JPH07502749A - Ｒｎａを調節するための組成物と方法 - Google Patents

Ｒｎａを調節するための組成物と方法

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JPH07502749A
JPH07502749A JP5515946A JP51594693A JPH07502749A JP H07502749 A JPH07502749 A JP H07502749A JP 5515946 A JP5515946 A JP 5515946A JP 51594693 A JP51594693 A JP 51594693A JP H07502749 A JPH07502749 A JP H07502749A
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クック，フィリップ・ダン
ブルース，トーマス
グイノッソ，チャールズ・ジョン
カワサキ，アンドリュー・マモル
グリフェイ，リチャード
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アイシス・ファーマシューティカルス・インコーポレーテッド
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ＲＮＡを皿部するための組１戊物上刀拮貞連黒願 本出願は、１９９０年１月１１日出願の出願第４６３．３５８号と１９９０年８ 月１３日出願の出願第５６６．９７７号との一部継続である、１９９１年１月１ １日出願の出願第ｔＪｓ９１１００２４３号の一部継続である、１９９２年３月 ５日出願の出願第８４６．５５６号の一部継続である、１９９２年９月１０日出 願の出願第９４２．９６１号の一部継続である。これらの出願は本発明の譲受は 人に譲渡される。各出願の全開示はここに参考文献として関係する。
ｇ明ｍ分野 本発明はＲＮＡの活性を検出し、調節する物質と方法とに関する。本発明は一般 に、ＲＮＡのヌクレオチド配列と共に特定のハイブリッドを形成することができ る“アンチセンス（ａｎｔｉｓｃｎｓｅ）”化合物の分野に関する。好ましい実 施態様によると、本発明はオリゴヌクレオチドの設計、合成及び用途に関し、疾 患の治療的処置を達成する方法、実験系における遺伝子表現の調節、ＲＮＡとＲ ＮＡ産物との、このようなＲＮＡとのアンチセンス相互作用を利用した分析、疾 患の診断、及び部位特異的やり方でのＲＮＡの開裂に関する。
余咀Ω背量 大抵の疾患症状を含めた、哺乳動物における身体状態の大部分がタンパク質によ って惹起されることは周知である。直接に又はそれらの酵素機能若しくはその他 の機能を介して作用する、このようなタンパク質か動物とヒトとにおける多くの 疾患に大きな割合で寄与する。古典的な治療法は一般にタンパク質の疾患誘発機 能又は疾患増長機能を調節しようと努力して、このようなタンパク質との相互作 用に重点を置いていた。しかし、最近では、このようなタンパク質の合成をコー ドする細胞内ＲＮＡ分子との相互作用によって、このようなタンパク質の実際の 産生を調節することが試みられてきた。タンパク質の産生を妨害することによっ て、最大の効果かつ最小の副作用で治療成果を挙げることが望まれていた。好ま しくないタンパク質形成を生ずる遺伝子表現を妨害するか又は他のやり方で調節 することが、このような治療アプローチの一般的な目的である。
特定の遺伝子表現を妨害する１方法は″アンチセンス”剤としてのオリゴヌクレ オチドの使用である。特定のターゲットメツセンジャーＲＮＡ　（ｍＲＮＡ）配 列に相補的なオリゴヌクレオチドが用いられる。数人の研究者がこのような試み を報告している。適切な概論としては、スティン（Ｓｔｅｉｎ）等、Ｃａｎｃｅ ｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　１９８８゜４８．２６５９＋ワルダー（Ｗａｌｄｅｒ） 、　Ｇ　ｅ　ｎ　ｅ　ｓ＆　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　１９８８．２．５０２； ７−カスーセクラ（Ｍａｒｃｕｓ−５ｅｋｕｒａ）、Ａｎａｌ、Ｂｉｏｃｈｅｍ ｉｓｔｒｙ　１９Ｂ８．１７２．２８９、シン（Ｚｏｎ）、Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏ ｒ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ１９８７．６．　１３１＋シン、Ｐｈ ａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　１９８８．５．５３９；ファン 　デル　クロール（Ｖａｎ　ｄｅｒ　Ｋｒｏｌ）等、Ｂｉ。
ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　１９８８．６．９５８；及びルーズーミッチェル（Ｌｏ ｏｓｅ−１ｌｉｔｃｂｅｌｌ）、ＴＴＰ３　１９８８．　９．　４５が挙げられ る。上記文献の各々は一般的アンチセンス論及び先行技術に関する背景を形成す る。
従って、アンチセンス方法論は、一本箱ｍＤＮＡ又は一本鎖ＤＮへに対する、こ れらの細胞内核酸の通常の本質的な機能が破壊されるような、比較的短いオリゴ ヌクレオチドの相補的ハイブリット形成に関するものであった。ハイブリッド形 成はＲＮＡ又は一本鎖ＤＮへへのワトソンークリック（ｆａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃ ｋ）塩基対を介したオリゴヌクレオチドの配列特異的水素結合である。このよう な塩基対の塩基は相互に相補的であると言われる。
アンチセンス療法の先行技術の試みは、ハイブリッド形成によって特定のｍＲＮ Ａに特異的に結合するように設計されたくすなわち、特異的にハイブリッド形成 することができる）オリゴヌクレオチドを提供している。このような類似体は幾 つかの機構のいずれかによって特定のｍＲＮＡの活性を阻害するように（例えば 、ｍＲＮＡによってコートされるタンパク質を産生ずる翻訳反応を妨害するよう に）意図される。ｍＲＮＡ配列によってコードされる特定タンパク質の形成を阻 害することによって治療効果を挙げることが望まれてきた。
アンチセンスオリゴヌクレオチド中に、それらの治療活性を高めるために、幾つ かの化学的修飾が導入されている。このような修飾は、アンチセンスオリゴヌク レオチドの細胞浸透を強化し、体内におけるオリゴヌクレオチドの構造又は活性 を分解又は妨害するヌクレアーゼその他の酵素からアンチセンスオリゴヌクレオ チドを安定化させ、ターゲットＲＮＡへのアンチセンスオリゴヌクレオチドの結 合を強化し、ターゲットＲＮＡに一度配列特異的に結合したアンチセンスオリゴ ヌクレオチドに分裂モード（停止イベント）を与え、アンチセンスオリゴヌクレ オチドの薬物動態的性質を改良するように意図される。しかし、現在、−膜化さ れたアンチセンスオリゴヌクレオチドの治療的又は診断的スキーム（ｓｃｈｅｍ ｅ）は発見されていない。先行技術の試みの最も重大な欠陥は、−ｆ適当なハイ ブリッド形成が行われた後の停止イベントの完全な欠落又は、オリゴヌクレオチ ドが有効な濃度で細胞中に取り込まれることができないために有用な効力が得ら れないほど不充分である停止イベントの発生であった。現在利用可能な、アンチ センスオリゴヌクレオチドの活性は実際的な意味での有効な治療的、研究用試薬 、又は診断的使用のために充分ではない。従って、有効に治療的又は診断的にア ンチセンス使用することができるオリゴヌクレオチドが依然として切望されてい る。
この切望（ｌｏｎｇ−ｆｅｌｔ　ｎｅｅｄ）はアンチセンスオリゴヌクレオチド 療法及び診断法の分野では先行技術の研究によってまだ満たされていない。他の 研究は、妥当な濃度で直ちに治療的又は診断的に有効である物質を提供すること ができていない。
最初は、２つの機構又は停止イベントのみが治療法に対するアンチセンスアプロ ーチで作用すると考えられた。これらは°ハイブリッド形成阻止”機構（すなわ ち、アンチセンスハイブリッド形成を介した翻訳の阻止）と、細胞酵素リボヌク レアーゼＨ（ＲＮアーゼＨ）によるハイブリッド化（ｈｙｂｒｉｄｉｚｅｄ）　 ＲＮ　Ａの開裂である。しかし、付加的な“自然（ｎａｔｕｒａｌ）”イベント がターゲットＲＮＡの分裂に関係すると考えられる。アンチセンス診断法及び治 療法に用いるためのオリゴヌクレオチドの効力を高めようと試みて、他の停止イ ベントも研究されている。
このようにして、一般にペンダント基と呼ばれる、オリゴヌクレオチドの第２ド メインを導入する研究分野が発展している。
このペンダント基はｍＲＮＡによるオリゴヌクレオチドの特異的ワトソンークリ ソクハイブリッド形成に関係しないが、オリゴヌクレオチドによって有されて、 反応性官能基として役立つ。ペンダント基はｍＲＮＡのタンパク質への翻訳ヲヨ り効果的に阻害するために何らかの方法でｍＲＮＡと相互作用するように意図さ れる。このようなペンダント基は一本鎖又は二本鎖ＤＮＡをターゲットとする分 子にも結合されている。
インターカレーティノブ剤（ｉｎｔｃｒｃａｌａｔｉｎｇ　ａｇｅｎｔ）として 知られるペンダント基の種類はカゼネーブ（Ｃａｚｅｎａｖｅ）等、Ｎｕｃｅｉ ｃ　Ａｃ１ｄ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　１９８７．１５．４７１７：及びコンスタン ト（Ｃｏｎｓｔａｎｔ）等、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　１９８８．２７．３９ ９７によって開示されている。このようなインターカレーティング剤の開示され た目的はオリゴヌクレオチドとターゲット核酸との間に形成される二重構造（ｄ ｕｐｌｅス）への結合によってこれらの間に形成されるハイブリッドに結合安定 性を与えることである。
オリゴヌクレオチドに架橋可能なペンダント基を与えることも開示されている。
このようにして、例えばブソラレン（ｐｓｏｒａｌｅｎ）のような、ペンダント 剤はエウング（Ｙｅｕｎｇ）等、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　１９８８．２７． ２３０４によって開示されている。ターゲットｍＲＮＡへのオリゴヌクレオチド のハイブリッド形成後に、ブソラレンは光活性化されて、ｍＲＮＡと架橋して、 オリゴヌクレオチドとｍＲＮＡとの間に共有結合を形成し、それによってｍＲＮ Ａ分子を永久的に不活化して、ＲＮＡのその特定部分によってコードされるタン パク質がさらに形成されることを阻止する。
マイヤー（Ｍｅｙｅｒ）、Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、１９８９．１１１．８ ５１７及びノッレ（Ｋｎｏｒｒｅ）とヴラソソフ（Ｖｌａｓｓｏｖ）、Ｐ　ｒ　 ｏ　ｇ　ｒ　ｅ　ｓ　ｓ　ｉ　ｎ　Ｎ　ｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄ　Ｒｅ５ｅａｒ ｃｈ　ａｎｄ　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　１９８５．３２．２９１ に開示されているように、診断法及び治療法へのアンチセンスアプローチに用い るためのオリゴヌクレオチドのペンダント基として、架橋性アルキル化剤を用い ることも提案されている。
アンチセンスアプローチにおいてオリゴヌクレオチドのペンダント基としてアル キル化剤を用いる目的は、このアルキル化剤を標的ｍＲＮＡと不可逆的に反応さ せることである。アンチセンスオリゴヌクレオチドとｍＲＮＡとの間のこのよう な不可逆的な結合は一般に共有結合であり、ｍＲＮＡの永久的な不活化と、この ように不活化されたｍＲＮＡ部分からのタンパク質産生を同時に停止させる。
提案されている他の方法（ｓｔｒａｔｅｇｙ）は、選択された条件下で、ターゲ ット核酸を開裂させるか又は他のやり方で不活化させる標的核酸との反応のため のラジカル種を発生させることができる化学試薬を用いることである。この方法 の提案ペンダント基は結合リガンドを有する金属イオンを含む配位錯体を包含す る。金属イオンは酸化状態を変えて、反応性酸素含有ラジカルイオン又は他のラ ジカル種を発生させることができる。ドアン（Ｄｏａｎ）等のＮｕｃｌｅｉｃ　 Ａｃ１ｄ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　１９８７．１５．８６４３は、この目的のための 鉄／ＥＤＴＡ種及び鉄／ポルフィリン種を開示している。銅／フェナントロリン 錯体はジグマン（Ｓｉｇｍａａ）、Ａｃｃｏｕｎｔｓ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ 　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　１９８６．１９．１８０によって開示されている。ドレイ ヤー（Ｄｒｅｙｅｒ）等、Ｐｒ。
ｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆＳ ｃｉｅｎｃｅｓ、Ｕ、Ｓ、Ａ、　１９Ｂ５．８２．９６８は、核酸を開裂させる ためのＥＤＴＡ／Ｆｅ部分を研究している。
アンチセンス診断法及び治療法のためのオリゴヌクレオチドのペンダント基とし て架橋剤、アルキル化剤及びラジカル発生種を用いる先行技術アプローチは幾つ かの重要な欠点を有する。オリゴヌクレオチドへのペンダント基の結合部位は、 治療法と診断法のためのオリゴヌクレオチドの有効性に重要ではあるが、まだ完 全には知られてはいない役割を果たす。先行技術の研究者は大抵のペンダント基 をリン原子に結合するものとして述べており、これは、上述したように、劣った ハイブリッド形成性を有するオリゴヌクレオチドを形成する。先行技術の試みは 、メツセンジャーＲＮＡ分子上の部位にアルキル化又は開裂のために有効な割合 で反応性ペンダント基が効果的に分配されていない点で、比較的不感応性であっ た。
さらに、このような物質の反応性が完全であったとしても、すなわち、各反応性 官能基がメツセンジャーＲＮＡ分子と実際に反応したとしても、効果は化学鳳論 的効果よりも良好ではない。すなわち、オリゴヌクレオチドの各分子に対して１ 個のＲＮＡ分子のみが不活化される。修飾オリゴヌクレオチドと、ターゲットＲ ＮＡ以外の分子、例えばアルキル化されるが又はラジカル種と反応することがで きる他の分子との非特異的相互作用並びにオリゴヌクレオチドの可能な自己破壊 がアンチセンス療法の効果を減するのみでなく、細胞内又は試験管内（ｉｎ　ｖ ｉｔｒｏ）の好ましくない有害な反応を惹起することも考えられる。このことは 、特異的ハイブリッド形成の座位を越えて拡散して、非ターゲット物質、他の細 胞分子及び細胞代謝産物に好ましくない損傷を与える可能性があると考えられる ラジカル種に関して、特に重大である。アンチセンスオリゴヌクレオチドのこの ような先行技術アルキル化剤とラジカル発生種との、この認められた特異性欠除 と、効力に対する化学量論的制限とがこれらの使用に対する重要な欠点である。
従って、好ましくない副作用を与えることなく、結合とｍＲＮＡ調節又は不活化 との両方における特異性と有効性とを改良することができるアンチセンスオリゴ ヌクレオチド組成物（ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）が依然として非常に必要とされ ている。
発朋Ω旦釣 アンチセンスオリゴヌクレオチド診断法及び治療法に用いるためのオリゴヌクレ オチドを提供することが、本発明の１つの目的である。
ＲＮＡの活性の調節に効果的である、このようなオリゴヌクレオチドを提供する ことが、本発明の他の目的である。
好ましくない又は有害な副反応を惹起する傾向が少ない、このようなオリゴヌク レオチドを提供することが、本発明の他の目的である。
さらに他の目的は、動物における身体状態、特に病的な状態（ｄｉｓｅａｓｅｄ 　５ｔａｔｅ）を分析イーるための研究と診断の方法と物質を提供することであ る。
さらに他の目的は、核酸の特定の部分を置換させるための核酸の修飾手段を提供 することである。
さらに他の目的は、ＤＮＡとＲＮＡの活性の調節を通して、疾患を治療するため の治療及び研究の方法と物質を提供することである。
さらに他の目的は、ＲＮＡを選択的に開裂するための手段を提供することである 。
上記その他の目的は、本明細書と添付請求の範囲との検討から、当該技術分野に ＪＩＩ常の技術を有する人に明らかになると思われる。
＆吸０櫃ス 本発明によると、ＤＮＡとＲＮＡの活性を調節するための組成物を提供する。
本発明によってＲＮＡの活性を調節するため又はＲＮＡの存在を検出するために 有用な組成物は、一般に、３部分を含む。第１部分（ターゲツティング部分）は ＲＮＡの所定ヌクレオチド配列と特異的にハイブリッド形成可能である部分であ る。この組成物はさらに、ＲＮＡとのハイブリッド形成時に形成される、塩基又 は塩基対の間に挿入可能なインターカーレーティング部分を含む。この組成物は さらに、ＲＮＡの開裂を、特にＲＮＡのホスホジエステル結合の開裂を触媒する か又は他のやり方で実施することができる反応性部分を含む。
本発明の１実施態様では、本発明による好ましい組成物は、少なくとも１個のり ボフラノシル単位を含み、この単位はその２′位置にインターカーレーティング 部分と反応性部分との両方を宵する。この組成物はターゲツティング部分と反応 性部分とを一緒に結合させて組成物を形成するためのテザー（ｔｅｔｈｅｒ）又 は他の手段を含むこともできる。本発明の他の実施態様では、好ましい組成物は オリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオシドのヌクレオシド間結合から伸びるテ ザーを含むオリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオシドを包含する。挿入部分と １反応性部分とはテザーに結合する。さらに他のテザーを用いてインターカーレ ーティング部分を反応性部分に結合させることができる。
本発明の組成物のターゲツティング部分は好ましくは３〜約５０塩基単位、より 好ましくは８〜４０サブユニツト、さらにより好ましくは１２〜２５サブユニツ トを有するオリゴヌクレオチドとオリゴヌクレオシドを含む。約１５塩基単位を 有するオリゴヌクレオチドとオリゴヌクレオシドとが、本発明のある一定の実施 態様の実施のために好ましい。
治療的用途のためには、好ましくは、標的部分は、オリゴヌクレオチドのホスホ ジエステル結合の少なくとも一部が・ヌクレアーゼ耐性（ｎｕｃｌｅａｓｅ　ｒ ｅｓｉｓｔａｎｃｅ）を強化するように及び／又はその活性を調節すべきＲＮＡ が存在する細胞の細胞内領域に浸透する組成物の能力を強化するように機能する 構造によって置換されたオリゴヌクレオチドの類似体である。ある一定の好まし い実施態様では、このような置換はホスホロチオエート結合又は短鎖アルキル若 しくはンクロアルキル構造を含む。他の好ましい実施態様によると、ホスホンエ ステル結合をヘテロ原子を含む他の構造によって置換して、オリゴヌクレオシド を形成する。
ある一定の好ましい実施態様では、組成物のインターカレーティング部分は、ハ イブリッドアンチセンス／ＲＮＡ標的配列二重槙造によって形成される、所定の 塩基列と塩基対の間に挿入することができる、公知の非発癌性タイプの多環式芳 香族炭化水素又は複素環式部分である。
他の好ましい実施態様によると、組成物の反応性部分はＲＮＡにおけるホスホジ エステル結合の加水分解又は開裂を触媒することができる官能基を含む。このよ うな官能基は塩基性、酸性、両性、イオン性又は疎水性のいずれがである。ヘテ ロ原子種は、このような目的のために、塩基性若しくは酸性であるように又は、 実際に、両性であるように配合することができる（ｆｏｒ■ｕｌａｔｅｄ）６本 発明のある一定の好ましい実施態様では、反応性部分は、例えばマグネシウム、 カルシウム及び亜鉛を含めた二価金属のような、ある一定の金属に配位すること ができる複数リガントを含む。
本発明は本発明の組成物の反応性部分としてアルキル化官能基とフリーラジカル 形成官能基の使用を含み、このような場合には特に、前記アルキル化物實とフリ ーランカル形成物質が本発明の組成物と調節すべきＲＮＡとの間に形成されるハ イブリッドの小さいｆｉ（ｍｉｎｏｒ　ｇｒｏｏｖｅ）中に供給される。
他の実施態様によると、ＲＮＡの活性を調節するための本発明の組成物は、それ に加えられたＲＮＡと相互作用することができる、少なくとも１個のＲＮＡ開裂 部分又は他の部分を有する複素環式構造を含む。これらの組成物の成るものは、 一部は複素環式ＲＮＡ開裂部分をアンチセンスオリゴヌクレオチド又は類似体に 結合させるための部位を細心に選択することによって、ＲＮＡ鎖の所定部分にＲ ＮＡ開裂（すなわち、挿入又は小さい溝結合）部分を供給するために適合する。
本発明の組成物は自然発生若しくは非自然発生糖部分１，１１ｉびに自然発生若 しくは非自然発生塩基部分を含むことができる。従って、ｆｉ規なヌクレオシド 及びヌクレオシド類似体が形成される。このようなヌクレオシド及びヌクレオシ ド類似体は本発明の実施に有用なオリゴヌクレオチド中に導入することができる 。
本発明はまた、ＲＮＡを何する生物体を上記考察（ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎ ）に従って配合した組成物と接触させることを含む、ＲＮＡの活性を調節する方 法にも関する。
その形成を調節すべきタンパク質をコードするメッセンシャーＲＮＡを好ましく は含むように、調節すべきＲＮＡを予め選択することが好ましい。本発明はまた 、プレメツセンツヤ−ＲＮＡにも適用することができ、実際に、包括的にＲＮＡ に及び一本鎖ＤＮＡに適用することができる。用いる組成物のターゲツティング 部分はＲＮＡ又は一本鎖ＤＮＡの所定部分に相補的であるように、すなわち、こ の部分に関してアンチセンスオリゴヌクレオチドであるように選択される。
本発明はまた、タンパク質の好ましくない産生又は過剰産生を特徴とする疾患を 有する生物体の治療方法であって、該生物体を上記考察による組成物と、好まし くは、その産生を調節又は阻害すべきタンパク質をコードするメツセンジャーＲ ＮＡと特異的に結合するように設計された組成物と接触させることを含む前記治 療方法にも関する。
本発明はまた、反応性官能基の他に、オリゴヌクレオチドにさらに加えられる基 の使用にも関する。このようなペンダント基はオリゴヌクレオチド摂取（ｕｐｔ ａｋｅ）を強化し、ヌクレアーゼによる分解に対するオリゴヌクレオチド耐性を 強化し、標的ＲＮＡへのオリゴヌクレオチドの結合を強化する。他の官能基も診 断の目的のために配列特異性オリゴヌクレオチドに、例えばビオチン及び蛍光体 のような、レポーター基を結合させるために役立つ。各オリゴヌクレオチドに１ 個より多い非反応性官能基を結合させることができ、単一ヌクレオシド単位に２ 個以上の非反応性官能基を結合させることができ、非反応性官能基と反応性官能 基との絵合せを単一ヌクレオシド単位又は単−オリゴヌクレオチドに結合させる ことができる。
本発明のヌクレアーゼ耐性オリゴヌクレオチドは連結基を介して一緒に結合した 核酸塩基の一本鎖から成る。このヌクレアーゼ耐性オリゴヌクレオチドの標的部 分は約５〜約５０核酸塩基の長さの範囲である。しかし、本発明の好ましい実施 態様によると、長さ約１５塩基のターゲット配列が最適であると考えられる。
本発明のオリゴヌクレオチドを構成する個々のヌクレオチドの塩基は、特定の配 列に配置された、例えばチミン、ウラシル若しくはントシンのようなピリミジン 、又は例えばグアニン若しくはアデニンのようなプリン、又はこれらの両方であ りうる。さらに、これらは技術上周知の合成塩基のいずれかでありうる。ヌクレ オチドの糖部分はデオキシリボース若しくはリボース型であるか、又は技術上周 知の合成糖であることができる。本発明のオリゴヌクレオチドのホスフェート連 結基は生（ｎａｔｉｖｅ）若しくは野生型のホスホジエステル結合又は、例えば ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、メチルホスホネート又はアルキル ホスホネートのような合成連結基である。ホスフェート連結基に代わる他の合成 結合を用いることもできる。ヌクレアーゼ耐性に関しては、合成結合が好ましい 。
得られる新規なオリゴヌクレオチドはヌクレアーゼ分解に対して耐性であり、野 生型（ＤＮＡ−ＤＮＡ及びＲＮＡ−ＤＮＡ）二重構造と、ホスホロチオエート、 メチルホスホネート、ホスホラミネート及びホスホロトリエステルを含めた、リ ン修飾オリゴヌクレオチドアンチセンス二重構造とに比べて質の高い、ハイブリ ッド杉成性を示す。
本発明はさらに、生物体又は細胞における異常なＲＮＡ分子の有無又は正常なＲ ＮＡ分子の異常な若しくは不適切な表現を検出するための診断方法に関する。
本発明はまた、研究及び診断法に有用な、ＲＮＡの選択的開裂方法に関する。こ のような選択的開裂は、このような開裂を惹起することができる反応性部分と選 択性を強化するように設計された標的部分とを有する本発明の組成物とＲＮＡと の相互作用によって達成される。
本発明はまた、生物体を上記考察に従って配合した組成物と接触させることを含 む、生物体によるタンパク質産生の調節方法にも関する。調節されるべきＤＮＡ 又はＲＮＡ部分がその形成を調節すべきタンパク質をコードするＤＮＡ又はＲＮ Ａ部分を含むように予め選択することが好ましい。用いる組成物のターゲツティ ング部分はＤＮＡ又はＲＮＡの所定部分に相補的であるように、すなわち、この 部分に関してアンチセンスオリゴヌクレオチドであるように選択される。
本発明はまた、タンパク質の好ましくない産生を特徴とする疾患を有する生物体 の治療方法にも関する。この方法は該生物体を上記考察による組成物と接触させ ることを含む。この組成物は好ましくは、その産生を阻害すべきタンパク質をっ −ドするメッセンンヤーＲＮＡと特異的に結合するように設計された組成物であ る。
本発明はさらに、生物体又は細胞における異常なＲＮＡ分子の有無又は正常なＲ ＮＡ分子の異常な若しくは不適切な表現を検出するための診断方法に関する。
本発明はまた、研究及び診断目的のためのＲＮＡの選択的結合方法にも関する。
このような選択的な強い結合は、分解性ヌクレアーゼに耐性である本発明の組成 物をこのようなＲＮＡ又はＤＮＡに接触させることによって得られ、他の公知の オリゴヌクレオチドに比べてより強力にかつより大きい適合性でハイブリッド形 成する。
本発明はまた、本発明のある一定の化合物の人為的な制限酵素としての試験管内 使用にも関する。このような人為的な制限酵素は、該化合物のオリゴヌクレオチ ド又はオリゴヌクレオシド部分の適当な塩基配列の選択によって部位特異性にさ れる。試験管内の人為的制限酵素として用いる場合に、本発明の化合物はさらに 、特定の金属の特異的配位のために選択された１個以上のリガンド基を介して化 合物の残部に配位した金属イオンを含む。好ましい金属は八面体又は四面体配位 錯体を形成する金属である。五配位することができる他の金属も選択することが できる。
本発明の他の実施態様によると、２°位置において置換され、本発明のオリゴヌ クレオチド中に導入するために有用である新規なヌクレオシド類似体を合成する だめの新規な方法を提供する。このような方法はリボフラノシルヌクレオシドの ３′又は５′　ヒドロキシル基のブロッキング（ｂｌｏｃｋｉｎｇ）が存在しな い場合に２°置換基の導入を可能にする。アデノシンとシチジンに関しては、こ のような方法は水素化ナトリウムによる処理を用いた後に、ハロゲン化アルキル を用いる。
ウリツノに関しては、このような方法は塩化第一スズとハロゲン化アルキルとに よる処理を用いる。グアノシンに関しては、このような方法は水素化ナトリウム とハロゲン化アルキルとによって２，６−７アミノブリンリボンドを処理した後 に、１９９２年７月２３０出願の米国特許出願第９１８．３６２号に開示されて いるように、脱アミノしてグアノツノ化合物を形成する、この特許出願の全開示 はここに参考文献として関係する。この反応は室温又は室温近くにおいて実施す る。これらの条件は強力なアルキル化剤（例えばンアゾメタン）を必要とする先 行技術の公知方法とは対照的である。このような強力なアルキル化剤はヌクレオ ノド塩基上の全ての反応性部位と、３°　と５゛糖ヒドロキシルとの完全な保護 を必要とする。
本発明によってＲＮＡ又はＤＮＡ分子の活性を調節するために有用な、ある一定 の組成物は一般に、−水路又は二本鎖ＤＮＡ又はＲＮＡ分子の所定ヌクレオチド 配列と特異的にハイブリット形成することができ、ヌクレアーゼ耐性である標的 配列を含む糖修飾（ｓｕｇａｒ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ）オリゴヌクレオチドを含む 。
その合成を最終的に調節すべき又は完全に阻害すべきタンパク質の産生に関係す る、ＤＮＡ又はＲＮＡの配列を選択することが一般に望ましい。このＲＮＡ又は ＤＮＡの所定ヌクレオチド配列に相補的であるか又は少なくともこの配列と特異 的にハイブリッド形成可能であるオリゴヌクレオチド配列を典型的に公知方法の 同相合成によって合成する。核酸合成装置は商業的に入手可能であり、これらの 使用か望ましい妥当な長さの殆ど任意のオリゴヌクレオチドの形成に有効である ことは当業者によって一般に理解される。
数面の可児に説明 本発明の多くの目的と利益は添付図面を参照するならば、当業者によってさらに 良好に理解されると思われる 図１は化合物１４の一般的な合成スキームを示す。
図２は化合物２０の一般的な合成スキームを示す。
図３は化合物９と２４の一般的な合成スキームを示す。
図４は化合物３４の一般的な合成スキームを示す。
図５は化合物１４の代替え合成スキームを示す。
図６〜１２は化合物１３４．１３５及び１３７の一般的な合成スキームを示す。
兄叫Ｏ詳担を説明 本発明の状況においては、“オリゴヌクレオチド”なる用語は自然発生塩基とペ ントフラノシル糖とを含み、ホスホジエステル結合によって結合される、複数の ヌクレオチド単位から形成されるポリヌクレオチドを意味する。従って、“オリ ゴヌクレオチドなる用語は自然発生種又は、自然発生ヌクレオチド単位から形成 される合成種を含む。
“オリゴヌクレオチド”なる用語はまた、非自然発生サブユニット又は修飾サブ ユニットから形成されるポリヌクレオチドをも含む。これらの修飾はヌクレオチ ドの塩基部分若しくはヌクレオチドの糖部分上に、又は１つのヌクレオチドを次 のヌクレオチドに結合させる結合上に生ずることができる。さらに、ヌクレオシ ド単位がヌクレオシド間ホスフェート結合又は糖ホスフェート結合に代わる基に よって結合される箇所に、修飾を形成することができる。このような結合は１９ ９０年８月１３日出願の新規なヌクレオシド類似体なる名称の米国特許出願第５ ６６．８３６号；１９９１年５月２１日出願のバックボーン修飾オリゴヌクレオ チド類似体なる名称の出願第７０３．６１９号；　１９９２年６月２４日出願の へテロ原子オリゴヌクレオシド結合なる名称の出願第９０３．１６０号；１９９ ２年５月２１日出願のバックボーン修飾オリゴヌクレオチドなる名称の出願第Ｐ ＣＴ／ＴＪＳ９２１０４２９４号、及び出願第ＰＣＴ／ＵＳ９２１０４３０５号 に開示された結合を含み、これらの出願は全て本発明の譲受は人に譲渡されてい る。
ヌクレオシド単位の結合にホスフェート結合以外を用いる場合には、このような 構造は“オリゴヌクレオシド”としても述べられている。
糖、塩基又はヌクレオチドのホスフェート基に他の修飾を形成することができる 。典型的な修飾は１９９０年１月１１日出願のＲＮＡ活性の検出及び調節のため の組成物と方法なる名称の米国特許出願第４６３．３５８号；　１９９０年８月 １３日出願の遺伝子表現を検出し、調節する糖修飾オリゴヌクレオチドなる名称 の出願第５６６．９７７号：１９９０年７月２７日出願の新規なポリアミン共役 オリゴヌクレオチドなる名称の出願第５５８．６６３号：］９９１年７月２７日 出願の遺伝子表現を検出し、調節するヌクレアーゼ耐性ピリミジン修飾オリゴヌ クレオチドなる名称の出願第５５８．８０６号、及び１９９１年１月１１日出願 のＲＮＡ活性の検出及び調節のための組成物と方法なる名称の出願第ＰＣＴ／Ｕ ３９１１００２４３号：１．９９１年１０月１５日出願のキラル　リン結合を何 するオリゴヌクレオチドなる名称の出願第７７７．６７０号＋１９９１年１２月 ２４日出願のギャップ上２゛修飾ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドなる名 称の出願第８１４．９６１号；　１９９１年１２月１３日出願のシクロブチルオ リゴヌクレオチド類似体なる名称の出願第８０８．２０１号、及び吸収その他の 性質を改良Ｉ５た誘導体化オリゴヌクレオチドなる名称の出願第７８２．３７４ 号に開示されており、これらの出願は全て本発明の譲受は人に譲渡されている。
上記特許出願の全てはここに参考文献として関係する。
このように、オリゴヌクレオチドなる用語は、天然塩基、天然糖及び天然ホスホ ／エステル結合と同様に機能する修飾部分（例えば修飾糖部分、修飾塩基部分又 は修飾塩基部分）を含む構造を意味することができる。代表的な修飾には、ホス ホンエステル　ヌクレオノド間結合に代わるホスホロチオエート、ホスホロチオ エート、メチルホスホイ、−ト、ホスホトリエステル又はホスホラミデートのヌ クレオシド間結合、天然プリン及びピリミジン塩基に代わるデアザ若しくはアザ 　プリン及びピリミジン、５又は６位置に置換基を有するピリミジン塩基：２． ６又は８位置に変化置換基又は代替え置換基を有するプリン塩基９例えばそれら の２゛位百に置換基を有する糖、又は炭素環式又は非環式糖類似体かある。
本発明の要旨に矛盾しない他の修飾は当業者に周知である。このようなオリゴヌ クレオチドは天然オリゴヌクレオチド（又は天然ラインに沿った合成オリゴヌク レオチド）と構造的には異１（るが、機能的には相互交換可能であるとして最も 良く述へられている。このようなオリゴヌクレオチドは全て、所望のＲＮＡ又は ＤＮＡ鎖の構造を実質的に模倣することができる限り、本発明に包括される。
本発明の組成物のターゲツティング部分は好ましくは約３〜約５０塩基単位を有 するオリゴヌクレオチドである。このようなオリゴヌクレオチドは好ましくは約 ８〜約４０塩基単位、より好ましくは約１２〜約２５塩基単位、さらにより好ま しくは約１５塩基単位を有する。ターゲツティング部分は、調節のために選択さ れたＲＮＡの所定ヌクレオチド配列と特異的にハイブリッド形成可能であるよう に適応させるへきである。　本発明の実施のために適切であると考えられるオリ ゴヌクレオチドは一般構造（１ａ）を有するサブユニットを１個以上含む：式中 、Ｂｘはプリン又はピリミジン塩基のいずれかであり、自然発生又は非自然発生 オリゴヌクレオチドに関して知られるか又は同様な機能を有するものを含む７　 （Ｅ）は表示位置の１個以上に結合し、ＲＮＡ開裂部分、前記オリゴヌクレオチ ドの薬物動態性質を改良するための基、前記オリゴヌクレオチドの薬力学的性質 を改良するための基、Ｈ，ＯＨ１又は他の置換基である。Ｓｇは自然発生又は非 自然発生糖である。Ｌは糖連結基である。糖連結基りはオリゴヌクレオチド、オ リゴヌクレオノド又は糖類何体の糖部分を結合して、本発明の組成物のターゲツ ティング部分を形成することかできる、ここに述べた又はそうでなくて知られた 、自然発生構造のいずれかであることができる。本発明のある一定の実施態様で は、これらの糖連結官能基がホスホジエステル構造、前記オリゴヌクレオチドの ホスホジエステル結合の少なくとも一部がホスホロチオエート、メチルホスホネ ート若しくはアルキルホスフェートによって置換したホスホンエステル構造、又 は参考文献として上述した特許出願の１つに記載された構造のいずれかを含むこ とが好ましい。池の実施態様では、これらの糖連結官能基は、例えば上記特許出 願第７０３．６１９号、第９０３．１６０号、第５６６．８３５号、１ＰｃＴ／ ＵＳ９２１０４２９４号又は第ＰＣＴ／ＵＳ９２１０４３０５号に開示されてい るような、メチレン又は炭素ベースド（ｃａｒｂｏｎ　ｂａｓｅｄ）基によって 結合した１個以上のへテロ原子を含むことか好ましい。
本発明の組成物の糖部分の構造を本発明の要旨から逸脱することなく変更するこ とができることは、当業者が理解するであろう。全ての糖連結官能基が修飾形で あることは必ずしも必要でない。組成物のターゲツティング部分全体がターゲッ トと特異的に結合して、ＲＮＡ活性を検出及び調節することができるハイブリッ ドを形成するための有効な能力を有する限り、このような連結基の実質的な数及 び圧倒的な多数さえもが生のホスホジエステル形で存在することができる。もち ろん、完全に修飾されない、生のホスホジエステル構造も使用可能である。
本発明の利益を実証するために、１個より多い又は恐らく２個のＲＮＡ開裂官能 基を結合することは必ずしも必要ではない。従って、ＲＮＡ開裂部分を本発明の 組成物のターゲツティング部分であるオリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオノ ドを構成する、比較的少ない割合のサブユニット、一般には１個又は２個のみの サブユニットに結合させることが好ましい。しかし、他の実施態様では、オリゴ ヌクレオチド又はオリゴヌクレオシド中のヌクレオチドの全てを１個以上のＲＮ Ａ開裂部分を含むように修飾することができる。さらに他の実施態様では、ヌク レオチド（ＲＮＡ開裂官能基をも有するものを含む）の１個以上又は全てさえも がそれらに結合した薬力学的改良基又は薬物動態的改良基を含む。
ある一定の好ましい実施態様によると、本発明の組成物のＲＮＡ開裂部分とイン ターカレーティノブ部分とをターゲツティング部分のサブユニットを形成するヌ クレオシドの１つに結合させることが望ましいと考えられる。このような結合は 構造（１ａ）を横１１ｉｊ（ｌｂ）に拡大することによって表示される。
（１ｂ） 式中、Ｇ１は二価リンカ−（Ｉｉｎｋｅｒ）であり、Ｇ２はアリール若しくはヘ テロアリール、又はアリール若しくはヘテロアリール含有基であり、Ｇ、は例え ば一般的な酸／塩基性質を有するＲＮＡ開裂部分である。本発明のある一定のさ らに好ましい実施態様では、Ｇ１はさらに電子性触媒を含む。
二価リッカーＧ、は好ましくは、Ｓｌ、Ｂｘ又はＬ基から６２基までに至る原子 バックボーンに直接へテロ原子（Ｇｌ’　）とアルキル、アルケニル又はアルキ ニル基（６１“）とを含む。好ましいヘテロ原子は０、Ｓ、及びＮ　−１−１又 はＮ−アルキルを含む。本発明のある一定の実施態様では、Ｇ１がそのヌクレオ ノド間結合の２゛糖部分に結合することか好ましい。本発明の他の好ましい実施 態様では、Ｇ１がヌクレオシト間結合、すなわち糖連結基に結合することか好ま しい。
Ｇ２は好ましくは２〜６環を有する多環状部分であり、前記環の少なくとも２個 は結合して、電子共役系を形成する。代表的な６２基はナフタレン、アントラセ ン、フェナントレン、ヘンゾナフタレン、フルオレン、カルバゾール、ピリド［ ４，３−ｂ〕カルバゾール、アクリジン、ピレン、アントラキノン、キノリン、 フェニルキノリン、キサンチン又は２．７−ジアザアントラセン基を含む。この タイプの構造は好ましくはインターカレーターとして作用する。有用であると考 えられる、他のインターカレーターは、デニー（Ｄｅｎｎｙ）のΔｎ　ｔ　１− Ｃａｎｃｅｒ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｓｉｇｎ　１９８９．４．２４１によって述べら れている。
ＲＮＡ開裂基Ｇ、は一般酸と一般塩基の特性を有する官能基であることができる 。これはまた電子的触媒特性を有することもできる。これはさらに金属イオン配 位特性を膏する。
我々は特定の理論によって縛られることを望む訳ではないが、一般酸／塩基部分 はターゲットを最初に脱プロトン化することによって機能すると考えられる（一 般塩基の機能）。次に、脱プロトン化ターゲットは隣接ヌクレオチド間のホスホ ／エステル結合に作用することができる。一般酸の性質はホスホンエステル結合 内の酸素原子のプロトン化によって発現される。２′　−ヒドロキシル基は典型 的に一般的塩基のターゲットであり、２゛　−酸素中心（２”　−ｏｘｙｇｅｎ −ｃｅｎｔｅｒｅｄ）アニオンはホスホジエステル結合に対して核試薬として作 用する。５°　−ヒドロキシル又はホスフェートの酸素は一般酸によってプロト ン化され、脱離基として役立つ。総合的結果はボスフェート基と５゛　−ヒドロ キシル基との間のホスホジエステル結合の開裂である。このプロセスはホスフェ ートに近接して、１個以上の適当な電子性触媒基を配置することによってさらに 容易に助成されることができる。このような電子性触媒基はエッチ　デュガス（ Ｉｌ、　Ｄｕｇａｓ）、　Ｂ　ｉ　ｏ　ｏ　ｒ　ｇ　ａ　ｎｉｃＣｈｅｍｉｓｔ ｒＬΔＣｈｅｍｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈＬ。
Ｅｎｚｙｍｅ　ＡｃＬｉｏｎ、第２版、ンユブリンガーーフエルラグ（Ｓｐｒｉ ｎｇｅｒ−Ｖｃｒｌａｇ）、ＮＹ、１９８９によって述へられている。
従って、上記一般酸／塩基機構と請求電子性触媒作用によって増強される一般酸 ／塩基機構とは、窒素マスタード（窒素マスタード型分子の概観に関しては、例 えば：＋−ン（Ｋｏｈｎ）等、Ｎｕｃｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　 １９８７．２４．１０５３１を参照のこと）、例えばブソラレンのような光活性 分子（光活性ブノラレ７の概旺に関しては、例えばンミノ（Ｃｉｍｉｎｏ）等、 　Ａｎｎ　ＲｅｖＢｉｏｃｈｅｍ、１９８５．５４．１１５１を参照のこと）、 及びブラー／　７７等のＮｕｃｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　１９８ ６．１４．４０６５によって述べられているアルキル化剤を除外する。
ある一定の好ましい実施態様では、Ｇ３は５員又は６員複素環、好ましくは少な くとも１個の窒素原子を含む複素環、より好ましくは少なくとも１個のイミダゾ ール基を含む。この実施態様のためにＧＳのより好ましい基はイミダゾール、Ｃ ２１換イミダゾール、そのＣ４又はＣ５位置において電子性触媒によって置換し たイミダゾール、ビス−イミダゾール、Ｃ２１１換イミダゾール、Ｃ４又はＣ５ 位置の少なくとも一方が電子性触媒によって置換したヒスイミダゾール、そのＣ ４位置の両方又はＣ５位置の両方が電子性触媒によって１換したビスイミダゾー ル、又はヒスイミダゾールの個々のイミダゾール環を連結する結合か電子性触媒 によって置換したビスイミダゾールを含む請求電子性触媒は好ましくはプロトノ 化されることかできる窒素官能基、好ましくはアミン、窒素複素環、グアニジノ 又はアミンジを含む。本発明の好ましい実施態様では、これらの窒素官能基は、 ホスフェートバックボーンの４酸素原子の１つ又はいずれが及びターゲット核酸 の隣接２°　−ヒドロキシルと最適に相互作用するように”予備組織化される（ ｐｒｅｏｒｇａｎｉｚｅｄ）’。
ヒスイミダゾールは好ましい一般酸／塩基ＲＮＡクリーバー（ｃｌｅａｖｅｒ） でもある。ビス−ミダゾール部分は２個のイミダゾール環が連結基によって結合 されたちのである。ヒスイミダゾールはタング（丁ａｎｇ）等、Ｊ、Ａｍ、Ｃｈ ｃｍ、Ｓｏｃ］９７８．１００．３９１８によって述べられている一般的な方法 を用いて製造することもできる。ビス−イミダゾールを結合する連結基はビス− イミダゾールを他の官能基に結合させるための１個以上のテザーリング（ｔｅｉ ｈｅｒｊｎｇ）基を含む。
好ましいテザーリング基はヒドロキシル、カルボキシ、アミン及びチオール基で あり、ヒドロキシル及びカルボキシ基が特に好ましい。他のテザーリング基には 、平面的な芳香環系がある。カルボキノ部分はエステル及びアミド結合を介した ビス−イミダゾールのテザーリングを可能にする。
Ｇ２と６３は単一共有結合によって又は単原子若しくは多原子二価リンカ−によ って結合することができる。共有結合と二価リンカ−とをタンデム（ｔａｎｄｅ ■）に用いてＧ２と６３の間を例えば各基土の２種類の原子位置によって結合す ることができる。二価リンカ−はＧ２からＧ！に至る原子バックボーンに直接に 、又はペンダント式にバンクボーンに取り付けて電子性触媒を含むことができる 。好ましい実施態様では、Ｇ、は少なくとも１個のイミダゾール基と、Ｇｓ基に 至るこのようなイミダゾール基のＣ４及び／又はＣ５位置の単−共有結合及び／ 又は二価リンカ−とを含む。単一共有結合と二価リンカ−の両方を用いることに よって、Ｇ、基と６２基の間に２個のタンデム結合点が設けられる。
他の好ましい実施態様では、Ｇｓはアンル、アミン、チオール、アリール、置換 アリール、アルキル若しくは置換アリール又はこれらの基の組合せの１種以上に よって６２に結合した２個のイミダゾール環を含む。ここで用いる限り、アシル 基はケト、カルボキシ基、エステル及びアミド結合を含み、アミンとチオールと の組合せはスルファミドを含む。アミドは商業的ＤＮＡ合成装置と商業的試薬と を用いるオリゴヌクレオチド合成中に通常用いられる反応条件に安定であるので 、特に好ましい。
さらに他の好ましい実施態様では、Ｇ、は、他の線状テザー及びリンカ−と共に 、１個以上のりガントを１個以上の金属イオンに配位するように三次元配列に配 置する構造を画定する、１個以上の炭素環、複素環又は芳香環（単環と複数環の 両方）構造を含む。さらに、Ｇ、はＧ２に結合して、これらのリガンドと金属イ オンとをターゲット鎖に対して好ましい空間配置で配位するように固定する。
本発明によるある一定の好ましい化合物は構造（ＩＣ）を有するＴ　−０’　Ｇ 　−Ｇ　、、−Ｇ　−Ｇ３　１’＋２３ 式中、Ｇｓ゛、Ｇ１“、Ｇ２及びＧ３は上記で定義した通りであり、７５はＨ１ ヒドロキシル保護基、ホスフェート基、ヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドで あり、■、はＨ１ヒドロキシル保護基、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ホ スフェート基、活性化ホスフェート基又は固相サポートであり、Ｂｘは複素環式 塩基部分、好ましくはプリンである。本発明のある一定の有用な合成中間体では 、Ｇ１−Ｇ２−Ｇ３はアルキニル、好ましくはプロパルギルであるが、但し、Ｂ ｘがウラシルである場合には、Ｔ、とＴ、はＨ又はアセチルではない。２“　− ０−プロノくルギル部分はある一定のケーシド（ｃａｇｅｄ）ボラノ化合物の合 成における中間体として又はＡＺＴの構造類似体として用いられている（アニス ツザマノ（Ａｏｉｓｚｚａｗａｎ）等　Ｐｏ１ｙｈｅｄｒｏｎ　１９９０．９． ８９１；ツルウェイ（Ｓｏｌｗａｙ）、Ｐ　ｕｒｅ　＆　ａｐｐｌ、Ｃｈｅｍ、 １９９１．６３．４１１；及びロソウスキー（Ｒｏｓｏｗｓｋｙ）等、Ｎｕｃｌ ｅｏｓｉｄｅｓ　＆　Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ　１９８９゜８４９１を参照のこ と）。以下の実施例に示すように、このプロパルギル結合を段階的に還元して、 プロペンに、その後にプロピル結合にすることができる。
プロパルギル、プロペン又はプロピル　ヌクレオシド中間体は抗ウィルス剤とし て有用である可能性かある。
ｉ造（ｌｃ）［式中、Ｔ、とＴ、はヒドロキシル保護基であり、Ｇ、”はアルキ ニルである］を有する化合物は、構ｉｊｉ＋（ｌｄ）を有する化合物を構造Ｔ８ ０−Ｇ２ｍｉｆｉ（ｌｅ）を有する化合物を形成することによって製造すること 力（できる。この構造において、Ｔａは例えばトリフルオロメチルスルホニルは ｔｒｆ基）のようなヒドロキシル基である。
（１ｅ） 化合物（１ｄ）を処理して化合物（１ｃ）を形成する場合には、Ｔ、、及びＴ− ヒドロキシル保護基の使用が最適である。このような保護基の使用は、２°　− ヒドロキシル基の置換中に３°　−又は５゛　−ヒドロキシル基が同時に置換さ れることヲ考虜する必要がないので、比較的激しい反応条件下で化合物（１ｄ） の初期製造を可能にする。化合物（１ｄ）の製造に保護基を用いない場合には、 ２°　−０百換を位置選択的に実施して、３゛又は５°位置よりも優先的に２° 位置を選択的に置換させる（又は主として選択的に置換させる）。Ｔ、及び／又 はＴ、保護基を選択する場合に、化合物（１ｄ）から化合物（１ｅ）への転化に は本質的にｐＨ中性反応条件が用いられるので、Ｔ３及びＴ、ヒドロキシル保護 基の酸又は塩基安定性を考慮する必要はない。従って、種々の公知のヒドロキシ ル保護基が使用可能である。このような保護基は当業者に周知の保護基から選択 することができる。このような保護基についての最近の概観はビューケーン（Ｂ ｅａｕｃａｇｅ）等のＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　１９９２．４８．２２２３に見 い出される。特に有用な保護基はテトライソプロピルシンロキサニル基である、 この理由はこの基が３゛　と５°　ヒドロキシル位置の両方を同時にブロックす ることができるからである。従って、好ましい実施態様では、Ｔ３とＴ、が−緒 に３’　、５’　−０−テトライソプロピルシンロキサニル基を形成する。
Ｔ６はＴ２Ｏが良好な脱離基であるように選択される。好ましくは、Ｔ６はトリ フルオロメチルスルホニルである。他の適当な脱離基にはヨードとブロモである 。
Ｔ６脱離基の置換は触媒、好ましくはバランラム触媒の存在下で実施される。好 ましいバランラム触媒の１つはＰｄ　（ＰＰｈｘ）４である。他のパランラム触 媒はＰｄＣ１２（ＰＰｈｓ）２である。
次に、化合物（１ｅ）を横ａＴ＋−Ｇｓ　Ｍ−Ｔｓを有する化合物と接触させて 、化合物（１ｃ）を形成する。この反応も触媒の存在下で実施される。上述の触 媒反応と同様に、パラジウム（好ましくはＰｄ　（ＰＰｈ３）４）か触媒として 選択される。バランラム触媒反応では、Ｍは好ましくはＳｎであるように選択さ れる。
ＴＡはポリアルキル基であるへきであり、アルキルは炭素数約１〜約５である。
好ましくは、Ｔ８はトリスブチルである。Ｔ７は位置保護基（ｒｅｇｉｏ　ｐｒ ｏｔｅｃｔｉｎｇ　ｇｒｏｕｐ）であるか又は以下で略述するようなＲ１である 。このようなＲ１基は適当な保護基をも含むことができる。この場合に（ｐｒｅ ｓｅｎｔｌｙ）、好ましい位置保護基にはｔ−ブチルジメチルシリル又はｔ−ブ チルジメチルシリル基がある。
本発明の幾つかの特に好ましい化合物は構造（２ａ）〜（５ｃ）を有する（］ａ ） ｆ４ｂン ９日 ＋５ａ）　（Ｓｂｌ （５ｃ） 式中、ＲＡはアリール、置換アリール又は窒素複素環式基であり。
Ｒ，はｓ、−ｃ、’　−Ｇ、”　、Ｓ、−１Ｂｘ−又はＬ−であり２Ｒｃは）１ ．０−１ｃｏｏ＼０し、Ｎ　Ｈ２、Ｃ（Ｒｃ）　（Ｒ，）　（Ｒ，）　、Ｎ　（ Ｒｃ）（Ｒ，、）　（Ｒ，）　、ＣＩ、Ｂｒ、　Ｆ、　ＣＦ３、ＳＲＣ，ＮＨＣ （ｏ）　Ｒｃ、　ｏｃ　（ｏ）Ｒｃ、Ｎｏ、窒素複素環式基又は他の電子供与基 であり。
Ｒｏは（ＣＨ２）。であり。
Ｒ７は１（、（Ｃ１，）、−Ｒ，、又はＲ６含有化学官能基であり２Ｒ，はＣＩ 　Ｃ２０アルキル、ＣＩ　Ｃ２゜アルケニル又はＣ２Ｃ２０アルキニルリール、 又はンクロアルキルであり１ Ｒ１、Ｒ□ｌ及びＲ，は、独立的に、■１、Ｃ＋Ｃ＋。アルキル又は置換アルキ ルであり７ Ｒ１は１１、窒素複素環式基、正？：：ｉ１Ｔ５基、又はホスホリル水素結合供 与基でありＲヶはアルキル、アシル又はアシル−アルキルであり。
Ｒ，はＨ又はＯＨであり。
ＺはＮ　Ｈ　２又はＣ　Ｉ（　２てあり。
Ｂｘはブリノ若しくはピリミジン塩基又はこれらの誘導体であり。
Ｌは糖連結基であり。
Ｓｌは自然発生若しくは非自然発生糖であり。
Ｇｌｏ　は０、ＳＳＮＨ又はＮ−アルキルであり。
Ｇｌ−はＣＩ　Ｃ２０アルキル、Ｃ２　Ｃ２０アルケニル又はＣ２　Ｃｚｅアル キニルであり。
Ｄは約１〜約５であり。
ｑは約Ｏ〜約５である。
ＲＡは好ましくはオリゴヌクレオチド／ＲＮＡターゲット配列へテロ二重構造の 塩基対の間への挿入を容易にするように選択される。ＲＡは正味挿入結合エネル ギーに大きく寄与するように選択される。正味挿入エネルギーへの他の寄与は構 造（２ａ）　−（５ｃ）のイミダゾール環部分に起因する。代表的なＲＡには、 フェニル、置換フェニル、ナフチル、アントラセニル、２．７−シアザーアント ラセニル、ヒラニル、アクリンニル、９−アミノアクリジニル、キノリニル、ピ リトーキノリニル及びピリジニル部分かある。ＲＡは好ましくは例えばナフチル 残基のような多環式芳香族炭化水素である。好ましい多環式芳香族炭化水素は、 ＲＮＡ又はＤＮＡに高いアフィニティ又は強い配列依存性を結合させないような 非発癌性部分、すなわち、いわゆる“最小”インターカレーターである。
本発明によると、ＲｅはＲＡを糖部分、塩基部分又は糖連結部分に結合させる共 有結合リンカ−（ｃｏｖａｌｅｎｔ　ｌｉｎｋｅｒ）である。ある一定の好まし い実施態様では、Ｒ，はＳ，−２°　−　０　−　Ｃ　Ｉ□−Ｃ１（２−又はＳ ，−２°　−０　（（ｊ−（２）　ｓ　ＮＨ−ＣＯ−である。
Ｒ５は好ましくは、銹導効果及び／又は共鳴効果によって、電子供与性である。
Ｒ１は構造（２ａ）−（５ｃ）にお（プるイミダゾール残基のｐＫ、を上向きに 調節するのに役立つと考えられる。立体的な意味で、ＲｃはＲＮＡハイブリッド 形成又はＲＡ及び／又はイミダゾール残基を介した又は挿入結合に影響を与えず にＲＮＡの小さい溝中に存在するように意図される。ＲｃはターゲットＲＮＡの ２゜−ヒドロキシルの脱プロトノを容易にするためにプロトン受容基を含むよう に設計されることができる。
Ｒ，は好ましくは、イミダゾール残基の５−位置とアミン官能基、Ｈ□ＲＦＮ’ とを結合させる共有結合リンカ−である。Ｒｏは好ましくは炭素数的１〜５であ る。
しかし、Ｒ，−Ｎ’Ｈ，Ｒ，は存在する必要がない。理解されるように、プロト ン付加形又は中性形のアミン官能基の存在は媒質依存性（ｍｅｄｉａ　ｄｅｐｅ ｎｄｅｎｔ）である。
アミン官能基はＲＮＡの大きい溝又は小さい溝のいずれかに存在して、ＲＮＡホ スフェート酸素への静１’１ｌ（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ）結合及び／又は 水素結合によってＲＮＡヌクレオチド間ホスホスフェートジエステル合体を形成 するように意図される。
このような複合体形成（ｃｏｍｐｌｅｘａｔｉｏｎ）は例えばイミダゾール残基 のようなＲＮＡ開裂部分を適当に配向させ、開裂連関を直接強化するように意図 される。このような速度強化は、リン原子を２゛　−酸素原子による作用に対し てより電子性にかつより反応性にする、分極とＲＮＡリン−酸素結合の弱化とに よって惹起されると考えられる。アミン官能基はまた、生ずる遷移状態と中間体 を安定化させて、ホスフェート酸素をより良好なプロトノ受容体にすると考えら れる。
好ましい実施態様では、Ｒ７は炭素数的３までのアルキル鎖と、ＲＮＡ開裂を容 易にすると知られている他の基、Ｒ８とを含む。好ましくは、Ｒ，は窒素複素環 、より好ましくはイミダゾールである。この官能基は初期の化学工程において２ 個の非エステル結合ホスホリル酸素の中の１個を予備プロトン付加して（ｐｒｅ −ｐｒｏｔ。
ｎａｔｅ）、リンを２′　−酸素アニオン、〇−による作用に対してより電子性 にかつより反応性にするように意図される。Ｒ，が下記構造の１つを有すること が特に好ましい 式中、Ｒｃは上記で定義した通りであるか又は、ホスフェート酸素と水素結合す るか若しくはホスフェート酸素と静電的に相互作用することができる基である。
他の好ましい実施態様では、Ｒ７はグアニジノ又はアミジノである。このような 構造はターゲット核酸のホスフェートバックボーンをさらに電子的に複合体形成 させるように選択される。構造（５ｃ）にはグアニジンとアミジン構造を示す。
ＲＦはＲ１とアミン官能基とを結合させる種々なサイズの配座制限部分である。
Ｒ，は単環式若しくは多環式及び／又は非環式であり、飽和及び／又は不飽和で ありうる。Ｒｒは好ましくは（ＣＨｚ）−（式中、ｎは１〜３である）である。
本発明による３種の代表的なイミダゾールペースト（ｉｍｉｄａｚｏｌｅ−ｂａ ｓｅｄ）　ＲＮ　Ａ開裂オリゴヌクレオチドは構造式（１１）〜（１３）［式中 、ＤＭＴはジメトキシトリチルであり、ＣＥＯはンアノエトキシであり、Ｂｚは ベンゾイルである］によって示される。後者は合成の保護ブロッキング（ｂｌｏ ｃｋｉｎｇ）基である。
本発明を特定の理論に限定することを意図する訳ではないが、本発明のオリゴヌ クレオチドがＲＮＡとハイブリッド形成する場合には、ＲＡと、これより軽度に 、ＲＡの２゛位置に付加した任意のイミダゾールサブユニットとがＲＮＡにイノ ターカレートし、それによってハイブリッド二重構造によって圧迫され、イノタ ーカレーテイブ（ｉｎｔｅｒｃａｌａｔｉｖｅ）部分を欠いた設計に比べてかな り限定された数の位置と配座になると考えられる。このようにして二重構造によ ってインターカレーティブクリーバーを圧迫することによって、特定のＲＮＡ開 裂官能基がハイブリッド形成ＲＮＡに最適に引き渡されるように配置される。構 造（２ｂ）−（５ｃ）の正荷電アミンが、インター力レーティブ結合形式を保持 しながら、ホスフェート基との水素結合と静電相互作用とによって組成物全体の 配向を最適に微調整することができるように、インター力レーティブ形式による 局部的運動と配置との制限が可能になる。従って、本発明は好ましい実施態様と してＲＮＡにインターカレートし、かつＲＮＡを開裂することができる置換基を その２゛位置に有するリボフラノシルヌクレオチドを含む全ての化合物を包含す る。ＲＮＡにインターカレートし、かつＲＮＡを開裂することができる同じ置換 基が塩基のいずれか又はオリゴヌクレオチドバックボーンに対する適当なリンカ −によって官能基化（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚａｔｉｏａ）されることもでき る。
構造（２ｂ）−（５ｃ）が特定のヌクレオシドの糖部分と、限定する訳でなく、 例えば構造式（１４）と（１５）に示すような２゛　−ヒドロキシル基を含めた 種々な位置において結合することができることは理解されるであろう。
式中、Ｑはｏ、Ｓ又Ｉｔ　ＣＲ＋　＋　テア’）　；Ｒ８とＲ１はＨ１低級アル キル、置換低級アルキル、オリゴヌクレオチドの薬物動態特性を改良する基、オ リゴヌクレオチドの薬力学特性を改良する基又はＲｓを欠いた構造（２ｂ）−（ ５ｃ）のいずれかであり：Ｒ７１はＨ１低級アルキル、置換低級アルキル、ＲＮ Ａ開裂部分、オリゴヌクレオチドの薬物動態特性を改良する基又はオリゴヌクレ オチドの薬力学特性を改良する基であり。
Ｂｘはヌクレオシド塩基又はブロックトヌクレオシド塩基部分である。
本発明のアルキル基は、限定する訳ではなく、Ｃ＋　Ｃ）ｚｌＴｔ鎖及び分枝鎖 アルキル、例えばメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキ／ル、ヘ プチル、オクチル、ノニル、デンル、ウンデシル、ドデシル、イソプロピル、２ −ブチル、イソブチル、２−メチルブチル、イソペンチル、２−メチルペンチル 、３−メチルペンチル、２−エチルヘキシル及び２−プロピルペンチルを含む。
アルケニル基は、限定する訳ではなく、上記アルキル基から誘導される不飽和部 分を含み、限定する訳ではなく、ビニル、アリル及びクロチルを含む。アルキニ ル基は上記アルキル基から誘導される、少なくとも１個の三重結合を何する不飽 和部分を含み、限定する訳ではなく、エチニル及びプロパルギルを含む。アリー ル基は、限定する訳ではなく、フェニル、トリル、ペンシル、ナフチル、アント ラシル、フェナントリル、ピレニル及びキノリルを含む。ハロゲンはフッ素、塩 素及び臭素を含む。適当な複素環式基は、限定する訳ではなく、イミダゾール、 テトラゾール、トリアゾール、ビロリンン、ピペリジノ、ピペラジン及びモルホ リンを含む。アミンは上記アルキル、アルケニル及びアリール基の全てのアミン を含み、第１アミン、第２アミン及び、例えばフタルイミドのような、“マスク ドアミン（ｍａｓｋｅｄ　ａｍｉｎｅ）”を含む。アミンはまた、ポリアルキル アミノ化合物と例えばアミノプロピルアミンのようなアミノアルキルアミンと、 さらに例えばイミダゾール−１，２若しくは４−イル−プロピルアミンのような ヘテロンクローアルキルアミ／とを含む。上記基に対する置換基は、限定する訳 ではなく、他のアルキル、ハロアルキル、アルケニル、アルコキシ、チオアルコ キン、ハロアルコキノ及びアリール基、並びにハロゲン、ヒドロキシル、アミノ 、アンド、カルボキノ、ンアノ、ニトロ、メルカプト、スルフィド、スルホン及 びスルホキシドを含む。他の適当な置換基はローダミン、クマリン、アクリドン 、ピレン、スチルヘア、オキサゾロ−ピリド−カルバゾール、アントラキノン、 フエナントリジン、フエナンノ、アンドベンゼン、プソラレン、ポルフィリン及 びコレステロールをも含む。
本発明の他の実施態様では、ＲＮＡ開裂に触媒作用を及ばずために、１種以上の 金属イオンを用いる。細胞系では、金属イオンは現場で（ｉｎ　５ｉｔｕ）細胞 系から得られる。人為的制限酵素として用いるために、予め形成された錯体とし て金属を本発明の化合物と共に加えることができる。いずれにせよ、本発明の化 合物は開裂されるべき問題のターゲｙ　トＲＮＡに関して所定の位置において金 属イオンに配位する、金属イオンとキレートを形成する又はマルチデンテート（ ｓｕｌｔｉｄｅｎｔａｔｅ）を形成するように特定の形状に配置された１個以上 のりガントテザー（］　ｉｇａｎｄ　ｔｅｔｈｅｒ）を含む・ 現場ＲＮＡ開裂に関しては、好ましくはマグネシウムに配位するリガンドが選択 される。問題の他の金属には、カルシウムと亜鉛がある。好ましい実施態様では 、理論によって縛られるのを望むわけではないが、２個のマグネシウムイオンに 配位するには全体で８リガントが用意される。イオンの他の配位部位は水によっ て占められるか、又はサブストレート（ｓｕｂｓｔｒａｔｅ）の酸素によって置 換される。
８リガントを用意する場合には、各マグネシウムは本発明の化合物の２個の赤道 （ｅｑｕａｔｏｒｉａｌ）リガンドと２個の軸方向リガンドとに配位された内部 球体（ｉｎｎｅｒ　５ｐｈｅｒｅ）でありうる。赤道リガンドの平面状配置を可 能にするように、本発明の化合物のりガントを選択することが好ましい。２個の 金属イオンがさらに残留赤道配位部位において１個の水分子に対して配位結合を 共有することができ、各マグネシウムの残留赤道部位が遊離水への結合に利用可 能であるように、金属イオンを配置するように、本発明の化合物のりガントを選 択することが好ましい。配位された金属イオンが強い鋳型効果を有し、一般酸、 一般塩基として役立ち、強力な電子性触媒であることか考えられる。
リガンドを金属と配位錯体を形成するように相互に対して空間に固定する連結ア ーム（ｌｉｎｋｉｎｇ　ａｒｃ）を介して、リガンドを結合することが好ましい 。リガンドとして特に適切であるのは、酸素、硫黄及び窒素種を含めたヘテロ原 子である。
この場合に、酸素が最も好ましい。ヘテロ原子を金属と配位結合するための位置 に配置又は結合させるために適当な有機基が用いられる。酸素原子に対しては、 このような配置用基としてアルコール、ケトン、アルデヒド、エーテル及び酸を 選択することが好ましい。窒素と硫黄種を配置するためには、対応する同様な種 か用いられる。
我々は理論によって縛られることを望む訳ではないが、この場合に、本発明の化 合物がキャリヤーのオリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオシド上に、このキャ リヤーのオリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオシドとターゲット鎖との間の本 発明の化合物に隣接する部位においてターゲット鏡上に不適正（厘ｉｓｍａｔｃ ｈ）が存在するように、配置されることか最も好ましい。この不適正が単一塩基 不適正であることか好ましいと考えられる。本発明の化合物のＲＮＡ開裂部分の 配置は、この場合に、小さい溝内にヌクレオシド間ホスフェート５°　−に単一 塩基不適正までに近接して存在することが好ましいと考えられ、この配置は本発 明の化合物の不可欠な部分を形成するインターカレーターの存在によって容易に なると考えられる。さらに、本発明の化合物のインターカレータ一部分がターゲ ットにおける不適正塩基のインターカレーシヨンを阻止し、この不適正塩基は二 重構造から離れて外方へ押し出されると考えられる。インターカレーターによる 不適正の上下の塩基対の分離と共に、これはヌクレオシト間結合５°　−を不適 正に配置すると考えられる。このような配置は立体配置的にかつ立体化学的に好 ましい。
本発明による代表的なりガントベースド（ｌｉｇａｎｄ　ｂａｓｅｄ）　ＲＮ　 Ａ開裂化合物を構造式（１６）　［式中、ＸとＹは金属イオンに配位するための 基である］によって好ましくは、ＸとＹ基は少なくとも１個のへテロ原子を含む 。このようなヘテロ原子が酸素、硫黄及び窒素から選択されることが好ましく、 酸素が最も好ましい。ＩＩＩ造式（１６）の化合物のＸ基のへテロ原子はエーテ ル、アルコール又は酸部分の一部を形成することが好ましい。構造式（１６）の 化合物のＹ基のへテロ原子はエーテル、ケトン又はアルコールの一部を形成する ことが好ましい。
ＸとＹ基を分子の残部に結合させるテザーその他の構造は、ＸとＹ基を金属イオ ンとの配位結合を促進するように空間に配置するように選択される。これらのテ ザーとして特に好ましいのは、共有単結合若しくは共有二重結合、炭素数約２〜 約１２の長さの低級アルキル、アルケニル若しくはアルキニル基、アリール若し くはアラルキル環、複素環及び脂環式環構造である。このような構造は多官能基 、多環系又は連結環系を含めた、より大きい骨格構造形（ｓｋｅｌｅｔａｌ　５ ｔｒｕｃｔｕｒａｌｆｅａｔ、ｕｒｅ）を形成するように結合するか又はこのよ うな骨格構造形の一部を形成することかでき、ヘテロ原子を配位させるＸとＹを 支持し、これらを１＠以上の金属イオンと配位結合するように空間に配置させる のに役立つ。
構造式（１６）の化合物は好ましくは、オリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオ シドに、例えば構造式（１６）に示すように、このようなオリゴヌクレオチド又 はオリゴヌクレオシドのヌクレオシド間結合を介して、オリゴヌクレオチド又は オリゴヌクレオシド分子の２個のヌクレオシドを結合するヌクレオノド間メチレ ンイミノ結合への結合によって、結合される。このようなメチレンイミノ結合は 」二記特許出願第７０３．６１９号に述べられている。これはさらに、バツソイ ル、ンエイ　ンエイ　（Ｖａｓｓｅｕｒ、　Ｊ、　Ｊ、　）、デパートエフ　（ Ｄｅｂａｒｔ、　Ｆ、　）、サングヴイ、ワイ　ニス　（Ｓａｎｇｂｖｉ、　Ｙ 、　Ｓ、　）及びクンク、ビー、ディ、（Ｃｏｏｋ、　Ｐ、　Ｄ、　）のＪＡｍ 、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、、１９９２．１１４．４００６に発表されている。
構造式（１６）において、Ｇ２インターカレーターとして役立つピリド［４゜３ −ｂ］カルバゾール環は、オリゴヌクレオシドのヌクレオノド間バックボーンの へテロ原子からピリド［４，３−ｂｌカルバゾール環のピリジン環の他のへテロ 原子に至るＧｉ二価テザーを介して結合する。Ｇ　、　Ｒ，Ｎ　Ａ開裂部分は４ 個のＸヘテロ原子、好ましくはエーテル、アルコール又は酸の酸素原子と、４個 のＹヘテロ原子、好ましくはエーテル、ケト又はアルコールの酸素原子とから成 り、４個のＹヘテロ原子はＸ部分を結合する４個のアルキルテザーと、Ｙ部分を 結合する１個のアルコール基、１個のエーテル基及び２個のケト基とによって空 間に固定される。アントラセン環とベントフラノース環との組合せがこれらをイ ンターカレークー６７部分に結合させる。次に、６２部分がＧ、テザーを介して オリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオシドのヌクレオシド間結合に結合する。
アットラセン環は塩基又は塩基対の間へのアントラセン環のインターカレーショ ンを阻害するために、例えばバルキー（ｂｕｌｋｙ）基のような、１ｌｌｌ基を さらにその上に含むことができる。このようなバルキー基（すなわち、ｔ−ブチ ル等）は、用いる場合には、例えばアットラセン環の位５！１０におけるように 、テザーがこの環に結合するアントラセン環の１．８位置から離れて、配置され ることが好ましい。
官能基が結合するヌクレオシドの部位と、介在リンカ−基の設計とは、ターゲッ ト化ＲＮΔの配列特異的破壊（ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｏｎ）又は調節のための組成 物の設計にとって重要である。ワトソンークリック塩基対水素結合ルールは破壊 すべきＲＮＡの選択にとって重要な配列特異的認識／結合要素であるので、官能 基はこれを妨害してはならない。官能性化（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚａｔｊｏ ｎ）のヌクレオシド部位はまた、構造的及び官能性の目的を最良に満たすために 、官能性化（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ）組成物の最適配置を排除してはな らない。
修飾オリゴヌクレオチドとターゲット化ＲＮＡとの間の完全な相補のためのアプ ローチは最も安定なヘテロ二重構造（ｈｅｔｅｒｏｄｕｐｌｅｘ）を生ずる。こ のことは、このヘテロ二重構造が本発明の反応性又は非反応性官能基にＲＮＡ開 裂又はＲＮＡ機能の破壊を開始させるために充分な半減期を有する筈であるので 、望ましい。
完全に形成された二重構造の半減期は結合した（ｔｅｔｈｅｒｅｄ）官能基の配 置によって非常に影響される。例えばワトソンークリック塩基対部位への配置の ような、官能基の不適切な配置は二重構造の形成を排除する。他の結合部位は配 列特異的結合を可能にするが、反応性官能基がＲＮＡ破壊を開始するために充分 な時間を何さないような、低い安定性であることが考えられる。
ＲＮＡ不活化に関して、結合した官能基の配置に関する他の重要な要素は、例え ば２°　−ヒドロキシル基による一般塩基基（ｇｅｎｅｒａｌ　ｂａｓｅ　ｇｒ ｏｕｐ）のような１ターゲツト化ＲＮＡ中に配置された受容的サブストレートに よる最適化分子認識ををさなければならないことである。例えばＸ線回折、化学 反応及び分子モデル化のような、種々な構造研究がこの配置を容易にする。
小さい溝中に！露されたような、二本鎖核酸のヌクレオシドの位置はワトソンー クリック塩基対又は二重構造安定性に影響を与えずに置換されることができる。
本発明の反応性官能基の結合のためには、このような部位が好ましい。本発明に よってこれらの部位に結合した反応性官能基はターゲット化ＲＮＡの開裂と破壊 とを開始し、このＲＮＡの活性を阻害することができる。
今までに文献に述べられたオリゴヌクレオチドの反応性官能基又はペンダント基 は殆ど排他的にリン原子上に、チミンの５−位置又はプリンの７−位置に配置さ れている。リン原子結合部位は反応性基を大きい溝と小さい溝の両方に接近させ るか、又は塩基対間にインターカレートさせることができる。しがし、内部リン 修飾はインターカレーター配置を例外としてヘテロ二重構造の安定性を大きく低 下させる。３°及び／又は５゛末端における結合は、１個又は２個のみの官能基 がオリゴヌクレオチド中に取り込むことができるにすぎないので、限定的である 。上首尾な開裂さえも開裂された部分を放出しない。複素環（塩基）のピリミジ ンとプリンの５−位置又は７−位置にそれぞれ配置された官能基は二重構造の大 きい溝中に存在し、ＲＮＡ　２°　−ヒドロキシル　サブストレートに近接しな い。
しかし、このような官能基配置は塩基対間に結合したインターカレーターへの結 合に利用することができる。さらに、このような配置はワトソンークリック結合 を妨害することができる。
ＲＮＡを開裂させないペンダント基も本発明のオリゴヌクレオチドに結合させる ことができる。ある一定の実施態様では、このような基は反応性官能基を有さな いが、オリゴヌクレオチドの薬力学的及び／又は薬物動態的特性の強化に役立つ 。この状況において、薬力学的性質の改良はオリゴヌクレオチドの摂取の改良、 オリゴヌクレオチドの耐分解性強化及び／又はＲＮＡとの配列特異的ハイブリッ ド形成の強化を意味する。薬物動態的性質の改良は、この状況において、オリゴ ヌクレオチドの摂取、分配、代謝又は排泄の改良を意味する。このようなペンダ ント基は化学反応を開始しない。これらは好ましくはアルキル鎖、ポリアミン、 エチレングリコール、ポリアミド、アミノアルキル鎖、両親媒性部分、レポータ ー基結合点、及び好ましい結合部位のいずれかに結合したインターカレーターを 念も。
特に、プリン若しくはピリミジン橋造の他の修飾が行われる場合又は官能性化に 適したバックボーン類似体（ａｎａ］ｏｇ）か見い出される場合に、本発明の要 旨から逸脱せずに当業者によって実施されうるように、ヌクレオシド、ヌクレオ チド又はオリゴヌクレオチドへのＲＮＡ開裂部分の結合のための他の位置が存在 する可能性がある。好ましくは１個又はせいぜい若干のＲＮＡ開裂部位を一般に 用いるへきであることは理解されよう。従って、当業者は本発明にょるＲＮＡ開 裂部分、薬力学的性質又は薬物動態改良基の結合手段の選択において大きな自由 裁量を有することになる。
本発明の組成物のＲＮＡ開裂部分は、ＲＮＡ活性の所望の調節を生ずる、それら の直接の課題の実施に有効でありうるように、設計される。これらの分子（特に アミド及びポリアミド）のＲＮＡ開裂部分にヘテロ原子置換を用いることが有用 であると考えられ、実際に、ターゲットｍＲＮＡと本発明の組成物との間のより 緊密な結合さえも保証するために、このような置換の一部が好ましい。
本発明のヌクレオシドは糖連結基を介してオリゴヌクレオチドの残部に一緒に結 合する。この連結基はオリゴヌクレオチドの糖部分を一緒に結合させて、本発明 の組成物のターゲツティング部分を形成することができる、ここに述べる構造の いずれかである。これらはホスホンエステル結合又はその誘導体を含むことがで きる。ホスホジエステル構造の誘導体は酸素に代わる硫黄、メチル、酸化メチル 、又はアミン基の置換を含むことかできる。糖ホスフェート核酸バックボーンは ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、メチルホスホネート又はホスフェ ートアルキル化部分として修飾することができる。ホスホジエステル結合は、上 述したように、置換した他のへテロ原子バックボーンであることもできる。
特定の作用理論に縛られることを望む訳ではないが、本発明で述べた反応性ＲＮ Ａ開裂官能基が下記のいずれか又は全てを含む機構によって作用すると考えられ る Ｉ　Ｈ結合、静電的相互作用、求電子性触媒又は鋳型効果によって助成された又 は助成されない一般酸／塩基触媒によるホスホジエステル結合の開裂；２、バッ クボーン糖の開裂： ３、塩基アルキル化開裂： ４、糖アルキル化、すなわち２°　−ヒドロキシル架橋。
本発明の重要な面の１つは本発明のターゲツティング部分の適当な反応性官能基 とターゲットＲＮＡとの位置と配向である。
ホスホジエステル結合開裂は、スキーム１［式中、Ｂ１とＢ、はヌクレオシド塩 基単位である］に示すように、それぞれｘ、ｙ、ｚによって表されるプロトン受 容性、プロトン供与性又は電子受容性官能基のいずれかを、このようなホスホジ エステル結合に隣接して効果的に配置することによって達成することができる。
非エステル結合ホスホリル酸素の１つに隣接してプロトン供与性基、Ｗ−Ｈを付 加的に配置すると、開裂をさらに強化することができる。
ある用途では、ＲＮＡ開裂を触媒するために１つの化学基で充分である。しかし 、本発明の他の用途では、２個の基又は３個の基さえもの組合せが好ましい。
当業者は特定の反応性官能基ｗ、ｘ、ｙ及び／又は２の選択において大きな自由 裁量を有する。同じ分子に１個以上の反応性官能基を用いる選択においても大き な自由裁量が存在する。
ターゲット反応性基による開′ｇＪ基の強力な結合と良好な分子認識とを得るた めの本発明の新規なアプローチは、アンチセンスＲＮＡ模倣体く１−ｉｃ）ヲ製 造してターゲット化ＲＮＡに結合させることである。それ故、適当なハイブリッ ド形成性を維持するヌクレアーゼｉ４性アンチセンスオリゴヌクレオチドを発見 するために、ｌＲｍ−活性関係アプローチを実施する。
アデニ７、グアニジノ、ノトンノ、チミジン及びこれらの塩基のある一定の類似 体の一連の２゛　−修飾ヌクレオシドを製造して、修飾ヌクレオシドとして配列 −特異的オリゴヌクレオチド中に固相核酸合成を介して挿入する。これらの新規 なアンチセンスすりゴヌクレオチドを、それらがヌクレアーゼによる分解に耐え 、未修飾のＨ（ｐａｒｅｎｔ）オリゴヌクレオチドに匹敵するハイブリッド形成 性を何する可能性に関して分析する。最初に、小さい電気陰性基を選択する、こ の理由はこれらの種類が必要なワトソンークリック塩基対水素結合（ハイブリッ ド形成）を立体的に妨害する傾向がないからである。しかし、２°　−位置にお ける原子又は基の電気陰性塵による電子変化が糖の配座に大きく影響する。
本発明のオリゴヌクレオチドは診断法、治療法に、及び研究用試薬とキットとし て使用可能である。治療用としては、タンパク質によって惹起される疾患に罹患 した動物にこのオリゴヌクレオチドを投与する。このような疾患の１種、パビロ マウイルス（ｐａｐｉｌｌｏ■ａｖｉｒｕｓ）感染症に対する典型的なアンチセ ンスアプローチは、１９８９年１２月４日出願の米国特許出願筒４４５．１９６ 号によって提供され、この出願の内容はここに参考文献として関係する。
オリゴヌクレオチドは、キャリヤー、増粘剤、希釈剤、緩衝液、防腐剤、界面活 性剤等をオリゴヌクレオチドの他に含むことができる薬剤組成物に配合すること ができる。薬剤組成物は例えば抗菌剤、抗炎症剤、麻酔薬等のような１種以上の 活性成分をオリゴヌクレオチドの他に含むこともできる。
この薬剤組成物は局部治療又は全身治療のいずれが必要であるがと、治療すべき 部分とに依存して幾つかの方法で投与することができる。投与は局所的（Ｉｌｌ 、膣、直腸及び鼻腔内を含める）、経口的、吸入によってであるが、又は例えば 静脈内ドリツプ、皮下、腹腔内若しくは筋肉的注射によって非経口的であること ができる。
局所投与用製剤は軟膏、ローノヨン、クリーム、ゲル、ドロップ、座薬、スプレ ー、液体及び粉末を含むことができる。通常の製薬用キャリヤー、水性、粉末若 しくは油性基剤、増粘剤等が必要であるか又は望ましい。被覆コンドームも有用 である。
経口投与用組成物は、粉末、顆粒、水中若しくは非水性媒質中の懸濁液又は溶液 、カプセル剤、サランｘ　（ｓａｃｈｅｔ）、又は錠剤を含む。増粘剤、風味剤 、希釈剤、乳化剤、分散助剤又は結合剤が望ましい。
非経口投与用製剤は、緩衝液、希釈剤、その他の適当な添加剤をも含有すること ができる無菌水溶液を含むことができる。
投与量は治療すべき状態の重症度と反応性とに依存するが、通常は１日に１回以 上の投与であり、治療過程は数日から数か月まで又は治癒が生ずるか或いは症状 の軽減か達成されるまで続く。当業者は最適投与量、投与方法及び反復速度を容 易に判断できる。
下記操作と実施例によって、本発明の詳細な説明する。これらの操作と実施例は 本発明を限定するものと解釈すべきではない。
本発明のヌクレオチドを製造したならば、これらを次に続いて本発明のオリゴヌ クレオチドに加える、このオリゴヌクレオチドは例えばアプライド　バイオシス テム（＾ｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ）、インコーホレイテンド（Ｉｎｃ ｏｒｐｏｒａｔｅｄ）　３８０　Ｂ又はミリゲノ／バイオサーチ（ＭｉｌｌｉＧ ｅｎ／Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ）　７５００若しくは８８００のような、標準固相自 動核酸合成器によって合成される。トリエステル、ホスホラミノット（ｐｂｏｓ ｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅ）又はハイドロジエン　ホスホネート（ｈｙｄｒｏｇｅ ｎ　ｐｂｏｓｐｂ。
ｎａｔｅ）カンプリング化学物質（ｃｏｕｐｌｉｎｇ　ｃｂｅｍｉｓｔｒｉｅｓ ）　（例えば、エム　カルーサ−（１１，ｃａｒｕｔｂｅｒ）、Ｏｌｉｇｏｎｕ ｃｌｅｏｔｉｄｅｓ、Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ　ｏｆ　Ｇｅ ｎｅ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ、、７−２４頁。
ンエイ、１ス、：］−ヘン（Ｊ、　Ｓ、　Ｃｏｂｅｎ）編集、ＣＲＣＰｒｅｓｓ 、　フロリダ州。
ポカレイトン、１９８９を参照のこと）をこれらの合成器によって用いて、所望 のオリゴヌクレオチドを得る。ビューケージ（Ｂｅａｕｃａｇｅ）試薬（例えば 、Ｊ、ＡｍＣｈｃｍ、Ｓａｃ、、１９９０．１１２．１２５３を参照のこと）又 は元素状硫黄（例えば、Ｔｃｔｒａｈｃｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ　１９８１． ．２２．１８５９をＷ照のこと）をホスホラミノット又はハイトロンエン　ホス ホネート化学物質（ｃ、ｈｃ組５ｅｒｉｃｓ）と共に用いて置換ホスホロチオエ ート　オリゴヌクレオチドを形成する。
本発明の化合物のある種の製造には、フユジティブ（ｆｕｇｉｔｉｖｅ）マスキ ングＭを用いる。このようなマスキング基は化合物の容易な合成を可能にする。
マスキング基を次に所望の官能基に転化させる。このような転化は好ましくは、 その後の反応のための標章的脱保護工程中に生ずる。この手順の例は、アミノ官 能基の導入のためのフタルイミド基の使用である。問題の化合物（例えばヌクレ オシド）の適当な位置に、例えばＮ−（ハロアルキル）フタルイミドのような適 当な中間体を介して、アルキルフタルイミドを結合させる。この誘導体化した化 合物を次に、ヌクレオシド合成器での標準オリゴヌクレオチド合成方法に用いる 。所望のオリゴヌクレオチドか得られた後に、これを適当な試薬を用いて合成器 サポートから開裂させる。この開裂用試薬はまたアルキルフタルイミドを所望の アルキルアミンに転化させる。この種の操作を拡大して、より長鎖のポリアミン 官能基を本発明のオリゴヌクレオチドに結合させることができる。第１アルキル アミノ官能基を有するヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドを他のＮ−（ハロア ルキル）フタルイミドによって処理する。この拡大官能基を次に末端アミン基を 生成するように処理する。これを繰り返して、ポリアミノ官能基をさらに拡大す ることかできる。或いは、拡大したポリアミノ官能基を最初に合成して、第１ア ルキルアミノ官能基と反応させて、ポリアミノ官能基を合成することができる。
図１に示す、典型的な調製例では、アデノシンを臭化プロパルギルによってアル キル化して、２′　−と３°−レンオイソマー（ｒｅｇｉｏｉｓｏ諭ｅ［）、そ れぞれ２と３の解合物を得た。この混合物は分割しなかったが、１．３−シクロ ロテトライソブロピルンシロキサンによって処理して、テ）・ライソブロピルン シロキサン（ＴＰＤＳ）誘導体を得た。この段階における精製は新規な２゛　− プロパルギル保護ヌクレオシド４をアデノシンから５４％収率で生じた。ｎＢｕ ｌＮ＋４＋Ｆによる４の脱保護はアデノシン２の２゛　−プロパルギルヌクレオ ノドを９０％収率で形成した。、３′　−レンオイソマ−３のＴ　１１　Ｉ）　 Ｓ保護形も４から＋＞ＩＩＩして、ｎＢｕ、Ｎ）１．Ｆによって脱保護して、新 規なヌクレオシド３を形成することができる。アルキン４とナフチルトリフレー ト５とのバランラム触媒作用クロスカップリング（ｃｒｏｓｓ−ｃｏｕｐｌ　ｉ ｎｇ）反応は結合ヌクレオシド生成物６を８３％収率で形成した。アルキン４と ナフチルシトリフレート７とのカップリングはナフチルトリフレート結合ヌクレ オ／ト生成物８を８６％収率で形成した。化合物８をスチル型（Ｓｔｊｌｌｅ− ｔｙｃ＋ｅｄ）パラジウム触媒作用カップリングによってイミダゾールオルガノ スタナノ９と反応させて、イミダゾイルナフチルヌクレオシド１０を４８％収率 で得た。
ｎＢｕ　４　Ｎ　Ｈｚ　Ｆによって１０を処理して、無保護イミダゾイルナフチ ルヌクレオシド１１を形成した後に、リンドラ−（Ｌｉｎｄｌａｒ）触媒によっ て選択的水素化して、ンスーオレフィン誘導体１２を得る。シヒドリド（ビカル ボナト）ビス−（トリイソプロピルホスフィン）ロンラム（Ｉｌｌ）によって１ １を選択的水素化することによって、トランス−オレフィン１３を得ることもで きる。１１．１２又は１３をパラジウムによってさらに水素化すると、アルキル 結合（ｔｅｔｈｅｒｅｄ）イミダゾイルナフチルヌクレオシド１４が得られる。
図２に示すように、プロパルギルアミンによる８のパラジウム触媒作用カップリ ングを実施することによって、アミノプロピルナフチル結合ヌクレオシド１５か 製造され、カルボジイミドが１５と保護ビス−アミノプロピルイミダゾイルグリ コール酸１６との縮合を仲介する。これによって、ビス−イミダゾイル官能性化 ヌクレオシド１７が得られる。１０に関して述べたような、１７の立体選択的還 元がシス、シス−及びトランス、トランス−誘導体１８と１９をそれぞれ形成す る。１７．１８又は１９をさらに還元すると、アルキル結合ビス−イミダゾリル 官能性化ヌクレオシド２０が得られる。
トリフルオロメタンスルホン酸無水物によるナフタレンジオール２１の処理によ って、図３に示すように、新規な化合物７−ヒドロキシ−２−０−）リフリルナ フタレン２２を３４％収率で合成した。同時に、２．７−ンー０−トリフリルナ フタレン７が２６％収率で得られた。化合物２２をＬ−プチルシメチンリルによ って保護して、５を７３％収率で得た。５とオルガノスタニルイミダゾール９と のバラノウム触媒作用カップリングは新規な保護イミダゾイルナフタレン化合物 ２３を３８％収率で形成した。、１−プチルンメチンリル基の脱保護は新規なイ ミダゾイルナフタレン化合物２４を７６％収率で生成した。報告された保護イミ ダゾール２５を塩化トリーローブチルスズによって処理して９を５２％収率で形 成することによって、保護された新規なオルガノスタニルイミダゾール９を製造 した。
図４に示すように、タッグ（Ｔａｎｇ）等、Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、１９ ７８゜３９１８の文献方法に従って、２５とエチルホルメートとの反応によって 、保護されたビスーイミダノイルカルヒノール２６を６９％収率で合成した。ヒ ドロキシル官能基をペンシルクロロメチルエーテルによって保護して、２７を８ ０％収率で得た。２５とＤＭＦ及びブチルリチウムとの反応によって２−アルデ ヒド誘導体を形成し、これをンアノメチルジエチルホスホネートによって処理し て、修飾ウィツテイヒ（ｖｉｔｔｉｇ）生成物２９を得ることによって、保護さ れたビス−アミノプロピルイミダゾイルグリコール酸１Ｇを合成した。ｐｔｏ２ による２９の水素化はアミノプロピルイミダゾール３０を生成し、これを５ＴＡ ＢＡＳＥ　（１゜１、　４．　４−テトラメチル−１，４−ンクロロシルエチレ ン）によって保護すると、アミノ保護イミダゾール３１か得られる。３１とエチ ル　Ｎ、Ｎ−７メチルオキサメートとの反応によって、保護されたビス−アミノ プロピルイミダゾイルグリコール酸１６が得られ、これを脱保護すると、ビス− アミノプロピルイミダメイルグリコール［３２が得られる。３１をエチルホルメ ートによって処理して３３を得ることによって、ビス−アミノプロピルイミダゾ イルカルビノール３４か得られる。脱保護かビス−アミノプロピルイミダゾイル カルビノール３４を生成する。
図５は化合物の代替え合成法を示す。
図６〜］２は本発明の他の化合物系列の合成を説明する。これらは化合物１０Ｇ 、１０９及び１１３によって説明するように、１個の金属イオンに配位するクリ −バ一部分を製造するための合成工程を含む。これらの図は化合物１３４．１３ ５及び１３７によって説明するように、２個の金属イオンに配位するクリ−バ一 部分を製造するための合成工程を含む。
下記機器　’Ｈ−ＮＭＲ：　Ｖａ　ｒ　ｉ　ａｎ−Ｇｅｍｉ　ｎ　ｉ　−２００ （１９９，９７５ＭＨｚ）　、１３Ｃ−ＮＭＲ：Ｖａ　ｒ　ｉ　ａｎ−Ｇｅｍｉ 　ｎ　１−２００　（５０，２８９ＭＨｚ）を用いて、ＮＭＲスペクトルを得た 。ＮＭＲスペクトルはジュウテリオクロロホルム（内部基準としてテトラメチル シラン）又はヂメチルスルホキシドーｄ６を溶媒として用いて記録した。個々の シグナルの多重性を表示するために下記略号を用いた。ｓ−一重線、ｄ−二重線 、を−三重線、ｑ−四重線、Ａ３ｑ＝ａｂ四重締、ｍ＝多重線、ｄｄ＝二重の二 重線、ｂｒ　ｓ−幅広一重線。
質量スペクトルはｖＧ７０−３ＥＱ機器（ＶＧ　Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　（Ｆｉ ｓｏｎｓ））において、迅速原子衝突イオン化（７ｋＶ　Ｘｅ原子）を用いて得 た。
カラムクロマトグラフィーの溶媒比は体１’ｌ／体積として記載する。溶媒の蒸 発は、池に記載しない限り、３０℃において真空下（６０ｔｏｒｒ）で実施した 。
実施例１ ９−（２−（０−２−プロピニルオキシ）−β−Ｄ−リボフラノシル）アデニン 、２ アルゴン雰囲気下でＴｔｌＦ　（１０ｍＬ）中に化合物４を溶解し、この反応混 合物にＩＭのフン化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム（３，６＋ｎＬ、　３．６ ミリモル）を加えて不透明液を生成させた。反応混合物を３時間撹拌した後、溶 媒を減圧にて蒸発除去して油状物を生成させ、ＥｔＯ＾ｃＪｅｏｌ！　（８０： ２０）を溶離剤として使用して、この油状物をカラムクロマトグラフィーにより 精製した。表記化合物２を白色固体として単離し　（５０３ｍｇ、　９０％）、 これを還流温度にてメタノールから再結晶して白色結晶を得た（ｍｐ、　１４７ −１４８°Ｃ）　。’Ｉｔ−ＮＭＲ（２００Ｍｔｌｚ、　Ｍｅ２ＳＯ−ｄｓ）　 ＋　８．３６　（ｓ、　１．　j１８） 、　８．１３　（ｓ、１．８２）、　７．３６　（ｂｒ　ｓ、　２．　ＮＨ）、 　６．００　（ｄ、　１．８１’、　Ｊ、’、２’＝６．２gｚ）。
５．４８　（ａ　］、　５’ＯＨ）、　５．３５　（ｄ、　１．３’０Ｉ（）、 　４．６８　（ｍ、　１．１１２’）、　４．３２　（ａ＋A１．　［３’）。
４２１（ＡＢｑ、　２．０ＣＩＩｚＣＣ，Ｊ　＝　１５．７１１ｚ）、　３．９ ８　（ｍ、　ｌ、　１１４’）、　３．５８　（ｍ、　２．@ｌ１５’ａ。
■５°ｂ）、　３．２７　（ｓ、　１．　ＣＣｔｌ）、ＦＴＩＲ（ＫＢｒ）：　 ２１１４ｃｍ−’（ｗ、　ＣＣｔＤ、元素分析結果二０１１ＬＨ１５Ｎ５０４に 対する計算値、　Ｃ：　５１．１４．１１．４．９５．　Ｎ：　２２．９４．実 測値、　ｃ；　５０．９８゜）■、４．８６．１１：　２２．８］。
実施例２ ９−（２−（０−２−プロピニルオキシ）−３，５−０−テトライソブロピルジ ンロキサニルーβ−Ｄ−リボフラノノル）アデニン、４゜アルゴン雰囲気下で高 温の無水ＤＭＦ　（２００ｎＬ）中にアデノシン（１０，７ｇ、　４０．０ミ１ １モル）を溶解し、本溶液を５°ＣＩ：冷却し、ＮａＨ（１，７６ｇ、　４４ミ リモル）をオイル中６０％分散液として加えた。反応混合物を周囲温度にて３０ 分撹拌した後、臭化プロパルギル（４，９０ｍＬ、　４４ミリモル）をトルエン 中８０％溶液としてンリンジにより加えた。反応混合物を２４時間撹拌した後、 減圧（１トル）で４０℃にて溶媒を蒸発除去してガムを得た。この粗Ｖ混合物を 周囲温度で減圧（１トル）にて１８時間乾燥し、無水ピリジンとともに２回蒸発 し、次いで高温の無水ピリジン（１２０ｎＬ）中に部分的に溶解させた。１，３ −ノクロロテトライソブロピルジノロキサン（１４，３５ｍＬ、　４５．６　ミ リモル）を加え、反応混合物を周囲温度で４時間撹拌し、減圧（１トル）にて４ ０°Ｃで溶媒を蒸発除去して残留物を得、これをＥｔＯ＾Ｃ（２００１！ｌＬ） 中に懸濁させた。有機相を塩水で洗浄し、分離し、モしてＭｇ５Ｏ，で乾燥した 。
減圧で溶媒を蒸発除去して油状物を得、ヘキサン−ＥｔＯ＾Ｃ（２５ニア５）を 溶離液として使用してカラムクロマトグラフィーにより精製した。表記化合物が 白色固体として得られた（１１．８ｇ、　５４％）。’Ｈ−ＮＩＩＲ（２００Ｍ Ｈｚ、　ＣＤＣＬｓ）　＋　ｄ　８．３２　（ｓ、　１．　Ｈ８）。
８．０８（ｓ、　１．　Ｈ２）、　６．０３　（ｓ、　１．　Ｈ１’）、　５． ６９　（ｂｒ　ｓ、　２．　ＮＨ）、　４．８６　（ｄｄ、@１．　Ｈ３°）。
４．５９　（ＡＢｑ、　２．０ＣＨ２ＣＣ，Ｊ　＝１５．５Ｈｚ）、４．５３　 （ｄ、　１．　Ｈ２’、　ｈ’、ｓ’＝　４．７０Ｈｚ）。
４．１８　（ｍ、　１．　ｌＩ４°）、　４．１２　（ｍ、　２．　）１５’　 、、　＋１５’ｂ）、　２．４１　（ｔ、　１．　ＣＣＨ，i　＝　２．２８Ｈ ｚ）。
１．０８　（ｍ、　２Ｂ、　ＳｉＣＨＭｅ２）、ＦＴＩＲ（ＮａＣ１）：　２１ １８ｃｍ−’（ｗ、　ＣＣ）ｌ）、　元素分析結果。
Ｃ２ＢＢ、１Ｎ３０５Ｓｉ２に対する計算値、　Ｃ：　５４．８２．　）Ｉ；　 ７．５５　Ｎ；　１２．７９．　Ｓｉ：　１０．２２．　実測値、　Ｃ；　５４ ．９４．　Ｈ：　７．６３．　Ｎ；　１２．６７、　Ｓｉ；　１（１，１３゜ア ルゴン雰囲気下で無水ピリジン（１２０ｍ１．）中に化合物２２を溶解し、ｔ− ブチルジメチルクロロシラン（５，３７ｇ、　３５．６ミリモル）を加えた。反 応混合物を周囲温度で２４時間撹拌し、水中（１２０ｎＬ）に注ぎ込み、エーテ ル（３Ｘ　１２０ｎＬ）で抽出した。有機相を分離し、水（１２０ｎＬ）　、１ ０％塩酸（１２０ｎＬ）　、水（１２０＋ａＬ）　、および塩水（１２０１ｎＬ ）で洗浄した。分離後、有機相をＭｇ５Ｏ、で乾燥し、溶媒を減圧にで蒸発除去 して油状物を得、これをヘキサン−ＥｔＯＡｃ　（９０：１０）を溶離液として 使用してカラムクロマトグラフィーにより精製した。表記化合物が油状物として 得られた（８．１０ｇ、　７３％）　。’ｌ（−ＮＭＲ（２０１）ＭＨｚ、　Ｃ ＤＣ１３）：　ｄ　７．８６　（ｗ、　６．　ＨＡｒ）、　１．O２　（ｓ。
９、　Ｍｅ３）、　０．２６　（ｓ、　６．０１３）。
化合物４　（１，０５２ｇ、　１．９２ミリモル）、化合物５　（７８０ＩＩ１ ｇ、　１．９２ミリモル）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム （０）　（２２２ｍｇ、　０．１９２ミリモル）、ＣｕＩ　（７３ｍｇ、　０． ３８４ミリモル）、およびＮＥｔ３　（０，５４ｍＬ、　３．８４ミリモル）を 、アルボン雰囲気下、無水ＤＭＦ　（１ｈＬ）中で周囲温度にて撹拌した。３時 間後、減圧（１トル）にて４０℃で溶媒を蒸発除去して油状物を得、これをＥｊ ＯＡｃ中に溶解した。有機相を水で洗浄し、Ｍｇ５Ｏ，で乾燥し、そして溶媒を 減圧にて蒸発除去して泡状物を得た。ヘキサン−ＥｊＯＡｃ　（５０：５０）を 使用してカラムクロマトグラフィーにより本生成物を精製して、表記化合物６を 泡状物として得た（１．２６ｇ、　８３％）。
’Ｈ−ＮｉｌＲ（２００ＭＨｚ、　ＣＤＣｌ５）　：　ｄ　８．２ｇ　（ｓ、　 Ｌ、　Ｈ８）、　８．１０　（ｓ、　１．　Ｔ１２）、　７D７２−７゜ ０４１６、　ＨＡｒ）、　６．１１　（ｓ、　１．　Ｉｌｌ’）、　５．６０　 （ｂｒ　ｓ、　２．　Ｎｉ＋）、　４．８５　（ＡＢｑ、　Q．０ＣＨｔ ＣＣ，Ｊ　＝　１５．８Ｈｚ）、　４．８３　（ｍ、１．　ｌ１３’）、　４． ６８　（ｄ、　１．　）１２’）、　４．２１　（ｉ、　１D１４’）、　４゜ １３　（ｍ、　２．　Ｈ５°ａ、　！４５’ｂ）、　１．０６　（ｍ、　２８． ８ｉＣＨＭｅＪ、　１．０１　（ｓ、　９．　（ＣＬ）り、@０．２４ （ｓ、　６．　Ｃ）Ｉ、−３ｉ）、ＦＴＩＲ（ＮａＣ１）：　２２５３ｃｒ’（ ｖ、　ＣＣｔｌ）、元素分析結果、Ｃ４１Ｈ８１Ｎ、０６Ｓｉ３に対する計算値 　ｃ；　６１．２３．　Ｈ；　７．６４．　Ｎ、　８．７１．　実測値・Ｃ＋　 ６１．０４．　）ｌ；７．７８．　Ｎ；　８．２６゜ ２−（７−ヒドロキシ）ナフチル　トリフルオロメタンスルホネート２２２．７ −ナフタレンジオール（１５，０ｇ、　９３．６ミリモル）をアルゴン雰囲気下 で無水ピリジン（２２５＋ｎＬ）中に溶解し、本溶液を一２０℃に冷却し、トリ フルオロメタンスルホン酸無水物（１７，３ｍＬ、　１０３　ミリモル）を／リ ンダにより徐々に加えた。
反応混合物を一２０℃で８時間撹拌し、水中（２２５ｍＬ）に注ぎ込み、そして エーテルで抽出した（３　Ｘ　２２５ｍ１、）。有機相を分離し、１０％塩酸（ ２２５ｍＬ）　、水（２２５ｍＬ）、および塩水（２２５ｍＬ）で洗浄した。有 機相を分離し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、溶媒を蒸発除去して油状物を得た。この油 状物を、ヘキサン−ＥｔＯＡｃ　（７５：２５）を溶離液として使用してカラム クロマトグラフィーにより精製して、表記化合物２２を油状物として得た（９． ３＋、ｇ、　３４％）。’ｔｌ−ＮｉｌＲ（２００ＭＨｚ、　Ｍｅ２ＳＯ−ｄｏ ）　：　ｄ　１０．１３　（ｓ、　１．　nＨ） 、　７．８９−７．１６　（ｍ、　６．　ＨＡｒ）１３Ｃ−ＮＭＲ（５０ＭＩＩ Ｚ、　ＣＤＣ１３）　：　ｄ　１５４．９　（Ｃ２）、　１S７．８ （Ｃ７）、　１３４．８　（ＣＬ）、　１３０．５．１３０．０．１２７．８　 （Ｃ４−）、　１１９　（ｑ、　ＣＦｓ、　Ｊ−、ｒ＝　３Q０Ｈｚ）。
１１９．３．１１７．７．１１７．０．　１０９．７゜化合物７も油状物として 得られた（１０．３４ｇ、　２６％）　。’Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、　Ｍｅ ２ＳＯ−ｄ６）　：　ｄ　８．２８　（ｍ、　４．　ｔｌＡｒ）、　７．７０　 （ｍ、　２．@ＨＡｒ）。
１３Ｃ−ＮＭＲ（５０ｉ１Ｈｚ、　Ｍｅ２ＳＯ−ｄ６）　：　１４７．８　（Ｃ ２，Ｃ７）、１３３．３　（Ｃ８，）、　１３１．３　（ＣP，Ｃ８）。
１２Ｌ２　（Ｃ３，Ｃ６）、　Ｌｉ９．８　（Ｃ４，Ｃ５）、　Ｌｉ８．３　（ ｑ、　ＣＦ、　Ｊｃ、　Ｆ＝　３１８＋ｌｚ）、　Ｌｉ５．n（Ｃ４，） 。元素分析結果、Ｃ１□Ｈ６０６Ｓ２Ｆ６に対する計算値：　ｃ；　３３．９７ ．　Ｉｔ、　１．４２．　Ｓ；　１５．１１゜Ｆ、　２６．８７゜　実測値：　 Ｃ：　３４．００．　Ｈ；　１．３６．　ｓ；　１５．１．１．　Ｆ、　２６゜ ８１゜化合物４　（３，４３ｇ、　６．２７ミリモル）と化合物７　（５３２ｇ 、　１２．５ミリモル）を無水ＤＭＦ　（５５ＩＩＩＬ）中に溶解した。テトラ キス（トリフェニルホスフィン）ツクラジウム（０）　（２１７ｍｇ、　０．１ ９ミリモル）　、ＣｕＩ　（７２ｍｇ、　０．３８ミリモル）、およびＮＥｔ３ （０，５８ｍｌ、４．１ミリモル）を加え、反応混合物をアルゴン雰囲気下で周 囲温度；こて１時間撹拌した。次いで、追加のテトラキス（トリフェニルホスフ ィン）／（ラジウム（０）　（２１７ｍｇ、　０．１９ミリモル）　、ＣｕＩ　 （７２ｍｇ、　０．３８ミリモル）、及びＮＥｔ３（０，５８ｍｌ。
４．１ミリモル）を加え、反応混合物を周囲温度にてさらに２時間撹拌−反応混 合物を５℃に冷却し、そしてＥｈＯ（５５ｍｌ）と水（５５ｍｌ）を加えｔこ。
５分間撹拌した後、有機相を分離し、水相をＥｔ２０で抽出しく２　Ｘ５０ｍＬ ）　、Ｅｔ、Ｏ抽出物を合わせ、Ｍｇ５（ｌａで乾燥し、そして溶媒を減圧にて 蒸発除去して油状物を得ｔこ。この粗製物を、ヘキサン−ＥｔＯＡＣ（５０：５ ０）を使用してカラムクロマ］・グラフィ一により精製して、表記化合物８を泡 状物として得た（４．４８ｇ、　８６％）。ＩＨ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、Ｍｅ ２ＳＯ−ｄｓ）　：　８．２３　（ｓ、１．　８８）、８．０５　（ｓ、１．　 Ｈ２）、８．１６−７．４４　（１１，６，Ｈ`ｒ）。
７．３４　（ｂｒ　ｓ、　２．　Ｎ１（）、　６．０７　（ｓ、　１．　）１１ °）、　５．０４　（ｍ、　１．１！２°）、　４．８１　b＾Ｂｑ、　２゜ ０ＣｔｈＣＣ，Ｊ　＝　１５．９Ｈｚ）、　４．８２　（ｍ、　１．１１３’） 、　４．０４　（ｍ、　１．１１４°）、　３．９８　（ｍA　２．　Ｈ５゜ ａ、　Ｈ５’ｂ）、　１．０２　（ｍ、　２８．　ＴＰＤＳ）。”Ｃ−ＮＭＲ（ ５０ＭＨ２，ＣＤＣ１３）　：　１５５．６．１５３．０゜１４９．０．１４７ ．５．１３８．８．１３２．８．１３１．６．　＋３１．５．１３０．４．１２ ９．７．１２７．９．　］、２７．６゜１２１．７．１２０．３．１１９．０． １１８．７　（ｑ、　ＣＦ、　ＪＣ，ｒ・３２０Ｈｚ）、　８８．６．８６．４ ．８１．４．８０．P゜ ７７．２．６９．６．５９．８．５９．１．１７．０　（ＣＨ３）、　１２．７ 　（ＣＨ）。”Ｆ−ＮＭＲ（１８８ＭＨｚ、　ＣＤＣｌ５）ｄ　ＩＯ２，６ｏＦ ＴｉＲ（ＮａＣ１）：　２２３１ｃｍ−’（ｖ、ＣＣＩ（）。
−ツメチルイミダゾール−１−スルホンアミド、９゜アルゴン雰囲気下で、化合 物２５　（２０，６ｇ、　７１．２ミリモル）を無水ＴＨＦ　（２００ｍＬ）中 に溶解した。本溶液を一７８℃に冷却し、１．６Ｍのｎ−ＢｕＬｉ　（４’１ｍ Ｌ、　７８．４ミリモル）を加えた。反応混合物を一７８℃で２５分撹拌した後 、塩化トリブチル錫（２１，２６ｍｌ。
７８４ミリモル）をノリンジにより加え、本混合物を静置して周囲温度にした。
周囲温度で２時間撹拌した後、反応混合物を氷水（２００ｍＬ）中に注ぎ込んだ 。エーテル（２００ｍＬ）を加えて、混合物を撹拌した。有機相を分離し、Ｍｇ ＳＯ４で乾燥し、溶媒を蒸発除去して油状物を得、この油状物を、ヘキサンで、 次いでヘキサン−ＥｊＯＡｃ　（９０：１０）を使用してカラムクロマトグラフ ィーにより精製して、表記化合物９を油状物として得た（２１．２１．ｇ、　５ ２％）。本生成物は光が当たらないようにし、０℃で保存した。’Ｈ−ＮｌＩＲ （２００ＭＩＩｚ、　ＣＤＣｌ５）　：　ｄ　７．１６　（１，Ｓ、　）１４） 、　２．６８（ｓ、　６．　ＮＣＨ３）、　１．５−０．８　（ｍ、　Ｂｕ）、 　０．９４　（ｓ、　９．　Ｍｅ３）、　０．４０　（ｓ、　６．３ｉＣg３） 。
実施例８ ９−（（４−（７−（５−Ｎ、Ｎ−ジメチルイミダゾール−１−スルホンアミド ）ナフチル）−Ｏ−２−プロピニルオキシー）−３，５−０−テトライソプロピ ルノノロキサニルーβ−Ｄ−リボフラノシル））アデニン、１０化合物８　（１ ，ＯＯｇ、１．２１ミリモル）、化合物９　（７７７ｍｇ、　１．３４ミリモル ）　、ＬｉＣ１（１４９ｍｇ、　３．５１ミリモル）、テトラキス（トリフェニ ルホスフィン）パラジウム（０）（１４０ｍｇ、　０．１２ミリモル）、および ２，６−ノーｔ−ブチル−４−メチルフェノール（数個の結晶）を無水メトキノ エチルエーテル（］、ＯｍＬ）中で混合し、反応混合物をアルゴン雰囲気下にて １２０℃て２時間加熱した。反応混合物を周囲温度に冷却し、ＥｊｉＯ（１０ｍ ｌ）と水（１０ｍｌ、）を加え、本混合物を数分撹拌した。有機相を分離し、水 相をＥｔ、Ｏて抽出しく２　Ｘ　１０ｍ１、）　、Ｅｔ２０抽出物を合わせてＭ ｇＳＯ４て乾燥し、た。溶媒を減圧にて蒸発除去して油状物を得、この油状物を 、ＥｔＯＡｃを使用してカラムクロマトグラフィーにより精製して、表記化合物 を泡状物として得た（４７３ｍｇ、４８％）。　’ｔｌ−ＮＭＲ（２００Ｍｔｌ ｚ、ＣＤＣ１３）　：　８．２５　（ｓ、１．　Ｔ１８）、８．１５　（ｓ、１ K １１２）、　８．　ＩＩ　（ｓ、　１．１１２−ＩＩＩ＋）、　７．９０−７． ４４　（ｍ、　８．　ＨＡｒ）、　７．１５　（ｓ、　１．@）１４４ｍ）、　 ６．３４ （ｂｒ　ｓ、　２　＼Ｉｔ）、　６．１２　（ｓ、］、　Ｉｌｌ’）、　４．８ ８　（八Ｂｑ、　２．０ＣＩ＋、、ＣＣ，Ｊ　＝　１６１（y）、　４．８２ ｔｄ、１．　ｌ１２’）、　４．６８　（ｄ、　１．１１３’、　Ｊ２°、３’ 　□　４．５Ｈｚ’）、　４．２３　（ｍ、　］　旧’）、@４．１５　（１１ １゜ ２、Ｈ５°ａ、　Ｈ５°ｂ）、　２．４３　（ｓ、　６．　ＮＣＨｓ）川、０７ 　（ｍ、　２８．　ＴＰＤＳ）。１３Ｃ−ＮＭＲ（５０１１gｚ。
ＣＤＣ１３）　：　１５５．１　（Ｃ６，１５２，３（Ｃ２）、　１４９．０　 （Ｃ４）、　１４０．３．１３９．０　（Ｃ８，Ｃ２−Ｈ５j。
１３２．５．１３２．Ｑ、　１３１．８．１３１．６．１３１．４．１２９．６ ．１２９．４．１．２ｇ、８．１２７．７．１２７．５゜１２６．４．１２０． ６．１２０．２　（Ｃ５，Ｃ５−Ｔｍ）、　ｇｇ６（Ｃ１°）、　８７．０　（ ＣＣ）、　８５．６　（ＣＣ）、８１D４ （Ｃ４’）、　８０．０　（Ｃ３°）、　６９．６　（Ｃ２°）、　５９．７． ５９．１　（Ｃ５°、　０ＣＨ２ＣＣ）、　３７．４　（ＮbＩ＋３）。
１７．０　（ｍ、　ＣＭｅ３）、　１２．７　（ｍ、　５ｉＣＩｈ）。ＦＴＩＲ （ＫＢｒ）　：　２２３０ｃｍ−’（ｖ、ＣＣ）。
化合物１０（１ミリモル）をＴＨＦ　（５ｍＬ）中に溶解し、ＩＭのｎ−Ｂｕ４ ＮＨＪ　（３ｍＬ、　３ミリモル）を反応混合物に加えた。反応混合物を数時間 撹拌した後、溶媒を蒸発除去して油状物とし、この粗製物をカラムクロマトグラ フィーによって精製して、化合物１１．９−　（（４−（７−（５−Ｎ、Ｎ−ツ メチルイミダゾール−１−スルホンアミド）ナフチル）−０−２−プロピニルオ キ／−）−β−Ｄ−リボフラノシル））アデニンを得た。サイドアームを備えた 大気圧水素化装置に接続されｔこ反応容器中に、炭酸カルシウム担持パラジウム （］、ｇ）とベンゼン（３０ｍｌ）を入れた。容器を脱気し、水素で３回再充填 することによって、系中の空気を水素で置き換えｔコ。
ガスが吸収されなくなるまで、触媒壁濁液を撹拌した。次し１で化合物１１（１ ，７ミリモル）をベンゼン（３０ｍｌ）中に溶解し、反応容器に加えた。約５分 で２０７ｍ１　（４゜９モル）のガス（２２℃バ４０トル）が吸収されるまで、 本混合物を、水素雰囲気下にててきるだけ激しく撹拌した。本混合物をガラス漏 斗により濾過し、触媒をベンゼンで洗浄した（３　Ｘ　２ＯｍＬ）。減圧にて溶 媒を蒸発除去し、得られた生成物を、ヘキサン−ＥｔＯＡＣを溶離液として使用 してカラムクロマトグラフィー（二より精製して化合物１２．　９　（（４（７ （５Ｎ、Ｎ−ツメチルイミダゾール−ホノアミド）ナフチル）−０−２−７スー プロベニルオキシー）−βーＤー＋ノＳＳフラノノル））アデニンを得た３３ ノヒドリド（バイカーボナート）ヒス（トリイソプロピルホスフィン）０ジウム （Ｉｌｌ）　（０，１７ｇ、　０．３５ミリモル）のトルエン（１ｈＬ）溶液に 、化合物１１　（０，１６ミリモル）を加えた。無色の溶液が赤橙色に変わり、 Ｃ０２が発生するようになった後、反応混合物の濃縮残留物をヘキサン−ＥｔＯ Ａｃで洗浄した。洗浄液を蒸発除去すると油状物が得られ、この油状物を、ヘキ サン−ＥｔＯＡｃを溶離液として使用してカラムクロマトグラフィーで精製する ことにより化合物１３．　９−（（４−（７−（５−Ｎ、Ｎ−ジメチルイミダゾ ール−１−スルホンアミド）ナフチル）−０−２−トランス−プロペニルオキシ −）−β−Ｄ−リボフラノシル））アデニンを得た。
炭素担持５％パラジウム触媒（０，２ｇ）を収容したパーボトル（Ｐａｒｒ　ｂ ｏｔｔｌｅ）中にて、無水エタノール（１２５ｍＬ）中に化合物１１　（０，４ ７モル）、化合物１２　（０，４７モル）、または化合物１３　（０，４７モル ）を溶解した。このパーボトルをバー水素化装＠　（Ｐａｒｒ　ｈｙｄｒｏｇｅ ｎａｔｉｏｎ　ａｐｐａｒａｔｕｓ）に繋げ、６０ｐｓｉの初期圧力にて振盪し た。
２時間後、水素の吸収が止まった。本混合物を２回自然濾過し、溶媒を減圧にて 蒸発除去して油状物を得た。この油状物を、ヘキサン−ＥｔＯＡｃを溶離液とし て使用してカラムクロマトグラフィーにより精製して表記化合物１４を得た。
方法Ｂ バー装置において、酸化パラジウム（ＩＩ）を触媒として、そしてエタノールを 溶媒として使用し、周囲温度にて化合物１０を水素化して化合物１０ａ、９−（ （４−（７−（５−Ｎ、Ｎ−ジメチルイミダゾール−１−スルホンアミド）ナフ チル）−〇−２−プロビルオキシー）−３，５−０−テトライソプロビルジシロ キサニル−ｂ　−Ｄ−リボフラノノル））アデニンを得た（収率９５％）。’Ｈ −ＮＭＲ（２００Ｍｌ（ｚ、　ＣＤＣ化合物１０ａをフッ化テトラブヂルアンモ ニウムを使用して通常の方法で処理して、表記化合物１４を８５％の収率で得た 。
化合物Ｉ４のイミダゾイル基を、メタノール−水中てのナトリウムメトキッドと の反応によって脱保護させて表記化合物１４ａを９５％の収率で得た。Ｉｌｌ− ＮＭＩ？　（２００ＭＨｚ、　Ｍｅ２Ｓｏ−δ６）　：　δ１２．２１　（ｂｒ 　ｓ、　ＩＴＩ、　Ｉｍｔり、　８．４２　（ＬＨ，ｓ、ＨＣ２）、　８．１５ @（ｓ、　Ｌ Ｈ，ＨＣ８）、８．１２　（ｓ、ＩＴＩ、＋１−Ｉｍ）、７．９−７．０　（ｓ 、６Ｈ，ｎａｐｈ）、７．４２　（ｓ、２Ｈ，ＮＨ２）。
７．４０　（ｓ、　１Ｂ、　Ｉ＋ａ−Ｈ）、　６．０６　（ｄ、　ＩＨ，Ｈ１’ ）、　５．４５　（ｂｒ　ｓ、　１．　Ｉ（Ｏ）、　５．２T　（ｂｒ　ｓ、　 １゜ １１０）、　３．２　（ｍ、　２Ｂ、　ＣＨ２）、　２．６２　（１１，２Ｈ， ＣＨ２）、　１．７９　（１１，２１１，ＣＨＩ）。
化合物１４ａを塩化トリメチルノリルで処理し、次いで塩化ベンゾイルと反応さ せることによって、表記化合物１４ｂを７８％の収率で得た。
化合物１４ｂを、通常の方法で塩化ンメトキシルトリチルと反応させて化合物１ ４ｃ、Ｎ６−ペンゾイルー９−　（（４−（７−（５−イミダゾイル−１−（４ ′、４”−ジメトキシルトリチル））−ナフチル）−０−２−プロピルオキシー ）　５’−０−（４’、　４”−ジメトキンルトリチル）−ｂ−Ｄ−リボフラノ シル））アデニンを８５％の収率で得た。
化合物１４ｃを、ンイソプロピルアミンヒドロテトラゾリドおよびビス（ジイソ プロピルアミノ）（ｂ−ノアノエトキノ）−ホスフィンで処理して、表記化合物 １４ｄを９１％の収率で得た。”Ｐ−ＮＭＲ（８０Ｍｌ（ｚ、　ＣＤＣｌ５）　 ：　δ１５１．０　（ｄ）。
プロパルギルアミン（１，９２ミリモル）、化合物８　（１，９２ミリモル）、 テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）　（２２２ｍｇ、　０ ．１９２ミリモ／ｌ／）　、Ｃｕｌ（７３ｍｇ、　０．３８４ミリモル）、およ びＮＥｔ３　（０，５４ｍＬ、　３．８４ミリモル）を、無水ＤＭＦ（１０＋ａ Ｌ）中、アルゴン雰囲気下にて周囲温度で攪拌した。３時間後、減圧（１トル） にて４０℃で溶媒を蒸発除去して油状物を得、この油状物をＥｔＯＡｃに溶解し た。有機相を水で洗浄し、Ｍｇ５Ｏ，で乾燥した。溶媒を減圧にて蒸発除去して 泡状物を得、本生成物をヘキサン−ＥｔＯＡｃを使用してカラムクロマトグラフ ィーにより精製して表記化合物１５を得た。
実施例１４ ビス（４−（２−（ｔ−ブチルジメチルンリル）−５−（３−（Ｎ、Ｎ−１，１ ゜４．４−テトラメチルシルエチレン）アミノプロピル）−Ｎ、Ｎ−ジメチルイ ミダゾール−１−スルホンアミド）〕グリコール酸、１６アルゴン雰囲気下にて 、化合物３１　（２３ミリモル）を無水ＴＨＦ　（２００ｍＬ）中に溶解し、反 応混合物を一７８℃に冷却した。ｎ−ＢｕＬｉ　（ＬＭ、　２５ｍＬ、　２５ミ リモル）を加え、反応混合物を一７８℃で２０分撹拌した。エチルＮ、Ｎ−ジメ チルオキサメート（１１，５ミリモル）を加え、反応混合物を徐々に周囲温度に 加温した。水（１０ｍＬ）を、次いでＥｔ２０　（２００１１Ｌ）を加えた。有 機相を分離し、溶媒を減圧にて蒸発除去して得られた精製物を、カラムクロマト グラフィーによって精製して表記化合物１６を得た。
化合物１６（１ミリモル）を無水ＤＭＦ　（５ｍＬ）とノルクロへキシルカルボ ジイミド（１，１ミリモル）の混合物中に溶解し、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリア ゾール・−水相物（１１ミリモル）を加えた。本混合物を、アルゴン雰囲気下に て１０分撹拌した。次いで化合物１５を加え、反応混合物を周囲温度にて数時間 撹拌し、水（５ｍ１７）を加えた。５分撹拌した後、エーテル（ｌｏｍＬ）を加 え、混合物を撹拌し、有機相を分離し、Ｍｇ５０４で乾燥した。溶媒を蒸発除去 して得られた粗製物を、ヘキサン−ＥｔＯＡｃを溶離液として使用してカラムク ロマトグラフィーにより精製して表記化合物１７を得た。
実施例１６ ９−　（（４−（７−（２−（３−Ｎ−（ビス（（４−（３−アミノプロピル） ）−５−イミダゾイルグリコール酸アミド）−１−シス−プロペニル）ナフチル ）サイドアームを備えた大気圧水素化装置に接続された反応容器中に、炭酸カル シウム担持パラジウム触媒（１ｇ）とベンゼン（３０＋ｎＬ）を入れた。容器を 脱気し、水素を再充填することによって（３回繰り返す）、系中の空気を水素で 置き換えた。この触媒懸濁液を、ガスが吸収されなくなるまで撹拌した。化合物 １７　（１，７ミリモル）をベンゼン（３０ｍＬ）中に溶解し、本溶液を反応容 器に加えた。約５分で２０７ｍＬ　（４，９モル相当）のガス（２２°Ｃ，７４ ０トル）が吸収されるまで、混合物を水素雰囲気下でできるだけ激しく撹拌した 。混合物をガラス漏斗により濾過し、触媒をベンゼンで洗浄した（３　ｘ　２０ ａ＋Ｌ）。溶媒を減圧にて蒸発除去して得られた生成物を、ヘキサン−ＥｔＯＡ ｃを溶離液として使用してカラムクロマトグラフィーにより精製して、表記化合 物１８を得た。
ンヒドリド（バイカーボナート）ビス（トリイソプロピルホスフィン）ロジウム （Ｉｌｌ）　（０，１７ｇ、　０．３５ミリモル）のトルエン（１０ｍＬ）溶液 に、化合物１７　（１，０６ミリモル）を加えた。無色の溶液が赤橙色に変化し 、Ｃ０２ガスが発生するようになった後、反応混合物の濃縮残留物をヘキサン− ＥｔＯＡｃで洗浄した。洗浄液を蒸発して得られた油状物を、ヘキサン−ＥｔＯ Ａｃを溶離液として使用してカラムクロマトグラフィーにより精製して表記化合 物１９を得た。
実施例１８ 炭素担持５％パラジウム触媒（０，２ｇ）を収容したパーボトル中にて、無水エ タノール（１２５ｍＬ）中に化合物１７　（０，４７モル）、化合物１８　（０ ，４７モル）、または化合物１９　（０，４７モル）を溶解した。このパーボト ルをパー水素化装置に接続し、６０ｐｓｉの初期圧力にて振盪した。２時間後、 水素の吸収が止まった。本混合物を２回自然濾過し、溶媒を減圧にて蒸発除去し て油状物を得た。この油状物を、ヘキサン−ＥｔＯＡｃを溶離液として使用して カラムクロマトグラフィーにより精製して表記化合物２０を得た。
実施例１９ 化合物５　（１２，６５ｇ、　３１．１ミリモル）、化合物９　（１４，５ｇ、 　２５．２ミリモル）、ＬｉＣ１（３，８３ｇ、　９０．２ミリモル）、テトラ キス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）　（３，６０ｇ、　３．１１ ミリモル）、および２．６−ジーｔ−ブチル−４−メチルフェノール（約２ｍｇ ）を無水メトキンエチルエーテル（１３０ｍＬ）中にて混合し、反応混合物をア ルゴン雰囲気下にて１２０°Ｃで２４時間加熱した。周囲温度に冷却した後、ピ リジン（１５ｍＬ）を加え、次いでＴＨＦ中１．４Ｍのフッ化水素−ピリジン（ ２６ｍＬ、　３６．４ミリモル）を加えた。５時間撹拌後、エーテル（５００ｍ Ｌ）を加え、セライトを通して混合物を濾過し、そして有機相を水（５００ＩＩ Ｌ）　、１０％塩酸（５００ｍｌ、）、水（５００＋ｎＬ）　、および塩水（５ ００ｍＬ）で洗浄した。有機相を分離し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、そして溶媒を蒸 発除去して得られた油状物を、ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（６０・４０）を使用して カラムクロマトグラフィーにより精製して、表記化合物を油状物として得た（４ ．１５ｇ、　３８％）。’１１−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、　Ｍｅ２ＳＯ−ｄｓ） 　＋　ｄ、　８．０９　（ｓ、　１．　ｌ１ｔ１２）、　７．８４−７．１５　 （ｍ、　６．　ＨＡｒ）、　７．１２　（ｓ、１．　ＩｍＨ２）、　２．４２　 （ｓ、　６．　ＮＣＨ３j、　１．０２ （ｓ、９．　１１ｅ３）、０．２６　（ＳｉＣｌ（３）。　′３Ｃ−ＮＭＲ（５ ０組１ｚ、ＣＤＣ１３）　＋　ｄ　１５４．２　（Ｃ２）、P４０゜ ２、１３４．０　（Ｃ７）、１３２．２　（Ｃ８，）、　１３１．１．１２９． ３．１２９．０　（Ｃ４，）、　１２８．７．１２７．７゜＋２７．５．１２５ ．９　（２，ｌｍＣ３）、　１２３．２．１１５．１　（ｌｍＣ４）、　３７． ４　（ＮＣｔ１３）、　２５．７　（Ｍ■R）。
１８．２　（ＳｉＣ）、　−４，３（ＳｉＣＨ３）。元素分析結果：Ｃ２＋１ｈ Ｊｓ０３ＳＳｉに対する計算値。
Ｃ；　５ｇ、４４．　Ｈ；　６．７７、　Ｎ；　９．７４．　Ｓｉ；　６．５１ ．　Ｓ；　７．４３゜実測値、　Ｃ；　５ｇ、２２．　＋１D６．７８゜ Ｎ；　９．４２．　Ｓ：　７．４４．　Ｓｉ＋　６．４７゜化合物２の合成に対 して使用したのと類似の方法を使用して、化合物２３　（４，１５ｇ、　９．６ １ミリモル）を脱保護処理した。得られた粗製油状物を、ＥｔＯＡｃを、次いで ＥｔＯＡｃ−ｉｌｅｏ）Ｉ　（８０：２０）を使用してカラムクロマトグラフィ ーにより精製して、表記化合物２４を油状物として得た（２．３２ｇ、　７６％ ）。’Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、　Ｍｅ２ＳＯ−ｄｓ）　：ｄ　９．８３　（ ｓ、　ｌ、　ＯＨ）、　８．２１　（ｓ、　１．　ＩｎＩ３）、　７．８４−７ ．１１　（ｍ、　６．　ＨＡｒ）、　７．P５　（ｓ、　１゜ ＩｍＨ４）、　２．４９　（ｓ、　６．　ＮＣＨ３）。”Ｃ−ＮＭＲ（５０ＭＨ ｚ、　ＣＤＣ１３）　：　ｄ　１５４．６　（Ｃ７）、１３W゜ ２　（ＩＱＩＣ２）、　１３２．５　（Ｃ２）、　１３０．７　（Ｃ８ａ）、　 １２９．３．１２７．６．１２６．６．１２６．２　（Ｃ４＝j、　１２５゜ ８、１２４．２　（ｌｍＣ５）、　＋２３．２．１１ｇ、３．１０７．７．３５ ．８　（ＮＣＨ３）。元素分析結果：　Ｃ，、Ｉ＋。
５Ｎ３０３Ｓに対する計算値、　Ｃ；　５６．７７、　Ｈ，４，７６、Ｎ、　１ ３．２４゜実測値、　ｃ；　５６．３８．　＋（；　４．８８．　Ｎ：　１２． ７７゜ アルゴン雰囲気下にて化合物２５　（１４，８１ｇ、　５１．２ミリモル）を無 水ＴＩ（Ｆ　（５３０ｍＬ）中に溶解し、溶液を一７８°Ｃに冷却し、１．６Ｍ のｎ−ＢｕＬｉ　（３８，４ｍＬ、　６１．４ミリモル）をンリンンにより徐々 に加えた。反応混合物を一７８℃で２５分撹拌した後、エチルホルメート（２， ０７ｍＬ、　２５．６ミリモル）を加え、混合物を周囲温度に加温した。１時間 撹拌した後、氷酢酸をｐＨ５になるよう加え、混合物をＮａ１ｌＣＯｓ水溶液（ ５３０ｍＬ）中に注ぎ込んだ。有機相を分離し、水相をエーテルで抽出した（３ 　Ｘ　５３０ａＬ）。
抽出物を合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧にて蒸発除去して油状物を得 た。
この油状物をＣ）１２Ｃ１２−アセトン（９０：１０）を使用してカラムクロマ トグラフィーにより精製して、表記化合物２６を固体として得た（１０．６５ｇ 、　６９％）。’ＩＩ−ＮＭＩ？　（２００４１Ｈｚ、　ＣＤＣ１３）　＋　ｄ 　７．０４　（ｓ、　２．　！１４）、　６．５１　（ｄ、　１．　ＣＨ，Ｊ、 １．ｏｌ＋　＝　３．３■撃噤j、　３．７９　（ｄ。
１、０ｉｌ）、　２．７８　（ｓ、　１２．　ＮＣＨ３）、　０．９８　（Ｓ、 　１８．　Ｍｅｓ）、　０．３９　（ｓ、　１２．　ＣＨ３j。
”Ｃ４ＭＲ（５０ＭＨ２，ＣＤＣ１３）：　ｄ　１５６．９　（Ｃ２）、１３４ ．８　（Ｃ５）、１３２．２　（Ｃ４）、５９．６　（Ｃｏ奄戟j 、　３７．７　（ＮＣＨ３）、　２７．２　（Ｍｅ３）、　１８．３　（ＳｉＣ ）、　−３，６（ＳｉＭｅ２）。　元素分析結果：Ｃ２３Ｈ４６Ｎ６０５Ｓ２Ｓ ｉ２　ｌ：対スル計算値、　ｃ；　４５．５２．　Ｈ：　７．６４．　Ｎ、　１ ３．８５．　Ｓ、　１０．５７D　Ｓ ｉ；９．２６゜実測値、　Ｃ；　４５．３２．　）Ｉ；　７．６９．　Ｎ；　１ ３．９３．　Ｓ；　１０．７９．　Ｓｉ；　９．３０゜化合物２６　（１，２１ ４ｇ、　２．０ミリモル）を無水ＤＭＦ　（１２ｍＬ）中に溶解し、ＮａＨ（９ ６ｍｇ。
２４ミリモル）を油中６０％分散液として周囲温度にて加え、反応混合物をアル ゴン雰囲気下で１０分撹拌した。次いで、ベンジルクロロメチルエーテル（０， ３４ｍＬ。
２．２ミリモル）を加えた。４時間後、氷酢酸を加えてｐＨ３とし、ＭｅＯＨ（ ２ｍＬ）を加え、そして混合物を５分撹拌した。溶媒を減圧にて蒸発除去して得 られた油状物を、ヘキサン−ＥｔＯＡｃ　（６０：４０）を溶離液として使用し てカラムクロマトグラフィーにより精製して、表記化合物２７を油状物として得 た（１．１６ｇ、　８０％）。’　Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、　ＣＤＣ１３） 　：　ｄ　７．３３−７．１７　（ｍ、　５．　ＨＡｒ）、　７．１２　（ｓ、 　２．　ＩｍＨ４）、　６D４４　（ｓ、　１゜ Ｃｌ０）、　４．９４　（ｓ、　２．０ＣＨ２０）、　４．５５　（Ｓ、　２． ０ＣＬＰｈ）、　２．７１　（Ｓ、　１２．　ＮＣＨ３）、@０．９８ （ｓ、１８．１ｌｅ３）、　０．４０　（ｓ、　６．５ｉＣｔｌｓ）、　０．３ ８　（ｓ、　６．５ｉＣＨ３）。
アルゴン雰囲気下にて、化合物２５（１，０ミリモル）を無水ＴＩＩＦ　（１０ ｍＬ）中に溶解し、反応混合物を一７８℃に冷却し、ＩＭのｎ−ＢｕＬｉ　（１ ，１ｍＬ、　１．１ミリモル）を加え、そして反応混合物を一７８℃で３０分撹 拌した。次いで無水ＤＭＦ　（１，１ミリモル）を加え、反応混合物を一７８° Ｃで２０分撹拌した後、周囲温度に加温した。エーテル（１０ｍＬ）を、次いで 水（５ｍＬ）を加えた。有機相を分離し、１１ｇＳＯ４て乾燥し、そして減圧に て溶媒を蒸発除去して得られた生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製し て、表記化合物２８を得た。
実施例２４ ２−（ｔ−ブチルジメチルシリル）−５−（２−シアノエチニル）−Ｎ、Ｎ−ジ メチルイミダゾール−１−スルホンアミド、２９ジエチルノアツメチルホスホネ ート（８，８５ｇ、　５０ミリモル）の無水ＴＨＦ　（４ｈＬ）溶液に、ナトリ ウムアミド（２、Ｏｇ、　５１．３ミリモル）を加えた。この懸濁液を周囲温度 で１時間撹拌した。これに、化合物２ｇ　（２５ミリモル）の無水ＴＨＦ　（６ ｈＬ）溶液を加えた。本混合物を還流温度にて２０時間加熱し、周囲温度に冷却 し、そして水（１００ｍｌ）を加えた。減圧にてＴＩＩＦを蒸発除去した後、水 性懸濁液に：ｉ１２Ｃ１２（４００ｍＬ）を加えた。有機相を分離し、水相をＣ ｔｌｚＣｌｚで抽出した（２　Ｘ　５０ｍＬ）。
有機抽出物を合わせ、水で洗浄しく２　Ｘ５０ｍＬ）　、ＭｇＳＯ４で乾燥し、 そして溶媒を減圧にて蒸発除去して得られた生成物をカラムクロマトグラフィー により精製して、表記化合物２９を得た。
実施例２５ ２−（ｔ−ブチルジメチルシリル）−５−（３−アミノプロピル）−Ｎ、Ｎ−ジ メチルイミダゾール−１−スルホンアミド、３０無水エタノール（７５ｍＬ）と ＴｔｌＦ　（２５ｍＬ）の混合溶媒中に化合物２９（２，１ミリモル）を溶解し た。クロロホルム（１，５ｍＬ）と酸化白金（７０ｍｇ）を加え、パー水素化装 置中５気圧にて本混合物を水素化処理に付した。４時間後、セライトを通して混 合物を濾過し、セライト床を無水エタノールで洗浄した（２　Ｘ　２０ｍＬ）。
濾液と洗浄液を合わせ、減圧にて溶媒を蒸発除去して得られた生成物をカラムク ロマトグラフィーにより精製して、表記の化合物３０を得た。
化合物３０（８ミリモル）をＮＥｔ３　（１６ミリモル）を含有したＣＪＣ１４ （５ｍＬ）中に溶解して得られた溶液に、撹拌しながら、１，１，４．４−テト ラメチル−１，４−ジクロロンルエチレン（１，８ｇ、　８ミリモル）を無水Ｃ ■２Ｃ１２（３ｍＬ）に溶解して得られた溶液を加えた。アルゴン雰囲気下にて 本混合物を周囲温度で２時間撹拌し、リン酸二水素ナトリウム水溶液中に注ぎ込 んだ。次いでＥｔｚＯ（１０＋ａＬ）を加えた。
有機相を分離し、減圧にて溶媒を蒸発除去して得られた生成物を、中性アルミナ を使用してカラムクロマトグラフィーにより精製して、表記の化合物３１を得た 。
１−スルホンアミド）〕グリコール酸・ジヒドロクロリド、３２濃塩酸（ＩｍＬ ）を含んだ７０％水性エタノール（２０ｍＬ）中に化合物１６　（Ｉｇ）を溶解 し、本混合物を還流温度にて６時間加熱した。溶媒を減圧にて蒸発除去して得ら れた生成物をメタノール／クロロボルムから再結晶させて、表記化合物３２をジ ヒドロクロリドとして得た。
ミダゾール−１−スルホンアミド）〕カルビノール、３３化合物３１　（２３ミ リモル）を無水ＴＩＩＦ　（２００ｍＬ）中に溶解し、アルゴン雰囲気下にて反 応混合物を一７８℃に冷却し、ＩＭのｎ−ＢｕＬｉ　（２５ｍＬ、　２５ミリモ ル）を加えた。
反応混合物を一７８℃で２０分撹拌した後、エチルホルメート（１１，５ミリモ ル）を加え、そして反応混合物を周囲温度に徐々に自然加熱した。水（ＬＱＯｌ ｎＬ）を、次いでＥｔｚＯ（２００ｍｌ、）を加えた。有機相を分離し、溶媒を 減圧にて蒸発除去して得られた生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製し て、表記の化合物３３を得た。
実施例２９ ビス［４−（５−（３−アミノプロピル）−Ｎ、Ｎ−ジメチルイミダゾール−１ −スルホンアミド）］カルビノール・ノヒドロクロリド、３４濃塩酸（ＩｍＬ） を含んだ７０％水性エタノール（２，ｍＬ）中に化合物３３　（Ｉｇ）を溶解し 、本混合物を還流温度にて６時間加熱した。溶媒を減圧にて蒸発除去して得られ た生成物をメタノール／クロロホルムから再結晶して、表記の化合物３４をジヒ ドロクロリドとして得た。
実施例３０ １．５−ビス−（４，４°−／メチルー１．３−オキサゾリンー２−イル）−３ −ベンタノン 市販のジエチル−４−オキソピメレート（アルドリッチ・ケミカルズ）をケン化 して（１！ａｒｃｔ＋、　Ａｄｖ、　Ｏｒｇ、　Ｃｈｅｌｌ　第４版、　Ｊｊｉ ｌｅｙ　ａｎｄ　５ｏｎｓ、　Ｎ、Ｙ、、　１９９２．　o。
３７ｇ）　４−オキソピメレートを生成させ、これを２−アルキル−１，３−オ キサシリン誘導体として保護することによって（ウエールマイスター、　Ｊ、　 Ｏｒｇ、　Ｃｈｅｗ。
１９６１、　２６．３８２１）表記の化合物１０１、保護オキソピメレートを得 た。
三フン化ホウ素を触媒として使用して、ベンズアルデヒドとプロパンジチオール とを反応させて（マーシャルら、　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、　１９ ７１．８７１）　、１．３−”チアン誘導体である表記化合物１０２を得た。
実施例３２ ３−（２−フェニル−１，３−ジチアン−２−イル）−１，５−ビス−（４，４ ゜−ジメチル−１，３−オキサゾリン−２−イル）−３−ペンタノール極性転換 反応（Ｈｕｎｉｇら、　Ｃｈｅｍ、　Ｂｅｒ、　１９８９．１２２．１３２９＋ 　Ｔ、＾、　Ｂａ５ｅ、　ＵｍｐｏｌｅｄＳｙｎｔｈｏｎｓ、Ｊ、１ｌｉｌｅｙ 　ａｎｄ　５ｏｎｓ、Ｎ、Ｙ、、１９８７；　５ｅｅｂａｃｈ、＾ｎｇｅｗ、Ｃ ｈｅｍ、１９８９゜１８、２３９）にて、化合物１０２をｎ−ＢｕＬｉおよび化 合物１０１で処理することにより、表記の化合物１０３を得た。
実施例３３ ４−（２−フェニル−１，３−ジチアン−２−イル）−４−ヒドロキシピメリン 酸 エタノール中にてＨＣＩを使用して化合物１０３の２−アルキル−１，３−オキ サゾリン保護基を脱保護処理することにより、表記の化合物１０４をジカルボン 酸４−（ベンゾイル）−４−ヒドロキシピメリン酸化合物１０４の１．３−ジチ アン基を過塩素酸水銀（ＩＩ）との反応により加水分解させて（Ｌｉｐｓｈｕｔ ｚら７Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、胆８９．３０．１５）　、表記の化 合物１０５をα−ヒドロキシケトンとして得た。
実施例３５ ４−（ベンゾイル）−４−メトキンピメリン酸化合物１０５のｔｅｒｔ−ヒドロ キシル基をヨウ化メチルで処理することによって（Ｊｕｎｇら、　Ｔｅｔｒａｈ ｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、　１９８９．３０．６４１）　、表記の化合物１０６を 得た。
実施例３６ ４（１，３−′、）チアン−２−イル）−１，４，７−へブタントリオール化合 物１０４と水素化リチウムアルミニウムとを反応させることによって（Ｏｒｔｉ ｚら、　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、　１９８５．２８３１）　、表記 の化合物１０７をトリオールとして得た。
実施例３７ ４−（ベンゾイル）−１，４，７−へブタントリオール過塩素酸水銀（ＩＩ）と の反応によって化合物１０７のジチアン基の加水分解を起こさせて（Ｌｉｐｓｈ ｕｔｚら、　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、　１９ｇ９．３０．１５）　 、表記の化合物１０８をα−ヒドロキシヶトントリオールとして得た。
実施例３８ ４−（ベンゾイル）−１，４，７−トリメトキンへブタンヨウ化メチルで処理す ることによって化合物１０８のメチル化を起こさせることにより（Ｊｕｎｇら、 　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、　Ｌｅｔｔ、　１９８９．３０．６４１）　、表記 の化合物１０９をメチルエーテル誘導体として得た。
化合物１０１のｔｅｒｔ−ヒドロキシル基を塩化メトキノメチルで処理すること によって保護して（Ｓｔｏｒｋら、　Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ、　１９７７、９ ９．１２７５）　、表記の化合物１１０を得た。
化合物１１０と水素化リチウムアルミニウムとの反応によりカルボニル官能基の 還元を起こさせて、表記の化合物１１１をノオール誘導体として得た。
実施例４１ ４−（ベンゾイル）−４−メトキンメトキシ−１，７−ジメトキシへブタン化合 物１１１をヨウ化メチルで処理しくＪｕｎｇら、　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌ ｅｔｔ、　１９８９．３０゜１５）、次いで過塩素酸水銀（ｎ）と反応させるこ とにより（Ｌｉｐｓｈｕｔｚら、　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、　１９ ８９．３０．１５）　、表記の化合物１１２をケト誘導体として得た。
メタノール性ＨＣＩとの反応によって化合物１１２のｔｅｒｔ−ヒドロキシル官 能基を脱保護処理して（Ａｕｅｒｂａｃｈら、Ｉ、　Ｃｈｅｗ、　Ｓａｃ、、　 Ｃｈｅｗ、　Ｃｏｍｍｕｎ、　１９７４．２’ＪＢ）、表記の化合物１１３をα −ヒドロキシヶトンとして得た。
ビス−１，３−ジチアニル表記化合物１１４は、報告されているアントラセン− １，８−ジカルボキノアルデヒド（Ｇｕｉｌａｒｄら、Ｊ、＾ｍ、　Ｃｈｅｍ、 　Ｓａｃ、　１９９２．１１４゜９８７７）をプロパンジチオールおよび触媒と しての三フン化ホウ素（ｉｌａｒｓｈａｌｌら。
化合物１１４をｎ−ブチルリチウムと化合物１０１で処理して極性転換反応を起 こさせて、表記の化合物１．１５を得た。
化合物１１５の２−アルキル−１，３−オキサゾ１ル保護基をＨＣＩ含有エタノ ールで脱保護処理することにより（Ｍｅｙｅｒｓら、　Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｃｍ 、　Ｓｏｃ、　１９７０．９２．６６４４）、表記の化合物１１６をンカルボン 酸として得た。
過塩素酸水銀（ＴＩ）との反応により化合物１１６の１，３−ジチアニル基を取 り除いて（＋、１ｐｓｈｕｔｚら０Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、　１９ ８９．３０．１５）　、表記化合物１１７をα−・ヒドロキシケトンとして得た 。
ヨウ化メチルを使用して化合物１１７のｔｅｒｔ−ヒドロキシル基をメチル化し て（Ｊｕｎｇら、　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、　１９８９．３０．６ ４１）　、表記化合物１１８を得た。
化合物１１６と水素化リチウムアルミニウムとの反応（Ｏｒｔｉｚら、　Ｔｅｔ ｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ、　１９８５．２８３１）によりカルボニル官能基の 還元を起こさせて、表記の化合物１１９をポリヒドロキシル誘導体として得た。
過塩素酸水銀（ＩＩ）との反応により化合物１１９の１．３−ジチアニル基を取 り除いて（Ｌｉｐｓｈｕｔｚら、　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、　１９ ８９．３０．１５）　、表記化合物１２０をポリヒドロキン−α−ヒドロキシケ トンとして得た。
ヨウ化メチルで処理することにより化合物１２０のメチル化を起こさせて（Ｊｕ ｎｇら、　Ｔｅｔ、ｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、１９８９．３０．６４１）　 、表記化合物１２１をメチルエーテル誘導体として得た。
実施例５１ １．８−ビス−（４−（４−メトキシメトキシピメレート）−１，３−ジチアン −２，２”−イル）アントラセン 塩化メトキシメチルで処理することによって化合物１１６のｔｅｒｔ−ヒドロキ シル基を保護して（Ｓｔｏｒｋら、Ｊ、＾ｍ、　Ｃｈｅｍ、　１９７７、９９． １２７５）　、表記化合物１２２を得た。
実施例５２ １．８−ビス−（４−メトキンメトキシ−（１，７−へブタンジオール）−１゜ ３−ジチアン−２，２゛−イル）アントラセン化合物１２２と水素化アルミニウ ムリチウムとの反応により（Ｏｒｔｉｚら、　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔ ｔ、　１９８５．２８３１）カルボニル官能基の還元を起こさせて、表記化合物 １２３をテトラオール誘導体として得た。
実施例５３ １．８−ビス−（２−メトキシメトキン−２−（３−メトキシプロピル）−５６ ４１）　、次いで過塩素酸水銀（ＩＩ）と反応させることにより（Ｌｉｐｓｈｕ ｔｚら、　Ｔｅｔｒａメタノール性ＭＣＩとの反応により化合物１２４のｔｅｒ ｔ−ヒドロキシ官能基の脱保護処理を行って（Ａｕｅｒｂａｃｈら、　Ｊ、　Ｃ ｈｅｍ、　Ｓｏｃ、、　Ｃｈｅｗ、　Ｃｏａ＋＋ｎｕｎ、　］、９７４．２９８ ）、表記の化合物１２５をα−ヒドロキシケトンとして得た。
４（Ｒ）−（ヒドロキシル）テトラヒドロ−２（Ｓ）−ベンゾイルオキシメチル フキンレートおよびトリフェニルホスフィンとを反応させて（Ｍｉｔｓｕｎｏｂ ｕ、合成。
１９８１、１）　Ｃ，における立体配置の反転を起こさせることにより、表記化 合物１２６を合成した。
化合物１２６と塩化ｐ−トルエンスルホニルとを反応させることにより、表記の 化合物１２７を４−トンレートとして得た（Ｎａｉｒら、Ｊ、＾ｍ、Ｃｈｅｍ、 　Ｓｏｃ、　１９９２．１１４゜（Ｌａｎｃａｓｔｅｒ合成）を使用してＮ−２ アルキル化して［１（ｕｓｓｏｎら、　Ｅｕｒ、　Ｐａｔ、＾ｐｐｌ。
（ＥＰ　４２３４８＾１２３　Ｄｅｃ　１９８１）　’ｌ　、表記化合物１２８ を得た。
実施例５８ Ｎ−６−（４（Ｒ）−テトラヒドロ−２（Ｓ）−ベンゾイルオキシメチルフラニ ル）−２−（２−エチル−１，３−ジオキソラン）−６Ｈ−ピリド（４，，３− ｂ〕カルバゾリウム 炭酸カリウムと１８−クラウン−６エーテル（Ｎａｉｒら、　Ｊ、　Ａｍ、Ｃｈ ｅｍ、　５ｏｃ１９９２、１１４．７９５１）の存在下にて化合物１２８と化合 物１２７とを反応させることにより立体選択的なグリコノル化を起こさせて、表 記の化合物１２９を得た。
実施例５９ Ｎ−６−（４（Ｒ）−テトラヒドロ〜２（Ｓ）−ヒドロキシメチルフラニル）− ２−（２−エチル−１，３−ジオキソラン）−６Ｈ−ピリド（４，３−ｂ）カル バブ＋１ウム アンモニアで処理することによりＯ−ベンゾイル官能基の脱保護を起こさせて実 施例６０ オキシメチルフラニル）−２−（２−エチル−１，３−ジオキソラン）−６８− ピリド［４，３−ｂｌカルバゾリウム塩化ｐ−トルエンスルホニルとの反応によ って化合物１３ＣＩのヒドロキシル基をトン−２−（３−メトキシプロピル）− ５−メトキシペンタナール−１−イル）化合物１２５（または同様の仕方にて化 合物１１３もしくは１１７）をメチル銅（１）で処理して（Ｗｈｉｔｅｓｉｄｅ ｓら、　Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｗ、　Ｓｏｃ、　１９７４．９６．２８２９）化 合物１２５（または化合物１１７）の銅アルコキシドを生成させ、これを化合物 １３１と反応させて表記化合物１３２を得た。
三臭化ホウ素との反応により、化合物１３２のメチルエーテル官能基の脱保護と ともにアセタール基の脱保護も同時に起こさせて（Ｇｒｉｅｃｏら、　Ｊ、　Ａ ｍ、　Ｃｈｅｓ、　Ｓｏｃ。
、　１９７７、９９．５７７３；　Ｄｅｍｕｙｎｃｋら、　Ｊ、　Ｏｒｇ、　Ｃ ｈｅｍ、　＋９７９．４４．４８６３）　、表記の化合物１３３を得た。
−ｂ）カルバゾリウム （ここでプロピルカルバゾリウムプロピル部分の“置換部分”は、オリゴヌクレ オシド中のメチレンイミノオキソメチレン主鎖である）シアノホウ水素化ナトリ ウムの存在下にて、オリゴヌクレオチド主鎖中に組み込まれているヒドロキシル アミン官能基との反応によって化合物１３３の還元性アミノ化を起こさせて（Ｖ ａｓｓｅｕｒら、Ｊ、＾ｌ　Ｃｈｅｗ、　Ｓｏｃ、　１９９２．１１４．４００ ６）　、表記の化合物１．３４を得た。
実施例６４ Ｎ−６−（４（Ｒ）−テｈうｔニド０−２（Ｓ）−０−（１，８−ビア、（２（ ドロキ□ ンー２−（３−プロピオネート）−５−ヒドロキシペンタナール−１−イル）ア ントラセン）−２−（３−“置換”プロピル）−６Ｈ−ピリド［４，３−ｂｌカ ルバゾリウム （ここでプロピルカルバゾリウムプロピル部分の”置換部分”は、オリゴヌクレ オシド中のメチレンイミノオキシメチレン主鎖である）実施例５４．５５．およ び５６の場合と同様の仕方にしたがって、実施例３２の化合物１２５の代わりに 化合物１１７を使用して表記化合物を得た。
実施例６５ Ｎ−６−（４（Ｒ）−ｆ　トラｔニドｏ−２（Ｓ）−０−（１，８−ビス（２− ヒドロキシ−２−（３−メトキシプロピル）−５−ヒドロキシペンタナール−１ −イル）アントラセン）−２−（３−プロパナール）−６Ｈ−ピリド［４，３− ｂ）カルバゾリウム ｒＨａｇｉｗａｒａら、　Ｊ、　Ｃｈｅｗ、　Ｓａｃ、、　Ｃｈｅｍ、　Ｃｏｍ ｍｕｎ、　１９ｇ７．１３５１Ｊの方法にしたがって、ピリジニウムｐ−１−ル エンスルホネートとの反応により、化合物１３２のメチルエーテル官能基の同時 的脱保護を起こすことなく化合物１３２のアセタール基の脱保護を起こさせて、 表記化合物を得た。
実施例６６ Ｎ−６−（４（Ｒ）−テトラヒドロ−２（Ｓ）−０−（１，８−ビス（２−ヒド ロキシ−２−（３−メトキンプロピル）−５−ヒドロキシペンタナール−１−イ ル）アントラセン）−２−（３−”置換”プロピル）−６Ｈ−ピリド（４，３− ｂ〕カルバゾリウム （ここでプロピルカルバゾリウムプロピル部分の“置換部分”は、オリゴヌクレ オシド中のメチレンイミノオキシメチレン主鎖である）実施例３４と同様の仕方 で、化合物１３３の代わりに化合物１３６を使用して表記化合物を得た。
実施例６７ ブロフクされた塩基、５’−０−ＤＭＴブロックされた３°−ポスポルアミダイ トヌクレオシド 塩基と５°−ヒドロキシル基をブロックし、３゛−ホスポルアミダイトを加える ための標準法を使用して、適切にブロフクされたホスホルアミダイトを作製した 。
塩基に対しては標準的なブロッキング剤を使用し、５°−ヒドロキシル基のブロ ッキングに対しては標準的なりＭＴ　（ジメトキシトリチル）基を使用した。ブ ロッキングの方法は種々の文献中に説明されており、例えば、ｒＧａｉｔ、　Ｍ 、　Ｊ、　（ｅｄ、）０１ｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｊｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ： 　Ａ　Ｐｒａｃｔｉｃａｌ　Ａｐｐｒｏａｃｈ　１９８４．　ＩＲＬ　Ｐｒｅｓ ｓ@Ｌｔｄ、。
０ｘｆｏｒｄ、　ＬＩＫＪおよびｒＥｃｋｓｔｅｉｎ、　Ｆ、　（ｅｄ、）　Ｏ ｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ　ａｎｄ　Ａｎａｌｏｇｕ■刀B ＾Ｐｒａｃｔｉｃａｌ　Ａｐｐｒｏａｃｈ、　ＩＲＬ　Ｐｒｅｓｓ　Ｌｔｄ、　 ｂｙ　０ｘｆｏｒｄ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｐｒｅｓｓ、@Ｎｅｗ　Ｙｏｒ ｋ、１９９１Ｊなどがある。
１ｅｏｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ：＾Ｐｒａｃｔｉｃａｌ　Ａｐｐｒｏａｃ ｈ　１９８４．　ＩＲＬ　Ｐｒｅｓｓ　Ｌｔｄ、、　０ｘｆ盾窒пA　ＵＫ） にしたがって、挿入剤置換イミダゾール付加物で修飾された１つ以上のヌクレオ シドをアンチセンス配列中に挿入することによって、挿入ＲＮＡ開裂剤を有する 、本発明によるアンチセンスオリゴヌクレオチドを作製した。自動化された核酸 合成装置（例えば、アプライド・バイオシステム社の３８０　Ｂ　）を使用して 、所望の修飾オリゴヌクレオチドを得ることができ、次いでこれをトリチル・オ ン逆相ＨＰＬＣて精製することができる。
開裂剤がヌクレオシドの２゛−位置に結合している本発明の化合物に対しては、 糖の２゛−位置と置換ナフタレンの２−位置との間のカップラーの長さと特性は 、種々の利用可能な化学的手法を使用することによって調節することができる。
イミダゾールは、その１−．２−、および４−位置において置換を行って、得ら れる化合物のｐＫａ’　、水素結合、および核性を調節することができる。ナフ タレン−イミダゾール付加物は、いかなる核酸ヌクレオシドに対しても配置させ ることができる。開裂剤が２つのヌクレオシドを繋げている結合基に結合してい る本発明の化合物に対しては、この場合も、主鎖と挿入剤との間のカップラーの 長さと特性は、種々の利用可能な化学的手法を使用して調整することができる。
図示の例において使用されているピリド［４，３−ｂ）カルバゾールの代わりに 、他の挿入剤を使用することもできる。さらに、ベントフラノース環に関連して 使用されるアントラセン環以外の池の開裂剤支持環を使用して、金属イオン配位 子を支持及び配置することができる。
Ａ　修飾オリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションに関する熱力学の評価本 発明の官能化オリゴヌクレオチドがそれらの相補的ＲＮＡ配列またはＤＮＡ配列 にハイブリダイズする能力は、熱溶融分析によって決定された。アプライド・バ イオシステムズ社の３９０Ｂ核酸合成装置を使用して合成したＤＮＡのテンプＩ ノートープロモーターとＴ７　ＲＮＡポリメラーゼから、相補ＲＮＡを合成した 。
Ｆ　Ｐ　Ｌ　Ｃ（ＬＫＢ　Ｐｈａｒｍａｃｉａ社）を使用したイオン交換によっ て、または変性ウレア−ＰＡＧＥによって、ＲＮＡ化学種を精製した。天然のア ンチセンスオリゴヌクレオチド、または特定の場所に官能基を含むアンチセンス オリゴヌクレオチドを、化学量論１度にて相補ＲＮＡもしくは相補ＤＮＡに加え て、ハイブリノド二本鎖を形成させた。ハイブリノド二本鎖からランダムコイル へ変化する際の、吸光度（２６０ｎｍ）　７１色性の温麿依存性を、ギルフォー ド・レスポンス■分光光度計を使用して調べた。これらの測定は、１０ｍＭ　Ｎ ａ−ホスフェｈ　（ｐ）１７．４）、　０．１＋ｎＭ　ＥＤＴＡ、および０．１ Ｍまたは１．０Ｍのイオン強度を生成させるためのＮａＣ１を含む緩衝液中で？ テ。た。データは、１７Ｔ、νｓ、　Ｉｎ（Ｃｔ〕のグラフ表示にて解析した。
ここで（Ｃｔ）は総オリゴヌクレオチド濃度である。この解析から、熱力学的パ ラメーターを決定した。形成された二本鎖またはへテロ二本鎖の安定性に関して 得られた情報に基づいて、修飾ピリミジンのオリゴヌクレオチド中への配置がら せん構造安定性に及ぼす影響を調べた。ハイブリッドの安定性を大きく変化させ る修飾は自由エネルギー（デルタＧ）の減少または増大を示し、アンチセンスオ リゴヌクレオチドの有用性についての決定を行った。
Ｂ、　修飾オリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションの忠実度本発明の修飾 アンチセンスオリゴヌクレオチドが絶対的な特異性を伴ってターゲットｍＲＮＡ にハイブリダイズする能力が、配列を種々に変えたターゲット配列に関する熱力 学的解析（上記）によって、あるいは全細胞性ＲＮＡの存在下での精製されたタ ーゲットｍＲＮＡのノザンプロット解析によって示された。Ｔ７ＲＮＡポリメラ ーゼプロモーターから下流に配置されているターゲットｍＲＮＡに対するｃＤＮ Δを含んだベクターから、ターゲットｍＲＮＡを合成した。合成したｍＲＮＡを アガロースゲル電気泳動にかけ、適切な支持膜（すなわちニトロセルロース）に 移した。支持膜をブロックし、　（”Ｐ）−標識されたアンチセンスオリゴヌク レオチドをプローブとして使用して調べた。ストリンジエンンーは、プロットの レプリカ及び洗浄用緩衝液について高温もしくは減少したイオン強度にて洗浄す ることによってめた。オートラジオグラフィーを行って、ヘテロ二重鎖の存在を 調べ、レーザーデンノトメトリ−（ＬＫＢ　Ｐｈａｒｍａｃｉａ社）またはホス ファ−イメージング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｄｙｎａａ＋ｉｃｓ社）によってオ ートラジオグラムを定量化した。未修飾のアンチセンスオリゴヌクレオチドにつ いてストリンジェンンーをあらかじめ定め、特異的にターゲットとされたｍＲＮ Ａのみが２°−修飾オリゴヌクレオチドとへテロ二重鎖を形成することができる ような条件を使用した。
種々の濃度のウシ胎児血清または成人ヒト血清を含有した培地中でオリゴヌクレ オチドをインキュベートすることによって、天然ホスホロチオエートおよび本発 明の修飾オリゴヌクレオチドの血清ヌクレアーゼに対する抵抗性を調べた。標識 したオリゴヌクレオチドを種々の時間インキュベートし、プロテアーゼにで処理 し、次いで２０％ポリアクリルアミド−ウレア変性ゲル上でのゲル電気泳動、お よびそれに引き続くオートラジオグラフィーまたはホスファ−イメージングによ って解析した。レーザー・デンシトメトリーによってオートラジオグラムを定量 化した。オリゴヌクレオチドの修飾箇所と既知長さに基づいて、ヌクレアーゼ分 解に及ぼす特定の修飾の影響を調べることができた。細胞質ヌクレアーゼに対し ては、Ｉ’１Ｌ６０細胞系を使用した。ポスト−ミトコンドリアの上澄み液を分 画遠心によって調製し、標識したオリゴヌクレオチドをこの上澄み液中で種々の 時間インキュベートした。インキュベート後、血清ヌクレアーゼ分解に関して上 記したように、オリゴヌクレオチドの分解を調べた。オートラジオグラフィーの 結果を、未修飾オリゴヌクレオチド（すなわちホスホロチオエート）と修飾オリ ゴヌクレオチドを比較して定量化した。
天然オリゴヌクレオチドと２°−修飾オリゴヌクレオチドの特定のヌクレアーゼ （すなわち、エンドヌクレアーゼ、３°、５°−エキソおよび５’、　３’−エ キソヌクレアーゼ）に対する抵抗性の評価を行って、修飾が分解に及ぼす正確な 影響を調べた。種々の選定されたヌクレアーゼに対して特異的な反応緩衝液中で 、修飾オリゴヌクレオチドをインキュベートした。生成物をプロテイナーゼにで 処理した後、尿素を加え、尿素を含有した２０％ポリアクリルアミドゲルによる 解析を行った。スティング・オール（ノグマケミカル社）を使用して染色するこ とによって、ゲル生成物が目視できるようにした。レーザー・デンシトメトリー を使用して、分解の程度を定量化した。特定のヌクレアーゼに対する修飾の効果 を調べ、血清系や細胞質系から得られる結果と比較した。
実施例７２ ）１１Ｖ−Ｉ　ＴＡＲＲＩＪ＾との二分子反応における、触媒的ＲＮＡ加水分解 による開裂部、全長（５９ｍｅｒ）　ｗｔ　ＨＩＶ−Ｉ　ＴＡＲ（）ランスアク チベーション・レスポンス）ＲＮＡを使用した。ＴＡＲ構造は、１７−ｂｐ　Ｔ ７プライマ一部位と５９−ｂｐ　ＴＡＲコーディング配列を有するＰＣＲ−増幅 されたｄｓ　ＤＮ＾テンプレートのｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ＲＮＡ　Ｔ７ボリメラー ゼ転写から調製した。ＣＩＰ　（子牛腸ホスファターゼ）を使用して、５°−説 リン酸化した。次いで、７０００Ｃｉ／　ミリモル〔γ”Ｐ）　ｄＡＴＰを使用 して５−キナーゼによる末端標識化を行った。二分子スクリーニング反応混合物 の変数は次の通りである：〔５°”Ｐ）　ＴＡＲ：　１１００ｐ；緩ｌｉ液種ニ 一般にはリン酸ナトリウムもしくはリン酸カリウムまたはＭＯＰＳ：　＋：緩衝 液〕：１０〜ｔｏｏｍ＋＋　（緩衝能力を保持するのに必要であればより高い値 ）　、　ＥＤＴ＾：±＠０．１ｍＭ：　ＮａＣ１：士約１０ｈＭ：　［開裂剤の 例］、１０μＭ〜５０ｍＭ　：外因性イミダゾール：士最大１．０ｍＭ；　ｍｇ ｃｔ、±＠２×〔開裂剤〕または最大５０＋ａＭ：　ＺｎＣｌ２：士約２×〔開 裂剤〕または最大５ｈＭ；　ｐ）ｌ：　６．０．７．０゜および８０；容積：１ ０〜５０＋＋Ｌ＋温度３７℃９時間Ｏ〜≧４８時間。解析は、変性シーフェンス 用ＰＡＧＥ解析法にしたがって行った。適当な時間において、等容積の１０Ｍ尿 素を反応混合物に加えた。反応混合物を混合し、すべての時間ポイントが集めら れるまで一２０℃で保存した。サンプルを３０秒間９０℃に加熱し、予備運転及 び予備加熱された（５０〜５５６Ｃ）ンークエンス用ゲル上に、標準サンプルと ともに挿入した。標準サンプルは、真正の未処理ＴＡＲＲＮＡ、限定塩基（ＨＯ −）処理によるラグ−ＴＡＲ，ＴＡＲの酵素（すなわちＲＮアーゼＴｌ）制限消 化、およびＢＢ（ブロモフェノールブルー）とＸＣ（キシレンンアノール）トラ ッキング染料との混合物であった。尿素ＰＡシークエンス用ゲルは１２％（２０ ：１アクリル・ビス）および５０％尿素であった。ＢＢとＸＣトラッキング染料 が互いに１４ｃｍ分離するまで、７０〜７５Ｗ〔約１７５０〜１９５０Ｖ、ゲル 装置の特性により異なる〕にて、約５０〜５５℃で約２時間、電気泳動にかけた 。オートラジオグラフィーによって、および／または、より良好な定量化のため にはホスファ−イメージヤ−によってゲルを現像した。３°−末端および／また は５°−末端から塩基ラグ−ＴＡＲを数えることによって、および酵素消化パタ ーンによって確認することによって（すなわち、６塩基ループの単一鎖Ｇ′に対 してはＴ１が優先していること）、配列位置を確認した。
実施例７３ クロマトグラフにおいて単一のピークまたはバンドが得られるよう、オリゴヌク レオチドをＨＰＬＣまたはＰＡＧＥによって精製した。約０．１〜０．２Ａｚａ 。の吸光度単位を有するＲＮＡターゲット鎖、および開裂剤とコンジュゲートさ せた相補的アンチセンスＤＮＡ鎖を使用した。ターゲット鎖とアンチセンス鎖を １＝１の化学量論でとり、無菌状態でＲＮアーゼフリーのシラン処理した０、　 ６ｉＬスナツプ・キャップ・チューブ中のコンポーネントミックスＡ−Ｃに加え 、最終全容量を１００μｌとした。
ＢＣ ＮａＰｉ　ｌｏｍＭ　１０ｍＭ　−− Ｔｒｉｓ−）ＩＣＩ　−−−−１ｈＭ ＥＤＴＡ　Ｏ，１ｍ１Ｉ　Ｏ，１■ｙ　−−−ＮａＣ１１００ｍＭ　１１００Ｉ Ｉ　１００５Ｍイミダゾール　−１，０１１１，０１１ｙｇｃ＋、；　ＺｎＣ１ ｙ：等　−−−−−−５０ｍＭ３セントのこれらの反応混合物を使用した。セッ ト１のｐＨは６，０、セット２のｐＨは７０、セント３のｐＨは８．０であった 。１８個のテスト混合物に関して時間ポイントを取った〔すなわち、３種の反応 混合物×３種のｐＨＸ２種の混合物（実験および対照標準）〕。時間ポイントは 、０〜２週間からのサンプルである。
各ポイントにおいて、実験の（ＤＮＡ　（＋）　・ＲＮＡ）へテロ二重鎖を対照 標準の［ＤＮＡ　（−）　・ＲＮＡ］へテロ二重鎖と比較した。測定時間中、イ ンキュベーター中で温度を３７℃に保持した。標準的な垂直ゲル装置、約１９Ｘ １９ｃｍのプレート〔シラン処理又は“ブレソジ（Ｐｌｅｄｇｅｄ）”したもの ］　、１．５＋ａａ＋のスペーサー、および２０個のウェルコームを使用してＰ ＡＧＥにより結果を解析した。ゲルは、２０％（２０＋１アクリル：ビス）尿素 ＰＡＧ　（約６ｈｌ）であった。等容積（１０μｌ）の１０％グリセロールを加 えることによってサンプルを調製した。サンプルは変性させなかった。ゲルを予 備運転し、≧５５℃に予備加熱し、そしＣ高温のうちにサンプルを装入した。全 混合物を、単一の時間ポイントに対して単一の２０レーンゲルに装入した。ブロ モフェノールブルー染料が底部緩衝液トレーの頂部に近づくまで、ゲルを３５０ 〜４５０Ｖ　（５０〜６０°）にて操作した。ゲルをプレートから取り除き、ス テインズーオール（Ｓｔａｉｎｓ−＾１１）を使用して染色した（−晩経過後に 最も暗色の染色が得られた）。ゲルを脱色し、レーザー・デンシトメトリー（二 よる処理、および／または写真処理を施した。ＲＮＡは、同じ長さのＤＮＡより 遅く移た、ターゲットＲＮＡ鎖を［１２ｐ］で５−末端標識し、この後に、実施 例７２１こ記載したようなオートラジオグラフィーまたはホスファ−イメージン グによって開裂解析を行うこともできる。
ＦＩＧＵＲＥ　１ｂ ＦＩＧｔＪＲＥ　２Ｘ ＦＩＧＵＲＥ　３ ＦＩＧＵＲＥ　４ａ ＦＩＧＵＲＥ　４ｂ ＦＩＧ（ＪＲＩＥ　６Ｘｌ ＦＩＧＵＲＥ　６ｂ ＦＩＧＵＲＥ　１０ ＦＩＧＵＲＥ　ｌｅａ 請求の範囲 １　構造式。
Ｇｏ　ＧＩ　Ｇ２　Ｇ３ ［式中、Ｇｏはヌクレオチド、ヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドであり；Ｇ 、は二価連結部分であり。
Ｇ、はアリール又はヘテロアリール部分であり；Ｇ３は少なくとも一般酸／塩基 性質を有するＲＮＡ開裂部分である］で示される化合物。
２、Ｇ２が２〜６環を有し、前記環中の少なくとも２環が結合して、共役環系を 形成する請求項１記載の化合物。
３、Ｇ２がインターカレーターである請求項２記載の化合物。
４．６２がナフタレン、アントラセン、フェナントレン、ベンゾナフタレン、フ ルオレン、カルバゾール、ピリド［４，３−ｂ］カルバゾール、アクリジン、ピ レン、アントラキノン、キノリン、フェニルキノリン、キサンチン、又は２，７ −ジアザアントラセンである請求項１記載の化合物。
５．６１がアルキル、アルケニル又はアルキニル基と共有結合している、Ｏ，Ｓ 。
ＮＨ及びＮ−アルキルから選択されるヘテロ原子を含む請求項１記載の化合物。
６．０３が少なくとも１個のイミダゾール部分を含む請求項１記載の化合物。
７、Ｇ３が、イミダゾール、Ｃ２−置換イミダゾール；Ｃ４又はＣ５位置におい て電子性触媒によって置換されたイミダゾール；ビス−イミダゾール、Ｃ２ｆｉ ｆ換ビス−イミダゾール：少な（とも一方の０４又はＣ５位置が電子性触媒によ って置換されたビス−イミダゾール、Ｃ４位置の両方又はＣ５位置の両方が電子 性触媒によって置換されたビス−イミダゾール、又はイミダゾール環の間の結合 が電子性触媒によって置換されたビス−イミダゾールである請求項１記載の化合 物。
８．０２と６３とが単一共有結合、二価リンカ−又は単一共有結合と二価リンカ −の両方によって結合している請求項１記載の化合物。
９、Ｇ、が、少なくとも１個のアシル部分を介して前記Ｇ２に結合している２１ １のイミダゾール環を含む請求項１記載の化合物。
１０　Ｇ３が少なくとも１個のイミダゾール部分を含み；Ｇ２とＧ、とが単一共 有結合と二価リンカ−の両方によって結合し：前記単一共有結合が前記イミダゾ ール部分の０４又はＣ５位置において前記イミダゾール部分に結合し；前記二価 リッカーが前記イミダゾール部分の０４又はＣ５位置において前記イミダゾール 部分に結合している請求項８記載の化合物。
１１、ＧＩが前記Ｇｏの２゛−精位置、複素環式塩基又はヌクレオノド間ボスフ ェート結合においてＧｏに結合している請求項１記載の化合物。
１２、ＧＩが前記Ｇ、の２°　−精位置において６０に結合している請求項１記 載の化合物。
１３　構造式 ［式中、Ｔ５はＨ、ヒドロキシル保護基、ホスフェート基、ヌクレオチド又はオ リゴヌクレオチドであり： Ｔ３はＨ１ヒドロキシル保護基、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ホスフェ ート基、活性化ホスフェート基又は固相支持体であり；６１′　は連結原子であ り。
Ｇ１”は二価連結部分てあり。
Ｇ２はアリール又はヘテロアリール部分であり。
Ｇ３はＲＮＡ開裂部分であり： Ｂｘは複素環式塩基部分である］ て示される化合物。
１４、Ｇ２がインターカレーターである請求項１３記載の化合物。
１５　Ｇ１”がアルキル、アルケニル又はアルキニルである請求項１３記載の化 合物。
１６　ＧｌｏがＯ，Ｓ、ＮＨ又はＮ−アルキルである請求項１３記載の化合物。
１７、Ｇ３が一般酸／塩基性質を有する部分である請求項１３記載の化合物。
１８　Ｇ２が多環式系を含む請求項１３記載の化合物。
１９　Ｇ２がナフタレン、アントラセン、フェナントレン、ベンゾナフタレン、 フルオレン、カルバゾール、アクリジン、ピレン、アントラキノン、キノリン、 フェニルキノリン、キサンチン、又は２，７−ジアザアントラセンである請求項 １３記載の化合物。
２０　Ｇ３が少なくとも１個の複素環を含む請求項１３記載の化合物。
２１　Ｇ３が少なくとも１個のイミダゾール部分を含む請求項１３記載の化合物 。
２２、Ｂｘがプリン複素環式塩基である請求項１３記載の化合物。
２３、構造式 ［式中、Ｔ５はＨ、ヒドロキシル保護基、ホスフェート基、ヌクレオチド又はオ リゴヌクレオチドであり。
Ｔ３は■（、ヒドロキシル保護基、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ホスフ ェート基、活性化ホスフェート基又は固相支持体てあり。
６１′　は連結原子であり。
Ｃ１゛はアルキニルであり。
Ｂｘは複素環式塩基部分である、但し、Ｂｘがウラノルである場合には、Ｔ３及 びＴ、はＨ又はアセチルてはない］ て示される化合物。
２４　Ｇ１”がプロパルギルである請求項２３記載の化合物。
２５、　Ｇｌ’　がＯ，Ｓ又はＮ）（である請求項２３記載の化合物。
２６、構造式： ％式％ ９日 （５ａ）　（Ｓｃ） （５ζ） ［式中、ＲＡはアリール、置換アリール又は窒素複素環式基であり：Ｒ＠はＳ、 −ｃ、’　−Ｇ＋”　、Ｓ、−１Ｂｘ−又（まし−であり；Ｒ６はＨｌｏ−１ｃ ｏｏ−１ＯＲｃ、　Ｎ　Ｈ２、Ｃ（Ｒ，）（Ｒ，）（Ｒ，）　、Ｎ　（Ｒｃ）（ Ｒ，、）　（Ｒ１）　、ＣＩ、Ｂｒ、ＦＳＣＦ３、ＳＲｃ、ＮＨＣ（０）Ｒｅ、 ＱＣ（０）ＲＧ、ＮＯ１窒素複素環式基又は池の電子供与基であり。
Ｒ，は（（ｊ（２）ａであり。
Ｒ４はＨｌ（ＣＨ２）−ＲＩ、又はＲ，含有化学官１１旨基であり；Ｒ２はＣ， Ｃ２０アルキル、Ｃ２−Ｃ２゜アルケニルリール、又は／クロアルキルであり。
す。
Ｒ，はＨ、窒素複素環式基、正荷電基、又はホスホリル水素結合供与基でありＲ ，はアルキル、アシル又はアシル−アルキルであり；Ｚｌ！ＮＨ２又はＣＨ２で あり； ＲＬはＨ又はＯＨであり： Ｂｘはプリン若しくはピリミジン塩基又はこれらの誘導体であり；Ｌは糖連結基 であり； Ｓ．は自然発生若しくは非自然発生糖であり；ＣＩ゛　はＯ，ＳＳＮＨ又はＮ− アルキルであり；Ｇ，″はＣＩ　Ｃ２０アルキル、Ｃ２Ｃ２。アルケニル又はＣ ，−Ｃ．。アルキニルであり； ｎは約１〜約５であり： ｑは約０〜約５である］ て示される構造式のいずれかを有する化学化合物。
２７、Ｓ，が構造式： ［式中、Ｑは○、Ｓ又はＣ　Ｒ　＋　＋であり；Ｒ６及びＲ９はＨ１低級アルキ ル、置換低級アルキル、オリゴヌクレオチドの薬物動態特性を改良する基、オリ ゴヌクレオチドの薬力学特性を改良する基又はＲ８基を欠いた構造（２ｂ）−　 （５ｃ）のいずれかであり；Ｒ１１はＨ、低級アルキル、置換低級アルキル、Ｒ ＮＡ開裂部分、オリゴヌクレオチドの薬物動態特性を改良する基又はオリゴヌク レオチドの薬力学特性を改良する基であり。
Ｂｘはヌクレオシド塩基又はブロックされたヌクレオシド塩基部分である］のい ずれかで示される糖部分である請求項２６記載の化合物。
２８　ヌクレオシド単位の少なくとも１個に結合している請求項２６記載の少な くとも１個の化合物を含む結合ヌクレオシド単位の配列。
２９、請求項１記載の少なくとも１個の化合物を含む、ＲＮＡの活性を調節する ための組成物。
３０　請求項２６記載の少なくとも１個の化合物を含む、ＲＮＡの活性を調節す るための組成物。
３１、ＲＮＡの予め選択されたヌクレオチド配列と特異的にハイブリッド形成し つるターゲツティング部分．及び 前記ＲＮＡ中のホスホジエステル結合を開裂することができ、かつ請求項１記載 の化合物を含む部分 を含む、ＲＮＡの活性を調節するための組成物。
３２、ＲＮＡの予め選択されたヌクレオチド配列と特異的にハイブリッド形成し つるターゲツティング部分；及び 前記ＲＮＡにインターカレートして前記ＲＮＡを開裂することができ、かつ請求 項１記載の化合物を含む部分 を含む、ＲＮＡの活性を調節するための組成物。
３３、前記ＲＮＡを開裂することができる前記部分が、前記ＲＮＡと前記組成物 とから形成されるハイブリッド構造の小さい溝部位中への配置に適合する請求項 ３２記載の組成物。
３＝ＬＲＮＡの予め選択されたヌクレオチド配列と特異的にハイブリッド形成し うるターゲツティング部分】及び Ｒ　Ｎ　ＡにインターカレートしてＲＮＡを開裂することができる反応性部分を その２°部位において有するリボフラノシルヌクレオチドを含む、Ｒ　Ｎ　Ａの 活性を調節するための組成物。
３５、前記ＲＮＡを請求項３１記載の組成物と接触させることを含む、ＲＮＡの 活性を調節する方法。
３６、前記ＲＮＡを請求項３２記載の組成物と接触させることを含む、ＲＮＡの 活性を調節する方法。
３７　前記ＲＮＡを請求項３４記載の組成物と接触させることを含む、ＲＮＡの 活性を調節する方法。
３８　生物体によるタンパク質産生を調節する方法であって、前記生物体を請求 項３４記載の組成物と接触させることを含む方法。
３９、タンパク質の好ましくない産生を特徴とする疾患に罹患した動物の治療方 法であって、前記動物を請求項３４記載の組成物と接触させることを含む方法。
４Ｑ，ＲＮＡの含有を疑われるサンプル中のＲＮＡの有無を検出する方法であ１ て、 該サンプルを請求項３４記載の組成物と接触させ；該組成物によるＲＮＡ開裂を 検出する の各工程を含む方法。
４１、請求項４０記載の方法によって生じる開裂ＲＮＡ。
４２、構造式： ［式中、 Ｔ，及びＴ３はヒドロキシル保護基であり；Ｇ＋’　はＯ，Ｓ，ＮＨ又はＮ−ア ルキルであり；Ｇ＋”はアルキニル、アルケニル又はアルキルであり：Ｇ２はア リール又はへテロアリール部分であり：Ｇ，はＲＮＡ開裂部分であり；そして Ｂｘは複素環式塩基部分である］ で示される化合物の製造方法であって、下記構造式 で示される第１反応物質を用意し； 前記第１反応物質を構造式：Ｔ２ＯＧ２　０Ｔ８　［式中、Ｔ６は脱離基である ］を有する第２反応物質と接触させ、前記接触は下記構造式：を有する第３反応 物質を形成するために有効な反応条件下で実施し：前記第３反応物質を構造式： ＴＴ　Ｇｓ　Ｍ−Ｔｓ　［式中、ＭはＳｎであり、Ｔ。
は保護基であり、Ｔｓはそれぞれ炭素数１〜約５の１個以上のアルキル部分を有 する基である］を有する第４物質と接触させ、前記接触は前記化合物を製造する ために有効な条件下で実施する の各工程を含む方法。
４３　前記接触工程をＰｄ　（ＰＰｈｓ）４の存在下で実施する請求項４２記載 の方法。
４４、Ｇ３が少なくとも１個の金属イオンに配位するための少なくとも２個のり ガントを含む請求項１記載の化合物。
４５　四配位、五配位又は六配位金属イオンの少なくとも１個に配位するための 複数のりガントを含む請求項１記載の化合物。
４６２個の金属イオンに配位するために複数のりガントを含む請求項４５記載の 化合物。
４７．２ｆ［ｌの四配位、五配位又は六配位金属イオンに配位するために複数の りガントを含む請求項４５記載の化合物。
４８、前記リガンドが少なくとも１個の酸素、硫黄又１ま窒素原子を含む請求項 ４４記載の化合物。
４９、前記リガンドが少なくとも１個の酸素原子を含む請求項４８記載の化合物 。
５０、前記酸素原子がアルコール、エーテル、酸又（まケトン部分の一部を特徴 とする請求項４９記載の化合物。
５１　Ｇ２が第１多環系を含み、Ｇ３が他の多環系を含む請求項１！己載の化合 物。
５２　前記第１多環系がカルノくゾール又はピリド［４，３−ｂ］カルツク゛ゾ ールのいずれかであり： 前記第２多環系がアントラセン環を含む請求項５１に己載の化合物。
特表千７−５０２７４９　（３２） フロントページの続き （８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。
ＤＫ、ＥＳ、ＰＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＥ、ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、ＰＴ、ＳＥ） 、０Ａ（ＢＦ、ＢＪ、ＣＦ、ＣＧ、ＣＩ、ＣＭ、ＧＡ、ＧＮ、ＭＬ、ＭＲ，ＳＮ 、ＴＤ。
ＴＧ）、ＡＵ、ＢＢ、ＢＧ、ＢＲ，ＣＡ、ＣＺ、ＦＩ。
ＨＵ、ＪＰ、ＫＰ、ＫＲ，ＬＫ、ＭＧ、ＭＮ、ＭＷ、ＮＯ，ＮＺ、ＰＬ、ＲＯ， ＲＵ、ＳＤ、ＳＫ、ＵＡ、ＵＳ（７２）発明者　グイノッソ、チャールズ・ジョ ンアメリカ合衆国カリフォルニア用９２０８３゜ヴイスタ、エンチノ・ドライブ 　３１３（７２）発明者　カワサキ、アンドリュー・マモルアメリカ合衆国カリ フォルニア州９２０５６゜オーシャンサイド、ランチョ・デル・オロ・ロード　 ２３９５．ナンバー　３１（７２）発明者　グリフエイ、リチャードアメリカ合 衆国カリフォルニア州９２０６９゜サン・マルコス、ウーレン・ウェイ　９３８

Claims (67)

    【特許請求の範囲】
  1. １．構造式： Ｇ０−Ｇ１−Ｇ２−Ｇ３ 〔式中、Ｇｏはヌクレオシド、ヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドであり：Ｇ １は二価連結部分であり： Ｇ２はアリール又はヘテロアリール部分であり；Ｇ３は少なくとも一般酸／塩基 性質を有するＲＮＡ開裂部分である〕で示される化合物。
  2. ２．Ｇ２が２〜６環を有し、前記環中の少なくとも２環が結合して、共役環系を 形成する請求項１記載の化合物。
  3. ３．Ｇ２がインターカレーターである請求項２記載の化合物。
  4. ４．Ｇ２がナフタレン、アントラセン、フェナントレン、ベンゾナフタレン、フ ルオレン、カルバゾール、ピリド〔４．３−ｂ〕カルバゾール、アクリジン、ピ レン、アントラキノン、キノリン、フェニルキノリン、キサンチン、又は２．７ −ジアザアントラセンである請求項１記載の化合物。
  5. ５．Ｇ１がアルキル、アルケニル又はアルキニル基と共有結合した、Ｏ、Ｓ、Ｎ Ｈ及びＮ−アルキルから選択されたヘテロ原子を含む請求項１記載の化合物。
  6. ６．Ｇ３が少なくとも１個のイミダゾール部分を含む請求項１記載の化合物。
  7. ７．Ｇ３がイミダゾール；Ｃ２一置換イミダゾール；Ｃ４又はＣ５位置において 求電子性触媒によって置換したイミダゾール；ビス−イミダゾール；Ｃ２置換ビ ス−イミダゾール；少なくとも一方のＣ４又はＣ５位置が求電子性触媒によ、て 置換したビス−イミダゾール；Ｃ４位面の両方又はＣ５位置の両方が求電子性触 媒によって置換したビス−イミダツール；又はイミダゾール環の間の結合が求電 子性触媒によって置換したビス−イミダゾールである請求項１記載の化合物。
  8. ８．前記求電子性触媒がプロトン付加可能な窒素官能基を含む請求項７記載の化 合物。
  9. ９．前記窒素官能基がアミン、窒素複素環、グァニジン又はアミジンである請求 項８記載の化合物。
  10. １０．Ｇ２とＧ３とが単一共有結合、二価リンカー又は単一共有結合と二価リン カーの両方によって結合する請求項１記載の化合物。
  11. １１．Ｇ２とＧ３とが単一共有結合によって結合する請求項１０記載の化合物。
  12. １２．Ｇ３がＣ４又はＣ５位置を介して共有待合した、少なくとも１個のイミダ ゾール部分を含む請求項１１記載の化合物。
  13. １３．前記二価リンカーが求電子性触媒を含む請求項１０記載の化合物。
  14. １４．前記求電子試薬がプロトン付加可能な窒素官能基を含む請求項１３記載の 化合物。
  15. １５．Ｇ３が少なくとも１個のアシル部分を介して前記Ｇ２に結合した２個のイ ミダゾール環を含む請求項１記載の．化合物。
  16. １６．Ｇ３が少なくとも１個のイミダゾール部分を含み；Ｇ２とＧ３が単一共有 結合と二価リンカーの両方によって結合し；前記単一共有結合が前記イミダゾー ル部分に、前記イミダゾール部分のＣ４又はＣ５位置において結合し；前記二価 リンカーが前記イミダゾール部分に、前記イミダゾール部分のＣ４又はＣ５位置 において結合すろ請求項１０記載の化合物。
  17. １７．Ｇ１がＧｏに、前記Ｇｏの２′一糖位置、複素環式塩基又はヌクレオシド 間ホスフェート結合において結合する請求項１記載の化合物。
  18. １８．Ｇ１がＧｏに、前記Ｇ０の２′一糖位置において結合する請求項１記載の 化合物。
  19. １９．構造式： ▲数式、化学式、表などがあります▼ 〔式中、Ｔ５はＨ、ヒドロキシル保護基、ホスフェート基、ヌクレオチド差又は オリゴヌクレオチド基であり； Ｔ３はＨ、ヒドロキシル保護基、ヌクレオチド基、オリゴヌクレオチド碁、ホス フェート基、活性化ホスフェート基又は固相サポートであり：Ｇ１′は連結原子 であり： Ｇ１′′は二価連結部分であり： Ｇ２はアリール又はヘテロアリール部分であり；Ｇ３はＲＮＡ開裂部分であり： Ｂｘは複素環式塩基部分である〕 で示される化合物。
  20. ２０．Ｇ２がインターカレーターである請求項１９記載の化合物。
  21. ２１．Ｇ１′′がアルキル、アルケニル又はアルキニルである請求項１９記載の 化合物。
  22. ２２．Ｇ１′′がアルキニルである請求項１９記載の化合物。
  23. ２３．Ｇ１′がＯ、Ｓ、ＮＨ及びＮ−アルキルである請求項１９記載の化合物。
  24. ２４．Ｇ１′がＯである請求項１９記載の化合物。
  25. ２５．Ｇ３が一般酸／塩基性質を有する部分である請求項１９記載の化合物。
  26. ２６．Ｇ２が多環式系を富む請求項１９記載の化合物。
  27. ２７．前記多環式系が２〜６環を有し、前記環中の少なくとも２環が共役する請 求項２６記載の化合物。
  28. ２８．Ｇ２がナフタレン、アントラセン、フェナントレン、ベンゾナフタレン、 フルオレン、カルバゾール、アクリジン、ピレン、アントラキノン、キノリン、 フェニルキノリン、キサンチン、又は２．７−ジアザァントラセンである請求項 １９記載の化合物。
  29. ２９．Ｇ３が少なくとも１個の複素環を含む請求項１９記載の化合物。
  30. ３０．前記複素環が少なくとも１個の窒素原子を含む請求項２９記載の化合物。
  31. ３１．Ｇ３が少なくとも１個のイミダゾール部分を含む請求項１９記載の化合物 。
  32. ３２．Ｇ３がイミダゾール部分である請求項１９記載の化合物。
  33. ３３．Ｇ３がビス−イミダゾール部分である請求項１９記載の化合物。
  34. ３４．Ｂｘがプリン複素環式塩基である請求項１９記載の化合物。
  35. ３５．構造式： ▲数式、化学式、表などがあります▼ 〔式中、Ｔ５はＨ、ヒドロキシル保護基、ホスフェート基、ヌクレオチド基又は オリゴヌクレオチド基であり； Ｔ３はＨ、ヒドロキシル保護基、ヌクレオチド基、オリゴヌクレオチド基、ホス フェート基、活性化ホスフェート基又は固相サポートであり；Ｇ１′は連結原子 であり； Ｇ１′′はアルキニルであり； Ｂｘは複素環式塩基部分である、但し、Ｂｘがウラシルである場合には、Ｔ３と Ｔ５はＨ又はアセチルではない〕 で示される化合物。
  36. ３６．Ｇ１′′がプロパルギルである請求項３５記載の化合物。
  37. ３７．Ｇ１′が０、Ｓ又はＮＨである請求項３５記載の化合物。
  38. ３８．構造式： ▲数式、化学式、表などがあります▼（２ａ）▲数式、化学式、表などがありま す▼（２ｂ）▲数式、化学式、表などがあります▼（２ｃ）▲数式、化学式、表 などがあります▼（３ａ）▲数式、化学式、表などがあります▼（３ｂ）▲数式 、化学式、表などがあります▼（４ａ）▲数式、化学式、表などがあります▼（ ４ｂ）▲数式、化学式、表などがあります▼（５ａ）▲数式、化学式、表などが あります▼（５ｂ）〔式中、ＲＡはアリール、置換アリール又は窒素複素環式基 であり；ＲｍはＳｒ−Ｇ１′−Ｇ１′′−、Ｓｒ−、Ｂｘ−又はＬ−であり；Ｒ ｃはＨ、Ｏ−、ＣＯＯ−、ＯＲｃ、ＮＨ２、Ｃ（Ｒｃ）（ＲＨ）（Ｒ１）、Ｎ（ Ｒｃ）（Ｒ１１）（Ｒ１）、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＣＦ３、ＳＲｃ、ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ ｃ、ＯＣ（Ｏ）Ｒｃ、ＮＯ、窒素複素環式基又は他の電子供与基であり；ＲＤは （ＣＨ２）ｑであり； ＲＥはＨ、（ＣＨ２）ｎ−Ｒ１、又はＲ１含有化学官能基であり；ＲｒはＣ１− Ｃ２０アルキル、Ｃ２−Ｃ２０アルケニル又はＣ２−Ｃ２０アルキニル、アリー ル、又はシクロアルキルであり； Ｒｃ、ＲＨ及びＲ１は、独立的に、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１０アルキル又は置換アルキル であり； Ｒ１はＨ、窒素複素環式差、正荷電基、又はホスホリル水素結合供与基でありＲ Ｋはアルキル、アシル又はアシルーアルキルであり；ＲＬはＨ又はＯＨであり： ＺはＮＨ２又はＣＨ２であり； Ｂｘはプリン着しくはピリミジン塩基又はこれらの誘導体でありＬは糖連結基で あり； Ｓｒは自然発生着しくは非自然発生糖であり；Ｇ１′はＯ、Ｓ、ＮＨ又はＮ−ア ルキルであり；Ｇ１′′はＣ１−Ｃ２０アルキル、Ｃ２−Ｃ２０アルケニル又は Ｃ２−Ｃ２０アルキニールであり； ｎは約１〜１勺５であり； ｑは約０〜約５である］ で示される構造式のいずれかを有する化学化合物。
  39. ３９．Ｓｒが構造式： ▲数式、化学式、表などがあります▼▲数式、化学式、表などがあります▼［式 中、ＱはＯ、Ｓ又はＣＲ１１であり；Ｒ８とＲ９はＨ、低級アルキル、置換低級 アルキル、オリゴヌクレオチドの薬物動態特性を改良する基、オリゴヌクレオチ ドの薬力学特性を改良する基又はＲ８基を欠いた構造（２ｂ）−（５ｃ）のいず れかであり；Ｒ１１はＨ、低級アルキル、置換低級アルキル、ＲＮＡ開裂部分、 オリゴヌクレオチドの薬物動態特性を改良する基又はオリゴヌクレオチドの薬力 学特性を改良する基であり； Ｂｘはヌクレオシド塩基又はブロックトヌクレオシド塩基部分である］のいずれ かで示される糖部分である請求項３８記載の化合物。
  40. ４０．ヌクレオシド単位の少なくとも１個に結合した請求項３８記載の少なくと も１個の化合物を含む結合ヌクレオシド単位の配列。
  41. ４１．請求項１記載の少なくとも１個の化合物を含む、ＲＮＡの活性を調節する ための組成物。
  42. ４２．請求項３８記載の少なくとも１個の化合物を含む、ＲＮＡの活性を調節す るための組成物。
  43. ４３．ＲＮＡの所定ヌクレオチド配列と特異的にハイブリッド形成しうるターゲ ッティング部分と； 前記ＲＮＡ中のホスホジエステル結合を開裂することができ、かつ請求項１記載 の化合物を含む部分と を含む、ＲＮＡの活性を調節するための組成物。
  44. ４４．ＲＮＡの所定ヌクレオチド配列と特異的にハイブリッド形成しうるターゲ ッティング部分と； 前記ＲＮＡにインターカレートして、前記ＲＮＡを開裂することができ、かつ請 求項１記載の化合物を含む部分と を含む、ＲＮＡの活性を調節するための組成物。
  45. ４５．前記ＲＮＡを開裂することができる前記部分が、前記ＲＮＡと前記組成物 とから形成されるハイブリッド構造の小さい溝部位中への配置に適合する請求項 ４４記載の組成物。
  46. ４６．ＲＮＡの所定ヌクレオチド配列と特異的にハイブリッド形成しうるターゲ ッティング部分と； ＲＮＡにインターカレートし、ＲＮＡを開裂することができる反応性部分をその ２′部位において有するリポフラノシルヌクレオチドとを含む、ＲＮＡの活性を 調節するための組成物。
  47. ４７．前記ＲＮＡを請求項４３記載の組成物と接触させることを含む、ＲＮＡの 活性を調節する方法。
  48. ４８．前記ＲＮＡを請求項４４記載の組成物と接触させることを含む、ＲＮＡの 活性を調節する方法。
  49. ４９．前記ＲＮＡを請求項４６記載の組成物と接触させることを含む、ＲＮＡの 活性を調節する方法。
  50. ５０．生物体によるタンパク質産生を調節する方法において、前記生物体を請求 項４６記載の組成物と接触させることを含む前記方法。
  51. ５１．タンパク質の好ましくない産生を特徴とする疾患に罹患した動物の治療方 法において、前記動物を請求項４６記載の組成物と接触させることを食む前記方 法。
  52. ５２．ＲＡの含有を疑われるサンプル中のＲＮＡの有無を検出する方法であって 、 該サンプルを請求項４６記載の組成物と接触させる工程と；該組成物によるＲＮ Ａ開裂を検出する工程とを含む前記方法。
  53. ５３．請求項５２記載の方法によって生じた開裂ＲＮＡ。
  54. ５４．構造式： ▲数式、化学式、表などがあります▼ ［式中、 Ｔ５とＴ３はヒドロキシル保護基であり；Ｇ１′はＯ、Ｓ、ＮＨ又はＮ−アルキ ルであり；Ｇ１′′はアルキニル、アルケニル又はアルキルであり；Ｇ２はアリ ール又はヘテロアリール部分であり；Ｇ３はＲＮＡ開裂部分であり； Ｂｘは複素環式塩基部分である］ で示される化合物の製造方法において、下記構造式： ▲数式、化学式、表などがあります▼ で示される第１反応物質を形成する工程と；前記第１反応物質を構造式：Ｔ６Ｏ −Ｇ２−ＯＴ６［式中、Ｔ６は脱離基である］を有する第２反応物質と接触させ 、前記接触を下記構造式：▲数式、化学式、表などがあります▼ を有する第３反応物質を形成するために有効な反応条件下で実施する工程と；前 記第３反応物質を構造式：Ｔ７−Ｏ３−Ｍ−Ｔ８［式中、ＭはＳｎであり、Ｔ７ は保護基であり、Ｔ８はそれぞれ炭素数１〜約５の１個以上のアルキル部分を有 する基である］を有する第４物質と接触させ、前記接触を前記化合物を製造する ために有効な条件下で実施する工程と を含む前記方法。
  55. ５５．Ｔ３とＴ５とが一諸に３，５−Ｏ−テトライソプロピルジシロキサニル基 を形成する請求項５４記載の方法。
  56. ５６．Ｇ１′がＯであり、Ｇ１′′がプロバルギルであり、Ｔ６がトリフルオロ メチルスルホニルである請求項５４記載の方法。
  57. ５７．Ｔ７がＴＢＤＭＳであり、Ｇ３がＮ、Ｎ−ジメチル−イミダゾール−１− スルホンァミジルであり、Ｔ６がトリブチルである請求項５４記載の方法。
  58. ５８．前記接触工程をＰｄ（ＰＰｈ３）４の存在下で実施する請求項５４記載の 方法。
  59. ５９．Ｇ３が少なくとも１個の金属イオンに配位するために少なくとも２個のリ ガンドを含む請求項１記載の化合物。
  60. ６０．四配位、五配位又は六配位金属イオンの少なくとも１個に配位するために 複数のリガンドを含む請求項１記載の化合物。
  61. ６１．２個の金属イオンに配位するために複数のリガンドを含む請求項６０記載 の化合物。
  62. ６２．２個の四配立、五配位又は六配位金属イオンに配位するために複数のリガ ンドを含む請求項６０記載の化合物。
  63. ６３．前記リガンドが少なくとも１個の酸素、硫黄又は窒素原子を含む請求項５ ９記載の化合物。
  64. ６４．前記リガンドが少なくとも１個の酸素、硫黄又は窒素原子を含む請求項６ ３記載の化合物。
  65. ６５．前記酸素原子がアルコール、エーテル、酸又はケトン部分の一部を形成す る請求項６４記載の化合物。
  66. ６６．Ｇ７が第１多環系を含み、Ｇ３が他の多環系を含む請求項１記載の化合物 。
  67. ６７．前記第１多環系がカルバゾール又はピリド［４、３−ｂ］カルバゾールの いずれかであり； 前記第２多環系がアントラセン環を含む請求項６６記載の化合物。
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