において、化合物 ＸＸＸＩＩＩは化合物ＸＸｖＪに変換することができる。

Ａ　Ｂｒ（％−ｃｏＯＣＲ，Ｎａα３３１、５．９．１４．１８．２２−へキサ ベンジルオキシカルボニル−１，２２−ジアミノ−１１−カルボキシメトキシ− ５，９，１４，１８−テトラアザトコサン化合物ＶＩＩが化合物ＶＩＩおよびＸ Ｉ系列に変換される上記反応と同様の反応において、化合物ＸＸＸＶＩは化合物 ＸＸＸＸＶＩ　ＩおよびＸＸＸＩＸ系列に変換することができる。

ＸＸＸＶＸ４ｐ　Ｉｔ／１−０１．Ｃ１％４４−ＯＨ，Ｃ１！、−ＮＯ−Ｒに中 、ｌ’ｌ１７λ、　ｍ、　ａ若和陣↓　朋ｒ、ロリχつＨ 式中　Ｉｌｌ　ｌ）　Ａ　ｊＸＸＸＸＸｍ）、ｌ　（！ｒ！！Ｔｈｌ、６　（！ ｒ！ＸＩＣ１ｇ１ＪＨ（！Ｌｌ化合物ＸＩが化合物ＸＩＩＩに変換される上記反 応と同様の反応において、系列ＸＬは系列ＸＬＩＩに変換することができる。

ｎ　−シナ朴メト−１し Ａ　Ｃ，Ｈ，Ｎ−５４−ＣＩ（、ｅＨ，−ＣＯＮＨ−Ｒ１式中、＊　Ｉ）　ｏ、 　１ｆｆ（１７ｖ化合物ＸｌｌがＸＩ系列に変換される上記反応と同様の反応に おいて、化合物ＸＬＩはＸＸＸＩＸ系列に変換することができる。

ｎＸ　＋　Ｃ，Ｈ，Ｎ−５−８−ｅ）Ｌ、ＣＩ４．−ＮＨ−１１１氏中、罠すＡ 、り附Ｇ ｉ中、　＊　（３Ａ（ｘｘｘｘｘａｌ、　ｍ　（ｘｘｘｘｒｂｙｙ９ａ　（ｘｘ ｘｘｘｃ）化合物ＶＩＩが化合物ＸＩＶおよびＸＶＩＩｇに変換される上記反応 と同様の反応において、化合物ＸＸＸＶＩは化合物ＸＬＩＶおよびＸＬＶＩｇに 変換することができる。

ＸＸＷＩ　◆　リー（へ１ｍ−Ｎ）Ｌｌ纂　◆　人７シ〉イミジル３（２−ビリ ４ジ’ｒＫ　＋、７”ｏビオ年子Ａ　＊　Ｍａｒ、　ＣＨ，Ｃ０ＱＨ 化合物ＩＸの化合物ＸＩＸｈへの上記変換と同様の反応において、化合物ＸＸＸ ＶＩＩＩを化合物ＸＬＶＩＩＩｈに変換することができる。

！！！’Ｖ！！Ｉ　＋　ｌ＄コハクＣ 化合物ＶＨのＸＸＴｌ系列への上記変換と同様の反応において、化合物ＸＸ１、 Ｓ、９，１４．ｌａ、２２−＾キ可べｙジ＋ｖＫ’ｔシカｌイζｑレーｌ、２２ −シフｉｔ　−ｕ−（ｘ（５゛−力１し本°キン鳴］ｈ−カ１曲しメトキシー５ ・９・１４・１８−テトラ了ブ°トコ・ワーン実施例５ インターカレーション用ヘキサカチオンＤＮＡ結合性鋳型これら化合物の合成の ための模式フローチャートを図８に示す。合成の化学的工程は以下に示す。

化合物Ｉ１１　（分割したＳエナンシオマー）（２ミリモル）、４−ピロリジノ ピリジン（４ミリモル）および無水ベンジルオキシカルボニル（４，１ミリモル ）を無水ベンゼン（４０ｍＬ）中で混合し、Ｎ、下、室温にて一夜撹拌する。フ ェニル−シリカ上の固相抽出およびヘキサン中の５０％までの酢酸エチルの線状 勾配を用いた溶出により所望の生成物を分離する。適当なフラクションをプール し、溶媒を蒸発させて生成物（Ｌｌｌ）をアモルファスな固体として得る。

ＸＸＸ　（う）ネｊＪしｒ＋、　Ｓ　＞丁＋）ｒｉ＜−１＋　ｔ−ａｏｃ、。

ゼン（４ｍＬ）を加え、２０分間撹拌する。乾燥ベンゼン（４ｍＬ）中の化合物 ＬＩＩＩ（２ミリモル）を加え、ついでベンゼン（２ｍＬ）中のブロモ酢酸メチ ル（２ミリモル）を加える。４時間後、水（２５ｍＬ）を加え、ベンゼン（２５ ｍＬｘ３）で抽出する。溶媒を真空除去して生成物を得る。

ジメチルアミノピリジン（０，１ミリモル）およびトリエチルアミン（１５ミリ モル）を含有する乾燥ピリジン（１０ｍＬ）中に化合物ＬＩＶ（５ミリモル）を 溶解する。この撹拌溶液に、アミノ基ふ特異的に反応するＤＮＡ結合性染料上の ６．９−ジクロロ−２−メトキシアクリジン（１１ミリモル）を乾燥ピリジン（ １０ｍＬ）中で滴下する。室温にて１時間以上撹拌する。溶媒を真空除去し、フ ェニル−シリカ上の固相抽出およびヘキサン中の５０％までのアセトニトリルの 線状勾配を用いた溶出のため、混合物をアセトニトリル中に再溶解する。適当な フラクションをプールし、溶媒を蒸発させて生成物をアモルファスな固体として 得る。

水酸化カリウム（２ミリモル）を含有するエタノール（１０ｍＬ）中に化合物Ｌ Ｖ（２ミリモル）を溶解する。室温にて一夜後、溶液を分別漏斗に移し、これに ＭＣＩ（２ミリモル）、水（５ｍＬ）およびベンゼン（２５ｍＬ）を加える。

ベンゼンでさらに３回抽出した後、コンバインした有機相を真空乾燥させる。標 １．１２−Ｎ、Ｎ“−ジ（２−メトキシ−６゛−クロロアクリジニル）アミノ− ４，９−ジ−ｔ−ブトキシカルボニル−６−カルボキシメトキシ−４，９−ジア ザ−ドデカン 実施例２の変換と同様の反応により、以下の生成物が得られる。当業者であれば 、反応条件は同じであるが出発物質および最終生成物は異なるであろうことを認 識するであろう。

ＬＩＶＸ＋Ｑ−ｅ）Ｌ、ＣＭ、−８−３−ｅｌｔ、ｅＨ，−Ｎ）Ｉ−Ｒ↓　ｇ中 、ｊｌｌｌ−＾１ｍｌ　”＃ｒ６Ｎ↓　Ｍａｒ、　ＣＨ，Ｃ０ＯＨ 六；中、Ｒｌ）　Ａ　ＩＬＩ！ａｌ、　！ｌ　ｉ！Ｊ！ｋｌ、　（ｌ　ｌ”ｘＣ １＃ｆＰ’　ＩＬ！＋（ｂ）　ＬＩ　令　：Ｉｒ万ヒトレイト１しｔ　ｃ３Ｈ， ｎ−５−＄−ｆ％Ｃ％−（Ｊ）１Ｍ−Ｒ＋　Ｑ、　Ｒ１１ｏ、　ｔｙ）ｐに中、 ＊　（３Ｄ　（Ｌ！！Ｘｄｌ、　Ｋ　（ＵＫ！＄Ｉｌ［Ｆ　（ｕＸＸ１ｊ！ＪＸ 　＊　ｅ、Ｍ、Ｎ−！−ｓ−ロｆ４−ｎ−Ｒ１ｉ中、　”　１７１１１鮎％ＬＶ Ｉ　◆　〜Ｎ−（Ｃ１ψ−へ 人りンンイミ乏１し　３（２−ピリ肖しジケ万　）アロＣ！芹キード１　◆　Ｈ 社、口ちα唖） ＬＶＸ　＋　菅セにコバ７−丸 ＬＶ！　＋　Ｈ，Ｎ（ＣＩ４，１．−αＸ）ｅ）Ｉ。

実施例６ 他のインターカレーション用ヘキサカチオンＤＮＡ結合性鋳型これら化合物の合 成のための模式フローチャートを図９に示す。合成の化学的工程は以下に示す。

実施例３の変換と同様の反応により、以下の生成物が得られる。当業者であれば 、反応条件は同じであるが出発物質および最終生成物は異なるであろうことを認 識するであろう。

ε−Ｎ−１ｙｓを無水コハク酸で誘導体化した後、以下のリガンドを樹脂結合し た保護ペプチドにカップリングする。

Ｈ２Ｎ　ＣＨｔＣＨｌ−８−８−ＣＨＩＣ）（！　ＮＨＲ（式中、ＲはＡＳＢＳ ＧまたはＨ）　′脱保護および樹脂から放出させて以下の化合物を得る。

ＬＸＸ！ＸＸ　＋　ジ〉１オドレイト−Ｊし・核局在化配列を付加して以下の化 合物が得られる。

実施例７ ダイマー性オクタカチオンＤＮＡ結合性鋳型これら化合物の合成のための模式フ ローチャートを図１０に示す。合成の化学的工程は以下に示す。

化合物ＬｒＶ（２ミリモル）、４−ピロリジノピリジン（１ミリモル）および無 水ベンジルオキシカルボニル（１，０ミリモル）を無水ベンゼン（４０ｍＬ）中 で混合し、Ｎ２下、室温にて一夜撹拌する。フェニル−シリカ上の固相抽出およ びヘキサン中の０〜５０％の酢酸エチルの線状勾配を用いた溶出により生成物を 分離する。、適当なフラクションをプールし、溶媒を蒸発させて生成物（ＬＸＸ ＸＩ）をアモルファスな固体として得る。

ＬＸＶ　＋　ＯＪ　ｕｌし　ｔ　−ＢＩＩＸ、０化合物ＬＸＸＸＩ　（２ミリモ ル）、４−ピロリジノピリジン（２ミリモル）およびビス（３−カルボキシエチ ル）ジチオール（３ミリモル）を無水ベンゼン（４０ｍＬ）中で混合し、Ｎｚ下 、室温にて一夜撹拌する。フェニル−シリカ上の固相抽出およびヘキサン中の５ ０％までの酢酸エチルの線状勾配を用いた溶出により生成物を分離する。適当な フラクションをプールし、溶媒を蒸発させて生成物（ＬＸＸＸ　Ｉ　Ｉ　）をア モルファスな固体として得る。

化合物ＬＸＸＸＩ　Ｉ　（２ミリモル）を乾燥ＤＭＦ　（２ｍＬ）中に溶解し、 １−エチル−３−［３−（ジメチル−アミノ）プロピル）カルボジイミド（４， ０ミリモル）を加え、２時間撹拌し、ついでＮ−ヒドロキシスクシンイミド（２ ，１ミリモル）を加え、室温にてさらに６時間撹拌を続け、ついで乾燥ＤＭＦ（ ２１ｍＬ）中の３−　［（３”−Ｎ−ｔ−ＢＯＣ−アミノプロピル）−４°−Ｎ −１−ＢＯＣ−アミノブチル］−Ｎ−ｔ−ＢＯＣ−アミノプロピルアミン（２ミ リモル）を混合する。室温にて一夜撹拌した後、溶媒を真空除去し、フェニル− シリカ上の固相抽出およびヘキサン中の０〜５０％の酢酸エチルの線状勾配を用 いた溶出により生成物を分離する。適当なフラクションをプールし、溶媒を蒸発 させて生成物（ＬＸＸＸＩ　Ｉ　１）をアモルファスｊよ固体として得る。

水酸化カリウム（２ミリモル）を含有するエタノール（１０ｍＬ）中１ニ化合物 ＬＸＸＸＩ　Ｉ　Ｉ　（２ミリモル）を溶解する。室温Ｉこで一夜後、溶液を分 ５３１ｊ漏斗（；移シ、これにＨＣｌ　（２ミリモル）、水（５ｍＬ）およびベ ンゼン（２５ｍＬ）を加える。ベンゼンでさらに３回抽出した後、コンノくイン した有機相を真空乾燥させる。フェニル−シリカ上の固相抽出お＋びヘキサン中 の５０％までの酢酸エチルの線状勾配を用いた溶出により生成物を分離する。適 当なフラクションをプールし、溶媒を蒸発させて生成物（Ｌ’ＸＸＸＩＶ）をア モルファスな固体として化合物ＬＸＸＸＴＶ　（１ミリモル）を乾燥ジメチルホ ルムアミドに溶解し、１−エチル−３−　［３−　（ジメチルアミノ）プロピル ）カルボジイミド（３．０ミリモル）を加え、２時間撹拌し、つＬｌでｎ−ヒド ロキシスクシンイミド（１．　１　ミリモル）を加え、室温にてさら１こ６時間 撹拌を読書する。この溶液ヲ乾燥ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）中のＨ２Ｎ −ＣＨ２ＣＨ２　ＮＨ−Ｒ　Ｃ式中、Ｒ＝ＡＳＢ，ＧまたはＨである）（３ミ１ ノモル）ｇ二滴下し、撹拌をさら１：２４時間続ける。溶媒を真空除去する。フ エニルーシ１ツカ上の固相抽出およびヘキサン中の０〜５０％の酢酸エチルの線 状勾配を用（また溶出番＝より所望の生成物を分離する。適当なフラクションを プールし、溶媒を蒸発させて生成物をアモルファスな固体として得る。

Ｌ！ｘＩｆｖ◆　リーｑｅ）ｌ，−５４４−Ｎｉｌ−１式中、’Ｒ１２＾，　ｍ ，　ｏ琴貸Ｈ ♂（中、　Ｒ　１７　Ａ　（ＬＩ！ｒｖａｌ，　！１　（ＬＸＸＸＶｂｌ　ｒ　 Ｏ　ｌムｕｎ／ａｌｊｉｌ；ｊＨ　ｎｌＸτｖ！］３０％ＨＢｒを含有する氷酢 酸（２−９ｍＬ）中に化合物ＬＸＸＸＶａ　（Ｉミ！Ｊモル）を溶解し、Ｎ２下 、暗所にて室温で一夜撹拌する。ジエチルエーテルｍＬ）を加えて生成物を沈殿 させる。酢酸の匂いが消えるまで生成物を洗浄する。

この固体を酸素不含のＯ．ＩＭ　ＮＨ４０Ｈ中に溶解する。この溶液を、２０％ アセトニトリルを含有する脱気したＯ．ＬＭ　ＮＨ４Ｃｏｎ中で平衡化したアニ オン交換樹脂に適用する。Ｏ．ＬＭ　ＮＨ．ＣＯ３中の２０〜８０％のアセトニ ド１ノルの勾配により生成物を未反応の出発物質から分離する。適当なフラクシ ョンをプールし、凍結乾燥して生成物を得る。

ｇ中、　Ｒ　ｌ）　Ａ　（ＬＸＸｒｖｌｌｍ）、　！１　（ＬＸＸｒｖＸＸｂｙ ，　Ｏ　（ＬｘｘｒＶＸＸＣｊｌｆＪ７Ｈ　ＩＬ！！ｎ／！IＫＩ ＨＥＮ　ＣＨ２ＣＨ２　ＳＳ　ＣＨ２ＣＨ２　ＮＨ　Ｒの代わりにＳ−ｔ−ＢＯ Ｃ−メルカプトエチルアミンを用いる他はＬＸＸＸＶａ−ＬＸＸＸＶｃと同じ手 順を用いる。ついでＬＸＸＸＶＩ　Ｔ　ａ−ＬＸＸＸＶＴ　Ｉ　ｃと同じ手順を 用（する。

ＬＸＸＸＸＶ　＊　ｔ−ＢＯＣづ→：’４ｅ４−ｍちＡ　Ｃ，）Ｉ、１４−５− ＣＫ、ａｌｌ、−ＣＯＮＨ−Ｒ１式中、ＲＩ）Ｄ、ＩＪマ氏中、ＲＩＦ　ｏ　＋ ｚｃｘｄ＋、　ｔ　（ｘｃｚ＊１１ｒ、ｌＪｒ　（ｘｃｘｔ＋化合物ＸＣ（１ミ リモル）をリン酸緩衝食塩水（ｐＨ７，４）（２ｍＬ）中に溶解し、Ａ’　（リ ン酸緩衝食塩水（ｐＨ７，４）（２ｍＬ）中に溶解）と混合する。

この反応混合物を水で２０倍に希釈し、２０％アセトニトリルを含有する脱気し たＯ、ＩＭ　ＮＨ４ＣＯ３で平衡化したアニオン交換樹脂に適用する。Ｏ，ＬＭ 　ＮＨ。

ＣＯ３中の２０〜８０％のアセトニトリルの勾配により生成物Ｘｌａを未反応の 出発物質から分離する。適当なフラクションをプールし、凍結乾燥して生成物を 得る。

大中、　＊　ｌ）　Ａ　（！Ｊ！ｎ／！Ｍａｌ、！ｌ　（’ＬＸＸＸＶＸＩｂ７ １ｆ−Ｊ”ＪＱ　（Ｘ、ＸＸＷＸＸＣｆ化合物ＬＸＸＸＩＶ　（１ミリモル）を 乾燥ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）中に溶解し、１−エチル−３−［３−（ジ メチルアミノ）プロピル）カルボジイミド（３，０ミリモル）を加え、２時間撹 拌し、ついでＮ−ヒドロキシスクシンイミド（１，１ミリモル）を加え、撹拌を 室温にてさらに６時間続けるヶこの溶液を乾燥ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ ）中の１．６−ジアミツヘキサン、（５ミリモル）に滴下し、撹拌をさらに２４ 時間続ける。溶媒を真空除去する。フェニル−シリカ上の固相抽出およびヘキサ ン中の０〜５０％の酢酸エチルの線状勾配を用いた溶出により所望の生成物を分 離する。適当なフラクションをプールし、溶媒を蒸発させて生成物をアモルファ スな固体として得る。

ｗｘｘ！ｖ＋　９−１％１ｓ−Ｑ＋ 乾燥ベンゼン（１０ｍＬ）中の化合物ＸＣＩＩ（１ミリモル）をスクシンイミジ ル３（２−ピリジルチオ）プロピオネート（１，１ミリモル）と混合し、室温に て２時間撹拌し、ついで溶媒を真空除去する。

３０％ＨＢｒを含有する氷酢酸（２０ｍＬ）中に化合物ＸＣＩＩＩ（１ミリモル ）を溶解し、Ｎ、下、暗所にて室温で一夜撹拌する。ジエチルエーテル（３０ｍ Ｌ）を加えて生成物を沈殿させる。酢酸の匂いが消えるまで生成物を洗浄する。

この固体を酸素不含のＯ，ＬＭ　ＮＨ４Ｃ０１中に溶解する。この溶液を、２０ ％アセトニトリルを含有する脱気した０、１Ｍ　ＮＨ４ＣＯ３中で平衡化したア ニオン交換樹脂に適用する。Ｏ，ＩＭ　ＮＨ４ＣＯ５中の２０〜８０％のアセト ニトリルの勾配により生成物を未反応の出発物質から分離する。適当なフラクシ ョンをプール４°にてＰＢＳ　（ｐＨ７，４）中の化合物ＸＣＩＶ　（１０ｍＭ 、０．３ｍＬ）を滴下する。６０分後、ＰＢＳ　（ｐＨ７，４）（０，５Ｌｘ３ ）に対して４°にて各２時間透析する。

化合物ＬＸＸＸＶＩ　（２ミリモル）、４−ピロリジノピリジン（２ミリモル） および無水コハク酸（３ミリモル）を無水ベンゼン（４０ｍＬ）中で混合し、Ｎ ２下、室温にて一夜撹拌する。フェニル−シリカ上の固相抽出およびヘキサン中 の５０％までの酢酸エチルの線状勾配を用いた溶出により所望の生成物を分離す る。

適当なフラクションをプールし、溶媒を蒸発させて生成物（ＸＣＶＩ）をアモル ファスな固体として得る。

標準固相ペプチド法を用い、支持体上のベプチ下のアミノ末端；＝化合物ＸＣＶ Ｉをカップ１ルグさせ、樹脂から開裂させ、脱保護し、イオン交換クロマトグラ フィーにより精製する。

化合物ＬＸＸＸＩＶ（２ミリモル）を乾燥ＤＭＦ　（２ｍＬ）中１＝溶解し、１ −エチル−３−［３−（ジメチルアミノ）プロピル）カルボジイミド（４，０ミ １ノモル）を加え、２時間撹拌し、ついでＮ−ヒドロキシスクシンイミド（２， １ミリモル）を加え、撹拌を室温にてさらに６時間続け、つＬｌで乾燥ＤＭＦ　 （２ｍＬ）中の６−アミノヘキサン酸メチル（２ミリモル）と混合する。室１１ Ｉこて一夜撹拌した後、溶媒を真空除去し、フェニル−シリカ上の固相抽出およ びヘキサン中の０〜５０％の酢酸エチルの線状勾配を用いた溶出により生成物を 分離する。適当なフラクションをプールし、溶媒を蒸発させて生成物をアモルフ ァスな固体として得る。

水酸化カリウム（２ミリモル）を含有するエタノール（１０ｍＬ）中に化合物Ｘ ＣＶＩ　Ｉ　Ｉ　（２ミリモル）を溶解する。室温にて一夜後、溶液を分別漏斗 に移し、これにＭＣＩ（２ミリモル）、水（５ｍＬ）およびベンゼン（２５ｍＬ ）を加える。ベンゼンでさらに３回抽出した後、コンバインした有機相を真空乾 燥させる。フェニル−シリカ上の固相抽出およびヘキサン中の１００にまでの酢 酸エチルの線状勾配を用いた溶出により所望の生成物を分離する。適当なフラク ションをプールし２．溶媒を蒸発させて生成物をアモルファスな固体として得る 。

標準固相ペプチド法を用い、支持体上の適当なペプチドのアミノ末端に化合物Ｘ ＣＩＸをカップリングさせ、樹脂から開裂させ、脱保護し、イオン交換クロマト グラフィーにより精製する。

式中、　Ｒ１７Ｐ＠Ｐ３１！ｅ！幻、　Ｐａｐ４　ｌｅｅ！プｌ＋　Ｐ＊ｐＳ　 ＋！ｅ！ｋｌ＃ＰＪ＄Ｐａｐ６　（ｘｃｘｘｌ実施例８ 他のダイマー性オクタカチオンＤＮＡ結合性鋳型これら化合物の合成のための模 式フローチャートを図１１に示す。合成の化学的工程は以下に示す。

ε−Ｎ−Ｌｙｓまたはα−Ｎ−Ｔｙｒを無水コハク酸で誘導体化した後、以下の リガンドを樹脂結合した保護ペプチドにカップリングする。

ＨｓＮ　ＣＨｓＣＨｘ−８Ｓ　ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＲ（式中、ＲはＡＳＢまたはＧ ） 脱保護および樹脂から放出させて以下の化合物を得る。

Ｎ中　Ｒ１７＆　（ｅＸａｌ、ｌ　１ｅＸＩ）ｌｊ７Ｊ＃（ｉ　ｌｅ！ｃｌｔ− ＮＬｙｓをｔ−ＢＯＣ−８−（ＣＨりｔ−Ｃ０ＯＨで誘導体化した後、脱保護お よび支持体から放出させて以下の化合物を得る。

ＰＢＳ　（ｐＨ７，４）（５ｍＬ）中のＤまたはＥ　（１０ｍｇ）の撹拌溶液に 、４″ニてＰＢＳ　（ｐＨ７，４）中の１０ｍＭの化合物ＣＩ　Ｉ　（０，３ｍ Ｌ）を滴下する。６０分後、反応混合物を水で２−０倍に希釈し、等容量の水お よび２．０ＭＭＣｌから調製した線状勾配を用い、カチオン交換カラムに適用し て所望の生成物を未反応の出発物質および他の生成物から分離する。適当なフラ クションをプールし、凍結乾燥して生成物を得る。別法として、ＰＢＳ　（ｐＨ ７，４）（５ｍＬ）中のＦまたはＦ’　（１０ｍｇ）の撹拌溶液に、４″にてＰ ＢＳ　（ｐＨ７，４）中の１０ｍＭの化合物ＣＩ　Ｉ　（０，３ｍＬ）を滴下す る。６０分後、ＰＢＳ（ｐＨ７，４）（０，５Ｌｘ３）に対して４″にて各２時 間透析する。

Ａ　＊　Ｃ，Ｈ，１１４４−Ｃ）ｌ、Ｃ）ｔ、−ｃｏＮＨ４１−１４，ｊｌ　１ ７１１１１１に１＆？、　Ｒｌ）　ｏ　（ｃｘｘｘａｌｒ　ｚ　Ｌｃｘｘｘａ＋ ｙＨ（ｌｒ　Ｃｃｘｘｘｔ）ｉ−Ｎ−スクシニル−１ｙｓをＨ＊　Ｎ　−ＣＨ！ 　ＣＨｔ　Ｓ　Ｓ　−ＣＨｘ　ＣＨ！　−Ｎ　Ｈ−ｔ−ＢＯＣで誘導体化し脱ブ ロックした後、標準固相法を用いて樹脂上にリガる。

樹脂に結合したＬｙｓ−εＮＨ−Ｃｏ　（ＣＨｔ）！ＮＨ！中間体をスクシンイ ミジル３（２−ピリジルジチオ）プロピオネートとカップリングし、ついで脱保 護および開裂して以下の化合物を得る。

核局在化配列を付加して以下の化合物を得る。

式中、Ｒｌ＄　ＰｅｐフＩＣＶＸＸ５．　ＰｌｌＰａ　＋ｃｖＩ！ｊｌ、　Ｐ＊ ｐ９　ｉｃ’Ｖ！ｌ１ｃ１２７１ｐｅｐｘｏ　１ｅＶｚ！ｌP ｇ中、Ｒｌ）　Ｐ＠ｐ３　１ｃＶ！！！ｉ）、　Ｐａｐ４　＋ｅＶｒｒ！ｊ１． 　Ｐ＊ｐＳ　（ｅＶ！！！ｋｌ）イミしｌ　Ｐｅｐ６実施例９ 二重リガンドを有するオクタカチオンＤＮＡ結合性鋳型少なくとも８種のＤＮＡ 結合性鋳型および少なくとも１２種のレセプターリガンドにより、用いることの できる多くの可能な組み合わせが存在する。代表的な例としては、開裂可能なま たは非開裂性のスペーサーにより連結されたポリアミン鋳型、および開裂可能な または非開裂性のスペーサーにより連結されたオリゴペプチド鋳型が挙げられる 。

これら化合物の合成のための模式フローチャートを図１２に示す。合成の化学的 工程は以下に示す。

ポリアミン鋳型の場合； 実施例７〜１０はすべて固相ペプチド合成によるものである。最終的なカップリ ングは、各ペプチドについて、Ａ、Ａ’、ＢＳＢ’、Ｇ、Ｇ’リガンドについて 記載したものと同じである。Ｄ、Ｅ、ＦおよびＦａｂ’に対する反応条件が匹敵 ↓　◆　ｎに１ｅ−Ｃ１ 実施例７と同様の反応により以下の拒成物が得られる。当業者であれば、出発物 質および最終生成物は異なるが反応は同じであることを認識するであろう。

〆、中、　ＲＩＳ　Ａ、　１１牝浮Ｇ 式中、　Ｒ１）入１ｅ！ｉａｌ、　”　Ｔ”ｘｂｌｔＡｌｔＧ　（ＣＸＸｃｌ戊 中、＊　７７　Ａ　（ｃｘｘｘａｌ、　ａ　（ｃｘｘｘｙｙ−、Ｈａ　（ｃｘｘ ｘａ）化合物ＣＸ（２ミリモル）を乾燥ＤＭＦ　（２ｍＬ）中に溶解し、１−エ チル−３−［３−（ジメチルアミノ）プロピル）カルボジイミド（４，０ミリモ ル）を加え、２時間撹拌し、ついでＮ−ヒドロキシスクシンイミド（２，１ミリ モル）を加え、撹拌を室温にてさらに６時間続け、ついで乾燥ＤＭＦ　（２ｍＬ ）中の５（２−アミノエチル）Ｓ’　（２−ピリジル）−ジチオール（２ミリモ ル）と混合する。室温にて一夜撹拌した後、溶媒を真空除去し、フェニル−シリ カ上の固相抽出およびヘキサン中の０〜５０％の酢酸エチルの線状勾配を用し） た溶出により生成物を分離する。適当なフラクションをプールし、溶媒を蒸発さ せて生成物をアモルファスな固体として得る。

ＶＴＩＩ（２ミリモル）を溶解する。室温で一夜後、溶液を分別漏斗に移し、こ れにＨＣｌ　（５０ミリモル）、水（５−ｍＬ）およびベンゼン（２５ｍＬ）を 加える。ベンゼンでさらに３＠抽出した後、コンバインした有機相を真空乾燥さ せる。

フェニル−シリカ上の固相抽出およびヘキサン中の１００％までの酢酸エチルの 線状勾配を用いた溶出により所望の生成物を分離する。適当なフラクションをプ ールし、溶媒を蒸発させて生成物をアモルファスな固体として得る。

Ｈｓ　Ｎ　−ＣＨ！　ＣＨｔ　−Ｓ　Ｓ　Ｃｓ　Ｈ４Ｎの代わりに５−ｔ−ＢＯ Ｃ−メルカプトエチルアミンを用いる他は化合物ＣＸＩＩＩと同じ手順を用しλ る。

ｃｚ　＊　４トｃ）ｔｌＣｋＬ、−５−ｔ−ＢＯＣ核局在化配列を付加する。標 準連続流固相合成法を用し）で市販の５−（Ｎ−ｔ−ＢＯＣ）アミノヘキサン酸 を固体支持体上の保護ペプチド１ニカツブ１）ングし、その後の反応を行って、 脱保護および支持体からの放出およびクロマトグラフィー単離の後の最終生成物 として化合物ＣＸＶＩ　Ｉａ−ｃＳＣＸＶＩ　Ｉ　ＩおよびＣＸＩＸを得る。

Ｈ，Ｎ−Ｐ＊ｐ３−ｅＯＮＭ−叉４ト　＋　ｔ−１０ｃｍＮＨ−＋ＣＫ１ｌｍ− α）０１４ＮＨ−−（ｃａ、１．−ｃｏＮＨ−ｐｓｐ３−ｃｏｎｏ４１（序、Ｌ 　＊　Ｈｏｏｅ−Ｃ）ｔ、ｅ−−６−５−ＣＪＣＨ２−Ｃ寞ＨｘＣａＭｓ　（− ■Ｍ１１１瓦中、１１７　ｇ−ｃＨ，ｌ：’Ｈ，−ＮＭ−Ａ、　５−ｃｌｔ、Ｃ Ｍ、−ＮＨＣＯ−＋ｓ、　５−ｃ）Ｌ、Ｃ１ｔ、−ＮｏＣＯ−Ｌ、　Ｓ|Ｃ，Ｈ ，Ｎｆｆｊｐ−ｔ− ＰＢＳ　（ｐＨ７，４）（５ｍＬ）中のＦａｂ’−８Ｈ（１０ｍｇ）の撹拌溶液 に、４６にてＰＢＳ　（ｐＨ７，４）中の１０　ＣＸＶＩ　Ｉ　Ｉ　（０，３ｍ Ｌ）を滴下する。

６０分後、ＰＢＳ　（ｐＨ７，４）（０，５Ｌｘ３）に対して４″にて各２時間 透析する。または、ＰＢＳ　（ｐＨ７，４）（５ｍＬ）中のＨ８−Ｃ）ｌ、ＣＨ ，−ＣＯＮＨ−Ｐｅｐ２−ＣＯＯＨ（標準固相ペプチド法により調製）（１０ｍ ｇ）の撹拌溶液に４６にてＰＢＳ　（ｐＨ７，４）中の１０ｍＭの化合物ＣＸＶ １１１　（０，３ｍＬ）を滴下する。６０分後、 ＣτｖＸＸＸ　＋　ＭＲｔ（中　Ｒ１７８−Ｆａｂ’　（ｅ！！ｇｌ）ｉ訃！− Ｃ４ＣＨ，−ＣＯＮｉｔ４＠ｐ２−ＣＯＯＳＩ　ｌｅ！！ｈｌ化合物ＣＩＩＩｄ −ｆの調製の場合と同様の反応条件を用いる。

ＣＸＸＫ　＋　（：、＄１．Ｎ−５４−ＣＲ，Ｃ１ｔ、−Ｑ）ＮＯ−Ｒに中、Ｒ １７Ｄ、す睦ｒ 式中、Ｒ１７−Ｄ　（ＣＸＸＸｄ）、　！　＋ＣＩ！ｆ＠１ｔ／４）Ｆ　ＩＣ： ＸＸＸｔ）合成の第四段階でＨＯＯＣ−ＣＨｚ　ＣＨｘ　Ｓ　Ｓ　−ＣＨ２ＣＨ ＊　ＣＯＯＨを−ＣｏＨｓ　（０ＣＨｓ）ｔの代わりに無水コ８り酸を用いると 非開裂性の中間体が得うｔＬ、こｆＬｔｔ化合物ｃＸＶＩ　Ｉ　ａ、ＣＸＶＩ　 ｌｂ、ＣＸＸｇ、ＣＸＸｈ。

ＣＸＸ１ｄ、ＣＸＸＩ　ｅおよびＣＸＸＩｆの反応系に従ってさらに修飾して、 遺伝子送達のための以下の生成物を得る。

標準連続流固相合成法を用いて無水コハク酸を固体支持体上の保護ペプチドにカ ップリングし、その後の反応を行って、脱保護および支持体がらの放出およびク ロマトグラフィー単離の後の最終生成物として化合物ＣＸＸＩＩａ−ｃ、および ｃｘｘｖｈを得る。ＣＸＸおよびＣＸＸＩ系列について記載したようにして、Ｃ ＸＶＩ　Ｉ　ＩおよびＣＸＩＸに対応する中間体を脱保護し、支持体から放出し 、クロマトグラフィー精製し、適当な中間体と反応させて化合物ＣＸＸＶｇ。

ｅ％ｌ：）ｌ、Ｃｏ−Ｄ　ＩＣ！ｆｆ！ｄｌ、　Ｍ−ＣＭ、ＣＭ、−ＣＣ）４　 （αｎｒ！・）ｌｌ＝４Ｊ！−ＯＬＩＣＭ、−ＣＯＭＭ−Ｆ@（＋：！ｎ／！ｆ ｌ 実施例１〇 二重リガンドを有する他のオクタカチオンＤＮＡ結合性鋳型これら化合物の合成 のための模式フローチャートを図１３に示す。合成の化学的工程は以下に示す。

実施例７〜１０はすべて固相ペプチド合成によるものである。最終的なカップリ ングは、各ペプチドについてＡ、Ａ’、Ｂ、　Ｂ’、　Ｇ、　Ｇ’リガンドにつ いて記載したのと同じである。ＤＳＥ、ＦおよびＦａｂ’に対する反応条件は匹 敵する。

オリゴペプチド鋳型の場合： １　◆　ｎ４Ｄｃ−聞く邸−一トトロリーぺ＊市ε−Ｎ−１７　ｓを無水コハク 酸で誘導体化した後、リガンド（Ｘ）を樹脂に結合した保護ペプチドにカップリ ングさせる。

Ｘ　式中、ＸはＨＩ　Ｎ　−ＣＨ！　ＣＨ＊　Ｓ　−Ｓ　Ｃ＊　Ｈａ　ＮＨｔＮ 　ＣＨｔＣＨｔ−８−ｔ−ＢＯＣまたはＨｚ　Ｎ　ＣＨ！　ＣＨ＊　−Ｓ　Ｓ　 −ＣＨｔ　ＣＨ！　−Ｎ　ＨＲ（式中、ＲはＡ、ＢまたはＧ） 必要ではないが、アミノ末端のチロシンを２−メトキシ−６−クロロアクリジニ ル残基で誘導体化することカルばしば望ましい。この誘導体化をしない場合は、 ｃｘｘｘ　＊　Ｃ，Ｈ，Ｎ−１４−ｅＨ，鴨−ｃｏＮＭ−Ｒ１式中、’　ｌ’） 　”ｒ　ｔ　若宅Ｆｉ１．　Ｒ１）　ｏ　（ｃｘｘｘｘａ）、　ｙｇ　（ｃｘｘ ｘｘｍＪ１７ｙ　（ｃｘｘｘｘｔ）ε−Ｎ−スクシニル−１ｙｓをＨｚＮ　ＣＨ ｔＣＨｚ　Ｓ　Ｓ　ＣＨｔＣＨｔ　ＮＨ−１−ＢＯＣで誘導体化し脱ブロックし た後、標準固相法を用し）てリガンドＰｅｐ３を樹脂上に合成する。脱ブロック および樹脂からの開裂により以下の化合物力曵得られる。

合成（Ｄ第二段ＦＩＴＦＭＯＣＮＨ−ＣＨｚＣＨｔ−３Ｓ　ＣＨｔ−ＣＨｔ−Ｃ ＯＯＨ（Ｆ）代わりｌ：ｔ−ＢＯＣ−ＮＨ−（ＣＨｔ）Ｓ−ＣＯＯＨｔｔ用いる と非開裂性ノ中間体カ得うレ、これを化合物ＣＸＸｖＩＩ系列、ＣＸＸＸｇ、Ｃ ＸＸＸ１１１ｈ、およびＣＸＸＸＩ系列の反応系に従ってさらに修飾して、遺伝 子送達のための以下の生成物を得る。

ｆし中、Ｒ１）Ｓ−（％ＣＭ、−１１４−ＡｊｃｕＸＸＶａ）ｊＳ−０１，ＣＩ Ｌ、−ＮＩＩＣＯ−！１（（ＪＸＸＸＹｂ）、５−ＣＫ、Ｃg，− ＮＨｅＯ−！、　ｊｃＸＸＸＸＶｃ）、　Ｓ−Ｆ＆ｂ’　（ＣＸＸＸＸＸｑ）、 　１１−ロＬ、ＣＩ、−ＣＯＮＭ−Ｐ＊ｐ１−００８１％　iＣＸＸ’ｒＶＸＩ Ｘｂｌ　。

５−ＣＫ、Ｃ）Ｌ、Ｃ０−Ｄ　（Ｃ！！！Ｖｆ！ｄｌ、　５−Ｃ１４，鴨−ＣＯ ４１ｃ！！ｒＶ！Ｉ・ｌ、　５−Ｃ）ｔ、ＣＯ，−ＣＯＭＭ|Ｆ　’ 実施例１ル セプターリガンドを含有するオリゴヌクレオチド図１４は、細胞膜レセプターお よび核層レセプターの両方を有するリガンドに結合した一本鎖ＤＮＡを有する二 本鎖ＤＮＡベクターを示す。細胞膜レセプターかまたは核層レセプターのいずれ かに対するリガンドで誘導体化されたスペース分子で３°および５′末端ヌクレ オチドが修飾された上記−重鎖ピリミジンデオキシオリゴヌクレオチドおよび／ または細胞膜レセプターかまたは核層レセプター２つの異なる機能を示すことが できる。

第一の機能は、二本鎖ベクターの発現および／またはベクター配列の宿主ゲノム 中への組み込みのために、該ベクターを特定細胞に対してターゲティングし、つ いで該標的細胞の核に対してターゲティングすることである。二本鎖標的配列の １０コピーのうち一つが個々にまたは集団でベクターの非コード領域に挿入され るであろう。

第二の機能は、癌、感染性疾患および心血管系疾患の治療のために治療用の−零 値ＤＮＡを送達することである。該−零値ＤＮＡを特定の細胞に、ついで該標的 細胞の核にターゲティングすることにより三本構造が形成され、これが特定の遺 伝子が転写されるのを妨害するであろう。

図１５Ａには、単一のレセプターリガンドを有するＤＮＡ−結合性鋳型としての 一本鎖ＤＮＡが示されている。Ｃ１は５−メチルシトシン誘導体である。

５！ｆ１１５Ｂには、核酸ポリマーのデオキシリボース−リン酸骨格がＮ−（２ −エチルアミノ）グリシンで置換された一本鎖ＤＮＡ結合性鋳型が示されている 。

図１５の誘導体および類似体を図１５Ｃに示す。

図１５Ｄには、ピリミジン系列における鋳型を含有するりガントの例を示す。

少なくとも１８種の結合性鋳型および少な（とも１２種のレセプターリガンドが 利用できるので、使用のために多くの可能な組み合わせが存在する。当業者であ れば、細胞膜リガンドを賀する一本鎖ＤＮＡが二本鎖ＤＮＡベクターから解離す るように、２つの異なるＤＮＡ結合性梼型をジチオ橋を用いて５′（３°）から ３゜（５°）へ連結することができることは明らかである。オリゴヌクレオチド は通常の固相合成により調製する。５′および３′ヌクレオチドは、それぞれ該 末端ヌクレオチドの５゛および３゛ヒドロキシル残基の代わりにアミノ基を含有 する。ヌクレオチドＴ−Ｙは、５−（Ｎ−［Ｎ−１Ｎ−リガンド−５−アミノヘ キサノイル）−４−アミノブタノイル］−３−アミノアリル）−２′−デオキシ ウリジン残基である。ヌクレオチドＡ−Ｙは、８−　［Ｎ−ＣＮ−リガンド−５ −アミノヘキサノイルコー８−アミノヘキシルアミノ］−２′−デオキシアデノ シン残基である。

５Ｖ−４０配列に対するリガンドを図１６に示す。癌、感染性疾患および心血管 疾患の治療のための治療用一本鎖ＤＮＡを特定の細胞、ついで該標的細胞の核酸 する。細胞質内での還元の結果、−零値ＤＮＡおよび細胞膜リガンドの両方が二 本鎖ＤＮＡベクターから別々の分子として解離するように、最初の鋳型は、ジチ オ橋により５’　（３’）→３°（５゛）に結合した２つの異なる一本鎖ＤＮＡ を含有するであろう。細胞質中に複合体が存在する場合に細胞ターゲティングリ ガンドが放出されるように、細胞膜リガンドに対するスペーサーもジチオ残基を 含有している。オリゴヌクレオチドは通常の固相合成によりｖＲ製する。５゛お よび３゜ヌクレオチドは、それぞれ該末端ヌクレオチドの５′および３°ヒドロ キシル残基の代わりにアミン基を含有する。図１７は、Ｃ−ｍｙｃプロモーター についての例を示す。

図１７において、デオキシオリゴヌクレオチド鎖は、固相シアノエチルホスホル アミデート法を用いた自動ＤＮＡ合成機上で合成する。市販の試薬を用いて３゜ 末端チオールを生成させ、脱ブロックおよび支持体からオリゴヌクレオチドを放 出させた後、この３°末端チオールを、さらに反応したＡと反応させる（実施例 １参照）。ペプチド支持体から放出させた保護ペプチドＮ−スクシニル−Ｐｅｐ ５　Ｃ０ＮＨｚ（２ミリモル）を乾燥ＤＭＦ　（２ｍＬ）中に溶解し、１−エチ ル−３−［３−（ジメチルアミノ）プロピル）カルボジイミド（４，０ミリモル ）を加える。２時間撹拌し、ついでＮ−−ヒドロキシスクシンイミド（２，１ミ リモル）を加える。室温でさらに６時間撹拌した後、ついで固体支持体上の５− （Ｎ−［Ｎ−（Ｎ−リガンド−５−アミノヘキサノイル）−４−アミノブタノイ ル］−３−アミノアリル）−２°〜デオキシウリジン残基の脱保護した側鎖アミ ノ基とカップリングさせる。このヌクレオチドを市販のユニーリンクアミノモデ ィファイア−（Ｕｎｉ−Ｌｉｎｋ　Ａ＋ｌｉｎｏＭｏｄｉｆｉｅｒ）　（クロー ンチック）で末端処理する（ｔｅｒｍｉｎａｔｅｄ）。置換したオリゴヌクレオ チドを支持体から開裂する前に、末端Ｆｍｏｃアミノ保護基を除去し、６．９− ジクロロ−２−メトキシアクリジンと反応させることができる。

−Ｈ２Ｎ−ｃＨ２ＣＨｒ＆ｓ心）＋２ｃＨｒＮ）％、１．ＯｕｌしＥＯＣ↓ ◆　ジチオスレート−Ｊし ↓ −２ｚ−ジケにジピリジン ↓ Ｆｉｇｕｒａ　１ ↓ −　ジ邊ジしくレイト−ＩＶ ↓ ・　２２−ジ千万う二ピリうグ／ ↓ Ｆｉｇｕｒｅ　２ ↓ ◆　ジチオ人レイト−Ｉし ↓ ・　υ−５：＋／ｉリピソジン ↓ ↓ ＮＨ３゜ ＸＶ　ＸＩＸ　ＸＩＸｈ ＦＩＧＵＲＥ６ ＸＬｆＶ　Ｌ　ＸＬＶＩｒｌｈ ＸＸＩＸａ ＸＬＩ　−ＸＸＸＩＸｂ ＸＸＸＩＸ： ＦＩＧＵＲＥ７ ＬＸＸＩ　ＬＶ ＦＴＧＵＲＥ８ ＦＩＧＵＲＥ　１１ ＠＠／ｆ；’７１：、　：　ＣＸＸ１１ａ、ＣＸＸ１１ｂ、ＣＸＸ１１ｃＦＩＧ ＵＲＥ１２ ｒａａ合Ｋ　：　ｃｘｘｖｏａ、　ｃｘｘｖｏｂ、αＸＶｌｌｃ、　ＣＸＸＸ１ １ｈＦＩＧＵｆ已１３ ＦＩＧＵＲＥ　１４ ＦＩＧＵＲＥ１５Ａ ＢＢ Ｆｉｇｕｒｅ　１５Ｂ （式：中、艮１、隨お１び゛に３叶ま良（才他乃１換表）ＦＩＧＵＲＥ　１６ ＦＩＧＵＲＥ　１７ ｇｌｙ−ｔｙｒ−ｓｅｒ−ｔｈｒ−ｐｒｏ−ｐｒｏ−１ｙｅ−ｔｈｒ−ａｒｇ− ａｒｇ−紅ｑ−ｐｒ。

＆ｒｑ−Ａｙ虐−Ｌｙトａｒｇ−ｇｌｙ−ｐｒｏ−ｔｈｒ−虐ｏｒ−ｔｙｒ−９ １２Ｇ“　ソＦ酸　（１）う　。

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Ｐ叩１５ Ｐｈｅ−Ｎ鴇 ｅｐ　１６ Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−８ｅｒ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ− Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ａｓｐ|Ｔｈｒ−Ｌｅｕ− ＧＩｎ− Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｃｙａ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ− Ｐｈｅ−８ｅｒ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＡＪａ−８ｅｒ−Ａｒｇ|Ｖａｌ−８ｅｒ− Ａｒｇ− Ａｒｇ−８ｅｒ−Ａｒｇ−ＧＩｙ−ＩＩｓ−Ｖａｌ−ＧＩｕ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ− Ｃｙｇ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−８ｅｒ−（ニアｓ−Ａｓｐ−Ｌａ普|ｅ−Ｘ−Ｌｙｓ −Ａｒｇ− Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−ＴｙＫ江−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ａｒｇ −８ｅｒ−ＧｌｕＦｉｇｕｒｅ　２０ ｅｐ　１７ Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｉｎ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ− んａ−Ｌｅｕ−ＨｉｓＦ−地 Ｐ＠Ｐ　２０ Ｆｉ９ｕｉ？・２３ Ｐ・ｐ２１ Ｃｙｓ−５＠ｒ−Ｃｙｓ−８ｅｒ−５＊ｒ−Ｌ働ｕ−Ｍｔ−人５ｐ−Ｌｙｅ−Ｇ ｌｕ−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｐｈ＊−Ｃｙｓ−Ｈｌｓ−kａｕ−Ａｓｐ− 工１ｓ−Ｉｌｌ−Ｔｒｐ Ｐ＠Ｐ２２ ＨｏｏＣＣＨ，（コＬ、Ｃ０ＮＨ−＾５ｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−人Ｌｍ−Ｖａｌ− Ｔｙｒ−Ｐｈ＊−＾１ａ−Ｈｌｓ−Ｌｅｕ−八−ｐ−Ｚｌ＊|１１ｅ−Ｔｒｐ Ｐ＠Ｐ２３ Ｐ＠ｐ２４ Ｐ＠ｐ２ｇ Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ｌａｕ−τｈｒ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｎｅｔ− Ｌ＠ｕ−Ｚ　１ｅ−Ｇ　ｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｌ凾刀|Ｃｙｍ−Ｐｈ ＊− Ｇｌｙ−＾−ｎ−Ｔｈｒ−人１ａ−ＶａｌＦｉｇｕｒ・２３ Ｆｉ磨１２６ 式：中、ｄｉｂ　＝　２．４−ジ丁ミノ西りめ良Ｆｉｇｕｒｅ　２６ ＦＭＯＣ−ｔｙｒ−（ｇ−ＢＯＣ−１ｙｓ）−ａｌａ−（ｇ−ＦＭＯＣ−Ｉｙｓ 易ｔｒｐ−ｇ−ＦＭＯＣ−１ｙｓ−叉せ休↓　ＴＦＡＩ；、Ｆシえ侍体力＼９り 旗ａＦｉｇｕｒｅ　２７ フロントページの続き Ｃｌ２Ｍ　１１００　Ａ　９０５０−４ＢＩ

Claims (111)

【特許請求の範囲】
1. １．複数の第一ＤＮＡ結合性複合体（該複合体は、非共有結合によりＤＮＡに結 合することのできる第一結合性分子を含み、該第一結合性分子は表面リガンドに 結合しており、該リガンドは細胞表面レセプターに結合することができる）；複 数の第二ＤＮＡ結合性複合体（該複合体は、非共有結合によりＤＮＡに結合する ことのできる第二結合性分子を含み、該第二結合性分子は核リガンドに結合して おり、該核リガンドは該トランスポーター系を認識し核膜を通して輸送すること ができる）からなり、複数の該第一および第二のＤＮＡ結合性複合体は該特定Ｄ ＮＡに同時かつ非共有結合により結合することができることを特徴とする、細胞 中へ特定のＤＮＡを挿入するためのＤＮＡトランスポーター系。
2. ２．該第一結合性分子がスペルミン、スペルミン誘導体、ヒストン、カチオン性 ペプチドおよびポリリシンよりなる群から選ばれ、該第二結合性分子がスペルミ ン、スペルミン誘導体、ヒストン、カチオン性ペプチドおよびポリリシンよりな る群から選ばれる、請求項１に記載のトランスポーター。
3. ３．該第一および第二結合性分子が同じ分子であり、スペルミン誘導体である請 求項２に記載のトランスポーター。
4. ４．該表面リガンドが、葉酸レセプター、ビオチンレセプター、リポ酸レセプタ ー、低密度リボタンパク質レセプター、アシアログリコプロテインレセプター、 インシュリン様増殖因子ＩＩ型／カチオン非依存性マンノース６−リン酸レセプ ター、カルシトニン遺伝子関連ペプチドレセプター、インシュリン様増殖因子Ｉ 型レセプター、ニコチン酸アセチルコリンレセプター、肝細胞増殖因子レセプタ ー、エンドセリンレセプターまたは胆汁酸レセプターよりなる群から選ばれたレ セプターに結合する分子である、請求項１に記載のトランスポーター。
5. ５．該表面リガンドがＩｇＧ抗原に結合する分子である請求項１に記載のトラン スポーター。
6. ６．該表面リガンドが、Ｐｅｐ１、Ｐｅｐ２、Ｐｅｐ１２、Ｐｅｐ１３、Ｐｅｐ １４、Ｐｅｐ１５、Ｐｅｐ１６、Ｐｅｐ１７、Ｐｅｐ１８、Ｐｅｐ１９、Ｐｅｐ ２０、Ｐｅｐ２１、Ｐｅｐ２２、Ｐｅｐ２３、Ａ、Ｂ、Ｇ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｊ、Ｍ およびＦａｂ′よりなる群から選ばれた化合物を含む、請求項１に記載のトラン スポーター。
7. ７．該核リガンドが、Ｐｅｐ３、Ｐｅｐ４、Ｐｅｐ５、Ｐｅｐ６、Ｐｅｐ７、Ｐ ｅｐ８、Ｐｅｐ９およびＰｅｐ１０よりなる群から選ばれた分子である、請求項 １に記載のトランスポーター。
8. ８．該表面リガンドおよび該核リガンドがスペーサーによってそれぞれの結合性 分子に結合している、請求項１に記載のトランスポーター。
9. ９．該スペーサーが親水性であり、６〜３０の炭素を有する請求項８に記載のト ランスポーター。
10. １０．該スペーサーが６〜１６の炭素を有する請求項９に記載のトランスポータ ー。
11. １１．該スペーサーが構造：［ＮＨ−（ＣＨ２−ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−］ｍ（式中 、ｎ＝１〜３、ｍ＝１〜２０）の繰り返しω−アミノ酸である請求項９に記載の トランスポーター。
12. １２．該スペーサーが構造：（ＣＨ２ＣＨ２−Ｓ−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ２−）ｎを有 するジスルフィドである請求項９に記載のトランスポーター。
13. １３．該スペーサーが、構造： ▲数式、化学式、表等があります▼ を有する酸感受性の２官能性分子である請求項１９に記載のトランスポーター。
14. １４．さらに複数の第三ＤＮＡ結合性複合体を含み、該複合体は非共有結合によ りＤＮＡに結合することのできる第三結合性分子を含み、該第三結合性分子はウ ィルスまたは溶解性ペプチドに結合しており、複数の該第三ＤＮＡ結合性復合体 は該特定ＤＮＡに同時かつ非共有結合により結合することができる、請求項１に 記載のトランスポーター。
15. １５．該第三結合性分子がスペルミン、スペルミン誘導体、ヒストン、カチオン 性ポリペプチドおよびポリリシンよりなる群から選ばれる、請求項１４に記載の トランスポーター。
16. １６．該第三結合性分子がスペルミン誘導体である請求項１４に記載のトランス ポーター。
17. １７．該表面リガンドが、葉酸レセプター、ビオチンレセプター、リポ酸レセプ ター、低密度リボタンパク質レセプターおよびアシアログリコプロテインレセプ ター、インシュリン様増殖因子ＩＩ型／カチオン非依存性マンノース６−リン酸 レセプター、カルシトニン遺伝子関連ペプチドレセプター、インシュリン様増殖 因子Ｉ型レセプター、ニコチン酸アセチルコリンレセプター、肝細胞増殖因子レ セプター、エンドセリンレセプターまたは胆汁酸レセプターよりなる群から選ば れたレセプターに結合する分子である、請求項１４に記載のトランスポーター。
18. １８．該表面リガンドがＩｇＧ抗原に結合する分子である請求項１に記載のトラ ンスポーター。
19. １９．該表面リガンドが、Ｐｅｐ１、Ｐｅｐ２、Ｐｅｐ１２、Ｐｅｐ１３、Ｐｅ ｐ１４、Ｐｅｐ１５、Ｐｅｐ１６■、Ｐｅｐ１７、Ｐｅｐ１８、Ｐｅｐ１９、Ｐ ｅｐ２０、Ｐｅｐ２１、Ｐｅｐ２２、Ｐｅｐ２３、Ａ、Ｂ、Ｇ、Ｄ、Ｅ、Ｐ、Ｊ 、ＭおよびＦａｂ′よりなる群から選ばれた化合物を含む、請求項１に記載のト ランスポーター。
20. ２０．該核リガンドが、Ｐｅｐ３、Ｐｅｐ４、Ｐｅｐ５、Ｐｅｐ６、Ｐｅｐ７、 Ｐｅｐ８、Ｐｅｐ９およびＰｅｐ１０よりなる群から選ばれた分子である、請求 項１４に記載のトランスポーター。
21. ２１．該ウィルスが、アデノウィルス、パラインフルエンザウィルス、ヘルペス ウィルス、レトロウィルスおよび肝炎ウィルスよりなる群から選ばれたものであ る、請求項１４に記載のトランスポーター。
22. ２２．該溶解性ペプチドが、Ｐｅｐ２４、Ｐｅｐ２５およびＰｅｐ２６よりなる 群から選ばれたものである請求項１４に記載のトランスポーター。
23. ２３．該ウィルスがアデノウィルスである請求項１４に記載のトランスポーター 。
24. ２４．該ウイルスリガンドがスペーサーによって結合性分子に結合している請求 項１４に記載のトランスポーター。
25. ２５．該スペーサーが親水性であり、６〜３０の炭素を有する請求項２４に記載 のトランスポーター。
26. ２６．該スペーサーが６〜１６の炭素を有する請求項２５に記載のトランスポー ター。
27. ２７．該スペーサーが構造：［ＮＨ−（ＣＨ２−ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−］ｍ（式中 、ｎ＝１〜３、ｍ＝１〜２０）の繰り返しω−アミノ酸である請求項２５に記載 のトランスポーター。
28. ２８．該スペーサーが構造：（ＣＨ２ＣＨ２−Ｓ−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ２−）を有す るジスルフィドである請求項２５に記載のトランスポーター。
29. ２９．該スペーサーが、構造： ▲数式、化学式、表等があります▼ を有する酸感受性の２官能性分子である請求項１４に記載のトランスポーター。
30. ３０．該溶解性ペプチドがアデノウィルスである請求項１４に記載のトランスポ ーター。
31. ３１．該溶解性ペプチドリガンドがスペーサーによって結合性分子に結合してい る請求項１４に記載のトランスポーター。
32. ３２．該スペーサーが親水性であり、６〜３０の炭素を有する請求項２４に記載 のトランスポーター。
33. ３３．該スペーサーが６〜１６の炭素を有する請求項２５に記載のトランスポー ター。
34. ３４．該スペーサーが構造：［ＮＨ−（ＣＨ２−ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−］ｍ（式中 、ｎ＝１〜３、ｍ＝１〜２０）の繰り返しω−アミノ酸である請求項２５に記載 のトランスポーター。
35. ３５．該スペーサーが構造：（ＣＨ２ＣＨ２−Ｓ−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ２−）を有す るジスルフィドである請求項２５に記載のトランスポーター。
36. ３６．該スペーサーが、構造： ▲数式、化学式、表等があります▼ を有する酸感受性の２官能性分子である請求項１４に記載のトランスポーター。
37. ３７．複数の第一ＤＮＡ結合性複合体（該複合体は、非共有結合によりＤＮＡに 結合することのできる第一結合性分子を含み、該第一結合性分子は第一のスペー サーに結合しており、該第一のスペーサーはまた表面リガンドに結合しており、 該リガンドは細胞表面レセプターに結合することができる）；複数の第二ＤＮＡ 結合性複合体（該複合体は、非共有結合によりＤＮＡに結合することのできる第 二結合性分子を含み、該第二結合性分子は第二のスペーサーに結合しており、該 第二のスペーサーはまた、該トランスポーター系を認識し核膜を通して輸送する ことができる核リガンドに結合している）；複数の第三ＤＮＡ結合性複合体（該 複合体は非共有結合によりＤＮＡに結合することのできる第三結合性分子を含み 、該第三結合性分子は第三のスペーサーに結合しており、該第三のスペーサーは またウィルスまたは溶解性ペプチドに結合している） からなり、複数の該第一、第二および第三のＤＮＡ結合性複合体は該特定ＤＮＡ に同時かつ非共有結合により結合することができることを特徴とする、細胞中へ 特定のＤＮＡを挿入するためのＤＮＡトランスポーター系。
38. ３８．該第一、第二および第三結合性分子がスペルミン誘導体であり；該表面リ ガンドがアシアログリコプロテインに結合する分子であり；該核リガンドがＰｅ ｐ３、Ｐｅｐ４、Ｐｅｐ５、Ｐｅｐ６、Ｐｅｐ７、Ｐｅｐ８、Ｐｅｐ９およびＰ ｅｐ１０よりなる群から選ばれた分子であり；該ウィルスがアデノウィルスであ り；該第一、第二および第三のスペーサーが親水性であり、６〜１６の炭素を有 する、請求項３７に記載のトランスポーター。
39. ３９．複数の共通のＤＮＡ結合性複合体からなり、該複合体はぞれぞれ非共有結 合によりＤＮＡに結合することのできる結合性分子を含み、該結合性分子は、細 胞表面レセプターに結合することのできる表面リガンドおよび該トランスポータ ー系を認識し核膜を通して輸送することのできる核レセプターの両方に結合して いることを特徴とする、細胞中に特定のＤＮＡを挿入するためのＤＮＡトランス ポーター系。
40. ４０．該表面リガンドおよび核リガンドを結合性分子に連結させるスペーサーを さらに含む、請求項３９に記載のトランスポーター。
41. ４１．該結合性分子に結合したウィルスをさらに含む、請求項３９に記載のトラ ンスポーター。
42. ４２．該ウィルスを結合性分子に連結させるスペーサーをさらに含む、請求項４ １に記載のトランスポーター。
43. ４３．請求項１に記載のＤＮＡトランスポーターに細胞を接触させる工程からな ることを特徴とする、細胞中にＤＮＡを導入する方法。
44. ４４．請求項１に記載のＤＮＡトランスポーターに細胞を接触させる工程からな り、その際、表面レセプターがターゲティングしょうとする細胞に特異的である ことを特徴とする、細胞中へのＤＮＡの挿入をインビボターゲティングする方法 。
45. ４５．生物体中の細胞に治療学的投与量の請求項１に記載のＤＮＡトランスポー ターを接触させる工程からなり、その際、特定ＤＮＡが疾患を治療するための分 子を含むことを特徴とする、疾患の予防または治療方法。
46. ４６．該生物体がヒトである請求項４５に記載の方法。
47. ４７．該生物体が動物である請求項４５に記載の方法。
48. ４８．動物中の細胞に請求項１に記載のＤＮＡトランスポーターを接触させる工 程からなり、その際、特定ＤＮＡが該動物を修飾する配列を含むことを特徴とす る、動物を修飾する方法。
49. ４９．Ｘａ、Ｘｂ、Ｘｃ、ＸＩａ、ＸＩｂ、ＸＩｃ、ＸＸＸＩＸａ、ＸＸＸＩＸ ｂ、ＸＸＸＩＸｃ、ＬＩＸａ、ＬＩＸｂ、ＬＩＸｃ、ＬＸＸＸＶＩＩａ、ＬＸＸ ＸＶＩＩｂおよびＬＸＸＸＶＩＩｃよりなる群から選ばれた化合物。
50. ５０．ＸＩＩＩｄ、ＸＩＩＩえ、ＸＬＩＩｄ、ＸＬＩＩｅ、ＬＸＩＩｄ、ＬＸＩ Ｉｅ、ＸＩＩＩｄ、およびＸＣＩｅよりなる群から選ばれた化合物。
51. ５１．ＸＩＩＩｆ、ＸＬＩＩｆ、ＬＸＩＩｆおよびＸＣＩｆよりなる群から選ば れた化合物。
52. ５２．ＸＶＩＩｇ、ＸＬＶＩｇ、ＬＸＶＩｇおよびＸＣＶｇよりなる群から選ば れた化合物。
53. ５３．ＸＸＩＸｇ、ＬＸＸＶＩＩＩｇおよびＣＶＩｇよりなる群から選ばれた化 合物。
54. ５４．ＸＸＶＩＩｈ、ＬＸＸＶＩｈおよびＣＩＶｈよりなる群から選ばれた化合 物。
55. ５５．ＸＸＩＩｉ、ＸＸＩＩｊ、ＸＸＩＩｋ、ＸＸＩＩｌ、ＬＩｉ、ＬＩｊ、Ｌ ＩＫ、ＬＩｌ、ＬＸＸＩい、ＬＸＸＩｊ、ＬＸＸＸＩｋ、ＬＸＸＩｌ、ＸＣＸｉ 、ＸＣＸｊ、ＸＣＸｋおよびＸＣＸ１よりなる群から選ばれた化合物。
56. ５６．ＸＩＸｈ、ＸＬＶＩＩＩｈ、ＬＸＶＩＩｈおよびＸＣＶＩＩｈよりなる群 から選ばれた化合物。
57. ５７．ＸＸＸｉ、ＸＸＸｊ、ＸＸＸｋ、ＸＸＸｉ、ＸＸＸＩｉ、ＸＸＸＩｊ、Ｘ ＸＸＩｋ、ＸＸＸＩｌ、ＬＸＸＩＸｉ、ＬＸＸＩＸｊ、ＬＸＸＩＸｋ、ＬＸＸＩ Ｘｌ、ＬＸＸＸｉ、ＬＸＸＸｊ、ＬＸＸＸｋ、ＬＸＸＸｌ、ＣＶＩＩｉ、ＣＶＩ Ｉｊ、ＣＶＩＩｋ、ＣＶＩＩｌ、ＣＶＩＩＩｉ、ＣＶＩＩＩｊ、ＣＶＩＩＩｋお よびＣＶＩＩＩＩよりなる群から選ばれた化合物。
58. ５８．Ａ、Ａ′、Ｂ、Ｂ′、Ｇ、Ｇ′およびＭよりなる群から選ばれた化合物。
59. ５９．Ｆの構造を有する化合物。
60. ６０．構造Ｅを有する化合物。
61. ６１．構造Ｄを有する化合物。
62. ６２．ＣＸＬＩｉ、ＣＸＬＩｊ、ＣＸＬＩｋ、ＣＸＬＩｌ、ＣＸＬＩＩｉ、ＣＸ ＬＩＩｊ、ＣＸＬＩＩｋおよびＣＸＬＩＩＩよりなる群から選ばれた化合物。
63. ６３．構造ＣＸＬＩＩＩを有する化合物。
64. ６４．ＸＶＩＩＩ、ＸＬＶＩＩ、ＬＸＶＩＩ、ＸＣＶＩおよびＣＸＩＩＩよりな る群から選ばれた化合物。
65. ６５．構造ＣＸＩＸを有する化合物。
66. ６６．ＣＸＬａｋ、ＣＸＬｂｋおよびＣＸＬｃｋよりなる群から選ばれた化合物 。
67. ６７．ＣＸＬｄｋおよびＣＸＬｅｋよりなる群から選ばれた化合物。
68. ６８．構造ＣＸＬｇｋを有する化合物。
69. ６９．構造ＣＸＬｈｋを有する化合物。
70. ７０．構造ＣＸＬｆｋを有する化合物。
71. ７１．ＣＸＶＩＩａ、ＣＸＶＩＩｂ、ＣＸＶＩＩｃ、ＣＸＸＩＩａ、ＣＸＸＩＩ ｂおよびＣＸＸＩＩｃよりなる群から選ばれた化合物。
72. ７２．構造ＣＸＸｇまたはＣＸＸＶｇを有する化合物。
73. ７３．構造ＣＸＸｈまたはＣＸＸＶｈを有する化合物。
74. ７４．ＣＸＸＩｄ、ＣＸＸＩｅ、ＣＸＸＶＩｄ、およびＣＸＸＶＩｅよりなる群 がら選ばれた化合物。
75. ７５．構造ＣＸＸＩｆまたはＣＸＸＶＩｆを有する化合物。
76. ７６．ＸＸＶＩｄ、ＸＸＶＩｅ、ＬＸＸＶｄ、ＬＸＸＶｅ、ＣＩＩＩｄおよびＣ ＩＩＩｅよりなる群から選ばれた化合物。
77. ７７．ＸＸＶＩｆ、ＬＸＸＶｆおよびＣＩＩＩｆよりなる群から選ばれた化合物 。
78. ７８．ＸＶＩ、ＬＸＶ、ＸＣＩＶおよびＣＸＶＩよりなる群から選ばれた化合物 。
79. ７９．ＩＶ、ＸＸＸＩＩＩ、ＸＩ、ＸＩＩ、ＸＬ、ＸＬＩ、ＬＸ、ＬＸＩ、ＬＸ ＸＸＶＩＩＩおよびＣＸよりなる群から選ばれた化合物。
80. ８０．ＸＶ、ＬＸＩＶ、ＸＣＩＩＩ、ＸＬＶおよびＣＸＩＶよりなる群から選ば れた化合物。
81. ８１．ＸＸＩＩＩａ、ＸＸＩＩＩｂ、ＸＸＩＩＩｃ、ＬＸＸＩＩａ、ＬＸＸＩＩ ｂ、ＬＸＸＩＩｃ、ＣＩａ、ＣＩｂおよびＣＩｃよりなる群から選ぼれた化合物 。
82. ８２．ＸＸＩＶ、ＸＸＶ、ＬＸＸＩＩＩ、ＬＸＸＩＶおよびＣＩＩよりなる群か ら選ばれた化合物。
83. ８３．ＶＩＩおよびＸＸＸＶＩよりなる群から選ばれた化合物。
84. ８４．ＸＸＶＩＩＩ、ＬＸＸＶＩＩおよびＣＶよりなる群から選ばれた化合物。
85. ８５．ＬＩＶ、ＬＶＩ、ＬＸＸＸＩＩ、ＬＸＸＸＩＶおよびＣＸよりなる群から 選ばれた化合物。
86. ８６．ＸＸＩ、Ｌ、ＬＸＸおよびＸＣＩＸよりなる群から選ばれた化合物。
87. ８７．ＣＸＸＶＩＩａ、ＣＸＸＶＩＩｂ、ＣＸＸＶＩＩｃ、ＣＸＸＸＩＶａ、Ｃ ＸＸＸＩＶｂおよびＣＸＸＸＩＶｃよりなる群から選ばれた化合物。
88. ８８．ＣＸＸＸＩｄ、ＣＸＸＸＩｅ、ＣＸＸＸＶＩＩｄおよびＣＸＸＸＶＩＩｅ よりなる群から選ばれた化合物。
89. ８９．ＣＸＸＸＩｆおよびＣＸＸＸＶＩＩｆよりなる群から選ばれた化合物。
90. ９０．ＣＸＸＸＩＸｇおよびＣＸＸＸＩＩＩｇよりなる群から選ばれた化合物。
91. ９１．ＣＸＸＸＩＩｈおよびＣＸＸＸＶＩＩＩｈよりなる群から選ばれた化合物 。
92. ９２．構造ＣＸＸＸを有する化合物。
93. ９３．構造ＣＸＸＩＸを有する化合物。
94. ９４．複数の該第一ＤＮＡ結合性複合体が、Ｘａ、Ｘｂ、Ｘｃ、ＸＩａ、ＸＩｂ 、ＸＩｃ、ＸＸＸＩＸａ、ＸＸＸＩＸｂ、ＸＸＸＩＸｃ、ＬＩＸａ、ＬＩＸｂ、 ＬＩＸｃ、ＬＸＸＸＶＩＩａ、ＬＸＸＸＶＩＩｂ、ＬＸＸＸＶＩＩｃ、ＸＩＩＩ ｄ、ＸＩＩＩｅ、ＸＬＩＩｄ、ＸＬＩＩｅ、ＬＸＩＩｄ、ＬＸＩＩｅ、ＸＣＩｄ 、ＸＣＩｅ、ＸＶＩＩｇ、ＸＬＶＩｇ、ＬＸＶＩｇ、ＸＣＶｇ、ＸＸＩＸｇ、Ｌ ＸＸＶＩＩＩｇ、ＣＶＩｇ、ＸＸＶＩＩｈ、ＬＸＸＶＩｈ、ＣＩＶｈ、ＸＩＸｈ 、ＸＬＶＩＩＩｈ、ＬＸＶＩＩｈ、ＸＣＶＩＩｈ、ＣＸＬａｋ、ＣＸＬｂｋ、Ｃ ＸＬｃｋ、ＣＸＬｄｋ、ＣＸＬｅｋ、ＣＸＬｇｋ、ＣＸＬｈｋ、ＣＸＬｆｋ、Ｘ ＸＶＩｄ、ＸＸＶＩｅ、ＬＸＸＶｄ、ＬＸＸＶｅ、ＣＩＩＩｄ、ＣＩＩＩｅ、Ｘ ＸＩＩＩａ、ＸＸＩＩＩｂ、ＸＸＩＩＩｃ、ＬＸＸＩＩａ、ＬＸＸＩＩｂ、ＬＸ ＸＩＩｃ、ＣＩａ、ＣＩｂ、ＣＩｃおよびこれらの組み合わせよりなる群から選 ばれたものである、請求項１に記載のトランスポーター。
95. ９５．複数の第二ＤＮＡ結合性複合体が、ＸＸＩＩｉ、ＸＸＩＩｊ、ＸＸＩＩｋ 、ＸＸＩＩｌ、ＬＩｉ、ＬＩｊ、ＬＩｋ、ＬＩｌ、ＬＸＸＩｉ、ＬＸＸＩｊ、Ｌ ＸＸＩｋ、ＬＸＸＩｌ、ＸＣＸｉ、ＸＣＸｊ、ＸＣＸｋ、ＸＣＸｌ、ＸＸＸｉ、 ＸＸＸｊ、ＸＸＸｋ、ＸＸＸｌ、ＸＸＸＩｉ、ＸＸＸＩｊ、ＸＸＸＩｋ、ＸＸＸ Ｉｌ、ＬＸＸＩＸｉ、ＬＸＸＩＸｊ、ＬＸＸＩＸｋ、ＬＸＸＩＸｌ、ＬＸＸＸｉ 、ＬＸＸＸｊ、ＬＸＸＸｋ、ＬＸＸＸｌ、ＣＶＩＩｉ、ＣＶＩＩｊ、ＣＶＩＩｋ 、ＣＶＩＩｌ、ＣＶＩＩＩｉ、ＣＶＩＩＩｊ、ＣＶＩＩＩｋ、ＣＶＩＩＩｌ、Ｃ ＸＬＩｉ、ＣＸＬＩｊ、ＣＸＬＩｋ、ＣＸＬＩｌ、ＣＸＬＩＩｉ、ＣＸＬＩＩｊ 、ＣＸＬＩＩｋ、ＣＸＬＩＩｌおよびこれらの組み合わせよりなる群から選ばれ たものである、請求項１に記載のトランスポーター。
96. ９６．複数の該第三ＤＮＡ結合性複合体が、ＸＩＩＩｆ、ＸＬＩＩｆ、ＬＸＩＩ ｆ、ＸＣＩｆ、ＣＸＸＩｆ、ＣＸＸＶＩｆ、ＸＸＶＩｆ、ＬＸＸＶｆ、ＣＩＩＩ ｆおよびこれらの組み合わせよりなる群から選ばれたものである、請求項１４に 記載のトランスポーター。
97. ９７．該第一および第二結合性分子が、ＩＶ、ＸＸＸＩＩＩ、ＸＩ、ＸＩＩ、Ｘ Ｌ、ＸＬＩ、ＬＸ、ＬＸＩ、ＬＸＸＸＶＩＩＩ、ＣＸ、ＸＸＩＶ、ＸＸＶ、ＬＸ ＸＩＩＩ、ＬＸＸＩＶ、ＣＩＩおよびこれらの組み合わせよりなる群から選ばれ たものである、請求項２に記載のトランスポーター。
98. ９８．複数の共通のＤＮＡ複合体が、ＣＸＶＩＩａ、ＣＸＶＩＩｂ、ＣＸＶＩＩ ｃ、ＣＸＸＩＩａ、ＣＸＸＩＩｂ、ＣＸＸＩＩｃ、ＣＸＸｇ、ＣＸＸＶｇ、ＣＸ Ｘｈ、ＣＸＸＶｈ、ＣＸＸＩｄ、ＣＸＸＩｅ、ＣＸＸＶＩｄ、ＣＸＸＶＩｅ、Ｃ ＸＸＶＩＩａ、ＣＸＸＶＩＩｂ、ＣＸＸＶＩＩｃ、ＣＸＸＸＩＶａ、ＣＸＸＸＩ Ｖｂ、ＣＸＸＸＩＶｃ、ＣＸＸＸＩｄ、ＣＸＸＸＩｅ、ＣＸＸＸＶＩＩｄ、ＣＸ ＸＸＶＩＩｅ、ＣＸＸＸＩｆ、ＣＸＸＸＶＩＩｆ、ＣＸＸＸＩＸｇ、ＣＸＸＸＩ ＩＩｇ、ＣＸＸＸＩＩｈ、ＣＸＸＸＶＩＩＩｈおよびこれらの組み合わせよりな る群から選ばれたものである、請求項３９に記載のトランスポーター。
99. ９９．Ｐの構造を有する化合物。
100. １００．Ｊの構造を有する化合物。
101. １０１．Ｑの構造を有する化合物。
102. １０２．図１５Ｂに示す構造を有する化合物。
103. １０３．図１５Ｃに示す構造を有する化合物。
104. １０４．図１５Ｄに示す構造を有する化合物。
105. １０５．図２２に示す構造を有する化合物。
106. １０６．図２４に示す構造を有する化合物。
107. １０７．４、１０、１１、１２、１３、１４、１５および１６よりなる群から選 ばれた構造を有する化合物。
108. １０８．１７、１８、１９および２０よりなる群から選ばれた構造を有する化合 物。
109. １０９．６、２１、２２、２３および２４よりなる群から選ばれた構造を有する 化合物。
110. １１０．２５、２６および２７よりなる群から選ばれた構造を有する化合物。
111. １１１．２８、２９および３０よりなる群から選ばれた構造を有する化合物。